CN101500610A - 抗肥胖药及其利用 - Google Patents

Abstract

本发明的课题在于提供新型的抗肥胖药及使用其的治疗方法。提供含有GABA_B受体激动剂或其在药理学上可接受的盐作为有效成分的抗肥胖药。

Description

抗肥胖药及其利用

技术领域

本发明涉及抗肥胖药及肥胖的治疗方法等。

背景技术

1994年鉴定出了肥胖和糖尿病的模型动物ob/ob小鼠的致病基因，由此表明，瘦素缺陷是肥胖和糖尿病的病因(非专利文献1)。由脂肪细胞分泌的瘦素作用于作为摄食调节的初级中枢的下丘脑弓状核，抑制在弓状核表达的摄食亢进肽neuropeptide Y(NPY)的表达，并且增强作为摄食抑制肽的α-MSH前体proopiomelanocortin(POMC)的表达，由此向负方向调节能量平衡(非专利文献2、3)。但是，通常肥胖者的血中瘦素浓度高，对肥胖者施用瘦素并未见充分的抗肥胖作用(非专利文献4、5)。这种结果启示，瘦素抗性、即瘦素信号障碍可能是肥胖发病的原因。

作为目前临床应用的主要的抗肥胖药，有脑内去甲肾上腺素的重吸收抑制剂马吲哚、脑内去甲肾上腺素/5-羟色胺的重吸收抑制剂***、***素受体1的选择性拮抗剂利莫那班(Rimonabant)等，任一药物均不具有抑制NPY或增强POMC的作用。另一方面，启示了神经营养因子ciliary neurotrophic factor(CNTF)通过与瘦素相同的信号转导***表现出抗肥胖作用，目前临床应用正在不断发展，但在施用了CNTF的患者中产生抗CNTF的抗体成为了问题(非专利文献6)。

非专利文献1：Zhang.Y.et al.Nature.1994.372：425-432.

非专利文献2：Stephens，T.W.et al.Nature.1995.377：530-532.

非专利文献3：Schwartz，M.W.et al.Diabetes.1997.46：2119-2123.

非专利文献4：Considine，R.V.et al.The New England Journal ofMedicine.1996.334：292-295.

非专利文献5：Heymsfield，S.B.et al.JAMA.1999.282：1568-1575.

非专利文献6：Korner，J.et al.The Journal of ClinicalEndocrinology & Metabolism.2004.89：2616-2621.

非专利文献7：Sato，I.et al.The Journal of Neuroscience.2005.25：8657-8664.

非专利文献8：Niswender，K.D.et al.Frontiers inNeuroendocrinology.2003.24：1-10.

发明内容

期望发现代替瘦素、通过作用于弓状核中的NPY神经元和POMC神经元而发挥抗肥胖效果的药物。本发明的课题在于，实现这种期望，即提供新型抗肥胖药及使用其的治疗方法等。

本发明人等在使用下丘脑器官培养的研究中阐明了，摄食抑制激素胰岛素通过GABA神经元抑制弓状核的NPY表达(非专利文献7)。得到该见解后，本发明人等着眼于确认在下丘脑中胰岛素和瘦素的信号转导***中存在串话(非专利文献8)，从而认为下丘脑弓状核中的GABA***的活化可能会增强瘦素受体下游的信号。瘦素信号的增强与抗肥胖效果的发挥相关。在这种考虑下，本发明人等为了发现通过作用于NPY神经元及POMC神经元而发挥抗肥胖效果的药物进行了深入研究。首先，着眼于GABA_B受体，建立了GABA_B受体激动剂通过增强瘦素信号发挥抗肥胖效果的假说。然后，构建将作为GABA_B受体激动剂代表的巴氯芬施用于肥胖模型动物(瘦素受体缺陷模型db/db小鼠)的实验***，尝试验证该假说。其结果是，在巴氯芬给药组中可见显著的摄食抑制和体重增加抑制，同时可见显著的血中瘦素浓度和血中脂联素浓度的增加(具体参照后述实施例)。而且，在巴氯芬给药组的下丘脑弓状核中可见NPY mRNA的表达抑制及POMC mRNA的表达增强，启示了巴氯芬通过对弓状核的NPY神经元及POMC神经元的作用而发挥抗肥胖效果。该结果证明巴氯芬作为抗肥胖药有效，另一方面表明，并不限于巴氯芬，与巴氯芬同样地能够增强GABA_B受体介导的信号转导的物质、即其他的GABA_B受体激动剂也有望作为抗肥胖药的候补。

而且，在更接近人的肥胖模型动物、通过施与高脂肪饮食而诱导的饮食性肥胖小鼠(diet-induced obese mice：DIO小鼠)中，巴氯芬的施用也表现出了摄食抑制效果和体重增加抑制效果，抑制了下丘脑弓状核中的NPY mRNA的表达，并且增强了POMC mRNA的表达。而且，在DIO小鼠中，施用其他的GABA_B受体激动剂3-氨基丙基(甲基)次膦酸(3-aminopropyl(methyl)phosphinic acid)和3-氨基丙基膦酸(3-aminopropylphosphonic acid)后表现出与巴氯芬相同的抗肥胖效果。

但是，巴氯芬中存在R构型(R-对映异构体)和S构型(S-对映异构体)，进一步研究的结果确定，前者具有特别强的抗肥胖效果。

本发明主要基于上述见解完成，本发明的第一方面提供以下的抗肥胖药。

[1]一种抗肥胖药，含有GABA_B受体激动剂或其在药理学上可接受的盐作为有效成分。

[2]如[1]所述的抗肥胖药，其中，所述GABA_B受体激动剂为巴氯芬。

[3]如[2]所述的抗肥胖药，其中，所述巴氯芬为R构型。

[4]如[1]～[3]中任一项所述的抗肥胖药，作用于下丘脑弓状核中的NPY神经元和POMC神经元而发挥抗肥胖效果。

[5]如[1]～[3]中任一项所述的抗肥胖药，对由瘦素抗性引起的肥胖或伴随瘦素抗性的肥胖发挥抗肥胖效果。

本发明还涉及以下所示的GABA_B受体激动剂或其在药理学上可接受的盐的应用。

[6]GABA_B受体激动剂或其在药理学上可接受的盐在制造抗肥胖药中的应用。

[7]如[6]所述的应用，其中，所述GABA_B受体激动剂为巴氯芬。

[8]如[7]所述的应用，其中，所述巴氯芬为R构型。

本发明还提供以下所示的肥胖的治疗方法。

[9]一种肥胖的治疗方法，包括对需要治疗肥胖的对象施用治疗上有效量的GABA_B受体激动剂或其在药理学上可接受的盐。

[10]如[9]所述的治疗方法，其中，所述GABA_B受体激动剂为巴氯芬。

[11]如[10]所述的治疗方法，其中，所述巴氯芬为R构型。

附图说明

图1是表示巴氯芬连续给药对db/db小鼠及db/+m小鼠的作用的图(C：对照组、L：巴氯芬外消旋混合物低浓度给药组、H：巴氯芬外消旋混合物高浓度给药组、S：S-巴氯芬给药组、R：R-巴氯芬给药组、db/db：db/db小鼠、db/+m：db/+m小鼠。#：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物低浓度给药组、或对照组比S-巴氯芬给药组。^＊：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物高浓度给药组、或对照组比R-巴氯芬给药组)。a，d：表示巴氯芬外消旋混合物对db/db小鼠作用的图(a：累积摄食量、d：体重增加量)。连续给药巴氯芬外消旋混合物5周在从给药开始1周起，显著抑制了累积摄食量(a)及体重增加量(d)，显著抑制一直持续到实验结束时。b，e：表示R-巴氯芬及S-巴氯芬对db/db小鼠的作用的图(b：累积摄食量、e：体重增加量)。连续给药R-巴氯芬5周在从给药开始2周起，显著抑制了累积摄食量(b)及体重增加量(e)，显著抑制一直持续到实验结束时。另一方面，对于S-巴氯芬的5周连续给药而言，给药开始4周对累积摄食量(b)及体重增加量(e)没有显著影响，但在给药开始5周中，显著抑制了累积摄食量(b)及体重增加量(e)。c，f：表示巴氯芬外消旋混合物对db/+m小鼠的作用的图(c：累积摄食量、f：体重增加量)。连续给药巴氯芬外消旋混合物5周没有显著影响给药期间的累积摄食量(c)及体重增加量(f)。g：由巴氯芬的施用引起的体温变化的db/db小鼠与db/+m小鼠的比较。巴氯芬的施用在db/db小鼠中显著使体温上升，但对db/+m小鼠的体温没有显著影响。h：db/db小鼠的褐色脂肪组织中的UCP1mRNA表达量的比较。巴氯芬的施用显著增强了UCP1mRNA的表达。i：db/db小鼠的空腹时血糖值的比较。巴氯芬的施用显著使空腹时血糖值降低。j：db/db小鼠的空腹时血中胰岛素浓度的比较。巴氯芬的施用对空腹时血中胰岛素浓度没有显著影响。k：db/db小鼠的HbAlc值的比较。巴氯芬的施用使HbAlc值显著减少。l：db/db小鼠的血中脂联素浓度的比较。巴氯芬的施用使血中脂联素浓度显著增加。m：db/db小鼠的血中瘦素浓度的比较。巴氯芬的施用使血中瘦素浓度显著增加。

图2是表示施用巴氯芬5周后的db/db小鼠的累积摄食量与体重增加量的图。(C：对照组、L：巴氯芬外消旋混合物低浓度给药组、H：巴氯芬外消旋混合物高浓度给药组。#：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物低浓度给药组。^＊：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物高浓度给药组)。a：db/db小鼠中施用巴氯芬外消旋混合物5周后的对照组与巴氯芬给药组的5周中的累积摄食量的比较。由于施用巴氯芬，5周中的累积摄食量显著减少。b：db/db小鼠中施用巴氯芬外消旋混合物5周后的对照组与巴氯芬给药组的5周中的体重增加量的比较。由于施用巴氯芬，5周中的体重增加量显著减少。

图3是表示db/db小鼠中巴氯芬连续给药对脂肪组织及下丘脑弓状核中的NPY和POMC表达的影响的图(C：对照组、L：巴氯芬外消旋混合物低浓度给药组、H：巴氯芬外消旋混合物高浓度给药组。#，P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物低浓度给药组。^＊：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物高浓度给药组)。a：附睾周围白色脂肪组织的重量的比较。巴氯芬的施用使附睾周围白色脂肪组织的重量显著减少。b：皮下白色脂肪组织的重量的比较。巴氯芬的施用对皮下白色脂肪组织的重量没有显著影响。c：附睾周围白色脂肪组织的H-E染色图像(比例尺表示100μm)。与对照组(左)相比，可见巴氯芬给药组(右)中脂肪细胞的小型化。d：H-E染色图像中的脂肪尺寸的比较(从上依次为对照组、巴氯芬低浓度给药组、巴氯芬高浓度给药组)。与对照组相比，在巴氯芬低浓度给药组及巴氯芬高浓度给药组中可见脂肪细胞尺寸的减小。e：代表性的原位杂交照片。上左：对照组中NPY mRNA的表达、上右：巴氯芬给药组中NPY mRNA的表达、下左：对照组中POMC mRNA的表达、下右：巴氯芬给药组中POMC mRNA的表达。f：NPY mRNA表达量的比较。巴氯芬给药组中可见显著的NPY mRNA表达的抑制。g：POMC mRNA表达量的比较。巴氯芬给药组中可见显著的POMCmRNA表达的增加。

图4是表示连续给药GABA_B受体激动剂、即巴氯芬外消旋混合物或3-氨基丙基(甲基)次膦酸(SKF97541)或3-氨基丙基膦酸(3-APPA)对给予高脂肪饮食的肥胖小鼠(DIO小鼠)及给予普通饮食的非肥胖小鼠(lean小鼠)的作用的图(Cont：对照组、Bac：巴氯芬外消旋混合物给药组、3-APPA：3-APPA给药组、SKF97541：SKF97541给药组、DIO：DIO小鼠、lean：lean小鼠、^＊：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物给药组、或对照组比SKF97541给药组。#：P<0.05对照组比3-APPA给药组)。a，b：表示巴氯芬外消旋混合物对DIO小鼠的作用的图(a：累积摄食量、b：体重增加量)。连续给药巴氯芬外消旋混合物5周从给药开始1周起，显著抑制了累积摄食量(a)及体重增加量(b)，显著抑制一直持续到实验结束时。c，d：表示巴氯芬外消旋混合物对lean小鼠的作用的图(c：累积摄食量、d：体重增加量)。连续给药巴氯芬外消旋混合物5周对给药期间的lean小鼠的累积摄食量(c)和体重增加量(d)没有显著影响。e，f：表示SKF97541和3-APPA对DIO小鼠的作用的图(e：累积摄食量、f：体重增加量)。连续给药SKF97541和3-APPA 5周从给药开始1周起，显著抑制了累积摄食量(e)及体重增加量(f)，显著抑制一直持续到实验结束时。g，h：表示SKF97541和3-APPA对lean小鼠的作用的图(g：累积摄食量、h：体重增加量)。连续给药SKF97541和3-APPA5周对给药期间的lean小鼠的累积摄食量(g)和体重增加量(h)没有显著影响。

图5是表示连续给药GABA_B受体激动剂、即巴氯芬外消旋混合物、SKF97541或3-APPA5周后的DIO小鼠的累积摄食量及体重增加量的图(Cont：对照组、Bac：巴氯芬外消旋混合物给药组、SKF：SKF97541给药组、3-APPA：3-APPA给药组。^＊：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物给药组、或SKF97541给药组、或3-APPA给药组)。a：对DIO小鼠连续给药GABA_B受体激动剂(巴氯芬外消旋混合物、SKF97541或3-APPA)5周后的5周中累积摄食量的比较。在巴氯芬外消旋混合物给药组、SKF97541给药组、3-APPA给药组中，与对照组相比均可见累积摄食量的显著减少。b：对DIO小鼠连续给药GABA_B受体激动剂(巴氯芬外消旋混合物、SKF97541或3-APPA)5周后的5周中体重增加量的比较。在巴氯芬外消旋混合物给药组、SKF97541给药组、3-APPA给药组中，与对照组相比均可见体重增加量的显著减少。

图6是表示连续给药GABA_B受体激动剂、即巴氯芬外消旋混合物、SKF97541或3-APPA 5周后的DIO小鼠禁食6小时后的空腹时血糖值的图(Cont：对照组、Bac：巴氯芬外消旋混合物给药组、SKF：SKF97541给药组、3-APPA：3-APPA给药组。^＊：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物给药组、或SKF97541给药组、或3-APPA给药组)。在巴氯芬外消旋混合物给药组、SKF97541给药组、3-APPA给药组中，与对照组相比均可见空腹时血糖值的显著降低。

图7是表示连续给药GABA_B受体激动剂、即巴氯芬外消旋混合物、SKF97541或3-APPA 5周后的DIO小鼠的HbAlc值的图(Cont：对照组、Bac：巴氯芬外消旋混合物给药组、SKF：SKF97541给药组、3-APPA：3-APPA给药组。^＊：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物给药组、或SKF97541给药组、或3-APPA给药组)。在巴氯芬外消旋混合物给药组、SKF97541给药组、3-APPA给药组中，与对照组相比均可见HbAlc值的显著降低。

图8是表示连续给药GABA_B受体激动剂、即巴氯芬外消旋混合物、SKF97541或3-APPA 5周后的DIO小鼠禁食6小时后的空腹时血中胰岛素浓度的图(Cont：对照组、Bac：巴氯芬外消旋混合物给药组、SKF：SKF97541给药组、3-APPA：3-APPA给药组。^＊：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物给药组、或SKF97541给药组、或3-APPA给药组)。在巴氯芬外消旋混合物给药组、SKF97541给药组、3-APPA给药组中，与对照组相比均可见空腹时血中胰岛素浓度的显著降低。

图9是连续给药巴氯芬外消旋混合物5周后的DIO小鼠的血浆瘦素浓度及血浆脂联素浓度的变化(Cont：对照组、Bac：巴氯芬外消旋混合物给药组。^＊：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物给药组)。a：巴氯芬外消旋混合物的施用使DIO小鼠的血浆瘦素浓度显著减少。b：巴氯芬外消旋混合物的施用使DIO小鼠的血浆脂联素浓度显著增加。

图10是表示连续给药巴氯芬外消旋混合物5周对DIO小鼠的白色脂肪组织的影响的图(Cont：对照组、Bac：巴氯芬外消旋混合物给药组。^＊：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物给药组)。a：巴氯芬外消旋混合物的施用使DIO小鼠的附睾周围白色脂肪组织的重量显著减少。b：巴氯芬外消旋混合物的施用使DIO小鼠的皮下白色脂肪组织的重量显著减少。c：附睾周围白色脂肪组织的H-E染色图像(比例尺表示100μm)。与对照组(左)相比，巴氯芬给药组(右)中可见脂肪细胞的小型化。

图11是表示连续给药巴氯芬外消旋混合物5周对DIO小鼠的下丘脑弓状核的NPY mRNA及POMC mRNA表达量的影响的图(Cont：对照组、Bac：巴氯芬外消旋混合物给药组。^＊：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物给药组)。a：NPY mRNA表达量的比较。巴氯芬外消旋混合物给药组中可见显著的NPY mRNA表达量的抑制。b：POMCmRNA表达量的比较。巴氯芬外消旋混合物给药组中可见显著的POMCmRNA表达量增加。c：代表性的原位杂交照片。上左：对照组中NPYmRNA的表达。上右：巴氯芬外消旋混合物给药组中NPY mRNA的表达。下左：对照组中POMC mRNA的表达。下右：巴氯芬外消旋混合物给药组中POMC mRNA的表达。

图12是表示连续给药巴氯芬外消旋混合物5周对DIO小鼠和db/db小鼠的产热和运动量的影响的图(Cont：对照组、Bac：巴氯芬外消旋混合物给药组。^＊：P<0.05对照组比巴氯芬外消旋混合物给药组)。a，d：由施用巴氯芬引起的体温变化的比较。对db/db小鼠(a)和DIO小鼠(d)施用巴氯芬外消旋混合物使体温显著上升。b，e：由施用巴氯芬引起的耗氧量的变化的比较。对db/db小鼠(b)和DIO小鼠(e)施用巴氯芬外消旋混合物使耗氧量显著增加。c，f：由施用巴氯芬引起的运动量的变化的比较。对db/db小鼠(c)和DIO小鼠(f)施用巴氯芬外消旋混合物对运动量没有显著影响。

图13是SKF97541与3-APPA的结构式。

图14是表示施用巴氯芬外消旋混合物对db/db小鼠的5周的累积摄食量(a)及体重增加量(b)的效果的图(Cont：对照组、4×10^-6M、10×10^-6M、40×10^-6M、100×10^-6M表示各巴氯芬给药组的饮用水中溶解的巴氯芬的浓度。^＊：P<0.05对照组比各巴氯芬外消旋混合物给药组)。在4×10^-6M～100×10^-6M的各浓度下，对db/db小鼠连续给药巴氯芬外消旋混合物5周显著抑制了累积摄食量(a)及体重增加量(b)。

图15是表示连续给药3-氨基丙基(甲基)次膦酸(SKF97541)或3-氨基丙基膦酸(3-APPA)对db/db小鼠及db/+m小鼠的作用的图(Cont：对照组、3-APPA：3-APPA给药组、SKF97541：SKF97541给药组、db/db：db/db小鼠、db/+m：db/+m小鼠、^＊：P<0.05对照组比SKF97541给药组。#：P<0.05对照组比3-APPA给药组)。a，b：表示SKF97541及3-APPA对db/db小鼠的作用的图(a：累积摄食量、b：体重增加量)。施用3-APPA从给药开始1周起、施用SKF97541从给药开始2周起显著抑制了累积摄食量(a)，并且显著抑制一直持续到实验结束时。而且，施用SKF97541和3-APPA从给药开始1周起显著抑制了体重增加量(b)，且显著抑制一直持续到实验结束时。c，d：表示SKF97541及3-APPA对db/+m小鼠的作用的图(c：累积摄食量、d：体重增加量)。连续给药SKF97541和3-APPA5周对给药期间的db/+m小鼠的累积摄食量(c)及体重增加量(d)没有显著影响。

具体实施方式

本发明的第一方面涉及抗肥胖药。本发明的抗肥胖药(以下也称作“本发明的药品”)含有GABA_B受体激动剂或其在药理学上可接受的盐作为有效成分。即，本发明中可以使用针对GABA_B受体的激动剂。作为GABA_B受体激动剂的例子，可以列举出巴氯芬(baclofen)、3-氨基丙基(甲基)次膦酸(3-aminopropyl-(methyl)phosphinic acid(SKF97541))、4-氨基-3-(5-氯-2-噻吩基)丁酸(4-amino-3-(5-chloro-2-thienyl)-butanoicacid)、3-氨基丙基膦酸(3-aminopropylphosphonic acid)等。GABA_B受体激动剂的优选一例为巴氯芬。即，本发明的一个优选方式提供了以巴氯芬或其在药理学上可接受的盐作为有效成分的抗肥胖药。巴氯芬(化学名：(RS)-4-Amino-3-(4-chlorophenyl)butanoic acid、分子式：C₁₀H₁₂ClNO₂、分子量：213.66)由以下的化学式表示。

巴氯芬中存在R构型(R-对映异构体)与S构型(S-对映异构体)。本发明中可以使用任何一种镜像异构体或两者的混合物(例如外消旋体)。如后述的实施例所示，本发明人等的研究结果表明，R构型比S构型发挥出更高的抗肥胖效果。基于该见解，本发明的优选方式中使用R构型的巴氯芬。另外，巴氯芬可以通过例如美国专利3,471,548号中记载的方法进行制备。作为以巴氯芬为有效成分的药品，有Lioresal(注册商标、诺华制药有限公司)及Gabalon(注册商标、第一制药株式会社)出售。而且，作为R构型的巴氯芬，市售有例如R(+)-Baclofen hydrochloride(目录编号G013、CAS Number 63701-55-3、西格玛公司)、作为S构型的巴氯芬，市售有S(-)-Baclofen hydrochloride(目录编号G014、CASNumber 63701-56-4、西格玛公司)。

作为本发明的药品的有效成分，可以使用GABA_B受体激动剂的药理学上可接受的盐。作为“药理学上可接受的盐”，例如可以有酸加成盐、金属盐、铵盐、有机胺加成盐或氨基酸加成盐。作为酸加成盐的例子，可以列举出盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、溴化氢酸盐等无机酸盐、醋酸盐、马来酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、苹果酸盐、草酸盐、甲磺酸盐、酒石酸盐等有机酸盐。作为金属盐的例子，可以列举出钠盐、钾盐、锂盐等碱金属盐、镁盐、钙盐等碱土类金属盐、铝盐、锌盐。作为铵盐的例子，可以列举出铵、四甲基铵等的盐。作为有机胺加成盐，可以列举出吗啉加成盐、哌啶加成盐。作为氨基酸加成盐的例子，可以列举出甘氨酸加成盐、苯丙氨酸加成盐、赖氨酸加成盐、天冬氨酸加成盐、谷氨酸加成盐。

本发明的药品可用于肥胖的治疗或预防。本发明人等如后述实施例所示，通过使用动物个体的实验阐明了GABA_B受体激动剂兼具抑制NPY mRNA表达的作用和增强POMC mRNA表达的作用。由该见解推出，以GABA_B受体激动剂(或其药理学上可接受的盐)作为有效成分的本发明的药品通过作用于下丘脑弓状核中的NPY神经元及POMC神经元来发挥抗肥胖效果。通过本发明的药品，代替瘦素起到由NPY神经元及POMC神经元介导的信号转导的增强作用。由此，可以说本发明的药品对由瘦素抗性引起的肥胖或伴随瘦素抗性的肥胖特别有效。

这里，“肥胖”一般来说是指体内脂肪组织过度蓄积的状态。本说明书中用语“肥胖”为广义解释，其概念中包含肥胖症。“肥胖症”是指具有或预测将来会具有由肥胖引起或相关的健康障碍(合并症)的情况，医学上认为必须减轻体重的病态。

肥胖的判定方法中有例如国际上广泛使用的以BMI(body massindex)作为标准的方法。BMI为体重(kg)除以身高(m)的平方的数值(BMI＝体重(kg)/身高(m)²)。判定BMI<18.5为轻体重(underweight)、18.5≤BMI<25为普通体重(normal range)、25≤BMI<30为1度肥胖(preobese)、30≤BMI<35为2度肥胖(obese class I)、35≤BMI<40为3度肥胖(obese class II)、40<BMI为4度肥胖(obese class III)(WHO)。而且，也有利用BMI，由下式：标准体重(kg)＝身高(m)²×22计算出日本人的成人标准体重(理想体重)，规定实测体重超过标准体重(计算值)120％的状态为肥胖的判断方法。但是，标准体重(理想体重)因性别、年龄或生活习惯的差异等每个人都不同，因此认为用该方法一概地进行肥胖的判定并不妥当。

本发明的药品的制剂化可以根据常法进行。进行制剂化时，可以使其含有制剂上可接受的其他成分(例如载体、赋形剂、崩解剂、缓冲剂、乳化剂、混悬剂、无痛剂、稳定剂、保存剂、防腐剂、生理盐水等)。作为赋形剂，可以使用乳糖、淀粉、山梨醇、D-甘露醇、白糖等。作为崩解剂，可以使用淀粉、羧甲基纤维素、碳酸钙等。作为缓冲剂，可以使用磷酸盐、柠檬酸盐、醋酸盐等。作为乳化剂，可以使用***胶、海藻酸钠、黄芪胶等。作为混悬剂，可以使用单硬脂酸甘油酯、单硬脂酸铝、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟甲基纤维素、十二烷基硫酸钠等。作为无痛剂，可以使用苯甲醇、氯丁醇、山梨醇等。作为稳定剂，可以使用丙二醇、二乙氨基亚硫酸盐、抗坏血酸等。作为保存剂，可以使用苯酚、苯扎氯铵、苯甲醇、氯丁醇、尼泊金甲酯等。作为防腐剂，可以使用苯扎氯铵、对羟基苯甲酸、氯丁醇等。

进行制剂时的剂型也没有特别限制，例如可以以片剂、散剂、细粒剂、颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂、注射剂、外用剂及栓剂等提供本发明的药品。

本发明的药品中含有用于得到期望的治疗效果(也包含预防效果)而必需的量(即治疗上的有效量)的有效成分。本发明的药品中的有效成分量一般根据剂型不同而异，但为了达到所期望的给药量，将有效成分量例如设定在约0.1重量％～约95重量％的范围内。

本发明的药品可以根据其剂型通过口服给药或非口服给药(静脉内、动脉内、皮下、肌肉或腹腔内注射、经皮、经鼻、经粘膜等)应用于对象。这里的“对象”没有特别限制，包括人及人以外的哺乳动物(包含宠物动物、家畜、实验动物。具体来说，例如为小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、猴、牛、猪、山羊、绵羊、狗、猫、鸡、鹌鹑等)。优选的一个方式是本发明的药品应用于人。

本发明的药品的给药量以使能够得到期望的治疗效果而进行设定。治疗上的有效给药量的设定，一般考虑到症状、患者的年龄、性别及体重等。另外，若为本领域技术人员，则可以考虑到这些事项来设定适当的给药量。例如，以成人(体重约60kg)作为对象，可以使每天的有效成分量为约0.1mg～约100mg、优选为约1mg～约50mg来设定给药量。作为给药时间表，例如可以采用一日一次至数次、两日一次或三日一次等。在给药时间表的制作中，可以考虑患者的病情和有效成分的效果持续时间等。实施例

<GABA_B受体激动剂巴氯芬的抗肥胖作用>

对于GABA_B受体激动剂是否具有抗肥胖作用，使用实验动物进行了研究。GABA_B受体激动剂使用巴氯芬的外消旋混合物(±)-巴氯芬(目录编号B5399、CAS Number1134-47-0、西格玛公司)。实验动物使用瘦素受体缺陷模型db/db小鼠。db/db小鼠表现出肥胖、贪食、糖尿病，而频繁地作为肥胖模型使用。

根据以下详细叙述的方法，对db/db小鼠经口给药(±)-巴氯芬5周，研究摄食量及体重的经时变化。而且，在给药(±)-巴氯芬5周后，研究空腹时血糖值、血中胰岛素浓度、血中瘦素浓度、血中脂联素浓度、HbAlc值、褐色脂肪组织中的UCP1mRNA表达量、附睾周围白色脂肪组织的重量及脂肪细胞的尺寸、皮下白色脂肪组织的重量以及下丘脑弓状核中的NPY和POMC的表达量。

1.实验方法

(1)动物实验的方法

购入5周龄的雄性C57BL/KsJ-db/db小鼠(db/db小鼠：体重19～25g、日本SLC)，使用小笼进行单独饲养。向db/db小鼠投与普通食物颗粒(CE-2)，使其自由饮水、自由摄食。自饲养开始时，每天测定体重和24小时摄食量。在饲养开始第3天，禁食6小时后眼窝采血，测定血糖值和血中胰岛素浓度。以使体重、24小时摄食量、血糖值、血中胰岛素浓度均等的方式将db/db小鼠分为3组(各组10只)，设为对照组、巴氯芬低浓度给药组、巴氯芬高浓度给药组。分组后，自饲养开始第5天起，将(±)-巴氯芬溶解于饮用水中，对巴氯芬给药组开始进行5周的连续经口给药。将(±)-巴氯芬在低浓度给药组中以1.1mg/dl、在高浓度给药组中以2.7mg/dl的浓度溶解于饮用水中。经时测定db/db小鼠在(±)-巴氯芬的5周给药期间的摄食量和体重，5周给药结束后采血，然后通过颈椎脱臼处死。摘取脑、附睾周围白色脂肪组织、皮下白色脂肪组织、褐色脂肪组织。将脑及褐色脂肪组织在摘取后立即以干冰和液氮冻结后保存于-80℃。附睾周围白色脂肪组织及皮下白色脂肪组织在测定重量后通过4％甲醛进行固定，然后保存于4℃。

(2)血糖值和HbAlc的测定方法

自眼窝采血后迅速通过葡萄糖分析仪アントセンス(堀场制作所)测定血糖值。HbAlc是在将血液保存在-80℃后通过糖化血红蛋白分析仪HLC-723 GHbV(Tosoh Corporation)进行测定。

(3)血浆激素浓度的测定方法

使用涂布有肝素的血细胞比容管自眼窝采血后，将血液在3500rpm、4℃下离心15分钟，将血浆在-80℃保存。通过ELISA法(Revis insulin kit(小鼠)：株式会社Shibayagi、Morinaga Leptin测定试剂盒：株式会社森永生科学研究所、小鼠/大鼠脂联素ELISA试剂盒：大冢制药株式会社)测定血浆的胰岛素浓度、瘦素浓度、脂联素浓度。

(4)脂肪组织的组织学研究

给药(±)-巴氯芬5周后摘取附睾周围白色脂肪组织和皮下白色脂肪组织，比较研究给药组和对照组的脂肪组织的重量及脂肪细胞的形态(尺寸)。脂肪细胞形态的比较通过以下步骤进行。即，将用4％甲醛保存的附睾周围白色脂肪组织用石蜡固定后，制作厚8μm的切片，然后进行苏木素-曙红染色(H-E染色)。使用图像解析***Neurolucida(MicroBrightField Japan，Inc.)研究脂肪细胞的形态(尺寸)。

(5)原位杂交

使用低温恒温器由保存在-80℃的脑制作厚12μm的下丘脑切片，贴在MAS包被玻片上后进行原位杂交。NPY mRNA、POMC mRNA探针的标记使用³⁵S。使用三乙醇胺、乙醇等对下丘脑切片进行前处理后，在55℃下进行12小时的杂交。杂交后使用SSC、RNase等进行清洗处理。显影到胶片后使用NIH image对mRNA表达强度进行定量。

(6)实时PCR

从在-80℃保存的褐色脂肪组织中提取RNA，使用ABI PRISM(注册商标)7700 Sequence Detection System，通过实时定量RT-PCR法研究UCP-1mRNA的表达。

2.结果及讨论

(1)摄食抑制、体重增加抑制、血中瘦素浓度变化等

对db/db小鼠给药(±)-巴氯芬，自给药开始1周起显著抑制了摄食量，显著抑制一直持续到实验结束时(图1a、图2a)。而且，在(±)-巴氯芬给药组中自给药开始1周起可见显著的体重增加的抑制，显著抑制一直持续到实验结束时(图1d、图2b)。

而且，给药(±)-巴氯芬5周后，比较空腹时血糖值(6小时禁食)，结果是(±)-巴氯芬给药组中可见显著的抑制(图1i)。空腹时血中胰岛素浓度(给药5周后)未见变化(图1j)。血中瘦素浓度(给药5周后)在(±)-巴氯芬给药组中可见显著增加(图1m)。血中脂联素浓度(给药5周后)同样在(±)-巴氯芬给药组中可见显著增加(图1l)。HbAlc值(给药5周后)在(±)-巴氯芬给药组中可见显著降低(图1k)。而且，在(±)-巴氯芬给药组中可见褐色脂肪组织中的UCP1mRNA表达(给药5周后)的显著增加(图1h)。另外，在(±)-巴氯芬低浓度给药组和高浓度给药组中，任一研究项目中均未见实质差异。

如上，在(±)-巴氯芬给药组中，可见体重、摄食量、空腹时血糖值的显著降低、可见血中瘦素浓度及血中脂联素浓度显著增加。

(2)组织学研究

确认了附睾周围白色脂肪组织的重量在(±)-巴氯芬给药组中显著减少(图3a)。另一方面，未见皮下白色脂肪组织的重量在(±)-巴氯芬给药组中的显著减少(图3b)。关于形态学的变化，与对照组(图3c左)相比，(±)-巴氯芬给药组(图3c右)中可见脂肪细胞的小型化。测定脂肪细胞的尺寸后，可知(±)-巴氯芬给药组中脂肪细胞的尺寸减小(图3d)。另外，在(±)-巴氯芬低浓度给药组和高浓度给药组中，任一研究项目中均未见实质差异。

如上所示，由于(±)-巴氯芬的施用，附睾周围白色脂肪重量降低，并且脂肪细胞的尺寸减小。即，明确了由于(±)-巴氯芬的作用，能使内脏脂肪量降低。

(3)作用机制的研究

给药(±)-巴氯芬5周后摘取脑，使用原位杂交法研究下丘脑弓状核中的NPY mRNA和POMC mRNA的表达。其结果是由于(±)-巴氯芬的施用，NPY mRNA的表达受到抑制(图3e上左、上右)。POMC mRNA的表达增强(图3e下左、下右)。使用NIH image进行表达量的定量后，由于(±)-巴氯芬的施用，显著抑制了NPY mRNA的表达(图3f)，POMCmRNA的表达显著增强(图3g)。另外，在(±)-巴氯芬低浓度给药组和高浓度给药组中，任一研究项目中均未见实质差异。

如上所述确认了下丘脑弓状核中的NPY表达的显著抑制和POMC表达的显著增强，这一事实强烈地启示(±)-巴氯芬对中枢性起作用(即通过对NPY神经元及POMC神经元的作用)而显示出抗肥胖效果，证实了巴氯芬作为抗肥胖药的有效性。而且，通过这样阐明巴氯芬的一部分作用机制，可以说不限于巴氯芬、与巴氯芬同样地能增强GABAB受体介导的信号转导的物质、即其他的GABA_B受体激动剂也成为了抗肥胖药的有希望的候补。

<巴氯芬的R构型与S构型的效果的比较>

巴氯芬在临床上作为痉挛性***治疗药使用，但目前出售的药品中使用外消旋混合物。巴氯芬中存在对映异构体，报道R-对映异构体(以下“R-巴氯芬”)与S-对映异构体(以下“S-巴氯芬”)相比，对GABA_B受体的结合亲和性(binding affinity)高(Falch，E.et al.Journal ofNeurochemistry.1986.47：898-903.)。我们为了对R-巴氯芬及S-巴氯芬的摄食抑制效果和抗肥胖效果的差异进行研究，进行了以下的实验。

1.动物实验的方法

购入5周龄的雄性C57BL/KsJ-db/db小鼠(db/db小鼠：体重19～25g、日本SLC)，使用小笼进行单独饲养。向db/db小鼠施与普通食物颗粒(CE-2)，使其自由饮水、自由摄食。自饲养开始时，每天测定体重和24小时摄食量。在饲养开始第3天，禁食6小时后眼窝采血，测定血糖值和血中胰岛素浓度。以使体重、24小时摄食量、血糖值、血中胰岛素浓度均等的方式将db/db小鼠分为3组(各组10只)，设为对照组、R-巴氯芬给药组、S-巴氯芬给药组。另外，作为R-巴氯芬使用R(+)-Baclofenhydrochloride(目录编号G013、CAS Number 63701-55-3、西格玛公司)，作为S-巴氯芬使用S(-)-Baclofen hydrochloride(目录编号G014、CASNumber 63701-56-4、西格玛公司)。分组后，自饲养开始第5天，将R-巴氯芬及S-巴氯芬溶解于饮用水中，开始进行5周的连续经口给药。R-巴氯芬、S-巴氯芬均以巴氯芬外消旋混合物给药实验的低浓度给药组中使用的1.1mg/dl的浓度溶解于饮用水中。经时测定摄食量和体重，给药开始5周中测定直肠温度。给药巴氯芬5周后采血，然后通过颈椎脱臼处死。

2.实验的结果和讨论

对db/db小鼠给药R-巴氯芬自给药开始2周显著抑制了摄食量及体重增加量，两者的显著抑制一直持续到实验结束时(图1b、e)。另一方面，给药S-巴氯芬的情况下，至给药开始4周未见摄食量及体重增加量的显著抑制，但给药开始5周时可见两者的显著抑制(图1b、e)。对GABA_B受体的结合亲和性高的R-巴氯芬的施用表现出强的效果，启示巴氯芬特异作用于GABA_B受体而发挥摄食抑制效果及抗肥胖效果。

<巴氯芬对肥胖模型动物(db/db小鼠)及非肥胖模型动物(db/+m小鼠)的效果的比较>

C57BL/KsJ-db/db小鼠(db/db小鼠)是表现出肥胖、贪食、糖尿病症状的肥胖模型动物，而其杂交个体C57BL/KsJ-db/+m小鼠(db/+m小鼠)是未表现出肥胖、贪食、糖尿病症状的非肥胖模型动物。我们为了研究在非肥胖模型动物db/+m小鼠中是否也可见在db/db小鼠中由于给药巴氯芬而可见的摄食抑制效果及体重增加抑制效果，进行了以下的实验。

1.动物实验的方法

购入5周龄的雄性C57BL/KsJ-db/+m小鼠(db/+m小鼠：体重19～23g、日本SLC)，使用小笼进行单独饲养。向db/+m小鼠施与普通食物颗粒(CE-2)，使其自由饮水、自由摄食。自饲养开始时，每天测定体重和24小时摄食量。在饲养开始第3天，禁食6小时后眼窝采血，测定血糖值和血中胰岛素浓度。以使体重、24小时摄食量、血糖值、血中胰岛素浓度均等的方式将db/+m小鼠分为2组(各组10只)，设为对照组及巴氯芬给药组。分组后，自饲养开始第5天，将(±)-巴氯芬溶解于饮用水中，开始对巴氯芬给药组进行5周的连续经口给药。将(±)-巴氯芬以db/db小鼠实验的高浓度给药组中使用的2.7mg/dl的浓度溶解于饮用水中。经时测定db/+m小鼠的摄食量和体重，给药开始5周时测定直肠温度。给药(±)-巴氯芬5周后采血，然后通过颈椎脱臼处死。

2.实验的结果和讨论

对db/+m小鼠给药(±)-巴氯芬5周对摄食量及体重没有显著影响(图1c，f)。这启示巴氯芬产生的摄食抑制效果及体重增加抑制效果可能仅在贪食及肥胖状态下可见。

<巴氯芬对产热的影响、肥胖模型动物(db/db小鼠)及非肥胖模型动物(db/+m小鼠)中该效果的比较>

报道称db/db小鼠由于产热低，因而为低体温(Trayhurn，P.PflugersArchiv European Journal of Physiology.1979.380：227-232.)，而且为了维持体温需要充分的摄食量，因此在限制进食下体温进一步降低(Nakagawa，T.et al.Diabetes.2000.49：436-444.)。我们对巴氯芬给药对db/db小鼠及db/+m小鼠体温的影响进行了研究。

1.动物实验的方法

对db/db小鼠给药R-巴氯芬及S-巴氯芬、对db/+m小鼠给药(±)-巴氯芬5周后，在小鼠将要开始摄食的暗期之前的20点，连续3天测定直肠温度。直肠温度的测定方法如下所述。即，使用数字式热敏电阻温度计(夏目制作所)测定直肠温度。

2.实验的结果和讨论

db/db小鼠中R-巴氯芬及S-巴氯芬的施用使直肠温度显著上升，而db/+m小鼠中(±)-巴氯芬的施用对直肠温度没有显著影响(图1g)。巴氯芬的施用使db/db小鼠的体温显著上升从而改善了低体温，这被认为启示了在增强褐色脂肪组织中的UCP1 mRNA表达的同时，巴氯芬使db/db小鼠产热增加，启示巴氯芬的抗肥胖作用不仅是通过摄食抑制，还可能是通过产热的增加。

<其他的肥胖模型动物中的巴氯芬的抗肥胖作用>

db/db小鼠是伴随瘦素受体缺陷而出现肥胖及糖尿病症状的肥胖模型动物，但作为更接近人的肥胖症的肥胖模型动物的代表，通过对普通小鼠给予高脂肪食物制作诱导了饮食性肥胖的肥胖小鼠(diet-inducedobese mice；DIO小鼠)，研究巴氯芬的抗肥胖作用。而且，也对向同种普通小鼠给予普通饮食的非肥胖小鼠(lean小鼠)的作用进行了比较研究。

1.实验方法

购入5周龄的雄性C57BL/6N小鼠(体重17～20g、CLEA Japan，Inc)，使用小笼进行单独饲养。向小鼠施与普通食物颗粒(CE-2)，使其自由饮水、自由摄食，自饲养开始时，每天测定体重和24小时摄食量。在饲养开始第3天，禁食6小时后眼窝采血，测定血糖值和血中胰岛素浓度。以使体重、24小时摄食量、血糖值、血中胰岛素浓度均等的方式分组为对照组及巴氯芬给药组(各组10只)，然后开始通过给予高脂肪食物(High Fat Diet 32，能量脂肪比60％，CLEA Japan，Inc)诱导饮食性肥胖(diet-induced obesity：DIO)(DIO小鼠)。在开始给予高脂肪食物的同时，将(±)-巴氯芬以每1kg体重每天5mg(5mg/kg/day)的给药量溶解于饮用水中，开始5周的连续经口给药。经时测定5周给药期间的摄食量和体重。对给予普通食物的非肥胖小鼠C57BL/6N小鼠(lean小鼠)也与上述相同地进行(±)-巴氯芬(5mg/kg/day)的经口给药，经时测定摄食量及体重。

2.实验的结果和讨论

DIO小鼠中(±)-巴氯芬的施用，自给药开始1周起显著抑制了摄食量及体重增加量，两者的显著抑制一直持续到5周后实验结束时(图4a，b、图5a，b)。另一方面，lean小鼠中(±)-巴氯芬的施用在给药期间对摄食量及体重没有显著影响(图4c，d)。由以上结果可知，在更接近人的肥胖症的肥胖模型动物DIO小鼠中也可见巴氯芬的抗肥胖作用，而且启示体重增加量的抑制效果仅在肥胖状态下可见。

<巴氯芬之外的GABA_B受体激动剂的抗肥胖作用>

以与巴氯芬结构式不同的其他GABA_B受体激动剂的施用是否在肥胖模型动物中与巴氯芬同样地表现出抗肥胖作用作为研究目的，向DIO小鼠连续经口给药3-氨基丙基(甲基)次膦酸(目录编号：EA-133，CASNumber：127729-35-5，BIOMOL公司)(以下，SKF97541)及3-氨基丙基膦酸(目录编号：268615，CAS Number：13138-33-5，Sigma-Aldrich公司)(以下、3-APPA)，对它们的抗肥胖作用进行研究。而且，也对向同种普通小鼠给予普通饮食的非肥胖小鼠(lean小鼠)的作用进行了比较研究。另外，SKF97541与3-APPA的结构式示出于图13。

1.实验方法

购入5周龄的雄性C57BL/6N小鼠(体重17～20g、CLEA Japan，Inc)，使用小笼进行单独饲养。向小鼠施与普通食物颗粒(CE-2)，使其自由饮水、自由摄食，自饲养开始时，每天测定体重和24小时摄食量。在饲养开始第3天，禁食6小时后眼窝采血，测定血糖值和血中胰岛素浓度。以使体重、24小时摄食量、血糖值、血中胰岛素浓度均等的方式分组为对照组、SKF97541给药组及3-APPA给药组(各组10只)，然后开始通过给予高脂肪食物(High Fat Diet 32，能量脂肪比60％，CLEA Japan，Inc)诱导饮食性肥胖(diet-induced obesity：DIO)(DIO小鼠)。开始给予高脂肪食物的同时，将SKF97541(0.3mg/kg/day)或3-APPA(5mg/kg/day)溶解于饮用水中，开始5周的连续经口给药。经时测定5周给药期间的摄食量和体重。对给予普通食物的C57BL/6N小鼠(lean小鼠)也与上述相同地进行SKF97541(0.3mg/kg/day)或3-APPA(5mg/kg/day)的经口给药，经时测定摄食量及体重。

2.实验的结果和讨论

DIO小鼠中SKF97541或3-APPA的给药自给药开始1周起显著抑制了摄食量及体重增加量，两者的显著抑制一直持续到5周后实验结束时(图4e，f、图5a，b)。另一方面，lean小鼠中SKF97541或3-APPA的给药在给药期间对摄食量及体重没有显著影响(图4g，h)。由以上结果可见不同的3种GABA_B受体激动剂在肥胖模型动物DIO小鼠中的抗肥胖作用，而且启示由这些GABA_B受体激动剂产生的体重增加的抑制效果仅在肥胖状态下可见。

<GABAB受体激动剂对DIO小鼠的糖耐量及胰岛素感受性的影响>

对向DIO小鼠连续给药3种GABA_B受体激动剂后的空腹时血糖值、HbAlc值及空腹时血中胰岛素浓度的变化进行了研究。

1.实验方法

根据前述方法对DIO小鼠经口给药(±)-巴氯芬(5mg/kg/day)或SKF97541(0.3mg/kg/day)或3-APPA(5mg/kg/day)5周后，禁食6小时后眼窝采血，然后测定血糖值及HbAlc值及血中胰岛素浓度。

2.实验的结果和讨论

在(±)-巴氯芬给药组、SKF97541给药组、3-APPA给药组中，与对照组相比均可见空腹时血糖值(图6)、HbAlc值(图7)及空腹时血中胰岛素浓度(图8)的显著降低。以上结果启示，通过不同的3种GABA_B受体激动剂，能够改善DIO小鼠的糖耐量及胰岛素感受性。

<(±)-巴氯芬对DIO小鼠的其他效果>

对向DIO小鼠连续给药(±)-巴氯芬后的血浆激素浓度的变化、对白色脂肪组织的影响进行了研究。

1.实验方法

根据前述方法对DIO小鼠经口给药(±)-巴氯芬(5mg/kg/day)5周后，禁食6小时后眼窝采血，然后测定血浆瘦素浓度及血浆脂联素浓度。而且，给药5周结束后通过颈椎脱臼处死DIO小鼠后，摘取附睾周围白色脂肪组织及皮下白色脂肪组织，测定重量后使用4％甲醛进行固定，将附睾周围白色脂肪组织制作成厚8μm的切片，进行苏木素-曙红染色(H-E染色)，使用图像解析***Neurolucida(MicroBrightField Japan，Inc.)研究脂肪细胞的形态(尺寸)。

2.实验的结果和讨论

DIO小鼠中经口给药(±)-巴氯芬5周使血浆瘦素浓度显著降低(图9a)、并使血浆脂联素浓度显著增加(图9b)。而且，使附睾周围白色脂肪组织的重量(图10a)及皮下白色脂肪组织的重量(图10b)显著减少。附睾周围白色脂肪组织中的脂肪细胞的尺寸在(±)-巴氯芬给药组中减小(图10c)。启示由于(±)-巴氯芬的施用，DIO小鼠的白色脂肪重量及脂肪细胞的尺寸减小。

<DIO小鼠中(±)-巴氯芬的作用机制>

对向DIO小鼠连续给药(±)-巴氯芬后的下丘脑弓状核中的NPYmRNA及POMC mRNA表达量的变化进行了研究。

1.实验方法

根据前述方法向DIO小鼠经口给药(±)-巴氯芬5周后处死，摘取脑，使用原位杂交法研究下丘脑弓状核中的NPY mRNA及POMC mRNA表达量的变化。

2.实验的结果和讨论

DIO小鼠中给药(±)-巴氯芬显著抑制了NPY mRNA的表达(图11a，c)，并且使POMC mRNA的表达显著增加(图11b，c)。启示与在db/db小鼠中相同，(±)-巴氯芬在DIO小鼠中也可能通过作用于食欲中枢来改善肥胖症。

<巴氯芬对体温、耗氧量及运动量的影响>

对db/db小鼠及DIO小鼠中(±)-巴氯芬的施用对体温、耗氧量及运动量的影响进行了讨论。

1.实验方法

对db/db小鼠及DIO小鼠进行5周的(±)-巴氯芬经口给药，在给药开始5周内测定直肠温度，且使用小动物用代谢测量***(modelMK-5000：室町机械(株))测定耗氧量及运动量。

2.实验的结果和讨论

db/db小鼠及DIO小鼠中(±)-巴氯芬的施用使体温(图12a，d)显著上升，并且使耗氧量(图12b，e)显著增加。而且，对运动量(图12c，f)没有显著影响。以上结果启示，由巴氯芬产生的抗肥胖作用的至少一部分可能是通过能量产生的增强。

<GABA_B受体激动剂巴氯芬的抗肥胖作用的用量依赖性的研究>

以阐明GABA_B受体激动剂巴氯芬的抗肥胖作用的用量依赖性作为目的进行以下的实验。巴氯芬使用外消旋混合物(±)-巴氯芬(目录编号B5399、CAS Number1134-47-0、西格玛公司)。实验动物使用瘦素受体缺陷模型db/db小鼠。

1.实验方法

购入5周龄的雄性C57BL/KsJ-db/db小鼠(db/db小鼠：体重19～25g、日本SLC)，使用小笼进行单独饲养。向db/db小鼠施与普通食物颗粒(CE-2)，使其自由饮水、自由摄食。自饲养开始时，每天测定体重和24小时摄食量。在饲养开始第3天，禁食6小时后眼窝采血，测定血糖值和血中胰岛素浓度。以使体重、24小时摄食量、血糖值、血中胰岛素浓度均等的方式将db/db小鼠分为5组(各组10只)，设为对照组及巴氯芬给药组。将(±)-巴氯芬以4×10^-6M、10×10^-6M、40×10^-6M、100×10^-6M各浓度溶解于饮用水中，对巴氯芬给药组进行5周的连续经口给药。经时测定(±)-巴氯芬5周给药期间的摄食量、体重及饮水量。

2.实验的结果和讨论

db/db小鼠中(±)-巴氯芬的施用，在100×10^-6M及40×10^-6M给药组中自给药开始1周起显著抑制了摄食量及体重增加量，两者的显著抑制一直持续到实验结束时。在10×10^-6M给药组中自给药开始2周起、在4×10^-6M给药组中自给药开始4周起可见摄食量及体重增加的显著抑制，两者的显著抑制一直持续到实验结束时(图14)。估算每天的巴氯芬的施用量为：100×10^-6M为5mg/kg/day、40×10^-6M为2mg/kg/day、10×10^-6M为0.5mg/kg/day、4×10^-6M为0.2mg/kg/day。

<db/db小鼠中巴氯芬之外的GABA_B受体激动剂的抗肥胖作用的研究>

以研究巴氯芬之外的GABA_B受体激动剂的施用在db/db小鼠中是否也表现出抗肥胖作用作为目的，将3-氨基丙基(甲基)次膦酸(目录编号：EA-133，CAS Number：127729-35-5，BIOMOL公司)(以下，SKF97541)及3-氨基丙基膦酸(目录编号：268615，CAS Number：13138-33-5，Sigma-Aldrich公司)(以下、3-APPA)向db/db小鼠连续经口给药，对它们的抗肥胖作用进行了研究。而且，也对非肥胖模型动物db/+m小鼠的作用进行了比较研究。

1.实验方法

购入5周龄的雄性C57BL/KsJ-db/db小鼠(db/db小鼠：体重19～25g、日本SLC)，使用小笼进行单独饲养。向db/db小鼠施与普通食物颗粒(CE-2)，使其自由饮水、自由摄食。自饲养开始时，每天测定体重和24小时摄食量。在饲养开始第3天，禁食6小时后眼窝采血，测定血糖值和血中胰岛素浓度。以使体重、24小时摄食量、血糖值、血中胰岛素浓度均等的方式将db/db小鼠分为3组(各组10只)，设为对照组、SKF97541给药组及3-APPA给药组。将SKF97541以10×10^-6M、将3-APPA以100×10^-6M的浓度溶解于饮用水中，进行5周的连续经口给药，经时测定给药期间的摄食量及体重。对db/+m小鼠也同样将SKF97541(10×10^-6M)或3-APPA(100×10^-6M)溶解于饮用水中并进行经口给药，经时测定摄食量及体重。

2.实验的结果和讨论

3-APPA的施用自给药开始1周起、SKF97541的施用自给药开始2周起显著抑制了累积摄食量(图15a)，并且显著抑制一直持续到实验结束时。而且，SKF97541及3-APPA的施用自给药开始1周起显著抑制了体重增加量(图15b)，且显著抑制一直持续到实验结束时。另一方面，db/+m小鼠中SKF97541或3-APPA的施用对给药期间的摄食量及体重没有显著影响(图15c，d)。以上结果启示，利用不同的3种GABA_B受体激动剂在db/db小鼠中可见抗肥胖作用，而且抗肥胖作用仅在肥胖状态下可见。

本发明的抗肥胖剂对肥胖(包含肥胖症)的治疗或预防有效。通过本发明的抗肥胖剂，通过利用其有效成分的中枢性作用能够得到良好的抗肥胖效果。

本发明并不限于上述发明的实施方式及实施例的说明。不脱离专利申请的范围的记载、且本领域技术人员能容易想到的范围中的各种变形方式也包含于本发明中。

本说明书中明示的论文、公开专利公报及专利公报等的内容以引用其全部内容的方式引用。

Claims (11)

1.一种抗肥胖药，含有GABA_B受体激动剂或其在药理学上可接受的盐作为有效成分。

2.如权利要求1所述的抗肥胖药，其中，所述GABA_B受体激动剂为巴氯芬。

3.如权利要求2所述的抗肥胖药，其中，所述巴氯芬为R构型。

4.如权利要求1～3中任一项所述的抗肥胖药，作用于下丘脑弓状核中的NPY神经元和POMC神经元而发挥抗肥胖效果。

5.如权利要求1～3中任一项所述的抗肥胖药，对由瘦素抗性引起的肥胖或伴随瘦素抗性的肥胖发挥抗肥胖效果。

6.GABA_B受体激动剂或其在药理学上可接受的盐在制造抗肥胖药中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其中，所述GABA_B受体激动剂为巴氯芬。

8.如权利要求7所述的应用，其中，所述巴氯芬为R构型。

9.一种肥胖治疗方法，包括对需要治疗肥胖的对象施用治疗上有效量的GABA_B受体激动剂或其在药理学上可接受的盐。

10.如权利要求9所述的治疗方法，其中，所述GABA_B受体激动剂为巴氯芬。

11.如权利要求10所述的治疗方法，其中，所述巴氯芬为R构型。

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