CN101619107A - 黄芪多糖的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种黄芪多糖的提取方法，包括往黄芪根粉中加入乙醇浸润；加水热提取；滤饼酶解、灭酶；提取液浓缩、醇沉、干燥等步骤。本发明方法选用乙醇溶液为解吸剂，水为提取溶剂，采用解吸－内部沸腾两步法，相较于传统的水提法和微波法，其提取速度及提取率都有了明显的提高，且保持了黄芪多糖的活性，整个提取过程耗时短，得率高、杂质少、耗能低、是一种绿色、安全、高效的黄芪多糖的提取方法。本发明方法也适用于其他植物源性药物多糖的提取和制备。

Description

黄芪多糖的提取方法

技术领域

本发明涉及一种植物多糖的提取方法，尤其是一种从中药黄芪中提取黄芪多糖的方法。

背景技术

随着畜禽的规模化饲养，其饲养密度不断提高。为了降低畜禽的疾病发生率、预防及控制疾病的发生，大量抗生素和抗病毒药物在养殖业中的使用造成了畜禽产品中药物的残留量超标。具有耐药性的病原微生物不断滋长，导致了动物自身免疫力的不断下降，这给畜牧业造成了巨大损失。

当前，免疫疗法这一安全、绿色的治疗方法已成为了世界范围的业内人士共同寻求的目标。因许多中草药具有提高自身免疫力的功效，因此，安全、高效、低毒的中草药提取物正日益被人们所关注。

免疫疗法是一种利用免疫***来治疗疾病的概念。免疫疗法通过增强机体的免疫能力，利用免疫***的识别、攻击细菌、外来物及异常细胞的功能来抵御和治疗疾病，其中多糖免疫疗法已引起了各国的高度重视。

自20世纪70年代以来，科学家们不断发现多糖以及糖复合物在生物体中不但作为能源及构成生物体的材料存在，而且它还存在于一切细胞膜结构中，参与各类细胞的生命运动，具有多样化的生物学功能。

多糖是一种结构相当复杂的高分子化合物。它所具有的复杂的、多途径、多环境、多靶点的生物活性与功能，在国际学术界被称为生物应答效应物。多糖的成分中以葡聚糖为主，是由β-1，3葡萄糖苷键结合的直链和β-1，6葡萄糖苷键结合的支链形成一个特殊的空间结构，使其具有了很好的生理活性。

被制药界称为“十药八芪”的黄芪具有补气升阳、固表止汗、利尿消肿、排脓、敛疮生肌的功效，具有抗氧化、抗病毒、减轻免疫损伤和免疫双向调节的作用。传统用于提高人体免疫力等功效。黄芪多糖是黄芪中最有效的成分之一，具有良好的水溶性。

现有的黄芪多糖的提取方法主要有水提发和微波法。水提法提取率低，且步骤复杂，耗时长，有效成分损失较多；微波法对设备要求较高，实施有难度，难以大规模应用。

发明内容

本专利的目的是提供一种黄芪多糖的提取方法，以植物源性中药黄芪为主要原料，经过解吸-内部沸腾两步提取工艺处理，得到高效率、高含量的黄芪多糖，可用于增强禽畜自身免疫力。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现：

一种黄芪多糖的提取方法，其特征在于包括以下步骤：

1)往黄芪根粉中加入乙醇，静置30min～60min；

2)以黄芪根粉重量3～5倍的量，加入温度为60～100℃的水，保温、回流15min～30min，冷却，过滤，用水反复清洗，滤液与清洗液合并，滤饼备用；

3)往上述滤饼加入1～10倍重量的水，加入酶制剂，控制温度为40～60℃，调节pH为中性，酶解1～8h后加热升温灭酶，冷却至室温，过滤，清洗，滤饼弃去，合并滤液与清洗液；

4)合并2、3步骤所得滤液与清洗液，减压浓缩至原体积的10％～50％，加入95％乙醇进行醇沉，过滤固体，干燥，得黄芪多糖产品。

进一步地，所述的酶为中性纤维素酶、中性蛋白酶或木瓜酶中的一种或几种，优选为中性纤维素酶。酶的加入量为黄芪根粉的2‰～5％。

更进一步地，步骤1中乙醇的加入量为黄芪根粉重量的1.5～3倍；步骤2中的保温时间优选为25min；步骤3中的酶解时间优选为2h。

本发明针对黄芪这一植物中药材，采用解吸-内部沸腾法(简称两步法)的提取方法。

本发明方法选用乙醇溶液为解吸剂，水为提取溶剂，巧妙的利用第一步解吸过程中所加入的少量解吸剂作为物料黄芪粉末内部的低沸点汽化介质，使其在第二步快速加入热提取溶剂后、在物料内部来不及扩散的情况下瞬间汽化，从而使物料内部传质方式发生了改变。有效成分由原来的普通分子扩散转变为对流扩散，从而使得提取速度明显加快，且多糖更易溶出。

酶解过程一方面可以提取滤饼中残留存在的纤维中的多糖的提取，另一方面还能去除蛋白质、氨基酸等杂质，提高黄芪多糖的纯度。

本发明采用两步法，相较于传统的水提法和微波法，其提取速度及提取率都有了明显的提高，且保持了黄芪多糖的活性，整个提取过程耗时短，得率高、杂质少、耗能低、是一种绿色、安全、高效的黄芪多糖的提取方法。本发明方法也适用于其他植物源性药物多糖的提取和制备。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的内容作进一步的说明。

实施例1

称取70g黄芪根粉末置于500ml三口烧瓶中，滴加140ml浓度为70％乙醇，使物料均匀润湿，静置30min。

往上述物料中加入245ml温度为100℃的蒸馏水，用恒温套保温、回流20min，冷却、过滤；滤饼用40℃热水反复冲洗，混合滤液与清洗液，滤饼备用。

往上述滤饼加入5倍重量的水，加入0.35g中性纤维素酶，控制温度为48℃，调节pH为中性，酶解2h。酶解结束后加热物料升温至80℃，灭酶，冷却、过滤、清洗，合并滤液与清洗液，滤饼弃去。

合并以上步骤步中所得的滤液与清洗液，减压浓缩至原体积的20％，冷却后用95％乙醇进行醇沉，所得沉淀物过滤，用丙酮清洗沉淀中残留的蛋白质、纤维素及部分水份，最后干燥，得到黄芪多糖11.15g，计算其得率为15.9％。

实施例2

称取50g黄芪根粉末置于500ml三口烧瓶中，滴加75ml浓度为95％乙醇，使物料均匀润湿，静置30min。

往上述物料中加入250ml温度为100℃的蒸馏水，用恒温套保温、回流20min，冷却、过滤；滤饼用40℃热水反复冲洗，混合滤液与清洗液，滤饼备用。

往上述滤饼加入10倍重量的水，加入0.5g中性纤维素酶，控制温度为50℃，调节pH为中性，酶解5h。酶解结束后加热物料升温至80℃，灭酶，冷却、过滤、清洗，合并滤液与清洗液，滤饼弃去。合并以上步骤步中所得的滤液与清洗液，减压浓缩至原体积的20％，冷却后用95％乙醇进行醇沉，所得沉淀物过滤，用丙酮清洗沉淀中残留的蛋白质、纤维素及部分水份，最后干燥，得到黄芪多糖8.84g，计算其得率为17.7％。

实施例3

称取65g黄芪根粉末置于500ml三口烧瓶中，滴加140ml浓度为70％乙醇，使物料均匀润湿，静置30min。

往上述物料中加入200ml温度为90℃的蒸馏水，用恒温套保温、回流20min，冷却、过滤；滤饼用40℃热水反复冲洗，混合滤液与清洗液，滤饼备用。

往上述滤饼加入5倍重量的水，加入0.46g中性纤维素酶，控制温度为48℃，调节pH为中性，酶解2h。酶解结束后加热物料升温至80℃，灭酶，冷却、过滤、清洗，合并滤液与清洗液，滤饼弃去。合并以上步骤步中所得的滤液与清洗液，减压浓缩至原体积的20％，冷却后用95％乙醇进行醇沉，所得沉淀物过滤，用丙酮清洗沉淀中残留的蛋白质、纤维素及部分水份，最后干燥，得到黄芪多糖9.34g，计算其得率为14.4％。

实施例4

称取65g黄芪根粉末置于500ml三口烧瓶中，滴加140ml浓度为70％乙醇，使物料均匀润湿，静置30min。

往上述物料中加入280ml温度为70℃的蒸馏水，用恒温套保温、回流20min，冷却、过滤；滤饼用40℃热水反复冲洗，混合滤液与清洗液，滤饼备用。

往上述滤饼加入5倍重量的水，加入0.33g中性纤维素酶，控制温度为48℃，调节pH为中性，酶解2h。酶解结束后加热物料升温至80℃，灭酶，冷却、过滤、清洗，合并滤液与清洗液，滤饼弃去。合并以上步骤步中所得的滤液与清洗液，减压浓缩至原体积的20％，冷却后用95％乙醇进行醇沉，所得沉淀物过滤，用丙酮清洗沉淀中残留的蛋白质、纤维素及部分水份，最后干燥，得到黄芪多糖7.66g，计算其得率为11.8％。

实施例5

称取60g黄芪根粉末置于500ml三口烧瓶中，滴加140ml浓度为70％乙醇，使物料均匀润湿，静置40min。

往上述物料中加入200ml温度为100℃的蒸馏水，用恒温套保温、回流30min，冷却、过滤；滤饼用40℃热水反复冲洗，混合滤液与清洗液，滤饼备用。

往上述滤饼加入3倍重量的水，加入1.8g中性蛋白酶，控制温度为55℃，调节pH为中性，酶解2h。酶解结束后加热物料升温至80℃，灭酶，冷却、过滤、清洗，合并滤液与清洗液，滤饼弃去。合并以上步骤步中所得的滤液与清洗液，减压浓缩至原体积的30％，冷却后用95％乙醇进行醇沉，所得沉淀物过滤，用丙酮清洗沉淀中残留的蛋白质、纤维素及部分水份，最后干燥，得到黄芪多糖9.69gg，计算其得率为16.2％。

实施例6

称取50g黄芪根粉末置于500ml三口烧瓶中，滴加100ml浓度为95％乙醇，使物料均匀润湿，静置30min。

往上述物料中加入250ml温度为100℃的蒸馏水，用恒温套保温、回流25min，冷却、过滤；滤饼用40℃热水反复冲洗，混合滤液与清洗液，滤饼备用。

往上述滤饼加入7倍重量的水，加入1g木瓜酶，控制温度为60℃，调节pH为中性，酶解3h。酶解结束后加热物料升温至80℃，灭酶，冷却、过滤、清洗，合并滤液与清洗液，滤饼弃去。

合并以上步骤步中所得的滤液与清洗液，减压浓缩至原体积的20％，冷却后用95％乙醇进行醇沉，所得沉淀物过滤，用丙酮清洗沉淀中残留的蛋白质、纤维素及部分水份，最后干燥，得到黄芪多糖8.42g，计算其得率为16.9％。

Claims (6)

1、一种黄芪多糖的提取方法，其特征在于包括以下步骤：

1)往黄芪根粉中加入乙醇，静置30min～60min；

2)以黄芪根粉重量3～5倍的量，加入温度为60～100℃的水，保温、回流15min～30min，冷却，过滤，用水反复清洗，滤液与清洗液合并，滤饼备用；

3)往上述滤饼加入1～10倍重量的水，加入酶制剂，控制温度为40～60℃，调节pH为中性，酶解1～8h后加热升温灭酶，冷却至室温，过滤，清洗，滤饼弃去，合并滤液与清洗液；

4)合并2、3步骤所得滤液与清洗液，减压浓缩至原体积的10％～50％，加入95％乙醇进行醇沉，过滤固体，干燥，得黄芪多糖产品。

2、如权利要求1所述的黄芪多糖的提取方法，其特征在于所述的酶为中性纤维素酶、中性蛋白酶或木瓜酶中的一种或几种，酶的加入量为黄芪根粉的2‰～5％。

3、如权利要求2所述的黄芪多糖的提取方法，其特征在于所述的酶为中性纤维素酶。

4、如权利要求2所述的黄芪多糖的提取方法，其特征在于步骤1中乙醇的加入量为黄芪根粉重量的1.5～3倍。

5、如权利要求4所述的黄芪多糖的提取方法，其特征在于步骤2中的保温时间为25min。

6、如权利要求5所述的黄芪多糖的提取方法，其特征在于步骤3中的酶解时间为2h。