CN101616916B

CN101616916B - 8-氮杂双环[3.2.1]辛烷化合物的晶型

Info

Publication number: CN101616916B
Application number: CN2008800059690A
Authority: CN
Inventors: 肖恩·达尔齐尔; 莱蒂西亚·M·普雷萨; 米罗斯拉夫·拉普塔; 皮埃尔-让·科尔松
Original assignee: SHIWAN PHARMACEUTICALS Inc
Current assignee: Theravance Biopharma R&D IP LLC
Priority date: 2007-02-28
Filing date: 2008-02-27
Publication date: 2011-10-12
Anticipated expiration: 2028-02-27
Also published as: NZ578871A; PT2132204E; AU2008219615B2; HRP20130193T1; AR109224A2; US9290491B2; IL200131A; US20080207676A1; RU2458061C2; US8816091B2; BRPI0807974B1; US8536335B2; CO6220856A2; KR101480530B1; TWI409067B; DK2132204T3; BRPI0807974A2; JP2013151564A; CN101616916A; MX2009009141A

Abstract

本发明提供3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的结晶硫酸盐或其溶剂化物。本发明还提供包含所述结晶盐形式的医药组合物、使用所述结晶盐形式治疗与μ阿片受体活性相关的疾病的方法，和适用于制备所述结晶盐形式的方法。

Description

8-氮杂双环[3.2.1]辛烷化合物的晶型

技术领域

本发明是关于8-氮杂双环[3.2.1]辛烷化合物的结晶盐形式，其适用作μ阿片受体拮抗剂。本发明还关于包含所述结晶化合物的医药组合物、使用所述化合物治疗或改善由μ阿片受体活性介导的医学病况的方法，和适用于制备所述化合物的方法。

背景技术

共同转让的2006年3月1日申请的美国临时申请案第60/777,962号和2006年8月30日申请的美国临时申请案第60/841,028号，和美国申请案第11/711,961号揭示8-氮杂双环[3.2.1]辛烷化合物，其为μ阿片受体拮抗剂，预期其适用于治疗或改善由μ阿片受体活性介导的医学病况。具体来说，在这些申请案中特别揭示化合物3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺硫酸盐显示μ阿片受体拮抗剂活性。

3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺(下文中的化合物1)的化学结构如下所示：

为有效地将此化合物用作治疗剂，将需要具有可易于制造并且具有可接受的化学和物理稳定性的固态盐形式。例如，将极需具有例如在超过约175℃或约180℃的温度下热稳定，并且既不吸湿也不易潮解的盐形式，由此促进这一物质的加工和储存。对于增强制品的纯度和稳定性而言，结晶固体一般优于非晶型。

先前未报导化合物1的结晶盐形式。因此，存在对既不吸湿也不易潮解并且显示有利热稳定性的化合物1稳定、结晶盐形式的需要。

发明内容

本发明提供3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的结晶硫酸盐或其溶剂化物。在一方面中，本发明的结晶盐形式为化合物1的结晶硫酸盐。在另一方面中，本发明的结晶盐形式为化合物1的硫酸盐的结晶水合物。

令人惊讶地，已发现本发明的结晶硫酸盐显示在约190℃至约205℃范围内的熔化温度以下无显著热事件并且当暴露于室温下介于约2％与约90％之间某一范围的相对湿度时显示小于约0.3％的重量变化。此外，当暴露于室温下高达约90％相对湿度时，本发明的结晶硫酸盐和其水合物均不易潮解。

除其它用途之外，预期本发明的结晶盐形式适用于制备供治疗或改善由μ阿片受体活性介导的医学病况的医药组合物。因此，在本发明的另一组合物方面中，本发明提供包含医药上可接受的载剂和3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的结晶硫酸盐或其溶剂化物的医药组合物。

本发明也提供治疗或改善通过以μ阿片受体拮抗剂治疗可得到改善的疾病或病况的方法，所述疾病或病况例如为胃肠道运动减少的病症，所述方法包含向哺乳动物投与治疗有效量的3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的结晶硫酸盐或其溶剂化物。

本发明另外提供治疗阿片诱导的肠功能紊乱或术后肠梗阻的方法，所述方法包含向哺乳动物投与治疗有效量的3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的结晶硫酸盐或其溶剂化物。

在另一方法方面中，本发明提供制备本发明的结晶硫酸盐的方法，所述方法包含使3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺与硫酸接触以形成反应混合物，和从反应混合物分离结晶硫酸盐。

本发明提供制备本发明的结晶硫酸盐的另一方法，所述方法包含将3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的硫酸盐的结晶水合物分散于包含甲醇的稀释剂中以形成反应混合物，和从反应混合物分离结晶硫酸盐。

在又一方法方面中，本发明提供制备化合物1的结晶硫酸盐的方法，所述方法包含：(a)使经保护的化合物1前驱体(其中羟基经保护)与硫酸接触以形成第一反应混合物；(b)从第一反应混合物分离化合物1的中间体级固体硫酸盐；(c)将中间体级固体硫酸盐分散于包含甲醇的稀释剂中以形成第二反应混合物；和(d)从第二反应混合物分离结晶硫酸盐。

在一相关组合物方面中，本发明提供N-环己基甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸苄酯亚硫酸氢盐加合物，其适用于制备上述经保护的化合物1前驱体。

本发明也提供如本文所述的适用于疗法中或适用作药物的本发明的结晶硫酸盐，以及本发明的结晶硫酸盐在制造药物中的用途，尤其用于制造治疗哺乳动物与μ阿片受体活性相关的病症的药物。

附图说明

图1显示本发明的3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的结晶硫酸盐的x射线粉末衍射(XRPD)图。

图2显示本发明的3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的结晶硫酸盐的差示扫描量热(DSC)曲线(右侧纵轴)和热重分析(TGA)曲线(左侧纵轴)。

图3显示本发明的3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的结晶硫酸盐的动态吸湿(DMS)曲线。

图4显示本发明的3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的硫酸盐的结晶水合物的x射线粉末衍射(XRPD)图。

图5显示本发明的3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的硫酸盐的结晶水合物的差示扫描量热(DSC)曲线(右侧纵轴)和热重分析(TGA)曲线(左侧纵轴)。

图6显示本发明的3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的硫酸盐的结晶水合物的动态吸湿(DMS)曲线。

具体实施方式

参考附图来说明本发明的多个方面。

本发明提供3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的结晶硫酸盐或其溶剂化物。

定义

当描述本发明的化合物、组合物和方法时，除非另作说明，否则以下术语具有以下含义。

术语“治疗有效量”意指当投与需要治疗的患者时足以实现治疗的量。

如本文中所用的术语“治疗”意指治疗例如哺乳动物(尤其人类)的患者的疾病、病症或医学病况，其包括：

(a)预防疾病、病症或医学病况发生，即对患者的预防性治疗；

(b)改善疾病、病症或医学病况，即消除患者的疾病、病症或医学病况或使其消退，包括抵消其它治疗剂的效果。

(c)抑制疾病、病症或医学病况，即减缓或遏止患者的疾病、病症或医学病况的发展；或

(d)减轻患者的疾病、病症或医学病况的症状。

术语“溶剂化物”意指由一个或多个溶质分子(即，本发明的化合物或其医药上可接受的盐)与一个或多个溶剂分子形成的络合物或聚集体。所述溶剂化物通常是具有大体上固定的溶质与溶剂摩尔比的结晶固体。代表性溶剂包括(例如)水、甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸等。当溶剂为水时，将形成的溶剂化物特定称为水合物。

如本文中所用的术语“结晶硫酸盐”或者“结晶硫酸盐(无水形式)”或“无水硫酸盐”意指在晶格中不包括大体上固定摩尔分数的溶剂分子的结晶固体，即不为溶剂化物或水合物的物质。本发明的溶剂化物，或特别是水合物经明确鉴别。

须注意除非内容另外明确规定，否则如本说明书和随附权利要求书中所用，单数形式“一”和“所述”可包括复数个提及物。

活性剂

呈本发明盐形式的活性剂，即化合物1称为3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺。或者，如依AutoNom软件(德国法兰克福市(Frankfurt)的MDL Information Systems，GmbH)实施的使用IUPAC惯例，将化合物表示为3-((1R，3R，5S)-8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺。本文中所用名称因此对应于IUPAC符号，其中明确表示经取代的苯基相对于8-氮杂双环[3.2.1]辛烷基团的内定向。在其它常用命名法中，将分子的“((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基”部分以不同方式称为((S)-2，3-二羟基-1-氧代丙基)氨基或((S)-2，3-二羟基丙酰氨基)。

本发明的盐形式

在一方面中，本发明提供3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺结晶硫酸盐。

在一方面中，本发明的结晶硫酸盐由具有两个或两个以上在选自以下各值的2θ值处的衍射峰(包括三个或三个以上和四个或四个以上衍射峰)的x射线粉末衍射(XRPD)图来表征：6.58±0.20、7.52±0.20、9.35±0.20、14.69±0.20、16.01±0.20、17.45±0.20、17.99±0.20、18.62±0.20、19.76±0.20、21.11±0.20、22.07±0.20、23.18±0.20、23.74±0.20、24.56±0.20、25.63±0.20、26.45±0.20、27.86±0.20、28.31±0.20、29.54±0.20、30.59±0.20、31.58±0.20、33.89±0.20和36.02±0.20。具体来说，在此方面中，所述晶型由具有两个或两个以上在选自以下各值的2θ值处的衍射峰(包括三个或三个以上和四个或四个以上衍射峰)的x射线粉末衍射图来表征：14.69±0.20、16.01±0.20、21.11±0.20、22.07±0.20和23.18±0.20。

如在粉末x射线衍射领域中所熟知，相比于相对峰高，XRPD光谱的峰位置对例如试样制备和仪器几何尺寸的细节等实验细节的敏感度相对较低。因此在一方面中，化合物1的结晶硫酸盐由峰位置大体上与图1中所示的那些峰位置一致的x射线粉末衍射图来表征。

所述结晶硫酸盐结构已进一步由单晶x射线衍射分析来表征，其提供以下晶格参数：单位晶胞为斜方晶，其尺寸为

α＝β＝γ＝90°；晶胞体积(V)为

计算密度为1.38g/cm³；空间群为P2₁2₁2₁(#19)。所得分子结构证实化学组成为硫酸根平衡离子与化合物1的摩尔比为1∶1的化合物1硫酸盐的化学组成并且不对称单位晶胞不含有水或其它溶剂分子。从导出原子位置预测的X射线粉末衍射峰与所观察到的XRPD图极为一致。

在另一方面中，本发明的结晶硫酸盐由其在暴露于高温时的行为来表征。如图2中所表明，高度结晶试样的差示扫描量热(DSC)曲线显示在约190℃至约205℃范围内吸热热流的峰值，其鉴别为熔化转变。热重分析(TGA)曲线显示在熔点以下的温度下无显著重量损失。热分解大致紧接着熔化发生。

在又一方面中，结晶硫酸盐由其红外吸收光谱来表征，所述光谱在以下各处显示显著吸收带：约430、590、639、705、867、1036、1053、1105、1171、1231、1277、1375、1391、1452、1476、1553、1596、1639、1664、2852、2907、2928、2967、3168和3357cm^-1。

已证实化合物1的结晶硫酸盐具有可逆吸附/解吸概况，其具有如图3中所示的格外低水平的吸湿性(即在室温下在2％相对湿度至90％相对湿度的湿度范围内增重小于约0.3％)。

另外，已发现在暴露于高温和高湿后，化合物1的结晶硫酸盐稳定。在40℃和75％相对湿度下储存4周后，HPLC分析显示无化学降解并且DSC、TGA或XRPD结果无可检测变化。

在另一方面中，本发明提供化合物1的硫酸盐的结晶水合物。

在一方面中，本发明的硫酸盐的结晶水合物由具有两个或两个以上在选自以下各值的2θ值处的衍射峰(包括三个或三个以上和四个或四个以上衍射峰)的x射线粉末衍射(XRPD)图来表征：9.41±0.20、9.98±0.20、15.17±0.20、16.70±0.20、18.59±0.20、19.46±0.20、19.91±0.20、20.63±0.20、21.35±0.20、21.89±0.20、23.00±0.20、24.20±0.20、25.40±0.20、26.03±0.20、27.44±0.20、28.46±0.20、29.45±0.20、31.22±0.20、31.82±0.20、33.17±0.20、33.56±0.20和36.89±0.20。具体来说，在此方面中，所述晶型由具有两个或两个以上在选自以下各值的2θ值处的衍射峰(包括三个或三个以上和四个或四个以上衍射峰)的x射线粉末衍射图来表征：16.70±0.20、18.59±0.20、19.46±0.20、19.91±0.20、23.00±0.20和24.20±0.20。

在另一方面中，化合物1的硫酸盐的结晶水合物由峰位置大体上与图4中所示的那些峰位置一致的x射线粉末衍射图来表征。

本发明的硫酸盐的结晶水合物也由其差示扫描量热(DSC)曲线来表征，所述曲线显示两个吸热事件：当在10℃/分钟的加热速率下分析时，吸热热流在约125℃至约133℃范围内的第一峰和在约178℃至约183℃范围内的第二峰，如图5中说明。热重分析(TGA)曲线显示在约60℃与约140℃之间的第一个热事件和在约140℃与约190℃之间的第二个热事件。在第一个热事件中蒸发的物质的TGA联用IR分析与具有约一摩尔水/摩尔化合物1硫酸盐的水合物组成一致。

令人惊讶地，化合物1的硫酸盐的结晶水合物显示较低吸湿性。如图6中说明，结晶水合物在室温下在约2％至约90％相对湿度的整个范围内显示可逆吸附/解吸概况，同时在整个相对湿度范围内增重小于约0.3％。

在下文实例中进一步说明本发明的盐形式的这些特性。

合成程序

从易于获得的起始物料，使用下文实例中所述的程序或使用列于本申请案【背景技术】部分中的共同转让的美国申请案中所述的程序可制备活性剂，3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺。

在一个制备方法中，通过使3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺与约0.5至约1.5摩尔当量(包括约1摩尔当量)硫酸接触来制备本发明的结晶硫酸盐。此反应一般在惰性稀释剂中在约0℃至约65℃，包括约60℃至约65℃范围内的温度下进行。除包含约10％水的甲醇水组合外，合适的惰性稀释剂包括(例如)甲醇、甲苯、二氯甲烷和例如甲苯与乙腈、二氯甲烷与乙腈，以及甲苯、乙腈与水的组合。使用这些稀释剂，制备浓度在约5mg/mL与约400mg/mL之间，包括在约50mg/mL与约100mg/mL之间的反应混合物并保持约2小时至约24小时，任选地伴以搅动。在所述保持期间可将混合物冷却至约5℃与约20℃之间。

反应完成后，可通过任何常规方法，例如过滤、浓缩、离心等使本发明的结晶盐从反应混合物分离。

或者，通过使水合形式再结晶来制备本发明的结晶硫酸盐。以在约5mg/ml与约400mg/ml之间的浓度将结晶水合物分散于如上所述的惰性稀释剂中。甲醇或呈约3∶1至约9∶1比率的甲醇：水组合是尤其适用于此反应的稀释剂。将反应混合物保持在约0℃至约65℃范围内的温度下(通常伴以搅动)约1小时至约24小时，包括约1小时至约6小时。在保持期间，通常将反应混合物从约65℃冷却至约5℃与约20℃之间。为提高产率，溶液体积可减少约50％，随后将反应混合物在约5℃与约20℃之间的温度下保持约1小时与约24小时之间，包括约1小时与约6小时之间的时段。以常规方式回收所得晶体。

化合物1的结晶硫酸盐和化合物1的硫酸盐的结晶水合物两者均有利地从经保护的化合物1前驱体制备。如下文实例中所述，为制备活性剂，使经保护的醛2，N-环己基甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸苄酯(从其亚硫酸氢盐加合物3再生)与3-内型-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-苄酰胺盐酸盐4偶合以提供经保护的中间体5，将其脱保护以提供3-内型-{8-[2-(环己基甲氨基)乙基]-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基}苄酰胺6。

中间体6与(4S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲酸锂7的反应提供经保护的中间体(S)-2，2-二甲基-[1，3]二氧戊环-4-甲酸{2-[3-(3-氨甲酰基-苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]乙基}环己基甲基-酰胺8。

在约20℃与约30℃之间的温度下，使经保护的中间体8与约0.8至约1.3当量，通常约1至约1.2当量的硫酸水溶液在例如乙酸乙酯或乙酸异丙酯等惰性稀释剂中接触。反应混合物中通常包括可与反应混合物混溶并且产物溶解性较小的第二稀释剂。乙腈适用作第二稀释剂。通常将反应混合物搅拌约2小时与约72小时之间的时段，使化合物8脱保护并形成化合物1的中间体级固体硫酸盐，其通常主要是化合物1的硫酸盐的结晶水合物。可以常规方式(例如通过过滤)来分离中间体级产物。

可通过使中间体级硫酸盐产物再结晶来获得水合形式，例如通过在加热下将中间体级产物悬浮于乙腈中、添加水以促进溶解、冷却至环境温度并分离再结晶的水合形式，如下文实例2中所述。

化合物1的结晶硫酸盐可由上述脱保护步骤的中间体级固态产物获得。以约5mg/mL与约400mg/mL之间，包括约50mg/mL与约200mg/mL之间的浓度将中间体级产物分散于包含甲醇的惰性稀释剂中。令人惊讶地，已确定具有至多25％水，包括约0％与约15％之间的水，和约5％与约15％之间的水的甲醇水组合是制备无水结晶盐的适用稀释剂。具体来说，包含约10％水的甲醇水组合适用于将中间体级产物再结晶为本发明的无水硫酸盐。

在一个典型的再结晶方法中，加热反应混合物直至获得完全溶解，例如将反应混合物加热至约65℃，并接着历经约2小时与约24小时之间的时段冷却至约5℃与约22℃之间。任选地，当反应混合物在溶解温度以下时，可添加无水硫酸盐的晶种。以常规方式(例如通过过滤)来回收所得晶体。

根据又一方法，水合形式可从结晶硫酸盐(无水)形式制备。通常例如通过冻干或快速蒸发从结晶硫酸盐制备的溶液来将结晶硫酸盐首先转化为溶解性较大的非晶型。接着将非晶固体硫酸盐物质分散于例如25％水与75％乙腈的水性溶剂***中，并任选地在约0℃至约65℃范围内的温度下，搅动约12小时以上或约24小时以上的时段。通常首先将温度升高至约65℃并接着降低至约5℃与约20℃之间。以常规方式回收所得结晶水合物形式。

因此，在一方法方面中，除其它方法之外，本发明提供制备化合物1的结晶硫酸盐的方法，所述方法包含：(a)使经保护的化合物1前驱体(其中羟基经保护)与硫酸接触以形成第一反应混合物；(b)从第一反应混合物分离化合物1的中间体级固体硫酸盐；(c)将中间体级固体硫酸盐分散于包含甲醇的稀释剂中以形成第二反应混合物；和(d)从第二反应混合物分离结晶硫酸盐。

此外，在一组合物方面中，本发明提供适用于制备化合物1的N-环己基甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸苄酯亚硫酸氢盐加合物3。如制备1中所述，可通过使用三乙酰氧基硼氢化钠使环己烷甲醛经2，2-二乙氧基乙胺还原性胺化，接着添加氨基保护基、使醛官能团脱保护，并通过与亚硫酸氢钠反应转化成亚硫酸氢盐加合物来制备亚硫酸氢盐加合物3。或者可通过催化氢化来执行初始还原性胺化。合适的氢化催化剂包括(但不限于)钯、铂和阮内(Raney)镍催化剂。

医药组合物

通常以医药组合物或调配物的形式向患者投与本发明的结晶硫酸盐形式。可通过任何可接受的投药途径向患者投与所述医药组合物，可接受的投药途径包括(但不限于)经口、经直肠、经***、经鼻、吸入、局部(包括经皮)和不经肠投药方式。

因此，在本发明的一个组合物方面中，本发明是关于包含医药上可接受的载剂或赋形剂和治疗有效量的化合物1或其溶剂化物的结晶硫酸盐的医药组合物。任选地，在需要时，所述医药组合物可含有其它治疗剂和/或调配剂。当讨论组合物时，应了解术语“本发明的盐”包括化合物1以及其溶剂化物，尤其水合物的结晶硫酸盐。

本发明的医药组合物通常含有治疗有效量的本发明以盐形式存在的活性剂。通常所述医药组合物将含有约0.1重量％至约95重量％活性剂；优选约5重量％至约70重量％；并且更优选约10重量％约60重量％活性剂。

任何常规载剂或赋形剂都可用于本发明的医药组合物中。特定载剂或赋形剂，或载剂或赋形剂的组合的选择将视用以治疗特定患者或医学病况或疾病病况类型的投药方式而定。就此而言，用于特定投药方式的合适医药组合物的制备完全在制药领域技术人员的范围内。另外，用于本发明的医药组合物的载剂或赋形剂可以外购。通过进一步说明，在以下文献中描述常规调配技术：雷明登氏药学的理论与实践(Remington：TheScience and Practice of Pharmacy)，第20版，利平科特·威廉斯·怀特出版公司(LippincottWilliams&White)，马里兰州巴尔的摩市(Baltimore，Maryland)(2000)；和H.C.安塞尔(H.C.Ansel)等人药物剂型与药物传递***(Pharmaceutical Dosage Forms and DrugDelivery Systems)，第7版，利平科特·威廉斯·怀特出版公司，马里兰州巴尔的摩市(1999)。

可充当医药上可接受的载剂的物质的代表性实例包括(但不限于)以下各者：糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素，例如微晶纤维素和其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；黄蓍胶粉；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇；多元醇，例如丙三醇、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；褐藻酸；无热原质水；等渗盐水；林格氏溶液(Ringer′s solution)；乙醇；磷酸盐缓冲液；和其它用于医药组合物中的无毒性相容物质。

通常通过充分和紧密混合或掺合活性剂与医药上可接受的载剂和一种或多种任选成分来制备医药组合物。接着可使用常规程序和设备将所得均匀掺合的混合物成形或装填于片剂、胶囊、丸剂等中。

本发明的医药组合物优选以单位剂型包装。术语“单位剂型”是指适用于对患者给药的实体离散单元，即，每一单元含有预定量的活性剂，其经计算以单独或与一个或多个额外单元组合来产生所需治疗效果。例如，所述单位剂型可为胶囊、片剂、丸剂等，或适用于不经肠投与的单位包装。

在一个实施例中，本发明的医药组合物适合于经口投与。用于经口投与的合适医药组合物可呈胶囊、片剂、丸剂、***剂、扁胶剂、糖衣药丸、散剂、颗粒剂的形式；或呈水性或非水性液体中的溶液或悬浮液的形式；或呈水中油型或油中水型液体乳液的形式；或呈酏剂或糖浆的形式；等等；每一者含有预定量的本发明化合物作为活性成分。

当想要以固体剂型(即以胶囊、片剂、丸剂等形式)经口投与时，本发明的医药组合物通常将包含活性剂和一种或多种医药上可接受的载剂，例如柠檬酸钠或磷酸二钙。任选地或替代地，所述固体剂型也可包含：填充剂或增量剂，例如淀粉、微晶纤维素、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；粘合剂，例如羧甲基纤维素、褐藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或***胶；保湿剂，例如甘油；崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸盐，和/或碳酸钠；溶液阻滞剂，例如石蜡；吸收促进剂，例如季铵化合物；湿润剂，例如鲸蜡醇和/或单硬脂酸甘油酯；吸附剂，例如高岭土和/或膨润土；润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和/或其混合物；着色剂；和缓冲剂。

脱模剂、湿润剂、涂布剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于本发明的医药组合物中。医药上可接受的抗氧化剂的实例包括：水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。用于片剂、胶囊、丸剂等的涂布剂包括用于肠溶衣的涂布剂，例如邻苯二甲酸乙酸纤维素、聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸酯、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、偏苯三酸乙酸纤维素、羧甲基乙基纤维素、琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素等。

也可使用(例如)不同比例的羟丙基甲基纤维素；或其它聚合物基质、脂质体和/或微球体来调配本发明的医药组合物以提供活性剂的缓慢或受控释放。另外，本发明的医药组合物可任选地含有乳浊剂，并且可经调配以使其仅或优先在胃肠道的某一部分任选地以延时方式释放活性成分。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。活性剂也可呈用(若适当)一种或多种上述赋形剂微囊封的形式。

用于经口投与的合适液体剂型包括(例如)医药上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。液体剂型通常包含活性剂和惰性稀释剂(例如水或其它溶剂)、增溶剂和乳化剂(例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇)、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，以及其混合物。除活性成分以外，悬浮液可含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧化乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶，以及其混合物。

本发明的盐也可不经肠投与(例如通过静脉内、皮下、肌肉内或腹膜内注射)。对于不经肠投与而言，活性剂通常与用于不经肠投与的合适媒剂混合，所述合适媒剂包括(例如)无菌水溶液、生理盐水、例如丙二醇等低分子量醇、聚乙二醇、植物油、明胶、例如油酸乙酯等脂肪酸酯等。不经肠调配物也可含有一种或多种抗氧化剂、增溶剂、稳定剂、防腐剂、湿润剂、乳化剂或分散剂。可通过使用无菌可注射介质、灭菌剂、过滤、辐射或热来使这些调配物无菌。

或者，本发明的医药组合物经调配以通过吸入投与。用于通过吸入来投与的合适医药组合物通常将呈气雾剂或粉末的形式。一般使用例如定量吸入器、干粉吸入器、喷雾器或类似传递装置等熟知传递装置来投与所述组合物。

当通过使用加压容器吸入投药时，本发明的医药组合物通常将包含活性成分和合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适气体。另外，医药组合物可呈胶囊或药筒(例如由明胶制得)的形式，其包含本发明的化合物和适于粉末吸入器中使用的粉末。合适的粉末基质包括(例如)乳糖或淀粉。

本发明的盐也可使用已知经皮传递***和赋形剂来经皮投与。例如，活性剂可与例如丙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯、氮杂环烷-2-酮等渗透增强剂混合，并加入贴片或类似传递***中。若需要，则包括胶凝剂、乳化剂和缓冲剂在内的其它赋形剂可用于所述经皮组合物中。

若需要，则本发明的盐可与一种或多种其它治疗剂组合投与。在此实施例中，本发明的盐与其它治疗剂物理混合以形成含有两者药剂的组合物；或者各药剂以独立且不同的组合物形式存在，所述组合物同时或依次投与患者。

例如，可使用常规程序和设备将本发明的盐与第二治疗剂组合以形成包含化合物1和第二治疗剂的组合物。另外，治疗剂可与医药上可接受的载剂组合以形成包含本发明的盐、第二治疗剂和医药上可接受的载剂的医药组合物。在此实施例中，通常混合或掺合组合物的组分以产生物理混合物。接着使用本文所述的任何途径以治疗有效量投与这一物理混合物。或者，治疗剂在投与患者之前可保持独立并且不同。在此实施例中，药剂在投与之前并不物理上混合在一起，而是作为独立组合物同时或在独立时间投与。所述组合物可独立包装或可以试剂盒形式包装在一起。试剂盒中的两种治疗剂可通过相同投药途径或通过不同投药途径来投与。

任何与本发明活性剂相容的治疗剂都可用作第二治疗剂。具体来说，经由除μ阿片受体拮抗作用以外的机制起作用的胃肠道蠕动促进剂(prokinetic agent)可与本发明的化合物组合使用。例如，5-HT4受体促效剂，如替加色罗(tegaserod)、伦扎必利(renzapride)、莫沙必利(mosapride)、普卡必利(prucalopride)、1-异丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰基哌嗪-1-基)乙基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}酰胺、1-异丙基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羟基-3-(甲烷磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}酰胺或4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯可用作第二治疗剂。

其它适用的胃肠道蠕动促进剂包括(但不限于)5-HT₃受体促效剂(例如普莫司曲(pumosetrag))、5-HT_1A受体拮抗剂(例如AGI 001)、α-2-δ配体(例如PD-217014)、氯离子通道开启剂(例如鲁比前列酮(lubiprostone))、多巴胺拮抗剂(例如伊托必利(itopride)、灭吐灵(metaclopramide)、多潘立酮(domperidone))、GABA-B促效剂(例如巴氯芬(baclofen)、AGI 006)、κ阿片促效剂(例如阿西马朵林(asimadoline))、蕈毒碱M₁和M₂拮抗剂(例如阿克替胺(acotiamide))、胃动素(motilin)促效剂(例如米坦西诺(mitemcinal))、鸟苷酸环化酶活化剂(例如MD-1100)和饥饿素(ghrelin)促效剂(例如Tzp 101、RC 1139)。

另外，本发明的盐可与阿片治疗剂组合。这些阿片剂包括(但不限于)***、哌替啶(pethidine)、可待因(codeine)、双氢可待因(dihydrocodeine)、奥施康定(oxycontin)、氧可酮(oxycodone)、氢可酮(hydrocodone)、舒芬太尼(sufentanil)、芬太尼(fentanyl)、瑞芬太尼(remifentanil)、丁丙诺啡(buprenorphine)、***(methadone)和***(heroin)。

在此项技术中已知所述治疗剂的大量其它实例并且任何这些已知治疗剂都可与本发明的化合物组合使用。第二药剂(若包括)以治疗有效量存在，即以与本发明的化合物共投与时产生治疗有利效果的任何量存在。与本发明的化合物组合投与的其它治疗剂的合适剂量通常在约0.05微克/天至约100毫克/天的范围内。

因此，本发明的医药组合物任选地包括如上所述的第二治疗剂。

以下实例说明本发明的代表性医药组合物：

调配物实例A：用于经口投与的硬明胶胶囊

充分掺合本发明的盐(50g)、喷雾干燥乳糖(200g)和硬脂酸镁(10g)。将所得组合物装填于硬明胶胶囊中(260mg组合物/胶囊)。

调配物实例B：用于经口投与的硬明胶胶囊

充分掺合本发明的盐(20mg)、淀粉(89mg)、微晶纤维素(89mg)和硬脂酸镁(2mg)并接着使其通过第45号网目美国筛。将所得组合物装填于硬明胶胶囊中(200mg组合物/胶囊)。

调配物实例C：用于经口投与的明胶胶囊

充分掺合本发明的盐(10mg)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯(50mg)和淀粉(250mg)并接着将其装填于明胶胶囊中(310mg组合物/胶囊)。

调配物实例D：用于经口投与的片剂

将本发明的盐(5mg)、淀粉(50mg)和微晶纤维素(35mg)通过第45号网目美国筛并充分混合。将聚乙烯吡咯烷酮(10重量％在水中，4mg)溶液与所得粉末混合，并接着使此混合物通过第14号网目美国筛。使如此产生的颗粒在50-60℃下干燥并通过第18号网目美国筛。接着添加先前已通过第60号网目美国筛的羧甲基淀粉钠(4.5mg)、硬脂酸镁(0.5mg)和滑石(1mg)至颗粒中。混合之后，在压片机上压缩混合物得到重100mg的片剂。

调配物实例E：用于经口投与的片剂

充分掺合本发明的盐(25mg)、微晶纤维素(400mg)、气相二氧化硅(10mg)和硬脂酸(5mg)并接着将其压缩形成片剂(440mg组合物/片剂)。

调配物实例F：用于经口投与的单面刻痕片剂

充分掺合本发明的盐(15mg)、玉米淀粉(50mg)、交联羧甲纤维素钠(25mg)、乳糖(120mg)和硬脂酸镁(5mg)并接着将其压缩形成单面刻痕片剂(215mg组合物/片剂)。

调配物实例G：用于经口投与的悬浮液

充分混合以下成分以形成用于经口投与的悬浮液，其含有100mg活性成分/10mL悬浮液：

成分量

本发明的盐 0.1g

富马酸 0.5g

氯化钠 2.0g

对羟基苯甲酸甲酯 0.15g

对羟基苯甲酸丙酯 0.05g

砂糖 25.5g

山梨糖醇(70％溶液) 12.85g

维格姆(Veegum)k(范德比尔特公司(Vanderbilt Co.)) 1.0g

调味剂 0.035mL

着色剂 0.5mg

基馏水适量补足至100mL

调配物实例H：干粉组合物

将微米尺寸化的本发明盐(1mg)与乳糖(25mg)掺合并接着装填于明胶吸入药筒中。使用粉末吸入器来投与药筒内容物。

调配物实例J：可泩射调配物

将本发明的盐(0.1g)与0.1M柠檬酸钠缓冲溶液(15mL)掺合。使用1N盐酸水溶液或1N氢氧化钠水溶液将所得溶液的pH值调节为pH 6。接着添加在柠檬酸盐缓冲剂中的无菌生理盐水以提供20mL的总体积。

应了解适用于特定投药方式的任何形式的本发明的盐(即结晶盐或溶剂化物)都可用于上文讨论的医药组合物中。

效用

本发明的活性剂，3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺硫酸盐是μ阿片受体拮抗剂，并因此预期本发明的盐适用于治疗由μ阿片受体介导或与μ阿片受体活性相关的医学病况，即通过用μ阿片受体拮抗剂治疗可得到改善的医学病况。具体来说，预期本发明的盐适用于治疗与使用阿片止痛剂相关的不良反应，即例如便秘、胃排空减少、腹痛、气胀、恶心和胃食道逆流等症状，其统称为阿片诱导的肠功能紊乱。也预期本发明的盐形式适用于治疗术后肠梗阻，即在腹部或其它手术之后发生的胃肠道运动减少的病症。另外，已提出例如化合物1的μ阿片受体拮抗剂化合物可用于逆转阿片诱导的恶心和呕吐。

因为已显示在动物模型中化合物1增加胃肠(GI)道的运动，所以预期本发明的盐适用于治疗包括人类在内的哺乳动物由运动减少引起的GI道病症。这些GI运动病症包括(例如)慢性便秘、便秘主导型肠易激综合征(C-IBS)、糖尿病性与特发性胃轻瘫和功能性消化不良。

因此在一方面中，本发明提供增加哺乳动物胃肠道运动的方法，所述方法包含向哺乳动物投与治疗有效量的包含医药上可接受的载剂和本发明的盐的医药组合物。

当用以治疗GI道运动减少的病症或由μ阿片受体介导的其它病况时，本发明的盐通常将以单次日剂量或以每天多次剂量来经口投与，但可使用其它投药形式。例如，尤其当用以治疗术后肠梗阻时，本发明的化合物可不经肠投与。每剂量投与的活性剂的量或每天投与的总量通常将由医生根据相关情况来决定，所述情况包括待治疗的病况、所选投药途径、实际所投与的化合物和其相对活性、个别患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重程度等。

用于治疗GI道运动减少病症或由μ阿片受体介导的其它病症的合适剂量将在约0.0007毫克/公斤/天活性剂至约20毫克/公斤/天活性剂，包括约0.0007毫克/公斤/天活性剂至约1.4毫克/公斤/天活性剂的范围内。对于平均70公斤的人而言，这将为约0.05毫克/天活性剂至约100毫克/天活性剂的量。

在本发明的一方面中，本发明的化合物用以治疗阿片诱导的肠功能紊乱。当用以治疗阿片诱导的肠功能紊乱时，本发明的化合物通常将以单次日剂量或以每天多次剂量来经口投与。用于治疗阿片诱导的肠功能紊乱的剂量优选将在约0.05毫克/天至约100毫克/天的范围内。

在本发明的另一方面中，本发明的化合物用以治疗术后肠梗阻。当用以治疗术后肠梗阻时，本发明的化合物通常将以单次日剂量或以每天多次剂量来经口或静脉内投与。用于治疗术后肠梗阻的剂量优选将在约0.05毫克/天至约100毫克/天的范围内。

本发明也提供治疗患有与μ阿片受体活性相关的疾病或病况的哺乳动物的方法，所述方法包含向哺乳动物投与治疗有效量的本发明化合物或包含本发明化合物的医药组合物。

本发明的活性剂任选地与另外一种或多种治疗剂组合投与，尤其与经由非μ阿片机制起作用的胃肠道蠕动促进剂组合投与。因此在另一方面中，本发明的方法和组合物另外包含治疗有效量的另一种胃肠道蠕动促进剂。

如上所述，本发明的盐是μ阿片受体拮抗剂。因此本发明另外提供拮抗哺乳动物体内的μ阿片受体的方法，所述方法包含向哺乳动物投与本发明的盐。

除其它特性之外，已发现呈游离碱和硫酸盐形式的本发明活性剂在μ受体功能分析中显示与μ阿片受体有效结合并且很少有或无促效作用。因此，本发明的盐是有效的μ阿片受体拮抗剂。另外，在动物模型中，活性剂已显示与中枢神经***活性相比主要为周边活性。因此，可预期本发明的盐逆转阿片诱导的GI运动减少，而不干扰止痛的有利中枢作用。使用所属领域技术人员熟知的各种活体外和活体内分析，可证明本发明化合物的这些特性以及效用。在以下实例中进一步详细描述代表性分析。

实例

提供以下合成和生物实例以说明本发明，并且不应以任何方式将其视为限制本发明的范围。在以下实例中，除非另作说明，否则以下缩写具有以下含义。未在下文定义的缩写具有其一般接受的含义。

DIPEA ＝N，N-二异丙基乙胺

DMF ＝N，N-二甲基甲酰胺

EtOAc ＝乙酸乙酯

EtOH ＝乙醇

MeTHF ＝2-甲基四氢呋喃

MTBE ＝叔丁基甲基醚

NaHMDS ＝双(三甲基硅烷基)氨基钠

PyBop ＝六氟磷酸苯并***-1-基氧基三吡咯烷基磷

psi ＝磅/平方英寸

Rt ＝滞留时间

THF ＝四氢呋喃

试剂和溶剂购自商业供应商(奥德里奇公司(Aldrich)、佛卢卡公司(Fluka)、西格玛公司(Sigma)等)，并且未经进一步纯化即使用。除非另外规定，否则反应在氮气气氛下进行。通过薄层色谱(TLC)、分析高效液相色谱(分析HPLC)和质谱分析来监测反应混合物的进程。通过HPLC分析使用下述方案测定产物的内型/外型比。反应混合物如各反应中具体所述而处理；其一般通过萃取和其它例如温度和溶剂依赖性结晶和沉淀等纯化法加以纯化。按惯例通过质谱和¹H-NMR光谱测定法进行反应产物的表征。对于NMR测量，将试样溶解于氘化溶剂(CD₃OD、CDCl₃或DMSO-d₆)中，并且¹H-NMR光谱用Varian Gemini 2000仪器(300MHz)在标准观测条件下获得。通过电喷雾电离法(ESMS)使用美国应用生物***公司(Applied Biosystems)(加利福尼亚州福斯特市(Foster City，CA))型号API 150 EX仪器或美国安捷伦公司(Agilent)(加利福尼亚州帕洛阿尔托市(Palo Alto，CA))型号1100 LC/MSD仪器进行化合物的质谱鉴别。

通用HPLC条件

柱： Zorbax SB-Aq，5μm.4.6×250mm

柱温： 40℃

流速： 1.0mL/min

流动相： A＝水/ACN(98∶2)+0.1％TFA

B＝水/ACN(10∶90)+0.1％TFA，

注入体积： 10μL

检测器波长： 214nm

HPLC方法1

以约1mg/mL将粗化合物溶解于水/ACN(50∶50)中并使用以下梯度历经20min加以分析(时间(min)/％ B)：0/10、2.5/20、9/75、15/90、17/90、18/10、20/10。

HPLC方法2

以约1mg/mL将化合物溶解于水/ACN(90∶10)中并使用以下梯度历经30min加以分析(时间(min)/％ B)：0/10、13/10、23/65、28/90、29/90、30/10。

HPLC方法3

以约1mg/mL将化合物溶解于水/ACN(90∶10)中并使用以下梯度历经55min加以分析(时间(min)/％ B)：0/10、10/20、46/75、47/90、50/10、55/10。

制备1：N-环己基甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸苄酯亚硫酸氢盐加合物的合成

a.N-环己基甲基-(2，2-二乙氧基乙基)胺的制备

向2，2-二乙氧基乙胺(209mL，1.43mol)与MeTHF(1050L)的混合物中添加环己烷甲醛(107mL，0.89mol)。将反应混合物在室温下搅拌30min并冷却至0℃。历经40min添加三乙酰氧基硼氢化钠(378g，1.79mol)并将反应混合物搅拌2h，冷却至0℃。添加1M NaOH(1L)。以于水中的盐水(1∶1，2×1L)洗涤有机层并将体积缩减至约20％。添加MeTHF(1L)并将体积缩减至约20％。将粗标题中间体的溶液直接用于下一步中。

b.N-环己基甲基-(2，2-二乙氧基乙基)氨基甲酸苄酯的制备

向先前步骤的产物(约213g，约0.9mol)中添加MeTHF(2L)和DIPEA(233mL，1.34mol)。将反应混合物冷却至0℃并逐滴添加氯甲酸苄酯(140mL，0.98mol)。将反应混合物在0℃下搅拌30min，在0℃至室温下搅拌2h，并接着在室温下搅拌1h。添加水(1.6L)并将反应混合物搅拌10min。分离各相并以碳酸氢钠(1.6L)和水(1.6L)洗涤有机层。分离各层并将有机层缩减至约20％。添加MeTHF(1L)并将体积缩减至约20％。将粗标题中间体的溶液直接用于下一步中。

c.N-环己基甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸苄酯亚硫酸氢盐加合物的合成

向先前步骤的产物(约302g，约0.62mol)和乙腈(2L)中添加1M HCl(2L)并在30℃下搅拌反应混合物7h。添加乙酸乙酯(2L)并搅拌反应混合物10min。分离各相，以1M HCl(1.5L)洗涤有机层，再分离各相并以0.5M HCl(1L)洗涤有机层。添加亚硫酸氢钠(71.4g，0.69mol)并将反应混合物搅拌过夜，接着过滤。以乙酸乙酯(1L)洗涤反应器和滤饼。将所得溶液在空气中干燥2h并在真空下干燥过夜以得到呈白色固体状的标题化合物(199g，根据HPLC纯度大于99％面积)。由相同程序处理滤液得到第二批标题化合物(30g)。

制备2：3-内型-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-苄酰胺的合成

a.8-苄基-3-外型-(3-甲氧基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-醇的制备

向3L烧瓶中添加氯化铈粉(194g，0.79mol)。以氮气吹拂烧瓶并添加THF(800mL)。在25℃下搅拌反应混合物1h。向混合物中逐滴添加约1M在THF中的3-甲氧基苯基溴化镁(800mL，0.87mol)。在3℃下搅拌所得浆料1.5小时。接着逐滴添加8-苄基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-酮(120.4g，0.56mol)于THF(200mL)中的溶液，同时保持内部温度在-5℃。搅拌所得溶液15min。将反应混合物添加至含有6N HCl(800mL)并且温度保持在10℃的烧瓶中。通过旋转蒸发去除溶剂之后，将反应混合物在室温下搅拌过夜。过滤分离固体，以6N HCL(70mL)和乙腈(3×70mL)洗涤，并干燥以得到呈奶白色固体状的标题中间体的盐酸盐(161g)。

b.8-苄基-3-(3-甲氧基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯的制备

向3L烧瓶中添加8-苄基-3-外型-(3-甲氧基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-醇盐酸盐(383.9g，1.06mol)、6M HCl(800mL)和MeTHF(200mL)。将所得浆料在氮气下在70℃加热2.5h。将反应混合物转移至12L反应器中并冷却至10℃。将反应烧瓶以MeTHF(1L)洗涤并将其添加至12L反应器中。添加NaOH(50重量％在水中，200mL)并且逐份添加另外NaOH(50重量％，150mL)直至达到pH值约13。分离各相，以MeTHF(1L)萃取水层，并以盐水(1L)洗涤合并的MeTHF层。通过在30℃至40℃下旋转蒸发来减少溶剂，产生呈稠厚油状的标题中间体(360g)。添加EtOH(1.5L)并将体积缩减至约500mL，接着调整为1.8L。

c.3-内型-(3-甲氧基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷的制备

向先前步骤中制备的8-苄基-3-(3-甲氧基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯(在95％EtOH中，400mL，0.20mol)中添加6M HCl(45mL)并接着添加MeTHF(50mL)。反应混合物以氮气净化，加热至40℃并添加钯/碳(10重量％，8g)。将反应器以氢气(3×20psi)加压并接着在20psi下在40℃氢化18h。反应混合物经由硅藻土过滤、浓缩、以MeTHF(2×100mL)洗涤、经由粗糙玻璃过滤器过滤、以MeTHF(10mL)洗涤并在过滤器上干燥以得到呈白色固体状的标题中间体的盐酸盐(31g，单一异构体，(HPLC检测不到外型异构体))。从母液中回收另外5.2g产物。

d.3-内型-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-苯酚的制备

向500mL烧瓶中添加3-内型-(3-甲氧基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(115g，0.45mol)和氢溴酸(48重量％在水中，100mL，0.88mol)。将混合物加热至120℃并在搅拌下保持于这一温度24h。添加另外氢溴酸溶液(25mL)并将反应混合物在搅拌下加热6小时，接着冷却至70℃。添加乙腈(200mL)并将所得浆料冷却至10℃，接着过滤，并以乙腈(50mL)洗涤滤饼以产生呈白色颗粒固体状的标题中间体的氢溴酸盐(99g，纯度大于99％)。

e.2，2，2-三氟-1-[3-内型-(3-羟苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]乙酮的制备

历经20min向3-内型-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-苯酚氢溴酸盐(54.4g，0.19mol)、甲苯(210mL)和三乙胺(40mL，0.29mol)的溶液中添加三氟乙酸酐(54mL，0.38mol)。在40℃下搅拌反应混合物2h。添加乙酸乙酯(370mL)和于水中的盐水(1∶1，265mL)。搅拌反应混合物15min，分离各相。向有机层中添加饱和碳酸氢钠(300mL)并将混合物剧烈搅拌过夜。分离各相并将有机层以于水中的盐水(1∶1，265mL)洗涤，经硫酸钠干燥并通过旋转蒸发去除大部分溶剂。添加甲苯(100mL)并通过旋转蒸发去除溶剂以得到粗标题中间体。

f.三氟甲烷磺酸3-内型-[8-(2，2，2-三氟-乙酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]苯酯的制备

向500mL烧瓶中添加先前步骤的中间体(32.8g，0.11mol)与三乙胺(23mL，0.17mol)的乙酸乙酯溶液(220mL)。将溶液冷却至5℃并逐滴添加三氟甲烷磺酰氯(14mL，0.13mol)。将混合物温至25℃并在这一温度下搅拌1h。添加饱和碳酸氢钠(200mL)，分离各层，添加盐水(150mL)至有机层，再分离各层，并从有机层中去除溶剂以得到粗标题中间体。

g.3-内型-[8-(2，2，2-三氟乙酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-苯甲腈的制备

向100mL烧瓶中添加三氟甲烷磺酸3-内型-[8-(2，2，2-三氟-乙酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]苯酯(25.3g，58.7mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(O)(0.81g，0.9mmol)、1，1′-双(二苯膦基)二茂铁(1.01g，1.8mmol)和氰化锌(4.2g，35.8mmol)。三次以氮气净化烧瓶5min并接着将其置于室内真空下持续5min。向烧瓶中添加DMF(150mL)和蒸馏水(2.5mL)。将溶液在搅拌下以氮气净化10min，加热至120℃并在120℃下在氮气下搅拌4h。当反应完成时，添加20g来自通过相同程序制备的先前批次的产物，并搅拌20min。

通过蒸馏去除大部分溶剂并将溶液冷却至22℃。向溶液中添加乙酸乙酯(445mL)并将所得溶液经由硅藻土过滤。添加碳酸氢钠(450mL)并搅拌溶液15min。分离各层并以稀盐水(2×95mL)洗涤有机层，并经由硫酸钠过滤。通过去除乙酸乙酯将体积缩减至约50mL。添加异丙醇(150mL)并在22℃下搅动溶液1h。过滤分离固体并以异丙醇(2×25mL)洗涤以得到呈奶白色/浅褐色固体状的标题中间体(33.5g，根据HPLC纯度为100％)。从滤液中分离第二批产物(6.3g，根据HPLC纯度大于98％)。

h.3-内型-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-苄酰胺的合成

在搅拌下将3-内型-[8-(2，2，2-三氟乙酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-苯甲腈(10g，32mmol)在硫酸(96％，12mL)中的溶液加热至50℃并且在搅拌下保持于这一温度2h。将反应混合物冷却至22℃并将其缓慢添加至含有5N NaOH(90mL)和甲醇(100mL)并冷却至10℃的500mL烧瓶中。过滤盐沉淀物并在22℃下搅拌滤液1h。在减压下浓缩反应混合物。向残余物中添加MeTHF(150mL)并在22℃下搅拌反应混合物5min。分离各层并添加MeTHF(100mL)至水层中。分离各层并添加盐水(150mL)至合并的有机层中。分离各层并且将有机层以碳酸钾干燥并过滤，并去除溶剂。在搅拌下添加EtOH(25mL)与浓盐酸(2.6mL)的混合物至残余物中，接着添加MTBE(25mL)并在22℃下搅拌溶液。将沉淀的固体过滤并风干以得到呈白色固体状的标题化合物的盐酸盐(8g，根据HPLC纯度为97％)。

制备3：3-内型-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-苄酰胺的合成

a.三氟-甲烷磺酸8-苄基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-3-基酯的制备

向500mL烧瓶中添加8-苄基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-酮盐酸盐(50.4g，200mmol)、EtOAc(160mL)和4N NaOH(50mL)。将反应混合物加热至30℃并在这一温度下搅拌1h。分离各层并弃去水层。通过旋转蒸发将有机层的体积缩减至约40mL并添加THF(270mL)。

将所得溶液添加至1L烧瓶中并冷却至-20℃。历经15min添加NaHMDS溶液(1M在THF中，230mL，230mmol)至烧瓶中。在-20±5℃下搅拌反应混合物1h。历经5min逐份添加N-苯基-双(三氟甲烷磺酰亚胺)(82.2g，230mmol)至反应混合物中并在-20℃至-10℃下搅拌混合物1h。向反应混合物中添加1N NaOH(200mL)并使混合物在搅拌下温至22℃。通过在30℃下旋转蒸发部分去除溶剂至450mL的体积。向剩余反应混合物中添加EtOAc(300mL)和庚烷(150mL)。在22℃下搅拌混合物5min。分离各层并弃去水层。以1N NaOH(3×450mL)洗涤有机层。弃去水层。通过旋转蒸发浓缩有机层以得到标题中间体(77g，根据HPLC方法1纯度大于96％)。

¹H NMR(d₆-DMSO，400MHz)：δ(ppm)7.25-7.35(m，5H)，6.05(d，J＝5.2，1H)，3.64(q，J＝13.2，2H)，3.40-3.44(m，2H)，2.77(d，J＝16.4，1H)，1.79-2.09(m，5H)，1.52-1.59(m，1H)。

b.3-(8-苄基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-3-基)苄酰胺的制备

向先前步骤的粗产物中添加THF(420mL)并以氮气净化溶液5min。向2L烧瓶中添加3-氨甲酰基苯基硼酸(98％，33.0g，200mmol)、乙酸钯(II)(98％，0.46g，2mmol)、1，1′-双(二苯膦基)二茂铁(97％，1.1g，2mmol)和氟化钾(34.9g，600mmol)，接着添加三氟-甲烷磺酸8-苄基-8-氮杂-\双环[3.2.1]辛-2-烯-3-基酯的THF溶液。将所得混合物以氮气净化5min，在氮气下加热至回流(67℃)并搅拌2h。将反应混合物冷却至30℃，接着添加EtOAc(500mL)和1N NaOH(500mL)并在22℃下搅拌混合物10min。分离各层并弃去水层。将有机层以盐水(250mL)与水(250mL)的混合物洗涤并搅拌5min。分离各层并弃去水层。有机层简短经Na₂SO₄干燥、过滤并部分去除溶剂。在溶剂去除期间，产物沉淀为浅黄色固体。过滤所得浆料(约200mL)并将固体以冷EtOAc(0℃，100mL)洗涤，并且在高真空下在25℃干燥以得到呈浅黄色固体状的标题中间体(42.5g)。

合并母液和上文洗涤液，浓缩，并且在5℃下搅拌所得浆料(约100mL)30min并过滤。经过滤的固体以冷EtOAc(0℃，30mL)洗涤并在高真空下干燥以得到第二批标题中间体(7g，组合产率为78％，根据HPLC方法1纯度大于98.5％)。

(m/z)：[M+H]⁺C₂₁H₂₂N₂O的计算值，319.18；实验值319.4。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ(ppm)7.9(s，1H)，7.63(d，J＝6.4，1H)，7.57(d，J＝6.4，1H)，7.21-7.42(m，6H)，6.38(d，J＝4.4，1H)，6.13(s，br，1H)，5.83(s，br，1H)，3.68-3.76(m，2H)，3.46-3.51(m，2H)，2.92(d，J＝17.2，1H)，2.18-2.26(m，1H)，2.04-2.12(m，2H)，1.86-1.92(m，1H)，1.58-1.65(m，1H)。

c.3-内型-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-苄酰胺的合成

向1L氢化容器中添加3-(8-苄基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-3-基)苄酰胺(40g，125mmol)、EtOH(800mL)、6M HCl(42mL)和水(80mL)，并在22℃下搅拌混合物直至观察到完全溶解。以氮气净化反应混合物5min同时历经5min将其加热至30℃。向混合物中添加10重量％ Pd/C(50％在水中，4g)。在加热的同时，在大气压下以氢气净化混合物5-10min。在50℃下，在低于5psi(低于0.34个大气压)的氢气流下搅拌混合物5h，使得反应物转化率大于99％(根据HPLC分析)。将溶液冷却至30℃并经由硅藻土过滤以得到标题化合物的粗盐酸盐的溶液，根据HPLC方法2，内型∶外型比为约93∶7，内型Rt＝10.97，外型Rt＝12.67。(m/z)：[M+H]⁺C₁₄H₁₈N₂O的计算值，231.15；实验值231.2。

通过在30℃下在EtOH(约80mL)中共沸蒸馏而从粗产物中去除水以得到浆料，将浆料加热至60℃直至完全溶解。将溶液冷却至35℃并添加产物的晶种(0.05g)。(根据制备2中所述的方法制备晶种。)在22℃下搅拌所得浆料30min，缓慢添加MTBE(120mL)，并将浆料在22℃下搅拌4h，接着在0℃下搅拌1h。将所得固体过滤，以冷EtOH洗涤并在高真空下干燥以得到呈白色粉末状的标题化合物的盐酸盐(24.5g)(75％产率，根据HPLC方法3纯度大于98.5％，外型异构体小于0.4％，内型Rt＝8.67，外型Rt＝9.43)。

(m/z)：[M+H]⁺C₁₄H₁₈N₂O的计算值，231.15；实验值231.2。¹H NMR(d₆-DMSO，400MHz)：δ(ppm)9.13(s，br，1H)，9.03(s，br，1H)，8.05(s，1H)，7.93(s，1H)，7.73(d，J＝7.6，1H)，7.58(d，J＝7.6，1H)，7.40(t，J＝7.6，2H)，3.97(s，2H)，3.17-3.23(m，1H)，2.39-2.46(m，2H)，2.19-2.24(m，2H)，1.86-1.89(m，2H)，1.59-1.63(m，2H)。

实例1A：3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺结晶硫酸盐的合成

a.N-环己基甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸苄酯的制备

向100mL烧瓶中添加N-环己基甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸苄酯亚硫酸氢盐加合物(3.94g，1mmol)和MeTHF(35mL)，接着添加水(25mL)。在室温下搅拌所得浆料5分钟并添加1M NaOH(8mL)。在室温下搅拌反应混合物45min。分离各层并将有机层的体积缩减至约8mL以得到粗标题中间体。

b.2-[3-内型-(3-氨甲酰基苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-乙基}环己基甲基-氨基甲酸苄酯的制备

向先前步骤的产物中添加DMF(15mL)，接着添加3-内型-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-苄酰胺盐酸盐(2.67g，1mmol)并接着添加DMF(10mL)。将混合物在室温下搅拌30min，冷却至10℃并接着添加三乙酰氧基硼氢化钠(4.25g，2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌90分钟并接着冷却至10℃。添加乙酸异丙酯(100mL)，接着添加1M NaOH(50mL)。搅拌混合物15min，并分离各相。以于水中的盐水(1∶1，2×50mL)洗涤有机层，并将有机层的体积缩减至约10mL以得到粗标题中间体。

c.3-内型-{8-[2-(环己基甲氨基)乙基]-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基}苄酰胺的制备

向先前步骤的产物中添加EtOH(30mL)和浓HCl(1.5mL)。以氮气净化溶液，添加10％钯/碳(470mg)并以氮气净化混合物5分钟，接着在30psi下氢化过夜。以氮气净化2min之后，经由硅藻土过滤溶液并去除溶剂至约10mL。添加乙酸异丙酯(40mL)和1M NaOH(20mL)。分离各层并以盐水(20mL)洗涤有机层，分离各相并去除有机溶剂至5-10mL。添加乙酸异丙酯(20mL)并将体积缩减至约8mL，向其中添加乙酸异丙酯(20mL)。在室温下搅拌所得浆料2h。过滤分离产物，以乙酸异丙酯(10mL)洗涤反应烧瓶和滤饼以产生呈奶白色固体状的标题中间体(2.4g，98％纯度)。

d.3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺硫酸盐(水合形式)的制备

向500mL烧瓶中添加3-内型-{8-[2-(环己基甲氨基)乙基]-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基}苄酰胺(31g，83.9mmol)和DMF(150mL)。搅拌混合物10分钟，接着添加六氟磷酸苯并***-1-基氧基三(吡咯烷基)-磷(56.8g，109mmol)和(4S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲酸锂(15.6g，92.3mmol)，并且在室温下搅拌混合物2h。添加乙酸乙酯(600mL)和0.5M NaOH(300mL)并分离各相。有机层含有粗(S)-2，2-二甲基-[1，3]二氧戊环-4-甲酸{2-[3-(3-氨甲酰基-苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]乙基}环己基甲基-酰胺(约84mmol)，未将其分离。

以于水中的盐水(1∶1，2×300mL)洗涤有机层并分离各相。向有机层中添加2MH₂SO₄(42mL)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加乙腈(300mL)并搅拌所得浆料2h。过滤分离产物，滤饼以乙腈(200mL)洗涤，在空气中干燥2h并接着在真空下在室温干燥20h以得到呈白色粉末状的标题化合物(40g，根据HPLC纯度为97％)。

e.3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺结晶硫酸盐的合成

向100mL烧瓶中添加3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺硫酸盐水合形式(2g)和MeOH(40mL)。将所得浆料在氮气下加热至65℃持续20min，使其完全溶解。在搅拌下将溶液冷却至室温。在轻微减压下去除约20mL溶剂并将所得浆料在室温下搅拌过夜。过滤分离产物，并以乙腈(2×5mL)洗涤烧瓶和滤饼。将滤饼在空气中干燥2h并接着在真空下在室温干燥过夜以得到呈白色粉末状的标题化合物(1.71g，根据HPLC纯度大于99％，约85％产率)。

根据上文程序制备的试样由¹H NMR(400MHz，DMSO d₆)表征：δ(ppm)9.08&8.94(两组brs，1H)，7.99-8.04(m，2H)，7.74-7.76(m，1H)，7.68-7.70(m，1H)，7.41-7.45(m，2H)，4.81，5.00和5.30(三组brs，2H)，4.34(变形m，1H)，4.00和4.05(变形m，2H)，3.01-3.25和3.47-3.55和3.75-3.82(三组m，10H)，2.50-2.55(m，2H)，1.99(变形m，2H)，1.56-1.70(m，8H)，1.15-1.19(m，3H)，0.89-0.99(m，2H)。

实例1B：3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺结晶硫酸盐的合成

a.3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺硫酸盐的制备

将3-内型-{8-[2-(环己基甲氨基)乙基]-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基}苄酰胺(100g，270.6mmol)与DMF(480mL)的混合物搅拌10分钟并接着冷却至0℃。在0℃下整份添加六氟磷酸苯并***-1-基氧基三(吡咯烷基)磷(183g，352mmol)和(4S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲酸锂(49.3g，324mmol)。在室温下搅拌反应混合物6h。添加乙酸异丙酯(2.0L)和1M NaOH(1.0L)，搅拌反应混合物15min并分离各相。以于水中的盐水(1∶1，2×1.0L)洗涤有机层并分离各相。将有机层缩减至四分之一体积(约500mL)，添加乙腈(500mL)并搅拌反应混合物直至均质以得到中间体(S)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲酸2-[3-内型-(3-氨甲酰基-苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-乙基-环己基甲基酰胺于乙酸异丙酯和乙腈中的溶液。

使上文中间体(3.03g，6.09mmol)于乙酸异丙酯/乙腈(22.5mL)中的溶液的等分试样与2.0M硫酸水溶液(3.68mL)组合并保持在25℃持续20h，接着在搅拌下保持在10℃持续5h。过滤反应溶液，并且以乙腈(25mL)洗涤滤饼并干燥以产生呈白色固体状、主要呈结晶水合物形式的标题化合物的中间体级硫酸盐(2.91g，根据HPLC纯度为99.4％)。

b.3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺结晶硫酸盐的合成

在搅拌下历经45min将如在先前步骤中制备的3-内型-(8-2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)-氨基]-乙基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-苄酰胺中间体级硫酸盐(154.0g，277.1mmol)与甲醇/10％水(616mL)的混合物加热至65℃。将反应混合物冷却至55℃，添加标题产物的晶种(120mg)，在55℃下搅拌反应混合物1h，并以10℃/h的速率将温度降至20℃，接着保持8h。将反应混合物冷却至5℃，保持30min，并过滤。以甲醇(2×25mL)洗涤滤饼并在高真空下干燥过夜以产生标题化合物(126.3g，99.9％纯度)。

实例2：3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺硫酸盐(水合形式)的再结晶

将化合物1硫酸盐(水合形式)(920mg)悬浮于乙腈(5mL)中并加热至65℃。接着逐滴添加水(2.4mL)直至达成完全溶解。历经20min将所得溶液冷却至环境温度。在约35℃观察到晶核生成。真空过滤分离固体，以乙腈(5mL)洗涤并干燥以得到标题化合物。

实例3：3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺硫酸盐的结晶

将化合物1硫酸盐(水合形式)(50mg)分散于水(10％)与甲醇(90％)的溶剂混合物(0.83mL)中并在搅拌下加热至60℃。历经2h使所得溶液冷却至环境温度。真空过滤分离所得固体以得到标题化合物(8mg)。

实例4：3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺硫酸盐的结晶

将化合物1硫酸盐(水合形式)(42mg)分散于水(25％)与甲醇(75％)的溶剂混合物(0.42mL)中并在搅拌下加热至60℃。使所得溶液冷却至环境温度。通过旋转蒸发将体积缩减至50％并将溶液保持在环境温度下过夜。真空过滤分离所得固体以得到标题化合物(8mg)。

实例5：3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺硫酸盐的结晶

将化合物1(11mg)溶解于甲苯(22％)与乙腈(78％)的溶剂混合物(0.2mL)中。添加乙腈(0.15mL)，接着添加在乙腈中的0.04M硫酸(0.59mL)。添加酸后即形成固体沉淀物。将反应混合物保持在环境温度12h。过滤分离所得固体以得到标题化合物。

实例6：3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺硫酸盐的结晶

将化合物1(38mg)溶解于二氯甲烷(0.5mL)中。向溶液中添加在乙腈中的0.04M硫酸(1.91mL)。添加酸后即形成固体沉淀物。将反应混合物保持在环境温度12h。过滤分离所得固体以得到标题化合物。

实例7：3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺硫酸盐的结晶

将化合物1(22mg)溶解于甲苯(23％)与乙腈(77％)的溶剂混合物(0.41mL)中。向溶液中添加在乙腈中的0.04M硫酸(1.20mL)。添加酸后即形成固体沉淀物。添加水(0.16mL)至反应混合物中以溶解沉淀物。2h之后观察到晶核生成。真空过滤分离所得固体以得到标题化合物。

实例8：3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺硫酸盐(水合形式)的结晶

将结晶化合物1硫酸盐(7.1g)溶解于水(42mL)与乙腈(25mL)的溶剂混合物中。将溶液冻干以产生非晶硫酸盐。将非晶盐(6.6g)分散于乙腈(75％)与水(25％)的溶剂混合物(34.6mL)中，并在搅拌下加热至65℃持续10min并使其在搅拌下冷却，直至达到环境温度。12h之后，真空过滤分离所得固体以得到标题化合物(5.4g)。

实例9-17：本发明的盐形式的特性

通过x射线粉末衍射(XRPD)、差示扫描量热(DSC)、热重分析(TGA)、红外光谱法(IR)和离子色谱来分析如实例1A中制备的3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺(化合物1)的结晶硫酸盐的试样和如实例2中制备的化合物1硫酸盐的结晶水合物的试样。

实例10：X射线粉末衍射

以理学(Rigaku)衍射计使用Cu Kα(30.0kV，15.0mA)辐射获得图1和图4的X射线粉末衍射图。使用以3°/分钟，0.03°步长，在2°至40°范围内的连续扫描模式运作的测角器进行分析。在石英样品支持器上将试样制备为薄层粉状物。以硅标准物校正仪器。

实例11：热分析

使用TA仪器型号Q-100模组进行差示扫描量热(DSC)。使用Q Series^TM软件的TAInstruments Thermal Advantage收集和分析数据。将约1-10mg的试样精确称量至有盖铝盘中。使用10℃/min的线性加热匀变，从5℃至(通常)265℃评估试样。在使用期间用干氮气净化DSC单元。图2和图5中分别显示化合物1的结晶硫酸盐试样和化合物1的硫酸盐的结晶水合物试样的代表性DSC曲线。

使用TA仪器型号Q-500模组进行热重分析(TGA)。使用Q Series^TM软件的TAInstruments Thermal Advantage收集和分析数据。将重约1-5mg的试样置于铂托架上的铝盘中，并且以10℃/min的线性加热速率从环境温度至300℃扫描。在使用期间以氮气净化天平和炉腔。图2和图5中也分别显示化合物1的结晶硫酸盐试样和化合物1的硫酸盐的结晶水合物试样的代表性TGA曲线。

实例12：动态吸湿评估

在25℃下使用VTI大气微天平SGA-100***(佛罗里达州海尔勒阿市VTI公司(VTICorp.，Hialeah，FL)(33016))进行动态吸湿(DMS)评估。使用约5-10mg的试样尺寸，并且在分析开始时将湿度设为环境值。典型DMS分析由三个扫描组成：以5％ RH/步的扫描速率，环境湿度至2％相对湿度(RH)、2％ RH至90％ RH、90％ RH至5％ RH。每两分钟测量一次质量并且当试样质量5个连续点稳定在0.02％内时将RH换为下一值(±5％ RH)。图3和图6中分别显示化合物1的结晶硫酸盐试样和化合物1的硫酸盐的结晶水合物试样的代表性DMS曲线。

实例13：红外分析

使用配备有漫反射红外傅里叶变换光谱(diffuse reflectance infrared fourier transformspectroscopy，DRIFTS)模组的阿凡达(Avatar)360 FT-IR光谱仪在4000cm^-1至400cm^-1的频率范围内测定红外(IR)吸收光谱。本发明的结晶硫酸盐试样的代表性IR吸收光谱在以下各处具有显著吸收带：430±1、590±1、639±1、705±1、867±1、1036±1、1053±1、1105±1、1171±1、1231±1、1277±1、1375±1、1391±1、1452±1、1476±1、1553±1、1596±1、1639±1、1664±1、2852±1、2907±1、2928±1、2967±1、3168±1和3357±1cm^-1。

实例14：X射线衍射晶体结构分析

将尺寸为0.43×0.05×0.031mm的化合物1硫酸盐块状晶体安装于玻璃纤维上。使用由SMART 5.630版软件(布鲁克公司(Bruker)，2003)控制的具有13.5cm视窗直径的布鲁克SMART 6K CCD x射线区域检测器，使用Cu Kα辐射获得X射线衍射晶体结构数据。试样至检测器的距离为5.039cm。在-153±1℃的温度下收集数据并且使用SHELXS 6.14版(布鲁克公司，2003)软件加以分析。导出以下晶格参数：单位晶胞为斜方晶，尺寸为

α＝β＝γ＝90°；晶胞体积(V)为

计算密度为1.38g/cm³；空间群为P2₁2₁2₁(#19)。通过目测判断根据Mercury 1.4软件从导出原子位置预测的粉末x射线衍射峰与图1的实验结果极为一致。

实例15：固态稳定性评估

在20℃和60％相对湿度(RH)下以及在40℃和75％ RH下，将本发明的硫酸盐试样储存于多个开口玻璃小瓶中。以特定时间间隔，取出代表性小瓶的内容物并且通过DSC、TGA、PXRD进行分析和通过HPLC进行化学纯度分析。储存4周之后，在任一条件下储存的试样的DSC或TGA热分析图中以及XRPD图中均不存在可检测变化。根据HPLC，储存试样的化学纯度在99.7％不变。

实例16：平衡离子含量的测定

通过硫酸根离子色谱法，使用配备有阴离子自再生抑制器、电导率检测器、IonPacAS11-HC分析阴离子交换柱和IonPac AG11-HC保护柱的Dionex ICS-2000离子色谱***，分析本发明的硫酸盐试样。试样的硫酸根含量测定为17.1％，其与每摩尔母化合物一摩尔当量硫酸根离子的17.6％理论硫酸根含量相当。

实例17：水合物的水含量的测定

通过对初始重量损失期间所蒸发的物质进行TGA联用IR分析来分析本发明的水合物试样。TGA曲线显示在100℃以下重量损失为3.2％，其可与化合物1硫酸盐的单水合物的3.1％理论重量损失相当。所蒸发物质的IR光谱与水的参考IR光谱一致。

分析1：对人类μ、人类δ和豚鼠κ阿片受体的放射配体结合分析

a.膜制备

使稳定转染有人类μ阿片或豚鼠κ受体cDNA的CHO-K1(中国仓鼠卵巢)细胞于培养基中于5％ CO₂、加湿恒温箱中37℃下生长，所述培养基由补充有10％ FBS、100单位/毫升青霉素(penicillin)-100μg/mL链霉素(streptomycin)和800μg/mL遗传霉素(Geneticin)的Ham′s-F12培养基组成。在膜放射配体结合分析中，使用[³H]-二丙诺啡([³H]-Diprenorphine)(比活性约50-55Ci/mmol)测定受体表达量(B_max分别为约2.0和约0.414pmol/mg蛋白质)。

使细胞生长至80％-95％铺满(小于25代继代培养)。对于细胞系继代而言，将细胞单层在室温下培育5分钟并通过在补充有5mM EDTA的10mL PBS中机械搅动来收集。再悬浮之后，将细胞转移至40mL新鲜生长培养基中以在1000rpm下离心5分钟并且以适当分流比(split ratio)将其再悬浮于新鲜生长培养基中。

对于膜制备而言，通过以于PBS中的5mM EDTA温和机械搅动接着离心(2500g持续5分钟)来收集细胞。将离心块再悬浮于pH 7.4的分析缓冲液(50mM 4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸N-(2-羟乙基)哌嗪-N′-(2-乙烷磺酸)(HEPES))中，并且在冰上以polytron破碎器均质化。将所得匀浆离心(1200g持续5分钟)，弃去离心块并将上清液离心(40,000g持续20分钟)。通过再悬浮于分析缓冲液中将离心块洗涤一次，接着再离心(40,000g持续20分钟)。将最终离心块再悬浮于分析缓冲液(等效1T-225烧瓶/1mL分析缓冲液)中。使用Bio-Rad Bradford蛋白质分析试剂盒测定蛋白质浓度，并且将膜以冷冻等分试样形式储存在-80℃直至需要为止。

从珀金埃尔默公司(Perkin Elmer)购得人类δ阿片受体(hDOP)膜。所报导的通过在[³H]-纳曲哚(Natrindole)放射配体结合分析中的饱和分析测定的这些膜的K_d和B_max分别为0.14nM(pK_d＝9.85)和2.2pmol/mg蛋白质。使用Bio-Rad Bradford蛋白质分析试剂盒测定蛋白质浓度。将膜以冷冻等分试样形式储存在-80℃直至需要为止。

b.放射配体结合分析

在爱思进(Axygen)1.1mL深度孔的96孔聚丙烯分析板中，在200μL的总分析体积中进行放射配体结合分析，所述总分析体积含有在补充有0.025％牛血清白蛋白(BSA)的分析缓冲液中适当量的膜蛋白(对于μ、δ和κ分别为约3、约2和约20μg)。使用在0.001nM-5nM范围内的8-12个不同浓度的[³H]-二丙诺啡进行用于测定放射配体K_d值的饱和结合研究。用对于μ、δ和κ分别为0.5nM、1.2nM和0.7nM的[³H]-二丙诺啡和在10pM-100μM范围内的11个浓度的化合物进行用于测定化合物pKi值的置换分析。

通过用格兰帕德普里森(GraphPad Prism)软件包(加利福尼亚州圣地亚哥市格兰帕德软件公司(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA))，使用单个位点竞争的3参数模型进行非线性回归分析来分析结合数据。如在10μM纳洛酮(naloxone)存在下测定，将曲线最小值确定为非特异性结合的值。使用程-普方程式(Cheng-Prusoff equation)(K_i＝IC₅₀/(1+([L]/K_d)，其中[L]＝[³H]-二丙诺啡的浓度)，在普里森(Prism)中从最佳拟合IC₅₀值和放射配体的K_d值计算测试化合物的K_i值。将结果表示为K_i值的负的以10为底数的对数，pK_i。

在这些分析中具有较高pK_i值的测试化合物对μ、δ或κ阿片受体具有较高的结合亲和力。化合物1的硫酸盐显示对人类μ阿片受体9.9的pK_i值。

分析2：由表达人类μ阿片受体的CHO-K1细胞制备的膜中促效剂介导的μ阿片受体的活化

在此分析中，通过测量在由表达人类μ阿片受体的CHO-K1细胞制备的膜中受体活化之后所存在的结合GTP-Eu的量来测定测试化合物的效能和固有活性值。

a.μ阿片受体膜制备：

人类μ阿片受体(hMOP)膜如上所述来制备或从珀金埃尔默公司购得。所报导的通过在[³H]-二丙诺啡放射配体结合分析中的饱和分析测定的所购膜的pK_d和B_max分别为10.06和2.4pmol/mg蛋白质。使用Bio-Rad Bradford蛋白质分析试剂盒测定蛋白质浓度。将膜以冷冻等分试样形式储存在-80℃直至需要为止。将冻干GTP-Eu和GDP于重蒸馏水中分别稀释至10μM和2mM，接着混合并且在室温下放置30分钟，随后将其转移至个别等分试样中以储存在-20℃。

b.人类μGTP-Eu核苷酸交换分析

使用AcroWell 96孔滤板中的DELPHIA GTP结合试剂盒(珀金埃尔默公司)根据制造商说明书进行GTP-Eu核苷酸交换分析。如上所述来制备膜，并且在开始分析之前，将等分试样于分析缓冲液中(50mM HEPES，pH 7.4在25℃下)稀释至200μg/mL的浓度，接着使用Polytron均质机均质化10秒钟。得到呈DMSO中10mM储备溶液形式的测试化合物，将其于含有0.1％ BSA的分析缓冲液中稀释至400μM，并接着制成连续(1∶5)稀释液以产生在40pM至80μM范围内的十个浓度的化合物，分别将GDP和GTP-Eu于分析缓冲液中稀释至4μM和40nM。在含有稀释于10mM MgCl₂、50mMNaCl和0.0125％ BSA(最终分析浓度)中的5μg膜蛋白、在10pM-20μM范围内的测试化合物、1μM GDP和10nM GTP-Eu的100μL总体积中进行分析。在每个板上包括DAMGO(Tyr-D-Ala-Gly-(甲基)Phe-Gly-ol)浓度-反应曲线(在12.8pM-1μM的范围内)。

在分析之前，在添加25μL分析缓冲液、25μL测试化合物和25μL GDP和GTP-Eu之后，立即制备分析板。通过添加25μL膜蛋白起始分析并使其培育30分钟。接着将分析板以与调节至10-12英寸Hg的室内真空相连的Waters真空歧管过滤并且以室温GTP洗涤溶液(2×300mL)洗涤。吸干板的底部以去除过量液体。接着立即读取板以通过测量在帕卡德酶标仪(Packard Fusion Plate ReaderVehicle)上的时间分辨荧光(TRF)来测定结合GTP-Eu的量：DMSO不超过1％最终分析浓度。

结合GTP-Eu的量与μ阿片受体由测试化合物的活化程度成比例。表示为百分比的固有活性(IA)按所观察的由测试化合物活化的结合GTP-Eu的量与所观察的由DAMGO活化的量(其假定为完全促效剂(IA＝100))的比率来测定。在此分析中，化合物1的硫酸盐显示-5的固有活性。由此，已显示本发明的硫酸盐为拮抗剂。

分析3：活体内功效的大鼠模型

在此分析中，在胃肠通过(gastrointestinal transit)模型(其评估周边活性)中评估测试化合物的功效。此研究由治疗先锋公司(Theravance，Inc.)的实验动物管理和使用委员会(Institutional Animal Care and Use Committee)批准并且符合由美国国家科学院(National Academy of Sciences)公布的实验动物管理和使用指南(Guide for the Care andUse of Laboratory Animals)(

1996)。

a.大鼠胃排空分析

在大鼠胃排空分析中评估测试化合物以测定其逆转洛哌丁胺(loperamide)诱导的延迟胃排空的能力。使大鼠禁食过夜，随后通过静脉内、皮下、肌肉内或经口投药途径以在0.001毫克/公斤至约30毫克/公斤(mg/kg)范围内的剂量投与测试化合物或媒剂。投与测试化合物之后皮下投与1mg/kg剂量的洛哌丁胺或媒剂。投与洛哌丁胺或媒剂五分钟后，经口管饲投与无营养、不可吸收的炭粗粉并允许动物自由获取水持续实验的六十分钟时间。接着经由二氧化碳窒息对动物施以安乐死，接着进行开胸术并小心地切除胃。将胃在下食道***和幽门***处结扎以防止在组织摘除期间的额外排空。接着在去除结扎之后测定胃重量。

b.数据分析和结果

使用格兰帕德普里森软件包(加利福尼亚州圣地亚哥市格兰帕德软件公司)分析数据。通过使用S形剂量反应(可变斜率)模型的非线性回归分析来构建百分比逆转曲线并计算最佳拟合ID₅₀值。将曲线最小值和最大值分别确定为洛哌丁胺对照值(指示0％逆转)和媒剂对照物(指示100％逆转)。将结果表示为ID₅₀，即50％逆转洛哌丁胺作用所需的剂量，单位为毫克/公斤。经口投与的化合物1的硫酸盐在胃排空模型中显示0.26mg/kg的ID₅₀值。

尽管本发明已参考其特定实施例加以描述，但所属领域技术人员应了解，在不脱离本发明的真正精神和范围的情况下可作出各种改变并且可用等效物替代。此外，可作出许多修改以使特定情况、材料、物质组合、方法、单个方法步骤或多个方法步骤适用于本发明的目标、精神和范围。所有这些修改希望在本文随附权利要求书的范围内。此外，上文引用的所有公开案、专利和专利文件均以全文引用的方式并入本文中，其引用程度就如同以引用的方式个别地并入一般。

Claims

1.一种结晶盐，其为3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的硫酸盐，其中所述结晶盐由峰位置大体上与图1中所示的图的峰位置一致的x射线粉末衍射图来表征。

2.根据权利要求1所述的结晶盐，其中所述结晶盐由以10℃/分钟的加热速率记录的差示扫描量热曲线来表征，所述曲线显示在约190℃与约205℃之间的温度下吸热热流的最大值。

3.根据权利要求1所述的结晶盐，其中所述结晶盐由大体上与图2中所示的曲线一致的差示扫描量热曲线来表征。

4.一种结晶盐，其为3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的硫酸盐的水合物，其中所述结晶盐由峰位置大体上与图4中所示的图的峰位置一致的x射线粉末衍射图来表征。

5.根据权利要求4所述的结晶盐，其中所述结晶盐由大体上与图5中所示的曲线一致的差示扫描量热曲线来表征。

6.一种医药组合物，其包含医药上可接受的载剂和根据权利要求1至5中任一权利要求所述的结晶盐。

7.一种制备如权利要求1所述的3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的结晶硫酸盐的方法，所述方法包含：

(a)使羟基经保护的经保护3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺前驱体与硫酸接触以形成第一反应混合物；

(b)从所述第一反应混合物分离3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的中间体级固体硫酸盐；

(c)将所述中间体级固体硫酸盐分散于包含甲醇的稀释剂中以形成第二反应混合物；和

(d)从所述第二反应混合物分离所述结晶硫酸盐。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述经保护的前驱体为(S)-2，2-二甲基-[1，3]二氧戊环-4-甲酸{2-[3-(3-氨甲酰基-苯基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]乙基}环己基甲基-酰胺。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述包含甲醇的稀释剂另外包含至多约25％的水。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述包含甲醇的稀释剂包含约5％与约15％之间的水。

11.一种制备如权利要求1所述的3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的结晶硫酸盐的方法，所述方法包含：

(a)使3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺与硫酸接触以形成反应混合物；和

(b)从所述反应混合物分离所述结晶硫酸盐。

12.一种制备如权利要求1所述的3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的结晶硫酸盐的方法，所述方法包含：

(a)将3-内型-(8-{2-[环己基甲基-((S)-2，3-二羟基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)苄酰胺的硫酸盐的结晶水合物分散于包含甲醇的稀释剂中以形成反应混合物；和

(b)从所述反应混合物分离所述结晶硫酸盐。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述包含甲醇的稀释剂另外包含至多25％的水。

14.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的结晶盐，其用于疗法中。

15.一种根据权利要求1至5中任一权利要求所述的结晶盐的用途，其用于制造治疗哺乳动物疾病或医学病况的药物，所述疾病或医学病况通过用μ阿片受体拮抗剂治疗可得到改善。

16.根据权利要求15所述的用途，其中所述疾病或病况为阿片诱导的肠功能紊乱或术后肠梗阻。