CN101704904B - 葛藤多糖提取物的制备方法及用途 - Google Patents

葛藤多糖提取物的制备方法及用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种葛藤多糖提取物及其制备方法和用途。包括下述步骤：A、葛藤粉碎：将葛藤粉碎至60～150目；B、多糖提取：以重量计8～20倍量的水提取，在60～100℃的温度下回流提取2～4h，提取2～4次；C、提取液离心：其中离心速度为3000～4000r/min；D、离心后液取上清液浓缩至一定浓度，浓缩的倍数为8～20倍；加入乙醇沉淀，使得多糖的浓缩液中乙醇浓度为60～85％，再离心或过滤法去除不溶物；E、上清液进行二次乙醇沉淀，条件同步骤D，再干燥，得葛藤多糖提取物。多糖提取物采用冷冻干燥法，干燥16～30h。本发明的葛藤多糖提取物制备方法简便，可制备成抗氧化的功能性食品；同时该发明可变废为宝，提升葛根副产品的附加值，提高葛根资源的综合利用率。

Description

葛藤多糖提取物的制备方法及用途
技术领域
本发明涉及一种葛藤多糖提取物及其制备方法和用途，特指具有抗氧化作用的葛藤多糖提取物，属于保健食品技术领域。
背景技术
野葛为豆科多年生落叶藤本植物，兼具药食两用价值。中国药典收载的葛根系野葛的干燥根，在我国分布很广，除西藏和新疆外，其余各省区均有分布，其药用最早记载于《神农本草经》。葛根含有多种活性成分，其中以葛根素、大豆苷和大豆苷元等异黄酮类成分为主，葛根素可用于治疗心血管疾病、心绞痛和心率失常等疾病，大豆苷和大豆苷元可用于治疗和预防妇女疾病。目前我国野葛的研究和开发都集中在葛根与葛花部位，而对葛藤的研究少，且对葛藤的研究主要针对异黄酮类成分，对多糖等其它活性成分及生物活性的研究少。葛藤为葛藤茎和葛叶，为农业废弃物，目前还未得到开发利用。葛藤含有多种活性成分，主要包括黄酮类、多糖、挥发油、维生素和矿物质等。关于葛藤异黄酮的研究已有专利报道。中国专利CN1769278A于2006年5月10日公开了“从葛藤中提取分离异黄酮的方法”，从葛藤中分离的总黄酮提取物为葛根素和大豆苷元。中国专利CN1723989A于2006年1月25日公开了“葛藤提取物、制备方法及用途”，该提取物主要成分为葛藤总黄酮，用于治疗妇女更年期综合症药物。中国专利CN1911923A于2007年8月23日公开了“一种从葛藤中提取、分离大豆苷元的方法”。本发明人采用反相高效液相法同时测定江苏茅山地区野葛的根、茎和叶中葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量(RP-HPLC法同时测定野葛的根、茎和叶中葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量，食品科学，2009，30(14)：248-252)，结果表明，葛藤中葛根素、大豆苷和大豆苷元含量均远低于葛根中的含量，可见葛藤中异黄酮的开发利用价值低。多糖是构成生命的四大基本物质之一，且有多种生物活性。但有关葛藤多糖及其制备方法和用途至今未见国内外报道，也未见相应专利公开。
发明内容
本发明的目的是为了克服以上背景技术的不足，提供一种葛藤多糖提取物及其制备方法和用途。
用本发明制备的多糖提取物，多糖含量大于30％，收率在7.0～10％之间。
制备本发明的多糖提取物包括下述步骤：
A、葛藤粉碎；其中葛藤粉碎至60～150目。
B、多糖提取；以8～20倍量的水提取，在60～100℃的温度下回流提取2～4h，提取2～4次。
C、提取液离心；离心速度为3000～4000r/min。
D、离心后液取上清液浓缩至一定浓度，浓缩的倍数为8～20倍；加入乙醇沉淀，使得多糖的浓缩液中乙醇浓度为60～85％，再离心或过滤法去除不溶物；
E、上清液进行二次乙醇沉淀，条件同步骤D，再干燥，得葛藤多糖提取物。多糖提取物采用冷冻干燥法，干燥16～30h。
葛藤多糖含量以苯酚-硫酸法测定。
采用清除羟基自由基、超氧自由基试验考察葛藤多糖抗氧化活性。结果表明葛藤多糖具有很好的抗氧化活性，因此本发明的多糖提取物可用于制备抗氧化的功能性食品。
本发明的优点：本发明的葛藤多糖提取物制备方法简便，可制备成抗氧化的功能性食品；同时该发明可变废为宝，提升葛根副产品的附加值，提高葛根资源的综合利用率。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明内容，用具体实施例说明如下，具体实施例不限定本发明内容范围。
葛藤多糖的制备
实施例1
取葛藤样品100g，葛藤粉碎至60目，以8倍量的水于60℃回流提取2次，每次2小时，以3000r/min离心，水提液浓缩至100mL，浓缩液用100mL60％乙醇醇沉，静置过夜，抽滤，上清液进行二次醇沉，冷冻干燥16h得到葛藤多糖提取物7.23g，其多糖含量为30.29％，收率为7.23％。
实施例2
取葛藤样品100g，葛藤粉碎至100目，以15倍量的水于80℃回流提取3次，每次3小时，以3600r/min离心，水提液浓缩至100mL，浓缩液用100mL75％乙醇醇沉，静置过夜，以3600r/min离心，上清液进行二次醇沉，冷冻干燥24h得到葛藤多糖提取物8.39g，其多糖含量为30.27％，质量收率为8.39％。
实施例3
取葛藤样品100g，葛藤粉碎至150目，以20倍量的沸水回流提取4次，每次4小时，4000r/min离心，水提液浓缩至100mL，浓缩液用100mL85％乙醇醇沉，静置过夜，抽滤，上清液进行二次醇沉，冷冻干燥30h得到葛藤多糖提取物9.47g，其多糖含量为30.31％，收率为9.47％。
葛藤多糖抗氧活性试验
葛藤多糖提取物清除羟基自由基作用
通过清除羟基自由基试验考察受试样品的抗氧化活性。
1、实验材料
1.1药品与试剂
葛藤多糖提取物：批号081021，配制成生药浓度为0.5mg/mL的水溶液备用；
邻二氮菲溶液：配制成0.75mmol/L的无水乙醇溶液；
磷酸盐缓冲溶液：配制成0.2mol/L pH7.40的缓冲溶液；
硫酸亚铁溶液：配制成0.75mmol/L的无水乙醇溶液；
双氧水：配制成0.01％的双氧水。
1.2仪器
UV2450紫外分光光度计：日本岛津公司；
电子天平：北京赛多利斯仪器***有限公司；
旋转蒸发仪RE-52C：巩义市予华仪器有限责任公司；
冷冻干燥机FD-1C-50：北京博医康实验仪器有限公司。
2、实验方法
取1mL邻二氮菲溶液于试管中，依次加入2mL磷酸盐缓冲溶液和1mL蒸馏水，充分混匀后，加入1mL硫酸亚铁溶液混匀，再加入1mL双氧水，于37℃水浴60min，在536nm测其吸光值，所测得的数据为损伤管的吸光值(A(损))；以1mL样品液代替1mL蒸馏水则测得样品的吸光值(A(样))；用1mL蒸馏水代替1mL双氧水测得的吸光值为A(未)。重复三次。清除率按下式计算：
清除率S(％)＝(A(样)-A(损))/(A(未)-A(损))×100％
3、实验结果
图1为葛藤多糖提取物和VC对羟基自由基的清除效果，可见，多糖提取物的清除效果好，当浓度为1mg/mL时，清除率为74.85％，其IC50值为0.7511mg/mL，葛藤多糖提取物清除·OH的能力与Vc(IC50为0.3477mg/mL)相近。
4、结论
葛藤多糖提取物具有很好的清除羟基自由基作用，其清除效果与VC相近。
实施例5、葛藤多糖提取物的清除超氧自由基作用
通过清除超氧自由基试验考察受试样品的抗氧化活性。
1、实验材料
1.1药品与试剂
葛藤多糖提取物：批号081021，配制成生药浓度为0.5mg/mL的水溶液备用；
邻二氮菲溶液：配制成0.75mmol/L的无水乙醇溶液；
磷酸盐缓冲溶液：配制成0.01M pH8.2的缓冲溶液；
邻苯三酚溶液：配制成45mM的水溶液；
盐酸：配制成10M的盐酸溶液。
1.2仪器
UV2450紫外分光光度计：日本岛津公司；
电子天平：北京赛多利斯仪器***有限公司；
旋转蒸发仪RE-52C：巩义市予华仪器有限责任公司；
冷冻干燥机FD-1C-50：北京博医康实验仪器有限公司。
2、实验方法
取9mL磷酸盐缓冲液与1mL样品液混合，25℃恒温水浴15min。取3mL混合液于比色皿中，加入0.1mL邻苯三酚，摇匀，在第4分钟加入盐酸1滴终止反应，于325nm处测定样品吸光值(A1)，同时分别测定不加邻苯三酚的样品液和磷酸盐混合液的吸光值(A2)和以1mL溶剂代替样品液的磷酸盐和邻苯三酚混合液的吸光值(A3)，重复三次。O2-·清除率按下式计算：
清除率S(％)＝[1-(A1-A2)/A3]×100％
3、实验结果
图2为葛藤多糖提取物和VC对超氧自由基的清除效果，可见，多糖提取物在1mg/mL时其清除率达63.95％，其IC50值为0.9229mg/mL(Vc的IC50为0.2299mg/mL)。可见多糖提取物清除超氧自由基活性好。
4、结论
葛藤多糖提取物清除超氧自由基活性好。

Claims (4)

1.葛藤多糖提取物的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：
取葛藤样品100g，葛藤粉碎至60目，以8倍量的水于60℃回流提取2次，每次2小时，以3000r/min离心，水提液浓缩至100mL，浓缩液用100mL60％乙醇醇沉，静置过夜，抽滤，上清液进行二次醇沉，冷冻干燥16h得到葛藤多糖提取物7.23g，其多糖含量为30.29％，收率为7.23％。
2.葛藤多糖提取物的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：
取葛藤样品100g，葛藤粉碎至100目，以15倍量的水于80℃回流提取3次，每次3小时，以3600r/min离心，水提液浓缩至100mL，浓缩液用100mL75％乙醇醇沉，静置过夜，以3600r/min离心，上清液进行二次醇沉，冷冻干燥24h得到葛藤多糖提取物8.39g，其多糖含量为30.27％，质量收率为8.39％。
3.葛藤多糖提取物的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：
取葛藤样品100g，葛藤粉碎至150目，以20倍量的沸水回流提取4次，每次4小时，4000r/min离心，水提液浓缩至100mL，浓缩液用100mL85％乙醇醇沉，静置过夜，抽滤，上清液进行二次醇沉，冷冻干燥30h得到葛藤多糖提取物9.47g，其多糖含量为30.31％，收率为9.47％。
4.根据权利要求1、2或3所述的方法制备的葛藤多糖提取物在制备抗氧化的功能性食品中的应用。
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