CN102010903A - Il-23在肝癌早期病变诊断中的应用 - Google Patents
Il-23在肝癌早期病变诊断中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102010903A CN102010903A CN 201010268466 CN201010268466A CN102010903A CN 102010903 A CN102010903 A CN 102010903A CN 201010268466 CN201010268466 CN 201010268466 CN 201010268466 A CN201010268466 A CN 201010268466A CN 102010903 A CN102010903 A CN 102010903A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- level
- sample
- liver cancer
- antibody
- biological sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 title claims abstract description 121
- 102000013264 Interleukin-23 Human genes 0.000 title claims abstract description 121
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 66
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 66
- 229940124829 interleukin-23 Drugs 0.000 title description 90
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title description 8
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 title description 4
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 title description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 62
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 30
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000013068 control sample Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 35
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 28
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 20
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 18
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 abstract description 5
- 208000016350 chronic hepatitis B virus infection Diseases 0.000 abstract 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 39
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 37
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 17
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 17
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 13
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 13
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 4
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 4
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 3
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical group N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 2
- 206010021703 Indifference Diseases 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 102100020881 Interleukin-1 alpha Human genes 0.000 description 2
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 2
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 2
- 108010082786 Interleukin-1alpha Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- CKMXBZGNNVIXHC-UHFFFAOYSA-L ammonium magnesium phosphate hexahydrate Chemical compound [NH4+].O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]P([O-])([O-])=O CKMXBZGNNVIXHC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000013211 curve analysis Methods 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 2
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 2
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 2
- 229910052567 struvite Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000013077 target material Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 206010073069 Hepatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 101000959820 Homo sapiens Interferon alpha-1/13 Proteins 0.000 description 1
- 206010062717 Increased upper airway secretion Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 238000010824 Kaplan-Meier survival analysis Methods 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 208000006994 Precancerous Conditions Diseases 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- -1 cell factor Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 201000004108 hypersplenism Diseases 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000003909 pattern recognition Methods 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 208000026435 phlegm Diseases 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000000575 proteomic method Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 108010008790 ribosomal phosphoprotein P1 Proteins 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/52—Assays involving cytokines
- G01N2333/54—Interleukins [IL]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种鉴定慢性乙型肝炎病毒感染对象具有发生肝癌倾向的方法,包括在所述对象的生物学样品例如血液样品例如血清或其衍生物中检测IL-23的水平并与对照样品中IL-23的水平比较,其中检测样品中所述IL-23水平升高是所述对象具有发生肝癌倾向的指征。本发明还涉及了检测IL-23的制剂在制备用于鉴定对象具有发生肝癌倾向的组合物中的应用以及用于所述鉴定的试剂盒。
Description
发明领域
本发明涉及肝癌早期病变诊断的新标记物和方法,还涉及用于肝癌早期病变诊断的试剂盒。
发明背景
原发性肝癌是我国发生率最高的恶性肿瘤之一,每年因患肝癌而死亡的人数约占全世界肝癌死亡人数的50%,严重威胁着人民群众的生命健康,给患者家庭及国家造成了沉重的经济负担。在我国,肝癌发生的主要病因是慢性持续性乙型肝炎病毒的感染,表现为血清乙型肝炎病毒表面抗原持续阳性,这部分人群是肝癌发生的危险人群。根据2006年全国流行病学调查结果显示,我国自然人群中乙型肝炎病毒表面抗原调整后阳性率高达7.18%,估计有乙肝病毒表面抗原携带者9400万人。目前,对于临床诊断的肝癌的治疗手段单一受限,患者的死亡率居多种恶性肿瘤的首位。因此,预防慢性持续乙肝病毒感染者进展为肝癌,及早发现肝癌的早期病变,进而采取积极的诊疗措施,可极大提高肝癌患者的生存率。
根据《中国抗癌协会肝癌专业委员会》于2001年9月在广州所制定的“原发性肝癌的临床诊断与分期标准”,(中华肝脏病杂志,2001年12月第9卷第6期第324页),我国目前最常用的原发性肝癌早期诊断方法是在高危人群中定期进行血清中甲胎蛋白的检测以及影像学的筛查(高危人群:40岁及以上男性,45岁及以上女性的慢性乙肝病毒感染者)。诊断标准为至少具有以下特征之一:(a)AFP≥400μg/L,能排除妊娠、生殖系胚胎源性肿瘤、活动性肝病及转移性肝癌,并能触及肿大、坚硬及有大结节状肿块的肝脏或影像学检查有肝癌特征的占位性病变者;(b)AFP<400μg/L,能排除妊娠、生殖系胚胎源性肿瘤、活动性肝病及转移性肝癌,并有两种影像学检查有肝癌特征的占位性病变或有两种肝癌标志物(DCP、GGT II、AFU及CA19-9等)阳性及一种影像学检查有肝癌特征的占位性病变者。(c)有肝癌的临床表现并有肯定的肝外转移病灶(包括肉眼可见的血性腹水或在其中发现癌细胞)并能排除转移性肝癌者。而这一诊断的做出往往在肝癌发生之后,病人已经丧失了最佳的治疗时机。此外,流行病学调查显示,在慢性乙肝病毒表面抗原携带者中,每年有1%的人群自然进展为肝癌,终身肝癌的发生率累计约有40%。因此在高危人群中及早发现早期的病变特征,从而采取积极的手段与措施进行干预和治疗,提高患者的生活质量与生存率。需要建立高效便捷易行的方法。
由慢性乙肝进展为肝癌是一个漫长的过程,可长达40-50年,是机体与病毒长期相互作用的结果。因此,临床医生通常针对40岁及以上男性,45岁及以上女性的慢性乙肝病毒感染者这一高危群体,定期检测其血清中甲胎蛋白的水平并附加超声影像学的筛查,以期采用现行的常规手段发现早期肝癌患者。近年来研究发现,在慢性乙肝病毒感染的患者中,病毒感染的肝细胞和识别感染肝细胞的免疫细胞分泌多种不同的细胞因子,在由慢性乙肝病毒感染状态进展为肝癌的病程进展中发挥着重要作用。
白细胞介素23(IL-23)是一个异二聚体造血细胞因子,由p40和p19两个亚基组成,主要由机体活化的巨噬细胞和树突状细胞产生,可促进T细胞的增殖和IFN-γ的产生。IL-23优先刺激机体记忆性T细胞而不是初始型T细胞群。其受体广泛表达于活化T细胞、记忆性T细胞、NK细胞、巨噬细胞和树突状细胞,IL-23作用于这些细胞,诱导IFN-γ等前炎性细胞因子的产生,在炎症性疾病、自身免疫性疾病的发病以及抗肿瘤和抗感染等方面发挥重要作用。
发明概述
在一个方面,本发明提供了一种鉴定慢性乙型肝炎病毒感染对象例如人具有发生肝癌倾向的方法,包括:
检测得自所述对象的生物学样品中IL-23的水平,其中检测样品中IL-23水平升高是所述对象具有发生肝癌倾向的指征。
在一个实施方案中,所述生物学样品是血液样品如血清或其衍生物。
在一个实施方案中,所述样品中IL-23的水平通过检测IL-23蛋白或IL-23的mRNA的水平来确定。
在一个实施方案中,使用IL-23特异性抗体或其抗原结合片段检测所述生物学样品中IL-23蛋白的水平。
在一个实施方案中,所述检测样品中IL-23水平升高是检测样品中IL-23水平与对照样品中IL-23水平相比是升高的。
在一个实施方案中,所述检测样品中IL-23水平升高是检测样品中IL-23蛋白水平高于截断值。在一个实施方案中,对象具有发生肝癌倾向的截断值为855pg/ml。
在一个实施方案中,所述检测样品中IL-23蛋白的水平通过检测p19亚基或其同源物来确定。
在另一个方面,本发明提供了一种用于鉴定慢性乙型肝炎病毒感染对象例如人具有发生肝癌倾向的组合物,其中所述组合物包含用于检测所述对象的生物学样品中IL-23水平例如检测IL-23蛋白或IL-23的mRNA的水平的制剂。
在一个实施方案中,所述生物学样品是血液样品例如血清或其衍生物。
在一个实施方案中,使用IL-23特异性抗体或其抗原结合片段检测所述生物学样品中IL-23蛋白的水平。
在一个实施方案中,所述制剂是针对IL-23蛋白的特异性抗体,例如单克隆或多克隆抗体。
在另一个方面,本发明提供了IL-23特异性抗体或其抗原结合片段在制备用于鉴定慢性乙型肝炎病毒感染对象例如人具有发生肝癌倾向的组合物中的应用。
在另一个方面,本发明提供了用于鉴定慢性乙型肝炎病毒感染对象例如人具有发生肝癌倾向的试剂盒,所述试剂盒包括用于检测所述对象的生物学样品中IL-23水平例如检测IL-23蛋白或IL-23的mRNA的水平的制剂。
在一个实施方案中,所述生物学样品是血液样品例如血清或其衍生物。
在一个实施方案中,所述制剂是针对IL-23蛋白的特异性抗体。在一个实施方案中,所述抗体是单克隆或多克隆抗体。
附图简述
图1:通过受试者操作特征曲线分析评估IL-23对预测肝细胞癌(HCC)的作用。ROC下的面积为0.699(95%CI 0.593/0.791)(图中两条虚线所表示曲线为95%置信区间)。当截断值为855pg/ml时,灵敏性和特异性分别为60.0%和91.1%。
图2:Kaplan-Meier分析用于评估IL-23水平和HCC累积发病率之间的相关性。结果表明具有高IL-23水平的患者中HCC的累积发病率较高。
图3:根据距随访结束时的时间间隔将不同时间点的样品血清分成5组。结果表明在发展为HCC的患者中,在疾病进展早期IL-23浓度较高,然后降低,在对照患者中在随访期间IL-23浓度保持恒定。
发明详细描述
除非特别指出,本文使用的科学和技术术语应具有本领域技术人员通常已知的含义。另外除非特别需要,则单数术语应包括复数,复数术语应包括单数。前述技术和方法通常根据本领域熟知的及在本说明书引用的参考文献所述的常规方法进行。见例如并入作参考的Current Protocols inImmunology.Wiley&Sons,Hoboken,NJ所述。本文引用的所有参考文献,包括专利、专利申请、文章、教科书等及其中引用的参考文献在此均以其全部援引加入本文。
本发明人于上世纪90年代中后期在我国肝炎肝癌的高发区之一的启东地区建立了一个可长期追踪随访的慢性乙肝携带者队列,定期进行血清甲胎蛋白水平的检测和肝胆脾的超声影像学检查,发现了一些早期肝癌患者。利用这一队列同时研究了在慢性乙肝病毒感染者中机体针对病毒的免疫应答在由慢性乙肝进展为肝癌过程中的作用,以期发现影响肝癌早期病变的血清细胞因子特征。研究结果显示,早在由慢性肝炎进展为采用现行临床常规方法诊断为肝癌的5-8年之前,与持续性慢性乙肝感染者相比,肝癌患者血清中的细胞因子表达谱就已经发生了明显的变化,其中差异最为明显的细胞因子为IL-23。采用酶联免疫布阵法(ELISA Array)的检测结果表明IL-23对于慢性肝炎患者病程进展结局具有较好的指示作用,能有效地对持续性慢性乙肝进展为肝癌的患者进行早期预警诊断。IL-23可作为由持续性慢性乙肝进展为原发性肝癌的早期病变血清标志物。
在一个方面,本发明提供了鉴定慢性乙型肝炎病毒感染对象例如人具有发生肝癌倾向的方法,包括在所述对象的生物学样品中检测IL-23的水平,其中检测样品中所述IL-23水平升高是所述对象具有发生肝癌倾向的指征。
本文所述“肝癌”是指原发性肝细胞癌症。本文所用术语“癌症”通常指任何类型的恶性赘生物,即与未受影响的(健康)野生型对照细胞相比显示或具有发生癌特征倾向的靶细胞的任何形态学和/或生理学改变。这种改变的例子可涉及细胞大小和形状(变大或变小)、细胞增殖(细胞数增加)、细胞分化(生理学状态变化)、凋亡(程序性细胞死亡)或细胞存活。
本文所用术语“具有发生癌症倾向”是指任何处于癌前状态即正常细胞转化为肿瘤细胞过程中的中间状态的指征的细胞表型。换句话说,该术语是指发生癌症的风险的状态。
最常见类型的肝癌是肝细胞癌(HCC)。本文所用术语“肝细胞癌”是指原发的肝脏恶性肿瘤。大多数HCC继发于慢性肝炎病毒感染(乙型肝炎或丙型肝炎)或者肝硬化(酒精中毒是导致肝硬化的最常见因素)。肝细胞癌与任何其它癌症一样,当存在引起细胞高速复制和/或导致细胞避免凋亡的分子机制突变时而发生。特别地,乙型肝炎和/或丙型肝炎的慢性感染通过导致机体自身免疫***反复攻击自身肝细胞(其中一些被病毒感染,其它的仅是旁观者)而可助于肝细胞癌的发生。
在一个实施方案中,所述生物学样品是血液样品如血清或其衍生物。本发明中的生物学样品可以是人或非人类来源的。然而,本发明典型地用人类生物学样品进行。本文所述生物学样品是来自被测对象的任意生物学样品,尤其是包括核酸或者多肽的任意样品。有利地,可以包括下列样品:血液,血清,血浆,血小板,唾液,痰,尿液等等,更一般来说包括核酸或者多肽的任意组织、器官或者有利地生物体液。另外,生物学样品可含有衍生自细胞例如肝细胞的细胞提取物或包括其的细胞群。在本发明的体外方法中用于检测的样品通常应以临床可接受的方式收集,例如以保护核酸或蛋白质的方式收集。在一个实例中,所述样品是源自血液的样品,如血液、血清或者血浆的样品。可以通过任意已知技术如通过采血、通过非侵入性技术从样品采集点或者库等等获取样品。还可以预处理所述样品以增加靶分子的可接近性,如通过裂解(机械、化学、酶裂解等等)、纯化、离心、分离等等。还可以标记所述样品以便于靶分子存在的检测(荧光、放射性、发光、化学、酶标记等等)。在一个实例中,所述生物学样品是全血样品,即还没有经过分离步骤的血液,其任选可以被稀释。
在一个实施方案中,所述样品中IL-23的水平通过检测IL-23蛋白或IL-23的mRNA的水平来确定,例如使用IL-23特异性抗体或其抗原结合片段检测所述生物学样品中IL-23蛋白的水平。
IL-23蛋白由p19和p40两个亚基组成,其中p19(SEQ ID NO:1:MGSRAVMWTAGRAVGGS SAWTCSKCTAWSAHVGHMDRGDTTNDVHCGDGCDGRDNSCRHGYKGSDTGSDSVGHASGSGHHWTSSSWRRKRSAVAVAARVAHGAATS)为特有亚基,而p40(SEQ ID NO:2:MCHVSWSVASVAWKKDVYVVDWYDAGMVVTCDTDGTWTDSSVGSGKTTVKGDAGYTCHKGGVSHSHKKDGWSTDKDKKNKTRCAKNYSGRTCWWTTSTDTSVKSSRGSSDGVTCGAATSARVRGDNKYYSVCDSACAASVMVDAVHKKYNYTSSRDKDKNKKNSRVVSWYDTWSTHSYSTCVVGKSKRKKDRVTDKTSATVCRKNASSVRADRYYSSSWSWASVCS)为与同源物共享的亚基。因此,在一个实施方案中,所述检测IL-23蛋白的水平可以通过检测p19亚基或其同源物的水平来进行,其中检测样品中所述IL-23的水平升高是所述对象具有发生肝癌倾向的指征。
p19亚基的同源物是指包含与SEQ ID NO:1所示氨基酸序列具有至少50%、60%、70%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或者更高的同源性的氨基酸序列的多肽。
两个蛋白质序列的同源性对应于两个蛋白质链中位于相同或类似位置的相同氨基酸的百分比。用BLAST算法利用BLOSUM 62阵列计算同源性百分比,该算法可在NCBI网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)获得。在本文中,所述p19亚基的同源物优选是功能性同源物,即其与SEQ ID NO:1具有显著的相似性(例如在氨基酸水平大约50%序列相同性)并且与p40亚基一起组成的多肽。至少大约60%,至少大约70%,至少大约80%、至少大约90%、至少大约95%、或至少大约99%序列相同性的p19亚基的功能性同源物是优选的功能性同源物。
用于检测IL-23蛋白、p19亚基或其同源物、IL-23的mRNA的制剂可以是多肽、核酸、碳水化合物、脂质、小分子量化合物、寡核苷酸、寡肽、RNA干扰(RNAi)、反义RNA、重组蛋白质、抗体、或者其缀合物或融合蛋白。关于RNAi,可见Milhavet O,Gary DS,Mattson MP.(Pharmacol Rev.2003Dec;55(4):629-48.Review.),关于反义RNA,可见Opalinska JB,GewirtzAM.(Sci STKE.2003Oct 28;2003(206):pe47)。
例如,为了确定对象中IL-23蛋白、p19亚基或其同源物的水平,本发明的方法可以使用结合IL-23蛋白或p19亚基的配体测定来自所述对象的生物学样品中IL-23蛋白或p19亚基或其同源物的水平(浓度或绝对量),在对象的所述生物学样品中IL-23蛋白或p19亚基或其同源物水平升高指示所述对象存在肝癌患病风险。
本文所述配体可以是受体靶向物质、细胞因子、激素、生长因子、受体特异性抗体以及模式识别受体(PRR)配体。在一个实例中,所述配体是抗体(或其抗原结合片段)。可以利用本领域技术人员已知的任意技术揭示或者分析样品中的IL-23蛋白、p19亚基或其同源物,尤其是例如利用特异性配体,如抗体或者片段或者抗体衍生物。优选所述配体是所述蛋白的特异性抗体或者这类抗体的片段(如Fab,Fab′,CDR等等)或者这类抗体的衍生物(诸如单链抗体,ScFv)。通过检测靶和配体的复合物如利用标记的配体、利用第二种标记的检测配体等等可以检测样品中靶蛋白的存在或者量。可以使用公知的免疫技术包括ELISA,RIA等等。
可以通过常规技术尤其是利用包括所述蛋白(或者其免疫原性片段)的免疫原免疫非人动物并回收抗体(多克隆)或者生成细胞(以产生单克隆抗体)产生靶蛋白的特异性抗体。用于制备多克隆或者单克隆抗体、ScFv片段以及人的或者人源化抗体的技术例如在下列文献中描述:Harlow et al.,Antibodies:A Laboratory Manual,CSH Press,1988;Ward et al.,Nature 341(1989)544;Bird et al.,Science 242(1988)423;WO94/02602;US5,223,409;US5,877,293;WO93/01288。
本文所述“抗体”、“抗原结合片段”或“免疫原性部分”均具有本领域技术人员通常已知的含义。例如抗体的“抗原结合片段”是指通过重组DNA技术或者通过酶或化学切割完整的抗体而产生的,包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv和单链抗体(svFc)。抗体可以是多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体及可以是标记的抗体以及所述抗体的片段、变体或衍生物。抗体标记可以是放射性标记、荧光标记、酶标记、化学发光标记或者生物素基团标记。抗体或其片段其制备及使用是熟知的并且公开在例如Harlow,E.and Lane,D.,Antibodies:A LaboratoryManual,Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,New York,1999。
本领域已知许多针对IL-23蛋白、p19亚基或其同源物的特异性抗体,例如Anti-Human IL-23(p 19)Monoclonal antibody,Clone hlt2736(Biolegend)、Anti-Human IL-23p 19,Clone eBio473P 19(eBioscience)和Anti-Human IL-23p 19Functional Grade Purified,Clone HNU2319(eBioscience)。
还可以利用质谱分析相关领域的技术人员已知的技术检测蛋白质表达和/或结构的变化,这类技术一般来说被分到蛋白质组分析名下,以便检测患者血液中的特异性特征序列。
或者,本发明的方法可以使用检测IL-23的mRNA的变化的任何检测方法来测定所述生物学样品中IL-23的mRNA的水平,其中所述生物学样品中IL-23的mRNA的水平升高指示所述患者具有肝癌患病风险。上述检测方法包括能够检测样品中核酸的各种技术,如Northern印迹,选择性杂交,使用包被寡核苷酸探针的基材例如核酸分子阵列、DNA芯片等,通过例如RT-PCR、定量PCR或者连接PCR的核酸扩增等等。这些方法可以包括使用能够选择性或者特异性检测样品中核酸靶的核酸探针或者引物。例如,本领域技术人员已知并且可以参考标准条件(Sambrook,Fritsch,Maniatis(1989)Molecular Cloning,Cold Spring Harbor Laboratory Press)进行杂交,例如可以在高、中或者低严格性条件下进行杂交。或者,本领域技术人员可以利用已知的各种方法进行扩增,如PCR、LCR、转录介导的扩增(TMA)、链置换扩增(SDA)、NASBA、等位基因特异性寡核苷酸(ASO)的使用、等位基因特异性扩增、Southern印迹、单链构像分析(SSCA)、原位杂交(例如FISH)、凝胶迁移、异源双链分析等等。
本文所述“水平升高”是指通过检测上述生物学样品获得的值与参照值例如在未患肝癌的慢性乙肝感染者或者正常人中观察到的中间值或者平均值、或者与基于实验证据和/或现有技术数据针对慢性乙型肝炎病毒感染对象例如人具有发生肝癌倾向的截断值相比是升高的。
在一个实施方案中,所述检测样品中IL-23水平升高是检测样品中IL-23水平与对照样品中IL-23水平相比是升高的。
本文所用术语“对照样品”典型地是指来自具有慢性乙型肝炎病毒感染但无肝癌病变特征的对象的生物学样品。靶的水平的确定典型地遵循本领域熟知的已建立的标准程序(参见例如Current Protocols in Immunology.Wiley&Sons,Hoboken,NJ;Current Protocols in Molecular Biology.Wiley&Sons,Hoboken,NJ)。确定可以在蛋白质水平或RNA水平进行,例如使用酶联免疫分析或Western印迹方法进行蛋白水平检测,或者RNA特异性探针进行Northern印迹分析,或者在逆转录(及克隆)RNA后通过定量PCR或实时PCR技术在DNA水平进行。
所获得的一或多种待测样品和一或多种对照样品的水平之间的差异可以归一化至进一步的对照核酸例如管家基因的水平,管家基因的水平已知不根据细胞的疾病状态而不同。举例的管家基因包括β-肌动蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶和核糖体蛋白P1等。
但是,代替在任何实验中确定一或多种对照样品的水平,也可以基于实验证据和/或现有技术数据定义针对特定疾病表型(即疾病状态)的一或多个截断值。
在本文中,截断值是指ROC曲线各点中阳性似然比(为真阳性率与假阳性率之比)与阴性似然比(为假阴性率与真阴性率之比)比值最大的点。
因此,在一个实施方案中,所述检测样品中IL-23水平升高是检测样品中IL-23蛋白水平高于截断值。在本发明一个优选的实施方案中,所述截断值为855pg/ml。
在本发明中,术语“鉴定具有发生肝细胞癌症的倾向”也包括预测和可能性分析(“诊断”意义上)。本文公开的组合物和方法意在临床应用,以决定治疗形式,包括治疗性或预防性干预,诊断标准如疾病阶段,和疾病监控和疾病监视。根据本发明,可提供用于检查对象状态的中间结果。这种中间结果可与额外信息组合以帮助医生、护士或其它从业人员诊断出该对象患有该疾病或者具有患有该疾病的风险。
本文所用术语“多肽”,“肽”和“蛋白质”可互换使用,指氨基酸残基的聚合物,其包含经肽键结合的9个或更多个氨基酸。聚合物可以是线性的,分枝的或环状的,可包含天然存在的和/或氨基酸类似物,它可被非氨基酸间断。通常,若氨基酸聚合物是长的(例如超过50个氨基酸残基),其优选称为多肽或蛋白质,但是若其是50个氨基酸长或更短,优选称为“肽”。在本文中,术语“核酸”,“核酸分子”,“多核苷酸”和“核苷酸序列”可互换使用,定义任何长度的多聚物,如聚脱氧核糖核苷酸(DNA)(例如cDNA,基因组DNA,质粒,载体,病毒基因组,分离的DNA,探针,引物和其任何混合物)或聚核糖核苷酸(RNA)分子(例如mRNA,反义RNA)或混合的聚核糖-聚脱氧核糖核苷酸。它们包含单链或双链,线性或圆形,天然或合成的多核苷酸。此外,多核苷酸可包括非-天然存在的核苷酸,例如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物和可被非核苷酸组分间断。如果存在,在聚合之前或之后可进行核苷酸修饰。
在另一个方面,本发明还提供了特异性检测IL-23蛋白或IL-23的mRNA的制剂在制备用于鉴定慢性乙型肝炎病毒感染对象例如人具有发生肝癌倾向的组合物中的应用。在一个实例中,所述制剂是IL-23蛋白的配体。本文所述配体可以是受体靶向物质、细胞因子、激素、生长因子、受体特异性抗体以及模式识别受体(PRR)配体。在一个实施方案中,所述配体是抗体(或其抗原结合片段)。在一个实施方案中,所述对象是人。在配体是抗体的实例中,所述抗体可以是多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体及可以是标记的抗体以及所述抗体的片段、变体或衍生物,或者所述抗原结合片段是Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv和单链抗体(svFc)。
在另一个方面,本发明还提供了用于鉴定慢性乙型肝炎病毒感染对象例如人具有发生肝癌倾向的试剂盒,所述试剂盒包括用于检测来自所述对象的生物学样品、例如血液样品或其衍生物中IL-23蛋白或IL-23的mRNA的水平的制剂。所述试剂盒包括可以用于实施本发明所述方法的任意物质。在一个实例中,本发明的试剂盒包括特异性针对IL-23蛋白或免疫原性片段的抗体。
实施例
本发明通过下述实施例进一步阐明,但任何实施例或其组合不应当理解为对本发明的范围或实施方式的限制。本发明的范围由所附权利要求书限定,结合本说明书和本领域一般常识,本领域普通技术人员可以清楚地明白权利要求书所限定的范围。在不偏离本发明的精神和范围的前提下,本领域技术人员可以对本发明的技术方案进行任何修改或改变,这种修改和改变也包含在本发明的范围内。
实施例1:
自1996年至1999年在江苏省启东招募在2年内至少2次测试为HBsAg阳性的慢性乙肝病毒(HBV)持续感染的患者。排除丙肝病毒或HIV共感染以及其他伴随性慢性肝病的人群。在基线进行B超检测以排除肝硬化和HCC的存在,在随访过程中,无人接受过抗病毒治疗。研究方案获得中国医学科学院和启东肝癌防治研究所癌症研究所/医院伦理委员会(EthicsCommittee of Cancer Institute/Hospital,Chinese Academy of Medical Sciencesand Qidong Liver Cancer Institute)批准(批准号:#09-59/354)。进展为HCC的所有患者根据2001年《中国抗癌协会肝癌专业委员会》所制定的“原发性肝癌的临床诊断与分期标准”进行诊断,具有至少一个下列标准:(a)AFP≥400μg/L,能排除妊娠、生殖系胚胎源性肿瘤、活动性肝病及转移性肝癌,并能触及肿大、坚硬及有大结节状肿块的肝脏或影像学检查有肝癌特征的占位性病变者;(b)AFP<400μg/L能排除妊娠、生殖系胚胎源性肿瘤、活动性肝病及转移性肝癌,并有两种影像学检查有肝癌特征的占位性病变或有两种肝癌标志物(DCP、GGT II、AFU及CA19-9等)阳性及一种影像学检查有肝癌特征的占位性病变者。(c)有肝癌的临床表现并有肯定的肝外转移病灶(包括肉眼可见的血性腹水或在其中发现癌细胞)并能排除转移性肝癌者。
患者每24-36个月进行随访。每次随访期间,进行肝功、AFP、乙肝病毒s抗原(HBsAg)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)检测。每次随访保存血清样品用于进一步分析,同时进行B超检测。临床肝硬化定义为肝硬化和脾功能亢进迹象特征。发生HCC前随访时间定义为首次血清收集时间和诊断出HCC之间的时间间隔。当随访在2009年6月结束时每名患者被访问3-4次。
实施例2:实验及统计方法
使用Quansys(Quansys Biosciences,Logan,Utah)的Human 9-plex分析试剂盒检测人血清细胞因子水平,所述试剂盒含有下述9种细胞因子:IL-1α,IL-1β,IL-6,IL-8,IL-10,IL-17,IL-23,IFNγ和TNFα。根据生产商手册的指导进行检测分析,该分析具有高灵敏性和广泛的动力学范围(IL-1α:0.87-450pg/ml;IL-1β:3.24-1400pg/ml IL-6:3.81-475pg/ml;IL-8:0.21-125pg/ml,;IL-10:0.22-190pg/ml;IL-17:1.63-450pg/ml;IL-23:18.64-8000pg/ml,TNFα:0.73-350pg/ml;IFNγ:0.25-100pg/ml,通过软件计算超出所述动力学范围的细胞因子浓度)。每个样品重复检测两次,使用平均值进行数据分析。为了评估储存时间长短是否影响细胞因子稳定性,在同一人的系列血样中检测了与肝功能无关的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)。结果表明,ECP浓度不随储存时间的长短而发生改变,因此认为本实验所检测的炎症性细胞因子在合适的储存条件下也是稳定的。
分析数据时,连续变量以中间值和四分位数间距表示。通过卡方检测比较分类变量。通过Mann-Whitney U检验比较发展为HCC的患者和保持慢性乙型肝炎病毒感染的对照人群之间的细胞因子水平。无HCC的随访时间通过Kaplan-Meier分析评估。多重逻辑回归模型用于调整与HCC发生相关的潜在因素。通过受试者特性曲线分析评估细胞因子水平在预测HCC发生中的作用。所有统计学测试均为双尾。p<0.05认为具有统计学显著性。
实施例3:实验结果
至2009年6月,45名患者发展为HCC,45名年龄和和性别相匹配的对照患者被配对。发展为HCC的患者中随访时间中位数(四分位数间距)为108(84,132)个月,对照组中为144(132,144)个月(p<0.0001)。我们还比较了两组之间的一些特征(表I)。发展为HCC的患者的中位年龄为45(39,52)岁,而对照组为44(41,53)岁(p=0.79)。因为男性比女性更倾向于发展HCC,因此在所述群中仅有3名女性患者。发展为HCC的28(62%)名患者饮酒,对照组中29(64%)名患者饮酒。他们具有相似的酒精摄入量(p=0.72)。此外,两组之间吸烟状况和家族病史也无差异。
表I-有和无HCC的慢性乙肝患者的基线特征
我们检测了9种炎症性细胞因子谱。发展为HCC的患者和对照患者的细胞因子表达谱示于表III。根据该表,我们可以发现IL-23(一种在连接先天免疫应答和适应性免疫应答中发挥重要作用的重要细胞因子)基线水平在发展为HCC的病例患者和对照患者之间具有显著差异。在病例患者中,IL-23(pg/ml)的中位值(四分位数间距)为1315pg/ml(137-3816),明显高于对照患者(四分位数间距)的227.9pg/ml(84.69-453.2)(p=0.0014)。
受试者特性曲线也用于确定IL-23在未来HCC发展中的预测作用。ROC曲线下的面积为0.699(95%CI 0.593/0.791)(图1)。当选择ROC曲线各点中阳性似然比/阴性似然比最大处时,IL-23浓度截断值为855pg/ml。我们将发展为HCC的45名病例患者和45名对照患者根据其基线IL-23浓度分为两组:高IL-23组(>855pg/ml)和低IL-23组(≤855pg/ml)。在病例组中,27(60.0%)名患者具有高IL-23浓度,在对照组中,仅有4名患者具有高IL-23浓度(p<0.001),预测HCC发展的灵敏性为60.0%,特异性为91.1%,阳性预测值为87.09%,阴性预测值为69.49%。
表II-与对照组相比,病例组中IL-23异常表达的比例显著增加
(1)灵敏性,即病人中得出阳性检测的样本占病人总数的百分比TP/(TP+FN);
(2)特异性,即对照组中得出阴性检测的样本占对照组总数的百分比TN/(FP+TN);
(3)阳性预测值,即得出阳性检测的样本总数中,病人样本占阳性检测样本总数的百分比TP/(TP+FP);
(4)阴性预测值,即得出阴性检测的样本总数中,对照样本占阴性检测样本总数的百分比TN/(FN+TN)。
Kaplan-Meier分析结果显示所述研究中高基线IL-23浓度和HCC的累积发病率是显著相关的。144个月中HCC累积发病率自低IL-23浓度患者中的25.42%增加至高IL-23浓度患者中的78.71%(p<0.001)。逻辑回归检验结果表示高IL-23浓度(>855pg/ml)是HCC发展的危险因子(对于包括年龄、性别、饮酒、吸烟和家族史在内的潜在干扰因素进行调整后OR=14.0295%CI 4.289/45.871p<0.001)。在最后的随访中,发展为HCC的病例患者中的IL-23水平与对照患者无显著差异(p=0.599)。我们还检测了HCC诊断前IL-23浓度相对于时间的改变。在研究结束前,我们将样品分为5个时间段。在对照患者中,在随访期间IL-23浓度保持恒定。在发展为HCC的患者中,在疾病进展早期IL-23浓度较高。然后浓度降低,随访结束前0-24个月发展为HCC的患者和对照患者之间无差异(图3)。
除了IL-23,在病例患者和对照患者之间其他8种细胞因子谱在基线水平无显著差异。
Claims (15)
1.一种鉴定慢性乙型肝炎病毒感染对象例如人具有发生肝癌倾向的方法,包括:
检测得自所述对象的生物学样品中IL-23的水平,
其中检测样品中IL-23水平升高是所述对象具有发生肝癌倾向的指征。
2.权利要求1的方法,其中所述生物学样品是血液样品如血清或其衍生物。
3.权利要求1或2的方法,其中所述样品中IL-23的水平通过检测IL-23蛋白或IL-23的mRNA的水平来确定。
4.权利要求1-3任一项的方法,其中检测所述样品中IL-23蛋白的水平。
5.权利要求4的方法,其中通过使用IL-23特异性抗体或其抗原结合片段检测所述生物学样品中IL-23蛋白的水平。
6.权利要求1-5任一项的方法,其中检测样品中IL-23水平升高是检测样品中IL-23水平与对照样品中IL-23水平相比是升高的。
7.权利要求4或5的方法,其中检测样品中IL-23水平升高是检测样品中IL-23蛋白水平高于截断值,例如高于855pg/ml。
8.权利要求4或5的方法,其中样品中IL-23蛋白的水平通过检测p19亚基或其同源物来确定。
9.IL-23特异性抗体或其抗原结合片段在制备用于鉴定慢性乙型肝炎病毒感染对象例如人具有发生肝癌倾向的组合物中的应用。
10.一种用于鉴定慢性乙型肝炎病毒感染对象例如人具有发生肝癌倾向的组合物,其中所述组合物包含用于检测所述对象的生物学样品中IL-23水平例如检测IL-23蛋白、或IL-23的mRNA的水平的制剂。
11.权利要求10的组合物,其中所述生物学样品是血液样品例如血清或其衍生物。
12.权利要求10的组合物,其中所述制剂是针对IL-23蛋白的特异性抗体,例如单克隆或多克隆抗体。
13.用于鉴定慢性乙型肝炎病毒感染对象例如人具有发生肝癌倾向的试剂盒,所述试剂盒包括用于检测所述对象的生物学样品中IL-23水平例如检测IL-23蛋白、或IL-23的mRNA的水平的制剂。
14.权利要求13的试剂盒,其中所述生物学样品是血液样品例如血清或其衍生物。
15.权利要求13或14的试剂盒,其中所述制剂是针对IL-23蛋白的特异性抗体,例如单克隆或多克隆抗体。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 201010268466 CN102010903A (zh) | 2010-08-26 | 2010-08-26 | Il-23在肝癌早期病变诊断中的应用 |
PCT/CN2011/078916 WO2012025057A1 (zh) | 2010-08-26 | 2011-08-25 | Il-23在肝癌早期病变诊断中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 201010268466 CN102010903A (zh) | 2010-08-26 | 2010-08-26 | Il-23在肝癌早期病变诊断中的应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102010903A true CN102010903A (zh) | 2011-04-13 |
Family
ID=43841231
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN 201010268466 Pending CN102010903A (zh) | 2010-08-26 | 2010-08-26 | Il-23在肝癌早期病变诊断中的应用 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102010903A (zh) |
WO (1) | WO2012025057A1 (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012025057A1 (zh) * | 2010-08-26 | 2012-03-01 | 中国医学科学院肿瘤研究所 | Il-23在肝癌早期病变诊断中的应用 |
WO2021126100A1 (en) | 2019-12-18 | 2021-06-24 | Sabanci Universitesi | Interleukin 11 (il-11) as a biomarker and drug target in fatal liver cancer |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101039951A (zh) * | 2003-11-03 | 2007-09-19 | 基因信息公司 | 肝癌生物标志物 |
CN101221178A (zh) * | 2006-11-28 | 2008-07-16 | 创盛科技股份有限公司 | 诊断原发性恶性肝肿瘤肝细胞癌的方法 |
CN101430323A (zh) * | 2008-11-05 | 2009-05-13 | 复旦大学附属中山医院 | 一种可预测原发性肝癌病人手术后肝癌转移复发的方法 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2108660A1 (en) * | 2002-10-30 | 2009-10-14 | Genentech, Inc. | Inhibition of IL-17 production |
CN102010903A (zh) * | 2010-08-26 | 2011-04-13 | 中国医学科学院肿瘤研究所 | Il-23在肝癌早期病变诊断中的应用 |
-
2010
- 2010-08-26 CN CN 201010268466 patent/CN102010903A/zh active Pending
-
2011
- 2011-08-25 WO PCT/CN2011/078916 patent/WO2012025057A1/zh active Application Filing
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101039951A (zh) * | 2003-11-03 | 2007-09-19 | 基因信息公司 | 肝癌生物标志物 |
CN101221178A (zh) * | 2006-11-28 | 2008-07-16 | 创盛科技股份有限公司 | 诊断原发性恶性肝肿瘤肝细胞癌的方法 |
CN101430323A (zh) * | 2008-11-05 | 2009-05-13 | 复旦大学附属中山医院 | 一种可预测原发性肝癌病人手术后肝癌转移复发的方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012025057A1 (zh) * | 2010-08-26 | 2012-03-01 | 中国医学科学院肿瘤研究所 | Il-23在肝癌早期病变诊断中的应用 |
WO2021126100A1 (en) | 2019-12-18 | 2021-06-24 | Sabanci Universitesi | Interleukin 11 (il-11) as a biomarker and drug target in fatal liver cancer |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2012025057A1 (zh) | 2012-03-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Nezos et al. | Type I and II interferon signatures in Sjogren's syndrome pathogenesis: contributions in distinct clinical phenotypes and Sjogren's related lymphomagenesis | |
US11016099B2 (en) | Prediction of clinical response to IL23-antagonists using IL23 pathway biomarkers | |
CN102175868B (zh) | 联合定量检测血清中IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17、IL-23和TNF-α在肝癌早期预警中的应用 | |
JP5650871B1 (ja) | そう痒を伴う疾患に罹患した患者のil−31アンタゴニストによる治療に対する応答を予測する方法 | |
Lecendreux et al. | Impact of cytokine in type 1 narcolepsy: Role of pandemic H1N1 vaccination? | |
JP6244226B2 (ja) | 過敏性腸症候群の処置および予防のための組成物および方法 | |
US20220144935A1 (en) | Ccl20 as a predictor of clinical response to il23-antagonists | |
KR101771697B1 (ko) | 트립토파닐 티알엔에이 합성효소를 이용한 감염 질환 또는 감염 합병증의 진단용 조성물과 진단 마커 검출 방법 | |
Rychkov et al. | Cross-tissue transcriptomic analysis leveraging machine learning approaches identifies new biomarkers for rheumatoid arthritis | |
JP2018506528A (ja) | Ibdにおける治療標的及びバイオマーカー | |
EP3440461A1 (en) | Infiltrating immune cell proportions predict anti-tnf response in colon biopsies | |
JP2015530868A5 (zh) | ||
CN108449999A (zh) | 使用色酰胺-tRNA合成酶诊断感染病或其并发症的组合物以及检测诊断标记物的方法 | |
KR102277330B1 (ko) | 암의 면역 치료 후 예후 예측용 바이오 마커 | |
US10955415B2 (en) | CD247 as a biomarker for assessing the effect of chemotherapeutic and biological drugs | |
CN102010903A (zh) | Il-23在肝癌早期病变诊断中的应用 | |
AU2017299513A1 (en) | Biomarkers for detection and treatment of mast cell activity-associated disorders | |
US20200103416A1 (en) | SNX9 as a novel biomarker for chronic inflammation and associated immunosuppresion and a new regulator of T cell receptor expression and function | |
AU2016349113A1 (en) | Dipeptidyl peptidase-4 and periostin as predictors of clinical response to eosinophil-targeted therapeutic agents in eosinophilic diseases | |
WO2019087200A1 (en) | Prognostic methods for anti-tnfa treatment | |
JP2010004750A (ja) | 自己免疫疾患による組織傷害の発症または発症可能性の診断方法、およびその利用 | |
JP2024508659A (ja) | 真菌感染を検出および処置するための方法 | |
WO2019208542A1 (ja) | スティル病と敗血症との鑑別用バイオマーカー | |
CN112063709A (zh) | 一种以微生物作为诊断标志物的重症肌无力的诊断试剂盒及应用 | |
AU2018100578A4 (en) | Method for detection & diagnosis of oral cancer in a sample |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20110413 |