CN101849478B - 一种墨汁鬼伞及其栽培方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种墨汁鬼伞及其栽培方法，还提供了用于培养墨汁鬼伞的母种、原种或栽培种的培养基以及菌袋培养时所用的培养基。所述墨汁鬼伞的保藏号为CGMCC No.3578；所述培养基具有配方简单、易于配制等优点；所述栽培方法可以改善墨汁鬼伞菌种的环境适应性、母种繁殖效率、原种及栽培种营养吸收效率，提高墨汁鬼伞的商品性，实现墨汁鬼伞的规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及野生食用药用真菌以及该真菌的栽培技术，具体地说，本发明涉及一种墨汁鬼伞菌种以及所述墨汁鬼伞的栽培方法。
背景技术
墨汁鬼伞(Coprinus atramentarius(Bull.)Fr.)，又名鬼盖、鬼伞、鬼屋、鬼菌或朝生地盖，为真菌类担子菌纲伞菌目伞菌科鬼伞属。墨汁鬼伞的子实体可以入药，中医认为该菌性寒味甘，有益肠胃、理气化痰、解毒消肿等功效，其粉末用醋调和后敷于患处，可治疗无名肿痛、肿毒和疮疽[杨尚光.药用真菌西安：陕西人民出版社.1986.54～55]。
墨汁鬼伞在河北、山西、江苏、台湾、四川、青海和甘肃等有分布，一般在春秋两季在果园、树林、草地、粪堆或路边出现，但因发生期短而被人们忽视。
目前各地有关墨汁鬼伞的研究都还停留在实验室阶段，一直没有分离出适合规模生产的菌种，这可能是因为现有墨汁鬼伞菌种对营养物质和环境条件要求较高所致。另外，在实验室阶段用于现有墨汁鬼伞菌种的母种、原种或子实体的培养基成分复杂，而且有的成分较为昂贵，也不适用于现有墨汁鬼伞菌种的规模生产。为此，需要分离出适合规模生产的墨汁鬼伞菌种，而且还需要为这样的墨汁鬼伞菌种建立起规模生产的培养基体系乃至整个方法体系。
发明内容
为了解决上述的一个或多个问题，发明人对分离自北京怀柔枯死腐烂柳木上的野生墨汁鬼伞菌种进行人工驯化和选育，得到长势和产量优良的墨汁鬼伞菌株N-1。发明人对用于培养所述墨汁鬼伞菌种的母种的培养基(简称母种培养基)、用于培养原种的培养基(简称原种培养基)、用于种植栽培种的培养基(简称为栽培种培养基)及用于栽培菌袋的培养基(菌袋培养基)的组分进行筛选，并对各培养基的组分含量和培养基的pH进行优化，最终得到了最有利于所述墨汁鬼伞菌种生长的培养体系。
发明人还对培养条件(例如温度等)进行优化，建立了一套完整的用于栽培所述墨汁鬼伞菌种的方法体系。本发明是通过如下技术方案来实现的。
1、一种用于培养墨汁鬼伞的母种培养基，其中，所述母种培养基包含1)PDA培养基和2)玉米粉。
2、如技术方案1所述的母种培养基，其中，以所述母种培养基的总重量计，所述玉米粉的含量为3重量％～8重量％；优选的是，所述母种培养基的pH值为9～10；更优选的是，所述玉米粉的含量为5重量％。
3、一种通过技术方案1或2的母种培养基培养的一种墨汁鬼伞。
4、一种用于培养墨汁鬼伞的原种和/或栽培种的培养基，其中，所述培养基包含1)麦粒、2)玉米粉、3)碳酸钙和4)石灰；优选的是，以所述培养基的总量计，所述麦粒的含量为88重量％～93重量％，所述玉米粉的含量为3重量％～7重量％，所述碳酸钙的含量为0.9重量％～1.1重量％；所述石灰的含量为3重量％～4重量％。
5、一种用于培养墨汁鬼伞的原种和/或栽培种的培养基，其中，所述培养基包含1)木屑或棉籽壳、2)玉米粉、3)麸皮和4)石灰；优选的是，以所述培养基的总量计，所述木屑或棉籽壳的含量为65重量％～80重量％，所述玉米粉的含量为3重量％～7重量％，所述麸皮的含量10重量％～25重量％，所述石灰的含量为3重量％～5重量％。
6、一种用于墨汁鬼伞的栽培袋培养的菌袋培养基，其中，所述菌袋培养基包含培养基料和水，所述培养基料包含1)木屑、2)玉米粉、3)麸皮和4)石灰；优选的是，以所述培养基料的总量计，所述木屑的含量为65重量％～80重量％，所述玉米粉的含量为5重量％～10重量％，所述麸皮的含量为10重量％～20重量％，所述石灰的含量为3重量％～5 重量％，所述培养基料和水的重量比为1∶1至1∶1.1。
7、一种栽培墨汁鬼伞的方法，所述方法包括如下步骤：
1)母种的培养：在20℃～25℃将墨汁鬼伞母种在装有母种培养基的培养容器中培养，获得墨汁鬼伞母种；
2)原种培养：在20℃～25℃将所获得的墨汁鬼伞母种接种于装有原种培养基的培养容器中并培养，获得墨汁鬼伞原种；
3)栽培种培养：在20℃～25℃将所获得的墨汁鬼伞原种在装有栽培种培养基的培养容器中培养，获得墨汁鬼伞栽培种；
4)栽培袋培养：在20℃～25℃将所获得的墨汁鬼伞栽培种在装有菌袋培养基的培养袋中培养，然后脱袋；
5)出菇栽培：将脱袋后的墨汁鬼伞码放到菇畦中，然后覆土，并将地温保持在8℃～20℃的范围内进行出菇栽培；
和
6)子实体收获：在单菇重量达到25g～35g时采收子实体。
8、如技术方案7所述的方法，其中，所述母种培养基为技术方案1或2所述的母种培养基；所述原种培养基和栽培种培养基为技术方案4或5所述的培养基；所述菌袋培养基为技术方案6所述的菌袋培养基。
9、如技术方案7或8所述的方法，其中，在出菇栽培时，将菇畦做成20cm～30cm深，宽90cm～110cm，在菇畦底撒石灰，将脱袋后的墨汁鬼伞按2cm～3cm的间隔码放，并用潮湿沙壤土填满其中的间隙，浇透水，再用沙土填埋至高出菌棒表面2cm～3cm，然后用麦草覆上。
10、如技术方案7～8任一项所述的方法，其中，所述方法还包括在采收头潮子实体后养菌12天～18天，再浇水，以出下一潮菇；在8℃～25℃的环境温度下采收子实体。
本发明整体考察了不同阶段所用的培养基的组成、各培养基的组分含量和各培养基的pH值，以及培养阶段和出菇阶段的温度等因素对所述墨汁鬼伞菌种生长的影响和各因素彼此之间的相关性，建立起适用于所述墨汁鬼伞栽培的培养基体系乃至一整套用于所述墨汁鬼伞栽培的方法体系。本发明的培养基体系具有配方简单和操作性强等优点，可以使所述墨汁鬼伞菌种的数量大为增加，菌丝能够从初生菌丝发育到次生菌丝，并且菌丝分解基质的能力也增强，生长加快，菌丝粗壮，从而能够得到高产优质的子实体。采用本发明的方法，可以提高所述墨汁鬼伞菌种的环境适应性、母种繁殖效率、原种及栽培种营养吸收效率，提高所述墨汁鬼伞的商品性，实现高产优质的墨汁鬼伞的规模化生产。
与保藏有关的信息
保藏日期：2010年1月12日；
保藏单位全称：中国普通微生物菌种保藏管理中心
保藏单位简称CGMCC；
保藏单位地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，邮编：100101；
保藏编号：CGMCC No.3578。
具体实施方式
为了有助于理解本发明，下文将具体描述本发明的某些优选的实施方式。然而应当理解的是，本发明并不限于这些优选的实施方式。本领域技术人员在阅读本申请文件之后一般能够想到的改进方案也应处在本申请要求保护的技术方案范围之内。
为了获得适合规模生产的墨汁鬼伞菌种，本发明人经过长期调查研究，终于从北京怀柔枯死腐烂的柳木上分离到一种新适合规模生产的墨汁鬼伞(Coprinus atramentarius(Bull.)Fr.)菌种，保藏单位全称为中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏单位简称为CGMCC，保藏单位地址为中国北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，邮编为100101，保藏日期为2010年1月12日，保藏编号为CGMCC No.3578。
对于所述墨汁鬼伞菌种，本发明首先采集新鲜的所述墨汁鬼伞菌种的子实体，然后用手术刀刮去表面泥土，用75％的酒精棉球消毒子实体的菌盖和菌柄，用手将子实体一撕为二，用无菌操作法在菌盖与菌柄交界处取黄豆大小的组织块，分别接种于母种培养基中。
经过对母种培养基的组分和含量进行试验，最后确定了适合用于培养墨汁鬼伞母种的母种培养基。
所述母种培养基包含PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)和玉米粉。
本发明对所述母种培养基的配制方法没有特别的限制，可以在PDA培养基的基础上添加玉米粉来获得。
PDA培养基是分离菌物和细菌的常用培养基，可以自行制备。所制得的PDA培养基一般含有20重量％的马铃薯、20重量％的葡萄糖和20重量％的琼脂。但是，其中的葡萄糖可以在1重量％～2重量％范围内变化，琼脂可以在1.7重量％～2重量％范围内变化。
以所述母种培养基的总重量计，所述玉米粉的含量为3重量％至8重量％，例如可以为3重量％、4重量％、5重量％、6重量％、7重量％或8重量％，更优选的是5重量％。
另外，所述母种培养基的pH值可以为6～10，但是更优选为9～10。因为在pH值小于9时，例如为6～8时，尽管菌丝生长健壮，但是生长速度偏慢；如果pH值超过10，则菌株容易老化。
在利用母种繁殖原种和将原种扩繁为栽培种时，本发明人对培养基的组分进行了筛选和不同组分的组合试验，最后建立了两套适合用于栽培墨汁鬼伞原种的培养基配方，并且这两套培养基也同样适合于墨汁鬼伞栽培种的栽培。
第一套培养基(下文简称为第一培养基)包含麦粒、玉米粉和碳酸钙。其中，麦粒主要作用是提供碳源和氮源，玉米粉的作用如上所述，碳酸钙和石灰作为pH值缓冲物质，用以中和菌体新陈代谢所产生的有机酸，防止基质pH值降低，另外，碳酸钙的主要作用是提供矿物质。
优选的是，所述麦粒的含量为89重量％～94重量％，例如可以为88重量％、89重量％、90重量％、91重量％、92重量％或93重量％，更优选的是92重量％。如果含量过低，则可能使培养基碳源和氮源不足，易引起菌种的过早衰老和自溶，且菌丝生长过于缓慢，对菌种培养不利，麦粒不能充分发挥支持墨汁鬼伞生长的功能，影响其生长；如果含量过高，则可能使墨汁鬼伞必需的玉米粉的含量相对较低，来自玉米粉的碳 源供应不足，菌丝非常稀疏，影响生长。
另外优选的是，所述玉米粉的含量为3重量％～7重量％，例如可以为3重量％、4重量％、5重量％、6重量％或7重量％，更优选的是5重量％。如果含量过低，则菌丝生长不够健壮，易引起菌种的过早衰老和自溶；如果含量过高，菌丝虽然生长旺盛，但分布斑驳，气生菌丝多，中部浓厚，四周逐渐稀薄。
另外优选的是，所述碳酸钙的含量为0.9重量％～1.1重量％，例如可以为0.9重量％、1.0重量％或1.1重量％。另外优选的是，所述石灰含量为3重量％～4重量％，例如可以为3重量％、3.5重量％或4重量％。如果所述碳酸钙和石灰的含量过低，无法维持适合菌丝生长的酸碱度环境，且不能提供足够的矿物质；如果含量过高，则可能使培养基pH值过高，使酶的活性受到抑制，从而影响营养物质的吸收，菌丝生长速度明显降低。
至于pH值，其范围如同针对母种培养基进行说明时所述，并且同样更优选为9～10。
第二套培养基(下文简称为第二培养基)包含木屑(或棉籽壳)、玉米粉、麸皮和石灰。其中，木屑的主要作用是作为纤维素的来源；玉米粉的作用如上所述，麸皮的主要作用是提供氮源；石灰作为pH值缓冲物质，用以中和菌体新陈代谢所产生的有机酸，防止基质pH值的降低。
优选的是，所述木屑或棉籽壳的含量为65重量％～80重量％，例如可以为65重量％、70重量％、75重量％或80重量％，更优选的是75重量％。如果含量过低，则可能使培养基碳源不足，易引起菌种的过早衰老和自溶，木屑不能充分发挥支持墨汁鬼伞生长的功能，影响其生长；如果含量过高，则可能使墨汁鬼伞必需的玉米粉相对含量不足，导致来自玉米粉的碳源供应不足，菌丝生长稀疏。
另外优选的是，所述玉米粉的含量为3重量％～7重量％，例如可以为3重量％、4重量％、5重量％、6重量％或7重量％，更优选的是5重量％。如果含量过低，则菌丝生长不够健壮，易引起菌种的过早衰老和自溶；如果含量过高，菌丝虽然生长旺盛，但分布斑驳，气生菌丝多，中部浓厚，四周逐渐稀薄。
另外优选的是，所述麸皮的含量为10重量％～25重量％，例如可以 为10重量％、15重量％、20重量％或25重量％，更优选的是15重量％。如果含量过低，则可能使培养基不能提供足够氮源，会引起菌丝生长过于缓慢，对菌种培养不利，如果含量过高，则可能使碳氮比失衡，则会引起菌丝过于旺盛生长，对菌种培养不利。
所述石灰的含量为3重量％～5重量％，例如可以为3重量％、4重量％或5重量％。如果含量过低，则不能起到缓冲作用，无法维持适合菌丝生长的酸碱度环境；如果含量过高，则可能使培养基pH值过高，使酶的活性受到抑制，从而影响营养物质的吸收，菌丝生长速度明显降低。
另外，本发明人发现，适合墨汁鬼伞菌袋栽培的培养基(下文简称为菌袋培养基)组分为木屑或棉籽壳、玉米粉、麸皮和石灰的组合。其中，所述木屑或棉籽壳的主要作用是提供纤维素。更优选的是，所述木屑为柳木屑，至于柳木屑适合作为纤维素来源的原因目前还不太清楚，但是考虑到本墨汁鬼伞从枯死腐烂的柳木上分离得到的事实，也许本墨汁鬼伞对柳木屑更为适应。至于其他组分例如玉米粉、麸皮和石灰，其主要作用如上所述。
优选的是，所述木屑的含量为65重量％～80重量％，例如可以为65重量％、70重量％或80重量％，更优选的是75重量％。如果含量过低，则可能使培养基碳源不足，易引起菌种的过早衰老和自溶，木屑不能充分发挥墨汁鬼伞生长的支持功能，影响其生长；如果含量过高，则可能使墨汁鬼伞必须的玉米粉相对不足，来自玉米粉的碳源供应不足，菌丝生长稀疏。
另外优选的是，所述玉米粉的含量为5重量％～10重量％，例如可以为5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％或10重量％，更优选的是5重量％。如果含量过低，则菌丝生长不够健壮，易引起菌种的过早衰老和自溶；如果含量过高，菌丝虽然生长旺盛，但分布斑驳，气生菌丝多，中部浓厚，四周逐渐稀薄。
另外优选的是，所述麸皮的含量为10重量％～20重量％，例如可以为10重量％、15重量％或20重量％，更优选的是15重量％。如果含量过低，则可能使培养基不能提供足够氮源，会引起菌丝生长过于缓慢，对菌种培养不利，如果含量过高，则可能使碳氮比失衡，则会引起菌丝过于旺盛生长，对菌种培养不利。
另外优选的是，所述石灰的含量为3重量％～5重量％，例如可以为3重量％、4重量％或5重量％。如果含量过低，则不能起到缓冲作用，无法维持适合菌丝生长的酸碱度环境；如果含量过高，则可能使培养基pH值过高，使酶的活性受到抑制，从而影响营养物质的吸收，菌丝生长速度明显降低。
另外，在配制菌袋培养基时，所述培养基的固体组分(下文有时简称为培养基料)和水的重量比优选为1∶1至1∶1.1，例如可以为1∶1或1∶1.1，更优选的为1∶1。如果所述重量比过大，则含水量大而影响基质的通气性，从而影响菌丝生长，如果所述重量比过小，则含水量少，菌丝不能健壮生长。具体还应当参考基质本身的干燥程度。
所述菌袋培养基的pH值如上所述，同样更优选为9～10。
另外，本发明还提供了一种栽培墨汁鬼伞的方法，所述方法包括如下步骤：
1)母种的培养：在20℃～25℃将墨汁鬼伞母种在装有母种培养基的培养容器(例如试管或培养皿)中培养，获得墨汁鬼伞母种；
2)原种培养：在20℃～25℃将所获得的墨汁鬼伞母种接种于装有原种培养基的培养容器中并培养，获得墨汁鬼伞原种；
3)栽培种培养：在20℃～25℃将所获得的墨汁鬼伞原种在装有栽培种培养基的培养容器中培养，获得墨汁鬼伞栽培种；
4)栽培袋培养：在20℃～25℃将所获得的墨汁鬼伞栽培种在装有菌袋培养基的培养袋中培养，然后脱袋；
5)出菇栽培：将脱袋后的墨汁鬼伞码放到菇畦中，然后覆土，并将地温保持在8℃～20℃的范围内进行出菇栽培；
6)子实体收获：在单菇重量达到25g～35g时采收子实体。
优选的是，所述母种培养基采用如上所述的本发明的母种培养基；所述原种培养基和栽培种培养基采用如上所述的第一培养基或第二培养基；所述菌袋培养基采用如上所述的菌袋培养基。
经过试验观察，本发明的墨汁鬼伞在33℃时生长完全停止，在29℃时生长非常缓慢。尽管在13℃～29℃的温度范围内，本发明的墨汁鬼伞均能够生长，但是当温度低于20℃或高于25℃时，生长明显偏慢，因此本发明的墨汁鬼伞的适宜温度为20℃～25℃，并且最适宜的温度为25℃。 因此，所述方法的第1)～4)步骤中的温度优选为20℃～25℃，例如为20℃、21℃、22℃、23℃、24℃或25℃，最优选为25℃。
在出菇栽培时，优选将地温保持在8℃～20℃，例如可以为8℃、10℃、12℃、14℃、16℃、18℃或20℃。如果地温低于8℃，可能会导致墨汁鬼伞生长偏慢；如果地温高于20℃，则可能会加快墨汁鬼伞的老化速度。
另外，在出菇栽培时，可以例如将菇畦做成20cm～30cm深，宽90cm～110cm，将脱袋后的墨汁鬼伞按2cm～3cm的间隔码放，并用潮湿沙壤土填满其中的间隙，浇透水，再用沙土填埋至高出菌棒表面2cm～3cm，然后用麦草覆上。这样的方法步骤简单，操作性强，而且能够保证子实体的高产优质。
为了出下一潮菇，可以在采收头潮子实体后养菌12天～18天，例如养菌12天、14天、16天或18天，然后再浇水，以出下一潮菇。
另外，在采收子实体时，环境温度优选保持在8℃～25℃的温度范围内，这样可以保持子实体的商品性。
顺便提及的是，除非另有说明，否则本文所述及的数值范围包括端值以及两端值(即上限和下限)之间的任意值。
下文将通过实施例来对本发明进行进一步的说明，不过这些实施例仅为说明目的，不应解释为对本发明范围的限制。
实施例
实施例1墨汁鬼伞菌种的分离和培养
2008年5月，从北京怀柔腐朽柳树附近采集到新鲜墨汁鬼伞的子实体。用75％的酒精棉球沾去表面泥土，用手将子实体一分为二，在无菌条件下在菌盖与菌柄交界处取米粒大小的组织块，放入PDA综合培养基试管中。菌丝萌发后，转接至同样的空白试管，作为试管菌种保存。
在培养过程中，发现PDA综合培养基对菌种进行培养，菌丝生长迅速，长满培养皿需要6天，但是菌丝稀疏，菌丝密度较低。连续转管2次后，菌丝变得健壮，满管时间变长。
实施例2碳源的确定
本发明人对用于母种培养的母种培养基的碳源进行试验，以期找到更适合本发明的墨汁鬼伞母种培养的母种培养基。
本试验采用的培养基的配方为蛋白胨5g、KH2PO41g、MgSO40.5g、维生素B10.01重量％、琼脂20g，水1000mL，pH值自然。然后配制碳源测定培养基8份，每份250ml，其中1份不加任何材料作为对照，在另外7份中分别添加2％的蔗糖、2％的葡萄糖、2％的玉米淀粉、2％的葡萄糖+2％玉米淀粉、2％的乳糖、2％的麦芽糖和2％的果糖，共计7个处理。每个处理灭菌后分装10个培养皿(直径9cm)，将试管菌种活化并接种于PDA培养基(马铃薯含量为20重量％、葡萄糖和琼脂的含量均为2重量％，以下实施例的PDA培养基均与此相同)的平板中，然后采用灭菌的吸头打孔，取0.5cm菌丝块分别接入制备好的培养皿中。25℃的恒温箱培养14d(天)，以单个菌落直径作为菌丝生长量的指标。取其菌落直径的平均值，比较菌种的生长情况。
经观察和记录，发现在加有葡萄糖+玉米淀粉组合的基础培养基中，菌丝生长最佳(日均生长速度为1.3cm，表中未示出)，比单一葡萄糖配方或单一玉米淀粉碳源培养基生长好，其菌丝洁白密实，生长粗壮有力，边缘整齐，长势最旺；其次是加有果糖碳源的基础培养基；加有蔗糖和麦芽糖碳源的基础培养基不适合墨汁鬼伞菌种的生长，其菌丝虽然生长迅速，但是菌丝稀疏(见表1)。
表1不同碳源对墨汁鬼伞菌丝生长的影响
| 培养基材料 | 菌丝形态 | 满皿所需天数 | 菌丝密度 |
| 基础培养基(对照) | 菌丝极稀疏，生长迅速 | 12天 | + |
| 乳糖 | 菌丝高高的***不向四周生长， 长速极慢 | 到第十四天菌丝长 到2.1cm | ++++ |
| 葡萄糖 | 菌丝分布斑驳，长势一般 | 16天 | ++ |
| 蔗糖 | 菌丝稀疏，生长迅速 | 12天 | + |
| 麦芽糖 | 菌丝不茂盛，不浓厚，菌丝伸长 速度快 | 15大 | ++ |
| 果糖 | 菌丝洁白浓密，长速一般 | 16天 | +++ |
| 玉米淀粉 | 菌丝生长旺盛，分布斑驳，气生 菌丝多，中部浓厚，四周逐渐稀 薄 | 16天 | ++ |
| 葡萄糖+玉米淀粉 | 菌丝洁白密实，生长粗壮有力， 边缘整齐，长势最旺 | 14天 | +++ |
注：++++表示菌丝非常浓密；+++表示菌丝浓密；++表示菌丝较浓密；+表示菌 丝稀疏(下同)。另外，小写字母表示5％显著水平，大写字母表示1％极显著水平。
实施例3pH值的确定
根据需要用1mol/L NaOH或1mol/L HC1将以葡萄糖+玉米淀粉作为碳源的基础培养基的pH调节为如表2所示梯度，分装在三角瓶内，灭菌，超净工作台内倒平皿，每个处理6个重复，接种墨汁鬼伞，然后置于25℃恒温培养，4天后开始每隔一天测量菌落的直径，以此作为菌丝体生长量的指标；记录满皿天数(即长满培养皿所需的天数)并观察菌丝的长势，计算菌丝的日均生长速度。
经观察和记录，发现墨汁鬼伞菌丝在接种3～4天后开始萌发，第6～10天菌丝生长速度较快，不同pH条件下菌丝生长的速度差异很大。pH 5时，菌丝浓密但生长缓慢；pH 6～8范围内菌丝体生长较快，生长速度之间无明显差异，菌丝长势都更为浓白、健壮；pH 9～pH 10生长最快，菌丝长满培养皿时间较短，14天时菌丝长势浓密，满皿(见表2)。
表2不同pH对墨汁鬼伞菌丝体生长的影响
实施例4培养温度的确定
本发明人对培养温度进行实验，采用如实施例2所筛选的最佳碳源培养基，并将该培养基的pH调节为9.5，然后将其分装在三角瓶内，灭菌，超净工作台内倒平皿，每个处理6个重复，温度如表3所示，4天后开始每隔3天测量菌落的直径，记录并计算菌丝长度和满皿天数，观察菌丝长势，计算其日均生长速度。
表3不同温度对墨汁鬼伞菌丝体生长的影响
如表3所示，墨汁鬼伞菌丝体在不同温度下生长情况差异较大。在13℃时菌丝7天才可萌发，日均长速缓慢，菌丝稀薄，气生菌丝较多。17℃下的菌丝生长较均匀，有气生菌丝，长势比较稀薄。21℃、25℃下菌丝长势旺盛浓白。29℃下菌丝长势较浓密，但在10天左右时生长显著减慢，15天时基本停止生长，且极易老化。而33℃的菌丝仅在原接种位置生长，不向外扩散生长。试验结果表明，不同温度下菌丝体生长差异极显著，17℃～25℃均适宜墨汁鬼伞菌丝体生长，最适生长温度为25℃。13℃下菌丝缓慢生长，29℃时菌丝生长极慢，极易老化，33℃菌丝完全停止生长。
实施例5母种培养基的确定
由实施例2得出葡萄糖+玉米淀粉作为碳源时，墨汁鬼伞的菌丝生长最佳。为了规模生产墨汁鬼伞母种，同时简化培养基配方，发明人在PDA培养基为基础加上玉米粉来配制母种培养基，即以玉米粉浸出液煮制PDA来配制，其中玉米粉含量如表4所示，并使pH为9.5。将所制得的母种培养基分装在三角瓶内，灭菌，超净工作台内倒平皿，每个处理6个重复，接种墨汁鬼伞，然后置于25℃恒温培养，观察其菌丝长势，记录满皿天数。
表4母种培养基中不同玉米粉含量对墨汁鬼伞母种菌丝生长的影响
| 玉米粉含量(重量％) | 1 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 10 |
| 满皿时间(天) | 16 | 16 | 14 | 15 | 15 | 14 | ||
| 菌丝长势 | ++ | ++ | +++ | +++ | ++ | ++ |
如表4所示，母种培养基中各组分含量尤其是玉米粉含量对墨汁鬼伞母种菌丝生长情况有较大的影响。在PDA培养基的基础上，当玉米粉 含量为1重量％时，发现菌种过早衰老和自溶；而当该含量大于10重量％时，发现菌丝虽然生长旺盛，但分布斑驳，气生菌丝多，中部浓厚，四周逐渐稀薄。在玉米粉含量为3重量％～8重量％时，满瓶天数为14～16天，长势在“++”级以上。
实施例6用于原种培养的培养基的确定
为了找到适合的原种和栽培种培养基，本发明在麦粒培养基和木屑培养基的基础上加以改进，其中加入了玉米粉，并对所加入的玉米粉的含量进行了优化筛选。
将麦粒浸泡24小时，然后煮沸至无白心，用石灰水浸泡后使用，加入玉米粉和碳酸钙，其中按照表7所示的各组分含量进行配制，并使pH为9.5，经高压灭菌后用以作为原种培养基(此处称为第一培养基)。取已长满且菌丝较茂密的母种斜面，用无菌操作方法，取一小块分别接种于经灭菌后的第一培养基上，每种培养基接5瓶，每瓶容积为750ml，然后放入25℃左右恒温箱中培养，比较菌丝的生长情况，记录满瓶天数，结果见表5。
表5第一培养基中不同组分组合对墨汁鬼伞原种菌丝生长的影响
另外，以木屑、玉米粉、麸皮和石灰为组分，按如表7所示配制用于原种培养的培养基(下文称为第二培养基)，混匀，pH为9.5，经高压灭菌后备用。取已长满且菌丝较茂密的母种斜面，用无菌操作方法，取一小块分别接种于经灭菌后的第二培养基上，每种培养基接5瓶，然后放入25℃左右恒温箱中培养，比较菌丝的生长情况，记录满瓶天数，结果见表6。
表6第二培养基中不同组分组合对墨汁鬼伞原种菌丝生长的影响
经试验发现，上述第一培养基和第二培养基均可以用于墨汁鬼伞栽培种的培养(具体数据未示出)。另外，在以棉籽壳代替木屑进行实施例6的上述过程，得到了类似的结果。
实施例7菌袋培养基的确定
以柳木屑、玉米粉、麸皮和石灰作为组分组合按表7所示含量配制培养基料，并将该培养基料与水按1∶1的重量比制备菌袋培养基，经高压灭菌后备用。取已长满且菌丝较茂密的原种斜面，用无菌操作方法，取一小块分别接种于经灭菌后的栽培种培养基上，每种培养基接5袋，然后放入25℃畦内栽培，比较菌丝的生长情况，记录满袋天数，结果如表7所示。
表7菌袋培养基中不同组分含量组合对墨汁鬼伞栽培种菌丝生长的影响
另外，采用实施例8.3所述培养基料与水按下表所示的重量比配置培养基，经高压灭菌后备用。取已长满且菌丝较茂密的原种斜面，用无菌操作方法，取一小块分别接种于经灭菌后的栽培种培养基上，每种培养基接5袋，然后放入25℃畦内栽培，记录菌丝形态，满袋天数和菌丝密度，结果如下表所示。
另外，以棉籽壳代替木屑进行的重复实施例7的上述过程，得到了类似的结果。
表8培养基料与水的重量比对墨汁鬼伞栽培种菌丝的影响
| 培养基与水比例 | 满袋天数 | 菌丝密度 |
| 1∶1 | 40 | +++ |
| 1∶1.1 | 45 | +++ |
实施例8出菇栽培
在出菇栽培时，如表10所示将地温保持在8℃～20℃的温度范围内，记录出菇时间，单菇重量，结果如下表所示。
表9出菇栽培中地温对墨汁鬼伞出菇的影响
| 出菇地温(℃) | 出菇时间(天) | 单菇重量(g) |
| 8～10 | 60 | 25 |
| 10～12 | 58 | 26 |
| 12～14 | 55 | 28 |
| 14～16 | 50 | 30 |
| 16～18 | 35 | 31 |
| 18～20 | 32 | 30 |
由以上结果可以看出，在例如北京等同纬度地区，在温度较低的3～5月、或9～11月，墨汁鬼伞可以在露地或林地种植，在冬天时可以在温室种植。
实施例9子实体收获
为了出下一潮菇，可以在采收子实体后，先浇透水，养菌一段时间，以出下一潮菇，记录单菇重量，并测量总产量，结果如下表所示。
表10养菌时间对墨汁鬼伞子实体的单菇重量和产量的影响
| 养菌天数(天) | 单菇重量(g) | 产量(kg/m2) |
| 12 | 25 | 5.1 |
| 14 | 30 | 6.0 |
| 16 | 31 | 6.5 |
| 18 | 35 | 7.0 |
Claims (9)
1.一种用于培养墨汁鬼伞的原种和/或栽培种的培养基，其中，所述培养基包含1)麦粒、2)玉米粉、3)碳酸钙和4)石灰；以所述培养基的总量计，所述麦粒的含量为88重量％～93重量％，所述玉米粉的含量为3重量％～7重量％，所述碳酸钙的含量为0.9重量％～1.1重量％；所述石灰的含量为3重量％～4重量％。
2.一种用于培养墨汁鬼伞的原种和/或栽培种的培养基，其中，所述培养基包含1)木屑或棉籽壳、2)玉米粉、3)麸皮和4)石灰；以所述培养基的总量计，所述木屑或棉籽壳的含量为65重量％～80重量％，所述玉米粉的含量为3重量％～7重量％，所述麸皮的含量10重量％～25重量％，所述石灰的含量为3重量％～5重量％。
3.一种用于墨汁鬼伞的栽培袋培养的菌袋培养基，其中，所述菌袋培养基包含培养基料和水，所述培养基料包含1)木屑、2)玉米粉、3)麸皮和4)石灰；以所述培养基料的总量计，所述木屑的含量为65重量％～80重量％，所述玉米粉的含量为5重量％～10重量％，所述麸皮的含量为10重量％～20重量％，所述石灰的含量为3重量％～5重量％，所述培养基料和水的重量比为1∶1至1∶1.1。
4.一种栽培墨汁鬼伞的方法，所述方法包括如下步骤：
1)母种的培养：在20℃～25℃将墨汁鬼伞母种在装有母种培养基的培养容器中培养，获得墨汁鬼伞母种；
2)原种培养：在20℃～25℃将所获得的墨汁鬼伞母种接种于装有原种培养基的培养容器中并培养，获得墨汁鬼伞原种；
3)栽培种培养：在20℃～25℃将所获得的墨汁鬼伞原种在装有栽培种培养基的培养容器中培养，获得墨汁鬼伞栽培种；
4)栽培袋培养：在20℃～25℃将所获得的墨汁鬼伞栽培种在装有菌袋培养基的培养袋中培养，然后脱袋；
5)出菇栽培：将脱袋后的墨汁鬼伞码放到菇畦中，然后覆土，并将地温保持在8℃～20℃的范围内进行出菇栽培；和
6)子实体收获：在单菇重量达到25g～35g时采收子实体。
5.如权利要求4所述的方法，其中，所述母种培养基包含1)PDA培养基和2)玉米粉；所述原种培养基和栽培种培养基为权利要求1或2所述的培养基；所述菌袋培养基为权利要求3所述的菌袋培养基。
6.如权利要求5所述的方法，其中，以所述母种培养基的总重量计，所述玉米粉的含量为3重量％～8重量％；所述母种培养基的pH值为9～10。
7.如权利要求6所述的方法，其中，以所述母种培养基的总重量计，所述玉米粉的含量为5重量％。
8.如权利要求4至7中任一项所述的方法，其中，在出菇栽培时，将菇畦做成20cm～30cm深，宽90cm～110cm，在菇畦底撒石灰，将脱袋后的墨汁鬼伞按2cm～3cm的间隔码放，并用潮湿沙壤土填满其中的间隙，浇透水，再用沙土填埋至高出菌棒表面2cm～3cm，然后用麦草覆上。
9.如权利要求4至7中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括在采收头潮子实体后养菌12天～18天，再浇水，以出下一潮菇；在8℃～25℃的环境温度下采收子实体。
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2010
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 郝册等.PH值和温度对墨汁鬼伞菌丝体生长的影响.《中国食用菌》.2010,第29卷(第1期),第35-36，51页. * |
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