CN101755205B

CN101755205B - 铅浓度测定用试剂以及铅浓度测定方法

Info

Publication number: CN101755205B
Application number: CN200880025219XA
Authority: CN
Inventors: 浅野贵春
Original assignee: Kowa Co Ltd
Current assignee: Kowa Co Ltd
Priority date: 2007-07-20
Filing date: 2008-07-18
Publication date: 2012-01-11
Anticipated expiration: 2028-07-18
Also published as: JPWO2009013884A1; EP2169399A1; US8133739B2; US20100184234A1; WO2009013884A1; CN101755205A; EP2169399A4; JP5032577B2

Abstract

本发明提供一种能够正确、高敏感度并且简易地测定共存有钙离子的试样溶液中的铅离子浓度(也简称为铅浓度)的铅浓度测定用试剂以及使用该试剂的铅浓度测定方法。铅浓度测定用试剂含有(A)水溶性卟啉衍生物或其盐、(B)选自聚丙烯酰胺、聚乙烯醇和聚乙二醇中的至少一种以及(C)钙离子供给化合物。

Description

铅浓度测定用试剂以及铅浓度测定方法

技术领域

本发明涉及使用水溶性卟啉的铅浓度测定用试剂以及使用该试剂的铅浓度测定方法。

背景技术

铅除了具有传导性等在电化学上有用的性质以外，由于容易进行加工，在焊料、电池、玻璃材料等各种各样的工业制品中被使用。这些物品作为城市垃圾和工业废弃物被废弃，用焚烧设备进行焚烧时，有时从焚烧灰或飞灰中检出高浓度的铅。将这些灰进行填埋处理，周边区域由于雨水等产生铅的溶出等问题。已知即使是微量的铅对人体也有很强的毒性，表现出神经***的障碍，或者贫血、头痛、食欲不振、铅绞痛等中毒症状。因此，设立填埋标准等，开发了防止铅溶出的处理剂和处理方法、以及溶出液中的铅浓度的测定方法。另外，由于铅对其它多数生物也显示毒性，因此除了设定环境标准以及排水标准等外，希望能有适用于大范围的环境分析的简易测定方法。

作为铅的测定方法，一般有使用原子吸光光度计和ICP发光分光光度计的方法，但是除了需要供给乙炔气体和氩气、设置排气管道之外，还要求复杂的操作，因此不适用于现场的环境分析和焚烧现场的日常分析。

另一方面，根据比色试剂的显色估算浓度的吸光光度法由于能够利用小型且廉价的装置和简单的操作进行测定，适用于简单测定。而且，铅的测定所使用的比色试剂中，已知有水溶性卟啉和导入卟啉核的聚合物等的卟啉衍生物，能够测定水溶液中微量的铅浓度。

但是，在作为环境分析对象的试样溶液中，一般除了铅之外还含有各种夹杂物，这些物质成为高敏感度并且正确地测定铅时的干扰物质。例如，在海水、河水、自来水、工厂排水、灰溶出液等环境中普遍发现的钙，在水溶液中主要以和铅相同的2价离子共存，因此在基于比色试剂的化学反应的吸光光度法中，成为铅测定的干扰物质。尤其是在灰溶出液中含有数十至数百毫摩尔浓度的高浓度的钙，因此，在比色试剂使用水溶性卟啉的吸光光度法中，难以对灰溶出液中的铅浓度进行测定。这样含有钙的试样溶液中的铅浓度通过吸光光度法进行测定时，作为其前处理，必须将钙和铅分离，或者将钙掩蔽。

作为将钙和铅分离的方法，有使用以亚氨二乙酸等为主要成分的螯合树脂的方法。是如下的方法：因为亚氨二乙酸与以铅为首的重金属的亲和性强，向由螯合树脂形成的柱子或者过滤器中通入试料溶液，仅捕捉铅之后，通入酸性洗脱液再将铅洗脱出来，测定该溶液中的铅浓度。该方法需要使用泵或者注射器等进行多次正确容量的通液，因此操作变得复杂，不足以称之为简单的测定。

作为钙的掩蔽剂，已知有乙二胺四乙酸(EDTA)以及乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸(EGTA)。但是，这些物质也同时和铅进行结合。为了将高浓度的钙掩蔽需要添加高浓度的掩蔽剂，此时，比钙还微量的铅全部被掩蔽。因此，使用水溶性卟啉的吸光光度法中的铅测定中，不能使用EDTA和EGTA作为钙的掩蔽剂。

作为试样溶液中含有干扰成分的钙时的吸光光度法的铅测定方法，除此之外，还报告了使用预先添加了钙的导入卟啉核的聚合物的铅浓度测定方法(专利文献1)。该方法能够消除钙的影响，但是在试剂的制造中包括聚合过程，因此调制试剂时需要时间和成本。另外，导入聚合物内的卟啉，其吸收峰宽度宽，使敏感度降低，因此在环境标准和排水标准水平的更微量的铅分析中，期望能够进一步提高敏感度。

专利文献1：国际公开第2006/011549号小册子

发明内容

因此，本发明的目的在于提供一种能够正确、高敏感度并且简易地测定共存有钙离子的试样溶液中的铅离子浓度(也简称为铅浓度)的铅浓度测定用试剂以及使用该试剂的铅浓度测定方法。

本发明的发明人对这些现状进行了深入的研究，结果意外地发现，使用水溶性卟啉的吸光光度法的铅浓度测定中，在使用钙供给化合物、以及聚丙烯酰胺、聚乙烯醇或聚乙二醇的高分子时，能够良好地排除初始钙离子的干扰，能够正确、高敏感度并且简易地测定共存有钙离子的试样溶液中的铅离子浓度，从而完成本发明。

即，本发明提供一种铅浓度测定用试剂，含有(A)水溶性卟啉衍生物或其盐、(B)选自聚丙烯酰胺(以下，简称为PAAm)、聚乙烯醇(以下，简称为PVA)和聚乙二醇(以下，简称为PEG)中的至少一种以及(C)钙离子供给化合物。

另外，本发明还提供一种铅浓度测定方法，其特征在于：混合上述铅浓度测定用试剂和试样溶液，测定混合液的吸光度。

发明的效果

本发明的铅浓度测定用试剂不受试样溶液中存在的钙离子的影响，能够正确且简易地测定铅浓度，作为排水、废液、灰溶出液(ashleachate)等的铅浓度测定用试剂有用。

附图说明

图1是使试样溶液(铅和0～50mM钙混合液)和TPPS反应后的吸收光谱的图。

图2是分别使试样溶液(铅和0～150mM钙混合液)和TPPS(non)，上述试样溶液和TPPS以及PAAm(PAAm)，上述试样溶液和TPPS以及钙供给化合物(Ca)，上述试样溶液和TPPS、PAAm以及钙供给化合物(PAAm+Ca)反应后的吸收光谱的图。

图3是分别使试样溶液(铅和0～150mM钙混合液)和TPPS、PVA以及钙供给化合物(PVA+Ca)、上述试样溶液和TPPS、PEG以及钙供给化合物(PEG+Ca)反应后的吸收光谱的图。

图4(a)是使试样溶液(铅和0～50mM钙混合液)和TPPS、EDTA以及钙供给化合物反应后的吸收光谱的图。

图4(b)是使试样溶液(铅和0～50mM钙混合液)和TPPS、EGTA以及钙供给化合物反应后的吸收光谱的图。

图5是分别使试样溶液(铅和0～150mM钙混合液)和TMPyP(non)，上述试样溶液和TMPyP以及PAAm(PAAm)，上述试样溶液和TMPyP以及钙供给化合物(Ca)，上述试样溶液和TMPyP、PAAm以及钙供给化合物(PAAm+Ca)反应后的吸收光谱的图。

图6是在简易型铅测定装置中，使试样溶液(铅和0～150mM钙混合液)和(a)本发明铅浓度测定用试剂(TPPS+PAAm+Ca)、(b)参考铅浓度测定用试剂(卟啉聚合物)反应后的吸收光谱的图。

图7是在简易型铅测定装置中，使试样溶液(0～0.1mg/L铅水溶液)和(a)本发明铅浓度测定用试剂(TPPS+PAAm+Ca)、(b)参考铅浓度测定用试剂(卟啉聚合物)反应时的校准线。

具体实施方式

作为本发明中使用的(A)水溶性卟啉衍生物或其盐，可以列举含有卟啉骨架、与铅离子反应、使特定波长的吸光度发生变化的物质。

作为具体的卟啉衍生物，可以列举下式(1)所示的水溶性卟啉。

(式中，X¹～X⁴中的至少1个表示

其余表示氢原子，其中，R¹表示烷基、磺烷基、羧烷基、羟烷基或氢原子，R²和R³表示羟基、羧基、氨基、磺酸残基、磷酸残基或三烷基铵基。)

上述式(1)中，作为R¹所示的烷基，可以列举甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、正戊基、正己基等碳原子数为1～6的烷基，特别优选甲基。另外，作为磺烷基，可以列举磺甲基、磺乙基、磺丙基、磺丁基、磺戊基、磺己基等的磺基C_1-6烷基。作为羧烷基，可以列举羧甲基、羧乙基、羧丙基、羧丁基、羧戊基、羧己基等羧基C_1-6烷基。作为羟烷基，可以列举羟甲基、羟乙基、羟丙基、羟丁基、羟戊基、羟己基等羟基C_1-6烷基。

作为R²和R³的具体例子，可以列举羟基、羧基、氨基、磺酸残基(-SO₃H)、磷酸残基或三甲基铵基，特别优选磺酸残基(-SO₃H)、三甲基铵基。

作为X¹～X⁴的优选例子，可以列举磺苯基、磺基噻吩基、三甲基铵苯基、羟基苯基、羧基苯基、氨基苯基、磷酰基苯基、吡啶鎓基、甲基吡啶鎓基、磺乙基吡啶鎓基、羧甲基吡啶鎓基、羟乙基吡啶鎓基等。进一步优选4-磺苯基、4-磺基噻吩-2-基、4-三甲基铵苯基、4-羟基苯基、4-羧基苯基、4-氨基苯基、4-磷酰基苯基、N-甲基吡啶鎓-4-基、N-甲基吡啶鎓-3-基、N-磺乙基吡啶鎓-4-基等。更优选4-磺苯基、4-三甲基铵苯基、N-甲基吡啶鎓-4-基、N-甲基吡啶鎓-3-基等。

作为特别优选的式(1)的化合物，可以列举5，10，15，20-四(4-磺苯基)卟啉(以下，简称为TPPS)、5，10，15，20-四(N-甲基吡啶鎓-4-基)卟啉(以下，简称为TMPyP)、5，10，15，20-四(4-三甲基铵苯基)卟啉等，其中，从测定敏感度的观点出发，优选TPPS或TMPyP。

本发明的式(1)所示的水溶性卟啉衍生物，根据取代基X¹～X⁴的种类，也可以是盐的形态。具体而言，可以列举盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、对甲苯磺酸盐等酸加成盐等。

本发明中使用的式(1)所示的水溶性卟啉，是作为微量金属的比色试剂所公知的化合物。该卟啉衍生物例如可以通过使四苯基卟啉的苯基在浓硫酸中磺化而制造，该四苯基卟啉通过吡咯与苯甲醛的脱水缩合、和利用对氯醌进行的氧化而得到(J.S.Lindsey，I.C.Schreiman，H.C.Hsu，P.C.Kearney，and A.M.Marguerettaz，“Rothemund andAdler-Longo Reactions Revisited：Synthesis of Tetraphenylporphyrinsunder Equilibrium Conditions”，J.Org.Chem.，1987，52，827)。另外，也可以作为市售品得到。

从试样溶液中微量含有的铅浓度测定的精度的观点出发，铅浓度测定用试剂中的式(1)所示的水溶性卟啉的浓度，作为使用时的浓度，优选为0.01～1000μmol/L，更优选为0.1～500μmol/L，特别优选为1～100μmol/L。

作为本发明中使用的(B)成分，为聚丙烯酰胺(PAAm)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)，其中，从测定敏感度以及稳定性的观点出发，优选聚丙烯酰胺。它们都是水溶性的高分子，是分别在各种各样用途中被使用的公知的化合物，能够作为市售品得到。

本发明的铅浓度测定用试剂中的PAAm浓度，作为使用时的浓度，优选为1～40质量％，特别优选为10～25质量％。另外，PAAm的平均分子量优选为1000～100000，特别优选为5000～20000。

本发明的铅浓度测定用试剂中的PVA浓度，作为使用时的浓度，优选为0.1～20质量％，特别优选为1～10质量％。另外，PVA的聚合度优选为100～10000，特别优选为200～2000。

本发明的铅浓度测定用试剂中的PEG浓度，作为使用时的浓度，优选为0.1～20质量％，特别优选为1～10质量％。另外，PEG的分子量优选为100～50000，特别优选为10000～40000。

一般而言，PAAm除了作为纸力增强剂、粘合剂、凝集剂使用以外，也作为有助于化妆品的适度粘性和稳定性的基剂使用，另外，凝胶化后的PAAm可以在电泳中使用。PVA被用于粘合剂、表面活性剂、薄膜材料等中，PEG作为药剂等的稳定剂或基剂被利用。但是，没有将PAAm、PVA、PEG作为钙离子的掩蔽剂使用，或者作为有助于水溶性卟啉和铅离子的稳定反应的添加剂使用的例子。

本发明的铅浓度测定用试剂所使用的(C)成分的产生钙离子的钙离子供给化合物，在不损害本发明的效果的范围内，只要是游离钙离子的化合物就没有特别限制。例如可以列举氯化钙、硫酸钙、硝酸钙、碳酸钙、氢氧化钙、磷酸氢钙、磷酸钙等的无机钙盐；乙酸钙、甲酸钙、乳酸钙、葡糖酸钙、安息香酸钙、异丁酸钙、丙酸钙、水杨酸钙等有机钙盐。作为钙离子供给化合物，优选无机钙盐，例如氯化钙、硫酸钙以及硝酸钙，特别优选氯化钙。

本发明的铅浓度测定用试剂中的钙离子供给化合物，优选在使用时能够供给0.1～100mmol/L、特别为5～50mmol/L的量。

本发明的铅浓度测定用试剂中，除了上述成分和水以外，在不损害本发明的效果的范围内，可以添加通常溶液中的重金属离子测定中使用的任意成分。作为这样的任意成分，可以列举pH调整剂、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂、对其它金属的掩蔽剂等。

作为pH调整剂，可以列举选自N-环己基-3-氨基丙磺酸(以下，有时简称为CAPS)、N-环己基-2-氨基乙磺酸、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠等中的至少一种。优选用于将铅浓度测定用试剂和试样溶液的混合液的pH调整至8～13、进一步优选为9～11(25℃)的pH调整剂。

作为表面活性剂，可以列举阳离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂等。

作为对其它金属的掩蔽剂，可以列举乙二胺-N，N’-二丙酸、乙二胺-N，N’-二乙酸和1，6-二氨基己烷-N，N，N’，N’-四乙酸等。

本发明的铅浓度测定用试剂可以是原液、浓缩液、粉体、糊状等任意形态。另外，可以将铅浓度测定用试剂的各成分适当地以分别或者混合的状态进行保存。

本发明的铅浓度测定方法通过混合上述铅浓度测定用试剂和试样溶液，测定混合液的吸光度而进行。

在测定中，优选将铅浓度测定用试剂和试样溶液的混合液的pH调整为8～13，进一步优选为9～11(25℃)。另外，该混合液的pH在该范围以外时，优选预先使用pH调整剂将铅浓度测定用试剂的pH调整到该范围内。

在进行吸光度测定之前，优选对铅浓度测定用试剂和试样溶液的混合液进行加热等，使反应充分进行。加热温度优选为30～90℃，加热时间优选为1～60分钟。其中，从精度和敏感度以及生产率的观点出发，特别优选加热时间为60～80℃，加热时间为3～15分钟。

使用本发明的铅浓度测定用试剂测定试样溶液中含有的铅浓度的方法，例如可以通过吸光度法，采用利用标准试样的校准线进行。

利用吸光度计测定的吸光波长优选为350～700nm、进一步优选为400～500nm、特别优选为460～490nm。

本发明中对铅浓度进行测定的试样没有特别限定，可以列举海水、河水、自来水、工厂排水、焚烧灰和飞灰等灰溶出液等的环境试样；食品、饮料、农林水产品、植物、药剂、人或动物的血液、唾液、***等体液、肾脏、心脏、脑等脏器、肌肉、皮肤、神经组织、头发、粪便等生物体试样等。

使用本发明的铅浓度测定用试剂的铅浓度测定方法中，试样溶液除了这些试样的原液以外，也包括为了测定将试样以公知的方法适当提取、浓缩、稀释等得到的提取液、浓缩液、稀释液等。该试样溶液中的钙离子浓度没有特别限定，但优选为150mM以下，特别优选为50mM以下。

实施例

以下，列举实施例对本发明进行更详细的说明。但是，本发明不受这些实施例的限定。

参考例1仅含TPPS的铅浓度测定用试剂A

铅浓度测定用试剂的调制：调制成含有作为水溶性卟啉的TPPS50μM、作为pH调整剂的CAPS 180mM的水溶液(pH 10)，作为铅浓度测定用试剂A。

试样溶液和标准试样的调制：作为试样溶液，准备含有0.15mg/L的铅和0.5、5、15、50以及150mM的氯化钙，且pH调整为9～12.5的铅-钙混合水溶液。另外，为了制作校准线，作为标准试样，准备含有0以及0.15mg/L的铅的标准溶液。

铅浓度的测定：混合250μL铅浓度测定用试剂A和250μL试样溶液，在75℃加热5分钟之后，使用分光光度计测定吸收光谱。

将得到的吸收光谱标准化，除去基线的变动。同样地，使用标准试样代替试样溶液，测定吸收光谱。

从与标准试样的混合得到的吸收光谱，在470nm附近选择与铅的反应由来的吸光度变化大的波长，制作校准线。使用该校准线，由与试样溶液的混合得到的吸光度，估算试样溶液中的铅浓度。

图1表示使用只含TPPS的铅浓度测定用试剂A时的吸收光谱。在466nm附近可以观察到铅由来的峰。但是，即使铅浓度相同，共存的钙浓度增加时，峰高也减少，最终峰消失。将通过图1所算出的铅浓度、相对共存的钙浓度绘制曲线而得到的曲线图表示于图2(non：参照)中。即使仅有少量的钙共存也会导致求出的值比本来的铅浓度(0.15mg/L)低，无法进行正确的测定。

试验例1含有(A)成分：TPPS、(B)成分：PAAm和/或(C)成分：氯化钙的添加剂的铅浓度测定用试剂B1～3

铅浓度测定用试剂的调制：调制成含有作为添加剂的聚丙烯酰胺(平均分子量10000)20质量％和/或氯化钙10mM、作为水溶性卟啉的TPPS 50μM、作为pH调整剂的CAPS 180mM的水溶液(pH 10)，作为铅测定用试剂B1～3。作为添加剂，试剂B1仅含有聚丙烯酰胺，试剂B2仅含有氯化钙，试剂B3并用聚丙烯酰胺和氯化钙。

试样溶液和标准试样的调制：使用与参考例1相同的物质。

铅浓度测定：使用试剂B1～3代替铅浓度测定试剂A，与参考例1同样进行。

图2表示使用铅浓度测定试剂B1～3时的铅浓度测定结果。使用仅添加聚丙烯酰胺的试剂B1时，高浓度的钙共存引起的影响多少被改善了，但低浓度(约15mM以下)的钙共存时有铅浓度测定结果偏低的倾向。使用仅添加钙的试剂B2时，与不含添加剂时相同，显示对应共存钙浓度、测定值单调降低的倾向。另一方面，使用共同添加聚丙烯酰胺和氯化钙的试剂B3时，从低浓度到高浓度共存钙时，都能算出接近本来的铅浓度的值。

试验例2含有(A)成分：TPPS、(B)：PVA和(C)成分：氯化钙的添加剂的铅浓度测定用试剂C，以及含有(A)成分：TPPS、(B)成分：PEG和(C)成分：氯化钙的添加剂的铅浓度测定用试剂D

浓度测定用试剂的调制：调制成含有作为添加剂的PVA(聚合度500)2.5质量％和氯化钙10mM、作为水溶性卟啉的TPPS 50μM、作为pH调整剂的CAPS 180mM的水溶液(pH 10)，作为铅浓度测定用试剂C。

另外，调制成含有作为添加剂的PEG(平均分子量20000)5质量％和氯化钙10mM、作为水溶性卟啉的TPPS 50μM、作为pH调整剂的CAPS 180mM的水溶液(pH 10)，作为铅浓度测定用试剂D。

除了使用试剂C或试剂D代替上述铅浓度测定用试剂B3以外，与上述试验例1相同地进行。

图3表示使用PVA和氯化钙并用添加剂的铅浓度测定用试剂C、PEG和氯化钙并用添加剂的铅浓度测定用试剂D时的结果。使用铅浓度测定用试剂C和D的任一个时，即使共存的钙增加，测定值也不降低，能够算出接近本来的铅浓度的值。

参考例2含有成分(A)：TPPS、掩蔽剂：EDTA或EGTA的铅浓度测定用试剂E和F

调制含有作为水溶性卟啉的TPPS 50μM、作为pH调整剂的CAPS180mM、EDTA或EGTA 50mM的水溶液(pH10)，作为铅浓度测定用试剂E和F。EDTA或EGTA一般作为钙螯合剂(掩蔽剂)而已知，EDTA和EGTA的浓度为50mM，即使为数十毫摩尔以上的钙也能够掩蔽。

除了使用试剂E或F代替参考例1的试剂A以外，与参考例1相同地进行。

图4(a)、(b)表示使用铅浓度测定用试剂E和试剂F时的结果的吸收光谱。使用EDTA或EGTA的任一个时，不管钙浓度是多少，都不能观察到铅由来的峰。这是由于EDTA和EGTA不仅对钙离子，也对铅离子具有亲和性，并且，由于与铅浓度相比、远远过剩地(摩尔比略小于7万倍)含有，所以几乎所有的铅离子与EDTA或EGTA结合，不能与卟啉形成配位化合物。因此，通过使用水溶性卟啉的吸光光度法，测定含有高浓度钙的试样溶液中的铅浓度时，不能使用EDTA和EGTA作为钙的掩蔽剂。

试验例3含有(A)成分：TMPyP、(B)成分：PAAm以及(C)成分：氯化钙的添加剂的铅浓度测定用试剂G1～4

铅浓度测定用试剂的调制：调制含有作为水溶性卟啉的TMPyP50μM、作为添加剂的聚丙烯酰胺(平均分子量10000)20质量％和/或氯化钙30mM、作为pH调整剂的CAPS 180mM的水溶液(pH 10)，作为铅测定用试剂G1～4。作为添加剂，试剂G1不添加聚丙烯酰胺和氯化钙，试剂G2仅含有聚丙烯酰胺，试剂G3仅含有氯化钙，试剂G4并用聚丙烯酰胺和氯化钙。

试样溶液和标准试样的调制：使用与参考例1相同的物质。

铅浓度测定：除了使用G1～4代替铅浓度测定试剂A以外，与参考例1相同地进行。

另外，从与标准试样的混合得到的吸收光谱，在480nm附近选择与铅的反应由来的吸光度变化大的波长。

图5表示测定结果。使用不含添加剂的试剂G1时，由于试样溶液中共存钙，测定值伴有正误差。使用仅添加氯化钙的试剂G3的情况也相同。如果添加仅含聚丙烯酰胺的试剂G2，由于试样溶液中共存低浓度的钙，测定值产生正误差，但是试样中的共存钙浓度在大致15mM以上时，显示一定值。另一方面，使用添加聚丙烯酰胺和钙两者的试剂G4时，试样中从低浓度到高浓度共存钙时，都能测得接近本来的铅浓度的值。

试验例4与导入卟啉核的聚合物的比较

作为测定含有高浓度的钙的试样溶液中的铅浓度的方法，报告了使用将导入卟啉核的聚合物作为比色试剂的含卟啉聚合物的铅浓度测定用试剂进行测定的方法(WO2006/011549)。使用简易型铅测定装置进行的铅浓度测定中，对作为比色试剂使用含卟啉聚合物的铅浓度测定用试剂的情况和使用本发明的铅浓度测定用试剂的情况进行比较。

简易型铅测定装置由本体和个人电脑构成，基于吸光光度法测定铅浓度，其中，本体内置有小型分光光度计和对单元(Cell)进行加热的加热器。将添加了铅浓度测定用试剂和试样溶液的混合液的比色杯放置于测定器中开始测定，得到此时的吸收光谱，在75℃加热5分钟后，再次得到吸收光谱。将两个光谱标准后差分得到的差光谱的466nm的峰高依存于铅浓度，因此，将此作为信号(signal)，应用预先利用铅浓度已知的标准试样做出的校准线，算出铅浓度、进行表示。

作为本发明铅浓度测定用试剂，准备上述铅浓度测定用试剂B3。

作为比较对照，也准备了含有卟啉聚合物的铅浓度测定用试剂。导入卟啉核的聚合物的合成方法和试剂调制方法参照WO2006/011549，试剂中的氯化钙浓度为14mM、聚合物浓度调制成2倍稀释时的466nm的吸光度为0.6～0.7。

试样溶液和标准试样的调制：使用与参考例1相同的物质。另外，为了做出校准线以及算出检测下限值，使用0～0.1mg/L的铅水溶液。

将本发明的铅浓度测定用试剂或含卟啉聚合物的铅浓度测定用试剂500μL和试样溶液500μL混合，使用简易型铅测定装置测定铅浓度。

图6表示测定结果。即使高浓度的钙共存，铅浓度的测定值都不发生极端的变动，能够算出接近本来的铅浓度的值。

图7表示改变铅浓度进行测定时，铅浓度和信号的关系(校准线)。本发明的试剂中，得到相关系数为R＝1.00的优异结果，并且，校准线的倾斜大，因此可知铅检测的敏感度良好。如果以赋予铅浓度为0时的变动(标准偏差)3倍的信号的铅浓度为检测下限，本发明的铅浓度测定用试剂的检测下限为0.006mg/L，含卟啉聚合物的铅浓度测定用试剂的检测下限为0.05mg/L。涉及铅的填埋标准(作为溶出液中的浓度)、排水标准、环境标准值分别规定为0.3、0.1、0.01mg/L。本发明的铅浓度测定用试剂不仅能够在填埋标准以及排水标准的判定中利用，也能够在环境标准的判定中利用。

Claims

1.一种铅浓度测定用试剂，其特征在于：

含有(A)水溶性卟啉衍生物或其盐、(B)选自聚丙烯酰胺、聚乙烯醇和聚乙二醇中的至少一种以及(C)钙离子供给化合物，

所述(A)水溶性卟啉衍生物为下式(1)所示的水溶性卟啉衍生物，

式中，X¹～X⁴中的至少1个表示

其余表示氢原子，其中，R¹表示烷基、磺烷基、羧烷基、羟烷基或氢原子，R²和R³表示羟基、羧基、氨基、磺酸残基、磷酸残基或三烷基铵基。

2.如权利要求1所述的铅浓度测定用试剂，其特征在于：

(B)成分含有选自1～40质量％的聚丙烯酰胺、0.1～20质量％的聚乙烯醇和0.1～20质量％的聚乙二醇中的至少一种。

3.如权利要求1或2所述的铅浓度测定用试剂，其特征在于：

(B)成分是聚丙烯酰胺。

4.如权利要求1或2所述的铅浓度测定用试剂，其特征在于：

(C)成分是供给0.1～100mmol/L的钙离子的成分。

5.如权利要求1或2所述的铅浓度测定用试剂，其特征在于：

(C)成分是氯化钙。

6.如权利要求1或2所述的铅浓度测定用试剂，其特征在于：

还含有用于将pH调整至8～13的pH调整剂。

7.一种铅浓度测定方法，其特征在于：

混合权利要求1～6中任一项所述的铅浓度测定用试剂和试样溶液，测定混合液的吸光度。

8.如权利要求7所述的铅浓度测定方法，其特征在于：

铅浓度测定用试剂和试样溶液的混合液的pH为8～13。