CN101804162B

CN101804162B - 抗鸡新城疫病毒的中药组合物及制备方法

Info

Publication number: CN101804162B
Application number: CN2010101489712A
Authority: CN
Inventors: 崔斓斓; 张慧茹; 刘来亭; 范根成; 齐仁立; 贺秀媛
Original assignee: Henan University of Technology
Current assignee: Henan University of Technology
Priority date: 2010-04-19
Filing date: 2010-04-19
Publication date: 2011-08-31
Anticipated expiration: 2030-04-19
Also published as: CN101804162A

Abstract

一种抗鸡新城疫病毒的中药组合物及制备方法，其特征在于：该中药组合物包括下述重量份数比的原料，其中：板蓝根5～25份、金银花5～25份、柴胡3～20份、贯众5～15份、白茅根4～20份、黄芩5～20份、丹皮5～15份、藿香4～12份、茯苓3～19份、苦参4～12份。本发明的中药组合物不仅有效地防治动物性疾病、洁净生态环境，且能提供天然绿色的生态产品，更好地为人类健康、畜牧业生产服务，该中药组合物具有巨大的抗病、提高免疫力的优势。

Description

抗鸡新城疫病毒的中药组合物及制备方法

技术领域

本发明涉及兽药制备技术领域，具体说是涉及一种天然绿色的中药组合物及其制备方法。该组合物对新城疫病毒具有明显的抑杀作用、能调节机体免疫、提高整体抗病性能。

背景技术

新城疫是由新城疫病毒引起的、以感染禽类为主的一种急性、高度接触性、烈性传染病，是威胁世界养禽业的主要疾病之一，被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病。目前主要采用疫苗接种预防该病的发生，基本控制了典型性新城疫的流行，但病毒变异、野毒感染、疫苗保管或使用不当、其它疾病对抗体产生的干扰等等因素都会造成免疫不全或失败，致使非典型性新城疫经常发生，严重影响产蛋、增加生产成本、污染周围环境造成恶性循环，给养鸡业造成巨大的经济损失。对新城疫疾病的治疗药物主要是化疗药盐酸金刚烷胺和利巴韦林，动物试验表明两种药物均有致畸作用，且盐酸金刚烷胺还可诱导耐药毒株的产生，长期应用使病毒产生抗药性而影响疗效。

中草药在世界范围内被大家所公认和大量使用，试验表明中草药在发挥其临床疗效时，体现的是“药食同补”的原则，不仅提供相应的植物营养素，同时，多层次、多靶点地发挥抑杀病毒、提高免疫力的作用，且病原微生物对其不易产生耐药性。

发明内容

本发明的目的正是针对上述现有技术中所存在的不足之处而提供一种主要以抗禽类新城疫病毒为主的抗鸡新城疫病毒的中药组合物及制备方法。该中药组合物也可用于其它动物抗病毒性疾病。

本发明的目的可通过下述技术措施来实现：

本发明的抗鸡新城疫病毒的中药组合物包括下述重量份数比的原料，其中：板蓝根5～25份、金银花5～25份、柴胡3～20份、贯众5～15份、白茅根4～20份、黄芩5～20份、丹皮5～15份、藿香4～12份、茯苓3～19份、苦参4～12份。

本发明的制备方法包括下述步骤：

a、按重量份数比称取藿香，采用超临界萃取技术提取挥发油，并用体积份数比为1∶3的乙醇溶解备用；

b、将a步骤已提取过取挥发油的藿香药渣同其它中药原料一起进行水提取，首先浸泡1-2h，用水量以原料药材被水浸没即可，再用热回流提取5-8h，之后进行过滤，取滤液浓缩至原浸提液的1/100成流浸膏状；

c、对水提过的药渣进行2次醇沉，首先在残渣中加入3-5倍体积比的乙醇含量为70％的乙醇进行醇沉12-15h，然后再加入3-5倍体积比的乙醇含量为80％的乙醇进行再次醇沉12-15h；过滤去残渣，滤液进行减压回收乙醇；

d、合并步骤a、b、c所制备出的三种提取液，用纯化水稀释至处方量1g/mL，4℃保存备用。

中医理论认为新城疫等病毒性疾病为疫疠之邪，属于瘟病范畴。中草药的清热药、解表药及其所组成的方剂，抗病毒的基本原理在于“扶正祛邪”，多层次、多靶点地阻断病毒吸附、穿入、复制、成熟等过程的某一或某些环节而抑杀病毒，并通过促进机体的特异性和非特异性免疫功能而提高机体的免疫功能，达到防治新城疫疾病的疗效。

组方的君药主要包括板蓝根、金银花、柴胡、贯众，为清热解毒类药物，发挥抗病毒、抗菌、促进白细胞吞噬作用、解热等作用，能有效地减少病毒在体内的数量、阻断新城疫病毒的入侵，提高机体的免疫功能；臣药主要包括白茅根、黄芩、丹皮，在清热燥湿的基础上，泻火利尿、止血化瘀，消除病毒对宿主细胞的损害作用，抑制病毒的合成、组装和释放，抑制病毒的增殖；辅佐药主要有藿香、茯苓、苦参，具有芳香化湿、行气化滞、健脾宁心、调和药性等功效，促进机体的消化吸收、促进机体恢复、减少药物的毒副作用，从而达到全面抗新城疫疾病、提高机体素质的疗效。

本发明的有益效果如下：

本发明的中药组合物不仅有效地防治动物性疾病、洁净生态环境，且能提供天然绿色的生态食品，更好地为人类健康、畜牧业生产服务，该中药组合物具有巨大的抗病、提高免疫力的优势。

附图说明

图1鸡胚尿囊液NDV的HA效价。

图2“预防+治疗”组发病保护率。

图3“治疗”组发病保护率。

具体实施方式

本发明将结合以下实施例作进一步说明：

实施例1：

a、按重量份数比称取藿香4份，采用超临界萃取技术提取挥发油，并用体积份数比为1∶3的乙醇溶解备用；

b、将a步骤已提取过取挥发油的藿香药渣同按重量份数比称取的板蓝根5份、金银花25份、白茅根20份、茯苓10份、丹皮15份、贯众7份、黄芩5份、苦参6份、柴胡3份一起进行水提取，用水量以原料药材被水浸没即可。首先浸泡1-2h，再用热回流提取5-8h，之后进行过滤，取滤液在旋转蒸发仪上进行浓缩至原浸提液的1/100成流浸膏状；

c、对水提过的药渣进行2次醇沉，首先在残渣中加入3-5倍体积比的乙醇含量为70％的乙醇进行醇沉12-15h，然后再加入3-5倍体积比的乙醇含量为80％的乙醇进行再次醇沉12-15h；过滤去残渣，滤液在旋转蒸发仪上进行进行减压回收乙醇；

实施例2：

a、按重量份数比称取藿香6份，采用超临界萃取技术提取挥发油，并用体积份数比为1∶3的乙醇溶解备用；

b、将a步骤已提取过取挥发油的藿香药渣同按重量份数比称取的板蓝根25份、柴胡20份、黄芩20份、丹皮8份、金银花5份、贯众5份、白茅根4份、茯苓3份、苦参4份一起进行水提取，首先浸泡1-2h，用水量以原料药材被水浸没即可，再用热回流提取5-8h，之后进行过滤，取滤液浓缩至原浸提液的1/100成流浸膏状；

实施例3：

a、按重量份数比称取藿香12份，采用超临界萃取技术提取挥发油，并用体积份数比为1∶3的乙醇溶解备用；

b、将a步骤已提取过取挥发油的藿香药渣同按重量份数比称取的板蓝根10份、贯众15份、茯苓19份、黄芩12份、苦参12份、丹皮5份、金银花5份、白茅根5份、柴胡5份一起进行水提取，用水量以原料药材被水浸没即可。首先浸泡1-2h，再用热回流提取5-8h，之后进行过滤，取滤液浓缩至原浸提液的1/100成流浸膏状；

本发明的试验效果如下：

(1)药物的毒性试验

试验方法：将3组实施例的组合物用生理盐水分别进行0、5、10、50、100倍稀释，分别注入9日龄的SPF鸡胚尿囊腔内，0.2mL/只，隔12h再注一次，共注射2次，每个处理4个平行实验，设生理盐水对照组，共用72枚鸡胚。注射后，于37℃恒温培养箱孵育72h，每天观察鸡胚成活状态，72h未死亡的鸡胚继续孵化直至出雏。以鸡胚出现死亡的最小用药浓度为该药液的最小致死浓度。

试验结果：所有浓度药液接种鸡胚无一死亡，孵化出雏的雏鸡正常。因此，药液对鸡胚的最小致死量大于1g/mL，毒性极小或无毒。

(2)抗新城疫病毒的鸡胚试验

试验方法：

将组合物与病毒采用不同的方式进行作用。以注入组合物2-4h后再注入新城疫病毒为“预防”方式；以组合物和新城疫病毒在体外37℃恒温下作用2-4h后再注入鸡胚为“直接杀毒”方式；以先注入病毒2-4h后加入组合物为“治疗”方式。同时，将病毒和生理盐水注入鸡胚设为阳性和阴性对照，以鸡胚新城疫病毒滴度的变化和鸡胚的成活率作为衡量指标，计算组合物对鸡胚的保护率：

保护率＝(总鸡胚数-死亡鸡胚数)/总鸡胚数×100％。

注入组合物的浓度为1g/mL，以9-11日龄的SPF鸡胚为实验材料，病毒选用鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)，注射量均剂量为0.2mL/枚，每种处理设3个重复，每个重复10枚鸡胚，共用330枚SPF鸡胚。37℃恒温箱培养。弃去24h以内死亡鸡胚，收集24-72h存活鸡胚的尿囊液，采用血凝实验测定尿囊液病毒的滴度。

试验结果：

A HA效价(参见图1)

图中所示的新城疫病毒效价均为平均效价。为了便于与阳性病毒效价对照，将阳性病毒效价按三种作用方式连接成线，以突出显示；阴性生理盐水对照的病毒滴度为零。3个实施例的3种作用方式都能不同程度地抑杀新城疫病毒在鸡胚中的生长，以“预防”的作用方式对病毒的抑杀作用较强，“预防”的方式能有效地抑杀(即降低)病毒3.5-4个滴度，存活病毒总量减少47-53％；“直接”作用方式能有效地抑杀病毒2.9-3.1个滴度，存活病毒总量减少39-41％；“治疗”作用方式能有效地抑杀病毒2-2.6个滴度，存活病毒总量减少27-35％。

B鸡胚的保护率

药液对鸡胚的保护率(％)

试验各组在24h内均无鸡胚死亡。60h内，3个实施例鸡胚无一死亡，保护率为100％；病毒对照组死亡9枚鸡胚(共30枚)，死亡率30％，保护率降为70％。86h时，各实施例试验组开始出现1-2枚鸡胚死亡，保护率下降到93.3％-96.7％，而此时病毒对照组死亡鸡胚已有21枚，死亡高达70％，保护率仅为30％，实施例比阳性对照增加63.3以上的保护率。

结论：3个实施例的三种作用方式都能不同程度地抑杀新城疫病毒在鸡胚中的生长，有效地保护鸡胚免受新城疫病毒侵害，提高鸡胚的成活率。

(3)防治新城疫疾病的临床试验

试验方法：

1.致病性试验

静脉致病指数(IVPI)的测定：将血凝效价高于4Log2的新城疫活毒疫苗用灭菌生理盐水1∶10稀释，静脉接种6周龄的SPF鸡10只，每只接种0.1mL。每天观察，共计10天。将每天观察的结果记分，病鸡和重病鸡的记分主要依据临床表现。“病鸡”表现有下述一种症状，而“重病鸡”则表现下述多个症状，如呼吸症状、沉郁、腹泻、鸡冠或肉髯发绀、脸或头部肿胀、神经症状。正常鸡记作0，病鸡记作1，瘫痪鸡记作2，死亡鸡在其死后的每次观察都记为3。静脉致病指数是指10天每次观察记录的平均数。

IVPI值＝每只鸡在10天内所有数字之和/(10只鸡×10天)

测定鸡新城疫中等毒力(I系)疫苗IVPI指数为1.04。

新城疫疾病的病理模型：采用静脉致病指数(IVPI)测定方法，使用测定的IVPI指数为1.04的鸡新城疫中等毒力(I系)疫苗、经翅静脉注射0.1mL/只以致SPF鸡发病，对产生临床新城疫疾病症状的SPF鸡进行中药组合物的防治试验。

防治试验方法：

动物的分组

“预防+治疗”(即感染病毒前后持续用药)：每天喂药2次，间隔12h，每次0.2mL，喂药3天后静脉注射新城疫病毒，持续喂药。

“治疗”(即感染病毒后用药)：静脉注射新城疫病毒以制作病理模型，感染后4h开始喂药，每天喂2次，间隔12h，每次0.2mL。

阳性对照组(即感染后不用药)：仅静脉注射病毒造成该组鸡发病，不进行治疗处理。

其中，病毒组和治疗组前3天喂生理盐水，与“预防+治疗”组的试验操作次数一致。

感染病毒第二天开始观察SPF鸡的临床症状，以上述确定静脉致病指数的临床症状观察方法确定临床症状，统计发病率和死亡率，计算各中药组合物对鸡群的发病保护率。治疗实验持续13d。

发病率＝发病鸡数/总鸡数×100％

死亡率＝死亡鸡数/总鸡数×100％

发病保护率＝(总鸡数-发病鸡数)/总鸡数×100％

试验结果：

A：SPF鸡的发病和死亡率

SPF鸡的发病、死亡情况

3组实施例“预防+治疗”组的发病鸡的只数为14-16只，发病率为35-40％，经治疗无死亡；3组实施例的治疗组的发病只数为16-26只，发病率为40-65％，死亡只数为1-3只，死亡率为2.5-7.5％；病毒对照组发病率为100％，死亡率为40％。

B.发病保护率(参见图2、3)：

发病保护率即为保护鸡只不发病的百分率，如果发病保护率不为100％，即有发病的鸡，当治疗后，发病鸡只逐渐好转，保护率也随之升高。“预防+治疗”组通过前期饲喂，具有一定的抗病能力，比“治疗”组的发病保护率高出5％，“治疗”组稍低于“预防+治疗”组。“预防+治疗”组和“治疗”组的发病保护率在试验的前9d，随着新城疫病毒的感染，鸡只发病的临床症状不断明显，发病保护率也呈下降趋势。9d以后，随着中药组合物治疗效果的提高，发病鸡只的临床症状开始好转，保护率也开始逐渐呈上升趋势，实际发病保护率要高于表中早期统计的数据。

结论：3组实施例均可有效的降低鸡群对新城疫疾病的发病率和死亡率。以“预防+治疗”的防治效果好于“治疗”的效果。

5中药组合物临床疗效

实例一：河南某养殖场45日龄雏鸡、约1000只鸡发病，病鸡精神沉郁，食欲减退，不喜走路，羽毛松乱无光泽，垂头缩颈，冠和肉髯发绀，眼半闭，有的病鸡出现神经症状，两腿麻痹、站立不稳，经诊断为新城疫感染。应用本发明实施例一制备的中药组合物进行治疗，采用饮水给药的方式集中给药，治疗前后对圈舍进行严格消毒处理。用药3天后，病鸡的临床症状及精神状态明显好转，用药7天后，965只病鸡恢复健康，临床症状消失，治愈率达到96.5％，治愈一个月后进行回访，康复的病鸡没有再复发。

实例二：青岛某个体养殖户蛋鸡出现疫情，一栋2500只、280日龄的产蛋鸡出现明显产蛋下降，且软壳蛋增多，蛋壳颜色变浅，经诊断为非典型性新城疫感染。应用本发明实施例二制备的中药组合物进行治疗，采用饮水给药的方式集中给药，治疗前后对鸡舍及周围环境进行严格消毒。用药3天后鸡群采食量上升、产蛋下降减缓，用药6天后，产蛋开始恢复，壳蛋基本恢复正常，经10天用药，产蛋恢复至原95％，治愈率达99％，治愈后三个月回访，康复鸡群没有再发病。

6优点

通过以上实验结果表明，本发明抗鸡新城疫病毒中药组合物，经过鸡胚、SPF鸡、临床鸡群试验，对鸡胚无毒性作用，对人类安全；对典型性和非典型性新城疫疾病均有较强的抑杀作用，达到防护和治疗的双重作用，同时，增强整体免疫力，保护鸡群抵抗新城疫疾病，促进动物生长发育，切实具有良好的生产实用效果。

Claims

1.一种抗鸡新城疫病毒的中药组合物，其特征在于：该中药组合物由下述重量份数比的原料制成，其中：板蓝根5～25份、金银花5～25份、柴胡3～20份、贯众5～15份、白茅根4～20份、黄芩5～20份、丹皮5～15份、藿香4～12份、茯苓3～19份、苦参4～12份；所述中药组合物的制备方法包括下述步骤：

b、将a步骤已提取过取挥发油的藿香药渣同其它中药原料一起进行水提取，用水量以原料药材被水浸没即可，首先浸泡1-2h，再用热回流提取5-8h，之后进行过滤，取滤液在旋转蒸发仪上进行浓缩至原浸提液的1/100成流浸膏状；

c、对水提过的药渣进行2次醇沉，首先在残渣中加入3-5倍体积比的乙醇含量为70％的乙醇进行醇沉12-15h，然后再加入3-5倍体积比的乙醇含量为80％的乙醇进行再次醇沉12-15h，过滤去残渣，滤液在旋转蒸发仪上进行进行减压回收乙醇；

d、合并步骤a、b、c所制备出的三种提取液，用纯水稀释至处方量1g/mL，4℃保存备用。