CN101919966A - 一种中药组合物在制备减少肾脏水通道蛋白2表达的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药组合物在制备减少肾脏水通道蛋白2表达的药物中的应用。本发明中药组合物由黄芪、人参、丹参等11味中药组成，以益气温阳药为治络强心之本，辅以活血通络药，使气旺血行络通，阻断血瘀络阻。实验研究证实，本发明中药组合物可以显著减少肾脏水通道蛋白2的表达，改善心脏功能。

Description

一种中药组合物在制备减少肾脏水通道蛋白2表达的药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种中药组合物的新用途，具体地，涉及一种中药组合物在制备减少肾脏水通道蛋白2表达的药物中的应用。

背景技术

慢性心力衰竭(CHF)的发生、发展是一个由诸多神经体液因素参与的过程，过度的神经体液激活，引起体液潴留等病理生理表现。已有证据表明，由精氨酸加压素(AVP)调节的肾脏水通道蛋白2(AQP2)增加集合管对水的重吸收，对CHF时水潴留起着重要的作用。

中医络病理论认为，心气虚乏、运血无力是充血性心衰发生的中医病机之本；络脉瘀阻是发病的中心环节，津液不循脉络运行，渗出脉外而为水湿之邪发为水肿，瘀血水饮阻滞络脉，日久结聚成形导致心络络息成积是其发展加重的结果。与现代医学提出的神经内分泌***过度激活引起血流动力学改变，导致心肌重塑，进而出现慢性心力衰竭的基本机制相一致。因此，当代预防治疗慢性心力衰竭的关键，已经从过去的改善临床症状，转变为阻断神经一内分泌的过度激活，抑制心肌重塑

本发明是在中国专利ZL 02146573.8的基础上进行的改进发明，在此全文引用该专利文件记载的内容。中国专利ZL 02146573.8未记载该中药组合物在制备减少肾脏水通道蛋白2表达的药物中的应用；

发明内容

本发明目的是提供一种中药组合物在制备减少肾脏水通道蛋白2表达的药物中的应用；

本发明还提供了该中药组合物在制备改善心脏功能药物中的应用；

本发明中药组合物的有效成分主要包括黄芪、附子、丹参及苈葶子等祖国传统中药材，以益气温阳药为治络强心之本，辅以活血通络药，使气旺血行络通，阻断血瘀络阻的病理中心环节，兼用利水消肿药以治其标，可以有效减少肾脏水通道蛋白2的表达，并且有效改善心脏功能。

本发明中药组合物中，作为活性组分的原料药的拉丁名及其加工方法来自《中药大辞典》(1977年7月，第一版，上海科学技术出版社)和《中国药典》(2005年版，化学工业出版社)。

所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪150-450份、附子40-120份、人参或党参75-225份、丹参75-225份、葶苈子50-150份、香加皮或南五加皮60-180份、泽泻75-225份、玉竹25-75份、桂枝30-90份、红花30-90份、陈皮25-75份；

优选地，所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪450份、附子112.5份、人参或党参225份、丹参225份、葶苈子150份、香加皮或南五加皮180份、泽泻225份、玉竹75份、桂枝90份、红花90份、陈皮75份；

或：

黄芪250份、附子112.5份、人参或党参200份、丹参120份、葶苈子135份、香加皮或南五加皮150份、泽泻200份、玉竹60份、桂枝75份、红花75份、陈皮60份。

本发明还提供了所述中药组合物的活性成分由下列步骤制成：

1)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮加7-9倍量70％乙醇提取，滤过，浓缩提取液至60℃测定相对密度为1.25-1.30的清膏；

2)用水提取桂枝、陈皮的挥发油，得挥发油A、水溶液B、药渣C；

3)加6-10倍量水煎煮附子、丹参、玉竹、红花2次，每次2小时，将所得水溶液滤过，得滤液D；

4)将桂枝、陈皮提挥发油后的水溶液B滤过，收集得水溶液滤液E，再加水煎煮药渣C，滤过得滤液F；

5)合并滤液D、滤液E、滤液F，浓缩至相对密度为1.25-1.30清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70％，静置，滤过，滤液浓缩至60℃测定相对密度为1.25-1.30清膏G；

6)步骤1)所得清膏、挥发油A和步骤5)所得清膏G构成中药组合物的活性成分。

本发明中药组合物还可以按常规的制剂工艺，例如，范碧亭《中药药剂学》(上海科学出版社1997年12月第1版)记载的制备工艺，制成药剂学可接受的任意常规剂型，例如胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂等。

为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，如范碧亭《中药药剂学》(上海科学出版社1997年12月第1版)中各剂型记载的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000，PEG4000，虫蜡等。

本发明还提供了该中药组合物胶囊剂的制备方法：

(1)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮按照比例量称取，加8倍量70％乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃测定相对密度为1.25-1.30的清膏，备用；

(2)按照比例称取桂枝、陈皮，蒸馏提取挥发油，提油后的水溶液滤过，备用，残渣再加8倍量水煎煮1小时，滤过，合并水煎液，备用；

(3)按比例量称取附子、丹参、玉竹、红花，加水9倍量煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，与步骤(2)中桂枝、陈皮水煎液合并，浓缩至60℃测定相对密度为1.25-1.30清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70％，4℃以下静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃测定相对密度为1.25-1.30清膏，与步骤(1)的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

(4)将步骤(3)所得干膏粉碎成100目粉，加适量70％乙醇制粒，喷入步骤(2)所得桂枝、陈皮挥发油，混匀，装胶囊，即得。

本发明中药组合物的用量，按活性组分原料药总重量计，为4-20克/日，可每日服用一次，优选为分2-4次服用，还优选为6-12克/日，分2-4次服用，更优选为7.59克/日，分3次服用。

实验例：

为阐明本发明中药组合物减少肾脏水通道蛋白2表达的活性，用按实施例1方法所制得的药物(以下称本发明药物)进行了下列试验。

1、材料和方法

1.1  主要试剂和仪器

呋塞米片由上海万安特公司生产，批号0200456；Trizol(Invitrogen Life Technologies公司)；cDNA合成试剂盒(Gene Copoeia公司)；小动物呼吸机(第二军医大学DW-2000型)；冰点渗透压仪(美国Advanced Instruments公司)；荧光定量PCR仪(BIO-RAD公司)；彩色Doppler超声显像仪(Acuson公司)；精密电子天平(TA1003)；显微照相摄像(OLYMPUS BX51)；Version4.0图像分析***(美国Kodak公司)；低温超速离心机(Sigma)；超纯水装置(MilliQ)；MPA-V型多道生物信号分析***(第二军医大学)；电泳仪(BIO-RAD)；冰冻切片机(Sandon)；酶标仪(BioTek，ELX800)；全自动生化分析仪(OLYMPUS AU640)；兔抗大鼠多克隆抗体(购自Santa Cruz公司)；辣根过氧化物酶标记的二抗(羊抗兔IgG，购自武汉博士德公司)；羊抗兔荧光抗体IgG(北京中杉生物)；本发明药物粉碎药粉(石家庄以岭药业股份有限公司生产)。

1.2方法

1.2.1  实验动物模型制作和分组

雄性SD大鼠180～220g(由南方医科大学南方医院实验动物中心提供)，采用左冠状动脉结扎致急性心肌梗死(AMI)后心力衰竭大鼠模型，在盐酸戊巴比妥钠(35mg.kg^-1)腹腔麻醉下，经口气管插管，接小动物呼吸机，潮气量2-3ml，吸呼比1∶2，呼吸频率60次/分。沿左胸骨第4～5肋间开胸。暴露心脏并打开心包，在左心耳和右心室流出道之间以6.0无创丝线结扎左冠状动脉前降支，肉眼观察前降支供血区变苍白，心电图导联ST段弓背向上抬高，提示AMI手术成功，然后挤压胸腔以排出空气并逐层关闭胸腔，术后经腹腔注射庆大霉素2.4×10⁴U.Kg^-1.d^-1，共3日，预防感染。

AMI术后4周存活51只，将这些大鼠随机分为慢性心力衰竭组(n＝10只，简称为C组)，本发明药物高、中、低剂量治疗组(n＝11，11，10只，分别简称为Q1、Q2和Q3组)，呋塞米治疗组(n＝9，只简称为F组)，假手术组(n＝10只，简称为S组)为仅穿线而未行冠状动脉结扎大鼠，各组大鼠经苦味酸标记，置于代谢笼饲养，待适应3日后，开始药物灌胃，本发明药物粉0.3、0.6、1.2g溶于2ml去离子水中灌胃，呋塞米组药物剂量为4mg.kg^-1，假手术组、慢性心衰组大鼠给予生理盐水2ml灌胃，收集大鼠24小时尿液并记录尿量，大鼠灌胃4周后，称量大鼠体重，行超声心动图和血液动力学检查，然后处死大鼠，采集血液和组织标本。

1.2.2  尿液收集和尿渗量的测定

记录大鼠代谢笼内24h尿量，所收集尿液在4℃条件，3000r/min离心10min，去除细胞残骸和食物残渣，然后用冰点抑制法测定尿渗量。

1.2.3  超声心动图检查

用彩色Doppler超声显像仪，M型曲线在左室短轴***肌水平测量，测定大鼠舒张期左室前壁厚度(AWTd)、后壁厚度(PWTd)、左室舒张末内径(LVEDd)及收缩末内径(LVESd)等指标，计算出射血分数(EF)、短轴收缩率(FS)等数值，以连续3个心动周期测量值的平均值作为最后的检测数据，用MO盘储存资料，专人分析。

1.2.4  血流动力学指标测定

戊巴比妥钠(30mg.kg^-1)腹腔麻醉下，钝性分离大鼠右侧颈总动脉，聚乙烯导管***充满0.3％肝素生理盐水以抗凝血，将导管***颈动脉、升主动脉，稳定10min后，应用多道生理仪记录平均动脉压(MBP)，然后继续送入导管，直至出现左心室压力曲线后，保持血流动力学稳定15min时，分别记录左室收缩末压(LVESP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)等指标，取3次测定结果的平均值作为实验值，所有电信号均用计算机软件分析处理。

1.2.5  免疫荧光

大鼠肾脏髓质标本快速冷冻后，经恒温冷冻切片，片厚3μm。冷冻切片在空气中自然干燥，加入含30mg/L Triton X-100的PBS室温放置30min，经兔抗大鼠AQP2(稀释度为1∶200)4℃孵育12h后，用FITC标记的山羊抗兔(稀释度为1∶200)IgG抗血清室温避光孵育2h。最后用甘油与PBS(1∶1)的混合液封片。每步骤后均用0.01mol/L PBS(pH 7.4)充分洗涤。自然风干后，荧光显微镜下观察。

1.2.6  实时荧光定量法(qPCR)检测大鼠肾脏髓质AQP2mRNA表达

用Trizol抽提的大鼠肾脏组织总RNA 1μg，按照First Strand cDNA Synthesis Kit的操作流程用Oligod(T)₁₈进行反转录获得单链cDNA。同时定量PCR的引物设计参考基因在NCBI标准序列，利用Primer Premier 5进行跨内含子设计，其中Aqp2(NM_012909.2)上游引物：5’-ggttgctccatgaatccag-3’，下游引物：5’-ggttgctccatgaatccag-3’；内参照GAPDH(NM_017008.3)上游引物：5’-ggaccaggttgtctcctgtg-3’，下游引物：5’-tgtaggccatgaggtccac-3’。整个实时定量PCR检测在iQ5^TM荧光定量PCR仪(BIO-RAD)上完成，反应体系为20μl，包含上下游引物各0.4μM，2×Allinone^TM Q-PCR Mix(GeneCopoeia)10μl，模板cDNA 0.5μl。PCR循环条件设置为95℃预变性10min，95℃变性10s，57℃退火20s，72℃延伸15s并读荧光，共40个循环，每个基因做3个复管，PCR产物的特异性通过融解曲线分析确认。所得到的原始数据经内对照GAPDH归一化处理后用ΔΔCt法进行Aqp2和NKCC2的表达量分析。

1.2.7  Western blot检测大鼠肾脏髓质AQP2蛋白的表达

取肾脏髓质100mg，剪碎后加入1.5ml含蛋白酶抑制剂的细胞裂解液(50mmol/L Tris-HCl，pH7.4，10mmol/LEDTA，pH7.2，1％去氧胆酸钠，0.6mmol/LPMSF，4μmol/L亮抑制肽，100kU/L抑肽酶)，冰上裂解肾脏髓质10min，10000r/min低温离心15min，取上清装入EP管中，总蛋白含量用考马斯亮蓝法测定。取蛋白质样品每份10μl，加等量样本处理液，100℃煮沸5min，10％ SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，将蛋白转到硝酸纤维膜上，然后用含5％脱脂牛奶的TBS-T封闭2h，加入兔抗鼠AQP2多克隆抗体(1∶500)孵育，4℃过夜，洗膜液洗涤剂5min，共3次，加入辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔IgG(1∶5000)孵育1h，洗膜液洗5min，共3次，然后显影并压片曝光，结果用图像分析***测定蛋白质条带相对吸光度比值(A)/β-actin比值。

1.3统计学处理

实验结果均以均数±标准差(x±s)表示，应用SPSS 11.5软件包行统计学分析，组间比较采用方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01为差异有非常显著意义。

2结果

2.1  各组大鼠心脏功能的变化(见表1和表2)

表1  各组大鼠心脏超声心动图变化(x±s)

注：与S组比较，a：P＜0.01，b：P＜0.05；与C组比较，c：P＜0.01，d：P＜0.05。

表2  各组大鼠血液动力学指标的变化(x±s)

注：与S组比较，a：P＜0.01，b：P＜0.05；与C组比较，c：P＜0.01，d：P＜0.05。

超声心动图显示，与S组相比，C组大鼠左心室扩大，心室前壁变薄，后壁代偿性肥厚，室壁运动明显减弱或消失，收缩功能显著降低(P＜0.01)。经本发明药物治疗4周后，Q1、Q2、Q3组左心室扩张都不同程度的减少，LVEF、FS提高。血流动力学结果也显示：Q1、Q2、Q3组LVEDP都有显著降低，±dp/dt显著升高(P＞0.05)；而F组LVEF、FS、LVEDP、±dp/dt较C组均无显著变化(P＞0.05)。

2.2  各组大鼠尿量、尿渗量的变化

C组大鼠尿量较S组显著降低，尿渗量增加(P＜0.01)。本发明药物治疗后，Q1、Q2、Q3组大鼠尿量较C组显著增加，尿渗量显著减少(P＜0.01)；同样F组大鼠尿量也显著增加，尿渗量显著减少(P＜0.01)。具体见图1和图2。

2.3  各组大鼠肾脏髓质AQP2免疫荧光表达

S组肾脏髓质绿色荧光显示AQP2表达很少，C组大鼠肾脏髓质绿色荧光表达明显增加；Q1、Q2、Q3组较心衰组表达减少，而F组表达增加。

2.4  各组大鼠肾脏髓质AQP2表达

qPCR实验发现显示，C组大鼠肾脏AQP2蛋白的表达较S组显著增高(P＜0.01)，经过本发明药物治疗后，Q1、Q2、Q3组大鼠肾脏AQP2蛋白的表达都有显著降低(P＜0.01)，而F组大鼠脏AQP2蛋白的表达显著增加(P＜0.01)。具体见图3。

3、结论

以上研究中发现，C组大鼠血浆AVP较S组显著升高，肾脏髓质AQP2 mRNA和蛋白表达也显著增加，同时C组大鼠尿量减少，尿渗量增加，提示肾脏髓质AQP2的表达上调，可能参与了CHF大鼠水代谢紊乱。经过本发明药物大、中、小剂量治疗4周后，伴随各组大鼠心功能改善，血浆AVP较心衰组显著降低，同时大鼠肾脏AQP2蛋白、mRNA表达也显著降低，尿量增加、尿渗量降低，提示本发明药物可以改善心脏功能，阻断神经内分泌的恶性循环，纠正水代谢紊乱。

综上所述，本发明药物组合物可以显著减少肾脏水通道蛋白2的表达，并且有效改善心脏功能。

附图说明：

图1：不同治疗药物对大鼠尿量的影响；

图2：不同治疗药物对大鼠尿渗量的影响；

图3：4周后不同治疗组大鼠肾脏髓质AQP2 mRNA表达。

具体实施方式

实施例1：本发明药物胶囊剂的制备

处方：

黄芪450g      附子112.5g    人参225g    丹参225g     葶苈子150g

香加皮180g    泽泻225g      红花90g     玉竹75g      陈皮75g

桂枝90g

制备方法：

(1)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参、香加皮按照上述处方加8倍量(重量比)70％乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃测定相对密度为1.25-1.30的清膏，备用；

(2)桂枝、陈皮按照比例蒸馏提取挥发油，提油后的水溶液滤过，备用，残渣再加8倍量水煎煮1小时，滤过，合并水溶液，备用；

(3)附子、丹参、玉竹、红花加水9倍量(重量比)煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，与步骤(2)中桂枝、陈皮水溶液合并，浓缩至60℃测定相对密度为1.25-1.30清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70％，4℃以下静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃测定相对密度为1.25-1.30清膏，与步骤(1)的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

(4)干膏混合粉碎成100目粉，加70％乙醇适量制粒，喷入桂枝、陈皮挥发油，混匀，装胶囊，制成1000粒，即得。

用法用量：每次4粒，每日3次，用于治疗急性心梗。

实施例2：活性成分的制备

处方：

黄芪450g    附子112.5g    人参225g    丹参225g    葶苈子150g

香加皮180g  泽泻225g      红花90g     玉竹75g     陈皮75g

桂枝90g

制备方法：

1)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮用70％乙醇提取，滤过，浓缩提取液至50-70℃相对密度为1.25-1.30的清膏；

2)用水提取桂枝、陈皮的挥发油，得挥发油A、水溶液B、药渣C；

3)加水煎煮附子、丹参、玉竹、红花，将所得水溶液滤过，得滤液D；

4)将桂枝、陈皮提挥发油后的水溶液B滤过，收集得水溶液滤液E，再加水煎煮药渣C，滤过得滤液F；

5)合并滤液D、滤液E、滤液F，浓缩至相对密度为1.25-1.30清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度60-80％，静置，滤过，滤液浓缩至60-70℃相对密度为1.25-1.30清膏G；

6)步骤1)所得清膏、挥发油A和步骤5)所得清膏G构成中药组合物的活性成分。

实施例3：本发明药物片剂的制备

处方：

黄芪150g    附子40g    人参225g    丹参225g    葶苈子50g

香加皮180g  泽泻75g    玉竹75g     桂枝30g     红花90g    陈皮25g

制备方法：

(1)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参、香加皮按照上述处方加8倍量70％乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液减与步骤(1)的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

(2)桂枝、陈皮按照处方量蒸馏提取挥发油，提油后的水溶液滤过，备用，残渣再加8倍量水煎煮1小时，滤过，合并水煎液，备用；

(3)附子、丹参、玉竹、红花加水9倍量煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，与步骤(2)中桂枝、陈皮水煎液合并，浓缩至60℃测定相对密度为1.25-1.30清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70％，4℃以下静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃测定相对密度为1.25-1.30清膏，与步骤(1)的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

(4)按常规制剂方法制成片剂。

实施例4：本发明药物颗粒剂的制备

处方：

黄芪250g      附子112.5g    党参200g    丹参120g    葶苈子135g

南五加皮150g  泽泻200g      玉竹60g     桂枝75g     红花75g    陈皮60g

制备方法：按常规制剂方法制成颗粒剂。

Claims (9)

1.一种中药组合物在制备减少肾脏水通道蛋白2表达的药物中的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪150-450份、附子40-120份、人参或党参75-225份、丹参75-225份、葶苈子50-150份、香加皮或南五加皮60-180份、泽泻75-225份、玉竹25-75份、桂枝30-90份、红花30-90份、陈皮25-75份。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪450份、附子112.5份、人参或党参225份、丹参225份、葶苈子150份、香加皮或南五加皮180份、泽泻225份、玉竹75份、桂枝90份、红花90份、陈皮75份。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪150份、附子40份、人参或党参225份、丹参225份、葶苈子50份、香加皮或南五加皮180份、泽泻75份、玉竹75份、桂枝30份、红花90份、陈皮25份。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪250份、附子112.5份、人参或党参200份、丹参120份、葶苈子135份、香加皮或南五加皮150份、泽泻200份、玉竹60份、桂枝75份、红花75份、陈皮60份。

5.如权利要求1-4任一所述的应用，其中所述中药组合物的活性成分由如下步骤制得的有效成分组成：

1)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮加7-9倍量70％乙醇提取，滤过，浓缩提取液至60℃测定相对密度为1.25-1.30的清膏；

2)用水提取桂枝、陈皮的挥发油，得挥发油A、水溶液B、药渣C；

3)加6-10倍量水煎煮附子、丹参、玉竹、红花2次，每次2小时，将所得水溶液滤过，得滤液D；

4)将桂枝、陈皮提挥发油后的水溶液B滤过，收集得水溶液滤液E，再加水煎煮药渣C，滤过得滤液F；

5)合并滤液D、滤液E、滤液F，浓缩至相对密度为1.25-1.30清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70％，静置，滤过，滤液浓缩至60℃测定相对密度为1.25-1.30清膏G；

6)步骤1)所得清膏、挥发油A和步骤5)所得清膏G构成中药组合物的活性成分。

6.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的制剂剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂。

7.如权利要求5中所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的制剂剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂。

8.根据权利要求6所述药物胶囊剂的制备方法，其特征在于，它是由以下步骤组成：

(1)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮按照比例量称取加8倍量70％乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃测定相对密度为1.25-1.30的清膏，备用；

(2)桂枝、陈皮按照比例蒸馏提取挥发油，提油后的水溶液滤过，备用，残渣再加8倍量水煎煮1小时，滤过，合并水煎液，备用；

(3)附子、丹参、玉竹、红花加水9倍量煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，与步骤(2)中桂枝、陈皮水煎液合并，浓缩至60℃测定相对密度为1.25-1.30的清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70％，4℃以下静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃测定相对密度为1.25-1.30的清膏，与步骤(1)的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

(4)将步骤(3)所得干膏粉碎成100目粉，加70％乙醇适量制粒，喷入桂枝、陈皮挥发油，混匀，装胶囊，即得。

9.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，该中药组合物在制备改善心脏功能药物中的应用。

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