CN101735818B - 食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂及其制备方法,该方法是以正常出菇的食用菌菌糠为原料,制备浸提液以及调理剂载体,并将以该浸提液为培养基发酵培养的巨大芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和刺孢吸水链霉菌菌液分别与由菌糠制得的调理剂载体混匀制备调理剂组分,最后按照一定比例将三种组分混合均匀得本发明的微生物土壤调理剂。使用上述方法制得的微生物土壤调理剂富含各种营养及活性物质,能促进土壤形成固粒结构,并能有效分解土壤中的有机P、K元素成无机状态,供作物吸收利用,并提高作物对土传病害的抗病性。本发明所述的生产上述微生物土壤调理剂的制备方法方案设计巧妙,高效地对废弃菌糠实现全面综合的利用,生产成本低廉,产品附加值高。

Description

食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂,还涉及食用菌菌糠的综合利用。
背景技术
我国是农业大国,为了提高作物产量,目前我国化肥的使用量为世界平均水平的1.6倍,用化肥总量增加90%的代价只换得粮食增加9%的效果,大量化肥的使用造成土壤板结,引起地下水中硝酸盐含量增加,造成严重污染。为此,必须大量减少化肥的使用量,增加有机肥的来源。
我国又是食用菌生产大国,食用菌栽培采菇后,废弃的培养基菌糠,数量大,大多数没得到综合利用,有的随地堆积,即浪费资源又污染环境。目前菌糠的利用已经引起了重视,主要是加工成饲料和有机肥料。如名为“一种食用菌菌糠绿色肥料”(公告号CN 100337993C,2007.09.19)的中国专利即公开了这样一种方案。然而由于菌糠是采收食用菌成品菇后的残留培养料,营养成分和残余物组成繁杂,受培养基配料组成,栽培的品种影响较大,用于制造肥料往往造成肥效不稳定;为了使产品性能稳定,通常采用的加工程序非常繁复,产品成本增加。按照现有技术方法制造的有机肥料过程中,菌糠要经过堆制发酵,周期比较长(30~40天),占地面积比较大,堆制过程中,中间要经过翻垛等工序,增加了加工成本。其他现有技术在利用菌糠制造有机肥过程中,要加入大量其它的如人畜粪便、污泥等有机肥料等作为补充,菌糠占产品比例较少。生产周期较长,产品附加值较低。因此,有必要开发出一种高效率的菌糠综合利用方案,并提高产品的附加值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效综合利用菌糠制备微生物土壤调理剂的方法以及由该方法制得的微生物土壤调理剂。
本发明所述的食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂的制备方法是将组分A、组分B和组分C按质量比2:2:1均匀混合而成;
其中所述的组分A是巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium var.phosphaticum)发酵液与菌糠载体I按质量比0.4~0.8:1的混合物;组分B是胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)发酵液与菌糠载体I按质量比0.4~0.8:1的混合物;组分C是刺孢吸水链霉菌(Streptomyces hygrospinocus Yan et Tao)发酵液与菌糠载体II按质量比0.1~0.3:1充分混合经疏松堆制、28℃保温发酵3~5天至有灰色孢子出现而得的培养物;
其中,所述的组分A的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium var.phosphaticum)发酵液与菌糠载体I质量比优选为0.6~0.8:1的混合物;组分B的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)发酵液与菌糠载体I质量比优选为0.6~0.8:1的混合物;
上述三种发酵液由其各自的冷藏保存菌种经活化培养和发酵培养而得:
(1)巨大芽孢杆菌发酵液的制备:将巨大芽孢杆菌母种B.megaterium var.phosphaticum接入活化培养基i(每100ml培养基中含豆饼粉3~5g,玉米粉1~3g,葡萄糖0.5~0.1g,NaCl 0.1~0.3g,KH2PO4 0.02~0.5g,自来水配制,调节pH 7.5,121℃灭菌30分钟),28℃振荡培养24小时,得巨大芽孢杆菌种子液。将步骤③制得的发酵培养基按无菌操作要求和所需体积,导入已灭菌的发酵罐A中,通入无菌空气,罐压保持0.03mpa,然后按培养基体积1%的接种量将巨大芽孢杆菌种子液接入发酵罐A的培养基中,28℃恒温、通入无菌空气培养48~120小时;
(2)胶质芽孢杆菌发酵液的制备:将胶质芽孢杆菌母种B.mucilaginosus接入活化培养基ii(每100ml培养基中含葡萄糖0.5~2g,大豆粉1~3g,KH2PO40.1~0.5g,MgSO4 0.01~0.05g,CaCO3 0.05~0.3g,自来水配制,pH 7.5~8.5,121℃灭菌30分钟),28℃振荡培养24小时,得胶质芽孢杆菌种子液。将步骤③制得的发酵培养基按无菌操作要求和所需体积,导入已灭菌的发酵罐B中,通入无菌空气,罐压保持0.03mpa,然后按培养基体积1%的接种量将胶质芽孢杆菌种子液接入发酵罐B的培养基中,28℃恒温、通入无菌空气培养48~120小时;
(3)刺孢吸水链霉菌发酵液的制备:将刺孢吸水链霉菌(S.hygrospinocusYanet Tao)母种接入活化培养基iii(每100ml培养基中含玉米粉1~2g,葡萄糖0.5~1g,大豆粉1~3g,KH2PO4 0.01~0.05g,CaCO3 0.1~0.3g,自来水配制,调节pH7.0,121℃灭菌30分钟),28℃振荡培养72~120小时,得刺孢吸水链霉菌种子液。将步骤③制得的发酵培养基按无菌操作要求和所需体积,导入已灭菌的发酵罐C中,通入无菌空气,罐压保持0.03mpa,然后按培养基体积1%的接种量将刺孢吸水链霉菌种子液接入发酵罐C的培养基中,28℃恒温、通入无菌空气培养48~120小时;
需要说明的是:上述(1)~(3)中所述发酵培养基由下述步骤制得:
①选用正常培养出菇后质地紧密、菌体蛋白丰富、多糖含量高的菌糠,粉碎成1~2mm碎块;
②加入菌糠质量1~2倍的水,95~100℃浸煮1.5~2.5小时;
③分离滤液和滤渣,滤液按无菌操作要求将高温滤液,回流到已灭菌的贮罐中,冷却至26~28℃,即得上述发酵培养基;
所述菌糠载体I是将正常培养出菇后质地疏松、菌体蛋白及多糖含量低的菌糠粉碎成1~5mm碎块并干燥至含水量≤20%所得;菌糠载体II是将上述步骤③的滤渣干燥至含水量≤20%所得。
由上述内容可以看出,本发明的目的是要实现对菌糠的充分利用,而本发明的技术方案完全实现了这点:本发明中以正常出菇后的菌糠为微生物土壤调理剂载体,添加物仅为几种有益菌的发酵液,而发酵液还是以废弃菌糠的水提物为培养基,综合利用菌糠的效率极高;其次,本发明采用液体发酵生产用于添加的有益菌液,比常规菌糠肥料制法中的固体堆肥发酵更为环保、节能、方便操作。
上述本发明的食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂的制备方法中提到两类菌糠,第一类是正常培养出菇后质地紧密、菌体蛋白丰富、多糖含量高的菌糠,第二类是正常培养出菇后质地疏松、菌体蛋白及多糖含量低的菌糠,这种分类跟菌糠的营养成分、理化性质、栽培品种以及栽培工艺都有关。生产实践中对此类菌糠的选择一般采用这样的标准:第一类菌糠粗蛋白含量≥8%,粗纤维含量≤25%,较为常见的是白灵菇、金针菇或杏鲍菇菌糠,其他如香菇、姬松茸等的菌糠也都可以满足使用的条件,它们中任意一种或其中任意两种或两种以上菌糠的混合物均可以作为本发明所述的菌糠载体II及发酵培养基的制备原料;第二类菌糠粗蛋白含量<8%及粗纤维含量>25%,较为典型的是平菇菌糠,其他如鸡腿菇、双孢菇、大球盖、黑木耳菌糠也可以满足使用的条件。本发明举例优选的几种菌糠都是生产实践中非常常见并且生产量很大的菌糠,因此使用它们作为本发明的生产原材料具有原料易得、成本低的优势。
根据上文所述的内容,本发明具体地给出所述食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂的制备方法的最优选方案,具体包括如下步骤:
(一)制备发酵培养基及菌糠载体II:
①选用正常培养出菇后的粗蛋白含量≥8%,粗纤维含量≤25%的菌糠,可以是一种或两种及两种以上菌糠的混合物,粉碎成1~2mm碎块;
②加入菌糠质量1~2倍的水,95~100℃浸煮1.5~2.5小时;
③分离滤液和滤渣,将高温滤液按无菌操作要求,回流到已灭菌的贮罐中,通入无菌空气保压0.03mpa,冷却至26~30℃,即得上述发酵培养基;菌糠滤渣干燥至含水量≤20%得菌糠载体II。
(二)制备菌糠载体I:
选取正常培养出菇后粗蛋白含量<8%及粗纤维含量>25%的平菇或符合要求的其它品种的菌糠,粉碎成1~5mm碎块,并干燥至含水量≤20%;
(三)制备巨大芽孢杆菌发酵液及组分A:
将冷藏保存的巨大芽孢杆菌母种接入活化培养基i(每100ml培养基中含豆饼粉3~5g,玉米粉1~3g,葡萄糖0.08~0.5g,NaCl 0.1~0.3g,KH2PO4 0.02~0.5g,自来水配制,调节pH 7.5,121℃灭菌30分钟),28℃振荡培养24小时,得巨大芽孢杆菌种子液。将步骤③制得的发酵培养基按无菌操作要求和所需体积,导入已灭菌的发酵罐A中,通入无菌空气,罐压保持0.03mpa,然后按培养基体积1%的接种量将巨大芽孢杆菌种子液接入发酵罐A的发酵培养基中,28℃恒温、通入无菌空气培养48~120小时,得巨大芽孢杆菌发酵液。
将该步制得的巨大芽孢杆菌发酵液与步骤(二)制得的菌糠载体I按质量比0.4~0.8:1均匀混合得组分A;
(四)制备胶质芽孢杆菌发酵液及组分B:
将冷藏保存的胶质芽孢杆菌母种接入活化培养基ii(每100ml培养基中含葡萄糖0.5~2g,大豆粉1~3g,KH2PO4 0.1~0.5g,MgSO4 0.01~0.05g,CaCO30.05~0.3g,自来水配制,调节pH 7.5~8.5,121℃灭菌30分钟),28℃振荡培养24小时,得胶质芽孢杆菌种子液。将步骤③制得的发酵培养基按无菌操作要求和所需体积,导入已灭菌的发酵罐B中,通入无菌空气,罐压保持0.03mpa,然后按培养基体积1%的接种量将巨胶质芽孢杆菌种子液接入发酵罐B的发酵培养基中,28℃恒温、通气培养48~120小时,得胶质芽孢杆菌发酵液。
将该步制得的胶质芽孢杆菌发酵液与步骤(二)制得的菌糠载体I按质量比0.4~0.8:1均匀混合得组分B;
(五)制备刺孢吸水链霉菌发酵液及分组C:
将冷藏保存的刺孢吸水链霉菌母种接入活化培养基iii(每100ml培养基中含玉米粉1~2g,葡萄糖0.5~1g,大豆粉1~3g,KH2PO4 0.01~0.05g,CaCO30.1~0.3g,自来水配制,调节pH7.0,121℃灭菌30分钟),28℃振荡培养72~120小时,得刺孢吸水链霉菌种子液。将步骤③制得的发酵培养基按无菌操作要求和所需体积,导入已灭菌的发酵罐C中,通入无菌空气,罐压保持0.03mpa,然后按培养基体积1%的接种量将刺孢吸水链霉菌种子液接入发酵罐C的发酵培养基中,28℃恒温、通入无菌空气培养48~120小时。得刺孢吸水链霉菌发酵液。
将该步制得刺孢吸水链霉菌发酵液与步骤(一)制得的菌糠载体II按质量比0.1~0.3:1均匀混合,疏松堆制28℃保温发酵3~5天,至有灰色孢子出现,得组分C;
(六)制备微生物土壤调理剂:将步骤(三)~(五)分别制得的组分A、B、C按质量比2:2:1均匀混合,分装。
本发明的另一目的是提供一种根据上文所述的方法制备的微生物土壤调理剂。所述的食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂为褐色粉状物,质地疏松,有食用菌和放线菌气味,对土壤有促进形成固粒结构,提高根部微生物活力的功能,吸附其中的解磷细菌和硅酸盐细菌,能有效分解土壤中的有机P、K元素成无机状态,供作物吸收利用,其中的放线菌能分泌多种促进植物根系发达和促生长激素,提高作物对土传病害的抗病性。有效微生物菌数可以达到每克1~2亿个。本发明所述的生产上述微生物土壤调理剂的制备方法方案设计巧妙,高效地对废弃菌糠实现全面综合的利用,生产成本低廉,产品附加值高。
附图说明
本发明附图1幅,即本发明所述的食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂的制备方法流程示意图。
具体实施方式
下文以具体实施例的方式对本发明的技术方案做进一步的说明,但不以任何形式对本发明的内容进行限制。如无特殊说明,本发明实施例中所使用的菌种均购自辽宁省农业科学研究院,其他原料均为市售商品。
此外,本发明中所涉及的理化指标的测定采用下述方法:
(1)含水量(%):采用中华人民共和国农业行业标准NY22794 5.3;
(2)粗蛋白含量(%):凯氏微量定氮法;
(3)粗纤维含量(%):酸碱洗涤重量测定法;
(4)a.有效菌数测定:中华人民共和国农业行业标准NY227-94 5.2微生物肥料。
b.选择性培养基:(检定菌落数)按照NY227-94附录所述;
(5)pH值测定:酸度计法。
生产实践中,本说明书提及的食用菌菌糠配方均为本领域的技术人员易于获知的现有技术,本说明书在此亦提供一种本发明人常常使用的食用菌培养基配方提供的菌糠组,但不是说其他与此类似的各种食用菌的菌糠即不可行。
(1)香菇(质量百分比):棉籽壳40%,杂木屑35%,玉米芯10%,麦麸10%,玉米粉3%,石膏粉2%,pH6.0~6.5.
(2)金针菇(质量百分比):棉籽壳62%,木屑20%,麦麸15%,石膏粉1%,过磷酸钙1%,蔗糖1%。
(3)白灵菇(质量百分比):玉米芯30%,棉籽壳28%,麦麸15%,木屑20%,玉米粉5%,石膏1%,钙镁磷肥1%,pH7.5。
(4)杏鲍菇(质量百分比):棉籽壳50%,木屑20%,麦麸18%,玉米芯10%,豆饼粉1%,够磷酸钙0.5%,尿素0.5%,pH7.5。
(5)平菇(质量百分比):玉米秸70%,棉籽壳20%,麦麸7%,石膏粉2%,石灰1%。
(6)黑木耳(质量百分比):棉籽壳43%,木屑40%,麦麸15%,石膏粉1%,过磷酸钙1%,pH8.0。
(7)鸡腿菇(质量百分比):玉米芯60%,豆秸30%,麦麸8%,钙镁磷肥2%。
(8)双孢菇:玉米秸2000kg,干牛粪1200kg,过磷酸钙50kg,尿素15kg,磷酸氢铵10kg,石膏粉40kg,pH7.5~8.0。
实施例1
(一)制备发酵培养基及菌糠载体II:
①选用正常培养出菇后的白灵菇、金针菇菌糠的混合物,粉碎成1~2mm碎块,放入加热容器中压紧,(菌糠的选择视即时可得的材料选取);
②加入菌糠质量2倍的水,100℃浸煮2.5小时;
③压滤法分离滤液和滤渣,菌糠滤渣干燥至含水量≤20%得菌糠载体II,将高温滤液按无菌操作要求和所需体积,回流到3个已灭菌的发酵罐A、B、C中,冷却至26~28℃,即得上述发酵培养基,罐中通无菌空气保压,待接入微生物菌种;
(二)制备菌糠载体I:
采用的平菇菌糠其培养基组成为:棉籽壳:20%,木屑:10%,玉米芯:67%,麦麸:2%,石灰1%;采用半熟料塑料袋栽培法,多潮采收后,留取无杂菌污染的菌糠备用。
将上述平菇菌糠,粉碎成1~5mm碎块并干燥至含水量≤20%;
(三)制备巨大芽孢杆菌发酵液及组分A:
将冷藏保存的巨大芽孢杆菌母种接入活化培养基i(按照每100ml培养基中含豆饼粉3g,玉米粉2g,葡萄糖1g,NaCl 0.3g,KH2PO4 0.3g,自来水配制,调节pH 7.5,121℃灭菌30分钟),28℃振荡培养24小时,得巨大芽孢杆菌种子液,将种子液按照发酵液体积1%的接种量接入步骤(一)制得的A罐发酵培养基,28℃恒温、通入无菌空气培养96小时,得巨大芽孢杆菌发酵液;
将该步制得的巨大芽孢杆菌发酵液与步骤(二)制得的菌糠载体I按质量比0.8:1均匀混合得组分A;
(四)制备胶质芽孢杆菌发酵液及组分B:
将冷藏保存的胶质芽孢杆菌母种接入活化培养基ii(按照每100ml培养基中含葡萄糖2g,大豆粉1g,KH2PO4 0.5g,MgSO4 0.01g,CaCO3 0.3g,自来水配制,调节pH 7.5,121℃灭菌30分钟),28℃振荡培养24小时,得胶质芽孢杆菌种子液,将种子液按照发酵液体积1%的接种量接入步骤(一)制得的B罐发酵培养基中,28℃恒温、通入无菌空气培养72小时,得胶质芽孢杆菌发酵液;
将该步制得的胶质芽孢杆菌发酵液与步骤(二)制得的菌糠载体I按质量比0.6~0.8:1均匀混合得组分B;
(五)制备刺孢吸水链霉菌发酵液:
将冷藏保存的刺孢吸水链霉菌母种接入活化培养基iii(按照每100ml培养基中含玉米粉1g,葡萄糖0.5g,大豆粉7g,KH2PO4 0.05g,CaCO3 0.1g,自来水配制,调节pH7.0,121℃灭菌30分钟),28℃振荡培养120小时,得刺孢吸水链霉菌种子液,将种子液按照发酵液体积1%的接种量接入步骤(一)制得的C罐发酵培养基中,28℃恒温、通入无菌空气培养120小时,得刺孢吸水链霉菌发酵液;
将该步制得的刺孢吸水链霉菌发酵液与步骤(一)制得的菌糠载体II按质量比0.3:1均匀混合,疏松堆制28℃保温发酵4天,至有灰色孢子出现,得组分C;
(六)制备微生物土壤调理剂:将步骤(三)~(五)分别制得的组分A、B、C按质量比2:2:1均匀混合,分装,即得以食用菌菌糠为原料制备的微生物土壤调理剂。
所制得的微生物土壤调理剂为褐色粉状物,质地疏松,有食用菌和放线菌气味,含有效菌株数是每克2.1亿个。
实施例2
采用实施例1的生产步骤制备菌糠微生物土壤调理剂,所不同的是本实施例中组分A是巨大芽孢杆菌发酵液与菌糠载体I按质量比0.4:1的混合物;组分B是胶质芽孢杆菌发酵液与菌糠载体I按质量比0.4:1的混合物;组分C是刺孢吸水链霉菌发酵液与菌糠载体II按质量比0.2:1的混合物。
实施例3
将按照实施例1的方法制得的微生物土壤调理剂施用于玉米,检测其应用效果,具体操作方法如下:
作物品种:玉米丹玉6号;
施用方法:①拌种:先用糖水将种子浸湿,按每亩用3kg的微生物土壤调理剂混拌让每粒玉米沾上菌剂即可接种;②与基肥同时使用:在玉米定苗围根时,按每亩1kg的量将其掺混到100kg肥土中,撒于根部后,及时围根。不施用土壤调理剂的为对照,处理组与试验组管理方法完全相同。
使用效果:增产25%;土壤疏松,板结改善持水量提高,抗病能力提高。试验组玉米黑粉病为零,对照组黑粉病为0.5%。
实施例4
将按照实施例1的方法制得的微生物土壤调理剂施用于黄瓜,检测其应用效果,具体操作方法如下:
作物品种:黄瓜津研3号;
施用方法:先将本发明的微生物土壤调理剂1kg与50kg基肥混匀,堆积3天,每天翻动一次,菜籽播种前做底肥施入。不施用本发明调理剂为对照组,其他管理完全相同。
使用效果:试验组黄瓜长势旺盛,叶片深绿色,发亮。抗病性提高,增产12.5%。
实施例5
将按照实施例2的方法制得的微生物土壤调理剂施用于苹果,检测其应用效果,具体操作方法如下:
作物品种:苹果;
施用方法:每亩亩产500kg以上的果园,用本发明的土壤调理剂5kg与农家肥混拌均匀,堆制2~3天,即可施入根部区,及时覆土,浇水。不施用本发明的土壤调理剂为对照组,其他管理完全相同。
使用效果:抗病,苹果树腐烂病比对照组减轻,叶色深绿,果实色泽好,甜度增加、增产15%。
实施例6:
作物品种:大白菜
将按照实施例1的方法制得的微生物土壤调理剂1kg与50kg基肥混匀,堆制3天,每天翻动一次,采取播种时与底肥一起施入的方法为试验组;不施用调理剂,只施用50kg基肥和同量的底肥为对照组。
试验地面积计252m2,每个试验小区面积42m2,试验组和对照组均3个重复,取平均值,按照常规方法管理;对产量、生育期、抗病性指标进行检测,结果如下。
(1)产量,结果如表1:
表1
Figure G2008102286192D00101
2、生育期提前
从整个生长期看,施用本发明的食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂的组别白菜长势旺盛,包心期提前3-5天、心实、单株重量大。
3、增强抗病性
对照组收获白菜166株,有4株出现软腐病,发病率为1.2%。
调理剂处理组未检出软腐病株,发病率为0。
实施例7:
将按照实施例1的方法制得的微生物土壤调理剂施用于葡萄园中,品种为巨丰,树龄15年,株行距3m×1m,土质为沙壤土。
处理方法:采用顺序排列每一个空间5株为一个实验小区,共设6个小区;分为试验组和对照组,各三个重复,4月中旬处理组每株施农家肥20kg与50g本发明的微生物土壤调理剂,充分混合后施入;对照组施入20kg农家肥,不施加本发明的微生物土壤调理剂。
7月中旬处理组和对照组同样施复合肥0.75kg/株,其它按常规方法管理。
9月中旬果实成熟进行测定比较,结果见表2。
表2
Figure G2008102286192D00111
加土壤调理剂后,果品质量和产量有明显提高,果穗增大变紧,整齐一致,着色均匀、艳丽、商品性状好。
实施例8:
将按照实施例1的方法制得的微生物土壤调理剂用于大豆,将调节土壤调理剂2kg先与50kg基肥混合再与农家肥一起施入均匀一致的棕土壤上,作为试验组:不加调理剂的为对照组;试验组与对照组各3个重复,共计6个试验小区,每个小区面积15m2
5月中旬播种,6月中旬出苗,7月下旬开花,8月上旬结荚,试验结果如表3所示:
表3
Figure G2008102286192D00112

Claims (6)

1.一种食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂的制备方法,其特征在于是将组分A、组分B和组分C按质量比2:2:1均匀混合而成;
其中,组分A是巨大芽孢杆菌发酵液与菌糠载体Ⅰ按质量比0.4~0.8:1的混合物;组分B是胶质芽孢杆菌发酵液与菌糠载体Ⅰ按质量比0.4~0.8:1的混合物;组分C是刺孢吸水链霉菌发酵液与菌糠载体Ⅱ按质量比0.1~0.3:1充分混匀经疏松堆制、28℃保温发酵3~5天至有灰色孢子出现而得的培养物;
上述三种发酵液由其各自的冷藏保存菌种经活化培养和发酵培养而得:
(1)巨大芽孢杆菌发酵液的制备:将母种接入活化培养基ⅰ,28℃振荡培养24小时,按照发酵培养基体积1%的接种量接入发酵培养基中,28℃恒温、通入无菌空气培养48~120小时;
所述的活化培养基ⅰ中,每100ml培养基中含豆饼粉3~5g,玉米粉1~3g,葡萄糖0.5~1g,NaCl0.1~0.3g,KH2PO40.02~0.5g,由自来水配制,调节pH7.5,121℃灭菌30分钟;
(2)胶质芽孢杆菌发酵液的制备:将母种接入活化培养基ⅱ,28℃振荡培养24小时,按照发酵培养基体积1%的接种量接入发酵培养基中,28℃恒温、通入无菌空气培养48~120小时;
所述的活化培养基ⅱ中,每100ml培养基中含葡萄糖0.5~2g,大豆粉1~3g,KH2PO40.1~0.5g,MgSO40.01~0.05g,CaCO30.05~0.3g,自来水配制,调节pH7.5~8.5,121℃灭菌30分钟;
(3)刺孢吸水链霉菌发酵液的制备:将母种接入活化培养基ⅲ,28℃振荡培养72~120小时,按照发酵培养基体积1%的接种量接入发酵培养基中,28℃恒温、通入无菌空气培养48~120小时;
所述的活化培养基ⅲ中,每100ml培养基含玉米粉1.0~2.0g,葡萄糖0.5~1g,大豆粉1~3g,KH2PO40.01~0.05g,CaCO30.1~0.3g,自来水配制,调节pH7.0,121℃灭菌30分钟;
上述(1)~(3)中所述的发酵培养基由下述步骤制得:
①选用正常培养出菇后质地紧密、菌体蛋白丰富、多糖含量高的菌糠,粉碎成1~2mm碎块;
②加入菌糠质量1~2倍的水,95~100℃浸煮1.5~2.5小时;
③分离滤液和滤渣,滤液冷却至26~28℃,即得上述发酵培养基;
所述菌糠载体Ⅰ是将正常培养出菇后质地疏松、菌体蛋白及多糖含量低的菌糠粉碎成1~5mm碎块并干燥至含水量≤20%所得;菌糠载体Ⅱ是将上述步骤③的滤渣干燥至含水量≤20%所得;
所述的正常培养出菇后质地紧密、菌体蛋白丰富、多糖含量高的菌糠是指粗蛋白含量≥8%,粗纤维含量≤25%的菌糠,是一个或两个品种以上菌糠的混合物;所述的正常培养出菇后质地疏松、菌体蛋白及多糖含量低的菌糠是指粗蛋白含量<8%,粗纤维含量>25%的菌糠。
2.根据权利要求1所述的食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂的制备方法,其特征在于所述的组分A是巨大芽孢杆菌发酵液与菌糠载体Ⅰ按质量比0.6~0.8:1的混合物;组分B是胶质芽孢杆菌发酵液与菌糠载体Ⅰ按质量比0.6~0.8:1的混合物。
3.权利要求1或2所述的食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂的制备方法,其特征在于所述的发酵培养基制备步骤③,分离滤液和滤渣,将高温滤液按无菌操作要求,回流到已灭菌的发酵罐中,通入无菌空气保压备用。
4.根据权利要求1所述的微生物土壤调理剂的制备方法,其特征在于该方法包括如下具体步骤:
㈠制备发酵培养基及菌糠载体Ⅱ:
①选用正常培养出菇后的粗蛋白含量≥8%,粗纤维含量≤25%的一种或两种以上菌糠的混合物,粉碎成1~2mm碎块;
②加入菌糠质量1~2倍的水,95~100℃浸煮1.5~2.5小时;
③分离滤液和滤渣,将高温滤液按无菌操作要求回流到已灭菌的贮罐中,通入无菌空气保压,冷却至26~28℃,即得上述发酵培养基;菌糠滤渣干燥至含水量≤20%得菌糠载体Ⅱ;
㈡制备菌糠载体Ⅰ:
选取正常培养出菇后的粗蛋白含量<8%,粗纤维含量>25%的菌糠,粉碎成1~5mm碎块并干燥至含水量≤20%;
㈢制备巨大芽孢杆菌发酵液及组分A:
将冷藏保存的巨大芽孢杆菌母种接入活化培养基ⅰ,28℃振荡培养24小时,为巨大芽孢杆菌种子液,将步骤③制得的发酵培养基按无菌操作要求和所需体积,导入已灭菌的发酵罐A中,通入无菌空气,罐压保持0.03mpa,然后按培养基体积1%的接种量将巨大芽孢杆菌种子液接入发酵罐A的发酵培养基中,28℃恒温、通入无菌空气培养48~120小时,得巨大芽孢杆菌发酵液;
将该步制得的巨大芽孢杆菌发酵液与步骤㈡制得的菌糠载体Ⅰ按质量比0.6~0.8:1均匀混合得组分A;
㈣制备胶质芽孢杆菌发酵液及组分B:
将冷藏保存的胶质芽孢杆菌母种接入活化培养基ⅱ,28℃振荡培养24小时,得胶质芽孢杆菌种子液,将步骤③制得的发酵培养基按无菌操作要求和所需体积,导入已灭菌的发酵罐B中,通入无菌空气,罐压保持0.03mpa,然后按培养基体积1%的接种量将胶质芽孢杆菌种子液接入发酵罐B的培养基中,28℃恒温、通入无菌空气中培养48~120小时,得胶质芽孢杆菌发酵液;
将该步制得的胶质芽孢杆菌发酵液与步骤㈡制得的菌糠载体Ⅰ按质量比0.6~0.8:1均匀混合得组分B;
㈤制备刺孢吸水链霉菌发酵液及组分C:
将冷藏保存的刺孢吸水链霉菌母种接入活化培养基ⅲ,28℃振荡培养72~120小时,为刺孢吸水链霉菌种子液,步骤③制得的发酵培养基按无菌操作要求和所需体积,导入已灭菌的发酵罐C中,通入无菌空气,罐压保持0.03mpa,然后按培养基体积1%的接种量将刺孢吸水链霉菌种子液接入发酵罐C的培养基中,28℃恒温、通入无菌空气培养48~120小时,得刺孢吸水链霉菌发酵液;
将该步制得的刺孢吸水链霉菌发酵液与步骤㈠制得的菌糠载体Ⅱ按质量比0.1~0.3:1均匀混合,再疏松堆制28℃保温发酵3~5天,至有灰色孢子出现,得组分C;
㈥制备微生物土壤调理剂:将步骤㈢~㈤分别制得的组分A、B、C按质量比2:2:1均匀混合,分装。
5.根据权利要求1或2中任一权利要求所述的方法制备的微生物土壤调理剂。
6.根据权利要求5所述的食用菌菌糠制备的微生物土壤调理剂,其特征在于该微生物土壤调理剂为褐色粉状物,质地疏松,有食用菌和放线菌气味。
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