CN101709308A - 一种小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，涉及小麦酒精废糟液的再利用技术，包括如下步骤：a、获得清液：b、获得菌种扩培培养基，进行菌种扩培；c、种子发酵罐培养：d、将发酵液“内含菌丝体”加入提取多糖时获得的泸饼，以调解含水量；获得食用、药用真菌菌粉；e、食用、药用真菌多糖的生产：按步骤c，获得食用、药用真菌多糖产品；本发明实现了小麦酒精废糟液的综合利用，变废为宝目的，并可将废糟液转化成高产值的保健食品和贵重的药品原料。

Description

一种小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法

【技术领域】

本发明属于一种小麦酒精废糟液的再利用技术，尤其是涉及一种利用小麦酒精废糟液生产食用、药用真菌菌粉及真菌多糖的方法。

【背景技术】

公知的，酒精发酵主要采用玉米、薯干、废糖蜜等为原料，由于养殖业的发展，势必造成原料的紧张；有些地区会出现地域价格差，货源供应也相对不稳定等。特别是近年来玉米价格上涨，使得现有酒精厂呈现亏损局面，由于上述原因和产地的限制，一些厂家便选用小麦作为生产酒精的原料。在我国小麦的主产区广泛分布在长江以北的广大地区，所以小麦的供给也相对较为宽裕，很多酒精厂家以小麦为生产酒精的主要原料，在酒精行业普遍具备一定的优越性，况且小麦具备如下对比优势：

1、以小麦作为原料所生产的酒精具有口感好、微甜，作为勾兑酒的原料有很大市场竞争力；

2、以小麦作为原料在生产过程中产生有诸如谷朊粉的中间产品，近年来谷朊粉的国际市场很大，可以明显提高产品的附加值，经济效益也相对得到提高；

3、以小麦作为制造酒精的原料所生产的DDG饲料蛋白质为26％“大约”，脂肪为3％“大约”，色泽好，动物较为喜欢食用，深受养殖户欢迎。

目前，很多酒精生产厂商以小麦为原料生产酒精，从目前的趋势看，有进一步发展的可能性。

制粒时的温度高达85℃以上，温度也较高，所以造粒后要降低水份，其含量为7-12％。蒸发器运行一段时间后会严重结垢，所以过一段时间要停机清洗，结垢是蛋白质沉淀淤积于加热管中，所以通常用1～3％的苛性钠溶液加热至90～95℃进行冲洗。

已知用小麦为原料生产酒精所产生的废糟液，由于含有大量的纤维素和半纤维素，酒精糟水中可溶物较多，具有一定的利用价值；但是小麦废糟液相对于其它原料，浓缩糖浆的浓度较高，粘度较大，蒸发器易结垢，清洗困难；所以回流水的再利用也受到一定的限制，长时间回流水中的有机物、纤维类物质积累，将不利于酵母的生长，而缩短回水利用的周期，现有技术又难以解决。

基于上述原因可知，小麦酒精废糟液的处理，是一个有待解决的技术难题。此时我们联想到，食用、药用真菌绝大多数种类，它们可以分解吸收纤维素和半纤维素。

申请人在先申请的专利“专利名称、生产食用、药用真菌菌粉和真菌多糖的方法；申请日、2000年12月8日；授权公告号、CN1236048C”由于当时诉求用玉米酒精废糟液为原料生产食用、药用真菌菌粉和真菌多糖，虽取得成功，但比起小麦酒精废糟液来，玉米酒精废糟液则由于原料有限，所以应用价值相应降低；主要原因有二，1、小麦酒精废糟液中含有丰富纤维素和半纤维素，对于食用、药用真菌是难得的可以利用木质素、纤维素、半纤维素的微生物类群；2、另外申请人还发现，由于小麦酒精废糟液有机物质比玉米酒精废糟液含量高，更适合于食用、药用真菌类深层发酵。

【发明内容】

为了实现所述发明目的，本发明公开了一种小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，本发明所述方法针对小麦酒精废糟液难处理，容易出现环保超标，以及食用、药用真菌能分解利用小麦酒精废糟液中难以处理的纤维素、半纤维素和高浓度有机物质的情况；本发明结合小麦酒精废糟液富含纤维素和半纤维素，可溶性有机物含量高的特点，用其进行食用、药用真菌菌粉及真菌多糖的生产；本发明通过利用食用、药用真菌分解、吸收废糟液中的纤维素、半纤维素和其它有机物，解决小麦加工酒精后通常将废糟液作为废弃物排放，造成环保污染的资源浪费的问题，实现了小麦酒精废糟液的综合利用，变废为宝目的，并可将废糟液转化成高产值的保健食品和贵重的药品原料。

本发明通过以下化学合成技术方案实现：

一种小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，所述小麦酒精废糟液以小麦为原料，经过液体深层发酵，酿造酒精，获得酒精废糟液，包括如下步骤：

a、获得清液：

将所述小麦酒精废糟液中的固体由液体分离分离出来，获得清液；

b、获得菌种扩培培养基，进行菌种扩培；

1)、斜面菌种培养基制备和斜面菌种扩培；斜面菌种培养基采用PDA综合培养基接种于24-27℃下培养10-15天。

2)、摇瓶培养基，种子发酵罐的培养基制备及种子扩培：

摇瓶培养基和种子发酵罐培养基相同，即步骤a所获得清液加入0-0.5％酵母膏；0-4％蔗糖，用NaOH和HCl调PH值至5.5-6.5；

摇瓶培养：取前述获取物250毫升的三角瓶内，装入70-90毫升的培养基，750毫升三角瓶，装量为100-120毫升/瓶；灭菌后，冷却至30℃时接入斜面菌种“PDA培养基上生长的，不超过10天的食用、药用真菌的菌种”用接种剷剷下一小块，大约1cm²左右纯培养物，于24-27℃条件下，静置24小时后置于摇床上160-180rpm于24-27℃左右，振荡培养48-72小时；

c、种子发酵罐培养：

在通用式机械搅拌发酵罐或者气升式气体搅拌式发酵罐中进行；常规灭菌后按5-10％接种量，接入摇瓶种子，其发酵条件为：采用机械搅拌式发酵罐；0-12小时：搅拌速度为80-100rpm，通气量为0.5∶1vvm；或12-72小时搅拌速度120rpm-140rpm通气量为0.5∶1vvm，采用气升式空气搅拌式发酵罐；或0-12小时时0.25∶1vvm，12-72小时为0.5∶1vvm；其中种子发酵罐培养温度为24-27℃；发酵周期为48-72小时；

获得发酵培养基后，进行食用、药用真菌液体深层发酵：发酵培养基的成份与摇瓶、种子发酵罐的扩培培养基相同；即步骤a所获得清液加入0-0.15％酵母膏，0-4％蔗糖，用NaOH和HCl调PH值至5.5-6.5；然后常规灭菌，灭菌后按5-10％的接种量，接入种子；

其中发酵控制：前72小时与种子发酵罐条件相同，用机械搅拌发酵罐；72-144小时，搅拌速度为160-200rpm，通气为0.5∶1vvm，气升式生物反应器空气搅拌的条件；72-144小时为0.75∶1vvm；发酵温度为24-27℃，然后进入食用、药用真菌菌粉的生产，其中按本步骤发酵至144小时左右，还原糖下降变缓，即可终止发酵；

d、将发酵液“内含菌丝体”加入提取多糖时获得的泸饼，以调解含水量；通过胶体磨、研磨、均质，使其基质颗粒小于5微米，通过离心式喷雾干燥机，喷雾干燥成食用、药用真菌菌粉，其中水份为≤10％；

e、食用、药用真菌多糖的生产：按步骤c，发酵终止时将发酵罐内温度控制到90℃，维持5小时，待冷却在35℃左右进行板框过滤；然后收集滤液，真空浓缩至原体积的1/5左右；通过离心式喷雾干燥机，喷雾干燥，成为食用、药用真菌多糖产品；所述滤饼，在生产菌粉时待用。

所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，所述PDA综合培养基为马铃薯200克，蔗糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，水1000毫升，琼脂20克。

所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，所述PDA综合培养基的加工为：200克马铃薯，洗净去皮切成小块，加水1000ml煮沸半个小时或高压蒸煮20分钟，纱布过滤，再依次添加蔗糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，水1000毫升和琼脂20克，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml“视试管大小而定”，15磅蒸气“121℃”灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存待用。

所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，所述步骤a的获得清液过程为：利用离心机对所述小麦酒精废糟液离心方式获得所述清液，或利用过滤方式获得所述清液，或将所述离心或过滤方式获得的清液浓缩后再次加水稀释获得所述清液。

所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，将步骤b或c获得摇瓶培养基种子发酵罐的培养基和发酵培养基；摇瓶、种子罐、发酵罐的培养基均用小麦酒精废糟液由步骤a所获得的清液为母体加入酵母膏0-0.5％，蔗糖0-4％，调PH值5.5-6.5而制成。

所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，步骤d，在发酵终止后，加入提取多糖时获得的滤饼调含水量，先用胶体磨、研磨成＜5微米基质颗粒，不经板框过滤，直接用离心式喷雾干燥机喷雾干燥，制成食用、药用真菌菌粉。

所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，所述步骤e，发酵终止时，在发酵罐内，发酵液直接升温至90℃，维持5小时，待冷却至35℃左右，进行板框过滤，收集滤液，真空浓缩至原体积的1/5，通过离心式喷雾干燥机喷雾干燥，其中条件为进风温度调至200-230℃，出风温度调至90℃，喷液量为500-1000kg/h；制得食用、药用真菌多糖产品；其中板框过滤获得的滤饼，待生产菌粉时用。

根据上述工艺步骤获取的真菌菌粉或真菌多糖，可作为药用、食用两用的真菌，除了是高蛋白低脂肪的保健食品外，它们还有特定的药效。由于药用真菌生产的发展，带动了制药工业、食品工业的同步发展，具有新的产业链起始端作用，本发明获取的药用真菌可作为药厂和加工厂的原料；用药用真菌为原料制作的真菌药物也将得到大力发展；

下表为以药用真菌为原料制作的真菌药物：

 

银耳及蜜环菌	三明真菌研究所	银蜜片	冠心病、心绞痛
				冬虫夏草  (Cordyceps sinensis)	医科院药物所  江西国药厂	金水宝胶囊	高血脂症、性功能低下、慢性支气管   炎
槐耳   (Trametes robiniophila)	南京中医药大学  江苏启东市制药  厂	槐耳冲剂	扶正抑散，适用于原发生肝

需要说明的是，随着药用真菌的药用价值被医疗临床逐渐证实，需求量逐年增加。多数药用真菌的生长需要木质素、纤维素、半纤维素，所以对林木的需求量也逐年上升，在一些集中生产的地区，对森林资源的毁坏已引起人们的关注。所以改变过去的单一椴木栽培，锯未栽培的方法也势在必行。

根据化学成份的分析和药理临床观察，某些药用真菌的菌丝体与子实体有同样的医疗和保健效果。40年来，随着发酵工业的兴起和发展，利用液体深层发酵生产药用真菌菌丝体制药路线有了很大发展。菌丝体的发酵培养周期短，适合于大规模工厂化生产。冬虫夏草、猴头菌丝体也都有生产厂家大规模生产。猴头菌丝体仅上海市每年的生产能力可达到400多吨。利用冬虫夏草菌丝体深层发酵生产的“金水宝”胶囊，成为中国第一个被批准生产的中药一类新药；由此可见市场之大。

本发明所述的小麦酒精废糟液生产出的真菌菌粉或真菌多糖优点在于：

1、变废为宝：小麦酒精废糟液富含纤维素、半纤维素及其它有机物质，它作为酒精酿造来讲虽属废物，但对于多数食用、药用真菌来讲，则是难得的天然培养基，稍加调配，便可成为某些食用、药用真菌最佳培养基。

2、成本低廉：小麦酒精废糟液(Vinasse)是发酵法生产酒精的副产品，是一种高浓度的有机废水，用它来生产食用、药用真菌菌粉和真菌多糖，大大降低了成本，提高了市场竞争力。

3、提高产品质量：小麦酒精废糟液没有或有很少的固形物，而传统的生产培养基含有大量的固形物，前者所生产的产品几乎不含有除菌丝体及代谢产物以外的杂质，而后者则含有2/3以上的杂质。因此，用小麦酒精废糟液生产的菌粉和多糖产品质量较好，其保健和药效成份含量也相应的优于传统产品。

本发明的工艺具有如下特点：

1、环保、很少的排放物；整个生产工艺基本没有或很少量的排放物，避免了环境的污染，使酒精生产成为绿色、安全的加工过程成为可能。

2、产品质优效高；在传统的菌粉生产过程，发酵终止后通过板框过滤、收集滤饼、干燥、粉碎，而滤过液弃去，但是发酵液内的胞外产物很多是保健、药效成份，弃之是巨大浪费。本发明所述工艺则是发酵终止后，通过胶体磨匀质，研磨成5微米的基质颗粒，在此过程中则包含了真菌的破壁过程，使产品中保健，药效成份大幅度增加，因此本发明获取的产品是较好的，并克服所述产品缺陷。

本发明所述的食用、药用真菌多糖的生产工艺还具有如下特点

本发明所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，实现了如下效果；

1.环保、零排放。真菌多糖的传统工艺是提取真菌多糖采用发酵液过滤，浓缩，醇析、干燥、粉碎等步骤实现的。而我们的工艺，发酵终止，90℃处理5小时，板框过滤，收集滤液，而滤鉼在制造菌粉时用于调正发酵液含水量。滤液则通过浓缩，喷雾干燥生产多糖，基本没有排放物，和影响周围环境。

2.产品优质、高效。现有经醇析的多糖产品，由于现有生产工艺不科学、不合理，使其具有的保健功能或药效成份大量流失，因此真菌多糖虽纯度较高，但疗效并非全面。而本发明的真菌多糖的生产工艺，既考虑了多糖的提取(90℃维持5小时)，又考虑到药效成份的流失(除加热，水提之外，不用醇析)，多糖含量能达到30％以上，并且有很好的疗效。

3.本发明富含酵母发酵所产生的活性物质。小麦酒精废糟液，含有20种氨基酸，10几种维生素和多种矿物元素，这些对于人们的保健和疾病的治疗将有极大的帮助。

由于采用了上述技术方案，本发明具有如下有益效果；

本发明所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，利用小麦酒精废糟液生产食用、药用真菌菌粉及真菌多糖产品其优点如下：

1.提供了一种利用小麦酒精废糟液生产高附加值产品的新途径。

2.将小麦酒精废糟液——这种高浓度的有机废水作为一种资源加以再利用，生产厂家达到零排放，解决了小麦酒精发酵的污染问题。

3.使食用、药用真菌菌粉和真菌多糖的产品质量有了进一步的提高。

4.使食用、药用真菌菌粉和真菌多糖的成本大幅度的降低。

5.使用本发明的方法，利用小麦酒精废糟液生产食用、药用真菌菌粉及真菌多糖将获得巨大的经济效益和明显的社会效益。

【具体实施方式】

参考下面的实施例，可以更详细地解释本发明；但是应当指出的是本发明并不局限于下述实施例。

本发明所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，用小麦酒精废糟液生产食用、药用真菌菌粉及真菌多糖的方法的工艺；其中包括：酒精发酵后获得酒精废糟液；利用酒精废糟液通过离心、过滤或者清液浓缩液经加水稀释还原成清液。

还包括，利用沉淀物制成全能干饲料。

还包括，利用废糟液的清液勾兑、调配摇瓶培养基、种子罐扩培的培养基和发酵罐的发酵培养基。即在清液中加入0-0.5％酵母膏、0-4％蔗糖，用NaOH和HCl调PH值至5.5-6.5。

本发明使用的菌种为松茸(Trichotoma matsutake)，来源于东北食(药)真菌研究所；蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)来源于辽宁省微生物研究院；本发明也可使用类似或相同但为其它研究院所或厂家生产的松茸、蝙蝠蛾拟青霉。菌种保存的方法为生理盐水低温保存。

菌种扩大培养的方法，采用常规逐级扩培的方法，包括如下步骤：

1.配制斜面培养基：斜面培养基采用PDA培养基，按常规方法配制。

2.配制液体培养基：包括摇瓶培养基、种子罐扩培培养基，两种培养基组成完全相同。

(1)用酒精废糟液离心或者过滤获得的清液加入0-0.5％的酵母膏；0-4％蔗糖用NaOH和HCl调PH值至5.5-6.5。

(2)用清液的浓缩液加水稀释成至原体积的15-30倍溶液，加入0-0.5％酵母膏，0-4％蔗糖，用NaOH和HCl调PH值至5.5-6.5。

3.斜面菌种的活化培养：用接种剂，剂块接种，在PDA培养基上25-27℃培养10-15天。

4.摇瓶扩培：取250毫升三角瓶蒸入70-90毫升摇瓶培养基，常规灭菌后，冷却至30℃时接入斜面菌种1cm²/瓶。先于25-27℃下静置24小时后于摇床上160-180rpm，24-27℃下振荡培养48-72小时。

5.种子罐扩培：种子罐扩培培养基常规装罐、灭菌后，冷却至25℃时，按5-10％的接种量，接入摇瓶种子。在接种前，可按接种量在无菌室内，严格无菌操作，将多瓶并成大三角瓶接种。

通用机械搅拌发酵罐0-12小时，搅拌速度为80-100rpm，通气为0.5∶1vvm，12-72小时搅拌速度120-140rpm，通气量为0.5∶1vvm。

气升式生物反应器，通气搅拌的条件为0-12小时，0.25∶1vvm，12-72小时通气量为0.5∶1vvm。培养温度为24-27℃，大约培养48-72小时。

此后，发酵培养基配制及发酵生产食用、药用真菌菌粉和真菌多糖。

发酵培养基的配制与摇瓶和种子发酵罐培养基相同。常规装罐、灭菌后，按5-10％的接种量接入种子罐的种子，0-72小时通气量的控制与种子罐完全相同。72-144小时，通用搅拌式发酵罐，搅拌速度为160-200rpm通气为0.5∶1vvm。气升式发酵罐0.75∶1vvm。发酵温度控制在24-27℃。

生产食用、药用真菌菌粉的方法：

前述步骤后，待发酵终止，发酵液(包含菌丝体)加入真菌多糖生产获得的滤饼，以调正含水量。通过胶体磨研磨、均质使其最大颗粒不超过5微米，用离心式喷雾干燥机喷雾干燥，喷雾干燥的工艺条件为进风温度230℃，出风温度90℃；喷雾量为1000kg/h，产品量300kg/h，最后包装成产品食用、药用真菌菌粉。

生产食用、药用真菌多糖的方法：

或者，待发酵终止，将发酵液温度升至90℃，并维持5小时。冷却至35℃，通过板框过滤机过滤。收集滤饼，待生产真菌菌粉时加入到发酵液中调解水份含量之用。

然后，收集滤过液，浓缩成1/5(5倍浓缩)由离心式喷雾干燥机喷雾干燥，喷雾干燥的工艺条件为进风温度230℃，出风温度90℃；喷雾量为1000kg/h，产品量300kg/h，最后包装成产品；食用、药用真菌多糖。

实施例1：以小麦酒精废糟液生产桑黄菌粉和桑黄多糖；

一、小麦酒精废糟液清液的制备：

收集新鲜的小麦酒精废糟，利用板框过滤机，过滤的方法，收集滤液；即为小麦酒精废糟液的清液。

二、桑黄液体深层发酵的工艺条件和发酵工艺

1.桑黄发酵的工艺条件

(1)斜面菌种扩培：

桑黄(Phellinus igniarius)的保存菌种购自东北食(药)真菌研究所。

斜面培养基：PDA综合培养基(马铃薯200克，蔗糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，琼脂20克，水1000毫升)用25×250mm试管，用桑黄保存菌种接种，27℃培养10天，在0-4℃条件下，保存备用。

(2)摇瓶菌种扩培

摇瓶培养基的配制：

摇瓶培养基为小麦酒精废糟液，经板框过滤机过滤，获得清液，在清液中加入0.25％的酵母膏，1.5％的蔗糖，用NaOH调PH值至6.0；250毫升三角瓶装量为70毫升/瓶。而750毫升三角瓶装量为100-120毫升。常规灭菌，冷却至30℃，接入斜面菌种，先于27℃静止培养24小时后，置于摇瓶机上160-180rpm，27℃振荡培养72小时。

(3)种子罐扩培

种子罐的培养基与摇瓶培养基相同，常规装罐灭菌后，冷却至27℃，按10％的接种量，接入摇瓶种子。

采用通用式机械搅拌发酵罐。0-12小时转数为80-100rpm，通气量为0.5∶1vvm；12-72小时搅拌转数为120-140rpm，通气量为0.5∶1vvm，培养温度为27℃。

(4)发酵罐发酵

发酵培养基与种子罐培养基和摇瓶培养基相同。

采用机械搅拌式发酵罐，空消后，将培养基打入发酵罐，进罐体积为70％。常规灭菌后，冷却至27℃，按10％接种量，接入种子罐的种子。发酵罐的控制72小时之前条件同种子罐，72-144小时时，搅拌速度为160-200rpm，通气量为0.5∶1vvm，发酵温度控制在27℃。

2.桑黄的发酵工艺路线

三、桑黄菌粉的生产

待发酵终止后，将发酵液和提取多糖获得的桑黄滤饼或者桑黄滤饼粉，按比例加入，其目的是调解桑黄发酵液含水量，以达到70-75％。采用胶体磨，研磨、均质，使其基质颗粒小于5微米。采用离心式喷雾干燥机进行喷雾干燥，其工艺条件为进风温度230℃，出风温度90℃，喷雾量为500-1000kg/h，产品量为100-300kg/h。最后包装成产品，即桑黄菌粉。

四、桑黄真菌多糖的生产

待发酵终止后(发酵过程，同菌粉生产)，发酵液加温至90℃，维持5小时。待冷却至35℃时，板框过滤，滤饼待生产菌粉时用。收集滤过液，真空浓缩至1/5原体积。用离心式喷雾干燥机喷雾干燥(其条件与菌粉的喷雾干燥条件相同)，最后包装成为产品，即桑黄真菌多糖。

本发明所述桑黄系一种药用真菌，其多糖和菌粉产品，对治疗癌症有特效。同时还有很多的保健功能。

本发明未详述部分为现有技术。

为了公开本发明的目的而在本文中选用的实施例，当前认为是适宜的，但是应了解的是，本发明旨在包括一切属于本构思和本发明范围内的实施例的所有变化和改进。

实施例2：用小麦酒精废糟液生产松茸菌粉

一、小麦酒精废糟液清液的制备

收集新鲜的小麦酒精废糟液清液的浓缩液，将其稀释20倍即为小麦酒精废糟液的清液(清液还原液)。

二、松茸发酵的工艺条件和发酵工艺

1.松茸发酵的工艺条件

(1)斜面培养菌株：松茸(Trichotoma matsutake)保存菌种。购自东北食(药)真菌研究所。培养基：PDA综合培养基25×250mm试管接种，生产菌种24-27℃培养10天左右，0-4℃保存备用。

(2)摇瓶培养：培养基为小麦酒精废糟液清液蒸发机获得的浓缩液，将其稀释20倍，还原为清液，加入0.25％的酵母膏，1.5％的蔗糖，加入NaOH调PH至6.0，250毫升三角瓶，装量70毫升，而750毫升三角瓶装量为100-120毫升。常规灭菌，冷却至27℃，接入斜面菌种，先于24-27℃静置24小时后置于摇瓶机上160-180rpm，27℃恒温培养72小时

(3)种子罐培养：培养基同摇瓶，常规装罐和灭菌后，冷却至27℃，按5％的接种量接入摇瓶种子。采用通用式机械搅拌发酵罐，0-12小时转数为80-100rpm，通气量为0.5∶1vvm；12-72小时搅拌速度为120-140rpm通气量为0.5∶1vvm培养温度为27℃。

(4)发酵罐发酵：培养基与种子发酵罐和摇瓶培养基完全相同。采用通用机械搅拌发酵罐，待发酵罐空消后将培养基打入发酵罐中，进罐体积为70％。常规灭菌后，冷却至27℃，按10％的接种量接入种子罐中的菌种。72小时之前发酵控制条件与种子罐相同，72-144小时搅拌速度为160-200rpm，通气量为0.5∶1vvm，发酵温度控制在27℃。

2.松茸的发酵工艺路线

三、松茸菌粉的生产

待发酵终止后，将发酵液中加入提取松茸多糖获得的松茸滤饼或者滤饼粉。调整发酵液含水量至70-75％，采用胶体磨研磨、均质使其基质颗粒小于5微米。采用离心式喷雾干燥机进行喷雾干燥，其工艺条件为：进风温度230℃，出风温度90℃，喷雾量为1000kg/h，产品量为300kg/h。最后，包装成为产品，即松茸菌粉。

注：松茸系一种珍奇的食用真菌，其子实体，不能人工培养，而菌丝体可以通过液体深层发酵法生产。

实施例3：用小麦酒精废糟液生产虫草多糖

一、小麦酒精废糟液清液的制备

收集新鲜小麦酒精废糟液，通过离心方法获得清液。

二、冬虫夏草的发酵工艺条件和发酵工艺

1.冬虫夏草的发酵工艺条件

(1)菌株。蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)来源于辽宁省微生物研究院。培养基PDA综合培养基25×250mm试管接种保存种子。24℃培养8-10天，0-4℃保存备用。

(2)摇瓶培养，培养基为小麦酒糟废糟液清液内加入0.25％酵母膏，1.5％蔗糖，用NaOH调PH值至6.0。250毫升三角瓶装量为70毫升；750毫升的三角瓶装100-120毫升。常规灭菌，冷却至24℃振荡培养2.5天。

(3)种子罐培养，培养基同摇瓶培养基。常规灭菌，冷却至24℃，按5％接种量接入摇瓶菌种，用通用机械搅拌发酵罐，0-12小时转速为80-100rpm，通气量为0.5∶1vmm，12-72小时，搅拌转速为120-140rpm，通气量为0.5∶1vvm，培养温度为24℃，培养周期为72小时。

(4)发酵罐发酵：培养基与种子罐培养基相同。采用通用机械搅拌发酵罐，待发酵罐空消后，将培养基打入发酵罐中，进罐体积为70％。常规灭菌后，冷却至24℃按10％的接种量，接入种子罐中的菌种，发酵控制与种子罐的发酵控制条件相同。48-72小时搅拌速度为160-200rpm，通气量为0.5∶1vvm，发酵温度控制在24℃，培养72小时。

2.冬虫夏草的发酵工艺路线

三、虫草多糖的生产

待发酵终止，将发酵液温度升至90℃，维持5小时。冷却至35℃，用板框过滤机过滤收集滤过液，真空浓缩至原体积的1/5。用离心式喷雾干燥机喷雾干燥；工艺控制：进气口温度为230℃，出气口温度为90℃，喷雾量1000kg/h，产品量为300kg/h。最后包装成为产品，即虫草多糖。收集的泸饼，待菌粉生产时用。

注：蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)是冬虫夏草的一个品种，它是一种药用真菌，冬虫夏虫很难人工栽培成子实体，但是通过液体深层发酵可以得到菌丝体，用其可以生产菌粉和虫草多糖。

Claims (7)

1.一种小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，其特征是：所述小麦酒精废糟液以小麦为原料，经过液体深层发酵，酿造酒精，获得酒精废糟液，包括如下步骤：

a、获得清液：

将所述小麦酒精废糟液中的固体由液体分离分离出来，获得清液；

b、获得菌种扩培培养基，进行菌种扩培；

1)、斜面菌种培养基制备和斜面菌种扩培；斜面菌种培养基采用PDA综合培养基接种于24-27℃下培养10-15天；

2)、摇瓶培养基，种子发酵罐的培养基制备及种子扩培：

摇瓶培养基和种子发酵罐培养基相同，即步骤a所获得清液加入0-0.5％酵母膏；0-4％蔗糖，用NaOH和HCl调PH值至5.5-6.5；

摇瓶培养：取前述获取物250毫升的三角瓶内，装入70-90毫升的培养基，750毫升三角瓶，装量为100-120毫升/瓶；灭菌后，冷却至30℃时接入斜面菌种“PDA培养基上生长的，不超过10天的食用、药用真菌的菌种”用接种

下一小块，大约1cm²左右纯培养物，于24-27℃条件下，静置24小时后置于摇床上160-180rpm于24-27℃左右，振荡培养48-72小时；

c、种子发酵罐培养：

在通用式机械搅拌发酵罐或者气升式气体搅拌式发酵罐中进行；常规灭菌后按5-10％接种量，接入摇瓶种子，其发酵条件为：采用机械搅拌式发酵罐；0-12小时：搅拌速度为80-100rpm，通气量为0.5∶1vvm；或12-72小时搅拌速度120rpm-140rpm通气量为0.5∶1vvm，采用气升式空气搅拌式发酵罐；或0-12小时时0.25∶1vvm，12-72小时为0.5∶1vvm；其中种子发酵罐培养温度为24-27℃；发酵周期为48-72小时；

获得发酵培养基后，进行食用、药用真菌液体深层发酵：发酵培养基的成份与摇瓶、种子发酵罐的扩培培养基相同；即步骤a所获得清液加入0-0.15％酵母膏，0-4％蔗糖，用NaOH和HCl调PH值至5.5-6.5；然后常规灭菌，灭菌后按5-10％的接种量，接入种子；

其中发酵控制：前72小时与种子发酵罐条件相同，用机械搅拌发酵罐；72-144小时，搅拌速度为160-200rpm，通气为0.5∶1vvm，气升式生物反应器空气搅拌的条件；72-144小时为0.75∶1vvm；发酵温度为24-27℃，然后进入食用、药用真菌菌粉的生产，其中按本步骤发酵至144小时左右，还原糖下降变缓，即可终止发酵；

d、将发酵液“内含菌丝体”加入提取多糖时获得的泸饼，以调解含水量；通过胶体磨、研磨、均质，使其基质颗粒小于5微米，通过离心式喷雾干燥机，喷雾干燥成食用、药用真菌菌粉，其中水份为≤10％；

e、食用、药用真菌多糖的生产：按步骤c，发酵终止时将发酵罐内温度控制到90℃，维持5小时，待冷却在35℃左右进行板框过滤；然后收集滤液，真空浓缩至原体积的1/5左右；通过离心式喷雾干燥机，喷雾干燥，成为食用、药用真菌多糖产品；所述滤饼，在生产菌粉时待用。

2.根据权利要求1所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，其特征是：所述PDA综合培养基为马铃薯200克，蔗糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，水1000毫升，琼脂20克。

3.根据权利要求1或2所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，其特征是：所述PDA综合培养基的加工为：200克马铃薯，洗净去皮切成小块，加水1000ml煮沸半个小时或高压蒸煮20分钟，纱布过滤，再依次添加蔗糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，水1000毫升和琼脂20克，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml“视试管大小而定”，15磅蒸气“121℃”灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存待用。

4.根据权利要求1所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，其特征是：所述步骤a的获得清液过程为：利用离心机对所述小麦酒精废糟液离心方式获得所述清液，或利用过滤方式获得所述清液，或将所述离心或过滤方式获得的清液浓缩后再次加水稀释获得所述清液。

5.根据权利要求1或4所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，其特征是：将步骤b或c获得摇瓶培养基种子发酵罐的培养基和发酵培养基；摇瓶、种子罐、发酵罐的培养基均用小麦酒精废糟液由步骤a所获得的清液为母体加入酵母膏0-0.5％，蔗糖0-4％，调PH值5.5-6.5而制成。

6.根据权利要求1或4所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，其特征是：步骤d，在发酵终止后，加入提取多糖时获得的滤饼调含水量，先用胶体磨、研磨成＜5微米基质颗粒，不经板框过滤，直接用离心式喷雾干燥机喷雾干燥，制成食用、药用真菌菌粉。

7.根据权利要求1或4所述的小麦酒精废糟液生产真菌菌粉及真菌多糖的方法，其特征是：所述步骤e，发酵终止时，在发酵罐内，发酵液直接升温至90℃，维持5小时，待冷却至35℃左右，进行板框过滤，收集滤液，真空浓缩至原体积的1/5，通过离心式喷雾干燥机喷雾干燥，其中条件为进风温度调至200-230℃，出风温度调至90℃，喷液量为500-1000kg/h；制得食用、药用真菌多糖产品；其中板框过滤获得的滤饼，待生产菌粉时用。