CN101703005B - 一种微生物菌株及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种微生物菌株及其应用，属微生物农药技术领域。本发明的微生物菌株为球盖菇2052(Stropharia sp.2052)，2052菌株已于2009年11月5日保存于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.3399。本发明的微生物菌株作为制备用于防治根结线虫制剂的应用。用本发明的微生物菌株制备的菌剂对番茄根结线虫病温室防效达到60％以上，对烟草根结线虫病温室防效达到50％以上，并能明显促进植物的生长。本发明制备的防治根结线虫制剂，具有高效、低毒及无残留的优点。

Description

一种微生物菌株及其应用

技术领域：

本发明涉及一种微生物菌株及其应用，属微生物农药技术领域。

技术背景：

植物寄生线虫是作物上普遍发生的病害之一，危害几乎所有作物。仅根结线虫(Meloidogyne spp.)每年在全球造成的损失就高达数百亿美元。由于生产上缺乏抗性品种，农作物复种指数高，化学杀线剂的使用受到限制，以及现代农业可持续发展的需要，生物防治根结线虫日益受到重视。

食线虫真菌中有一类特殊的蘑菇成员，也被称为食线虫担子菌。这些蘑菇因其攻击并利用线虫的行为而被称为“食肉的蘑菇”。这些蘑菇中许多种类会产生一些附属结构，其中包括作为捕食器的滴漏状粘球和冠囊体，还有分泌毒素的毒素球和类毒素球，这些附属结构通过粘附捕捉或毒素击倒的方式作用线虫。在线虫的生物防治中具有潜在和实际的应用价值。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种微生物菌株及其应用。

本发明从食线虫担子菌中筛选寻找具有工业化生产前景的菌株，为农业生产提供一种具较好的防治根结线虫的生防制剂。本发明具体是这样实现的：

本发明人在前期研究中，筛选获得了具有良好杀根结线虫功能的担子菌球盖菇2052(Stropharia sp.2052)，2052菌株已于2009年11月5日保存于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.3399。

球盖菇(Stropharia)隶属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、球盖菇科。其主要形态特征为：有着紫褐色至烟褐色的孢子，常见于树林、草地、堆肥、动物粪便等场所。子实体中等至较大，菌盖直径60～160(200)mm，扁半球形、半球形至扁平，葡萄酒红褐色，逐渐转为赭褐色或乳酪色，有时黄乳酪色并有酒红色细丝分布其间。菌盖幼时锥形至钟形，成熟时钟形至平展，平滑或有纤毛状鳞片，湿润时稍粘，初期有菌幕残片，后变光滑，边缘锐，常向内卷曲。菌褶初期略带烟色，后着色变深，灰蓝色至紫黑色，近生和贴生，密，较宽，不等长，边缘略白。菌柄白色，有时略黄，较厚，70～150×15～30mm，圆柱形，基部略膨大，实心。菌环较厚，白色。菌柄在菌环以下部位光滑、无鳞。菌肉白色，较厚。有青草香味。孢子印紫褐色，孢子椭圆至卵形，厚壁，9.5～12×7～9μm，有芽孔。单生或群生于树林和草地等生境。几乎所有球盖菇属真菌的纯培养都能够产生附属结构刺细胞，该结构被认为是该属真菌分类的一个重要特征

本发明将球盖菇2052通过固体培养，获得包括菌丝和菌丝附属结构的菌体培养物，固体培养物直接制成粒剂，作为杀根结线虫制剂的应用。

球盖菇(Stropharia)原始菌株生长缓慢。我们从土壤中分离到不同菌株，其中大部份不具备我们所需的“明显稳定的防治效果，综合性状好，易于规模化生产”的特性。通过对菌株进行筛选和改良后，获得了稳定的菌株2052。它不但对根结线虫(Meloidogyne spp.)具有良好的防治效果，同时具备了工业化生产的基本性状。

鉴于该菌株由于(自发的、物理的或化学的)突变、原生质体融合，转化或其他通过生物技术会发生变化或被改造，本菌种任何菌株的突变株、变种和衍生物均在本专利的保护范围内。

本生防制剂能与其他的杀线虫农药、植物生长调节剂混合使用，但必须保证所混合药剂对本发明采用的球盖菇无副作用。

本发明的线虫生防制剂一般在作物播种或移栽时施用。方法是播种时与种子共同施入土壤中，移栽时将本制剂施入作物根际周围。对线虫发生严重地区可在作物生长过程中追施一次，方法是将本制剂施入作物根际周围。

本发明与现有的杀植物寄生线虫药相比，具有高效、低毒以及无残留的优点。

具体实施方式：

本发明化合物的发酵生产方法(常规方法)：

1、将2052菌株的菌丝体接种到试管固体培养基斜面上，培养基配方为PDA培养基，20-30℃下培养4-8天，获得试管种。

2、将培养好的固体种子接入固体培养基中，培养基的配方为：70-80％小麦粒、10-20％葡萄糖，5-10％碳酸钙，22-28℃培养25-35天后，40-45℃温度条件下烘干后制成粒剂。

本发明制剂对根结线虫的防效试验：

1、南方根结线虫(Meloidogyne incognita)的培养

将温室培养的带有南方根结线虫的番茄根用无菌水洗净，解剖针挑取根结线虫的卵囊置于0.4M的KCl溶液中，在5ml离心管中依次用4ml无菌水(三次)、1ml无菌青-链霉素双抗溶液、3ml 0.1％的NaClO溶液洗涤和消毒，每一步骤均通过短暂离心(8000转30秒)除去上清液。洗涤好的虫卵置于0.4M的ZnCl₂溶液中孵化48小时，二龄幼虫用移液器收集于1.5ml离心管，通过短暂离心(5000转30秒)富集备用。

2、防效试验方法

(1)试验所用药剂及处理

A、固体菌剂10-20％，在作物移栽时一次性施于作物根际；

B、阳性对照，0.5％阿维菌素按37.5kg/hm²处理；

C、空白对照，不加菌剂或药剂处理。

(2)试验方法

在直径为15cm的盆钵加入500g土样(病土∶沙土∶腐殖土＝1∶1∶1)，做以上几个处理。每个处理5盆且3次重复，置于25-28℃的温室中培养。移栽后每隔3天浇水，使其正常生长。菌剂处理后30、60天分别调查各处理组作物根部的根结数、根际的虫卵数和作物的株高、地上部分重以及根的湿重，计算菌剂对根结线虫病的防治效果。

实施例1：用菌剂防治番茄根结线虫病试验

移栽1月龄番茄(4-6叶)，番茄品种为：改良毛粉802，山东农业科技开发公司生产。每盆施用50g菌剂，按上述试验方法进行防效试验。列表所示为防效数据。

表1菌剂对番茄根结线虫病的防治效果(60d)

结果表明，该菌剂对番茄根结线虫病具有明显的防治作用。

表2菌剂对番茄生长的影响(60d)

结果表明，该菌剂对番茄的生长具有显著的促生长作用，明显高于对照。

实施例2：用菌剂防治烟草根结线虫病试验

实施例2方法同实施例1，不同之处为：移栽烟草品种为：云南85，云南省育烟草研究所培育。

表3菌剂对烟草根结线虫病的防治效果(60d)

结果表明，该菌剂对烟草根结线虫病具有明显的防治作用。

表4菌剂对烟草生长的影响(60d)

结果表明，该菌剂对烟草的生长具有显著的促生长作用，明显高于对照。

实施例3：不同菌剂施用量的防效比较

实施例3方法同实施例1，不同之处为：施用菌剂为每盆50g和75g。

表5不同量菌剂对番茄根结线虫病的防治效果％

结果表明，菌剂施用量增加50％，防效提高20％。

Claims (2)

1.一种微生物菌株，其特征在于该微生物菌株为球盖菇2052(Stropharia sp.2052)，该菌株已于2009年11月5日保存于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.3399。

2.权利要求1所述的微生物菌株在制备用于防治根结线虫制剂中的应用。