CN101869066A - 百子莲的组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及百子莲的组织培养方法，包括无菌材料的获得，球茎的分化和增殖，球茎壮苗培养，生根培养，炼苗与移栽等步骤。与现有技术相比，本发明大大提高了百子莲的繁殖速度和苗的整齐度，可实现育苗的工厂化大批量生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物的组织培养方法，尤其是涉及一种百子莲的组织培养方法。
背景技术
百子莲为石蒜科百子莲属植物，原产于秘鲁和巴西一带，现栽培较为广泛。百子莲是多年生草本植物，鳞茎肥大，近球形，直径5-7cm，外皮呈淡绿色或黄褐色。叶片两侧对生，带状，先端渐尖，共6-8枚，叶片多于花后生出。顶端着花2-4朵，花朵硕大，花色紫色，是良好的花镜与庭院材料。做为国外引进的新品种，百子莲的引种数量较少，种球分株慢，种苗供应受限制。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种可提高繁殖速度和苗的整齐度的百子莲的组织培养方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
百子莲的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)无菌材料的获得
在百子莲开花时，摘取未开花的花苞，用自来水冲洗1-3h后于超净工班工作台上，依次利用质量浓度为60-75％的乙醇浸泡10-50s，体积浓度为0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用无菌水冲洗4-6次，利用无菌滤纸吸干花苞表面的水分后，将花苞接种于花苞诱导培养基上；
(2)球茎的分化和增殖
花苞接种于花苞诱导培养基上，1-3周后花苞开始膨大，出现白色突起，3-5周后可见芽分生组织，再培养1-2个月，有小球茎生成，将小球茎切下移入球茎增殖培养基中进行增殖培养，球茎基部的愈伤组织较多，但球茎生长发育良好，无玻璃化等不良现象；
(3)球茎壮苗培养
将球茎增殖培养基上诱导出的球茎转至壮苗培养基上生长，20-40天后可以长成0.2-0.5cm的球茎；
(4)生根培养
取0.2-0.5cm的球茎，转接入生根培养基中诱导生根，10-20天后幼苗基部分化出白色的根原基，30-35天后可以长至2-4cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90-100％；
(5)炼苗与移栽
生根培养30-35天，根系长至0.5-1cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗1-3天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化30-50天，即可移栽室外上盆或地栽，给予肥水管理，最终的移栽成活率为90-100％。
所述的花苞诱导培养基包括MS+6-BA1.0-5.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L。
所述的花苞诱导培养基优选MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L。
所述的球茎增殖培养基包括MS+6-BA0.5-4.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L。
所述的球茎增殖培养基优选MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L。
所述的壮苗培养基包括MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L。
所述的壮苗培养基优选MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。
所述的生根培养基包括MS+NAA0.1-0.3mg/L。
所述的生根培养基优选MS+NAA0.1mg/L。
所述的培养基还包括蔗糖20-40g/L、琼脂粉4-8g/L，培养基pH5.5-6.0，培养温度24-26℃，光照1500-2500lx。
与现有技术相比，本发明通过组培技术，极大提高了百子莲的繁殖速度和苗的整齐度，可以实现育苗的工厂化大批量生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
(1)无菌材料的获得
在百子莲开花时，摘取未开花的花苞，用自来水冲洗1h后于超净工班工作台上，依次利用质量浓度为60％的乙醇浸泡10s，体积浓度为0.5‰的汞浸泡10min，无菌水冲洗4次，用无菌滤纸吸干表面水分后，将花苞接种于包括MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L的腋芽诱导培养基上；
(2)球茎的分化和增殖
花苞接种于花苞诱导培养基上，1周后花苞开始膨大，出现白色突起，3周后可见芽分生组织，再培养1个月，有小球茎生成，将小球茎切下移入包括MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的球茎增殖培养基中进行增殖培养，球茎基部的愈伤组织较多，但球茎生长发育良好，无玻璃化等不良现象；
(3)球茎壮苗培养
将在球茎增殖培养基上诱导出的球茎转至包括MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的壮苗培养基上生长，20天后可以长成0.2cm的球茎；
(4)生根培养
取0.2cm的球茎，转接入包括MS+NAA0.1mg/L的生根培养基中诱导生根，10天后幼苗基部分化出白色的根原基，30天后可以长至2cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90％；
(5)炼苗与移栽
生根培养30天，根系长至0.5cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗1天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化30天，即可移栽室外上盆或地栽，给予肥水管理，最终的移栽成活率为90％。
上述各种情况的培养基还包括蔗糖20g/L、琼脂粉4g/L，pH＝5.5，培养温度24℃，光照1500lx。
实施例2
(1)无菌材料的获得
在百子莲开花时，摘取未开花的花苞，用自来水冲洗1h后于超净工班工作台上，依次利用质量浓度为75％的乙醇浸泡30s，体积浓度为1‰的汞浸泡15min，无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干表面水分后，将花苞接种于包括MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L的腋芽诱导培养基上；
(2)球茎的分化和增殖
花苞接种于花苞诱导培养基上，3周后花苞开始膨大，出现白色突起，4周后可见芽分生组织，再培养1个半月，有小球茎生成，将小球茎切下移入包括MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L的球茎增殖培养基中进行增殖培养，球茎基部的愈伤组织较多，但球茎生长发育良好，无玻璃化等不良现象；
(3)球茎壮苗培养
将在球茎增殖培养基上诱导出的球茎转至包括MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L的壮苗培养基上生长，30天后可以长成0.5cm的球茎；
(4)生根培养
取0.5cm的球茎，转接入包括MS+NAA0.1mg/L的生根培养基中诱导生根，15天后幼苗基部分化出白色的根原基，30天后可以长至4cm，根系粗壮，须根众多，生根率为100％；
(5)炼苗与移栽
生根培养30天，根系长至1cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗3天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化40天，即可移栽室外上盆或地栽，给予肥水管理，最终的移栽成活率为100％。
上述各种情况的培养基还包括蔗糖30g/L、琼脂粉6g/L，pH＝5.8，培养温度25℃，光照2000lx。
实施例3
(1)无菌材料的获得
在百子莲开花时，摘取未开花的花苞，用自来水冲洗3h后于超净工班工作台上，依次利用质量浓度为75％的乙醇浸泡50s，体积浓度为2‰的汞浸泡30min，无菌水冲洗6次，用无菌滤纸吸干表面水分后，将花苞接种于包括MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L的腋芽诱导培养基上；
(2)球茎的分化和增殖
花苞接种于花苞诱导培养基上，3周后花苞开始膨大，出现白色突起，5周后可见芽分生组织，再培养2个月，有小球茎生成，将小球茎切下移入包括MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.3mg/L的球茎增殖培养基中进行增殖培养，球茎基部的愈伤组织较多，但球茎生长发育良好，无玻璃化等不良现象；
(3)球茎壮苗培养
将在球茎增殖培养基上诱导出的球茎转至包括MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L的壮苗培养基上生长，40天后可以长成0.4cm的球茎；
(4)生根培养
取0.4cm的球茎，转接入包括MS+NAA0.3mg/L的生根培养基中诱导生根，20天后幼苗基部分化出白色的根原基，35天后可以长至3cm，根系粗壮，须根众多，生根率为95％；
(5)炼苗与移栽
生根培养35天，根系长至0.8cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗3天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化50天，即可移栽室外上盆或地栽，给予肥水管理，最终的移栽成活率为94％。
上述各种情况的培养基还包括蔗糖40g/L、琼脂粉8g/L，pH＝6.0，培养温度26℃，光照2500lx。
Claims (10)
1.百子莲的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)无菌材料的获得
在百子莲开花时，摘取未开花的花苞，用自来水冲洗1-3h后于超净工班工作台上，依次利用质量浓度为60-75％的乙醇浸泡10-50s，体积浓度为0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用无菌水冲洗4-6次，利用无菌滤纸吸干花苞表面的水分后，将花苞接种于花苞诱导培养基上；
(2)球茎的分化和增殖
花苞接种于花苞诱导培养基上，1-3周后花苞开始膨大，出现白色突起，3-5周后可见芽分生组织，再培养1-2个月，有小球茎生成，将小球茎切下移入球茎增殖培养基中进行增殖培养，球茎基部的愈伤组织较多，但球茎生长发育良好，无玻璃化等不良现象；
(3)球茎壮苗培养
将球茎增殖培养基上诱导出的球茎转至壮苗培养基上生长，20-40天后可以长成0.2-0.5cm的球茎；
(4)生根培养
取0.2-0.5cm的球茎，转接入生根培养基中诱导生根，10-20天后幼苗基部分化出白色的根原基，30-35天后可以长至2-4cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90-100％；
(5)炼苗与移栽
生根培养30-35天，根系长至0.5-1cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗1-3天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化30-50天，即可移栽室外上盆或地栽，给予肥水管理，最终的移栽成活率为90-100％。
2.根据权利要求1所述的百子莲的组织培养方法，其特征在于，所述的花苞诱导培养基包括MS+6-BA1.0-5.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L。
3.根据权利要求2所述的百子莲的组织培养方法，其特征在于，所述的花苞诱导培养基优选MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L。
4.根据权利要求1所述的百子莲的组织培养方法，其特征在于，所述的球茎增殖培养基包括MS+6-BA0.5-4.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L。
5.根据权利要求4所述的百子莲的组织培养方法，其特征在于，所述的球茎增殖培养基优选MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L。
6.根据权利要求1所述的百子莲的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培养基包括MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L。
7.根据权利要求6所述的百子莲的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培养基优选MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。
8.根据权利要求1所述的百子莲的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基包括MS+NAA0.1-0.3mg/L。
9.根据权利要求8所述的百子莲的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基优选MS+NAA0.1mg/L。
10.根据权利要求2或4或6或8所述的百子莲的组织培养方法，其特征在于，所述的培养基还包括蔗糖20-40g/L、琼脂粉4-8g/L，培养基pH5.5-6.0，培养温度24-26℃，光照1500-2500lx。
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: STATE GRID SHANGHAI ELECTRIC POWER COMPANY POWER S Effective date: 20140103 |
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| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20140103 Address after: 201114 Pujiang village, Pujiang Town, Shanghai, Minhang District Patentee after: Shanghai Shangfang Landscape Plant Institute Patentee after: State Grid Shanghai Municipal Electric Power Company Patentee after: Shanghai Urban Power Supply Design Co., Ltd. Address before: 201114 Pujiang village, Pujiang Town, Shanghai, Minhang District Patentee before: Shanghai Shangfang Landscape Plant Institute |
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| CI01 | Correction of invention patent gazette | ||
| CI01 | Correction of invention patent gazette |
Correction item: Patentee Correct: Shanghai Main Garden Plant Research Institute Co., Ltd.|201114. Pujiang village, Pujiang Town, Shanghai, Minhang District|Shanghai Shanghai Municipal Electric Power Company power supply design Co., Ltd. False: Shanghai Main Garden Plant Research Institute|201114. Pujiang village, Pujiang Town, Shanghai, Minhang District|Shanghai Shanghai Municipal Electric Power Company power supply design Co., Ltd. Number: 05 Volume: 30 |
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| ERR | Gazette correction |
Free format text: CORRECT: PATENTEE; FROM: SHANGHAI SHANGFANG LANDSCAPE PLANT INSTITUTE:201114 MINHANG, SHANGHAI; STATE GRID SHANGHAI ELECTRIC POWER COMPANY, POWER SUPPLY DESIGN (SHANGHAI) CO., LTD. TO: SHANGHAI SHANGFANG LANDSCAPE PLANT RESEARCH INSTITUTE CO., LTD.:201114 MINHANG, SHANGHAI; STATE GRID SHANGHAI ELECTRIC POWER COMPANY, POWER SUPPLY DESIGN (SHANGHAI) CO., LTD. |
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120104 Termination date: 20150424 |
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| EXPY | Termination of patent right or utility model |