CN101845086A - 水稻叶形调控基因nrl1及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种水稻叶形调控基因NRL1编码的蛋白质，其具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。本发明还公开了编码上述蛋白质的基因，其具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。该水稻叶形调控基因NRL1能用于改良水稻叶宽或卷曲度。

Description

水稻叶形调控基因NRL1及其用途

技术领域

本发明属于植物基因工程领域。具体的说，本发明涉及一种利用图位克隆技术克隆水稻NRL1(NARROW AND ROLLED LEAF 1)基因，以及利用转基因互补实验鉴定该基因的功能；同时还涉及利用该基因物对水稻叶片大小及卷曲度进行叶形的调控，用于改良水稻品种以提高产量。

背景技术

叶片是植物进行光合作用的主要营养器官，也是理想株型的重要组成部分。当前高产育种中，叶倾角的大小特别是剑叶倾角的大小对水稻光合生产量有重大的影响，而叶片适当的卷曲或凹凸可造成叶片挺直，减小叶倾角，提高群体的透光率、增加通风度，在中后期的充足光照下更有利于营养物质向穗部的输送，从而最终提高产量。

叶片起始于顶端分生组织外周区的基细胞，这些细胞不断的分化形成叶原基，在经过近远轴、中侧轴和基顶轴三个轴向的发育后形成完整叶。其中叶片沿着靠近茎和远离茎的方向分化成基顶轴，而沿着主脉和远离主脉方向的轴则为中侧轴，近远轴则是背面和腹面的分化。这三个轴向的极性正确分化是形成平展叶的基础，在此过程中发育的异常将直接影响到叶片的形态建成。叶片在近远轴的极性发生反转可能导致叶片正向和反向的卷曲、甚至呈现针状、棒状、辐射状。叶片在基顶轴的发育异常将使叶片出现靠近茎的结构，如叶耳、叶舌、叶鞘与远端叶片的转化。而叶片在中侧轴的异常能够使叶鞘变窄，甚至出现无叶。

目前，国内外科学家们已经对水稻叶片的性状进行了大量研究，但在遗传控制及分子水平机制的研究相对较少，尤其对叶片形态建成的分子机理研究还很不充分。现已研究表明水稻中存在多对控制水稻叶片形状的基因，卷叶性状通常由1对或几对基因控制。虽然迄今为止已报道的水稻卷叶主基因多达12个，但其中3个基因被精细定位，而真正克隆到的卷叶调控相关的基因仅有2个。基因序列的预测并不一定能获得准确的基因序列(当然也有预测是准确的)；该基因到底是起什么作用，虽然可以通过软件和同源分析推测该基因的功能，但无法实际证明，并且该基因不一定就是在这个方面起作用。因此，必须要通过实验获得的基因，并确定该基因编码序列及其产物，同时证明了该基因的用途，在本行业来说，才是真正获得该基因。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从水稻窄卷叶突变体中克隆的新基因NRL1，该基因编码一个纤维素合成类似蛋白，主要通过减少叶脉的小脉总数和改变泡状细胞的大小来调控叶片的宽度和卷曲度。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种水稻叶形调控基因NRL1编码的蛋白质，该蛋白质为SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

作为本发明的水稻叶形调控基因NRL1编码的蛋白质的改进：氨基酸序列还包括在SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列中添加、取代、***或缺失一个或多个氨基酸或其他物种的同源序列而生成的氨基酸序列或衍生物。

本发明还同时提供了编码上述蛋白质的基因，该基因为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

作为本发明的基因的改进：其核苷酸序列还包括在SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列中添加、取代，***或缺失一个或多个核苷酸而生成的突变体、等位基因或衍生物。

本发明还同时提供了含有上述基因的质粒。

本发明还同时提供了含有上述基因的植物表达载体。

本发明还同时提供了一种宿主细胞，该宿主细胞含有上述基因序列。

作为本发明的宿主细胞的改进：该细胞为大肠杆菌细胞、农杆菌细胞或植物细胞。

本发明还同时提供了上述NRL1基因的用途：用于改良水稻叶宽或卷曲度。

作为本发明的NRL1基因的用途的改进：用具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的基因转化水稻细胞，再将转化后的水稻细胞培育成植株。

本发明的创作过程如下：首先获得了一个窄卷叶的突变水稻，由于造成水稻的突变可能是一个基因，也有可能是好几个基因突变造成的。所以我们通过将突变体与正常水稻杂交，看后代的分离来确定是一个基因还是多个基因。在确定是一个基因引起外观上的变化后，我们对该基因进行了分子定位，最后用互补载体，将正常基因的序列通过农杆菌转入到突变了的水稻中，在转基因水稻植株中，由于转入了一段正常的基因序列，该段序列就会发挥作用，从而使该基因的外观变得正常。以此来验证该基因所起的作用。

进一步具体说明：本发明的目的是提供一种从水稻突变体narrow and rolled leaf 1中克隆的新基因NRL1，如SEQ ID NO：1所示的DNA序列，也包括与SEQ ID NO：1所示的DNA序列至少有70％同源性的基因序列。本发明中的SEQ ID NO：2所示的蛋白质属于纤维素合成类似蛋白D4(OsCSLD4)，其中进行一个或几个替换，***或缺失所获得的功能类似物。另外，也包括在SEQ ID NO：1中添加、取代、***或缺失一个或多个核苷酸而生成的突变体、等位基因或衍生物，具有相同功能的序列也能达到本发明的目的。

本发明的另一个目的是提供一种用NRL1基因进行高效的植物转化的方法，具体地说，本发明提供了具有SEQ ID NO：1所示的序列的基因或基因部分片段的载体，其中，如图4所示的pCAMBIA1300-NRL1，该载体可以表达有上述核苷酸序列编码的多肽或其同源类似物。

本发明还提供了一种利用植物表达载体转化植物细胞影响水稻叶片宽度及卷曲的方法。具体地是利用植物表达载体转化植物细胞以影响农作物叶片形态。

实现本发明的具体技术步骤如下：

一、水稻窄卷叶突变体nrl1的分离和遗传分析：

本发明的水稻窄卷叶叶突变体nrl1-1来自日本晴的EMS(ethyl methane sulphonate)诱变，突变体与野生型水稻的正反交实验证明该突变体受隐性单基因控制，如图1所示。

二、图位克隆控制水稻叶形的NRL1基因：

1、NRL1基因的初步定位：

为了分离NRL1基因，本发明首先组建了定位群体，由nrl1-1与籼稻品种南京6号(NJ6)杂交组配成F₂定位群体，再通过图位克隆的方法，利用均匀分布于全基因组的分子标记对NRL1位点进行初步定位，将其初步定位在第12染色体，介于HRL9和HRHRL16之间，见图2。

2)、NRL1基因的精细定位：

通过对HRL9和HRL16两个标记之间的序列分析，发展新的分子标记将NRL1精确定位于AL845342的BAC上，介于分子标记HA39和HA40之间8.71kb范围之内(图3)，通过分析此区段开放阅读框(ORF)推测候选基因。

3)、NRL1基因的鉴定和功能分析：

通过转基因技术，结果表明本发明获得了使突变体恢复正常表型的转基因水稻(图5、6、7)，证明了本发明正确克隆了NRL1基因，氨基酸序列分析表明NRL1编码一个纤维素合成类似蛋白D4(CSLD4)。

综上所述，本发明利用窄卷叶的突变体，通过图位克隆技术首先克隆到了NRL1基因，该基因编码一个纤维素合成类似D蛋白(OsCSLD4)，并通过叶片的小脉数目和近轴面泡状细胞的大小来控制水稻叶片的宽度和卷曲度，同时还影响了植株的高度和籽粒的形态。

随着我国人口的不断增长、耕地面积持续减少形势下，高产育种一直是水稻研究的主题。叶片形态是水稻“理想株型”的重要组成部分，也是当前超高产水稻育种关注的重点。NRL1基因的克隆和应用，能够使稻株能够保持叶片挺直，改善植株的受光姿态，提高光能利用效率。因而，本发明能对叶形进行改良，最终能提高水稻产量。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1是水稻反卷横生叶nrl1与野生型材料的表型；

图2是NRL1基因在水稻第12染色体上的初步定位图；

图3是NRL1基因的精细定位图；

图4是pCAMBIA1300-NRL1载体图谱；

图5是功能互补实验T₀转基因水稻植株的表型图；

图6是nrl1与T₀转基因水稻植株的叶片表型图；

图7是nrl1与T₀转基因水稻植株的叶片横切面表型图。

具体实施方式

实施例1：

1、水稻材料：

本发明中的三个水稻(Oryza sativa L.)窄卷叶突变体nrl1(narrow and rolled leaf 1)均是通过EMS(Ethyl Methane Sulphonate)诱变获得。其中nrl1-1原始野生材料为粳稻品种日本晴(Nipponbare)。其等位突变体nrl1-2，nrl1-3分别为粳稻品种日本晴和武运粳7号。

2、分析和定位群体：

纯合的nrl1-1突变体和籼稻品种南京6号进行杂交，F₁代自交，得到F₂群体，并从中选出1138株nrl1-1突变个体作为定位群体。在分蘖期每株取1克左右的嫩叶，用来提取总DNA。

3、分子标记定位NRL1基因

采用水稻微量DNA的快速提取方法从水稻叶片中提取用于基因定位的基因组DNA。取大约0.2g水稻叶片，经液氮冷冻，在直径5cm的小研钵中磨成粉状，转移到1.5ml离心管里提取DNA，获得的DNA沉淀溶解于150μl超纯水中。每一个PCR反应用2μl DNA样品。

NRL1基因的初步定位：在nrl1-1与南京6号组合的F₂群体中选取193个隐性个体，组成的小群体进行连锁分析，根据公布的粳稻和籼稻创建的分子遗传图谱，选取近似均匀分布于各条染色体上的分子标记，利用MJResearch的PTC-200型梯度热循环仪进行PCR扩增，其中PCR扩增反应总体积为20μl，其中包括50mmol/L KCl，10mmol/L Tris-Cl(pH9.0)，1.5mmol/L MgCl2，200μmol/L dNTP，50-100ng的基因组DNA，1个单位的Taq聚合酶和0.1μmol/L引物，其余为去离子水。扩增程序为94℃预变性5min，进入循环扩增：94℃变性1min，各引物退火温度见表1，退火时间1min，72℃延伸1min，循环40次；72℃延伸10min。经5％琼脂糖凝胶电泳分离和溴化乙啶(EB)染色，检测PCR产物的多态性。最终将NRL1初步定位在第12号染色体HRL16和HRL9标记之间。

NRL1基因的精细定位：在nrl1-1与南京6号组合的F₂群体中共选取1138株隐性个体，在初定位的基础上继续设计分子标记，

最终将NRL1精确定位于AL845342的BAC上，位于分子标记HA39和HA40之间共8.71kb的范围之内。

初定位和精细定位的分子标记序列如表1所示。

表1、分子标记序列

标记名称	大小(bp)	前引物(5’-3’)	后引物(5’-3’)	退火温度
					T34912	238	GGAGTGGAAGACATCAGGGA	AGAAGGCTCGATTGTTGCAT	56.7-57.3
T3146	89	AGAGGAATTGTGAGAAGCCG	TGGTGTGGTGTGAGGGTGT	56.9-56.4
					HRL9	57	GACCAGAAGGAGGACATTG	GCATGTAGTTTCCTCGTCCT	55.3-54.2
HRL16	153	GGAGTGGAGCGAGCTAAAGT	AGTTTGGTGACTAAGGGCATA	56.3-54.4
					HRL32	193	TAGCAGACAAAACCCCAGAA	GCTCTTGGTTTTTTATGGGAT	55.8-55.8
HRL45	112	CCTCTTAAACACACCCGAA	CAATGGTTGAGATTCGGAGA	53.2-55.6
					HA10	112	TAGGAGACACCGCAAGAATG	TCTCTCTCCAATTCTTTCGG	56.0-54.1
HA13	217	GGTGACTTAAAAGCCAATGC	TCATCCGCATCATCAACTCA	55.2-57.6
					HA22	61	GTCATAGTGTTGTCTGTGTGT	ATGATCTCACCAACACTGAA	46.7-49.9
HA31	330	CTAAGCTGATTTGCCATCTGA	GTTGATGCTGATGCCTACCT	55.8-54.9
					HA33	127	CCCAAGGGTGCTACTCGTA	AGAGATGAGACACCGACACG	55.9-55.1
HA39	53	CTCCTTCTCTCAAACACCCA	GTCTCCGTAGGAACTTACACAC	54.8-53.3

标记名称	大小(bp)	前引物(5’-3’)	后引物(5’-3’)	退火温度
					HA40	81	GTCCAAAAAGTGCCGAAAATC	TTGACAGGATTTTCACTTTCG	59.1-55.5

4、基因预测和比较分析：

根据精细定位的结果，在8.71kb范围内根据Rice Automated Annotation System(http://RiceGAAS.dna.affrc.go.jp)的预测，发现在此区间内只有1个候选基因，根据两标记剩余的重组个体数及共分离标记，我们设计了该基因的测序引物(如表2所示)，采用PCR法分别从nrl1-1和野生型品种基因组中扩增出该候选基因进行测序分析。发现三个等位突变体在该个基因的DNA片段中，突均发生单碱基的替换。根据BAC克隆OSJNBa0027H05序列的基因注释信息(NCBI)，预测此基因编码一个纤维素合成类似蛋白D4(OsCSLD4)，该基因与其它物种的纤维素合成类似蛋白D家族的基因具有很高的同源性。

表2、测序引物序列

标记名称	大小(bp)	前引物(5’-3’)	后引物(5’-3’)	退火温度
					HRS1	751	GCTCCTGCTGACCAAGTAAG	CCGACAGACAGAAAGATTACC	54.96-54.03
HRS2	854	TGTCTTACAGCAGAATAGGAGG	CCACCATCGTCTTCGTCTG	54.32-56.43
					HRS3	753	CGACACCACTACACTACTGATA	CCTTCACCTCCGTGTTCCT	50.33-56.91
HRS30	1068	GAGGTCAGCGTGAAGGAGAT	CCAACCACAACCTCGTCTTC	56.36-57.54
					HRS33	1007	GAACCGCTTCGGTAGCATAG	CAGAAGAGGGACTTCCTCAAGA	57.8-57.82
HRS7	864	GCACCTTGAACTCGTCGTA	TCTCCCAAGCCATTCTCAG	53.94-55.49
					HRS8	631	CGAATCGCAATCAACAACC	ACACCGACGAATCCGACTC	56.96-57.64
HRS9	877	CAGAGAGCGTTGCCGTAGC	GCTTGTGGTTTTGAGGTGAT	59.28-54.79
					HRS34	820	ACTCCTTGCAGATCATGAACC	CATTCACATGAGAGATCCTCG	56.43-55.11
HRS11	593	ATCACCTCAAAACCACAAGC	AGCATCTCATCACCCAAATC	54.79-54.45
					HRS12	625	GACGGCTGAGATTTGACTGG	ATCCTATCGCTGGAGACACA	57.77-55.11

该NRL1基因具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，其编码的蛋白质具有SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列。

实施例2：

植物转化：

利用PCR技术将SwaI酶切位点引入pCAMBIA1300载体的多克隆位点中，扩增引物为：F：CGAGGTTATGGATCCATTTAAATAAAATCTT，R：GGGAGCATGC CATTTGGTATTC，退火温度为59.7℃-59.8℃。其中前引物含有BamHI(G/GATCC)和SwaI(ATTT/AAAT)的酶切位点，后引物含有SphI(GCATG/C)的酶切位点。用该引物PCR扩增日本晴基因组DNA，电泳后回收纯化498bp(命名为SEQ ID NO：3)的片段，将该片段用BamHI和SphI进行双酶切，同时也用这两种内切酶对pCAMBIA1300载体进行部分酶切，再将两者酶切后大小片段正确的产物连接，这样就在pCAMBIA1300载体的多克隆位点BamHI之后引入了SwaI的酶切位点。然后将BAC克隆OSJNBa0027H05用SwaI和SphI酶切，电泳分离后，割取8.746kb(命名为SEQ ID NO：4)的DNA片段，连接到改造后的pCAMBIA1300中，获得了转化载体pCAMBIA1300-NRL1，该克隆覆盖了整个ORF的基因组区域，包括ATG上游2.3kb启动子序列和2.5kb的下游序列。该质粒通过电击的方法转入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)株系EHA105中转化水稻。我们利用突变体nrl1-1的幼胚诱导的愈伤组织，经过诱导培养基培养3周后，挑选生长旺盛愈伤用作转化的受体。用含有双元质粒载体的EHA105菌株侵染水稻愈伤，在黑暗、25℃条件下共培养3天后，在含有40mg/LHygromycin的筛选培养基上培养。筛选抗性愈伤在含有50mg/L预分化培养基上培养10天左右。将预分化的愈伤转至分化培养基上在光照条件下培养。一个月左右得到抗性转基因植株。对植株进行鉴定和连续的观察，发现植株叶片恢复了正常形态。与同时期的突变体比较，转基因植株叶片平展不卷曲，宽度正常。

以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。有必要指出，本发明不局限于以上实施例，对于本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

序列表

SEQ ID NO：1

1     ATGTCGCGGC GGCTGTCGTT GCCGGCGGGG GCGCCGGTGA CGGTGGCGGT GTCGCCGGTG

61    CGGAGCCCGG GGGGTGACGC GGTGGTGAGG AGGGGGAGCG GGCTGACGTC CCCCGTGCCG

121   AGGCACTCGC TCGGGTCGTC CACCGCCACG CTGCAGGTGT CGCCGGTGAG GCGGAGCGGC

181   GGGAGTAGGT ACCTCGGCGC GTCGAGGGAT GGCGGCGCCG ATGAGAGCGC CGAGTTCGTG

241   CACTACACCG TGCACATCCC GCCCACGCCC GACCGGGCGA CGGCGTCCGT GGCGAGCGAG

301   GCGGAGGCGG CGGCGGAGGC CGAGGAGGTG CACCGGCCGC AGCGGAGCTA CATCTCCGGG

361   ACGATATTCA CCGGGGGGCT CAACTGCGCC ACGCGCGGCC ACGTGCTCAA CTTCTCCGGC

421   GAGGGCGGCG CCACCGCCGC CTCCAGGGCG GCGGCGTCGG GGAACATGTC GTGCAAGATG

481   CGCGGGTGCG ACATGCCCGC GTTCCTCAAC GGCGGCCGCC CGCCGTGCGA CTGCGGGTTC

541   ATGATCTGCA AGGAGTGCTA CGCGGAGTGC GCCGCGGGCA ACTGCCCCGG TTGCAAGGAG

601   GCCTTCTCCG CGGGCTCCGA CACCGACGAA TCCGACTCCG TCACCGACGA CGACGACGAC

661   GAGGCCGTCT CCTCCTCCGA GGAGAGGGAC CAGCTGCCGC TGACATCCAT GGCGAGGAAA

721   TTTTCCGTGG TGCACTCCAT GAAGGTCCCC GGCGCCGCCG CCAACGGCAA CGGCAAGCCG

781   GCCGAGTTCG ACCACGCCCG CTGGCTCTTC GAGACCAAGG GCACCTATGG CTACGGCAAC

841   GCTCTCTGGC CCAAGGACGG CCACGCCCAT AGCGGCGCCG GCTTCGTCGC CGCCGACGAG

901   CCCCCCAACT TCGGTGCCCG CTGCCGCCGC CCCCTCACCA GAAAAACCAG CGTCTCCCAA

961   GCCATTCTCA GCCCCTACAG GTACCAAATC CTCCTCAAAA TTTGAACAAT TTCAACAAAT

1021  TTTACCAAAT TTGAGCAAAT TGGTTAGCAT TTTGAGGTGG ATTTGTTTTT GATTAGGTTG

1081  AATTTTGAAC AATTTCAACA AAATTTACCA AGTTGGTTAG CATTTTGAGG TGGATTTGTT

1141  TTTGATTAGG TTGAATTTTG AACAATTTCA ACAAATTTTA CCAAATTTGA GCAAATTTGT

1201  TAGCATTTTG AGGTGGATTT GTTTTTGATT AGGTTGTTGA TTGCGATTCG GCTGGTGGCG

1261  CTGGGGTTCT TCCTCGCGTG GAGGATTCGG CATCCGAATC CGGAGGCGGT GTGGCTGTGG

1321  GCGATGTCGG TGGCGTGCGA GGTGTGGTTC GCCTTCTCAT GGCTGCTCGA CAGCCTCCCC

1381  AAGCTCTGCC CCGTCCACCG CGCCGCCGAC CTCGCCGTCC TCGCCGAGCG GTTCGAGTCG

1441  CCGACGGCGC GCAACCCCAA GGGCCGCTCC GACCTCCCCG GGATCGACGT GTTCGTCACC

1501  AGCGCCGACC CGGAGAAGGA GCCGCCGCTG GTCACCGCCA ACACCATCCT CTCCATCCTC

1561  GCCGCGGACT ACCCCGTCGA GAAGCTCGCT TGCTACCTCT CCGACGACGG CGGCGCGCTG

1621  CTGTCGTTCG AGGCGCTCGC CGAGACGGCC AGCTTCGCGC GCACGTGGGT GCCATTCTGC

1681  CGCAAGCACG GCGTCGAGCC GCGGTGCCCC GAGGCGTATT TCGGCCAGAA GAGGGACTTC

1741  CTCAAGAACA AGGTGCGCGT CGACTTCGTC CGCGAGAGGC GGAAGGTGAA GCGCGAGTAC

1801  GACGAGTTCA AGGTGCGGGT GAACTCGCTC CCCGAGGCGA TCCGGCGGCG CTCCGACGCG

1861  TACAACGCCG GCGAGGAACT GCGCGCCAGG AGGCGGCAGC AGGAGGAGGC CGCCGCCGCG

1921  GCTGCCGCCG GCAACGGCGA GCTTGGAGCG GCGGCGGTCG AGACCGCCGC CGTGAAGGCC

1981  ACGTGGATGT CGGACGGCTC GCACTGGCCG GGGACGTGGA CGTGCCCCGC GGCGGACCAC

2041  GCCCGCGGCG ACCACGCCGG GATCATCCAG GCGATGCTGG CGCCGCCGAC CTCGGAGCCG

2101  GTGATGGGAG GCGAGGCGGC GGAGTGCGGC GGGCTGATCG ACACCACGGG CGTGGACGTC

2161  CGCCTCCCGA TGCTGGTGTA CGTGTCGCGG GAGAAGCGCC CGGGCTACGA TCACAACAAG

2221  AAGGCCGGCG CCATGAACGC GCTGGTGCGG ACGAGCGCCA TCATGTCGAA CGGGCCCTTC

2281  ATCCTCAACC TCGACTGCGA CCACTACGTG CACAACTCGT CGGCGCTCCG GGAGGGGATG

2341  TGCTTCATGC TCGACCGCGG CGGCGACCGC GTGTGCTTCG TCCAGTTCCC GCAGCGGTTC

2401  GAGGGCGTCG ACCCCAGCGA CCGGTACGCC AACCACAACC TCGTCTTCTT CGACGTGTCC

2461  ATGCGCGCCA TGGACGGGCT TCAGGGCCCC ATGTACGTCG GCACCGGCTG CGTCTTCCGC

2521  CGCACCGCGC TGTACGGCTT CAGCCCGCCC CGCGCCACCG AGCACCATGG CTGGCTCGGC

2581  CGCAGGAAGA TCAAGCTGTT CCTCACCAAG AAGAAGAGCA TGGGCAAGAA GACGGACAGG

2641  GCCGAGGACG ACACCGAGAT GATGCTGCCG CCGATCGAGG ACGACGACGG CGGCGCCGAC

2701  ATTGAGGCCT CGGCTATGCT ACCGAAGCGG TTCGGCGGGT CGGCGACGTT CGTGGCGTCG

2761  ATACCCGTGG CGGAGTACCA GGGTCGGCTG CTGCAGGACA CCCCCGGGTG CCACCACGGC

2821  CGCCCTGCGG GCGCGCTCGC TGTGCCGCGC GAGCCGCTCG ACGCGGCGAC GGTGGCGGAG

2881  GCCATCGGCG TGATCTCCTG CTTCTACGAG GAGAAGACGG AGTGGGGGCG GCGCATCGGG

2941  TGGATCTACG GCTCCGTCAC CGAGGACGTG GTCACCGGCT ACCGGATGCA CAACCGCGGG

3001  TGGCGCTCCG TCTACTGCGT GACGCCGCGG CGCGACGCGT TCCGCGGCAC GGCGCCGATC

3061  AACCTCACCG ACCGCCTCCA CCAGGTGCTC CGGTGGGCGA CGGGCTCCGT CGAGATCTTC

3121  TTCTCCCGCA ACAACGCCCT CTTCGCCTCG CCGCGGATGA AGCTGCTGCA GCGCGTCGCC

3181  TACTTCAACG CCGGGATGTA CCCCTTCACC TCCGTGTTCC TCCTCGCCTA CTGCCTCCTC

3241  CCGGCCGTCT CCCTCTTCTC CGGCAAGTTC ATCGTGCAGC GACTCAGCGC CACCTTCCTC

3301  GCCTTCCTCC TCGTCATCAC CCTCACCCTC TGCCTCCTCG CCCTGCTCGA GATCAAGTGG

3361  TCCGGGATCA CGCTCCACGA GTGGTGGCGC AACGAGCAGT TCTGGGTGAT CGGCGGCACC

3421  AGCGCGCACC CGGCCGCCGT GCTGCAGGGC CTACTCAAGG TGATCGCCGG CGTGGACATC

3481  TCCTTCACGC TGACCTCCAA GCCGGGGAAC GGCGGCGGCG ATGGCGGGGT CGGCGGCGAG

3541  GGGAACGACG ACGAGGCGTT CGCGGAGCTG TACGAGGTGA GGTGGAGCTA CCTGATGGTG

3601  CCGCCGGTGA CGATCATGAT GGTGAACGCG GTGGCGATCG CGGTGGCGGC GGCGAGGACG

3661  CTGTACAGCG AGTTCCCGCA GTGGAGCAAG CTGCTCGGCG GCGCCTTCTT CAGCTTCTGG

3721  GTGCTGTGCC ACCTCTACCC GTTCGCCAAG GGCCTCCTCG GCCGCCGCGG CCGCGTGCCC

3781  ACCATCGTCT TCGTCTGGTC GGGCCTCATC TCCATGATCA TCTCCCTCCT CTGGGTCTAC

3841  ATCAACCCGC CCGCCGGCGC CCGGGAGCGC ATCGGCGGCG GCGGATTCAG CTTCCCATAG

SEQ ID NO：2

1    MET  Ser  Arg  Arg  Leu  Ser  Leu  Pro  Ala  Gly  Ala  Pro  Val  Thr  Val

16   Ala  Val  Ser  Pro  Val  Arg  Ser  Pro  Gly  Gly  Asp  Ala  Val  Val  Arg

31   Arg  Gly  Ser  Gly  Leu  Thr  Ser  Pro  Val  Pro  Arg  His  Ser  Leu  Gly

46   Ser  Ser  Thr  Ala  Thr  Leu  Gln  Val  Ser  Pro  Val  Arg  Arg  Ser  Gly

61   Gly  Ser  Arg  Tyr  Leu  Gly  Ala  Ser  Arg  Asp  Gly  Gly  Ala  Asp  Glu

76   Ser  Ala  Glu  Phe  Val  His  Tyr  Thr  Val  His  Ile  Pro  Pro  Thr  Pro

91   Asp  Arg  Ala  Thr  Ala  Ser  Val  Ala  Ser  Glu  Ala  Glu  Ala  Ala  Ala

106  Glu  Ala  Glu  Glu  Val  His  Arg  Pro  Gln  Arg  Ser  Tyr  Ile  Ser  Gly

121  Thr  Ile  Phe  Thr  Gly  Gly  Leu  Asn  Cys  Ala  Thr  Arg  Gly  His  Val

136  Leu  Asn  Phe  Ser  Gly  Glu  Gly  Gly  Ala  Thr  Ala  Ala  Ser  Arg  Ala

151  Ala  Ala  Ser  Gly  Asn  MET  Ser  Cys  Lys  MET  Arg  Gly  Cys  Asp  MET

166  Pro  Ala  Phe  Leu  Asn  Gly  Gly  Arg  Pro  Pro  Cys  Asp  Cys  Gly  Phe

181  MET  Ile  Cys  Lys  Glu  Cys  Tyr  Ala  Glu  Cys  Ala  Ala  Gly  Asn  Cys

196  Pro  Gly  Cys  Lys  Glu  Ala  Phe  Ser  Ala  Gly  Ser  Asp  Thr  Asp  Glu

211  Ser  Asp  Ser  Val  Thr  Asp  Asp  Asp  Asp  Asp  Glu  Ala  Val  Ser  Ser

226  Ser  Glu  Glu  Arg  Asp  Gln  Leu  Pro  Leu  Thr  Ser  MET  Ala  Arg  Lys

241  Phe  Ser  Val  Val  His  Ser  MET  Lys  Val  Pro  Gly  Ala  Ala  Ala  Asn

256  Gly  Asn  Gly  Lys  Pro  Ala  Glu  Phe  Asp  His  Ala  Arg  Trp  Leu  Phe

271  Glu  Thr  Lys  Gly  Thr  Tyr  Gly  Tyr  Gly  Asn  Ala  Leu  Trp  Pro  Lys

286  Asp  Gly  His  Ala  His  Ser  Gly  Ala  Gly  Phe  Val  Ala  Ala  Asp  Glu

301  Pro  Pro  Asn  Phe  Gly  Ala  Arg  Cys  Arg  Arg  Pro  Leu  Thr  Arg  Lys

316  Thr  Ser  Val  Ser  Gln  Ala  Ile  Leu  Ser  Pro  Tyr  Arg  Leu  Leu  Ile

331  Ala  Ile  Arg  Leu  Val  Ala  Leu  Gly  Phe  Phe  Leu  Ala  Trp  Arg  Ile

346  Arg  His  Pro  Asn  Pro  Glu  Ala  Val  Trp  Leu  Trp  Ala  MET  Ser  Val

361  Ala  Cys  Glu  Val  Trp  Phe  Ala  Phe  Ser  Trp  Leu  Leu  Asp  Ser  Leu

376  Pro  Lys  Leu  Cys  Pro  Val  His  Arg  Ala  Ala  Asp  Leu  Ala  Val  Leu

391  Ala  Glu  Arg  Phe  Glu  Ser  Pro  Thr  Ala  Arg  Asn  Pro  Lys  Gly  Arg

406  Ser  Asp  Leu  Pro  Gly  Ile  Asp  Val  Phe  Val  Thr  Ser  Ala  Asp  Pro

421  Glu  Lys  Glu  Pro  Pro  Leu  Val  Thr  Ala  Asn  Thr  Ile  Leu  Ser  Ile

436  Leu  Ala  Ala  Asp  Tyr  Pro  Val  Glu  Lys  Leu  Ala  Cys  Tyr  Leu  Ser

451  Asp  Asp  Gly  Gly  Ala  Leu  Leu  Ser  Phe  Glu  Ala  Leu  Ala  Glu  Thr

466  Ala  Ser  Phe  Ala  Arg  Thr  Trp  Val  Pro  Phe  Cys  Arg  Lys  His  Gly

481  Val  Glu  Pro  Arg  Cys  Pro  Glu  Ala  Tyr  Phe  Gly  Gln  Lys  Arg  Asp

496  Phe  Leu  Lys  Asn  Lys  Val  Arg  Val  Asp  Phe  Val  Arg  Glu  Arg  Arg

511  Lys  Val  Lys  Arg  Glu  Tyr  Asp  Glu  Phe  Lys  Val  Arg  Val  Asn  Ser

526  Leu  Pro  Glu  Ala  Ile  Arg  Arg  Arg  Ser  Asp  Ala  Tyr  Asn  Ala  Gly

541  Glu  Glu  Leu  Arg  Ala  Arg  Arg  Arg  Gln  Gln  Glu  Glu  Ala  Ala  Ala

556  Ala  Ala  Ala  Ala  Gly  Asn  Gly  Glu  Leu  Gly  Ala  Ala  Ala  Val  Glu

571  Thr  Ala  Ala  Val  Lys  Ala  Thr  Trp  MET  Ser  Asp  Gly  Ser  His  Trp

586  Pro  Gly  Thr  Trp  Thr  Cys  Pro  Ala  Ala  Asp  His  Ala  Arg  Gly  Asp

601  His  Ala  Gly  Ile  Ile  Gln  Ala  MET  Leu  Ala  Pro  Pro  Thr  Ser  Glu

616  Pro  Val  MET  Gly  Gly  Glu  Ala  Ala  Glu  Cys  Gly  Gly  Leu  Ile  Asp

631  Thr  Thr  Gly  Val  Asp  Val  Arg  Leu  Pro  MET  Leu  Val  Tyr  Val  Ser

646  Arg  Glu  Lys  Arg  Pro  Gly  Tyr  Asp  His  Asn  Lys  Lys  Ala  Gly  Ala

661  MET  Asn  Ala  Leu  Val  Arg  Thr  Ser  Ala  Ile  MET  Ser  Asn  Gly  Pro

676  Phe  Ile  Leu  Asn  Leu  Asp  Cys  Asp  His  Tyr  Val  His  Asn  Ser  Ser

691  Ala  Leu  Arg  Glu  Gly  MET  Cys  Phe  MET  Leu  Asp  Arg  Gly  Gly  Asp

706  Arg  Val  Cys  Phe  Val  Gln  Phe  Pro  Gln  Arg  Phe  Glu  Gly  Val  Asp

721  Pro  Ser  Asp  Arg  Tyr  Ala  Asn  His  Asn  Leu  Val  Phe  Phe  Asp  Val

736  Ser  MET  Arg  Ala  MET  Asp  Gly  Leu  Gln  Gly  Pro  MET  Tyr  Val  Gly

751  Thr  Gly  Cys  Val  Phe  Arg  Arg  Thr  Ala  Leu  Tyr  Gly  Phe  Ser  Pro

766  Pro  Arg  Ala  Thr  Glu  His  His  Gly  Trp  Leu  Gly  Arg  Arg  Lys  Ile

781  Lys  Leu  Phe  Leu  Thr  Lys  Lys  Lys  Ser  MET  Gly  Lys  Lys  Thr  Asp

796  Arg  Ala  Glu  Asp  Asp  Thr  Glu  MET  MET  Leu  Pro  Pro  Ile  Glu  Asp

811  Asp  Asp  Gly  Gly  Ala  Asp  Ile  Glu  Ala  Ser  Ala  MET  Leu  Pro  Lys

826  Arg  Phe  Gly  Gly  Ser  Ala  Thr  Phe  Val  Ala  Ser  Ile  Pro  Val  Ala

841  Glu  Tyr  Gln  Gly  Arg  Leu  Leu  Gln  Asp  Thr  Pro  Gly  Cys  His  His

856  Gly  Arg  Pro  Ala  Gly  Ala  Leu  Ala  Val  Pro  Arg  Glu  Pro  Leu  Asp

871  Ala  Ala  Thr  Val  Ala  Glu  Ala  Ile  Gly  Val  Ile  Ser  Cys  Phe  Tyr

886  Glu  Glu  Lys  Thr  Glu  Trp  Gly  Arg  Arg  Ile  Gly  Trp  Ile  Tyr  Gly

901  Ser  Val  Thr  Glu  Asp  Val  Val  Thr  Gly  Tyr  Arg  MET  His  Asn  Arg

916  Gly  Trp  Arg  Ser  Val  Tyr  Cys  Val  Thr  Pro  Arg  Arg  Asp  Ala  Phe

931   Arg  Gly  Thr  Ala  Pro  Ile  Asn  Leu  Thr  Asp  Arg  Leu  His  Gln  Val

946   Leu  Arg  Trp  Ala  Thr  Gly  Ser  Val  Glu  Ile  Phe  Phe  Ser  Arg  Asn

961   Asn  Ala  Leu  Phe  Ala  Ser  Pro  Arg  MET  Lys  Leu  Leu  Gln  Arg  Val

976   Ala  Tyr  Phe  Asn  Ala  Gly  MET  Tyr  Pro  Phe  Thr  Ser  Val  Phe  Leu

991   Leu  Ala  Tyr  Cys  Leu  Leu  Pro  Ala  Val  Ser  Leu  Phe  Ser  Gly  Lys

1006  Phe  Ile  Val  Gln  Arg  Leu  Ser  Ala  Thr  Phe  Leu  Ala  Phe  Leu  Leu

1021  Val  Ile  Thr  Leu  Thr  Leu  Cys  Leu  Leu  Ala  Leu  Leu  Glu  Ile  Lys

1036  Trp  Ser  Gly  Ile  Thr  Leu  His  Glu  Trp  Trp  Arg  Asn  Glu  Gln  Phe

1051  Trp  Val  Ile  Gly  Gly  Thr  Ser  Ala  His  Pro  Ala  Ala  Val  Leu  Gln

1066  Gly  Leu  Leu  Lys  Val  Ile  Ala  Gly  Val  Asp  Ile  Ser  Phe  Thr  Leu

1081  Thr  Ser  Lys  Pro  Gly  Asn  Gly  Gly  Gly  Asp  Gly  Gly  Val  Gly  Gly

1096  Glu  Gly  Asn  Asp  Asp  Glu  Ala  Phe  Ala  Glu  Leu  Tyr  Glu  Val  Arg

1111  Trp  Ser  Tyr  Leu  MET  Val  Pro  Pro  Val  Thr  Ile  MET  MET  Val  Asn

1126  Ala  Val  Ala  Ile  Ala  Val  Ala  Ala  Ala  Arg  Thr  Leu  Tyr  Ser  Glu

1141  Phe  Pro  Gln  Trp  Ser  Lys  Leu  Leu  Gly  Gly  Ala  Phe  Phe  Ser  Phe

1156  Trp  Val  Leu  Cys  His  Leu  Tyr  Pro  Phe  Ala  Lys  Gly  Leu  Leu  Gly

1171  Arg  Arg  Gly  Arg  Val  Pro  Thr  Ile  Val  Phe  Val  Trp  Ser  Gly  Leu

1186  Ile  Ser  MET  Ile  Ile  Ser  Leu  Leu  Trp  Val  Tyr  Ile  Asn  Pro  Pro

1201  Ala  Gly  Ala  Arg  Glu  Arg  Ile  Gly  Gly  Gly  Gly  Phe  Ser  Phe  Pro

SEQ ID NO：3

1    CGAGGTTATG  GATCCATTTA  AATAAAATCT  TTAAAAAATC  AGGACATAGA  TCAAAAGTAG

61   TCTTATAGAA  AATCAGCTTT  TTGTTACTTG  CTTTTTCCCG  TAGTACAGAG  AATAAAATAA

121  TAAAAAAAGA  GGGGCTTGTC  TTACCGAGAA  AAATAGAAAA  ATAGGGCAAT  AGTCTTCTTT

181  TTCTTTGGCC  AAGCGATAAG  CAGAATCCAG  CTTTCTATTC  CCACTAGCTG  TACTGGCCCA

241  AACATTGTAC  TTAATGCTCC  TATGTACATG  GTCCTCAGTG  TAGGACTTTA  TTACAAAAAA

301  TTTTGCATCC  TTGTATTCAG  TGACAAAATC  AGGGCGATTA  TACAGTTCAC  TATCAACCAG

361  AGGAACATTT  TTCTCATTTT  TGTCATCTAT  TGAAGAGTTC  TCTGTGTCTT  GTTTCTTTGG

421  TTTTGTAGCA  CGTGGCCCAC  GGTTTTGCTC  ATTCAGGAAC  TCAAGAGCAC  CATTCTGAAT

481  ACCAAATGGC  ATGCTCCC

SEQ ID NO：4

1    GCCGGGGAGT  CACGACCATT  GCGGGCACCT  GTTGAGTCCG  GGTACATGTA  TGGGCCGGCG

61   ACTGCAACAG  AGTGTCGTAG  ACGACGCTCA  GTTGCACTCC  ATGACTAGCC  CTATTGGCGA

121  GTCGACTCTG  CATCACGGTT  TCCAGCTTTT  TCAAGGTCGG  GCGGATTCGT  GCTGCTAGGC

181  AAGGGAGAAA  TGGAGCCCCT  CTCCACCCGG  ACCTGGCACT  TCGACCAACG  GATTCTCCTT

241  GCGCAGTACA  TTTGTTGGAT  CGCGCGACCA  GCCCTTGTAT  TCGTCCCGCA  TGAAGCGACG

301   AACTCGATGG  CACTGAGAGA  AAGCAGATAG  AATCGAGAGA  ATGTCTGATC  AGGCCGCCAA

361   TCTCAAGCGC  ACAGAGGGCA  GGTAGTTCTC  GACGTACCTG  TCAGGCGTGC  CCGGGGAACA

421   AGTGAGGGAG  GGTATCATAG  TGACCCGGAC  ATCTGCGAGC  CTTCTTTAAA  CATCCAGCCG

481   GAATATTTCC  GGATGACGTT  GACCGGTGCA  GCCCGCGGAA  AGCTGCAAAC  CGAGCAGCAG

541   GGGGGTTACC  CCTCAGAGGT  ACAGCTTCCA  CCCGCGGCTG  GCACAAGAGG  GAGATGTGTT

601   TTAGACACCT  CACAGTGCAA  CGGCTAAAGC  GCGGCACGCC  TGCTAGGGCC  CAAATCGTCT

661   AGCAGAAGCG  AATGGACGCC  GTACAAAAAC  AGCGCGTATC  TACCCGGGTC  CACTCAGTGG

721   CACGACGCTC  ACGGGACTAC  ACAACCTAGT  CCAAGATGCC  GCGCGAGCGA  AACTGATGAC

781   GATCAGACTA  GCGACTGTAC  GCTAGAGGGG  TTCTACTCCA  GCTCGAGTCC  AACTCGTTGG

841   GTCTGAGCTT  CAGTCTAGCA  TCGGACGAAC  GCTTATAGTT  AACCTGGGCA  GGGTAGTCAC

901   GCGCGCGTCG  CCAGGGCCGG  CTACCGTTAC  TTTGAATTTA  ATTTGCTTCA  CTGCAACCAC

961   ACTTCCTGGT  GATCTGTAGG  AAAAGCGGTG  GATATTTGAG  TGGGTGATGA  TAAAGTCGTG

1021  GTCGGATGCG  CCCAAGCTAC  AAACTGAGAA  ACCGCGCGGG  GTTCCGTCCG  CGGTAATTGC

1081  CGCCCCCCCG  GTGAATTCCC  TCCCGTTACG  GGGGCACTGA  GGCTACCCGC  CACCGTGGCT

1141  TGCAAGGGTT  TCATAGCCGA  ACCACGCCGC  AAAAACACCC  GTAATCGCCT  GGGATCCAAT

1201  GGGCCACGAT  GTTGTCAGGC  GCTAACGCTA  CCGAAACAAA  CCCGTAGATG  TCTTCCGACG

1261  ACCTTTGCTG  TGACTTTGTG  CCTTAGAGGC  TCACTCATCC  TTCTGCATGA  TTGCGCCCGA

1321  TGCGGCTAAC  TGAATGAATT  GCTCCGCATT  ATATGGCGAT  GATGTGCGCC  CGTGCTCCGC

1381  CTGGGTACCT  AGGCCTTTAA  CGGATCCGCA  GCACGAAGGC  CCCTGTTTCG  CACTCGTGTG

1441  GTGTAATAAT  TGGGAGGATT  AGATGTTGAG  AGCTTAGCTC  GCGTTCAAGA  GCAGTGACCA

1501  GATTCTCCTA  CGTGACCCTT  CATCATGAGT  TTTCGACCGG  CCACCCTCTA  AAAGGTGGGG

1561  AGCCATGGTT  CACCTTTGTG  CTAGATCAGC  GAGAGGTAAC  TCGTATTCGT  AACGCGAATT

1621  CTAGGGCGAA  TCCCGATCCG  GGGTCACAAG  GGTCACCGAT  TTTCGGTTAC  CTCAACACGT

1681  GTAGCAAGGA  CGGTCCGGCA  GGGCACGCTT  GGATTGGAGG  GATACAGTTA  TAGTTGCTGT

1741  GGCTACGGAC  GTTCTAACAA  CGAACCTGGA  GGCTATTACC  GCCCATAGAC  GGCCCCGTCC

1801  CGCAGACCAT  ATTCCCTCCG  GCGACGTCGA  CTGGCTAACC  TCCGGAGATC  ATAACTAGGG

1861  CCCTGGGGCC  GGGTTCGTGG  CAAGGGTGTA  ATATGTGGAC  AGAAGGGCCA  ACACCCATAG

1921  CCTCAGTCCG  GTTGGAAAGC  GCACGATCGC  CAGTCGAGTC  CGGGAGACTT  GGGCAATTAT

1981  CAAGAATAGT  CGAACAGCCT  TCAGTCCCTG  CGTCCGCATG  TGGTTACCTG  TGCAGCCAGC

2041  GTTTAGGGGA  GCGTCGCTCC  CCGATCCCCT  TCGGGAACTA  TTCATTCGAA  CAAGCCGGGC

2101  CCTCACTTTG  AAACAGAATA  TCCGCGGCCG  GTACTATCAA  CTACACTCGA  ATGCCACCTG

2161  GGCTCCTTGA  CATAACCCTC  TAATGGCGCC  CTAGCACCTT  ACATAGCGTT  ACACAGCGGT

2221  CTCGAGCAAG  CTATTGGCGT  GAGCTACGTT  AAACTCCCAT  GGAAAGCCGG  CATCATCCTA

2281  TGGACCACCT  GAGCTCGCCG  TTCACTAAGT  TTTTGCCCGC  AAATCCTTAC  CACTCCGCGT

2341  CAGACCAATA  CGATAAGGCA  CGGGTGCGGA  TTCATTCCGG  CCGGCTATTG  ATAGCTAGGA

2401  ATTATGTTCT  TAGCAATTTA  TTCTTGAGTA  GCCCCCAAAC  ATGCAATCTA  AAGTTCACAA

2461  GTGTGAGGTC  TTGCCATGTA  ATTTGAGGCA  AACTGTGCAC  ATGGCCTTCG  ACGCGTATAG

2521  TTACTGGTAA  GGCCGAATGC  AATGCCCATC  GCCCGGAATA  GTCAAAGCTG  TCAGGGCCTA

2581  AGTAGTCATT  CTTCAGGGTC  AAAGACCTTA  AGGATTACGA  CGGGTTCCTA  ACACCAATGA

2641  GATACCGCTG  CCTCGTAAAA  TTCCAAATCT  CGCGGCCCTA  CGAGCTCAGG  CGGGGCTGAT

2701  TTCGTACCCA  TGCGCTTCCA  CATGGCCTAG  GTTAACTGCC  GAGGACTTAA  CGGGATAAAG

2761  GAGGATTGGG  GCGACGACAA  GATCAGGCGA  GCACCGGGAA  TACATTTCTA  GGGTCTGCCT

2821  CAACTACGAC  ACATCGGGCG  GGGTCAGTCG  CTCGGGCGCA  TGCACGGGGC  TGGTATCGGT

2881  TCACTGCTTA  CATGTTGGAT  AGCCACCTAG  ATACGGAGTC  GGGCCTCGCT  TAGAGTCGGA

2941  GGTGCGAAGC  ATGTACTCTC  AGGCAGAGCT  CGTGGCCCAT  ACTCGGACAC  GCTCTGGTAT

3001  GGGCGAGAAA  AGGCGGCGCT  CGCTGGACTG  CATGCAGAAA  AACTACCTCC  CATGCTGTAT

3061  GGATACGGCC  AGTCACGATA  TGGGTGCTCT  CAGGTCTTCG  GACGAGCGCT  CGGACGATCT

3121  AAGTAGGTCT  CCAAAACTCG  CAGGGTAAAG  CCCTTGACGG  CTGGACAGCG  CTAATCGCCT

3181  CCGCCGGGAG  CCCAACTAAC  TCAATTCGAG  GTTTCTTACT  TGCGGTGTGA  TTCAAGCGCA

3241  GTCACCAAAG  AGTGTAACGA  AACAGCTCTA  CGGCACATGG  CCCTTCCCAC  ATCGAAGGTC

3301  ACCCGGTCCC  ATCTACCCAG  ATTACGCATA  ACTAGCGATT  TCACCGCTCG  GATCCCAGCA

3361  AGGGGTATGC  TGATTGAATA  ATAGGCGTAC  TTTCAAGGCT  AAGTACGCGG  AGCCTGATGA

3421  TCCGCAATCA  CCTGATAAAT  ACCGCGAGCT  GCGGTATAAA  CGGGCCCCTG  TTCAACGCCT

3481  GTTTAGTTCA  GTGTATAATA  AGCGCTGGCG  ATCATTCCCA  ACCTTCTCTG  ACCGCGGCGT

3541  TCTCGCTAGG  CTCTATTTGT  AGGTCAAAAG  TTCAGTACTT  GCGTGTGGGG  GAACGCATAC

3601  TCAGAGCCCA  TGTCATATGT  CCTCATGTAT  GGAGTGGATC  CGTCTAAGCT  GCGTTGGGTC

3661  TCCCCTACGG  AAGGAGCCGG  GCAAAACAGT  TTGACGATTA  ACAAGAGATG  ACCTCCCAGC

3721  GGCTGTGGTT  TAACCGCGCG  CACCGTTAAC  AACTAAAGCA  GCCGAAGTTC  GCGTACTGCG

3781  TCTTCGTCGT  CGTGTTACCT  GTTCACCATT  TGATGTCAGA  ACAGATGCCG  CGGTCCTTCA

3841  TAACAGTCAG  CCCTCCTCAC  TGAGGAGCAC  GGTCCGTGAG  AGGTTTTCGG  TCAGGCATGC

3901  ATTTAAACGA  TCTAGCAATA  TCTCTTCTAG  CGTACTCTAC  GCGCCCGGTG  CCCGACTTCC

3961  TGGCACTGGA  GAGCACGTGG  GGTTTGAAGG  GCGAGCAGCC  CGTTTTAGGC  GAGGCAGGAC

4021  TGCGAGCGCT  GAGGCGCGCG  GGCTAAGCGC  CTGGCCAGAT  TATGGGTAAC  ATGGAGTGTA

4081  ACGAACTAAC  ACCCTGGCCC  CTCAACAAAT  AAACCGTTCA  GGGTTTGATT  TTTAAAATGG

4141  GTCGGCCTCG  TTCGGTTGGC  TCCCAAGCAA  TAGCGGCCAG  CAATGCAACC  AGGGGTACCG

4201  TCAGGGACGG  GGAGAAGTAT  TGCGGGCCGG  CGTTTTGCCC  CGTGGAGGTA  GTCGCGCTGA

4261  TGGTCAAAAC  ACTGCCTGAA  ACAGCTCTAT  GCCCTGCAAC  GACTTCAGGC  CACCGTGGGA

4321  AGTCAAGGCC  TACTACGATT  GCTGTACTAT  TAAGGGACGT  CATGACGCAA  AGTTCCGTCA

4381  GGGCGTGTAG  TCCGCGTCGG  GAGCTTGGCG  GCGAATAGTA  ACTTTATGGC  AGATGCTTAC

4441  GAGTCGATAA  CACTACATCA  GGGACCCCTG  CGTACCAATG  ATGTCAAAAT  GAGGACCTAC

4501  GCCGCAGAGG  ATAGCCGTCC  ACTTAAAAAT  TGTGTCGTGC  TTGCGGTCGC  CAGTCGACGC

4561  CCGCGCACGA  GGGGCTGGTA  CCGAGGGGCC  GGCCCCTAAT  TGAGTAGGTC  CCATGCGGGC

4621  GCACAGGAGC  CCACGTACCG  CGAGGAGAAG  CTCTCCGATT  ATGGCGGACG  GAGGGCCACC

4681  GTCCCCAGGC  GGGCCTCATC  CGTAGCGTCC  CCTCCAAAGT  GACCTGGCTC  AGGAAGACCA

4741  GTGCGCGGGG  CCCCGTAGTT  AACTAGCGAC  GAGGAATTGC  ATCATGGTAT  CGGTCTCTAA

4801  CAGCCAGCTG  CCCCAACCGG  GTCACGAGGA  TAACGGCTTG  AATGGCTATG  GTACATGCTC

4861  CTGGCGCTGT  GGCTCGCGGA  ATGATACCAG  TTAAAGTCAT  CGGAATGCGG  CAGGATAGGA

4921  CGGTGCCGCG  AATAGGGGTG  CGGGCAAGGG  GGGGCCAGCC  AGTGCTAGTG  CAGCACAAGA

4981  TCATTCCAGC  CATCAATAAC  AGGAACCAAT  TTAGGGTCCT  ACAGAATATG  CGGCCCGGCC

5041  ATTGTCCGTG  AAGTGGTGGT  GTAAAAGTGG  AATGAGAGAA  GGCCCATGGG  TGCGTTTACT

5101  AGGGGAATAA  GGCCTTCGTA  TCGTTACTGA  AGCCATAGGT  TCGGGCCTAC  TCCCTCGGGG

5161  GCAGACCACG  CCTTTGGAGC  CGCCAGATGC  GTAGAATCGG  TCCGATACAA  TGTGAGAGCG

5221  CCTATTTCGC  GAGCAACCTA  ACATTGGCGT  GTTCTGCGCC  GTCGGCCGAG  GGCTACATAA

5281  CCTGTTTCCG  AGACGGCTGA  AGGGGGATTC  TCAGGATCGG  ACTTGGGCCA  GCAAGAGGCC

5341  CGTTCAACGT  TTTCGGACTC  CTTGAGGCCC  TCACCGGGGC  ACAACGGGAA  GCTGAAAGAC

5401  CCTAAGATGC  TTTCGCCCCA  TGAAAGGGGC  AGAGAGAATC  GCGACCCTAG  CTGCTAAAAA

5461  GTATGGCGAT  CTAGGCAAGT  CAAAGTGAGG  GCACCGCGCC  CAGCTACTCG  GCACGTATAT

5521  GTTAGTTAAG  GCCGACTTGA  TGAACAGTCT  CCCTTGGTCG  ACAAGGGGAT  GGGGCTCACG

5581  AAAGTCGCAT  TTTGCGCCAG  ACCAGAAGAC  AGGCGTGGGG  GGCTCTAAGG  GGCCGACCAG

5641  AATTCGAAAG  TCGACTCTCG  TCGTCCGTAG  GAGAAAATCT  CGTGGTGTGC  CCAGTCTCTG

5701  TGATTTAAGA  GCTTTTTGGA  TTAGCTATAG  AACATCGCGT  AAAACGAACG  GAGCGCCTGG

5761  AGCGCGCAGC  GAGGGATTGC  CAGGTACGGG  AGCTGTCTGT  ACGGTATATC  ATCGTACATG

5821  CGTCTATTCG  CTCCATTAGT  GGGACAAGAC  GCACAGGGCA  CTACCTCGCC  GATAACTCGA

5881  TAAAGGCGAG  CAAGCCTGTA  CCGGGTCACT  TCAGCGGAAT  AGCCGATATT  CGGGTCACGA

5941  CAAACGGCAA  TTGCATCGCT  CCACTCACCA  AGCCCCGCCA  CGTTCGACGA  GATAGAGTCT

6001  AAAGAGACCC  CTATGAGGAG  TCCGACGAAG  GGGGTGTGTC  TGTCCGCCAT  GTTGGGCGAA

6061  AGGGTGTTAT  TTAGACAGGC  GGTTGGTGGG  GAAAACTACT  TCTATTGGGT  GCGGACCCCG

6121  ACAGAATCGT  TACCAACAAT  CAGTCCTAGA  CTGTTGCCAC  AACGCCGTAA  CTAGCGACCC

6181  CGGGCGGGTA  GACGCAGCTT  TTTGGAGAAC  GCGGCGCGCC  CATACTACGG  GGATTTGGGC

6241  ATCGCGTCGA  GCGTTATACA  GATGAGCTCT  CCAATCCGGT  GCAAGTATAG  CAAGACACCC

6301  GCTGGATGTC  GAACCCACTA  GGAGTGAATC  TTTAGGATTA  GGGGTGGGTT  TAGGTCTGTT

6361  CCTCTAGGGA  AGTTGCCTCT  TCATGGCGAG  CTGGGGCCGC  TCTCGGCGAG  CATAAGCCAC

6421  ACGTCCCAAT  TCAATAGAGA  TCAGCTCTGA  TTTGGATAGC  CGCACAACGG  GAGCCCCTTT

6481  TATGAGCAGT  AATAGATTGG  ATGCTGCAGA  AGTACCCCTC  GAGCTGATTT  TGGTGCCTTC

6541  TTCCAAACTC  TAGATGACTG  GCTATGGTTG  GCGCGTCATA  CCCGTTTTCC  TCCCAGGCTA

6601  TTGGTCAAGC  GTGGAGGGAA  GGTTGTAAAG  TTGCAAGTCT  AGCTGTAGAG  CACAGTACCT

6661  CTAAGATCTT  TGAGGTAGTC  CCGAGAGTCG  GAGTTGATAG  GCGGCCAGTT  CTTGGGGCGG

6721  AGCCCCGGAT  CTGACTCTGC  GGGGGGCATA  GTTGGAGTCA  AAGCTAAGCG  CCTCGCCTAA

6781  ATGCTGGTGG  TACTGGATCC  GCCCCCAAAT  ACGTATATAG  GCTTCCCGGG  CCGATCATAC

6841  TAGCGCGGGG  CGAGTAAGGG  GGGGCCCGGG  CGATACCGAG  TTTCCTCTAT  GGAGCTTACC

6901  GGTTTCCCAG  GGCGACAGTG  TACATGCCGG  TGGTAGCGGG  GCAGCATCCC  TGTAACACGC

6961  GGCGATGCCC  TGAGCACTAG  GCGCTATCGG  CGTCCCTTGG  ATGCCCACCT  GTTTATTCTG

7021  AGTCCCCGTC  TTCCGCCCGC  CAAGGCTGAT  CAATACTCAG  CTAAGCAAGC  TTTCCTTTCA

7081  CCTGTTCGGG  TTTCGACGTG  ACTAGTCAGT  CCCGAAACAG  AAAGGTCGGT  GGTAAGGTCA

7141  GTTAACGGCC  GCTACCTTCA  GTAAGCCAAT  ACTAAGGGCG  AAATTACTCC  GTATTCTTCC

7201  CGCAGTACGT  TGCTGCAATC  CGGGGACCTT  CAAGCAGAGG  TGGCTAGTTC  CCGGGTAGCG

7261  GTTGGATGTA  CCGCCGGACT  TCGCAGTACG  AGTTGGCGCG  ACGGCACCAC  TATAGATTCC

7321  TAACATGCTT  AGTCACACGC  AGACAGTTTT  GGCTCACTAT  TGTCCGAAGG  TGGGCCGGAG

7381  TTGTCGCGCA  ACTGCGTTCT  ATGGGGTACG  CGCTACGACC  ATCATACGGC  GCGGGTCGAA

7441  CCTGCGCCAT  CGCTGGCCGC  ATGGTAACAC  GGGTTCAACG  CCTCGCGTAG  GTGTGGGCGA

7501  TCAATTCTGA  ACTTCCGCGT  TACTCGAAAG  CGATGCCGGG  AAATGAACTA  TTCGACCTCT

7561  GGGATTCAGC  TACCGGTCTG  CTGGCACTCA  TGCGGAGCGC  CCCAGACTTA  AAAGACCGTC

7621  TAGTTCGGAG  TCCCACCGTG  ATCCGCTCCT  TTTCTCAAGT  CGCGTTCGGG  AAGTCTCGCT

7681  CCACCAACCC  CCCTACCAAC  CCGGCCATAT  CCGGCTGGAG  TTGCCGCCGT  GCCTGACTTC

7741  GTAAGCGTAA  GTTTCCAGAT  ACCCCTGATA  GGCTCGGGGC  GCGCTGGGCC  GACCTCGCAG

7801  ACCGGGAGCC  CGGGCTGGGT  TTCGGAGTCG  GTGGGCGATG  AATAATAACC  CTTGCTCCAG

7861  CCACATCGAC  CGCGCTACTT  ATTTGGGGTA  ATAGTCAGCA  CTGGGGCATC  TGGGCCTTAT

7921  CCGTCCGTAC  TCTTAGTATC  CGTGGACTGC  TTATCATCGC  AATCCGTCGG  CTCATGAGAA

7981  CGGGTGCCCA  AAACAGCAGT  CACCAGGCCA  TGTCTCGCGA  GTTGACGCGG  TGTCAACTCG

8041  TGGGGTACGC  GCTATGAAGC  CGGCGGCTCG  ATGAGGAGGG  TTTGTCCGCT  GGGATCGGAC

8101  AAAGCACCAC  ACGGATCCAG  TACAAGACTC  TCAGACCCGT  CCCCGCTACC  CTTGTGGATG

8161  TAGTCACTGG  GAAACCGCTG  TTTCGCCTGT  ATGGTGTTTT  CATCCGCGAA  TCGATCAAAT

8221  CTGGCGGTCT  CCAGACTCCG  CCACCAGGGG  CAGCTGCATA  CTCCAGGGCA  CCTAAGACAA

8281  GGGCCCCCGG  TGGAGATTTG  GTCAATAACA  TAGCGGGCGA  CGGACTTTCG  TACCGCTGCG

8341  AGACTGTGGG  TAGTACTCTC  GGTTCAGGCT  TGCTCGTCTG  TGCCTTGCGC  TATGCTGACG

8401  GTTCTGCAGT  GTGAGCCTAA  TCCGATAACT  ACGTCCATTG  CACGAGGCCG  GTCCCGGCAT

8461  ATCGGTCCTT  GCGTGTGGCC  GTGGACGATG  ACAGGAGAGT  TGCACGTGAA  GGTAACCACG

8521  CGATAGGGTA  GGGTGAGGGC  ACCGGCTAAT  TAAGTGTGCC  TTCGAGTCGC  GCGCATACGG

8581  AAAAGCCACC  CTGGCAACCT  ACTTTCCACA  CACTAATCTT  TATTTGTGTT  AAGCGTATGA

8641  GCCCCACAAC  ACCAGATGCT  ATATTAGGTG  GAAGAACAGT  TATAGGAAAT  TTGGGTGACT

8701  AGGTGGTGTT  CGCTTGAGCC  ATTGGGCGAC  GGTCGTTGCG  GGAAAG

Claims (10)

1.一种水稻叶形调控基因NRL1编码的蛋白质，其特征在于：该蛋白质为SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的水稻叶形调控基因NRL1编码的蛋白质，其特征在于：所述氨基酸序列还包括在SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列中添加、取代、***或缺失一个或多个氨基酸或其他物种的同源序列而生成的氨基酸序列或衍生物。

3.一种编码权利要求1或2所述蛋白质的基因，其特征在于：该基因为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的基因，其特征在于：所述核苷酸序列还包括在SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列中添加、取代，***或缺失一个或多个核苷酸而生成的突变体、等位基因或衍生物。

5.一种含有权利要求3或4所述基因的质粒。

6.一种含有权利要求3或4所述基因的植物表达载体。

7.一种宿主细胞，其特征在于：该宿主细胞含有权利要求3或4所述的基因序列。

8.根据权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于：该细胞为大肠杆菌细胞、农杆菌细胞或植物细胞。

9.如权利要求3所述的水稻叶形调控基因NRL1的用途，其特征在于：用于改良水稻叶宽或卷曲度。

10.根据权利要求9所述的水稻叶形调控基因NRL1的用途，其特征在于：用具有SEQ IDNO：1所示的核苷酸序列的基因转化水稻细胞，再将转化后的水稻细胞培育成植株。

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