CN101502546B - 人参(根)寡糖制备,及其新用途 - Google Patents

Abstract

经大孔树脂柱，中空纤维柱超滤及活性炭柱吸附纯化等技术，从人参根中提取分离得到人参混合寡糖，并证明人参混合寡糖具有抗老年痴呆、镇痛和抗胃溃疡的新用途。

Description

人参(根)寡糖制备,及其新用途

技术领域

本发明涉及由人参(根)中提取分离得到的人参寡糖，即聚合度由2-15个单糖组成的人参混合寡糖，在作为抗老年痴呆药、镇痛药，抗胃溃疡药方面的应用 

背景技术：

人参为五加科植物人参(Panax ginsengC.A.Meyer)的干燥根。从古自今作为名贵药材，由于其独特的医疗保健作用，一直深受人们的重视，为了更有效地开发利用这种珍贵药材，多年来，国内外在多学科多领域中对人参化学成分及活性方面进行了大量的研究工作，从中分离出的主要成分有皂苷类、多糖类、多肽类、脂肪酸类、氨基酸类、挥发油等，其中的人参皂苷和人参多糖类成分在生物活性方面研究的最为广泛。长期以来，由于人们对寡糖的功能所知甚少，所以对人参(根)寡糖的分离及生物活性等方面研究极为有限。 

近年来，国内外对功能性寡糖的研究十分活跃，其主要生理功能体现在1)促进双歧杆菌增殖，抑制肠道病原菌的生长繁殖；2)减少有毒发酵产物及有害细菌酶的作用；3)预防、治疗便秘、腹泻；4)清除有害物质，保护肝脏功能；5)降低血清胆固醇和血压；6)增强免疫功能，具有防癌抗癌作用；7)抗衰老作用；8)促进双歧杆菌生成维生素等营养物质；9)预防和治疗癫痫病；10)具有水溶性膳食纤维的功能；11)促进Ca²⁺的吸收；12)抑制癌症发生；13)神经***疾病的治疗。可见，寡糖产品在食品、保健、医药、化工等领域均 显出广阔的开发前景，此类化合物为开发新药和保健品拓宽了空间。 

发明内容

本发明提供了一种从人参(根)中提取分离人参混合寡糖的制备工艺，以及该工艺生产的产品作为抗老年痴呆药、镇痛药，抗胃溃疡药。 

为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案： 

1.制备人参混合物寡糖将人参(根)粉碎，加10-15倍量的水，煎煮3小时，反复煎煮2次，滤液合并，浓缩至1克药材/毫升，过大孔树脂D₁₀₁水洗至洗脱体积为上柱前的2倍量，水洗脱液通过中空纤维柱(截留分子量3000)超滤，超滤外液浓缩，浓缩液(1克药材/毫升)上活性炭柱经乙醇分级洗脱，收集30％乙醇洗脱部分，浓缩，真空干燥，得人参混合寡糖。 

2.人参混合物寡糖结构的验证为确定人参混合物寡糖中各单体寡糖的结构，我们利用光谱数据验证上述工艺生产的产品为人参混合寡糖，由2-7糖组成，分析结果如下： 

①理化性质结果 

总糖含量的测定采用苯酚-硫酸法，葡萄糖作为对照品，制作标准曲线，结果表明，人参混合寡糖中的总糖含量为78％。 

酸性糖含量的测定采用间-羟基联苯法，半乳糖醛酸作为对照品，制作标准曲线，结果表明，人参混合寡糖中的酸性糖含量为12.9％ 

蛋白质含量的测定采用Lowry法，牛血清白蛋白作为对照品，制作标准曲线，结果表明，人参混合寡糖中的蛋白含量为6.8％。 

②.分子量分布采用HPLC，示差检测器，OHpak SB-802.5 HQ凝胶柱，不同分子量的Dextru作为对照品，制作标准曲线，结果表明，人参混合寡糖分子量主要分布在3000-300之间。 

③.组成糖分析采用糖醇乙酰化法将人参混合寡糖制备成衍生物，以各单糖的衍生物作为对照品，GC结果表明，人参混合寡糖由鼠李糖、***糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸组成。 

④.甲基化结果分析采用Hakomori法，GC-MS结果表明，人参混合寡糖的糖苷键连接方式，主要以1-4，1-6连接为主链。 

⑤.ESI-MS对人参寡糖进行质谱分析，通过碎片峰可以推断的人参混合寡糖是由2-7个单糖组成。受条件的限制，分子量更大的寡糖尚不能用该方法。 

权利要求 

1.对从人参(根)中提取分离人参混合寡糖的制备工艺2.对该工艺生产的产品作为抗老年痴呆药物3.对该工艺生产的产品作为镇痛药物4.对该工艺生产的产品作为抗胃溃疡药物均给以保护。 

实施方案 

1.人参混合寡糖是通过以下两种提取方法获得的： 

方法1取人参根5Kg，粉碎成粗粉，加10倍量的水，煎煮3小时，反复2次，滤液浓缩至5000毫升，过大孔树脂D₁₀₁柱，水洗脱至10000毫升，水洗脱液超滤(中空纤维柱，截留分子量3000)，超滤液浓缩，干燥，即得人参混合物寡糖75g。 

方法2取人参根5Kg，粉碎成粗粉，加15倍量的水，煎煮3小时，反复2次，滤液浓缩至5000毫升，过大孔树脂D₁₀₁柱，水洗脱至10000毫升，水洗脱液浓缩至1000毫升，加乙醇至醇浓度60-80％，醇溶液回收乙醇，浓缩，干燥，即得人参混合物寡糖67g。 

2.人参混合寡糖的活性试验及结果 

(1)人参混合寡糖抗衰老试验 

受试药对东莨菪碱所致小鼠记忆障碍的影响 

分组及给药 

正常对照组        水20ml/kg 

模型组            水20ml/kg 

阳性药组          比拉西坦700mg/kg 

人参混合寡糖      400mg/kg 

取昆明种小鼠40只，随机分为4组，分别为空白对照组、模型组、阳性药比拉西坦和给药组，除正常对照组和模型组给药与等体积的水外，各组小鼠每天固定时段灌胃给药一次，连续6d，给药前3d各组正常进行水迷宫的4个象线定位航行训练，第4d，5d，6d给药后30min进行测试，除正常对照组腹腔注射生理盐水10ml/kg，其余各组小鼠均在训练前腹腔注射东莨菪碱2mg/kg，观察记录小鼠在120秒内找到平台所用的时间(逃避潜伏期)，共四个象线，取平均值。第7d进行空间探索试验，撤除平台，使小鼠在无平台情况下寻找记忆中的平台，游泳120s，记录小鼠跨平台次数。在整个测试过程中，水池周围参照物包括试验者本身位置不变，结果如下： 

受试药对东莨菪碱所致小鼠记忆障碍的结果(x±s，n＝10) 

组别	给药后第  4d  (逃避潜伏  期)(秒)	给药后第5  (逃避潜伏  期)(秒)	给药后第6d  (逃避潜伏  期)(秒)	穿越平台的次  数
					正常对照  组	70.7688±  10.10787	74.3383±  11.11422	77.4289±  8.11770	2.0500±  0.22298
模型组	95.9607±  8.15643	96.6482±  10.0276	102.37±  5.16331	1.8750±  0.35038
					阳性药组	86.3474±  9.71912	92.8394±  7.58107	87.2650±  6.77475	2.2750±  0.64706
给药组	76.6669±  8.67879	90.0024±  9.05353	76.7582±  9.44077	1.9250±  0.42500

结果表明，与模型组比较，阳性药组效果显著，给药组与模型组比较在给药第4天逃避潜伏期明显缩短，穿越平台次数增加，第5，6天比较平稳。p＜0.01。 

(2)人参混合寡糖镇痛试验 

受体药对小鼠醋酸扭体的影响 

分组及给药 

模型组          20ml/kg(溶剂) 

人参混合寡糖    400mg/kg 

取昆明种小鼠20只，随机分为2组，分别为模型组、给药组，各组小鼠每天固定时段灌胃给药一次，模型组给与等体积的溶剂，连续7d。末次给药1小时候后，每只小鼠腹腔注射0.6％的醋酸，观察小鼠20分钟内的扭体次数，结果如下：

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
											一组  20分  钟内  扭体  次数	23	8	18	7	12	7	8	16	*	14
二组  20分  钟内  扭体  次数	4	8	4	13	2	10	6	7	18	3

均值±标准误差：一组为12.556±1.886；二组7.500±1.579。结果表明，给药组小鼠20min内扭体的次数明显少于模型组，p＜0.05. 

(3)人参混合物寡糖抗溃疡试验 

对大鼠应激型溃疡的影响 

将大鼠随机分组，首次灌胃(po)给药后即禁食，次日再给药一次，共2次。末次给药后1h，将大鼠头朝下，四肢绑于木架上。16h后，处死动物，剖腹，结扎幽门，取出全胃，注入10ml生理盐水，结扎贲门。然后将全胃浸泡于1％甲醛溶液中固定。沿胃小弯剪开胃，平展于玻璃板上。按文献方法评定溃疡等级。统计表明，人参混合物寡糖对大鼠应激型溃疡均有明显抑制作用，结果如下。 

人参混合寡糖对大鼠应激型溃疡的作用 

Claims (3)

1.一种人参混合寡糖，其特征在于由下述方法制备：将人参根粉碎，加10-15倍量的水煎煮2次，每次煎煮3小时，过滤，滤液合并，浓缩至1克药材/毫升，过D₁₀₁大孔树脂，用水洗脱2倍量柱体积，水洗脱液通过截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，超滤液浓缩至1克药材/毫升，上活性炭柱经乙醇分级洗脱，收集30％乙醇洗脱部分，浓缩，真空干燥，得人参混合寡糖。

2.根据权利要求1所述的人参混合寡糖，其特证是：(a)人参混合寡糖中的总糖含量为78％，酸性糖含量为12.9％，蛋白质6.8％；

(b)人参混合寡糖分子量主要分布在3000-300之间；(c)人参混合寡糖由鼠李糖、***糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸组成；(d)人参混合寡糖是由2-7糖组成混合寡糖。

3.根据权利要求2所述的人参混合寡糖在制备抗老年痴呆、镇痛和抗胃溃疡药物中的用途。