CN101637492A - 柿叶总黄酮的制备方法及其在保肝药物和保健食品中的应用 - Google Patents

柿叶总黄酮的制备方法及其在保肝药物和保健食品中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN101637492A
CN101637492A CN200910023741A CN200910023741A CN101637492A CN 101637492 A CN101637492 A CN 101637492A CN 200910023741 A CN200910023741 A CN 200910023741A CN 200910023741 A CN200910023741 A CN 200910023741A CN 101637492 A CN101637492 A CN 101637492A
Authority
CN
China
Prior art keywords
folium kaki
total flavones
ethanol
mass concentration
liver
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN200910023741A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101637492B (zh
Inventor
张志琪
王燕
原江锋
张清安
贾晓燕
涂得助
唐继斌
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shaanxi Normal University
Original Assignee
Shaanxi Normal University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shaanxi Normal University filed Critical Shaanxi Normal University
Priority to CN200910023741A priority Critical patent/CN101637492B/zh
Publication of CN101637492A publication Critical patent/CN101637492A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101637492B publication Critical patent/CN101637492B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

一种柿叶总黄酮的制备方法，用浓度为70％的乙醇75℃水浴回流提取或用浓度为70％的乙醇于微波辐射加热回流提取或用浓度为70％的乙醇于超声波加热回流提取；合并提取液，用浓度为2％HCl水溶液调pH值至5.5，过LX－28型大孔吸附树脂柱或LX－38型大孔吸附树脂柱，水洗至流出液无色，用质量浓度为70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；洗脱液60℃减压浓缩至相对密度为1.30～1.40g/cm3，置于冷冻干燥箱内，－50℃干燥，得到柿叶总黄酮。有效成分柿叶总黄酮在制备保肝药物和保健食品中的应用。柿叶总黄酮经药效试验，能降低血清ALT和AST、肝脏MDA含量，提高肝脏SOD和CAT活性，降低肝细胞的损伤程度，对预防及治疗肝脏疾病有重要作用。

Description

柿叶总黄酮的制备方法及其在保肝药物和保健食品中的应用
技术领域
本发明属于含有原料或其与不明结构之反应产物的医用配制品技术领域，具体涉及到来源于植物的材料。
背景技术
柿叶为柿科柿属植物柿(Diospyros kaki L.f)的新鲜或干燥叶，味苦、性寒，其入药始见于明《滇南本草》记载“经霜叶敷臃疮”，《本草再新》记载用于“治咳嗽吐血，止渴生津”。柿叶已被制成中成药，用于治疗冠心病、心绞痛等，还具有抗菌消炎、生津止渴、清热解毒、润肺强心、镇咳止血、抗癌防癌等多种医疗保健功能。我国柿叶资源丰富，近年来，随着现代提取分离技术以及现代药理学的飞速发展，对柿属植物的研究越来越深入。
柿叶中的主要活性成分是黄酮类物质，已发现的柿叶总黄酮类物质有异槲皮素、山奈酚、槲皮素、芦丁、黄芪苷、山奈酚苷、槲皮素苷、金丝桃甙和紫云英甙等，采用不同的方法提取所得黄酮类物质的成分和含量均存在较大差异。
众所周知，肝脏具有生物转化糖、脂类、蛋白质、维生素、激素的功能和生成、分泌胆汁及摄取、转化、***胆红素的作用。肝脏是动物体内的解毒器官及重要的代谢场所。当前，由于环境污染和药物等各方面的影响，肝脏疾病已成为严重威胁人类健康的首要根源之一，各种有害因素所致的肝损伤可表现为肝坏死、脂肪肝、胆汁郁积、肝纤维化、肝硬化及肝癌等。肝损伤的防治目前仍是一个全球性的严峻课题。因此，通过建立实验性肝损伤动物模型，研究肝病的发生机制，筛选保肝药物，探索保肝作用原理，具有十分重要的现实意义。
发明内容
本发明所要解决的一个技术问题在于提供一种柿叶总黄酮的提取制备方法。
本发明所要解决的另一个技术问题在于为柿叶总黄酮提供一种新用途。
解决上述技术问题所采用的技术方案是由下述步骤组成：
1、称取柿叶干燥粉末，加20倍量的质量浓度为70％的乙醇于75℃水浴加热回流提取1小时，过滤，滤渣再分别用10倍量的质量浓度为70％的乙醇提取两次，每次1小时。
2、将各次提取液合并，用质量浓度为2％的HCl水溶液调节pH值至5.5，过LX-28型大孔吸附树脂柱或LX-38型大孔吸附树脂柱，用水洗至流出液无色，用质量浓度为70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
3、将洗脱液减压浓缩至60℃相对密度为1.30～1.40g/cm3，置于冷冻干燥箱内，-50℃干燥，得到柿叶总黄酮。
在上述步骤1中也可以于频率为2000～3000MHz、功率为400～450W的微波辐射加热下回流10分钟，过滤，滤渣再分别用20倍量的质量浓度为70％的乙醇微波提取两次，每次10分钟。
在上述步骤1中还可以在频率为40～50KHz、功率为220W的超声波加热下回流30分钟，滤渣再分别用20倍量的质量浓度为70％的乙醇超声提取两次，每次30分钟。
上述的提取物柿叶总黄酮的外观为淡黄色粉末状，含有异槲皮素、山奈酚、槲皮素、芦丁、黄芪苷、山奈酚苷、槲皮素苷、金丝桃苷、紫云英苷等。
柿叶总黄酮在制备保肝药物和保健食品中的应用。
有效成分柿叶总黄酮制备保肝的药物用常规药用制剂的形式来使用。所述的常规药用制剂含作为活性成分的柿叶总黄酮，该活性成分在制剂中与药学上可接受的载体如适宜于胃肠内给药的有机或无机的固体或液体赋形剂混合。该药用制剂可以是固体形式如片剂、颗粒剂、胶囊剂；也可以是液体形式如悬浮剂、糖浆剂、乳剂等。
上述制剂中可含有辅助物质、稳定剂、润湿剂、增溶剂和其它常用的添加剂，如乳糖、滑石粉、纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、果胶、吐温-80、聚乙烯醇等。
上述制剂可按照各种制剂常规的制备工艺制成。
含有柿叶总黄酮保肝药物中柿叶总黄酮含有质量比为1％～50％的活性成分，优选含有质量比为5％～20％的活性成分。
有效成份柿叶总黄酮也可以加入乳制品、饮料、茶叶、面包等食品中，制成保肝保健食品。
本发明的活性成分柿叶总黄酮制成各种剂型的口服药物，成人口服，常用剂量一次200mg，1日2次，饭后服用，儿童用药酌情减量。在保健食品中每天用量400mg，可长期使用。
本发明的适应症：治疗肝病及保肝。
将上述提取物柿叶总黄酮按常规方法制成的口服药剂是制剂学上所说的片剂或颗粒剂或胶囊剂或口服液。
本发明药物经药效试验表明，柿叶总黄酮能有效地抑制四氯化碳所致小鼠血清中谷草转氨酶(ALT)和谷丙转氨酶(AST)的活性上升，即降低血清ALT和AST的水平；能明显降低CCl4致小鼠肝损伤肝组织中丙二醛(MDA)的含量，提高总超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性。电镜观察结果表明柿叶总黄酮能够减少肝细胞的损伤。
动物体内试验研究表明，柿叶总黄酮能有效地清除被损害细胞的自由基，拮抗CCl4诱发的肝细胞自由基和脂质过氧化损伤，具有显著的保护和治疗肝损伤的作用，在试验中没有观察到明显的副作用。可以作为保肝药物和保健食品。柿叶总黄酮小鼠急性毒性试验表明，柿叶总黄酮小鼠给药，求不出LD50。
柿叶总黄酮能显著的降低血清ALT和AST的作用，并能明显降低肝脏MDA的含量，提高肝脏SOD和CAT活性，明显的降低肝细胞的损伤程度，对预防及治疗肝脏疾病具有重要作用。用柿叶总黄酮制备的药物可进入临床试验。
附图说明
图1是实施例1提取的柿叶总黄酮的高效液相色谱图。
图2是CCl4肝损伤小鼠肝细胞HE染色的电镜观察结果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。
实施例1
以干燥柿叶10g为例所用的其他原料及其提取方法如下：
1、称取柿叶干燥粉末10g，加20倍量的质量浓度为70％的乙醇于75℃水浴加热回流提取1小时，过滤，滤渣再分别用10倍量的质量浓度为70％的乙醇提取两次，每次1小时。
2、将各次提取液合并，用质量浓度为2％的HCl水溶液调pH值至5.5，过中极性的LX-28型大孔吸附树脂柱，用水洗至流出液无色，用质量浓度为70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
3、将洗脱液减压浓缩至相对密度为1.30～1.40g/cm3(60℃)，置于冷冻干燥箱内，-50℃干燥，得到柿叶总黄酮391mg，提取物中总黄酮含量(以芦丁计)为72.1％。
采用本发明方法提取的柿叶总黄酮用高效液相色谱进行分析，色谱柱为Phenonenex Luna C18(250×4.6nm，5μm)；流动相为甲醇(A)，0.5％磷酸(B)；梯度洗脱为0-5分钟13％A，5-8分钟13-18％A，8-25分钟18-19％A，25-40分钟19-20％A，40-50分钟20-60％A，50-60分钟60-13％；流速为1.0ml/min；检测波长为360nm。高效液相色谱图见图1。由图1可见，柿叶总黄酮含有10种以上的成分。
实施例2
以干燥柿叶10g为例所用的其他原料及其提取方法如下：
1、称取柿叶干燥粉末10g，加20倍量的质量浓度为70％的乙醇于于频率为2450MHz、功率为400-450W的微波辐射加热下回流10分钟，过滤；滤渣再用20倍量的质量浓度为70％的乙醇微波提取10分钟一次。
2、将两次提取液合并，用质量浓度为2％的HCl水溶液调pH值至5.5，过中极性的LX-28型大孔吸附树脂柱，用水洗至流出液无色，用质量浓度为70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
3、将洗脱液减压，浓缩至至相对密度为1.30～1.40g/cm3(60℃)的浸膏，置于冷冻干燥箱内，-50℃干燥，得到柿叶总黄酮586mg，提取物中总黄酮含量(以芦丁计)为72.5％。
实施例3
以干燥柿叶10g为例所用的其他原料及其提取方法如下：
1、称取柿叶干燥粉末10g，加20倍量的质量浓度为70％的乙醇在频率为40～50KHz、功率为220W的超声波加热下回流30分钟，滤渣再分别用20倍量的质量浓度为70％的乙醇超声提取30分钟一次。
2、将两次提取液合并，用质量浓度为2％的HCl水溶液调pH值至5.5，过弱极性的LX-38型大孔吸附树脂柱，用水洗至流出液无色，用质量浓度为70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
3、将洗脱液减压浓缩至相对密度为1.30～1.40g/cm3(60℃)的浸膏，置于冷冻干燥箱内，-50℃干燥，得柿叶总黄酮567mg，提取物中总黄酮含量(以芦丁计)为71.5％。
实施例4
以生产柿叶总黄酮保肝药物颗粒剂产品1000克为例所用的柿叶总黄酮和辅料及其配比为：
柿叶总黄酮                        20g
蔗糖                              400g
糊精                              加至1000g。
将柿叶总黄酮加入乙醇使含醇量达60％，静置24小时，取上清液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.30～1.40g/cm3(60℃)的清膏，加糊精，蔗糖，混匀，制成颗粒，干燥，装袋，每袋重10g，每克含柿叶总黄酮20mg。
以生产柿叶总黄酮保肝药物片剂产品1000片为例所用的柿叶总黄酮和辅料及其配比为：
柿叶总黄酮                        100g
淀粉                              加至400g。
其制备方法按制剂学片剂的制备方法进行。每片重0.4g，每片含柿叶总黄酮100mg。
以生产柿叶总黄酮保肝药物胶囊剂产品1000粒为例所用的柿叶总黄酮和辅料及其配比为：
柿叶总黄酮                        100g
3-环糊精                          加至300g。
其制备方法按制剂学胶囊剂的制备方法进行。每粒重0.3g，每粒含柿叶总黄酮100mg。
以生产柿叶总黄酮保肝药物口服液1000mL为例所用的柿叶总黄酮和辅料及其配比为：
柿叶总黄酮              20g
蔗糖                    400g
蒸馏水                  加至1000mL。
其制备方法按制剂学口服液的制备方法进行。每瓶10mL，每毫升含柿叶总黄酮20mg。
实施例5
取柿叶总黄酮20g，用10倍量的乙醇溶解，均匀喷洒到980g茶叶上，使每克茶叶中柿叶总黄酮的含量为20mg，烘干，分装成每袋10g的袋泡茶，每天饮用2袋，可长期饮用。
实施例6
取柿叶总黄酮1.6g，用30mL的0.3％食品用羧甲基纤维素钠悬浮，加入970mL牛奶中制成具有保肝作用的乳制品，每100mL含柿叶总黄酮160mg，灭菌后包装，每袋250mL，每人每天饮用不超过250mL，可长期饮用。
实施例7
取柿叶总黄酮4g，植物油50g，20g活性酵母，标准粉加至1000g，按照常规面包制作工艺进行。每人每天食用100g，含柿叶总黄酮400mg。每人每天食用不超过100g。
在其他食品中，如饼干、蛋糕等食品中，也可以加入柿叶总黄酮，按每人每天柿叶总黄酮食用量400mg为宜。
为了验证柿叶总黄酮在预防、治疗肝损伤方面的效果，申请人采用本发明实施例1制备的柿叶总黄酮进行了药效学试验，各种试验情况如下：
受试药物：柿叶总黄酮，自制，试验时按常规方法配制成质量浓度为3％的柿叶总黄酮水溶液。
受试动物：昆明种小鼠，体重25～30g，雌雄兼用，由西安交通大学医学实验动物中心提供。动物合格证为SCXK(陕)2007-001。
1、柿叶总黄酮小鼠急性毒性试验
取小鼠20只，雌雄各半，禁食12小时，一天内给小鼠灌胃(300mg/kg)3次，每次间隔4小时，使其日累计量达到900mg/kg，给药后让小鼠自由摄食及饮水，连续观察7天，记录动物外观，食欲，行为活动，死亡等毒副反应情况。7天后将小鼠处死，解剖，肉眼观察主要脏器组织病变情况。
试验结果：小鼠灌胃后未出现死亡。第一次、第二次灌胃后，活动未见明显异常；第三次灌胃后，部分小鼠出现自主活动减少、闭目静卧、反应迟钝等症状，但无竖毛懒动、抽搐、翻倒等异常情况，1-3小时后活动如常，大便深褐色质软，未出现稀样便。连续观察7天，均存活，饮食、活动、精神状态、皮毛肤色、大小便等均无异常变化。7天后将小鼠处死，解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等主要脏器，均未见形态学异常改变。
试验结论：柿叶总黄酮小鼠给药，求不出LD50，最大给药量为800mg/kg。按60kg成人用量400mg计算，相当于人日用量的72倍(800mg/kg×60％/400mg×60kg)。柿叶总黄酮的毒性较小。
2、柿叶总黄酮药效学试验
试剂：谷草转氨酶(ALT)，谷丙转氨酶(AST)，丙二醛(MDA)，总超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢化酶(CAT)试剂盒及蛋白试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供；联苯双酯滴丸，由浙江万邦药业有限公司生产，批号为081010，规格为1.5mg/丸；四氯化碳(AR)，由天津市化学试剂一厂生产，实验时用植物油配成0.2％的溶液；其它试剂均为国产分析纯。
配制联苯双酯溶液：按常规方法配制成质量浓度为1％联苯双酯水溶液。
试验方法：取昆明种小鼠48只，雌雄各半，随机分为6组每组8只，正常对照组(NCG)、CCl4模型组(MCG)、阳性对照组(LCG)、治疗低、中、高组(DKLF1-3，3组)置于通风条件下，所有动物可以自由饮水和饮食。正常对照组(NCG)和CCl4模型组(MCG)每天灌胃蒸馏水一次(10mL/kg)，阳性对照组(LCG)每天灌胃联苯双酯(100mg/kg)一次，治疗低、中、高组(DKLF1-3，剂量分别为50mg/kg、100mg/kg、300mg/kg柿叶总黄酮)每天灌胃给药一次，连续处理21天。实验第22天，除正常对照组(NCG)给予等剂量植物油外，其余各组给予0.2％四氯化碳植物油溶液(预先经超声波混匀)，制备急性肝组织损伤模型，灌胃量均按体重10ml/kg，随后禁食24小时后从眼眶取血，脱臼，称毛重。
(1)柿叶总黄酮对CCl4诱使急性肝损伤小鼠肝指数的影响
小鼠给药最后一天，称毛重，脱臼致死，解剖取出肝脏，用冰冷的生理盐水涮洗血渍，并用滤纸蘸干，对肝分别称量。按下面公式计算肝指数：
L(肝指数)＝m1(肝的重量)/m2(小鼠体重)×100％
试验结果见表1。
表1   柿叶总黄酮对CCl4诱使的肝损伤小鼠肝指数、血清ALT和AST的影响
组别   肝指数(％)   谷草转氨酶(ALT，U/L)   谷丙转氨酶(AST，U/L)
  NCG   4.22▲▲   28.31▲▲   49.56▲▲
  MCG   6.66**■■   69.8**■■   81.92**■■
  LCG   4.72▲▲   42.98*▲▲   56.18*▲▲
  DKLF1   6.25**■   65.86**■■   76.52**■
  DKLF2   5.02*▲   43.61*▲   62.29*▲
  DKLF3   4.29▲▲   29.57▲▲   50.6▲▲
注：表1中DKLF1为柿叶总黄酮低剂量组，DKLF2为柿叶总黄酮中剂量组，DKLF3为柿叶总黄酮高剂量组。
与正常组(NCG)比较，**P＜0.01，*P＜0.05，与模型组(MCG)比较，▲▲P＜0.01，▲P＜0.05，与联苯双酯对照组(LCG)比较，■■P＜0.01，■P＜0.05。
由表1可见，模型组(MCG)小鼠的肝指数比正常组(NCG)和对照组(LCG)均有显著的增加，且存在显著性差异(P＜0.01)，表明模型组小鼠肝细胞发炎严重，CCl4诱导了小鼠肝细胞的损伤；对照组(LCG)小鼠的肝指数比正常组差异不显著，柿叶总黄酮低剂量组(DKLF1，50mg/kg)小鼠的肝指数明显高于对照组，中剂量组与其差异不大，当给药浓度达到300mg/kg时，肝细胞损伤小鼠的肝指数基本上恢复到正常水平，与正常组和对照组均无显著性差异。
取肝左叶0.5×0.5×0.5m3小块，置质量浓度为4％的中性缓冲甲醛溶液中，常规脱水，石蜡包埋，切片，作HE染色，在显微镜下观察肝组织病理改变。病理组织学检查结果见图2。(A)正常组(NCG)，(B)模型组(MCG)，(C)联苯双酯对照组(LCG)，(D)柿叶总黄酮低剂量组(DKLE1)，(E)柿叶总黄酮中剂量组(DKLE2)，(F)柿叶总黄酮高剂量组(DKLE3)。
图2显示，柿叶总黄酮治疗组与模型组比较，低剂量组无明显差别，中剂量组、高剂量组明显减轻了肝细胞碎屑样坏死、点状坏死及肝细胞浊肿水样变性，且正常肝细胞数目增多，与对照组相当，无明显差异。结果表明柿叶总黄酮对CCl4诱使急性肝损伤有明显的药效。
(2)柿叶总黄酮对CCl4诱使的肝损伤小鼠血清ALT和AST的影响
CCl4造模后禁食24小时，摘取眼球取血，分离血清，按照试剂盒要求，测血清ALT和AST指标。试验结果见表1。由表1可知，CCl4造模后模型组血清中ALT和AST与正常组和对照组相比均有显著性差异(P＜0.01)。与模型组相比，柿叶总黄酮低剂量组(DKLF1，50mg/kg)小鼠血清ALT和AST的水平都有降低，但差异不显著；中剂量组(100mg/kg)小鼠血清ALT和AST明显下降(P＜0.05)；高剂量组(300mg/kg)其ALT和AST水平与模型组差异显著(P＜0.01)。中、高剂量组均与对照组(LCG)已无显著性差异。高剂量组的ALT和AST水平已经基本达到正常。实验结果表明，柿叶总黄酮能够明显降低肝损伤小鼠血清ALT和AST水平，具有保护细胞免受损伤的作用，与联苯双酯具有相同的防护急性四氯化碳肝损伤的作用。
(3)柿叶总黄酮对CCl4诱使的肝损伤小鼠MDA含量的影响
动物脱臼处死后，解剖取出肝脏，用冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，用滤纸拭干，制备肝匀浆。按照试剂盒的要求测小鼠肝脏中脂质过氧化物(MDA)的含量。试验结果见表2。
表2   柿叶总黄酮对CCl4诱使的肝损伤小鼠肝中SOD、MDA和CAT的影响
  组别   脂质过氧化物(MDA，nmol/mg prot)   总超氧化物歧化酶(SOD，U/mgprot)   过氧化氢酶(CAT，U/mgprot)
  NCG   7.18▲▲   182.99▲▲   35.13▲▲
  MCG   14.08**■■   135.25**■■   15.15**■■
  LCG   8.6▲▲   176.11▲▲   30.72▲▲
  DKLF1   13.26**■   140.34**■■   16.73**■■
  DKLF2   9.86*▲   167.81*▲   26.16*▲■
  DKLF3   7.42▲▲   184.84▲▲   34.06▲▲■
注：表2中DKLF1为柿叶总黄酮低剂量组，DKLF2为柿叶总黄酮中剂量组，DKLF3为柿叶总黄酮高剂量组。
与正常组(NCG)比较，**P＜0.01，*P＜0.05；与模型组(MCG)比较，▲▲P＜0.01，▲P＜0.05；与联苯双酯对照组(LCG)比较，■■P＜0.01，■P＜0.05。
从表2可以看出，模型组(MCG)肝组织MDA含量与正常组(NCG)相比，有显著的升高(P＜0.01)，即在CCl4的诱导下，造成了小鼠肝脏的脂质过氧化损伤，造成了MDA的产生。对照组(LCG)比正常组(NCG)MDA含量稍高，但无显著性差异。与模型组(MCG)相比，柿叶总黄酮(DKLF)随着药物剂量的增加其肝组织MDA含量也明显的降低，高剂量组(300mg/kg)其MDA含量已经下降至正常水平，高剂量和中剂量组与对照组(LCG)相比差异亦不显著。结果表明柿叶总黄酮能降低CCl4诱导引发的小鼠肝组织中脂质过氧化物MDA的含量，柿叶总黄酮在小鼠体内发挥了作用，即能减轻肝细胞受损伤的程度。
(4)柿叶总黄酮对CCl4诱使的肝损伤小鼠肝中SOD活性的影响
动物脱臼处死后，解剖取出肝脏，用冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，用滤纸拭干，制备肝匀浆。按照试剂盒的要求测肝中SOD活力。试验结果见表2。从表2中可以看出模型组(MCG)肝组织中总超氧化物歧化酶(SOD)活力明显低于正常组(NCG)和对照组(LCG)，均有显著性差异(P＜0.01)，说明肝细胞损伤严重。与模型组(MCG)相比，柿叶总黄酮三个剂量组(DKLF)肝组织中SOD活性也显著的增加，经统计学处理分析，除低剂量组(50mg/kg)外，其它两组(100、300mg/kg)均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，且存在明显的剂量效应关系。中剂量组(DKLF2)和高剂量组(DKLF3)SOD活力与对照组(LCG)相比，差异不显著。结果表明柿叶总黄酮可以抑制CCl4所致肝脏SOD活力下降，即柿叶总黄酮能通过一系列间接的生理生化机制，促进机体SOD等抗氧化酶的生物合成或活化，提高机体的抗氧化能力，清除超氧自由基保护细胞免受损伤，减轻细胞的胁迫损伤，起到保护细胞的作用。
(5)柿叶总黄酮对CCl4诱使的肝损伤小鼠CAT活力的影响
测试CCl4诱导引发损伤小鼠肝CAT的变化，结果见表2，与正常组(NCG)肝组织过氧化氢酶(CAT)活力相比，模型组(MCG)CAT显著下降(P＜0.01)；与模型组(MCG)相比，治疗组除过低剂量(50mg/kg)外，其余两组小鼠肝脏的CAT活力都有不同程度的增加，且存在明显的剂量效应关系，当给药浓度达到300mg/kg时，小鼠肝CAT活力基本恢复到正常水平，且与对照组差异不显著。结果表明柿叶总黄酮能改善环CCl4所致小鼠肝损伤效应，清除自由基的影响，提高小鼠体内CAT的活力。
(6)试验结论
柿叶总黄酮能有效地抑制四氯化碳所致小鼠血清中谷草转氨酶(ALT)和谷丙转氨酶(AST)的活性上升，即降低血清ALT和AST的水平；能明显降低CCl4致小鼠肝损伤肝组织中丙二醛(MDA)的含量，提高总超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性。电镜观察结果也表明柿叶总黄酮能够降低肝细胞的损伤。
试验结果表明柿叶总黄酮能有效地清除一些损害细胞的自由基，拮抗CCl4诱发的肝细胞自由基和脂质过氧化损伤，具有显著的保护和治疗肝损伤作用，可以作为治疗肝病和保肝药物以及保健食品。
柿叶总黄酮药物的功能与主治：治疗肝病或保肝。
柿叶总黄酮药物的规格：柿叶总黄酮药物颗粒剂每袋重10g，每克含柿叶总黄酮20mg；柿叶总黄酮药物片剂每片重0.4g，每片含柿叶总黄酮100mg；柿叶总黄酮药物胶囊剂每粒重0.3g，每粒含柿叶总黄酮100mg；柿叶总黄酮药物口服液每瓶10mL，每毫升含柿叶总黄酮20mg。
柿叶总黄酮药物的用法与用量：口服药物颗粒剂，开水冲服，一次1袋，早晚各1次；口服药物片剂，一次2片，一日2次；口服药物胶囊剂，一次2粒，一日2次；口服药物口服液，一次1瓶，一日2次。

Claims (2)

1、一种柿叶总黄酮的制备方法，其特征在于由下述步骤组成：
(1)称取柿叶干燥粉末，加20倍量的质量浓度为70％的乙醇于75℃水浴加热回流提取1小时，过滤，滤渣再分别用10倍量的质量浓度为70％的乙醇提取两次，每次1小时；或称取柿叶干燥粉末，加20倍量的质量浓度为70％的乙醇于用频率为2000～3000MHz、功率为400～450W的微波辐射加热下回流10分钟，过滤，滤渣再分别用20倍量的质量浓度为70％的乙醇微波提取两次，每次10分钟；或称取柿叶干燥粉末，加20倍量的质量浓度为70％的乙醇在频率为40～50KHz、功率为220W的超声波加热下回流30分钟，滤渣再分别用20倍量的质量浓度为70％的乙醇超声提取两次，每次30分钟；
(2)将各次提取液合并，用质量浓度为2％的HCl水溶液调pH值至5.5，过LX-28型大孔吸附树脂柱或LX-38型大孔吸附树脂柱，用水洗至流出液无色，用质量浓度为70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；
(3)将洗脱液60℃减压浓缩至相对密度为1.30～1.40g/cm3，置于冷冻干燥箱内，-50℃干燥，得到柿叶总黄酮。
2、有效成分柿叶总黄酮在制备保肝药物和保健食品中的应用。
CN200910023741A 2009-08-31 2009-08-31 柿叶总黄酮的制备方法 Expired - Fee Related CN101637492B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200910023741A CN101637492B (zh) 2009-08-31 2009-08-31 柿叶总黄酮的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200910023741A CN101637492B (zh) 2009-08-31 2009-08-31 柿叶总黄酮的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101637492A true CN101637492A (zh) 2010-02-03
CN101637492B CN101637492B (zh) 2012-10-10

Family

ID=41612794

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200910023741A Expired - Fee Related CN101637492B (zh) 2009-08-31 2009-08-31 柿叶总黄酮的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101637492B (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102068483A (zh) * 2011-01-07 2011-05-25 河南中医学院 一种柿叶中提高脑缺血耐受作用的提取物
CN102178722A (zh) * 2011-05-06 2011-09-14 陕西科技大学 一种柿叶总黄酮缓释微丸及其制备方法
CN102526137A (zh) * 2012-01-18 2012-07-04 河北联合大学 微波回流萃取栗毛壳废渣中总黄酮的方法
CN103223001A (zh) * 2013-04-25 2013-07-31 徐州工程学院 微波—超声波协同提取酱油渣中大豆异黄酮的方法
CN103284148A (zh) * 2013-05-20 2013-09-11 国家***泡桐研究开发中心 一种富含天然维生素c的柿叶浓缩粉加工方法
CN104689600A (zh) * 2015-03-10 2015-06-10 沈阳东新药业有限公司 柿叶总黄酮的提取和纯化方法
CN108279278A (zh) * 2017-12-29 2018-07-13 广州白云山和记黄埔中药有限公司 一种分离黄酮类成分的方法及其应用

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107823243A (zh) * 2017-11-30 2018-03-23 广西南宁栩兮科技有限公司 一种柿子籽中黄酮的提取方法

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102068483B (zh) * 2011-01-07 2012-07-25 河南中医学院 一种柿叶中提高脑缺血耐受作用的提取物
CN102068483A (zh) * 2011-01-07 2011-05-25 河南中医学院 一种柿叶中提高脑缺血耐受作用的提取物
CN102178722A (zh) * 2011-05-06 2011-09-14 陕西科技大学 一种柿叶总黄酮缓释微丸及其制备方法
CN102526137B (zh) * 2012-01-18 2014-06-25 河北联合大学 微波回流萃取栗毛壳废渣中总黄酮的方法
CN102526137A (zh) * 2012-01-18 2012-07-04 河北联合大学 微波回流萃取栗毛壳废渣中总黄酮的方法
CN103223001A (zh) * 2013-04-25 2013-07-31 徐州工程学院 微波—超声波协同提取酱油渣中大豆异黄酮的方法
CN103223001B (zh) * 2013-04-25 2014-10-22 徐州工程学院 微波—超声波协同提取酱油渣中大豆异黄酮的方法
CN103284148A (zh) * 2013-05-20 2013-09-11 国家***泡桐研究开发中心 一种富含天然维生素c的柿叶浓缩粉加工方法
CN103284148B (zh) * 2013-05-20 2015-04-15 国家***泡桐研究开发中心 一种富含天然维生素c的柿叶浓缩粉加工方法
CN104689600A (zh) * 2015-03-10 2015-06-10 沈阳东新药业有限公司 柿叶总黄酮的提取和纯化方法
CN104689600B (zh) * 2015-03-10 2016-07-06 沈阳东新药业有限公司 柿叶总黄酮的提取和纯化方法
CN108279278A (zh) * 2017-12-29 2018-07-13 广州白云山和记黄埔中药有限公司 一种分离黄酮类成分的方法及其应用
CN108279278B (zh) * 2017-12-29 2020-09-04 广州白云山和记黄埔中药有限公司 一种分离黄酮类成分的方法及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN101637492B (zh) 2012-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101637492B (zh) 柿叶总黄酮的制备方法
CN102048933B (zh) 一种治疗小儿腹泻的中药组合物及其制备方法
CN102724991B (zh) 用于治疗口腔溃疡、肿瘤的中药组合物及其制备方法和用途
CN115120683A (zh) 原料组合物和中药发酵产品及其制备方法和应用
US9872880B2 (en) Natural herbal compositions for rapid removal of metabolic toxins in the body
CN112336815A (zh) 一种强体防癌调理三高抗衰老组合物及其应用
CN103301413A (zh) 一种治疗高血脂合并高血糖症的中药组合物
Li Chinese herbal medicine
KR20090050295A (ko) 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 또는 피부염예방 및 치료용 조성물
CN106177432A (zh) 一种包含青钱柳叶、桑叶、绿茶和玉竹的保健组合物
CN101940621A (zh) 一种润肠通便的中药组合物、制剂及其制备方法
CN102188671B (zh) 一种治疗慢性肝胆炎的中药制剂
CN101342249B (zh) 一种***的中药制剂及其制备方法
CN109549958A (zh) 治疗激素依赖性皮炎的组合物及其制备方法
CN105327115B (zh) 一种防治ⅱ型糖尿病桑黄通泻配方及制备工艺
CN101199806A (zh) 一种治疗腹泻的药物及其制备方法和质量控制方法
CN110538308B (zh) 一种生发的中药组合物及其制备方法
CN103720808B (zh) 一种具有通便功效的组合物及其用途、制备方法
CN102784364B (zh) 一种防治鸡大肠杆菌病的纯中药散剂及其制备方法
CN102711779A (zh) 用于预防或治疗肝癌的包含乌参提取物的组合物
CN101816708B (zh) 治疗风湿病的中药组合物及其制备方法
CN106578185A (zh) 一种将军红降脂茶及制备方法
CN101269130B (zh) 治疗痔疮的中药组合物
CN110090243A (zh) 一种用于餐后血糖控制的芡实提取物、制备方法及应用
CN104984141A (zh) 一种治疗便秘的方剂及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20121010

Termination date: 20150831

EXPY Termination of patent right or utility model