CN101683461B - 一种中药组合物在制备抑制氧化损伤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药组合物在制备抑制慢性心力衰竭患者氧化损伤药物中的应用。本发明中药组合物主要由黄芪、人参、丹参等11味中药组成，实验研究表明，该中药组合物能有效降低丙二醛(MDA)含量，提高超氧化物歧化酶(SOD)活性，抑制慢性心力衰竭患者氧化损伤。

Description

一种中药组合物在制备抑制氧化损伤药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种中药组合物的新用途，具体地，涉及一种中药组合物在制备抑制慢性心力衰竭患者氧化损伤的药物中的应用。

背景技术

正常人体可产生少量氧自由基，它们在机体的防御***和解毒***中起重要作用，同时机体也存在一系列自由基消除***，能及时清除氧自由基。当氧自由基生成增加或抗氧自由基物质活性降低，机体可产生氧自由基堆积，进而使脂质过氧化，引起过氧化损伤。超氧化物歧化酶(SOD)能清除超氧阴离子，保护细胞免受损伤，其活力可反映机体清除氧自由基的能力；丙二醛(MDA)是氧自由基引起脂质过氧化反应的一种脂质过氧化物，其含量可反映细胞损伤的程度。氧自由基能产生心肌细胞损伤，诱导心肌细胞凋亡，导致心肌重构和心功能减退，而功能减退的心肌细胞对氧自由基诱导的细胞损伤更加敏感，从而产生一系列恶性循环。(马琦琳，谢勇，张赛丹，彭道地，曾小林.心力衰竭患者氧自由基的变化及万爽力对其的影响.湖南医科大学学报，2002，27(6).)

生理情况下，体内氧自由基的产生和清除保持动态平衡，心衰时由于心肌缺血缺氧，使氧自由基产生增加，同时清除氧自由基的防御***活性下降，从而使氧自由基进一步增多，又可损害心肌导致或加重心衰。

一般认为氧化损伤可通过以下几个方面影响心脏功能：作用于心肌细胞膜发生脂质过氧化损伤，影响心功能最终导致心肌细胞死亡；使心肌线粒体肿胀、崩解、合成障碍，导致心肌收缩力下降；破坏溶酶体膜，释放磷脂酶并激活膜旁磷脂酶，破坏膜磷脂，严重时发生心肌收缩成分外溢直至细胞自溶；还使大分子蛋白肌原纤维挛缩、断裂、破坏微粒体、核酸及膜受体，影响心肌细胞的代谢及收缩功能；等等。

因此，心力衰竭患者可以通过降低MDA含量，提高SOD活性，来抑制氧化损伤。

本发明是在中国专利ZL02146573.8的基础上进行的改进发明，在此全文引用该专利文件记载的内容。中国专利ZL02146573.8未记载该中药组合物在抑制慢性心力衰竭患者氧化损伤药物中的应用。

发明内容

本发明目的是提供一种中药组合物在制备抑制慢性心力衰竭患者氧化损伤药物中的应用；

更优选地，该中药组合物通过有效降低慢性心力衰竭患者丙二醛(MDA)的含量，提高超氧化物歧化酶(SOD)的活性，抑制慢性心力衰竭患者的氧化损伤。

本发明药物主要由黄芪、人参、丹参等11味中药组成，具有温补心肾阳气及活血利水之功效。本方中的有效成分人参总皂苷、丹参素等均可有效清除氧自由基、抑制多种因素引起的脂质过氧化反应而有利于细胞形态和功能的完整性。

所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪150-450份、附子40-120份、人参或党参75-225份、丹参75-225份、葶苈子50-150份、香加皮或南五加皮60-180份、泽泻75-225份、玉竹25-75份、桂枝30-90份、红花30-90份、陈皮25-75份；

优选地，所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪450份、附子112.5份、人参或党参225份、丹参225份、葶苈子150份、香加皮或南五加皮180份、泽泻225份、玉竹75份、桂枝90份、红花90份、陈皮75份；

优选地，所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪250份、附子112.5份、人参或党参200份、丹参120份、葶苈子135份、香加皮或南五加皮150份、泽泻200份、玉竹60份、桂枝75份、红花75份、陈皮60份。

本发明中药组合物的活性成分可以由常规的提取工艺[如范碧亭《中药药剂学》(上海科学出版社1997年12月第1版)]制得，更优选地，所述中药组合物的活性成分由下列步骤制得的有效成分组成：

(1)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮用7-9倍量70％乙醇提取，滤过，浓缩提取液至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏；

(2)提取桂枝、陈皮的挥发油；

(3)附子、丹参、玉竹、红花加6-10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过；桂枝、陈皮提油后的水溶液滤过，收集水溶液滤液，再加6-10倍量水煎煮残渣1小时，滤过，合并水溶液；将上述所得的各种水溶液合并，浓缩至相对密度为1.25-1.30清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70％，静置，滤过，滤液浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30清膏。

本发明还提供了该中药组合物胶囊剂的制备方法：

(1)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮按照比例量称取加8倍量70％乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25-1.30(60℃热测)的清膏，备用；

(2)桂枝、陈皮按照比例蒸馏提取挥发油，提油后的水溶液滤过，备用，残渣再加8倍量水煎煮1小时，滤过，合并水煎液，备用；

(3)附子、丹参、玉竹、红花加水9倍量煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，与步骤(2)中桂枝、陈皮水煎液合并，浓缩至相对密度为1.25-1.30(60℃热测)清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70％，4℃以下静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25-1.30(60℃热测)清膏，与步骤(1)的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

(4)将步骤(3)所得干膏粉碎成100目粉，加70％乙醇适量制粒，喷入桂枝、陈皮挥发油，混匀，装胶囊，即得。

本发明中药组合物中，作为活性组分的原料药的拉丁名及其加工方法来自《中药大辞典》(1977年7月，第一版，上海科学技术出版社)和《中国药典》(2005年版，化学工业出版社)。

本发明中药组合物还可以按常规的制剂工艺，例如，范碧亭《中药药剂学》(上海科学出版社1997年12月第1版)记载的制备工艺，制成药剂学可接受的任意常规剂型，例如胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂等。

本发明的应用中，所述中药组合物制剂剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂，为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000，PEG4000，虫蜡等。为使上述剂型能够实现中药药剂学，需在制备这些剂型时加入药学可接受的其它辅料(范碧亭《中药药剂学》，上海科学出版社1997年12月第1版中各剂型记载的辅料)。

本发明中药组合物的用量，按活性组分原料药总重量计，为4-20克/日，可每日服用一次，优选为分2-4次服用，还优选为6-12克/日，分2-4次服用，更优选为7.59克/日，分3次服用。

为阐明本发明中药组合物抑制慢性心力衰竭患者氧化损伤的活性，用按实施例方法所制得的药物(以下称本发明药物)进行了下列试验。

1、动物

健康Wistar大鼠，清洁级，雌雄各半，体重200～240g，购于河北省动物实验中心，许可证号：SCXK(冀)2003—1—003。饲养在河北以岭医药研究院药理室，光照12小时/天，温度20～23℃，相对湿度40～60％。大鼠笼养，5只/笼。大鼠饲料为全价颗粒饲料，由河北省实验动物中心提供。适应性饲养三天。

2、药物

本发明药物，由石家庄以岭药业股份有限公司提供(批号：20000601)，试验用蒸馏水配成所需浓度。

3、实验方法

3.1分组与造模

大鼠随机分为3组：假手术组，模型组，本发明药物4.8g生药/kg剂量组。每组10只。药物以蒸馏水稀释至所需浓度，给药体积均为10ml/kg，给药途径为口服。

采用腹主动脉缩窄法制作慢性心力衰竭(心衰)大鼠模型。大鼠用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，剑突下腹正中切口，分层打开腹腔，在肾动脉分支以上钝性游离腹主动脉，将7号注射器针头平行置于腹主动脉上，用4号手术丝线将腹主动脉和注射器一同结扎，然后缓慢将注射器撤出，关腹，分层缝合。使大鼠腹主动脉直径缩窄为0.7mm。假手术组开腹后将手术丝线穿过腹主动脉，除不缩窄腹主动脉以外，其他操作与模型组完全相同。术后3周开始口服给药，每日一次。连续给药4周。

3.2血流动力学指标：

经颈动脉插管，用四导生理记录仪记录左心室收缩压、左心室舒张末压、左心室压力上升和下降最大速度、心率。

3.3MDA、SOD检测：

取各组动物做血浆MDA含量与SOD活性检测，按试剂盒说明书进行。

3.4HE染色：

处死大鼠，取左心室肌，10％甲醛溶液固定，常规HE染色，光镜下观察。

3.5电镜观察：

取左心室肌，于冰上切成1mm³心肌组织块，置于5％戊二醛4℃固定24小时，送电镜室包埋，制作超薄切片，透射电镜下观察。

3.6统计学分析 实验数据采用SPSS11.5版软件包进行统计学处理。实验数据以均数±标准差表示。用单因素方差分析，P<0.05作为差别有显著性的检验水准。

4、结果

4.1对慢性心力衰竭大鼠血流动力学指标的影响：

与假手术组相比，慢性心力衰竭组左心室舒张末压、心率显著升高(P<0.01)，收缩压、舒张压、平均压、左心室收缩压、左心室内压最大收缩率、左心室内压最大舒张率显著降低(P<0.01)，强心力组舒张压、左心室收缩压、左心室舒张末压、心率显著低于慢性心力衰竭组(P<0.01)，左心室内压最大收缩率、左心室内压最大舒张率显著高于慢性心力衰竭组(P<0.01)。见表1。

表1 对慢性心力衰竭大鼠血流动力学指标的影响(x±s)

与假手术组比较^**P<0.05，与模型组比较##P<0.01

4.2对慢性心力衰竭大鼠SOD、MDA的影响：

模型组与假手术组比，MDA含量明显上升(P<0.01)，SOD活性明显下降(P<0.01)，强心力组与模型组比，MDA含量明显下降(P<0.01)，SOD活性明显上升(P<0.01)。见表2。

表2 对慢性心力衰竭大鼠SOD、MDA的影响(X±S)

与假手术组比较^**P<0.05；与模型组比较##P<0.01

4.3HE染色：

光镜观察可见假手术组心肌纤维排列有序，横纹清晰。模型组大鼠心肌细胞明显浊肿，部分肌纤维溶解、断裂，横纹消失，胞浆空泡样变，心肌间质水肿，可见炎性细胞浸润。本发明药物组可明显改善上述病理变化。

4.4电镜观察：

电镜观察可见假手术组心肌肌原纤维和肌丝排列有序，明暗带清晰，线粒体排列有序，形态结构正常；模型组大鼠心肌肌原纤维间隙明显增宽，排列紊乱，可见局灶性肌丝溶解，线粒体数目增多、排列紊乱，明显肿胀，部分嵴断裂或消失，可见肌浆网明显扩张。本发明药物组可明显改善上述病理变化。

5、结论

本实验光镜及电镜可观察到：心衰后，大鼠心肌细胞明显浊肿，部分肌纤维溶解、断裂，横纹消失，胞浆空泡样变，心肌间质水肿，炎性细胞浸润，线粒体数目增多、排列紊乱，明显肿胀，部分嵴断裂或消失，可见肌浆网明显扩张，本发明药物治疗后可明显改善上述病理变化，改善心功能。实验结果显示心衰后，MDA含量上升，SOD活性下降，给予本发明药物治疗后可明显降低MDA含量，提高SOD活性。

综上所述，本发明药物可明显降低MDA含量，提高SOD活性，抑制慢性心力衰竭患者氧化损伤。

具体实施方式

实施例1：本发明药物胶囊剂的制备

处方：

黄芪450g   附子112.5g  人参225g  丹参225g  葶苈子150g

香加皮180g 泽泻225g    红花90g   玉竹75g   陈皮75g  桂枝90g

制备方法：

(1)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参、香加皮按照上述组方加8倍量70％乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25-1.30(60℃热测)的清膏，备用；

(2)桂枝、陈皮按照组方蒸馏提取挥发油，提油后的水溶液滤过，备用，残渣再加8倍量水煎煮1小时，滤过，合并水煎液，备用；

(3)附子、丹参、玉竹、红花加水9倍量煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，与步骤(2)中桂枝、陈皮水煎液合并，浓缩至相对密度为1.25-1.30(60℃热测)清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70％，4℃以下静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25-1.30(60℃热测)清膏，与步骤(1)的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

(4)干膏混合粉碎成100目粉，加70％乙醇适量制粒，喷入桂枝、陈皮挥发油，混匀，装胶囊，制成1000粒，即得。

实施例2：本发明药物片剂的制备

处方：

黄芪150g    附子40g  人参225g  丹参225g  葶苈子50g

香加皮180g  泽泻75g  玉竹75g   桂枝30g   红花90g  陈皮25g

制备方法：

(1)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参、香加皮按照上述组方加8倍量70％乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液减与步骤(1)的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

(2)桂枝、陈皮按照组方蒸馏提取挥发油，提油后的水溶液滤过，备用，残渣再加8倍量水煎煮1小时，滤过，合并水煎液，备用；

(3)附子、丹参、玉竹、红花加水9倍量煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，与步骤(2)中桂枝、陈皮水煎液合并，浓缩至相对密度为1.25-1.30(60℃热测)清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70％，4℃以下静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25-1.30(60℃热测)清膏，与步骤(1)的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

(4)按常规制剂方法制成片剂。

实施例3：本发明药物口服液的制备

处方：

黄芪250g     附子112.5g 党参200g 丹参120g  葶苈子135g

南五加皮150g 泽泻200g   玉竹60g  桂枝75g   红花75g  陈皮60g

制备方法：按常规制剂方法制成口服液。

Claims (9)

1.一种中药组合物在制备抑制慢性心力衰竭氧化损伤药物中的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪150-450份、附子40-120份、人参或党参75-225份、丹参75-225份、葶苈子50-150份、香加皮或南五加皮60-180份、泽泻75-225份、玉竹25-75份、桂枝30-90份、红花30-90份、陈皮25-75份。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪450份、附子112.5份、人参或党参225份、丹参225份、葶苈子150份、香加皮或南五加皮180份、泽泻225份、玉竹75份、桂枝90份、红花90份、陈皮75份。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪150份、附子40份、人参或党参225份、丹参225份、葶苈子50份、香加皮或南五加皮180份、泽泻75份、玉竹75份、桂枝30份、红花90份、陈皮25份。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

黄芪250份、附子112.5份、人参或党参200份、丹参120份、葶苈子135份、香加皮或南五加皮150份、泽泻200份、玉竹60份、桂枝75份、红花75份、陈皮60份。

5.如权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的活性成分由下列步骤制成：

(1)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮用7-9倍量70％乙醇提取，滤过，浓缩提取液至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏；

(2)提取桂枝、陈皮的挥发油；

(3)附子、丹参、玉竹、红花加6-10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过；桂枝、陈皮提油后的水溶液滤过，收集水溶液滤液，再加6-10倍量水煎煮残渣1小时，滤过，合并水溶液；将上述所得的各种水溶液合并，浓缩至相对密度为1.25-1.30清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70％，静置，滤过，滤液浓缩至在60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏。

6.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物作为活性成分的药物制剂为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的胶囊剂是由以下步骤制成：

(1)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮按照比例量称取加8倍量70％乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏，备用；

(2)桂枝、陈皮按照比例蒸馏提取挥发油，提油后的水溶液滤过，备用，残渣再加8倍量水煎煮1小时，滤过，合并水煎液，备用；

(3)附子、丹参、玉竹、红花加水9倍量煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，与步骤(2)中桂枝、陈皮水煎液合并，浓缩至60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70％，4℃以下静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏，与步骤(1)的醇提清膏混合，65-70℃烘干；

(4)将步骤(3)所得干膏粉碎成100目粉，加70％乙醇适量制粒，喷入桂枝、陈皮挥发油，混匀，装胶囊，即得。

8.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，该中药组合物在制备降低慢性心力衰竭患者丙二醛含量药物中的应用。

9.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，该中药组合物在制备提高慢性心力衰竭患者超氧化物歧化酶活性药物中的应用。