CN101985443A - 乙二半胱氨酸（ec）-药物结合物、组合物及用于组织特异性疾病显像的方法 - Google Patents

乙二半胱氨酸（ec）-药物结合物、组合物及用于组织特异性疾病显像的方法 Download PDF

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Abstract

概括地说，本发明提供一种新的利用化合物的标记策略，该化合物为与靶向配体(targeting ligand)结合的N2S2螯合物，其中该靶向配体为疾病细胞周期靶向化合物、肿瘤血管发生靶向配体、肿瘤细胞凋亡靶向配体、疾病受体靶向配体、氨磷汀、血管他丁、单克隆抗体C225、单克隆抗体CD31、单克隆抗体CD40、卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白或三甲基赖氨酸。本发明还涉及应用目的化合物的试剂盒、以及利用本发明的化合物评价目的物质药理学性质的方法。

Description

乙二半胱氨酸(EC)-药物结合物、组合物及用于组织特异性疾病显像的方法
本申请是申请号为200380105318.6(PCT/US2003/036078)、申请日为2003年11月7日、发明名称为“乙二半胱氨酸(EC)-药物结合物、组合物及用于组织特异性疾病显像的方法”的中国专利申请的分案申请。 
技术领域
概括地说本发明涉及标记、放射显像、放射性免疫治疗和化学合成领域。更具体地说，它涉及一种放射性标记靶配体的策略。它进一步涉及使用这些放射性标记的配体靶向肿瘤血管发生、缺氧、细胞凋亡、疾病受体、疾病作用途径和疾病细胞周期，以及用于评价药物治疗剂在这些生物化学过程中的效应的方法。 
背景技术
血管发生，内皮细胞和平滑肌细胞增殖形成新血管，是转移途径的基本要素。这些血管提供了某些细胞离开原组织部位并进入循环的主要路径。对于许多疾病组织而言，血管密度可以提供转移潜力或存活的预后指示，因为高血管化的肿瘤比血管化不充分的组织具有较高的转移发生率(Bertolini等，1999；Cao，1999；Smith等，2000)。 
通过使用抗血管生成剂阻断血管发生和肿瘤发展也许是可行的。目前，处于临床试验阶段的抗血管生成剂包括：天然的血管发生抑制剂(例如血管他丁、内皮他丁、血小板因子-4)，(Jiang等，2001；Dhanabal等，1999；Moulton等，1999；Jouan等，1999)特异性的内皮细胞生长抑制剂(例如TNP-470、沙利度胺、白细胞介素-12)，(Logothetis等，2001；Moreira等，1999；Duda等，2000)中和血管生成肽的药剂(例如成纤维细胞生长因子或血管内皮生长因子的抗体、苏拉明及其类似物、tecogalan)(Bocci等，1999；Sakamoto等，1995)或它们的受体，(Pedram等，2001)干扰血管基底膜和细胞外基质的药剂(例如金属蛋白酶抑制剂、抑制血管的(angiostatic)甾类化合物)， (Lozonschi等，1999；Maekawa等，1999；Banerjeei等，2000)抗粘着分子，(Liao等，2000)抗体如抗整联蛋白αvβ3，(Yeh等，2001)以及其它通过多种不同作用机理调节血管发生的药物(Gasparini1999)。 
例如许多恶性肿瘤是血管发生依赖性的。若干实验研究表明原发肿瘤生长、侵入和转移需要新生血管形成(Sion-Vardy等，2001；Guang-Wu等、2000；Xiangming等，1998)。与肿瘤相关的血管发生是一种受正性和负性可溶性因子支配的复杂的、多级过程。血管生成表型的获得是肿瘤发展的通常途径，并且活性血管发生与导致肿瘤发展的分子机制有关(Ugurel等，2001)。例如，血管内皮生长因子(VEGF)是一种有丝***素，成形素，内皮细胞的化学引诱物和在体内是有力的血管渗透性调节剂(Szus等，2000)。白细胞介素-8(IL-8)是一种嗜中性白细胞的化学引诱剂并且是有效的生成血管因子(Petzelbauer等，1995)。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在几种人癌症中与肿瘤发生和转移有关(Smith等，1999)。对化疗的癌症患者已经测定了血管生成因子表达的预测值(例如VEGF、bFGF、微血管密度、IL-8、MMP-2和MMP-9)。这些因子调节转移和血管发生并且可以预测个体癌症患者转移的可能性(Slaton等，2001)。 
在程序性细胞死亡中细胞凋亡缺陷在肿瘤发病机理中起重要作用。这些缺陷允许肿瘤细胞超过它们的正常预期寿命而生存，并且不再需要外源性存活因子。当肿瘤质量膨胀时细胞凋亡缺陷还保护其免受缺氧和氧化应激。它们还使细胞增殖失控的遗传变化累积，结果是在肿瘤发展过程中干扰分化、血管发生，细胞运动性和侵入性增加(Reed，1999)。事实上，细胞凋亡缺陷被认为是一种原癌基因激活的重要补体，因为许多驱动细胞***的丧失调节的癌基因蛋白质也触发细胞凋亡(Green和Evan，2002)。类似地，DNA修复和染色体分离的缺陷通常触发细胞***作为对于根除(readicating)遗传不稳定的细胞的防卫机制。因此，细胞凋亡缺陷允许遗传不稳定的细胞继续生存，为进行性的侵蚀性克隆的选择提供了机会(Ionov等，2000)。细胞凋 亡缺陷还通过允许上皮细胞在悬挂而不附着于细胞外基质的状态下继续生存而促进转移(Frisch和Screaton，2001)。它们还促进对免疫***的抵抗，因为许多用于攻击肿瘤的武器包括溶细胞的T细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK)，依赖于细胞凋亡机制的完整(Tschopp等，1999)。最后，在细胞凋亡中与癌症相关的缺陷在化学抗性和辐射抗性中起作用，升高了细胞死亡的阈值从而杀死肿瘤需要较高的剂量(Makin和Hickman，2000)。因此，缺陷的细胞凋亡调节是癌症生物学的基本方面。 
就通过非外科的方法成功根除癌细胞而论，所有途径最终归结于血管发生和细胞凋亡。目前临床使用的所有的细胞毒性抗癌药基本上都阻断血管发生和诱导恶性细胞的细胞凋亡。尽管结合微管的药物、DNA损伤物质、和核苷是治疗癌症中的重要武器，但新类的靶向治疗可能不久会出现。这些新类的靶向治疗可能会不久出现，这是建立以下基础之上的：来自对血管发生和细胞凋亡现象基础分子机制更深刻了解的策略已经出现(Reed，2003)。 
虽然血管生成因子和细胞凋亡因子反映了血管发生和细胞凋亡状态，但这些物质可能不能充分反映肿瘤的治疗反应。目前，评估肿瘤内血管发生和细胞凋亡的方法依赖对在新生血管形成的区域内微血管密度的计数和用FACS技术对膜联蛋白V的观察。在组织活检之后，进行组织样品的免疫组织化学。两种技术都是侵入性的并不能重复地进行。 
闪烁肿瘤显像的改进被更多肿瘤特异放射性药物的开发确定。由于肿瘤特异性更强，放射性标记的配体和放射性标记的抗体已经开辟了肿瘤闪烁检测的新纪元并且经历了广泛的临床前研发和评价(Mathias等，1996，1997a，1997b)。放射性核素显像方式(正电子发射断层成象，PET；单光子发射计算机断层照相，SPECT)是映射放射性核素标记的放射性示踪剂的位置和浓度的诊断性截面显像技术。虽然CT和MRI能提供相当多的关于肿瘤的位置和程度的解剖学信息，但这些显像方式还不能区分侵入性损害与水肿、放射坏死、分级(grading) 或神经胶质增生。PET和SPECT可通过测量代谢活性而用于定位和表征肿瘤。 
[18F]FMISO已经用于诊断头部和颈部肿瘤、心肌梗塞、炎症、以及脑缺血(Martin等1992；Yeh等1994；Yeh等1996；Liu等1994)。肿瘤与正常组织的摄取之比用作评价肿瘤缺氧的基线(Ye t等1996)。虽然利用[18F]FDG进行肿瘤代谢显像被清楚地证实，但将分子成象剂引进临床实践还依赖其它因素如容易获取和同位素成本等。[18F]氟去氧葡萄糖(FDG)已经用于诊断肿瘤、心肌梗塞、和神经***疾病。此外，PET放射合成必须迅速，因为正电子同位素的半衰期短。18F化学过程是复杂的并且不能在异类分子中重现。 
已经利用氮和硫螯合物以99mTc标记了几种化合物(Blondeau等，1967；Davison等，1980)。已知双氨基乙硫醇四齿配体，也称作二氨基二硫醇(diaminodithol)化合物，在氧代锝基团与两个硫醇硫原子和两个胺氮原子有效结合的基础上形成很稳定的Tc(V)O络合物。用 99mTc-2-吡咯硫酮(pyrrolthiones)标记的2-pyrrolthiones的放射性金属络合物已经开发用作显像和治疗用的放射性药物(WO0180906A2)。99mTc-L，L-乙二半胱氨酸(99mTc-EC)是近来的成功的N2S2螯合物的例子。EC可以用99mTc容易和高效地标记，获得高的放射化学纯度和稳定性，通过主动小管运输经肾***(Surma等，1994；VanNerom等，1990，1993；Verbruggen等，1990，1992)。此外，与乙二半胱氨酸(EC)螯合以及与各种配体结合的99mTc已经开发用作组织特异性疾病的显像剂、预测工具或用作将治疗剂输送至哺乳动物体内特定部位的工具(WO 0191807A2，AU 0175210A5)。99mTc-EC-螯合物已经开发用于肾显像和肾功能的检查(US 5986074和US 5955053)。制备 99mTc-EC络合物的方法和用于实施所述方法的试剂盒也已经开发(US5268163和WO 9116076A1)。 
然而，仍然需要开发新的物质以靶向肿瘤血管发生、缺氧、细胞凋亡缺陷、疾病受体、疾病作用途径、疾病细胞周期，除此之外还用于评价药物治疗剂对这些生物化学过程的效应。 
发明概述 
概括地说，本发明的某些实施方案涉及包含与靶向配体结合的N2S2螯合物的化合物，其中靶向配体是疾病细胞周期靶向化合物、肿瘤血管发生靶向配体、肿瘤细胞凋亡靶向配体、疾病受体靶向配体、氨磷汀、血管他丁、单克隆抗体C225、单克隆抗体CD31、单克隆抗体CD40、卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白或三甲基赖氨酸。 
本发明的具体方面包括下式的N2S2螯合物： 
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8独立地为H或CH3；R9为H、CH3、疾病细胞周期靶向化合物、氨磷汀、血管他丁、抗EGF受体、单克隆抗体CD31、单克隆抗体CD40、卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白或三甲基赖氨酸；R10为H、CH3、疾病细胞周期靶向化合物、氨磷汀、血管他丁、抗EGF受体、单克隆抗体CD31、单克隆抗体CD40、卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白或三甲基赖氨酸；n为0或1；m为0或1；当n为1时，X为水溶性肽、C1-C20烷基、谷氨酸、多聚谷氨酸、天冬氨酸、多聚天冬氨酸、乙酸溴乙酯、乙二胺或赖氨酸，或当n为0时，X为直连键；当m为1时，Y为水溶性肽、C1-C20烷基、谷氨酸、多聚谷氨酸、天冬氨 酸、多聚天冬氨酸、乙酸溴乙酯、乙二胺或赖氨酸，或当m为0时，Y为直连键；且M为99mTc、188Re、186Re、183Sm、166Ho、90Y、89Sr、67Ga、68Ga、 111In、183Gd、59Fe、225Ac、212Bi、211At、45Ti、60Cu、61Cu、67Cu、64Cu或62Cu。 
在优选的实施方案中，如前所述的化合物，其中R9和R10独立地为H、CH3、COX-2、抗EGF受体、赫赛汀、血管他丁或沙利度胺；且M为 99mTc。 
在另一优选的实施方案中，如前所述的化合物，其中所述的疾病细胞周期靶向化合物为腺苷或喷昔洛韦。 
血管发生靶向是指用某种试剂与新生血管形成，如肿瘤细胞的新生血管形成相结合。下面的说明书对此进行更详细的论述。用于该用途的试剂为本领域的普通技术人员已知的用于进行各种肿瘤测量，包括肿瘤血管床尺寸的测量、和肿瘤体积的测量的试剂。其中一些试剂与血管壁结合。一个本领域的普通技术人员将熟悉可用于该用途的试剂。 
肿瘤细胞凋亡靶向是指用试剂与经历细胞凋亡的细胞或有细胞凋亡危险性的细胞结合。这些试剂通常用于提供在一群细胞，如肿瘤中细胞凋亡、或程序性细胞死亡的程度或危险率的指示。一个本领域的普通技术人员将熟悉用于该用途的试剂。在下面的说明书中对肿瘤细胞凋亡靶向进行更详细的论述。 
在疾病受体靶向中，开发了一些配体以便它们能与在疾病状态，如肿瘤中过度表达的特定细胞受体结合。这类被作为靶子的受体的例子包括***受体、雄激素受体、垂体受体、铁传递蛋白受体和孕酮受体。可用于疾病-受体靶向的试剂的例子如表1所示。在下面的说明书中对疾病受体靶向进行更详细的论述。 
疾病细胞周期靶向是指在增殖细胞中受增量调节的试剂的靶向。用于该用途的化合物可用来测量在细胞中的各种参数，如肿瘤细胞中的DNA含量。这些试剂中有许多是核苷类似物。在下面的说明书中提供关于疾病细胞周期靶向的进一步论述。 
本发明的某些基于药物的配体可用于测量受试者对药物的药学反 应。在测定受试者对药物应用的反应中可测量许多参数。一个本领域的普通技术人员将熟悉可测量的反应的种类。这些反应在某种程度上依赖于各种因素，包括所评价的具体药物、正在接受治疗的受试者的具体的疾病或状况、以及受试者的特性。在测量药物的评价中可应用放射性标记的试剂。在本说明书的其它部分中提供关于药物评价的进一步论述。 
本发明的另一个方面包括合成用于显像的放射性标记的乙二半胱氨酸衍生物的方法，包括以下步骤：a)获得氨磷汀、血管他丁、抗EGF受体、单克隆抗体CD31、单克隆抗体CD40、卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白、三甲基赖氨酸、或疾病细胞周期靶向化合物；b)将所述化合物与乙二半胱氨酸(EC)混合，得到EC-化合物衍生物；和c)将所述EC-化合物衍生物与放射性核素和还原剂混合，得到放射性核素标记的EC-化合物衍生物，其中EC与放射性核素形成N2S2螯合物。 
在一实施方案中还原剂可以是连二亚硫酸根离子、亚锡离子或亚铁离子。放射性核素优选99mTc。 
在另一实施方案中，疾病细胞周期靶向化合物是腺苷或喷昔洛韦。 
本发明的另一方面包括显像哺乳动物体内某一部位的方法，其包括步骤：a)施用诊断有效量的下式N2S2螯合物： 
Figure BDA0000027340570000071
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8独立地为H或CH3；R9为H、CH3、 疾病细胞周期靶向化合物、氨磷汀、血管他丁、抗EGF受体、单克隆抗体CD31、单克隆抗体CD40、卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白、或三甲基赖氨酸；R10为H、CH3、疾病细胞周期靶向化合物、氨磷汀、血管他丁、抗EGF受体、单克隆抗体CD31，单克隆抗体CD40，卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白、或三甲基赖氨酸；n为0或1；m为0或1；当n为1时X为水溶性肽、C1-C20烷基、谷氨酸、多聚谷氨酸、天冬氨酸、多聚天冬氨酸、乙酸溴乙酯，乙二胺或赖氨酸，或当n为0时X为直连键；当m为1时，Y为水溶性肽、C1-C20烷基、谷氨酸、多聚谷氨酸、天冬氨酸，多聚天冬氨酸、乙酸溴乙酯、乙二胺或赖氨酸，或当m为0时，Y为直连键；M为99mTc、188Re、186Re、183Sm、166Ho、90Y，89Sr、67Ga、68Ga、 111In、183Gd、59Fe、225Ac、212Bi、211At、45Ti、60Cu、61Cu、67Cu、64Cu或62Cu；和b)检测源自位于所述部位的化合物的放射性信号。M优选99mTc。疾病细胞周期靶向化合物可以是腺苷或喷昔洛韦。所述部位可以是肿瘤、感染、乳腺癌、卵巢癌、***癌、子宫内膜、心脏癌、肺癌、脑癌、肝癌、叶酸(+)癌、ER(+)癌、脾癌、胰腺癌或肠癌。 
本发明的另一方面包括用于制备放射性药物制剂的试剂盒，其包含：a)含预定量的下式化合物的密封容器： 
Figure BDA0000027340570000081
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8独立地为H或CH3；R9为H、CH3、疾病细胞周期靶向化合物、氨磷汀、血管他丁、抗EGF受体、单克隆抗体CD31、单克隆抗体CD40、卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、 赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白、或三甲基赖氨酸；R10为H、CH3、疾病细胞周期靶向化合物、氨磷汀、血管他丁、抗EGF受体、单克隆抗体CD31，单克隆抗体CD40，卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白、或三甲基赖氨酸；n为0或1；m为0或1；当n为0时X为水溶性肽、C1-C20烷基、谷氨酸、多聚谷氨酸、天冬氨酸、多聚天冬氨酸、乙酸溴乙酯、乙二胺或赖氨酸，或当n为0时X为直连键；当m为1时，Y为水溶性肽、C1-C20烷基、谷氨酸、多聚谷氨酸、天冬氨酸、多聚天冬氨酸、乙酸溴乙酯、乙二胺或赖氨酸，或当m为0时，Y为直连键；和b)足量的与99mTc、188Re、186Re、183Sm、166Ho、90Y、89Sr、67Ga、 68Ga、111In、183Gd、59Fe、225Ac、212Bi、211At、45Ti、60Cu、61Cu、67Cu、64Cu或62Cu结合的还原性标记物。还原性标记物可以与99mTc结合。疾病细胞周期靶向化合物可以是腺苷或喷昔洛韦。 
本发明的一方面包括一种试剂，该试剂用于制备包含下式N2S螯合物的闪烁显像剂： 
Figure BDA0000027340570000091
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8独立地为H或CH3；R9为H、CH3、疾病细胞周期靶向化合物、氨磷汀、血管他丁、抗EGF受体、单克隆抗体CD31、单克隆抗体CD40、卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白、或三甲基赖氨酸；R10为H、CH3、疾病细胞周期靶向化合物、氨磷汀、血管他丁、抗EGF受体、单克隆抗体CD31，单克隆抗体CD40、卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白、或三甲基赖氨酸；n为0或1；m为0或1；当n为1时，X为水溶性肽、C1-C20烷基、谷氨酸、多聚谷氨酸、天冬氨酸、多聚天 冬氨酸、乙酸溴乙酯、乙二胺或赖氨酸，或当n为0时，X为直连键；当m为1时，Y为水溶性肽、C1-C20烷基、谷氨酸、多聚谷氨酸、天冬氨酸、多聚天冬氨酸、乙酸溴乙酯、乙二胺或赖氨酸，当m为0时，Y为直连键；且M为99mTc、188Re、186Re、183Sm、166Ho、90Y、89Sr、67Ga、68Ga、 111In、183Gd、59Fe、225Ac、212Bi、211At、45Ti、60Cu、61Cu、67Cu、64Cu或62Cu。M优选99mTc且疾病细胞周期靶向化合物优选腺苷或喷昔洛韦。 
本发明还涉及评价目的药剂的药理学性质的方法，其包括(1)制备该药剂与N2S2螯合物的结合物，(2)将放射性核素加入到所述的结合螯合物中形成放射性结合物；(3)将所述放射性结合物施用给受试者；和(4)评价该药剂的药理学性质。目的药剂可以为药物治疗剂。在某些实施方案中N2S2螯合物为乙二半胱氨酸。受试者可以是任何一种受试者，如实验动物或人。在某些实施方案中，评价药剂的药学性质包括评价药试剂的生物分布、评价该药剂的生物稳定性、或评价该药剂的生物消除。 
附图简述 
下面的附图成为本说明书的一部分并被包括在本说明书中以进一步说明本发明的某些方面。通过参考这些图中的一个或多个图结合本文中给出的具体实施方案的详细说明可以更透彻地理解本发明。 
图1乳腺癌细胞中99mTc-EC-血管他丁的体外细胞摄取。 
图2用未标记的血管他丁在乳腺癌细胞中进行的99mTc-EC-血管他丁的体外阻断研究。 
图3加入未标记的血管他丁之后99mTc-EC-血管他丁的抑制百分率。 
图4在携带乳腺肿瘤的大白鼠体内99mTc-EC-抗血管生成剂的肿瘤摄取。 
图599mTc-EC-抗血管生成剂的肿瘤与肌肉计算密度之比。 
图699mTc-EC-血管他丁的闪烁显像图。 
图799mTc-EC-C225的HPLC色谱图。 
图8EC-C225和C225的体外比较。 
图9在携带A431vulvic肿瘤的裸鼠体内99mTc-EC-C225的生物分布。 
图10在携带A431 vulvic肿瘤的裸鼠体内肿瘤99mTc-EC-C225与组织计算密度之比。 
图11病例研究1：对头部和颈部癌症的99mTc-EC-C225扫描：左颈内静脉二腹肌***。 
图12病例研究2：对头部和颈部癌症的99mTc-EC-C225扫描：左舌底和口底。 
图1399mTc-EC-COX-2的合成。 
图14EC-COX-2-酯的NMR光谱数据。 
图15EC-COX-2-的NMR光谱数据。 
图16乳腺癌细胞中99mTc-EC-试剂的体外细胞摄取。 
图1799mTc-EC-COX-2的闪烁显像图。 
图18EC-沙利度胺的化学结构。 
图19EC-喹唑啉的化学结构。 
图20氨基喷昔洛韦的合成。 
图21EC-喷昔洛韦(EC-鸟嘌呤)的合成。 
图22人癌细胞系中99mTc-EC-喷昔洛韦(99mTc-EC-鸟嘌呤)的体外细胞摄取。 
图2399mTc-EC-喷昔洛韦(99mTc-EC-鸟嘌呤)的闪烁显像图。 
图2499mTc-EC-喷昔洛韦(99mTc-EC-鸟嘌呤)的放射自显影图。 
图25EC-脱氧胞苷的化学结构。 
图26卡培他滨的化学结构。 
图27EC-腺苷的合成。 
图2899mTc-EC-腺苷的放射自显影图。 
图2999mTc-EC-LHRH的闪烁显像图。 
图30人卵巢癌细胞中99mTc-EC-试剂的体外细胞摄取。 
图3199mTc-EC-LH的闪烁显像图。 
图3299mTc-EC-铁传递蛋白的放射自显影图。 
图33EC-TML的合成。 
图34EC-TML的质谱。 
图35在携带乳腺肿瘤的大白鼠体内99mTc-EC-TML的生物分布。 
图3699mTc-EC-TML的闪烁显像图。 
图37EC-吡哆醛的合成。 
图3899mTc-富勒烯-EC-药物结合物的合成。 
图39188Re-EC脱氧葡萄糖的合成。 
图40188Re-EC-甲硝唑的合成。 
图41178Re-和99mTc-标记的EC-喷昔洛韦(EC-鸟嘌呤)的体外细胞培养。 
图42188Re-EC-甲硝唑的体外细胞培养。 
图43A-43C99mTc-EC-脱氧葡萄糖(试剂盒制剂)的体外细胞培养。 
示例性实施方案的描述 
I.本发明 
本发明通过提供新的放射性标记的EC结合物而克服了现有技术中的缺陷，其中放射性标记的EC结合物被设计成能靶向肿瘤血管发生、缺氧、细胞凋亡缺陷、疾病受体、疾病作用途径、疾病细胞周期。这类放射性标记的EC结合物还可以用于评价药物治疗剂对上述的生物化学过程的效应。更具体地说，本发明提供放射性标记的99mTc-EC结合物以靶向肿瘤血管发生、缺氧、细胞凋亡缺陷、疾病受体、疾病作用途径、疾病细胞周期，除此之外还用于评价药物治疗剂对这些生物化学过程的效应。 
II.放射性药物 
在核医学领域，通过检测少量的体内给药(internally-administered)的放射性标记的示踪化合物(称为放射性示踪剂或放射性药物)的分布对某些病理状况进行定位或对其程度进行评价。检测这类放射性药物的方法通常是已知的显像或放射显像方法。 
III.放射显像方法 
在放射显像中，放射标记物是放射γ射线的放射性核素并利用检测γ射线的照相机对放射性示踪剂定位(这种方法通常称为γ闪烁法)。显像的部位是可检测的，因为要么所选择的放射性示踪剂位于病理部位(称为正反差)，要么所选择的放射性示踪剂特异性不位于这些病理部位(称为负反差)。 
IV.放射性核素 
各种放射性核素已知用于放射显像和放射免疫治疗，包括 67Ga/68Ga、99mTc、111In、123I、125I、169Yb或186Re/188Re。由于显像特性更好和价格更低，人们已经尝试当可能时用相应的99mTc标记的化合物代替123I、131I、67Ga和111In标记的化合物。由于具有有利的物理特性和极低的价格($0.21/mCi)，优选用99mTc标记放射性药物。虽然已有报 道可用99mTc有效地标记DTPA-药物结合物(Mathias等，1997)，DTPA基团与99mTc螯合不如与111In螯合稳定(Goldsmith，1997)。 
对于人体内的最佳放射显像必须考虑许多因素。为了使检测效率最佳，优选放射100-200keV范围γ能量的放射性核素。为了使患者辐射吸收剂量最小，放射性核素的物理半衰期应与提供的显像过程一样短。为了允许在任何一天和在一天的任何时候检测，在临床中心备有总是可得到的放射性核素源是有利的。99mTc是优选的放射性核素，因为它放射140keV的γ射线，具有6小时的物理半衰期，且易于利用钼-99/锝-99m发生器(generator)原位获得。 
V.乙二半胱氨酸 
本发明利用99mTc-EC结合物作为标记物以靶向肿瘤血管发生、缺氧、细胞凋亡缺陷、疾病受体、疾病作用途径和疾病细胞周期，除此之外还用于评价药物治疗剂对这些生物化学过程的效应。 
与组织靶向配体结合EC的优点是组织靶向配体的特异性结合性质在目标区域集中放射性信号。可以想象使用99mTc-EC结合物作为标记策略与所设计的配体结合可能是有效的，其中所述配体用于靶向疾病受体、缺氧、细胞凋亡途径、疾病细胞周期、疾病作用途径、放射免疫治疗，和评价药物治疗剂对这些生物化学过程的效应。本发明的某些实施方案的例子可见于表1。 
表1 
Figure BDA0000027340570000161
VI.99m锝-EC络合物 
99mTc通常由钼-99/锝-99m发生器以99mTc高锝酸盐(TcO4-；+7氧化态的锝)而获得。不过，高锝酸盐不能与其它化合物很好结合。因此，为了放射标记一种化合物，必须将99mTc高锝酸盐转化为别的形式。由于锝在水溶液中不能形成稳定的离子，因此它在这样的溶液中必须保持配位络合物的形式，这种配位络合物具有足够的动力学和热力学稳定性以防止分解和99mTc的最终转化为不溶性二氧化锝或者转回到高锝酸盐。 
就放射性标记而言，99mTc络合物形成螯合物特别有利，其中包围锝离子的所有供体基团由单一的螯合配体-在本发明中为乙二半胱氨酸提供。这就允许螯合的99mTc与组织特异性配体要么直接结合要么通 过乙二半胱氨酸和配体之间的单一连接物结合。 
锝具有许多氧化态：+1、+2、+4、+5、+6和+7。当为+1氧化态时，称之为Tc MIBI。Tc MIBI必须用加热反应生产(Seabold等1999)。对本发明而言，当使用N2S2螯合物时，Tc为+4氧化态是重要的。该氧化态对于与EC形成N2S2螯合物是理想的。因此，在与本发明的药物结合物形成放射性锝的络合物时，锝络合物，优选99mTc高锝酸盐，在还原剂存在的情况下与本发明的药物结合物起反应。 
优选用于本发明的还原剂为将Tc还原为其+4氧化态的氯化亚锡(SnCl2)形式的亚锡离子。不过，应考虑到其它还原剂，如连二硫酸根离子或亚铁离子也可以用于本发明中。还应当考虑到还原剂可以为固态的还原剂。还原剂的量可能是重要的，因为必须避免胶体的形成。例如，每约100-约300mCi的Tc高锝酸盐优选使用约10-约100μg SnCl2。最优选的量为每约200mCi的Tc高锝酸盐和约2ml盐水使用约0.1mg SnCl2。这样典型地生成足够在5名患者中使用的Tc-EC-组织特异性配体结合物。 
在组合物中包括抗氧化剂和过渡螯合剂(transition chelator)以防止乙二半胱氨酸氧化通常也是重要的。用于本发明中优选的抗氧化剂是维生素C(抗坏血酸)。不过，应考虑到也可以使用其它抗氧化剂如生育酚、吡哆醇、维生素B1或芦丁。过渡螯合剂的例子包括葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖二酸盐、枸橼酸盐和酒石酸盐。在某些实施方案中，过渡螯合剂为葡糖酸盐或葡萄糖二酸盐，两者都不干扰乙二半胱氨酸的稳定性。 
VII.EC配体 
通常，用于本发明中的配体要么具有氨基，要么具有羟基，它们能与EC在一个或两个酸臂(arms)上结合。倘若氨基或羟基不能获得(例如酸官能团)，期望的配体还可以采用本发明的方法通过加入连接物，如乙二胺、氨基丙醇、二亚乙基三胺、天冬氨酸、多聚天冬氨酸、谷氨酸、多聚谷氨酸或赖氨酸与EC结合和用99mTc标记。可考虑用于 本发明的配体包括但不限于血管发生/抗血管发生配体、DNA拓扑异构酶抑制剂、糖酵解标记物(glycolysis markers)、抗代谢物配体、细胞凋亡/缺氧配体、DNA嵌入剂、细胞受体标记物、肽、核苷酸、抗微生物剂如抗生素或抗真菌剂、器官特异性配体以及糖或模拟葡萄糖的试剂。 
EC本身是水溶性的。本发明的EC-药物结合物也必然是水溶性的。用于本发明中的许多配体是水溶性的，或当与EC结合时形成水溶性的化合物。不过，若组织特异性配体不是水溶性的，可以使用增加配体溶解度的连接物。连接物可以与脂肪族、芳香族的醇、胺、肽、羧基、肽或它们的任何一种组合结合。连接物可以为多聚氨基酸(肽)、氨基酸、丙氨酸精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸盐、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸、组氨酸、异亮氨酸、白氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸或者它们的任何一种组合。更优选的连接物可以为谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸或它们的任何一种组合。 
还可以想象的是本发明的EC-组织特异性配体药物结合物可与其它放射性核素螯合和用于放射性核素治疗。通常认为事实上任何一种α，β-发射体、γ-发射体、或β，γ-发射体都可用于本发明中。优选的α发射体包括铋-213、砹-211和镭-223。优选的β，γ-发射体包括 166Ho、188Re、186Re、153Sm和89Sr。优选的β-发射体包括90Y和225Ac。优选的γ-发射体包括67Ga、68Ga、64Cu、62Cu和111In。优选的α-发射体包括211At和212Bi。还可以构想的是顺磁性物质如Gd、Mn、Cu或Fe可与EC螯合用于本发明中。 
VIII.制备EC络合物的试剂盒 
络合物和制备这类络合物的工具适宜以试剂盒的形式提供，试剂盒包括装有将被标记的预定量的本发明EC-组织特异性配体结合物和足量的用99mTc标记结合物的还原剂的密封小瓶。本发明的99mTc标记的闪烁显像剂可通过将适量的99mTc或99mTc络合物加入到装有EC-组织 特异性配体结合物和还原剂的小瓶中并在下文实施例1所述的条件下反应来制备。试剂盒还可包含常规的药物添加剂，如调节渗透压的药学上可接受的盐、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂等等。 
在某些实施方案中，组合物中含抗氧化剂和过渡螯合剂以防止乙二半胱氨酸氧化。在某些实施方案中，抗氧化剂为维生素C(抗坏血酸)。不过，应考虑到也可以使用其它本领域的普通技术人员已知的抗氧化剂如生育酚、吡哆醇、维生素B1或芦丁。用于本发明中的过渡螯合剂的例子包括但不限于葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖二酸盐、枸橼酸盐和酒石酸盐。在本发明的某些实施方案中，过渡螯合剂为葡糖酸盐或葡萄糖二酸盐，因为两者都不干扰乙二半胱氨酸的稳定性。试剂盒的组分可为液体、冷冻或干燥的形式。在优选的实施方案中，试剂盒组分以冷干的形式提供。 
IX.放射性标记的试剂 
本发明提供的放射性标记的试剂或结合物具有适当量的放射活性。形成99mTc放射性络合物时，通常优选在含浓度为每毫升约0.01毫居里(mCi)至约300mCi放射活性的溶液中形成放射性络合物。 
本发明提供的99mTc标记的闪烁显像剂可被用来显现哺乳动物体内的部位。按照本发明，99mTc标记的闪烁显像剂以单一的可注射的单位剂量应用。按照本发明任何本领域技术人员已知的常用载体如无菌盐水溶液或血浆，都可在放射性标记之后使用，用于配制诊断显像的各个器官、肿瘤等的可注射溶液。通常，将应用的单位剂量的放射能为约0.01mCi至约300mCi，优选10mCi至约200mCi。以单位剂量注射的溶液为约0.01mL-约10mL。在静脉内注射应用之后，如有需要可在放射性标记的试剂引入患者体内数小时乃至更长的时间后进行体内器官或肿瘤的显像。大多数情况上，足量的应用剂量便会在约0.1小时内聚集于显像的区域以允许拍摄γ闪烁图。按照本发明用于诊断或预后的闪烁显像的任何常规方法都可使用。 
X.99mTc-EC结合物的应用 
本发明的99mTc-EC标记策略还可用于预后目的。可以构想列在表1 中的EC-结合物可给患肿瘤的患者应用。可以构想使用99mTc-EC作为标记策略用于配体可能是有效的，其中所述配体被设计用于靶向疾病受体、缺氧标记物、细胞凋亡缺陷、疾病细胞周期、疾病作用途径，和评价药物治疗剂对这些生物化学过程的效应。可进行显像以确定 99mTc-EC-结合物对抗与疾病受体、缺氧标记物、细胞凋亡缺陷、疾病细胞周期、疾病作用途径相关的患者具体问题的有效性，和评价药物治疗剂对这些生物化学过程的效应。用这种方法医生能迅速确定哪一种99mTc-EC-结合物将对于患者最有效并设计相应的疗法或治疗模式。这种新方法代表一种对目前选择药物和实施一轮化疗的方法的显著改进，原来的方法在癌症化疗剂的有效性能被确定之前可能花费患者几个月的时间和相当的费用。 
本发明还可以用于监测成功经受了化疗或辐射处理的前述患者的病情发展以确定癌症是否减轻或正在转移。有癌症家族历史或已经确诊为携带与癌症有关的基因的人们可以接受健康专家使用本发明的方法进行的监测。本发明的方法和药物治疗剂还可以由健康专业人员使用以监测癌症是否已经在由暴露于致癌因子的环境而有患癌症危险因素的人体内开始发展。 
XI.肿瘤血管发生靶向 
在整篇申请中，“肿瘤血管发生靶向”是指用试剂与肿瘤新生血管形成和肿瘤细胞结合。用于该用途的试剂为本领域的普通技术人员已知的用于进行各种肿瘤测量，包括肿瘤血管床尺寸的测量、和肿瘤体积的测量的试剂。其中一些试剂与血管壁结合。一个本领域的普通技术人员将熟悉可用于该用途的试剂。肿瘤血管发生靶向配体是一种用于如上定义的肿瘤血管发生靶向的配体。这类试剂的例子包括 99mTc-EC-西乐葆(EC-COX-2)、99mTc-EC-C225、99mTc-EC-赫赛汀、99mTc-EC-血管他丁，99mTc-EC-沙利度胺已经开发用于评价血管发生的生化过程。 
XII.肿瘤细胞凋亡靶向 
“肿瘤细胞凋亡靶向”是指用一种试剂与经历细胞凋亡的细胞或有细胞凋亡危险性的细胞结合。这些试剂通常用于在一群细胞，如肿 瘤中提供细胞凋亡、或程序性细胞死亡的程度或危险率的指示。一个本领域的普通技术人员将熟悉用于该用途的试剂。细胞凋亡靶向试剂的例子如表1所示。“肿瘤细胞凋亡靶向配体”是一种能进行在该段中定义的肿瘤细胞凋亡靶向的配体。本发明的靶向配体可包括TRAIL，它是与TNF相关的细胞凋亡诱导配体，是在各种转化细胞系中快速诱导细胞凋亡的肿瘤坏死因子配体家族的成员之一。本发明的靶向配体还可包括半胱天冬酶-3靶向配体。 
细胞凋亡抑制因子是用于药物发现的靶子，其概念是废除它们的细胞保护作用且对肿瘤细胞恢复细胞凋亡敏感性(Reed，2003)。 
XIII.疾病受体靶向 
在“疾病受体靶向”中，开发了一些试剂以便它们能与在疾病状态如癌症中，过度表达的某些细胞受体结合。这类被作为目标的受体的例子包括***受体、雄激素受体、垂体受体、铁传递蛋白受体和孕酮受体。可用于疾病-受体靶向的试剂的例子如表1所示。 
放射性标记的配体，如喷曲肽、善得定、铁传递蛋白和垂体肽，与细胞受体结合，其中一些细胞受体在某些细胞上过度表达。因为这些配体不是免疫原性的且能迅速从血浆中清除，与抗体显像相比受体显像似乎更有前途。 
在本发明中，发明人发展了一系列新的受体配体。这些配体是 99mTc-EC-促黄体生成激素(99mTG-EC-LH)和99mTc-EC-铁传递蛋白。 
XIV.疾病细胞周期靶向 
用于体内测量细胞增殖的基于基因的类似物已经由PET证实(Alauddin等，2001)。 
疾病细胞周期靶向是指在增殖细胞中受增量调节的试剂的靶向。用于该用途的化合物可用来测量在细胞中的各个参数，如肿瘤细胞中的DNA含量。 
这些试剂中有许多是核苷类似物。例如，嘧啶核苷(例如，2′-氟-2′-脱氧-5-碘-1-β-D-***呋喃糖尿嘧啶[FIAU]、2′-氟-2′-脱氧-5-碘-1-β-D-核呋喃糖-尿嘧啶[FIRU]、2′-氟-2′-5-甲基-1- β-D-***呋喃糖尿嘧啶[FMAU]、2′-氟-2′-脱氧-5-碘代乙烯基-1-β-D-核呋喃糖尿嘧啶[IVFRU])和无环鸟苷：9-[(2-羟基-1-(羟甲基)乙氧基)甲基]鸟嘌呤(GCV)和9-[4-羟基-3-(羟甲基)丁基]鸟嘌呤(PCV)(Tjuvajev等，2002；Gambhir等，1998；Gambhir等，1999)及其它18F-标记的无环鸟苷类似物，如8-氟-9-[(2-羟基-1-(羟甲基)乙氧基)甲基]鸟嘌呤(FGCV)(Gambhir等，1999；Namavari等，2000)、8-氟-9-[4-羟基-3-(羟甲基)丁基]鸟嘌呤(FPCV)(Gambhir等，2000；Iyer等，2001)、9-[3-氟-1-羟基-2-丙氧基甲基]鸟嘌呤(FHPG)(Alauddin等，1996；Alauddin等，1999)、和9-[4-氟-3-(羟甲基)丁基]鸟嘌呤(FHBG)(Alauddin和Conti，1998；Yaghoubi等，2001)已经开发为报道分子底物用于显像野生型和突变型(Gambhir等，2000)HSV1-tk的表达显像。一个本领域或普通技术人员将熟悉这些试剂及其它用于疾病细胞周期靶向的试剂。 
在本发明中，发明人发展了一系列疾病细胞周期靶向配体。例如，这些配体包括99mTc-EC-腺苷和99mTc-EC-喷昔洛韦(EC-鸟嘌呤)。 
XV.药物评价 
本发明的某些基于药物的配体可用于测量受试者对药物的药理学反应。在测定受试者对药物应用的反应中可测量许多参数。一个本领域的普通技术人员将熟悉可测量的反应的种类。这些反应在某种程度上依赖于各种因素，包括所评价的具体药物、正在接受治疗的受试者的具体疾病或状况、以及受试者的特性。在测量药物的评价中可应用放射性标记的试剂。 
在本发明中，发明人发展了一种新的基于药物的配体99mTc-EC-肉毒碱(Taggart等，1999)。这些试剂的其它例子如表1所示。 
XVI.药物制剂 
本发明的药物组合物含溶解或分散于药学上可接受的载体中的有效量的放射性标记的乙二半胱氨酸衍生物，或更具体为99mTc-EC衍生物或其它试剂。短语“药学上或生理学可接受的”是指分子实体和组合物当适当地应用到动物(如人)时不产生有害的、过敏的或其它不 良反应。根据目前的公开，含至少一种放射性标记的乙二半胱氨酸衍生物或其它活性成分的药物组合物的制备将为本领域技术人员已知，如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版Mack PrintingCompany，1990所示例的，该书在此引入作为参考。此外，对于动物(例如人)的施用，应当理解制剂应该满足FDA Office的生物制品标准所要求的无菌、致热原性、一般的安全性和纯度标准。 
本文中使用的“药学上可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、凝胶剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、着色剂、类似的物质以及它们的组合，上述物质为本领域普通技术人员已知(例如，参见Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，MackPrinting Company，1990，第1289-1329页，在此引入作为参考)。除任何与活性成分不相容的常规载体之外，都可考虑将其应用在治疗或药物组合物中。 
放射性标记的乙二半胱氨酸衍生物可含不同类型的载体，取决于它是否将以固体、液体或气雾剂的形式应用以及对于该给药途径如注射是否必须是无菌。本发明的制剂可以静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、病灶内(intralesionally)、颅内、关节内、***内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内(intravitreally)、***内、直肠内、局部、瘤内、肌内、腹膜内、皮下、结膜下、囊泡内(intravesicularlly)、粘膜、心包内、脐内(intraumbilically)、眼内、经口地、局部地、局部(locally)、注射、输注、连续输注、直接局部灌注浸浴靶细胞、经导管、经灌洗、以脂类组合物(例如脂质体)的方式给药，或通过其它方法或上述为本领域普通技术人员已知的方式的任何组合方式给药(例如，参见Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，MackPrinting Company，1990，Mack Printing Company，1990，在此引入作为参考)。 
给患者应用的本发明组合物的实际用药量可由身体和生理因素， 如体重、疾病的严重程度、所治疗的疾病种类、早先的或并行的治疗、患者的特发病以及有关给药途径而确定。总之，负责给药的医师将确定组合物中活性成分的浓度和个体受试者的合适剂量。 
例如，在某些实施方案中，药物组合物可含至少约0.1％的放射性标记的乙二半胱氨酸衍生物。例如，在其它实施方案中，活性化合物可占单位剂量重量的约2％-约75％，或约25％-约60％，以及其中任何可导出的范围。在其它非限制性例子中，剂量也可包括每次给药约0.1mg/kg/体重、0.5mg/kg/体重、1mg/kg/体重、约5mg/kg/体重、约10mg/kg/体重、约20mg/kg/体重、约30mg/kg/体重、约40mg/kg/体重、约50mg/kg/体重、约75mg/kg/体重、约100mg/kg/体重、约200mg/kg/体重、约350mg/kg/体重、约500mg/kg/体重、约750mg/kg/体重，至约1000mg/kg/体重或更高，以及其中任何可导出的范围。在根据本文中列举的数量可导出的范围的非限制性例子中，基于上述的数量可以按约10mg/kg/体重至约100mg/kg/体重等的剂量范围给药。 
在任何情况下，组合物都可含各种抗氧化剂以阻止一种或多种成分的氧化。另外，防腐剂，如各种抗菌剂和抗真菌剂，可以防止微生物的作用，包括但不限于对羟苯甲酸酯(例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯)、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞或它们的组合。 
放射性标记的乙二半胱氨酸衍生物可以游离碱、中性或盐的形式配制成组合物。药学上可接受的盐包括由无机碱例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁；或如异丙胺、三甲胺、组氨酸或普鲁卡因这样的有机碱与游离的羧基产生的盐。 
在组合物为液态形式的实施方案中，载体可以是溶剂或分散介质，包括但不限于水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、脂类(例如甘油三酯、植物油、脂质体)以及它们的组合。适当的流动性可以通过下述方式维持：例如通过利用包衣如卵磷脂；通过维持在载体如液态的多元醇或脂类中分散的所要求的粒径；通过利用表面活性剂如羟丙基纤维素；或诸如此类方法的组合。在很多情况下，优选包括 等渗剂，如糖、氯化钠或它们的组合。 
无菌可注射的溶液制备如下：将在所需量的合适溶剂中的放射性标记的乙二半胱氨酸衍生物根据需要与上文列举的不同量的其它组分混合，之后过滤灭菌。通常，分散体通过将各种灭菌的活性成分掺入到含碱性分散介质和/或其它组分的无菌赋形剂中来制备。在用于配制无菌可注射的溶液、混悬液或乳剂的无菌粉末的情况下，优选的制备方法为真空干燥或冷冻干燥技术，它们能由预先无菌过滤的液体介质产生活性成分加任何其它所需组分的粉末。必要时液体介质应适当地缓冲且在注射之前液体稀释剂首先用足量的盐或葡萄糖调至等渗。也可考虑制备用于直接注射的高度浓缩的组合物，在这种情况下可以构想使用DMSO作为溶剂以产生非常迅速的渗透、将高浓度的活性剂输送至小区域内。 
组合物在制备和贮存的条件下必须是稳定的，且必须防止微生物如细菌和真菌的污染。应理解内毒素污染最低应保持在安全限度内，例如低于0.5ng/mg蛋白质。 
在具体的实施方案中，通过在组合物中使用吸收延迟剂，如单硬脂酸铝、明胶或其组合可以延长可注射组合物的吸收。 
XVII.联合治疗 
本发明的一个方面是放射性标记的乙二半胱氨酸衍生物可与另一种试剂或治疗方法(优选另一种癌症治疗法)联合使用。放射性标记的乙二半胱氨酸衍生物可在其它试剂治疗之前或之后间隔数分钟至数周使用。在其它试剂和表达构建体分开地应用于细胞的实施方案中，通常要确保在各自释放的时间之间的有效时段不会超出，这样以使试剂和表达构建体还能在细胞上发挥有利的联合效应。例如，在这样的情况下，应考虑可与放射性标记的乙二半胱氨酸衍生物基本上同时(即在不到约一分钟内)地应用两种、三种、四种或更多种药征(modalities)接触细胞、组织或生物体。另一方面，可将一种或多种试剂在放射性标记的乙二半胱氨酸衍生物给药之前和/或之后约1分钟、约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约45分钟、 约60分钟、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约25小时、约26小时、约27小时、约28小时、约29小时、约30小时、约31小时、约32小时、约33小时、约34小时、约35小时、约36小时、约37小时、约38小时、约39小时、约40小时、约41小时、约42小时、约43小时、约44小时、约45小时、约46小时、约47小时，至约48小时或更长时间内给药。在某些其它的实施方案中，药剂可在放射性标记的乙二半胱氨酸衍生物给药之前和/或之后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约15天、约16天、约17天、约18、约19天、约20天、至约21天内给药。然而，在一些情况下，可能需要显著延长治疗时间，其中各自给药之间空几周(例如约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周或更长时间)。 
可以采用不同的组合，放射性标记的乙二半胱氨酸衍生物为“A”而第二试剂(可以是任何一种其它的治疗剂)为“B”： 
A/B/A  B/A/B  B/B/A  A/A/B  A/B/B  B/A/A  A/B/B/BB/A/B/B 
B/B/B/A  B/B/A/B  A/A/B/B  A/B/A/B  A/B/B/A  B/B/A/A 
B/A/B/A  B/A/A/B  A/A/A/B  B/A/A/A  A/B/A/A  A/A/B/A 
将本发明的治疗性表达构建体应用给患者将遵循通常的化学治疗给药的方案，若载体有毒性，应注意载体的毒性。可以预料治疗周期将根据需要重复。还可考虑各种标准的治疗和外科手术与所述的砷剂联合应用。这些治疗包括但不限于化学治疗、放射治疗、免疫治疗、基因治疗和外科手术。 
a.化学治疗 
癌症治疗还包括基于化学药品和放射线治疗的各种联合治疗。例 如，联合化疗包括顺氯氨铂(CDDP)、卡铂、丙卡巴肼、氮芥、环磷酰胺、喜树碱、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、nitrosurea、放线菌素、柔红霉素、阿霉素、博来霉素、plicomycin、丝裂霉素、依托泊苷(VP16)、他莫西芬、雷洛昔芬、***受体结合剂、紫杉酚、吉西他滨、诺维本、法呢基-蛋白质转移酶抑制剂、顺铂、5-氟尿嘧啶、新长春碱、长春碱和氨甲喋呤、或上述任何一种类似物或衍生物变体。 
b.放射治疗 
其它引起DNA损伤并且已经广泛应用的因子包括通常被称为γ-射线、X-射线、和/或直接输送到肿瘤细胞的放射性同位素的这些因子。还可考虑其它形式的DNA损伤因子，如微波和紫外线照射。所有这些因子很可能会引起DNA、DNA前体、DNA的复制和修复、以及染色体的装配和维持的广泛损害。X-射线的剂量范围为50-200伦琴长期应用(3-4周)的每日剂量至2000-6000伦琴的单次剂量。放射性同位素的剂量范围变化很大，取决于同位素的半衰期、发射的射线的强度和种类、以及肿瘤细胞的摄取。术语“接触”和“暴露，”当应用于细胞时，在本文中用于描述治疗性构建体和化学治疗剂或放射治疗剂被输送到靶细胞或被置于与靶细胞的直接邻近的方法。为了达到使细胞杀死或停滞的目的，将两种治疗剂以有效杀死细胞或阻止其***的合并量输送至细胞。 
c.免疫治疗 
免疫疗法通常依赖免疫效应细胞和分子对癌细胞的靶向和破坏的应用。免疫效应器可以是例如肿瘤细胞表面上一些标记物的特异性抗体。单独的抗体可以起治疗效应器的作用或者它可以招幕其它细胞去实际上实施细胞杀死的功能。抗体也可以与药物或毒素(化学治疗剂、放射性核苷酸、蓖麻毒A链、霍乱菌毒素、百日咳毒素等。)结合而仅仅起靶向剂的作用。另外，效应器可以是带有表面分子的淋巴细胞，其中表面分子与肿瘤细胞靶直接或间接相互作用。不同的效应细胞包括细胞毒性T细胞和NK细胞。 
因此，免疫治疗可用作联合治疗的一部分，与基因治疗结合。联合治疗的常规方法在下面论述。通常，肿瘤细胞一定带有一些接受靶向作用的标记物，即在大部分其它的细胞上不存在的标记物。存在许多肿瘤标记物并且在本发明的上下文中其中任何一种都适合于靶向。常见的肿瘤标记物包括癌胚抗原、***特异性抗原、泌尿道肿瘤相关抗原、胚儿抗原、酪氨酸酶(p97)、gp68、TAG-72、HMFG、Sialyl Lewis抗原、MucA、MucB、PLAP、***受体、层粘连蛋白受体、erb B和p155。 
d.基因 
在另一实施方案中，第二治疗为另一种基因治疗，其中治疗性多核苷酸在第一治疗剂之前、之后、或同时给药。将治疗剂和编码基因产物的载体一起输送将对靶组织有联合的抗过度增殖的作用。 
e.外科手术 
大约60％癌症患者会进行某些类型的手术，它包括预防性、诊断性或肿瘤分类、治疗性和缓解性外科手术。治疗性外科手术是一种可以与其他治疗如本发明治疗、化学治疗、放射治疗、激素治疗、基因治疗、免疫治疗和/或替换治疗结合应用的癌症治疗方法。治疗性外科手术包括切除，其中整个或部分癌组织完全或部分地移除、摘除、和/或破坏。肿瘤切除是指从身体上切除至少部分肿瘤。除肿瘤切除之外，外科手术治疗还包括激光手术、冷冻手术、电外科手术、以及错抄控制(miscopically controlled)的外科手术(Mohs’外科手术)。可进一步考虑本发明可以与浅表癌症(superficial cancers)、初癌、或附带量组织(incidental amounts of normal tissue)的切除结合应用。 
XVIII.EC的合成 
按照以前描述的方法，EC以两步法合成来制备(Ratner和Clarke，1937；Blondeau等，1967；均在此引入作为参考)。合成其前体L-噻唑烷-4-甲酸(m.p 195°，报道值196-197°)。然后制备EC(m.p.237°， 报道值251-253°)。通过1H-NMR和快原子轰击质谱(FAB-MS)确定其结构。 
XIX.闪烁显像和放射自显像研究 
在静脉注射18.5MBq的99mTc-标记的放射性示踪剂0.5、2和4小时后利用配备有低能量、平行孔准直仪的γ照相机获得闪烁影像。 
通过定量图像分析仪获得全身放射自显影(Cyclone StoragePhosphor System，Packard，Meridian，CI.)。在静脉注射37MBq的99mTc-EC-叶酸盐之后，在1小时时将动物杀死并将身体固定于羧甲基纤维素(4％)中。将冷冻的身体置于恒冷切片机(LKB 2250低温切片机)上并切成100μm冠状缝切面。将各切面解冻并置于载玻片上。然后使载玻片与多用途磷存储屏(phosphor storage screen)(MP，7001480)接触并暴光15小时以进行99mTc-标记)。磷屏被红光激光器激发，并记录所产生的蓝光，该蓝光与先前吸收的能量成比例。 
XX.定义 
本文中使用的术语“放射性核素”定义为一种在具体的实施方案中能***而发射微粒子或电磁辐射的放射性核素(一种能在可测量的使用寿命内存在并且能根据该原子核的电荷、质量、数量、和量子态进行区分的原子种类)。该术语可以与术语“放射性同位素”互换使用。 
本文中使用的术语“治疗剂”定义为一种为疾病或医疗的状况提供治疗的试剂。具体实施方案中的试剂能改善疾病或医疗状况的至少一种症状或参数。例如，在肿瘤治疗中，治疗剂缩小肿瘤的尺寸、抑制或阻止肿瘤的生长或转移、或消除肿瘤。例子包括药物，如抗癌药物、基因治疗组合物、放射性核素、激素、营养药、或它们的组合。 
本文中使用的术语“肿瘤”定义为组织中细胞不受控制的和累进性生长。专业技术人员知道存在其它的同义术语，如瘤或恶性肿瘤。在具体的实施方案中，肿瘤为实体瘤。在其它的具体实施方案中，肿瘤要么由为原发瘤要么为源自癌症转移的形式，这些癌症如肝、前列 腺、胰腺、头部和颈部、***、脑、结肠、腺、口腔、皮肤、肺、睾丸、卵巢、宫颈、子宫内膜、膀胱、胃、以及上皮的癌症(如疣)。 
本文中使用的术语“药物”定义为有助于疾病或医疗状况的治疗或者能控制或改善任何与疾病或医疗状况有关的生理或病理条件的化合物。在具体的实施方案中，药物为99mTc-EC-药物结合物。 
本文中使用的术语“抗癌药物”定义为用于治疗癌症，例如实体瘤的药物。抗癌药物优选地缩小肿瘤的尺寸、抑制和/或阻止肿瘤的生长和/或转移、和/或消除肿瘤。 
本文说明书中使用的“一”可以意味着一或多。当与“包括”结合使用时，本文权利要求书中使用的“一”可以意味着一或一以上。本文中使用的“另一种”可以意味着至少另一种或更多。 
XXI.实施例
列举以下实施例以举例说明本发明的优选实施方案。本领域技术人员应当理解以下实施例中公开的技术代表发明人发现的在本发明的实践中作用较好的技术，因此可以被认为构成其实践的优选方式。然而，根据本发明的公开，本领域技术人员应该理解在不背离本发明的精神和范围的情况下可以对公开的具体实施方案进行许多变化并且仍然能获得相似的结果。 
实施例1 
用EC-血管他丁靶向整联蛋白(αvβ3) 
a.乙二半胱氨酸(EC)的合成 
整联蛋白(αvβ3)是一种可以用本发明化合物EC-血管他丁靶向的疾病血管生成靶。按照以前描述的方法以两步合成来制备EC(Ratner和Clarke，1937；Blondeau等，1967；均在此引入作为参考)。合成其前体，L-噻唑烷-4-甲酸(m.p.195°，报道值196-197°)。然后制备EC(m.p.237°，报道值251-253°)。通过1H-NMR和快原子轰击质谱(FAB-MS)确定其结构。 
b.99mTc-EC-血管他丁的放射合成 
将碳酸氢钠(1N，1ml)加入到搅拌的EC溶液(3.27mg，12.2μ mol)中。向该无色溶液中加入磺基-N-羟基磺基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS，Pierce Chemical Co.，Radford，IL)(3.0mg，13.8μmo l)和1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC，2.0mg，10.5μmol)(Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，WI)。然后加入血管他丁(32.7mg，0.93μmol)。将该混合物在室温下搅拌18小时。将该混合物透析48小时(M.W.截断值为10,000)。在冷冻干燥后称量EC-血管他丁重17mg(产率：100％)。将99mTc-高锝酸盐(5.5mCi)(SyncorPharmaceutical Inc，Houston，TX)加入到装有在0.2ml水中的EC-血管他丁(10μg，0.5nmol)冷冻干燥残留物和氯化锡(II)(SnCl2，100g，0.53μmol)的小瓶中。将产物用葡聚糖凝胶G-25柱(柱床体积10ml)(Sigma Chemical Company，St.Louis，MO)纯化并用PBS(5ml)洗脱。每个试管中收集1毫升洗脱液。分离出第3和4管内的产物，得到3.9mCi(70％)。通过射线-TLC扫描器用1M乙酸铵∶甲醇(4∶1)作为洗脱剂评估放射化学纯度(Bioscan，Washington，DC)。使用配备有GPC柱(Biosep SEC-S3000，7.8×300mm，Phenomenex，Torrance，CA)和两个检测器(NaI和UV)的高效液相色谱仪(HPLC)分析该产物的纯度。洗脱剂为在PBS中的0.1％LiBr(10mM)且流速为1.0ml/min。 
c.体外细胞摄取分析和组织分布研究 
将不同浓度血管他丁(0-200μM)的体外细胞培养物用99mTc-EC-血管他丁(4μCi/50,000个细胞/孔)在0.5-2小时时在RBACRL-1747中孵育。在癌细胞中加入未作标记的血管他丁后，99mTc-EC-血管他丁的摄取显著减少，暗示摄取的受体机制(图1-2)。血管他丁的I C-50为176μM(R2＝0.998)(图3)。 
对携带乳腺肿瘤的大白鼠中的生物分布进行评估(RBA CRL-1747，n＝3/时间间隔，静脉注射)。在移植14-17天之后当肿瘤直径达到大约1cm时进行研究。应用放射性示踪剂之后，在0.5-4小时时将大白鼠处死。将所选择的组织摘除、称重并使用γ计数器(PackardInstruments，Downers Grove，IL)计算放射性强度。各样品中示踪剂的生物分布以每克组织湿重中的注射剂量之百分比(％ID/g)计算。 99mTc-EC-血管他丁在携带肿瘤的大白鼠中的生物分布显示作为时间函数的肿瘤与组织计数密度之比增加(图4-5)。 
d.闪烁显像研究 
在0.5-4小时时对携带乳腺肿瘤的大白鼠进行闪烁显像研究(0.3mCi/大鼠，n＝3，静脉注射)。对照组应用99mTc-EC。计算机描绘的目标区域用于测定肿瘤摄取(计数/像素)和肿瘤/非肿瘤计数密度之比。平面图像证实肿瘤可以用放射性标记的血管他丁(图6)清楚地显现。 
许多其它的蛋白质和肽也可适于采用实施例1中描述的该技术。这包括EC-VEGF(血管内皮生长因子)、EC-内皮生长抑素(抗内皮细胞)、EC-干扰素α(抗-FGF)。 
实施例2 
用EC-C225单克隆抗体靶向EGFR 
a.99mTc-EC-C225的放射合成 
EGFR是一种可用本发明化合物99mTc-EC-C225单克隆抗体靶向的疾病血管生成靶。临床的抗-EGF受体R MAb C225(IMC-C225)级从ImClone Systems，Inc.(Somerville，NJ)获得。将C225(20mg)与EC(28.8mg，0.11mmo l在1.4ml的1N NaHCO3中)、磺基-NHS(23.3mg，0.11mmol)和EDC(16.6mg，0.09mmol)一起搅拌。透析后，得到17mg  EC-C225。将100mCi的Na 99mTcO4加入到装有1mg EC-C225和100μg SnCl2的小瓶中并将产物用G-25柱纯化并用PBS洗脱，得到80mCi99mTc-EC-C225。99mTc-EC-C225的放射化学纯度为100％(HPLC，凝胶渗透柱，0.1％LiBr在10mM PBS中，pH7.4)。比放射性活度为2Ci/μmol(图7)。 
例如，免疫测定(蛋白质印迹和免疫沉淀)和细胞增殖测定用于检测EC-C225的完整性。简而言之，已知DiFi细胞在细胞培养过程中当与C225接触时经历细胞凋亡。将细胞接种在24-孔的培养皿上。通过向0.5ml的培养基中加入50ul的10mg/ml MTT(溴化3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑)(Sigma)测定细胞的生活力并 将细胞在CO2培养箱中于37℃下培养3小时，之后用在二甲基甲酰胺/H2O中含20％SDS、pH 4.7的缓冲液在37℃下溶解细胞6h以上。然后通过测量胞溶产物在595nm处的吸光率和用相应未处理的细胞归一化测定值而测定细胞的生活力。结果表明EC-C225在DiFi细胞中具有诱导细胞死亡的生物活性。与之相反，与未处理的对照细胞相比较EC-Na对细胞增殖没有显示出任何影响(图8)。 
b.组织分布研究 
对生长在裸鼠体内的A431(一种过度表达EGFR的异种移植物)中的生物分布进行评估(1μCi/小鼠，10μg/小鼠，n＝3/时间间隔，静脉注射)。在移植14-17天之后当肿瘤直径达到大约1cm时进行研究。应用放射性示踪剂之后，在0.5-4小时时将小鼠处死。摘除所选组织，称重并用γ计数器进行放射性强度计数。各样品中示踪剂的生物分布以每克组织湿重中的注射剂量之百分比(％ID/g)计算。生物分布研究表明肿瘤与肌肉计数密度之比作为时间函数增加(图9)。肿瘤摄取(％ID/g)为1±0.2％。肿瘤总摄取为注射剂量的6％(图10)。 
c.闪烁显像研究 
在5名患者中用HNSCC在0.5-24小时时进行SPECT显像(25-30mCi/患者)。在C225抗体治疗与放射治疗联合治疗之前每名患者都经历了扫描。计算机描绘的目标区域用于测定肿瘤摄取(计数/像素)和肿瘤/非肿瘤计数密度之比。临床SPECT图像表明肿瘤可在0.5-4小时时显现。图像及结果如图11-12所示。 
其它的抗体也可适于采用该EC技术，包括EC-赫赛汀(抗HER2)、EC-CD31、EC-CD40(免疫调节剂)、EC-HSA(人血清白蛋白)。 
实施例3 
用EC-COX-2靶向COX-2酶 
a.乙氨基COX-2(EA-COX-2)的合成 
COX-2酶为一种疾病血管生成靶，它可用本发明化合物EC-COX-2靶向。将N-4-(5-对甲苯基-3-三氟甲基-吡唑-1-基)苯磺酰胺(COX-2抑制剂)(114.4mg，0.3mmol)溶解于氯仿(2ml)中。向该溶液中，加入 DBU 44.9μl(0.3mmol在0.5ml氯仿中)和乙基异氰酸根合醋酸酯33.7μl(0.3mmol在0.5ml氯仿中)。将该反应物在室温下搅拌6小时。真空蒸发溶剂。以氯仿甲醇作为洗脱剂将产物从硅胶填充柱中分离。酯形式的COX-2(化合物I)的产量为135mg(88.1％)。合成流程图如图13所示。NMR光谱数据记录在图14中。 
将化合物I(102mg，0.2mmol)溶解于2ml的甲醇中并加入乙二胺(72.9μl)。将该反应物在室温下搅拌24小时。以氯仿甲醇作为洗脱剂将产物从硅胶填充柱中分离。分离出所需的乙氨基COX-2(EA-COX-2)(化合物II)(91mg，86.7％产率)。化合物I I的NMR光谱数据记录在图15中。 
b.EC-乙氨基COX-2(EC-COX-2)的合成 
为了溶解EC，将NaOH(1N，0.6ml)加入到搅拌的EC(42.3mg，0.15mmol)的水(3ml)溶液中。向该无色的溶液中，加入磺基-NHS(65.1mg，0.3mmol)和EDC(57.5mg，0.3mmol)。然后加入EA-COX-2(78.6mg，0.15mmol)。将混合物在室温下搅拌24小时然后用分子截断值为500的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum Medical Industries Inc，Houston，TX)透析48小时。透析之后，将产物冻干。产物重87.5mg(产率75％)。 
c.用99mTc放射性标记EC-COX-2 
99mTc-EC-COX-2的放射合成通过将需要量的99mTc-高锝酸盐加入到装有EC-COX-2(5mg)的冷冻干燥残留物、SnCl2(100μg)、Na2HPO4(13.5mg)、抗坏血酸(0.5mg)、谷氨酸(2mg)和EC(0.5mg)的自制试剂盒中来实现。制剂的最终pH为7.4。放射化学纯度通过TLC(ITLC SG，Gelman Sciences，Ann Arbor，MI)分别用乙酸铵(1M在水中)∶甲醇(4∶1)洗脱进行测定。根据射线-TLC(Bioscan，Washington，DC)分析，放射化学纯度＞95％。 
d.体外细胞摄取分析和组织分布研究 
将肿瘤细胞的体外细胞培养物用99mTc-EC-COX-2(4μCi/50,000细胞/孔)于0.5-2小时时在RBA CRL-1747中孵育。与99mTc-EC(图1 和16)相比摄取有显著的增加。 
对携带乳腺肿瘤的大白鼠中的生物分布进行评估(RBA CRL-1747，n＝3/时间间隔，静脉注射)。在移植14-17天之后当肿瘤直径达到大约1cm时进行研究。应用放射性示踪剂之后，在0.5-4小时时将大白鼠处死。摘除所选组织，称重并用γ计数器(Packard Instruments，Downers Grove，IL)进行放射性强度计数。各样品中示踪剂的生物分布以每克组织湿重中的注射剂量之百分比(％ID/g)计算。与99mTc-EC相比99mTc-EC-COX-2在有肿瘤的大白鼠中的生物分布显示肿瘤与组织计数密度之比作为时间函数的增加(表2和3)。 
表2 
99mTc-EC在携带乳腺肿瘤的大白鼠中的生物分布 
Figure BDA0000027340570000361
所显示的数值代表3只动物的均值±标准差。 
表3 
99mTc-EC-COX-2在携带乳腺肿瘤的大白鼠中的生物分布每克组织重量中的注射剂量之百分比(n＝3/时间间隔，静脉注射) 
Figure BDA0000027340570000371
所显示的数值代表3只动物的均值±标准差。 
e.闪烁显像研究 
在0.5-4小时时对携带乳腺肿瘤的大白鼠进行闪烁显像研究(0.3mCi/大鼠，n＝3，静脉注射)。对照组应用99mTc-EC。平面图像证实肿瘤可以用99mTc-EC-COX-2(图17)清楚地显现。 
其它的小分子可适于采用该EC技术，包括EC-沙利度胺(抗VEGF)、EC-喹唑啉类似物(抗EGF受体R)。其结构如图18-19所示。 
实施例4 
用EC-喷昔洛韦靶向染色质 
a.EC-喷昔洛韦的合成 
喷昔洛韦是一种鸟嘌呤类似物，用于靶向疾病细胞周期靶。EC-喷昔洛韦的合成以三步法完成(如图20-21所示)。起始原料，3-N-三苯甲基-9-(4-甲苯磺酰-3-邻三苯甲基甲基丁基)鸟嘌呤(喷昔洛韦类似物)，按照已公开的方法(Allaudin 2001)制备。将喷昔洛韦类似物(500mg，0.52mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF，15ml)中。向该溶液中，加入叠氮化钠(160mg，2.5mmol)。将该反应物在100℃下加热一整夜。将溶剂与水混合并用乙酸乙酯萃取。真空蒸干溶剂。叠氮基产物重400mg(产率93％)。不经进一步纯化，将叠氮基喷昔洛韦类似物(400mg，0.48mmol)在四氢呋喃(THF，15ml)中用三苯基膦(655mg，2.5mmol)还原。将该反应物搅拌过夜。加入盐酸(5N，0.5ml)并将反应物回流5小时。然后蒸发溶剂。将反应混合物用水洗涤并用乙酸乙酯萃取。收集水层并用NaHCO3(1N)将pH调至7-8。冻干后，该氨基喷昔洛韦类似物重120mg(90％)。 
向搅拌的EC(50mg，0.2mmol)在NaHCO3(1N)(2ml)中的溶液中，加入磺基-NHS(95.5mg，0.44mmol)和EDC(84.5mg，0.44mmol)。然后加入含氨基喷昔洛韦类似物的盐水(350mg，1.38mmol)。将该混合物在室温下搅拌24小时。用分子截断值为500的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum Medical Industries Inc.，Houston，TX)将混合物透析48小时。透析之后，将产物冻干。产物重100mg(产率67％)。 
b.体外细胞摄取分析 
将肿瘤细胞的体外细胞培养物用99mTc-EC-喷昔洛韦(4-6μCi/50,000细胞/孔)在0.5-2小时时在人卵巢癌和子宫癌细胞中孵育。与99mTc-EC相比摄取有显著的增加(图22)。 
c.闪烁显像研究 
在0.5-4小时时对携带人子宫肿瘤的小鼠进行闪烁显像研究(0.1mCi/大鼠，n＝3，静脉注射)。对照组应用99mTc-EC。平面图像证实肿瘤可以用99mTc-EC-喷昔洛韦清楚地显现(图23)。通过定量图像分析仪获得全身放射自显像图(Cyclone Storage Phosphor System， Packard，Meridian，CT)。在静脉注射0.1m Ci的99mTc-EC-喷昔洛韦之后，在1小时时将动物杀死并将身体固定于羧甲基纤维素(4％)中。将冷冻的身体置于恒冷切片机上(LKB 2250低温切片机)并切成100μm的冠状缝切面。将各切面解冻并置于载玻片上。然后使载玻片与多用途磷存储屏(MP，7001480)接触并曝光15小时。在注射99mTc-EC-喷昔洛韦后1小时完成的放射自显影显示了肿瘤活性(图24)。 
其它的小分子可适用于采用该实施例中的EC技术，包括EC-去氧胞苷、EC-卡培他滨(胞苷类似物)。其结构如图25-26所示。 
实施例5 
用EC-腺苷靶向染色质 
a.EC-腺苷的合成 
染色质为一种可用本发明化合物EC-腺苷靶向的疾病血管生成靶。向搅拌的EC(45.6mg，0.17mmol)在NaHCO3(1N)(0.7ml)中的溶液中，加入磺基-NHS(80.3mg，0.37mmol)和EDC(71.0mg，0.37mmol)。然后加入起始原料，N，N-二甲基-3’-氨基腺苷(氨基腺苷类似物)(50mg，0.17mmol)。将该混合物在室温下搅拌24小时。用分子截断值为500的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum MedicalIndustries Inc.，Houston，TX)将混合物透析48小时。透析之后，将产物冻干。产物重65.2mg(产率69.4％)。EC-腺苷(EC-ADN)的合成如图27所示。 
b.体外细胞摄取分析 
将肿瘤细胞的体外细胞培养物用99mTc-EC-腺苷(4-6μCi/50,000细胞/孔)在0.5-2小时耐在人卵巢癌细胞中孵育。与99mTc-EC相比摄取有显著的增加(图22)。 
c.放射自显影研究 
通过定量图像分析仪获得全身放射自显影(Cyclone StoragePhosphor System，Packard，Meridian，CT)。在静脉注射0.1mCi的99mTc-EC-腺苷之后，在1小时时将动物杀死并将身体固定于羧甲基纤维素(4％)中。将冷冻的身体置于恒冷切片机(LKB 2250低温切片机) 上并切成100μm的冠状缝切面。将各切面解冻并置于载玻片上。然后使载玻片与多用途磷存储屏(MP，7001480)接触并曝光15小时。在注射99mTc-EC-腺苷后1小时完成的放射自显影显示了肿瘤活性(图28)。 
实施例6 
用EC-LHRH靶向GnRH受体 
a.EC-LHRH的合成 
GnRH受体为一种疾病组织受体，它可用本发明化合物EC-LHRH靶向。向搅拌的EC(4.6mg，0.017mmol)在NaHCO3(1N)(0.5ml)中的溶液中，加入磺基-NHS(3.72mg，0.017mmol)和EDC(3.3mg，0.017mmol)。然后加入起始原料，促黄体素释放激素(人的LHRH，SigmaChemical Company，St.Louis，MO)(50mg，0.042mmol)。将该混合物在室温下搅拌24小时。用分子截断值为1,000的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum Medical Industries Inc.，Houston，TX)将混合物透析48小时。透析之后，将产物冻干。产物重51mg(产率93.4％)。 
b.体外细胞摄取分析 
将肿瘤细胞的体外细胞培养物用99mTc-EC-LHRH(4-6μCi/100,000细胞/孔)在0.5-2小时时在人***癌细胞中孵育。使用两种类型的细胞系。它们要么对雄激素(LNCap)敏感要么对雄激素(PC-3)治疗无反应。与99mTc-EC相比摄取有显著的增加(图29)。 
c.闪烁显像研究 
在0.5-4小时时对携带乳腺肿瘤的大白鼠进行闪烁显像研究(0.1mCi/大鼠，n＝3，静脉注射)。对照组应用99mTc-EC。平面图像证实肿瘤可以用99mTc-EC-LHRH清楚地显现(图30)。 
实施例7 
用EC-LH抗体靶向促黄体生成激素受体 
a.EC-LH抗体的合成 
促黄体生成激素受体为一种疾病组织受体，它可用本发明化合物EC-LH抗体靶导。向搅拌的EC(0.51mg，1.90μmol)在NaHCO3(1N)(0.1 ml)中的溶液中，加入磺基-NHS(0.41mg，1.9μmol)和EDC(0.36mg，1.9μmol)。然后加入起始原料，促黄体生成激素抗体(SigmaChemical Company，St.Louis，MO)(5.1mg)。将该混合物在室温下搅拌18小时。用分子截断值为10,000的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum Medical Industries Inc.，Houston，TX)将混合物透析48小时。透析之后，将产物冻干。产物重5.1mg(产率97％)。 
b.体外细胞摄取分析和组织分布研究 
将肿瘤细胞的体外细胞培养物用99mTc-EC-LH抗体(4μCi/50,000细胞/孔)在0.5-2小时时在RBA CRL-1747(乳腺癌细胞)中孵育。与99mTc-EC相比摄取有显著的增加(图31)。 
对携带乳腺肿瘤的大白鼠中的生物分布进行评估(RBA CRL-1747，n＝3/时间间隔，静脉注射)。在移植14-17天之后当肿瘤直径达到大约1cm时进行研究。应用放射性示踪剂之后，在0.5-4小时时将大白鼠处死。摘除所选择的组织，称重并用γ计数器(PackardInstruments，Downers Grove，IL)进行放射性强度计数。各样品中示踪剂的生物分布以每克组织湿重中注射剂量之百分比(％ID/g)计算。与 99mTc-EC相比99mTc-EC-LH抗体在携带肿瘤的大白鼠中的生物分布显示肿瘤与组织计数密度之比作为时间函数的增加(表2和3)。 
表4 
99mTc-EC-LH在携带乳腺肿瘤的大白鼠中的生物分布每克组织重量中的注射剂量之百分比(n＝3/时间间隔，静脉注射) 
Figure BDA0000027340570000421
所显示的数值代表3只动物的均值±标准差。 
c.闪烁显像研究 
在0.5-4小时时对携带乳腺肿瘤的大白鼠进行闪烁显像研究(0.1mCi/大鼠，n＝3，静脉注射)。对照组应用99mTc-EC。平面图像证实肿瘤可以用99mTc-EC-喷昔洛韦清楚地显现(图32)。 
实施例8 
用EC-铁传递蛋白靶向铁传递蛋白受体 
a.99mTc-EC-铁传递蛋白的放射合成 
铁传递蛋白受体为一种疾病组织受体，它可用本发明化合物EC- 铁传递蛋白靶向。将铁传递蛋白(100mg)与EC(15mg，0.056mmol在1.0ml的1N NaHCO3中)、磺基-NHS(11.6mg，0.056mmol)和EDC(10.7mg，0.056mmol)一起搅拌。透析后(截断MW 10,000)，得到110mg的EC-铁传递蛋白(96％)。将100mCi的Na 99mTcO4加入到装有5mg EC-C225和100μg SnCl2的小瓶中并将产物用G-25柱纯化和用PBS洗脱，得到80mCi的99mTc-EC-铁传递蛋白。 
b.闪烁显像和放射自显影研究 
在0.5-4小时时对携带人子宫肿瘤的小鼠进行闪烁显像研究(0.1mCi/大鼠，n＝3，静脉注射)。对照组应用99mTc-EC。平面图像证实肿瘤可以用99mTc-EC-铁传递蛋白清楚地显现(图23)。通过定量图像分析仪获得全身放射自显影(Cyclone Storage Phosphor System，Packard，Meridian，CT)。在静脉注射0.1mCi的99mTc-EC-铁传递蛋白之后，在1小时时将动物杀死并将身体固定于羧甲基纤维素(4％)中。将冷冻的身体置于恒冷切片机(LKB 2250低温切片机)上并切成100μm的冠状缝切面。将各切面解冻并置于载玻片上。然后使载玻片与多用途磷存储屏(MP，7001480)接触并曝光15小时。在注射99mTc-EC-铁传递蛋白后1小时完成的放射自显影显示了肿瘤活性(图33)。 
其它的蛋白质和肽也可适于采用该EC技术，包括EC-生长激素抑制素、EC-半胱天冬酶、EC-内啡肽、EC-PSA，EC-p53、EC-奥曲肽(结构如图34所示)。 
实施例9 
用EC-阿霉素靶向肿瘤拓扑异构酶 
a.EC-阿霉素的合成 
组织对治疗药物的反应可用本发明的化合物确定。用本发明化合物EC-阿霉素靶向肿瘤拓扑异构酶。向搅拌的EC(55.1mg，0.21mmol)在NaHCO3(1N)(2ml)中的溶液中，加入磺基-NHS(44.6mg，0.21mmol)和EDC(39.4mg，0.21mmol)。然后加入起始原料，阿霉素(119.2mg，0.21mmol)。将该混合物在室温下搅拌24小时。用分子截断值为500的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum Medical Industries Inc.， Houston，TX)将混合物透析48小时。透析之后，将产物冻干。产物重135mg(产率78％)。EC-阿霉素(EC-Doxo)的合成如图35所示。 
b.体外细胞摄取分析 
将肿瘤细胞的体外细胞培养物用99mTc-EC-阿霉素(4-6μCi/50,000细胞/孔)在0.5-2小时时在对阿霉素敏感的(MDA 231，低HER2)和耐阿霉素的(MDA 453，高HER2)人乳腺癌细胞中孵育。对阿霉素敏感的细胞比耐阿霉素的细胞摄取多(图36)。 
其它小分子也可适于采用本实施例中的EC技术，包括EC-紫杉醇、EC-托泊替康、EC-氟他胺、EC-反义、EC-他莫西芬、EC-米托蒽醌、EC-丝裂霉素、EC-万古霉素、EC-博来霉素。 
实施例10 
用EC-肉毒碱靶向脂类代谢 
a.EC-肉毒碱(EC-TML)的合成 
肉毒碱，2-羟基-3-三甲铵丁酸盐对于脂肪酸氧化是重要的，并且它是靶向疾病信号转导途径的一个例子。6-三甲铵赖氨酸(TML)是肉毒碱的类似物。EC与TML的氨基结合。向搅拌的EC(34.9mg，0.13mmol)在NaHCO3(1N)(0.5ml)中的溶液中，加入磺基-NHS(62mg，0.29mmol)和EDC(54.8mg，0.29mmol)。然后加入起始原料，TML(50mg，0.13mmol)。将该混合物在室温下搅拌24小时。用分子截止值为500的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum Medical Industries Inc.，Houston，TX)将混合物透析48小时。透析之后，将产物冻干。产物重74.2mg(产率93.8％)。EC-肉毒碱(EC-TML)的合成如图37所示。 
EC-TML的质谱如图38所示。 
b.体外细胞摄取分析 
将肿瘤细胞的体外细胞培养物用99mTc-EC-肉毒碱(4-6μCi/50,000细胞/孔)在0.5-2小时时在乳腺癌细胞中孵育。99mTc-EC-肉毒碱比99mTc-EC摄取多(图16)。 
c.闪烁显像研究 
在0.1-4小时时对携带乳腺肿瘤的大白鼠进行闪烁显像研究 (0.1mCi/大鼠，n＝3，静脉注射)。对照组应用99mTc-EC。观察到高的肿瘤/肌肉和心脏/肌肉计数密度之比(图39)。平面图像证实肿瘤可以用99mTc-EC-TML清楚地显现(图40)。 
实施例11 
用EC-脱氧葡萄糖靶向葡糖胺和葡萄糖代谢 
a.EC-脱氧葡萄糖(EC-DG)的合成 
用本发明化合物EC-脱氧葡萄糖靶向一种信号转导途径，葡糖胺代谢。将氢氧化钠(1N，1ml)加入到搅拌的EC(110mg，0.41mmol)在水(5ml)中的溶液中。向该无色的溶液中，加入磺基-NHS(241.6mg，1.12mmol)和EDC(218.8mg，1.15mmol)。然后加入D-葡糖胺盐酸盐(356.8mg，1.65mmol)。将混合物在室温下搅拌24小时并将pH调至6.4-7.0。用截断值为500的Spectra/POR分子多孔膜(SpectrumMedical Industries Inc，Houston，TX)将混合物透析48小时。透析之后，将产物用冷冻干燥器(Labconco，Kansas City，MO)冻干。产物重291mg(产率60％)。1H-NMR(D2O)δ2.60-2.90(m，4H和EC的-CH2-SH)，2.95(t，2H，葡糖胺5-CH-CH2OH)3.20(d，4H，葡糖胺6-CH2OH)，3.30-3.95(m，6H葡糖胺1，3，4-CH和4H  EC的CH2-SH)3.30-3.66(m，4H，EC的CH2-CH2-)，4.15-4.30(t，2H，EC的NH-CH-CO)，4.60(d，2H，葡糖胺2-CH-NH2).FAB MS m/z 591(M+，20).结构如图41所示。 
b.99mTc-EC-DG的组织分布研究 
将雌性无胸腺的裸鼠(NCr-nu/nu，NCI，Bethasda，MD)由一位作者在中背部位接种人肺癌细胞(A549肿瘤细胞系，3×106细胞/小鼠，肌肉注射)。在肿瘤达到6mm之后，用99mTc-EC-DG和18F-FDG进行独立的生物分布研究。每只静脉内接受99mTc-EC-DG或18F-FDG(n＝3/时点)。注射强度为1-3μCi/小鼠。99mTc-EC-DG的注射质量为0.2mg/啮齿动物。在放射性示踪剂给药之后，处死啮齿动物并摘除所选择的组织，称重并进行放射性强度计数。作为随时间的函数的99mTc-EC-DG肿瘤/肌肉之比和肿瘤/脑之比较高，而18F-FDG的肿瘤/血液之比较高 (表4和5)。 
表5 
18FDG在携带肺肿瘤小鼠中的生物分布 
每克组织重量中的注射剂量之百分比 
Figure BDA0000027340570000461
所显示的数值代表3只动物的均值±标准差。 
表6 
99mTc-EC-DG在携带肺肿瘤小鼠中的生物分布 
每克组织重量中的注射剂量之百分比 
所显示的数值代表3只动物的均值±标准差。 
c.γ闪烁显像研究 
将雌性Fischer 344大白鼠(每只250-275g)(Harlan，Inc，Indianapolis，IN)由一位作者用来自13762肿瘤细胞系(s.c.106细胞/大鼠，对Fischer大白鼠特异性的肿瘤细胞系)接种乳腺肿瘤细胞。8-10天后，测量肿瘤的体积为0.3-0.6cm。在静脉注射300μCi的99mTc-EC或99mTc-EC-DG(n＝3/试剂，总共6只大白鼠)0.5， 2和4小时之后获得闪烁显像。肿瘤组织和肌肉(在对称部位)之间的ROI用于测定肿瘤/非肿瘤之比。可由99mTc-EC-DG检测到的最小肿瘤体积为3mm。中等大小的肿瘤(6mm)在每个时间点显示较高的摄取。心、肾、肝、和膀胱被显现(图42)。 
其它小分子可适于采用在该实施例中的EC技术，包括EC-氨磷汀、EC-乳糖、EC-吡哆醛(结构如图43所示)、EC-富勒烯(EC-碳60，结构如图44所示)。 
根据本发明的公开，本文中公开和要求保护的所有组合物和/或方法如无需过多实验都可制备和实施。尽管本发明的组合物和方法只根据优选的实施方案进行了描述，但对本领域技术人员显而易见的是所述组合物和/或方法和在本文描述的方法中的步骤或步骤的顺序在不背离本发明的构思、精神和范围的情况下可进行变化。更具体地说，显而易见的是在化学性质上和生理学上都相关的某些试剂可代替本文中描述的试剂而将取得相同的或相似的结果。所有这些对本领域的技术人员来说显而易见的相似的替换和改变都被认为在附加的权利要求中定义的本发明的精神、范围和构思的范围之内。 
d.188Re-EC-DG的合成和配制 
为了开发试剂盒形式的EC-DG，将溶解在0.2ml水中的EC-DG(10mg)与在10ml的中等小瓶中的氯化锡(2mg在0.2ml水中)和葡萄糖酸盐(3mg)一起冻干并在标记前在室温下贮存。标记时，将冻干的粉末在盐水中(0.5ml)重建并加入高锝酸盐(10mCi)。将试剂盒在55℃下加热30分钟(或在75℃下加热15分钟)。由射性-TLC测得的99mTc-EC-DG的放射化学纯度高于95％(盐水，Rf：0.8)(图39)。类似的方法可适于其它EC-试剂，如EC-甲硝哒唑(EC-MN)(图40)和EC-喷昔洛韦(亦称作EC-Guan)。为了证实Re-188和Tc-99m之间的相似性，将Re-188和Tc-99m标记的EC-Guan和EC-甲硝哒唑进行细胞培养。两者的摄取没有显著的差异(图41和图42)。 
在本发明的组合物中包含抗氧化剂和过渡螯合剂以阻止乙二半胱氨酸氧化或许也很重要。例如抗氧化剂可以是维生素C(抗坏血酸)。不过，也可使用其它本领域普通技术人员已知的抗氧化剂，如生育酚、吡哆醇、硫胺或芦丁。任何本领域普通技术人员已知的过渡螯合剂也可结合本发明使用。过渡螯合剂的例子包括葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖二酸盐、枸橼酸盐、和酒石酸盐。在某些实施方案中，过渡螯合剂为葡萄糖酸盐或葡萄糖二酸盐，它们不干扰乙二半胱氨酸的稳定性。含或不含过渡螯合剂(葡萄糖酸盐或葡萄糖二酸盐)的99mTc-EC-脱氧葡萄糖(EC-DG)体外细胞培养不干扰99mTc-EC-DG的稳定性(图43A-43C)。 
参考文献
以下参考文献在一定的程度上提供了示例性的程序或对本文中的描述补充的其它说明，特别引入本文作为参考。 
美国专利5,268,163 
美国专利5,605,672 
美国专利5,817,776 
美国专利5,955,053 
美国专利5,986,074 
美国专利6,284,220 
澳大利亚专利0175210A5 
PCT申请WO 0175125A1 
PCT申请WO 0180906A2 
PCT申请WO 0191807A2 
PCT申请WO 0232291 
PCT申请WO 9116076A1 
PCT申请WO 9428940A1 
Alauddin等，Nucl.Med.Biol.，23：787-792，1996. 
Alauddin等，Nucl.Med.Biol.，26：371-376，1999. 
Alauddin等，J.Nucl.Med.，42(11)：162-1690，2001. 
Alauddin and Conti，Nucl.Med.Biol.，25：175-180，1998. 
Banerjeei等，Anticancer Res.，20：2641-2645，2000. 
Bertolini等，Br.J.Haematol.，106：5045-09，1999. 
Blondeau等，Can.J.Chem.，45：49-52，1967. 
Bocci等，Cancer Chemother.Pharmacol.，43：205-212，1999. 
Burian等，Acta Otolaryngol.，119：289-292，1999. 
Canet等，Magn.Reson.Med.，43(3)：403-409，2000. 
Cao，Haematologica，84：643-650，1999. 
Dhanabal等，J.Biol.Chem.，274：11721-11726，1999. 
Duda等，Cancer Res.，60：1111-1116，2000. 
Frisch and Screaton，Curr.Opin.Cell Biol.13：555-562，2001. 
Gambhir等，J.Nucl.Med.，39：2003-2011，1998. 
Gambhir等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，96：2333-2338，1999. 
Gambhir等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，97：2785-2790，2000. 
Gasparini，Drugs，58：17-38，1999. 
Goethals等，J.Nucl.Med.，36：880-882，1995. 
Green and Evan，Cancer Cell，1：19-30，2002. 
Guang-Wu，等，Laryngoscope，110：2066-2069，2000. 
Higashi等，J.Nucl.Med.，34：414-419，1992. 
Inoue等，Clin.Cancer Res.，6：4866-4873，2000. 
Iyer等，J.Nucl.Med.，42：96-105，2001. 
Jiang等，Am.J.Physiol.Cell Physiol.，280：1140-1150，2001. 
Jouan等，血液，94：984-993，1999. 
Kao等，Cancer，83：64-68，1998. 
Laissy等，Magn.Reson.Imaging，12(3)：413-419，1994. 
Lamszus等，Neurosurgery，46：938-948，2000. 
Li等，Inorg.Chem.，35(2)：404-414，1996. 
Liao F等，Cancer Res.，60：6805-6810，2000. 
Logothetis等，Clin.Cancer Res.，7：1198-1203，2001. 
Lozonschi等，Cancer Res.，59：1252-1258，1999. 
Maekawa等，Cancer Res.，59：1231-1235，1999. 
Martiat等，J.Nucl.Med.，29：1633-1637，1988. 
McConathy等，Nucl.Med.Biol.，30：477-490，2003. 
Minn等，Cancer，61：1776-1781，1988. 
Moreira等，J.Neurooncol.，43：109-114，1999. 
Moulton等，Circulation，99：1726-1732，1999. 
Namavari等，Nucl.Med.Biol.，27：157-162，2000. 
Ohtsuki等，Eur.J.Nucl.Med.，26(10)：1251-1258，1999. 
Okada等，J.Nucl.Med.，32：686-691，1991. 
Okada等，J.Nucl.Med.，33：325-329，1992. 
Pedram等，Endocrinology，142：1578-1586，2001. 
Petzelbauer等，Cytokine，7：267-272，1995. 
Ratner and Clarke，J.AM Chem.Soc.，59：200-206，1937. 
Reed，Cancer Cell，3：17-22，2003. 
Sakamoto等，Invest.Ophtha lmol.Vis.Sci.，36：1076-1083，1995. 
Shields等，J.Nucl.Med.，31：337-342，1990. 
Sion-Vardy等，Pathol.Res.Pract.，197：1-5，2001. 
Slaton等，Am.J.Pathol.，158：735-743，2001. 
Smith等，J.Clin.Oncol.，18：2046-2052，2000. 
Smith等，Ann.Oncol.，10：707-713，1999. 
Taggart等，Human Mutation.，13(3)：210-220，1999. 
Tjuvajev等，J.Nucl.Med.，43：1072-1083，2002. 
Tschopp等，Curr.Biol.9：R381-R384，1999. 
Ugurel等，J.Clin.Oncol.，19：577-583，2001. 
Van Nerom等，Eur.J.Nucl.Med.，20：738-746，1993. 
Vriens等，J.Thorac.Cardiovasc.Surg.，116：844-853，1998. 
Wu等，J.Diabetes Complications，17：297-300，2003. 
Xiangming等，Ann.Surg.Oncol.，5：585-589，1998. 
Yaghoubi等，J.Nucl.Med.，42：1225-1234，2001. 
Yeh等，Mol.Pharmacol.，59：1333-1342，2001. 

Claims (56)

1.包含与靶向配体结合的N2S2螯合物的化合物，其中靶向配体是疾病细胞周期靶向化合物、肿瘤血管发生靶向配体、肿瘤细胞凋亡靶向配体、疾病受体靶向配体、氨磷汀、血管他丁、单克隆抗体C225、单克隆抗体CD31、单克隆抗体CD40、卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白或三甲基赖氨酸。
2.权利要求1的化合物，其进一步定义为：
Figure FDA0000027340560000011
其中
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8独立地为H或CH3；
R9为H、CH3、疾病细胞周期靶向化合物、肿瘤血管发生靶向配体、肿瘤细胞凋亡靶向配体、疾病受体靶向配体、氨磷汀、血管他丁、单克隆抗体C225、单克隆抗体CD31、单克隆抗体CD40、卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白或三甲基赖氨酸；
R10为H、CH3、疾病细胞周期靶向化合物、肿瘤血管发生靶向配体、肿瘤细胞凋亡靶向配体、疾病受体靶向配体、氨磷汀、血管他丁、单克隆抗体C225、单克隆抗体CD31、单克隆抗体CD40、卡培他滨、COX-2、脱氧胞苷、富勒烯、赫赛汀、人血清白蛋白、乳糖、促黄体生成激素、吡哆醛、喹唑啉、沙利度胺、铁传递蛋白或三甲基赖氨酸；
n为0或1；
m为0或1；
当n为1时，X为水溶性肽、C1-C20烷基、谷氨酸、多聚谷氨酸、天冬氨酸、多聚天冬氨酸、乙酸溴乙酯、乙二胺或赖氨酸，或当n为0时X为直连键；
当m为1时，Y为水溶性肽、C1-C20烷基、谷氨酸、多聚谷氨酸、天冬氨酸、多聚天冬氨酸、乙酸溴乙酯、乙二胺或赖氨酸，或当m为0时Y为直连键；以及
M为99mTc，188Re，186Re，183Sm，166Ho，90Y，89Sr，67Ga，68Ga，111In，183Gd，59Fe，225Ac，212Bi，211At，45Ti，60Cu，61Cu，67Cu，64Cu或62Cu。
3.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括肿瘤血管发生靶向配体。
4.权利要求3的化合物，其中靶向配体包括COX-2、抗EGF、赫赛汀、血管他丁或沙利度胺。
5.权利要求1的化合物，其中靶向配体为疾病细胞周期靶向配体。
6.权利要求5的化合物，其中靶向配体包括腺苷、喷昔洛韦、FIAU、FIRU、IVFRU、GCV、PCV、FGCV、FPCV、PHPG、PHBG或鸟嘌呤。
7.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括肿瘤细胞凋亡靶向配体。
8.权利要求7的化合物，其中靶向配体包括TRAIL或半胱天冬酶-3靶向配体。
9.权利要求2的化合物，其中靶向配体包括疾病受体靶向配体。
10.权利要求9的化合物，其中靶向配体包括***、雄激素、促黄体生成激素、铁传递蛋白或***。
11.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括肉毒碱或阿霉素。
12.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括喷昔洛韦或腺苷。
13.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括氨磷汀。
14.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括抗EGF受体。
15.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括单克隆抗体CD31。
16.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括单克隆抗体CD40。
17.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括卡培他滨。
18.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括脱氧胞苷。
19.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括富勒烯。
20.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括人血清白蛋白。
21.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括乳糖。
22.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括吡哆醛。
23.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括喹唑啉。
24.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括三甲基赖氨酸。
25.权利要求1的化合物，其中靶向配体包括疾病细胞周期靶向化合物。
26.权利要求25的化合物，其中疾病细胞周期靶向化合物包括腺苷、喷昔洛韦、FIAU、FIRU、IVFRU、GCV、PCV、FGCV、FHPG、FHBG或鸟嘌呤。
27.权利要求1的化合物，其中N2S2螯合物进一步定义为乙二半胱氨酸。
28.权利要求1的化合物，进一步包含放射性核素。
29.权利要求28的化合物，其中放射性核素包括99mTc、188Re、186Re、183Sm、166Ho、90Y、89Sr、67Ga、68Ga、111In、183Gd、59Fe、225Ac、212Bi、211At、45Ti、60Cu、61Cu、67Cu、64Cu或62Cu。
30.权利要求1的化合物，进一步包含位于靶向配体和螯合物之间的水溶性肽、C1-C20烷基、谷氨酸、多聚谷氨酸、天冬氨酸、多聚天冬氨酸、乙酸溴乙酯、乙二胺或赖氨酸。
31.权利要求1的化合物，选自：
Figure FDA0000027340560000051
Figure FDA0000027340560000061
32.合成与靶向配体结合的放射性标记的N2S2螯合物的方法，其包括步骤：
a)获得权利要求1的化合物；
b)将所述化合物与放射性核素和还原剂混合得到放射性核素标记的衍生物，其中N2S2螯合物与放射性核素形成螯合物。
33.权利要求32的方法，其中所述还原剂为连二亚硫酸根离子、亚锡离子或亚铁离子。
34.权利要求32的方法，其中所述放射性核素为99mTc、188Re、186Re、183Sm、166Ho、90Y、89Sr、67Ga、68Ga、111In、183Gd、59Fe、225Ac、212Bi、211At，45Ti、60Cu、61Cu、67Cu、64Cu或62Cu。
35.显像哺乳动物体内部位的方法，其包括步骤：
a)将诊断有效量的权利要求28的化合物施用到所述部位；和
b)检测来自所述定位于部位的化合物的放射性信号。
36.权利要求35的方法，其中所述部位为肿瘤。
37.权利要求35的方法，其中所述部位为感染部位。
38.权利要求35的方法，其中所述部位为乳腺癌、卵巢癌、***癌、子宫内膜、心脏癌、肺癌、脑癌、肝癌、叶酸(+)癌、ER(+)癌、脾癌、胰腺癌或肠癌。
39.用于制备放射性药物制剂的试剂盒，其包括：
a)包含预定量化合物的密封容器，其中所述化合物为放射性核素标记的权利要求1的N2S2螯合物-靶向配体结合物；和
b)足量的还原剂。
40.权利要求39的试剂盒，进一步包含放射性核素。
41.权利要求40的试剂盒，其中该放射性核素为99mTc、188Re、186Re、183Sm、166Ho、90Y、89Sr、67Ga、68Ga、111In、183Gd、59Fe、225Ac、212Bi、211At，45Ti、60Cu、61Cu、67Cu、64Cu或62Cu。
42.权利要求38的试剂盒，进一步包含抗氧化剂。
43.权利要求42的试剂盒，其中抗氧化剂为维生素C、生育酚、吡哆醇、维生素B1或芦丁。
44.权利要求43的试剂盒，其中抗氧化剂为维生素C。
45.权利要求39的试剂盒，进一步包含过渡螯合剂。
46.权利要求45的试剂盒，其中过渡螯合剂为葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖二酸盐、枸橼酸盐或酒石酸盐。
47.权利要求46的试剂盒，其中过渡螯合剂为葡糖酸盐或葡萄糖二酸盐。
48.权利要求39的试剂盒，其中还原剂为氯化锡(II)或三苯基膦。
49.评价目的物质的药理学性质的方法，其包括：
a)制备该物质与N2S2螯合物的结合物；
b)将放射性核素加入到所述结合的螯合物中形成放射性结合物；
c)将所述放射性结合物施用到受试者；和
d)评价该物质的药理学性质。
50.权利要求49的方法，其中目的物质为药剂。
51.权利要求49的方法，其中N2S2螯合物为乙二半胱氨酸。
52.权利要求49的方法，其中所述受试者为实验动物。
53.权利要求49的方法，其中所述受试者为人。
54.权利要求49的方法，其中评价物质的药理学性质包括评价该物质的生物分布。
55.权利要求49的方法，其中评价物质的药理学性质包括评价该物质的生物稳定性。
56.权利要求49的方法，其中评价物质的药理学性质包括评价该物质的生物消除。
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Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL158532A0 (en) 2001-05-02 2004-05-12 Purdue Research Foundation Treatment and diagnosis of macrophage mediated disease
US8043602B2 (en) 2002-02-07 2011-10-25 Endocyte, Inc. Folate targeted enhanced tumor and folate receptor positive tissue optical imaging technology
US8043603B2 (en) 2002-02-07 2011-10-25 Endocyte, Inc. Folate targeted enhanced tumor and folate receptor positive tissue optical imaging technology
ES2317010T3 (es) 2003-05-30 2009-04-16 Purdue Research Foundation Metodo de diagnostico de la arterosclerosis.
US7601341B2 (en) * 2003-06-05 2009-10-13 Research Development Foundation Vascular endothelial growth factor fusion constructs used to inhibit osteoclastogenesis
DE602004015331D1 (de) * 2003-12-22 2008-09-04 Hoffmann La Roche Verfahren für fluorcytidinderivate
WO2005087275A2 (en) * 2004-03-11 2005-09-22 Board Of Regents, The University Of Texas System Metal radiolabeled pet imaging agents
CA2592302C (en) * 2004-12-23 2013-10-29 Purdue Research Foundation Positron emission tomography imaging method
AU2006204045B2 (en) 2005-01-05 2010-10-14 Board Of Regents, The University Of Texas System Conjugates for dual imaging and radiochemotherapy: composition, manufacturing, and applications
US20070025957A1 (en) * 2005-04-29 2007-02-01 Rosenblum Michael G Vascular targeting of ocular neovascularization
EP1904183B1 (en) 2005-07-05 2014-10-15 Purdue Research Foundation Pharmaceutical composition for the treatment of osteoarthritis
WO2007038346A2 (en) 2005-09-23 2007-04-05 Purdue Research Foundation Multiphoton in vivo flow cytometry method and device
US10925977B2 (en) * 2006-10-05 2021-02-23 Ceil>Point, LLC Efficient synthesis of chelators for nuclear imaging and radiotherapy: compositions and applications
CA2668197A1 (en) 2006-11-03 2008-05-15 Philip S. Low Ex vivo flow cytometry method and device
US20100104511A1 (en) * 2006-11-22 2010-04-29 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods and compositions using chelator-antibody conjugates
WO2008098112A2 (en) 2007-02-07 2008-08-14 Purdue Research Foundation Positron emission tomography imaging method
US8961926B2 (en) 2007-05-25 2015-02-24 Purdue Research Foundation Method of imaging localized infections
GB0804406D0 (en) * 2008-03-10 2008-04-16 Univ Zuerich Metal complexes
US8440168B2 (en) * 2008-03-24 2013-05-14 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Image-guided therapy of myocardial disease: composition, manufacturing and applications
JP2012532846A (ja) * 2009-07-09 2012-12-20 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト インビボ腫瘍脈管構造画像処理
HUE048557T2 (hu) * 2012-03-26 2020-07-28 Univ Texas Etilén-dicisztein és cukor konjugátumok hatékony szintézise képalkotási és terápiás célra
KR102124442B1 (ko) * 2018-09-11 2020-06-23 서울대학교산학협력단 황화수소 검출 또는 농도 측정용 조성물 및 이를 유효성분으로 함유하는 생체내 염증, 저산소 손상조직 또는 암의 진단 또는 영상화용 조성물

Family Cites Families (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4418068A (en) * 1981-04-03 1983-11-29 Eli Lilly And Company Antiestrogenic and antiandrugenic benzothiophenes
US4507466A (en) * 1983-01-07 1985-03-26 The Dow Chemical Corporation Dense star polymers having core, core branches, terminal groups
US4558120A (en) * 1983-01-07 1985-12-10 The Dow Chemical Company Dense star polymer
US4631337A (en) * 1983-01-07 1986-12-23 The Dow Chemical Company Hydrolytically-stable dense star polyamine
US4737550A (en) * 1983-01-07 1988-04-12 The Dow Chemical Company Bridged dense star polymers
US4568737A (en) * 1983-01-07 1986-02-04 The Dow Chemical Company Dense star polymers and dendrimers
US4587329A (en) * 1984-08-17 1986-05-06 The Dow Chemical Company Dense star polymers having two dimensional molecular diameter
US4732863A (en) * 1984-12-31 1988-03-22 University Of New Mexico PEG-modified antibody with reduced affinity for cell surface Fc receptors
US4871779A (en) * 1985-12-23 1989-10-03 The Dow Chemical Company Ion exchange/chelation resins containing dense star polymers having ion exchange or chelate capabilities
US4694064A (en) * 1986-02-28 1987-09-15 The Dow Chemical Company Rod-shaped dendrimer
US4861869A (en) * 1986-05-29 1989-08-29 Mallinckrodt, Inc. Coupling agents for joining radionuclide metal ions with biologically useful proteins
US4713975A (en) * 1986-05-30 1987-12-22 The Dow Chemical Company Dense star polymers for calibrating/characterizing sub-micron apertures
IN165717B (zh) * 1986-08-07 1989-12-23 Battelle Memorial Institute
US5279811A (en) * 1987-02-18 1994-01-18 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Ester-substituted diaminedithiols and radiolabeled complexes thereof
US4965392A (en) * 1987-03-26 1990-10-23 Neorx Corporation Chelating compounds for metal-radionuclide labeled proteins
US4857599A (en) * 1988-02-08 1989-08-15 The Dow Chemical Company Modified dense star polymers
US5164294A (en) * 1988-05-17 1992-11-17 Syntex (U.S.A.) Inc. Method for immunochromatographic analysis
US4988496A (en) * 1988-05-31 1991-01-29 Neorx Corporation Metal radionuclide chelating compounds for improved chelation kinetics
US5688488A (en) * 1989-04-03 1997-11-18 Purdue Research Foundation Composition and method for tumor imaging
US5108921A (en) * 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
JP2517760B2 (ja) * 1989-05-11 1996-07-24 新技術事業団 水溶性高分子化医薬製剤
CA2080685A1 (en) * 1990-04-17 1991-10-18 Alfons Verbruggen Method and kit for preparing technetium-99m complexes
US5385719A (en) * 1991-09-24 1995-01-31 Unger; Evan C. Copolymers and their use as contrast agents in magnetic resonance imaging and in other applications
US6113946A (en) * 1992-04-03 2000-09-05 The Regents Of The University Of California Self-assembling polynucleotide delivery system comprising dendrimer polycations
US5605671A (en) * 1992-10-05 1997-02-25 The Regents Of The University Of Michigan Radiolabeled neutrophil activating peptides for imaging
US5951964A (en) * 1993-06-04 1999-09-14 Diatide, Inc. Technetium-99m labeled peptides for imaging
US5605672A (en) 1993-06-09 1997-02-25 The General Hospital Corporation Blood pool imaging composition and method of its use
US5534241A (en) * 1993-07-23 1996-07-09 Torchilin; Vladimir P. Amphipathic polychelating compounds and methods of use
US5443953A (en) * 1993-12-08 1995-08-22 Immunomedics, Inc. Preparation and use of immunoconjugates
US5730968A (en) * 1994-03-31 1998-03-24 Sterling Winthrop Inc. Segmented chelating polymers as imaging and therapeutic agents
US5670132A (en) * 1994-09-20 1997-09-23 Immunomedics, Inc. Modified radioantibody fragments for reduced renal uptake
DE69536153D1 (de) * 1994-11-17 2011-05-05 Ich Productions Ltd Internalisierung von dna, unter verwendung von konjugaten des poly-l-lysins und eines peptidligands des integrin-rezeptors
US5830431A (en) * 1995-06-07 1998-11-03 Mallinckrodt Medical, Inc. Radiolabeled peptide compositions for site-specific targeting
US5908777A (en) * 1995-06-23 1999-06-01 University Of Pittsburgh Lipidic vector for nucleic acid delivery
US5808146A (en) 1995-11-09 1998-09-15 Emory University Amino acid analogs for tumor imaging
CN1304058C (zh) * 1996-03-12 2007-03-14 Pg－Txl有限公司 水溶性紫杉醇产品
US6441025B2 (en) * 1996-03-12 2002-08-27 Pg-Txl Company, L.P. Water soluble paclitaxel derivatives
US5986074A (en) 1996-05-06 1999-11-16 Emory University Metal chelates as pharmaceutical imaging agents, processes of making such and uses thereof
US5955053A (en) 1996-05-06 1999-09-21 Emory University Metal chelates as pharmaceutical imaging agents, processes of making such and uses thereof
WO1998020857A1 (en) * 1996-11-12 1998-05-22 The Regents Of The University Of California Preparation of stable formulations of lipid-nucleic acid complexes for efficient in vivo delivery
DE69838811T2 (de) * 1997-04-30 2008-10-30 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University, Stanford Verfahren zur darstellung von abgestorbenen zellen in-vivo
US6251866B1 (en) * 1997-08-05 2001-06-26 Watson Laboratories, Inc. Conjugates targeted to the interleukin-2 receptor
US20010041189A1 (en) * 1999-04-13 2001-11-15 Jingya Xu Poly(dipeptide) as a drug carrier
US6284220B1 (en) 1999-06-03 2001-09-04 The General Hospital Corporation Noninvasive imaging of nucleic acid vectors
CN1315554A (zh) 2000-03-24 2001-10-03 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——人atp依赖的丝氨酸蛋白水解酶31和编码这种多肽的多核苷酸
CA2406852A1 (en) 2000-04-20 2001-11-01 The University Of British Columbia Radiometal complexes of 2-pyrrolylthiones and their use as radiopharmaceuticals for imaging and therapy
DK1286704T3 (da) * 2000-06-02 2014-09-22 Univ Texas Ethylendicystein (EC)-glucose analoge konjugater
WO2002032291A2 (en) 2000-10-19 2002-04-25 The General Hospital Corporation Imaging of enzymatic activity

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