CN101880265A

CN101880265A - 酸敏感聚合物胶束药物组合物及制备方法

Info

Publication number: CN101880265A
Application number: CN2010101956029A
Authority: CN
Inventors: 唐汝培
Original assignee: Jiangnan University
Current assignee: Jiangnan University
Priority date: 2010-06-09
Filing date: 2010-06-09
Publication date: 2010-11-10

Abstract

本发明涉及一种侧链含酸敏感基元(原酸酯)的两亲性嵌段聚合物的合成方法，及其该递送载体和包含活性剂的pH敏感控释胶束药物组合物。该药物组合物可以是用于该活性剂的局部可控递送或者可注射的剂型。使用简单的方法，疏水性药物可容易的负载于胶束中，该聚合物药物组合物可大幅度提高药物胞内传输和癌细胞灭杀效率。

Description

酸敏感聚合物胶束药物组合物及制备方法

技术领域

本发明涉及一种侧链含酸敏感基元(原酸酯)的两亲性嵌段聚合物的合成方法，及其该递送载体和包含活性剂的控释胶束药物组合物。该药物组合物可以是用于该活性剂的局部可控递送或者可注射的剂型。属于聚合物载体与缓控释材料技术领域。

背景技术

肿瘤是威胁人类健康的主要疾病之一，同时肿瘤治疗也是世界性的难题。化疗是目前肿瘤治疗过程中的临床主导方法，但抗肿瘤药物直接施药在化疗上存在难以克服的缺点：1)肌体内循环的半衰期过短使药物的疗效欠佳；2)缺乏选择性使药物对健康组织和细胞有较强的毒副作用；3)药物与肌体容易产生内免疫排斥反应使药效降低甚至完全丧失。因此，研制和开发具有智能靶向性的纳米载药***，使药物得以在肿瘤局部可控释放并发挥作用已经成为人们关注的焦点。

聚合物纳米胶束由于具有独特的纳米尺寸(10～200nm)，尤其适合于抗癌药物的靶向传递：1)较小的体积有利于减少网状内皮***(reticuloendothelial systems，RES)的吸收、肾脏的***清除(renal clearance)及吞噬细胞的识别(phagocyte recognition)，从而延长药物在体内的循环时间，提高药物的生物利用度；2)较小的粒径增强药物对肿瘤组织血管壁的渗透，具有对癌变组织特有的被动靶向(passive targeting)识别，使药物有效的富集于癌变组织部位，杀伤肿瘤细胞，发挥药物疗效的作用；3)聚合物纳米胶束载体便于改造和修饰，可以根据胞内外转运过程，对其进行逐步修饰，转运活性成分至靶点部位。

近年来，开发新型肿瘤环境响应性的智能胶束，尤其是酸敏感的聚合物纳米胶束载药体系，已经成为一个异常热门的研究/开发领域。异常增生的肿瘤细胞呈现一个高代谢状态，需要远大于其自身所能提供的氧以及养料。肿瘤细胞能够进行糖酵解来提供额外的能量，但是酵解又会使肿瘤细胞周围的环境酸化，使得肿瘤组织的微环境的pH值(约5.5～6.5)低于正常组织微环境(pH＝7.4)，相应的内体和溶酶体内的pH值也要低于细胞浆的pH值。因此可利用肿瘤组织及细胞内内酶体/溶酶体较低pH值的微环境，设计pH敏感型聚合物纳米载体。在正常的中性pH值下，该纳米微球比较稳定，但是当进入肿瘤组织的偏酸性环境时，该微球会加速崩解，从而释放其内负载的药物，使药物主动富集于肿瘤部位，在肿瘤组织内达到一个较高的药物浓度；同时肿瘤细胞内局部较高的酸性环境(pH＝4.5～5.5)，还可加速该纳米粒子与内涵体、溶酶体融合，将包裹的药物转运至胞浆中，增加肿瘤细胞对药物的摄取。

中国专利第1317928A、1961868A、1571817A、101708335A、1304423A、101495149A等披露了一系列酸敏感聚合物药物组合物，取得了较好的药物缓控释效果。但这些具有一级核-壳结构的纳米胶束粒子共同的特点是胶束载体的核-壳结构在微酸性环境里在较短的时间内完全崩解，快速释放其内负载的药物，导致局部药物浓度过高，产生较大的毒副作用，同时亦降低药物肿瘤灭杀效率及生物利用度。

发明内容

本发明的目的是提供一种简单、经济，高效的制备具有二级核-壳结构、药物释放速率可控的新型酸敏感聚合物胶束药物组合物，实现可控的胞外药物释放能力；控制二级胶束的尺寸，胞外部分药物仍可通过第二级胶束携带，经内吞作用进入癌细胞并最终在胞内释放，提高药物杀死癌细胞的能力。

本发明合成的甲基丙烯酸原酸酯类单体结构如下化学式I所示：

本发明所述甲基丙烯酸原酸酯类单体合成方法较详细的步骤如下：

1)在有或无溶剂条件下，将2，2-二乙氧基四氢呋喃、乙二醇及催化剂的混合物在60-130℃反应4-24小时，其摩尔比为1∶1-2∶0.01-0.05，粗产物溶于乙酸乙酯，经饱和碳酸钠水溶液及饱和盐水洗三次，干燥得到纯产物2-(2′-羟基乙氧基)-2-乙氧基四氢呋喃；

2)将2-(2′-羟基乙氧基)-2-乙氧基四氢呋喃和N，N-二异丙基乙胺溶于有机溶剂中，冷至-70-20℃，加入甲基丙烯酰氯，摩尔比为1∶1-2∶2-4，混合物在室温反应4-24小时，粗产物粗产物经硅胶柱层析分离，得到甲基丙烯酸原酸酯类单体：2-乙氧基四氢呋喃-2-氧乙基甲基丙烯酸酯。

本发明所述的甲基丙烯酸原酸酯类单体合成方法步骤1所用的有机溶剂是己烷、苯或者甲苯。

本发明所述的甲基丙烯酸原酸酯类单体合成方法步骤1所用的催化剂为对甲基苯磺酸或者多聚磷酸。

本发明所述的甲基丙烯酸原酸酯类单体合成方法步骤2所用的有机溶剂是二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃或者乙氰。

本发明所述的甲基丙烯酸原酸酯类单体合成方法步骤2所用的硅胶柱层析分离淋洗液是乙酸乙酯和己烷的混合物，其体积比为1∶1-10。

本发明合成的侧链含酸敏感基元(原酸酯)的两亲性嵌段聚合物结构如化学式II所示：

x表示数值45，113和226，y表示数值20-150。

根据原酸酯的开环酸降解机理(Adv.Drug Deliv.Rev.2002，54，1015-1039；Biomacromolecules 2004，5，1625-1632)，两亲性嵌段聚合物胶束的内核酸降解产物结构是化学式III的聚甲基丙烯酸羟乙酯(PHEMA)。聚甲基丙烯酸羟乙酯是一类具有良好生物及血液相容性的高分子材料(Macromolecules 2004，37，2395-2403)，由于具有强烈的分子间/内氢键作用，使其能够在水溶液中进一步聚集、原位自组装形成新的二级核-壳型聚合物纳米胶束；酸响应导致的二级聚合物胶束核-壳结构的形成，可有效实现pH触发、速率可控的逐步胞外药物释放过程；胞外部分药物可通过第二级胶束携带，经内吞作用进入癌细胞并最终在胞内释放灭杀癌细胞。

本发明所述两亲性嵌段聚合物合成方法较详细的步骤如下：

甲基丙烯酸原酸酯类单体(I)、大分子引发剂、催化剂、配体准确称量放入干燥洁净的玻璃聚合管中，最后加入少量的溶剂。聚合物经三次冷冻、解冻、抽真空、充氮脱氧后封管，随后聚合反应管被放入60-100℃的油浴中聚合，反应6-12小时后，将反应混合物溶解在四氢呋喃中，通过一段短的碱性氧化铝柱以除去催化剂中的金属化合物。待大部分的四氢呋喃旋转蒸发去除后，用大量的己烷沉淀出聚合物，过滤，真空干燥至恒重得到目标共聚物。

本发明所述两亲性嵌段聚合物合成方法所用的大分子引发剂结构是化学式IV的聚乙二醇类化合物，聚乙二醇的分子量是2000、5000和10000。

本发明所述两亲性嵌段聚合物合成方法得到的侧链含酸敏感基元(原酸酯)的聚甲基丙烯酸酯嵌段的聚合度是20-150。

本发明所述两亲性嵌段聚合物合成方法所用的溶剂是苯、甲苯、二甲苯、二甲氧基苯或者苯甲醚。

本发明所述两亲性嵌段聚合物合成方法所用的配体是联吡啶或者N，N，N′，N′，N′-五甲基二乙基三胺，所用的催化剂是氯化亚铜或者溴化亚铁。

本发明的另一目的是提供用于活性剂的局部可控递送或者可注射的控释胶束药物组合物。

本发明所述的胶束药物组合物，包括一种侧链含原酸酯基元的两亲性嵌段聚合物胶束，以及至少一种掺入在该胶束中的活性剂。

本发明所述的胶束药物组合物，其中所述的活性剂选自抗炎药、癌症化疗药物、免疫抑制剂、代谢药物、抗过敏药物、肝病治疗药物、神经***治疗药物以及循环***疾病治疗药物。

本发明所述的胶束药物组合物，，其中所述的癌症化疗药物选自紫杉醇、阿霉素、环孢霉素和卡莫司汀。

本发明所述的将活性剂掺入到两亲性嵌段聚合物胶束中的方法包括搅拌、加热、超声波、溶剂蒸发或者渗透处理。

附图说明

图1是实施例1所制备的2-乙氧基四氢呋喃-2-氧乙基甲基丙烯酸酯单体的¹H NMR及¹³C NMR谱图。

图2是实施例3所制备嵌段共聚物的¹HNMR谱图；A：氘代氯仿溶剂；B：氘代水溶剂。

图3是实施例3-5所制备嵌段共聚物的GPC(凝胶渗透色谱法)谱图(柱子：Waters 590HPLC pump流速：1.0ml/min；淋洗剂：氯仿；温度：35℃)。

图4是实施例6所制备的负载阿霉素(DOX)聚合物胶束的尺寸、药物含量与药物/共聚物起始投料比的关系图。

图5是负载阿霉素聚合物胶束及水溶性阿霉素(DOX)的药物释放曲线。

图6是实施例2-5所制备共聚物与小鼠成纤维细胞(NIH 3T3)共培养24h的细胞毒性结果。

图7是实施例6所制备负载0.5％阿霉素(DOX)的聚合物(P2)胶束溶液与脑胶质瘤细胞(T98Gliomacells)共培养24、48h的细胞毒性结果。

图8是实施例6所制备负载阿霉素(DOX)的聚合物胶束与脑胶质瘤细胞(T98Glioma cells)培养不同时间的激光共聚焦扫描显微镜图。

图9是水溶性阿霉素(DOX)与脑胶质瘤细胞(T98Glioma cells)培养不同时间的激光共聚焦扫描显微镜图。

具体实施方式

下面的实例将具体说明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。

实施例1

2-乙氧基四氢呋喃-2-氧乙基甲基丙烯酸酯单体的合成方法，通过下述步骤实现：

1)2-(2′-羟基乙氧基)-2-乙氧基四氢呋喃的制备

氮气氛下，将7.60g(47.44mmol)2，2-二乙氧基四氢呋喃、11.78g(189.79mmol)乙二醇和微量的对甲基苯磺酸在130℃反应18小时后冷至室温。反应混合物溶于乙酸乙酯，经饱和碳酸钠水溶液和饱和盐水洗，硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，真空干燥得到无色油状纯产物6.94g，产率为83％。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ(ppm)1.15-1.20(t，3H，CH₃)，1.89-1.94(m，2H，CH₂)，2.42-2.47(t，2H，CH₂)，3.42-3.61(m，4H，OCH₂)，3.69-3.82(m，2H，CH₂OH)，4.19-4.23(t，2H，OCH₂).¹³C NMR(CDCl₃，δppm)：15.22，25.15，30.97，31.42，61.07，62.16，63.43，66.01，69.17，72.43，173.92.

2)2-乙氧基四氢呋喃-2-氧乙基甲基丙烯酸酯的制备

氮气氛下，将4.33g(24.58mmol)2-(2′-羟基乙氧基)-2-乙氧基四氢呋喃和6.53g(49.15mmol)N，N-二异丙基乙胺溶于100ml二氯甲烷后冷至-20℃；然后缓慢滴加入5.65g(27.03mmol)甲基丙烯酰氯，室温反应过夜后，减压蒸干挥发性试剂后，粗产物溶于乙酸乙酯，经10％碳酸钠水溶液及饱和盐水洗，硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，真空干燥，得到的粗产物经硅胶柱层析分离(淋洗洗：己烷/乙酸乙酯，体积比1∶5)得到淡黄色油状物4.23g纯产物2-乙氧基四氢呋喃-2-氧乙基甲基丙烯酸酯，产率是70％。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)：δ(ppm)1.17-1.21(t，3H，CH₃)，1.91-1.96(m，5H，CH₂，CH₃)，2.42-2.47(t，2H，CH₂)，3.43-3.48(m，4H，O-CH₂)，4.33-4.36(m，4H，O-CH₂)，5.60-6.14(d，2H，C＝CH₂).¹³C NMR(CDCl₃，δppm)：15.23，18.34，25.11，31.01，62.06，62.52，69.38，126.13，136.01，167.21，173.40.ESI-MS Calcd for(C₁₂H₂₀O₅)，244.3；found m/z，245.2(M+H⁺)，267.2(M+Na⁺).

实施例2

将1.50g(0.29mmol)聚乙二醇大分子引发剂、2.14g(8.76mmol)2-乙氧基四氢呋喃-2-氧乙基甲基丙烯酸酯、28.86mg(0.29mmol)氯化亚铜、90.58mg(0.58mmol)联吡啶准确称量放入干燥洁净的玻璃聚合管中，最后加入4ml甲苯。聚合物经三次冷冻、解冻、抽真空、充氮脱氧后封管，随后聚合反应管被放入80℃的油浴中加热聚合，反应8小时后，将反应混合物溶解在四氢呋喃中，通过一段短的碱性氧化铝柱以除去催化剂中的金属化合物。待大部分的四氢呋喃旋转蒸发去除后，用大量的己烷沉淀出聚合物，过滤，真空干燥至恒重得到目标共聚物P1，该共聚物的性质见表1。

实施例3

将1.50g(0.29mmol)聚乙二醇大分子引发剂、3.57g(14.60mmol)2-乙氧基四氢呋喃-2-氧乙基甲基丙烯酸酯、28.86mg(0.29mmol)氯化亚铜、90.58mg(0.58mmol)联吡啶准确称量放入干燥洁净的玻璃聚合管中，最后加入5ml甲苯。聚合物经三次冷冻、解冻、抽真空、充氮脱氧后封管，随后聚合反应管被放入80℃的油浴中加热聚合，反应12小时后，将反应混合物溶解在四氢呋喃中，通过一段短的碱性氧化铝柱以除去催化剂中的金属化合物。待大部分的四氢呋喃旋转蒸发去除后，用大量的己烷沉淀出聚合物，过滤，真空干燥至恒重得到目标共聚物P2，该共聚物的性质见表1。

实施例4

将0.90g(0.17mmol)聚乙二醇大分子引发剂、3.43g(14.02mmol)2-乙氧基四氢呋喃-2-氧乙基甲基丙烯酸酯、17.32mg(0.17mmol)氯化亚铜、54.35mg(0.35mmol)联吡啶准确称量放入干燥洁净的玻璃聚合管中，最后加入5ml甲苯。聚合物经三次冷冻、解冻、抽真空、充氮脱氧后封管，随后聚合反应管被放入80℃的油浴中加热聚合，反应12小时后，将反应混合物溶解在四氢呋喃中，通过一段短的碱性氧化铝柱以除去催化剂中的金属化合物。待大部分的四氢呋喃旋转蒸发去除后，用大量的己烷沉淀出聚合物，过滤，真空干燥至恒重得到目标共聚物P3，该共聚物的性质见表1。

实施例5

将0.60g(0.11mmol)聚乙二醇大分子引发剂、3.43g(14.02mmol)2-乙氧基四氢呋喃-2-氧乙基甲基丙烯酸酯、11.55mg(0.11mmol)氯化亚铜、36.23mg(0.22mmol)联吡啶准确称量放入干燥洁净的玻璃聚合管中，最后加入5ml甲苯。聚合物经三次冷冻、解冻、抽真空、充氮脱氧后封管，随后聚合反应管被放入80℃的油浴中加热聚合，反应24小时后，将反应混合物溶解在四氢呋喃中，通过一段短的碱性氧化铝柱以除去催化剂中的金属化合物。待大部分的四氢呋喃旋转蒸发去除后，用大量的己烷沉淀出聚合物，过滤，真空干燥至恒重得到目标共聚物P4，该共聚物的性质见表1。

表1

实施例6

将阿霉素溶和嵌段共聚物(P2、P3、P4)溶于含微量三乙胺的二甲基亚砜中(浓度为10％)，搅拌过夜。使用透析膜(MWCO：3500)，相对于含微量三乙胺的蒸馏水(PH＞7.4)对上述混合液进行透析24小时，每隔2小时换新鲜透析液一次。用0.45μm的膜滤器过滤经过透析的溶液，得到负载阿霉素的澄清嵌段共聚物胶束溶液，冷冻干燥得到固态载药聚合物胶束。胶束尺寸及药物含量与药物/共聚物起始投料比的关系见图4。实验结果证明：调节起始药物/共聚物起始投料比，药物可以很容易的负载入聚合物胶束中，同时可得到适合药物靶向传递的纳米聚合物胶束粒子。

实施例7

将实施例3-5所制备的5ml负载0.5％阿霉素的聚合物(P2)胶束溶液和水溶性阿霉素溶液(浓度：5％)放置在透析袋(MWCO：3500)中。将上述透析袋放入PH值分别为7.4和5的缓冲溶液中。在预定的时间测定阿霉素相对于时间从胶束中的释放量。从图5可以看出，负载的药物在微酸环境中表现出二级释放曲线，在起始6小时内，由于酸敏感胶束内核的降解，药物快速释放约50％；此后由于二级胶束的形成，药物释放速率降低，药物在一周内呈缓慢持续释放状态并最终完全释放药物至环境中。

实施例8

NIH 3T3细胞(5000个/孔)接种于96孔培养板，在37℃和5％二氧化碳条件下培养24h，细胞融合度为60-80％。将共聚物胶束溶液加入上述已经接种、培养NIH 3T3细胞的96孔板，继续培养24h。每孔加入20ul MTT(5mg/ml)，4h后吸去培养液，每孔加入100ul DMSO，振摇10min，在酶标仪(Bio-TEKSynergy HT微孔读板器)上，于570nm测定A值。按以下公式计算细胞生存率：细胞生存率(％)＝(A_sample/A_control)×100％。从图6可以看出，NIH 3T3细胞的存活率相比于对照组(培养基)，即使在1mg/ml这样高的浓度下也仅有大约20％的降低，证明共聚物降解产物的细胞毒性是较小的。

实施例9

脑胶质瘤细胞(T98Glioma cells)(6000个/孔)接种于96孔培养板，在37℃和5％二氧化碳条件下培养24h，细胞融合度为60-80％。将负载0.5％阿霉素的聚合物(P2)胶束溶液加入上述已经接种、培养T98Glioma细胞的96孔板，继续培养24h。每孔加入20ul MTT(5mg/ml)，4h后吸去培养液，每孔加入100ul DMSO，振摇10min，在酶标仪(Bio-TEK Synergy HT微孔读板器)上，于570nm测定A值。按以下公式计算细胞生存率：细胞生存率(％)＝(A_sample/A_control)×100％。从图7可以看出，在24小时内，负载阿霉素的聚合物胶束能以极小的药物量完全灭杀T98Glioma细胞，且其灭杀效率与培养时间(48小时)无关，证明胶束能很容易的以细胞内吞方式进入癌细胞并释放出药物；在24小时内，水溶性阿霉素至少需要提高10倍的药物剂量才能完全灭杀T98Glioma细胞，其灭杀效率随着培养时间的延长(48小时)而大幅度增加，证明水溶性阿霉素以无规扩散方式进入癌细胞，并且效率很低。

实施例10

脑胶质瘤细胞(T98Glioma cells)(50000个/孔)接种于6孔培养板，在37℃和5％二氧化碳条件下培养24h，细胞融合度为60-80％。将负载0.5％阿霉素的聚合物(P2)胶束及水溶性阿霉素溶液加入上述已经接种、培养T98Glioma细胞的6孔板中(阿霉素浓度：1ug/ml；细胞核染色剂DAPI浓度：1ug/ml)，培养预定时间后吸去培养液，PBS缓冲液洗3次。加入含4％多聚甲醛的PBS缓冲溶液混合10分钟后，用激光共聚焦显微镜(Olympus Fluoview 1000)观察。从图8和图9可以看出：载药聚合物胶束(红色荧光)可容易的(1-4小时)大量进入细胞及细胞核(蓝色荧光)；而水溶性阿霉素即使与T98Glioma细胞共培养11小时，仅微量的药物进入细胞及细胞核；实验结果证明负载阿霉素的聚合物胶束可以大幅度提高药物进入癌细胞的效率。

本发明各个原料及药物组合物的上下限取值和区间值，以及所列举的各原料都能实现本发明，在此就不一一列举实施例。

Claims

1.一种合成化学式I的甲基丙烯酸原酸酯类单体的方法：

2.一种权利要求1的甲基丙烯酸原酸酯类单体的合成方法，其特征在于，由下述步骤实现：

1)在有或无溶剂条件下，将2，2-二乙氧基四氢呋喃、乙二醇及催化剂的混合物在60-130℃反应4-24小时，其摩尔比为1∶1-2∶0.01-0.05，粗产物溶于乙酸乙酯，经饱和碳酸钠水溶液及饱和盐水洗三次，干燥得到纯产物2-(2′-羟基乙氧基)-2-乙氧基四氢呋喃，直接用于下一步反应；

3.根据权利要求1或2所述的甲基丙烯酸原酸酯类单体的合成方法，其特征在于：步骤1)所用的有机溶剂是己烷、苯或者甲苯，步骤1)所用的催化剂为对甲基苯磺酸或者多聚磷酸，步骤2)所用的有机溶剂是二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙氰，步骤2)所用的硅胶柱层析分离淋洗液是乙酸乙酯和己烷的混合物，其体积比为1∶1-10。

4.一种合成化学式II的侧链含原酸酯基元的两亲性嵌段聚合物的方法：

x表示数值45，113和226，y表示数值20-100。

5.一种权利要求II的侧链含原酸酯基元的两亲性嵌段聚合物的合成方法，其特征是：

甲基丙烯酸原酸酯类单体(I)、大分子引发剂、催化剂、配体准确称量放入干燥洁净的玻璃聚合管中，最后加入少量的溶剂。聚合物经三次冷冻、解冻、抽真空、充氮脱氧后封管，随后聚合反应管被放入60-100℃的油浴中聚合，反应经预定的时间后，将反应混合物溶解在四氢呋喃中，通过一段短的碱性氧化铝柱以除去催化剂中的金属化合物。待大部分的四氢呋喃旋转蒸发去除后，用大量的己烷沉淀出聚合物，过滤，真空干燥至恒重得到目标共聚物。

6.根据权利要求7或8所述的侧链含原酸酯基元的两亲性嵌段聚合物的合成方法，其特征在于：所用的大分子引发剂结构是化学式III的聚乙二醇类化合物，聚乙二醇的分子量是2000、5000和10000。

7.根据权利要求5所述的侧链含原酸酯基元的两亲性嵌段聚合物的合成方法，其特征在于：侧链含酸敏感基元(原酸酯)的聚甲基丙烯酸酯嵌段的聚合度是20-150，所用的溶剂是苯、甲苯、二甲苯、二甲氧基苯或者苯甲醚，所用的配体是联吡啶或者N，N，N′，N′，N′-五甲基二乙基三胺，所用的催化剂是氯化亚铜或者溴化亚铁。

8.一种聚合物胶束药物组合物，包括一种如权利要求5所述的侧链含原酸酯基元的两亲性嵌段聚合物胶束，以及至少一种掺入在该胶束中的活性剂，其中所述的活性剂选自抗炎药、癌症化疗药物、免疫抑制剂、代谢药物、抗过敏药物、肝病治疗药物、神经***治疗药物以及循环***疾病治疗药物。

9.根据权利要求8所述的胶束药物组合物，其中所述的癌症化疗药物选自紫杉醇、阿霉素、环孢霉素和卡莫司汀。

10.将活性剂掺入到两亲性嵌段聚合物胶束中的方法包括搅拌、加热、超声波、溶剂蒸发或者渗透处理。