CN101460843A - 凝溶胶蛋白治疗多发性硬化和诊断神经疾病的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及凝溶胶蛋白治疗神经疾病(例如多发性硬化)的用途，还涉及凝溶胶蛋白诊断、监测和评价神经疾病(例如多发性硬化)的治疗法的用途。

Description

凝溶胶蛋白治疗多发性硬化和诊断神经疾病的用途
技术领域
本发明涉及凝溶胶蛋白的诊断和治疗应用。
背景技术
尽管诊断和治疗有显著进展，神经疾病仍然是全世界发病和死亡的一种主要原因。神经疾病是常见的并且耗费颇多。根据最近的估计，美国每年治疗神经疾病的费用超过6千亿美元。因此，有强烈动机鉴定神经疾病的新治疗法。
因为治疗结果依赖于恰当的诊断，具有恰当的检验来诊断神经疾病以及监测这些疾病的治疗是重要的。恰当的诊断使得医生可以实施恰当且及时的治疗。对治疗的适当监测使得医生能够决定治疗过程以及向患者及其家属建议预期的疾病过程。因此，还强烈需要有诊断和评价神经疾病治疗的新的改进的测试和方法。
凝溶胶蛋白首先作为参与细胞运动的细胞内肌动蛋白结合蛋白而被发现(Yin，H.L.& Stossel，T.P.(1979)Nature 281，583-6)，最近已经注意到它参与多种疾病。尽管血浆凝溶胶蛋白的真实功能尚不知道，临床和动物研究已经表明，损伤和炎症所致血浆凝溶胶蛋白的消耗与不利的结果相关。凝溶胶蛋白消耗的一种推测机制是它结合由于组织破坏而暴露的细胞中高丰度的肌动蛋白。更近以来，发现凝溶胶蛋白结合生物活性炎性介质如溶血磷脂酸、二腺嘌呤磷酸酯、Aβ肽(参与阿尔茨海默氏病发病的一种肽)、血小板活化因子并且可能还有其它物质。
发明内容
凝溶胶蛋白(GSN)，尤其是胞浆凝溶胶蛋白(cGSN)，除了是参与细胞运动的细胞内肌动蛋白结合蛋白以外，还是高丰度的分泌蛋白(Yin，H.L.，Kwiatkowski，D.J.，Mole，J.E.& Cole，F.S.(1984)J BiolChem 259，5271-6)。外泌型凝溶胶蛋白被称为血浆凝溶胶蛋白(pGSN)，具有额外的25个氨基酸，来源于单基因的另外选择性剪接(Kwiatkowski，D.J.，Stossel，T.P.，Orkin，S.H.，Mole，J.E.，Colten，H.R.& Yin，H.L.(1986)Nature 323，455-8)。
本发明基于以下令人惊奇的发现：在多发性硬化的动物模型中血浆凝溶胶蛋白水平被降低，并且血浆凝溶胶蛋白水平降低出现在表现出多发性硬化之前。本发明还基于另一发现：施用凝溶胶蛋白阻止和/或抑制了所述疾病的表现。因此，在一个方面，本发明涉及向对象施用凝溶胶蛋白以治疗多发性硬化。本发明还涉及使用凝溶胶蛋白来诊断神经疾病以及诊断治疗效果的方法。
根据本发明的一个方面，提供一种表征对象未来发生神经疾病(例如多发性硬化)的风险特征的方法。所述方法包括：获得所述对象中的凝溶胶蛋白水平以及将该凝溶胶蛋白水平与预定值进行比较。基于与所述预定值相比的凝溶胶蛋白水平来表征所述对象发生神经疾病(例如多发性硬化)的风险特征。凝溶胶蛋白水平处于或低于该预定水平指示了所述对象有更高的风险发生该神经疾病，而凝溶胶蛋白水平处于或高于该预定水平则指示了所述对象没有发生该神经疾病的更高风险。
在一些实施方案中，所述方法还包括进行一或更多次检验以评价该神经疾病。评价神经疾病的检验的实例包括但不限于神经科检查、脑电图(EEG)、脑脊液(CSF)检查、诱发电位(感觉、运动、视觉、本体感觉、或认知)、肌电图(EMG)、神经传导、计算机断层扫描(CT)成像、磁共振成像(MRI)、磁共振血管成像(MRA)、回声-平面MR成像、正电子发射断层扫描(PET)、脊髓造影和血管造影。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗患有神经疾病(例如多发性硬化)或有发生此病风险的对象的方法。所述方法包括向需要这种治疗的对象施用有效量的凝溶胶蛋白以治疗所述对象。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗患有神经疾病(例如多发性硬化)或有发生此病风险的对象的方法。所述方法包括向需要这种治疗的对象施用有效量的凝溶胶蛋白以将所述对象中的凝溶胶蛋白水平提高到预定值之上。
在一些实施方案中，所述对象在其它方面没有需要用凝溶胶蛋白治疗的适应症。所述凝溶胶蛋白优选地通过口服、舌下、含服、鼻内、静脉内、肌肉内、鞘内、腹膜内或皮下来施用。所述凝溶胶蛋白可以预防性施用。
在一些实施方案中，所述治疗方法包括施用第二药剂用于治疗所述神经疾病(例如多发性硬化)。用于治疗神经疾病(例如多发性硬化)的药剂的实例包括但不限于干扰素(IFN)-β1b(Betaseron或Betaferon)，干扰素(IFN)-β1a(Avonex，Rebif)，醋酸格拉太咪尔(考帕松)，米托蒽醌(能减瘤)，硫唑嘌呤，环孢菌素，氨甲喋呤，环磷酰胺，静注免疫球蛋白，***，甲基***，***龙，甲基***龙，***，促肾上腺皮质激素(ACTH)，促皮质素，2-氯脱氧腺嘌呤(2-CDA，克拉屈滨)，肌苷，白介素-2抗体(赛尼哌Zenapax，达利珠单抗)，亚叶酸，特立氟胺(teriflunomide)，雌孕激素类，去氧孕烯，炔雌醇，BHT-3009，ABT-874，卡介(BCG)苗，T细胞疫苗，CNTO1275，利妥昔单抗，Tysabri(那他珠单抗)，N-乙酰半胱氨酸，米诺环素，RO0506997和他汀类药物(例如阿伐他汀(立普妥)，洛伐他汀(美降脂Mevacor)，普伐他汀(Pravachol)，氟伐他汀(来适可Lescol)和辛伐他汀(舒降之Zocor))。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗对象以降低神经疾病(例如多发性硬化)之风险的方法。所述方法包括基于已知其具有低于正常水平的凝溶胶蛋白来选择对象以及向该对象施用有效量的凝溶胶蛋白和/或第二药剂以降低该对象发生神经疾病(例如多发性硬化)的风险。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗对象以减少神经疾病(例如多发性硬化)之风险的方法。所述方法包括基于已知其具有低于正常水平的凝溶胶蛋白来选择对象以及向该对象施用有效量的凝溶胶蛋白和/或第二药剂以将该对象中的凝溶胶蛋白水平提高到高于预定值。
在一些实施方案中，所述治疗方法包括向所述对象施用用于治疗所述神经疾病(例如多发性硬化)的第二药剂。用于治疗所述神经疾病的药剂的实例如上列出。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗具有低于正常水平的凝溶胶蛋白的对象的方法。所述方法包括使用用于治疗神经疾病(例如多发性硬化)或降低其风险的第一治疗法来治疗所述对象。获得所述对象中的凝溶胶蛋白水平。将所述凝溶胶蛋白水平与预定值进行比较，该预定值对应于凝溶胶蛋白的预定水平(例如在表面上健康的对照群体中)。如果未达到该预定的凝溶胶蛋白水平，使用用于治疗神经疾病(例如多发性硬化)或降低其风险的第二药剂来治疗所述对象，直至达到该预定的凝溶胶蛋白水平。
＂低于正常水平的凝溶胶蛋白＂是比给定对象群体中所测量平均水平至少小10％的凝溶胶蛋白水平。所述平均凝溶胶蛋白水平可以依赖于具体的对象群体。例如，表面上健康的群体将具有与已有在先病症的对象相比不同的“正常”范围的凝溶胶蛋白。在一些实施方案中，所述凝溶胶蛋白水平比给定对象群体中所测量平均水平至少小10％。在另一些实施方案中，所述凝溶胶蛋白水平比给定对象群体中所测量平均水平至少小20％。在再一些实施方案中，所述凝溶胶蛋白水平比给定对象群体中所测量平均水平至少小30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％。在其中一个实施方案中，所述凝溶胶蛋白水平低于约250mg/L血浆。在另一些重要的实施方案中，所述凝溶胶蛋白低于约2.4μM/L(微摩尔/升)血浆。
在一些实施方案中，所述对象在其它方面没有需要用该药剂治疗的适应症。当所述药剂是凝溶胶蛋白时，没有需要用凝溶胶蛋白治疗之适应症的对象是没有需要用凝溶胶蛋白治疗之征兆或症状的对象。凝溶胶蛋白适用于治疗脓毒病和感染。凝溶胶蛋白适用于治疗肌动蛋白相关病症，比如成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、爆发性肝坏死、急性肾功能衰竭、肌肉损伤、以BUN和/或肌酸酐水平升高为特征的病症。肌动蛋白相关病症对本领域普通技术人员是已知的。
在另一些实施方案中，所述对象是表面上健康的对象。如本文所用，＂表面上健康的对象＂是没有疾病征兆和/或症状的对象。
根据本发明的另一方面，提供一种评价用于治疗对象中神经疾病(例如多发性硬化)或降低其风险的治疗法之功效的方法。所述方法包括获得对象中的凝溶胶蛋白水平，其中所述对象接受用治疗神经疾病(例如多发性硬化)或降低其风险的药剂的治疗法。将所获得的凝溶胶蛋白水平与预定值进行比较，该预定值对应于凝溶胶蛋白的预定水平(例如在表面上健康的对照群体中)。确定凝溶胶蛋白水平是否高于预定水平用于指示所述治疗法是否有疗效。在一些实施方案中，重复获得凝溶胶蛋白水平，以监测在一段时间中所述人对象的凝溶胶蛋白水平。
所述治疗可以用凝溶胶蛋白，干扰素(IFN)-β1b(Betaseron或Betaferon)，干扰素(IFN)-β1a(Avonex，Rebif)，醋酸格拉太咪尔(考帕松)，米托蒽醌(能减瘤)，硫唑嘌呤，环孢菌素，氨甲喋呤，环磷酰胺，静注免疫球蛋白，***，甲基***，***龙，甲基***龙，***，促肾上腺皮质激素(ACTH)，促皮质素，2-氯脱氧腺嘌呤(2-CDA，克拉屈滨)，肌苷，白介素-2抗体(赛尼哌Zenapax，达利珠单抗)，亚叶酸，特立氟胺(teriflunomide)，雌孕激素类，去氧孕烯，炔雌醇，BHT-3009，ABT-874，卡介苗(BCG)，T细胞疫苗，CNTO 1275，利妥昔单抗，Tysabri(那他珠单抗)，N-乙酰半胱氨酸，米诺环素，RO0506997或他汀类药物(例如阿伐他汀(立普妥)，洛伐他汀(美降脂Mevacor)，普伐他汀(Pravachol)，氟伐他汀(来适可Lescol)和辛伐他汀(舒降之Zocor))。
根据本发明的另一方面，提供一种用于决定对象的治疗过程的方法。该方法包括获得对象中的凝溶胶蛋白水平，其中所述对象接受治疗神经疾病(例如多发性硬化)或降低其风险的治疗法。将所述凝溶胶蛋白水平与预定值进行比较，该预定值对应于凝溶胶蛋白的某一水平(例如在表面上健康的对照群体中)。确定所获得的凝溶胶蛋白水平是等于或高于还是等于或低于预定水平，并基于这种确定来决定治疗过程。在一些实施方案中，重复获得凝溶胶蛋白水平，以监测在一段时间中所述对象的凝溶胶蛋白水平。
除非另外指出，下列实施方案应用于本文所述发明的各个方面。
所述神经疾病可以是脱髓鞘疾病。在一些实施方案中，所述神经疾病是多发性硬化。所述多发性硬化可以是急性、复发性、缓解型、稳定的、慢性的或可能的。
所述神经疾病可以是阿尔茨海默病，急性播散性脑脊髓炎，横贯性脊髓炎，进行性多病灶脑白质病，肾上腺脑白质营养不良，肾上腺脊髓神经病，脑桥中央髓鞘溶解症，视神经炎，视神经脊髓炎(Devic’s综合征)，Leber’s遗传性视神经病，热带痉挛性下肢轻瘫(HTLV-相关的脊髓病)，或者格林-巴利综合征(也称急性炎症性脱髓鞘多神经病，急性特发性多神经根神经炎，急性特发性多神经炎，French脊髓灰质炎和Landry’s上行性麻痹)。
所述凝溶胶蛋白水平可以是所述对象体液中的水平。体液的实例包括但不限于血、血浆、血清、脑脊液(CSF)和尿。
所述凝溶胶蛋白水平可以是所述对象身体组织中的水平。在一些重要的实施方案中，所述身体组织是神经组织。在一些实施方案中，所述对象是表面上健康的对象。
在一些实施方案中，该预定值是250mg/L血浆或更低。在一些实施方案中，该预定的凝溶胶蛋白值大约是240mg/L、230mg/L、220mg/l、210mg/L、200mg/L、190mg/L、180mg/L、170mg/L、160mg/L、150mg/L、140mg/L、130mg/L、120mg/L、110mg/L、100mg/L、90mg/L、80mg/L、70mg/L、60mg/L、50mg/L、40mg/L、30mg/L、20mg/L或10mg/L血浆或更低。
在另一些实施方案中，该预定值是2.4μM/L血浆或更低。在一些实施方案中，所述预定的凝溶胶蛋白值大约是2.3μM/L、2.2μM/L、2.1μM/L、2.0μM/L、1.9μM/L、1.8μM/L、1.7μM/L、1.6μM/L、1.5μM/L、1.4μM/L、1.3μM/L、1.2μM/L、1.1μM/L、1.0μM/L、0.9μM/L、0.8μM/L、0.7μM/L、0.6μM/L、0.5μM/L、0.4μM/L、0.3μM/L、0.2μM/L血浆或更低。
本发明的每一项限定可以包括本发明的多种实施方案。因此，可以想到涉及任一要素或要素组合的本发明的每一项限定可以包括在本发明的每个方面中。本发明还能够有其他的实施方案而且可以各种方式来实施或实现。此外，本文中使用的措辞和术语是用于描述目的，而不应该认为是限定。本文中使用“包括”、“包含”、或者“具有”、“含有”及其变型意思是涵盖其后列出的项目及其等同物以及其它项目。
本发明的这些和其他方面以及各种优点和效用在参考发明详述时将是显而易见的。本发明的每个方面可以包括可从中理解的各种实施方案。
本申请中列出的所有文件以其整体通过引用并入本文。
附图说明
图1的直方图显示对照小鼠(用辐射自身处理)和患有试验性过敏性脑脊髓炎(EAE)原发性损伤的小鼠中的凝溶胶蛋白水平。
图2显示，对于指定处理，作为时间函数，EAE小鼠中的疾病评分。
图3显示，对于指定处理，作为时间函数，对照和EAE动物(缺乏整合素功能)中的临床评分。
应当理解，实施本发明并不需要所述附图。
发明详述
本发明部分地基于以下发现：施用凝溶胶蛋白保护对象避免多发性硬化。因此，在一些方面，本发明涉及向对象施用凝溶胶蛋白用于治疗对象中的多发性硬化。我们已经发现，凝溶胶蛋白治疗延迟了多发性硬化的发作，显著减弱了其严重程度，并加速其症状的好转。
术语“处理”或“治疗”意思包括预防、改善、防止或根治疾病。
如本文所用，术语“对象”意思是指可能需要治疗的任何哺乳动物。对象包括但不限于：人、非人灵长类、猫、狗、绵羊、猪、马、牛、啮齿动物比如小鼠、仓鼠和大鼠。优选的对象是人对象。
如本文所用，术语“凝溶胶蛋白”包括野生型凝溶胶蛋白(GenBank登记号：X04412)、凝溶胶蛋白的同工型、类似物、变体、片段或功能衍生物。
不同于其他的哺乳动物蛋白质，凝溶胶蛋白(GSN)兼备胞浆型(cGSN)和分泌或外泌性同工型，也称为血浆凝溶胶蛋白(pGSN)，它们来源于单个基因的信使RNA的可供选择性剪接(Sun et al.J.Biol.Chem.274：33179-33182(1999))。如本文所用，凝溶胶蛋白同工型包括在其氨基酸序列中有一些小差异的凝溶胶蛋白变型，通常是剪接变体或是某种翻译后修饰的结果。
凝溶胶蛋白包括天然的以及合成和重组的凝溶胶蛋白和凝溶胶蛋白类似物。凝溶胶蛋白是一种高丰度的分泌蛋白质(Yin，H.L.，Kwiatkowski，D.J.，Mole，J.E.& Cole，F.S.(1984)J Biol Chem 259，5271-6)。外泌型凝溶胶蛋白pGSN具有额外的25个氨基酸，其来源于单个基因的选择性剪接(Kwiatkowski，D.J.，Stossel，T.P.，Orkin，S.H.，Mole，J.E.，Colten，H.R.& Yin，H.L.(1986)Nature 323，455-8)。重组的人凝溶胶蛋白(rhGSN)(Biogen IDEC，Inc.，Cambridge，MA)在大肠杆菌中生产；尽管它与天然蛋白有相同的一级结构，在标准纯化条件下，它与天然的人血浆凝溶胶蛋白区别在于天然蛋白中存在的二硫键。因此，所述重组蛋白在纯化后被适当地氧化，并且其结构和功能无法与人血浆凝溶胶蛋白相区分(Wen et.al，Biochemistry 35：9700-9709(1996))。在本发明的一些重要的治疗方面和实施方案中，优选使用rhGSN。在本发明的一些重要的诊断方面和实施方案中，优选使用pGSN。
“凝溶胶蛋白类似物”表示在功能上与天然凝溶胶蛋白或其片段实质上相似的化合物。凝溶胶蛋白类似物包括与凝溶胶蛋白序列实质上相似的生物活性氨基酸序列，并且其可以具有取代、缺失、延长、替换或其它修饰的序列，其中所述修饰序列具有与凝溶胶蛋白实质上相似的生物活性。例如，凝溶胶蛋白的一种类似物不具有与凝溶胶蛋白相同的氨基酸序列但与凝溶胶蛋白足够同源以致于保留了凝溶胶蛋白的生物活性。例如，生物活性可以通过测定凝溶胶蛋白类似物的性质来确定和/或通过测定凝溶胶蛋白类似物治疗或预防多发性硬化的能力来确定。凝溶胶蛋白生物活性测定的一个实例是凝溶胶蛋白刺激肌动蛋白核化的能力。凝溶胶蛋白生物活性测定描述于实施例中并且是本领域普通技术人员已知的。
“片段”意思包括提供维持凝溶胶蛋白生物活性之凝溶胶蛋白区段的凝溶胶蛋白分子的任何部分；该术语意思包括由任何来源(例如来自天然存在的肽序列、合成的或化学合成的肽序列以及遗传工程改造的肽序列)组成的凝溶胶蛋白片段。
凝溶胶蛋白的“变体”意思是指在结构和生物活性上与天然凝溶胶蛋白或其片段实质上相似的化合物。术语变体包括凝溶胶蛋白家族的蛋白质。所述凝溶胶蛋白家族的蛋白质是一组肌动蛋白结合蛋白，它们共有采取相似折叠的约15kDa同源结构域的重复序列。凝溶胶蛋白家族蛋白质的实例包括但不限于绒毛蛋白样蛋白(advillin)、绒毛蛋白(villin)、capG、非飞行蛋白质(flightless proteins)、截断蛋白(fragmin)、肌割蛋白、微丝肌割蛋白(adseverin)、原绒毛蛋白(protovillin)以及超绒毛蛋白(supervillin)。
凝溶胶蛋白的“功能衍生物”是具有与凝溶胶蛋白生物活性实质上相似之生物活性的衍生物。“实质上相似”意思是指活性有定量的差异但定性上相同。例如，凝溶胶蛋白的功能衍生物可以包含与凝溶胶蛋白相同的氨基酸骨架但还含有其它修饰比如翻译后修饰例如结合的磷脂或共价连接的碳水化合物，这取决于这些修饰对于实施诊断测定或治疗性处理的必要性。如本文所用，该术语意思还包括凝溶胶蛋白的化学衍生物。这些衍生物可以提高凝溶胶蛋白的溶解性、吸收、生物半衰期等。所述衍生物还可以降低凝溶胶蛋白的毒性、或者消除或减弱凝溶胶蛋白的任何不受欢迎的副作用等。能够介导这种作用的化学部分已经公开于Remington′s Pharmaceutical Sciences(1980)中。将这些部分偶联到诸如凝溶胶蛋白等分子的方法是本领域公知的。术语“功能衍生物”意思包括凝溶胶蛋白的“片段”、“变体”、“类似物”或“化学衍生物＂。
在一些方面中，本发明涉及治疗对象中疾病(例如神经疾病比如多发性硬化)的方法。所述对象已知具有或怀疑具有所述疾病或有发生所述疾病的风险。所述凝溶胶蛋白以有效治疗对象中所述疾病的量来施用。
对本发明治疗方法的反应例如可以通过确定所述治疗的生理效应来测量，比如在施用所述治疗后症状的降低或缺失。
根据本发明的另一方面，提供一种用于监测对象中治疗的方法。该方法包括获得对象中的凝溶胶蛋白水平，其中所述对象接受治疗疾病(例如神经疾病比如多发性硬化)的治疗法。将所述凝溶胶蛋白水平与预定值进行比较，该预定值对应于凝溶胶蛋白的对照水平(例如在表面上健康的群体中)。确定所述凝溶胶蛋白水平是否处于或低于预定水平指示了所述对象是将从用相同治疗来继续治疗中受益还是将受益于治疗改变。在一些实施方案中，重复获得凝溶胶蛋白水平，以监测在一段时间中所述对象的凝溶胶蛋白水平。在一些实施方案中，所述对象可以已接受所述治疗至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12周或更长时间。在一些实施方案中，所述对象可以已接受所述治疗至少3、4、5、6个月或更长时间。
凝溶胶蛋白治疗的变化是指凝溶胶蛋白剂量的增加、从凝溶胶蛋白转换为另一种药剂、向所述凝溶胶蛋白治疗方案中添加另一种药剂、或者其组合。
根据本发明的另一方面，提供一种评价用于治疗对象中疾病(例如神经疾病比如多发性硬化)或降低其风险的治疗法之功效的方法。该方法包括获得对象中的凝溶胶蛋白水平，其中所述对象接受了治疗所述疾病的治疗法。将所述凝溶胶蛋白水平与预定值进行比较，该预定值对应于凝溶胶蛋白的对照水平(例如在表面上健康的群体中)。确定到凝溶胶蛋白水平处于或高于预定水平指示了所述治疗有疗效。在一些实施方案中，所述对象可以已接受所述治疗至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12周或更长时间。在一些实施方案中，所述对象可以已接受所述治疗至少3、4、5、6个月或更长时间。
本发明的一个方面涉及测量凝溶胶蛋白来指导治疗以改善对象中的治疗结果。凝溶胶蛋白的治疗中水平(on-therapy levels)对于对疾病(例如神经疾病比如多发性硬化)治疗的反应具有预测价值。凝溶胶蛋白的所述治疗中水平是对疾病结果的现有预测方案的补充。
将受益于本发明此方面的对象是正接受治疗以治疗或预防所述疾病例如多发性硬化的对象(即“治疗中”对象)。治疗中对象是已经诊断并处于用治疗多发性硬化的治疗法进行治疗过程的对象。所述治疗法可以是本文提到的任何治疗剂。所述治疗法还可以是非药物治疗。在一些重要的实施方案中，所述治疗法是提高凝溶胶蛋白水平的治疗法。在一个特别重要的实施方案，所述治疗法是用凝溶胶蛋白进行的治疗。优选的对象是人对象。最可能受益于本发明的对象是处于治疗中并且其凝溶胶蛋白水平等于或低于约250mg/L(或2.4μM/L)血浆的人对象。
在一些实施方案中，所述对象已经有所述疾病。在一些实施方案中，所述对象可能患所述疾病的风险增加。
疾病风险因素对本领域普通技术人员是已知的。例如，多发性硬化的风险因素包括：年龄(在20和40岁之间)、女性、白种人以及阳性家族史。多发性硬化的风险程度取决于很多因素以及对象中所述风险因素的严重性或程度。有风险表和预测算法可供用于基于风险因素的存在性和严重性来评定对象中多发性硬化的风险。在一些实施方案中，患所述疾病的风险增加的对象可以是表面上健康的对象。表面上健康的对象是没有疾病征兆或症状的对象。
评定对象中多发性硬化风险的其他方法是本领域普通技术人员已知的。
本发明的优选治疗是凝溶胶蛋白。凝溶胶蛋白可以单独施用、在药物组合物中施用或联合其它治疗方案来施用。凝溶胶蛋白和任选地其它治疗剂可以同时施用或依次施用。当同时施用所述其它治疗剂时，它们可以在相同的制剂中施用，或者在分开的制剂中但同时施用。当从时间上分开施用所述其它治疗剂和凝溶胶蛋白时，所述其它治疗剂可以彼此互相并且与凝溶胶蛋白依次施用。施用这些化合物之间的时间分开可以是以分钟计或者可以更长。
在实施本发明的某些方法中，需要获得对象中的凝溶胶蛋白水平。然后将该水平与预定值进行比较，其中与所述预定值相比的所述凝溶胶蛋白水平用于指示所述对象将受益于继续治疗的可能性。然后可以基于可能从治疗改变中将获得的净利益来表征所述对象。
可以通过现有技术已知的任何方法来获得所述对象的凝溶胶蛋白水平。典型地，通过测量体液(例如血、血清、血浆、淋巴、唾液、尿等)中的凝溶胶蛋白水平来确定该水平。可以通过ELISA或其它免疫测定或确定凝溶胶蛋白存在的其它常规技术来测定该水平。通常的方法可以包括将对象的体液样品送到商业测量实验室。在实施例中描述了测量凝溶胶蛋白的方法。
所述发明还包括将所述对象的凝溶胶蛋白水平与预定值进行比较。所述预定值可以采用各种形式。它可以是单截断值，比如中位值或平均值。它可以基于比较群体来建立，例如，其中一个确定组中的风险是另一确定组中风险的2倍。它可以是一个范围，例如，其中将所测试群体平均(或不平均)分成群，比如低风险群、中风险群和高风险群；或者四等分，最低的四分之一是具有最高风险的对象而最高四分之一是具有最低风险的对象；或者三等分，最低的三分之一是具有最高风险的对象而最高三分之一是具有最低风险的对象。所述预定值可以是由以下事实预先确定的截断值：与比较组相比，在发生神经疾病(例如多发性硬化)的风险方面，具有不小于所述截断值的凝溶胶蛋白水平的组表现出统计学显著的增加。在一些实施方案中，所述比较组是具有较低凝溶胶蛋白水平的组。
所述预定值可以依赖于所选的具体对象群体。例如，表面上健康的群体可以具有与具有其它病症的对象群体相比不同的“正常”凝溶胶蛋白范围。因此，选择的所述预定值可以考虑对象所属的类群。可以由本领域普通技术人员通过不超过常规试验来选择适当的范围和类群。
优选的体液是血。在一些实施方案中，凝溶胶蛋白的所述预定值是约250mg/L血浆或更低。在一些实施方案中，该预定的凝溶胶蛋白值大约是240mg/、230mg/L、220mg/l、210mg/L、200mg/L、190mg/L、180mg/L、170mg/L、160mg/L、150mg/L、140mg/L、130mg/L、120mg/L、110mg/L、100mg/L、90mg/L、80mg/L、70mg/L、60mg/L、50mg/L、40mg/L、30mg/L、20mg/L或10mg/L血浆或更低。
在一些实施方案中，凝溶胶蛋白的所述预定值是约2.4μM/L血浆或更低。在一些实施方案中，所述预定的凝溶胶蛋白值大约是2.3μM/L、2.2μM/L、2.1μM/L、2.0μM/L、1.9μM/L、1.8μM/L、1.7μM/L、1.6μM/L、1.5μM/L、1.4μM/L、1.3μM/L、1.2μM/L、1.1μM/L、1.0μM/L、0.9μM/L、0.8μM/L、0.7μM/L、0.6μM/L、0.5μM/L、0.4μM/L、0.3μM/L、0.2μM/L血浆或更低。
凝溶胶蛋白的重要预定值是健康对象群体(即没有疾病征兆和症状的对象)的平均值。当然，所述预定值将取决于对象所属对象群体的特征。在确定风险特征时，可以建立许多的预定值。
现在，有商业来源生产供测定凝溶胶蛋白的试剂。例如，这些包括Cytoskeleton(Denver，CO)，Sigma(St.Louis，MO)和Calbiochem(SanDiego，CA)。
在一些实施方案中，本发明还包括测量所述凝溶胶蛋白水平以及疾病(例如神经疾病比如多发性硬化)的第二种标志物的水平。多发性硬化标志物的实例包括例如Rantes、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)抗体(抗-MOG)和髓鞘碱性蛋白(MBP)抗体(抗-MBP)以及ERBB3基因微卫星)。获得所述对象中的凝溶胶蛋白水平。将所述凝溶胶蛋白水平与预定值相比较以建立第一风险值。还获得所述对象中第二种标志物的水平。将所述对象中所述第二种标志物的水平与第二预定值进行比较以建立第二风险值。然后基于第一风险值和第二风险值的组合来表征所述对象发生所述疾病的风险特征，其中第一风险值和第二风险值的组合建立了不同于所述第一和第二风险值的第三风险值。在一些实施方案中，所述第三风险值大于第一和第二风险值中任何一个。优选的供测试对象和预定值如上所述。所述疾病可以是神经疾病，比如上述的任何神经疾病。
本发明提供用于确定对象是将受益于继续治疗还是受益于治疗改变的方法。所述利益典型地是疾病征兆和症状的减少或者从疾病表现中更快的恢复。疾病的征兆、症状和表现是本领域普通技术人员已知的。例如，在多发性硬化中，疾病的征兆和症状包括：肢体软弱、视神经炎、复视、感觉症状、共济失调、膀胱功能障碍、认知障碍、抑郁、热敏感和疲劳。
肢体软弱可以表现为疲劳、步调紊乱和/或灵巧度丧失。
视神经炎通常表现为视觉敏锐度减弱和/或中心视野模糊或色彩饱和度降低。视神经炎的症状可以是轻度的或者可以经几小时或若干天发展到严重的视觉丧失或者完全丧失光感。视觉症状通常是单眼但也可能发生于双侧。眼眶周围疼痛可以发生在视觉敏锐度之前或相伴发生。
复视可以表现为显著的眼球震颤。多发性硬化中另一种常见注释紊乱是水平注视麻痹。
多发性硬化中的感觉症状包括感觉异常(刺痛或灼痛(painfulburning))或感觉过敏(麻木或无感觉(“dead”feeling)。不同身体部位的“不适感”抱怨是常见的。
步调和肢体共济失调是多发性硬化的常见表现。
膀胱功能障碍表现为尿急或排空迟钝、膀胱不完全排空或尿失禁。
认知障碍表现为记忆丧失、注意力减退、解决问题困难、信息处理缓慢以及认知任务转移困难。判断力减弱和情绪不稳定可以是明显的。
出现疲劳在大多数多发性硬化患者中是常见的。疲劳的症状包括一般性运动无力、集中或阅读能力受限、倦怠和困倦。
多发性硬化的其它症状包括构音困难、便秘或肠失禁、面部疼痛、面部无力、面部肌纤维颤搐(面部肌肉的慢性颤动性收缩)和眩晕。
这些方法对患者治疗有重要影响，并且还对临床开发新治疗法有重要影响。确定对象是将受益于继续治疗还是受益于治疗改变在临床上是有用的。本发明方法的临床有用性的一个实例包括识别更少或更多可能对治疗产生反应的对象。本发明的方法还可用于预测或者确定对象是将受益于继续治疗还是将受益于治疗改变。保健专业人员基于对所述对象的预期净利益来选择治疗方案。所述净利益来源于风险/收益比。本发明允许确定对象是将受益于继续治疗还是将受益于治疗改变，从而辅助医生选择治疗法。
例如对于人对象来说，临床有用性的另一个实例包括辅助临床调查人员选择具有高概率获得净收益的对象进行临床试验。预期临床调查人员将使用本发明用于确定临床试验的入选标准。
将受益于继续治疗的对象是其治疗中凝溶胶蛋白水平达到某一预定值或者其凝溶胶蛋白水平正在升高的对象。凝溶胶蛋白的预定值如上所述。将受益于治疗改变的对象是其治疗中凝溶胶蛋白水平未达到某一预定值或者其治疗中凝溶胶蛋白水平未在升高的对象。
如本文所用，“治疗改变”表示现有治疗之剂量的增加或减少、从一种治疗转换为另一种治疗、向现有治疗中增加另一种治疗、或者其组合。从一种治疗转换为另一种治疗可以包括转换为具有高风险特征但其中预期收益之概率增加的治疗。在一些实施方案中，优选的治疗法是提高凝溶胶蛋白水平的治疗法。通过增加现有治疗的剂量而将受益于治疗改变的对象例如是正接受治疗但未接受所述治疗的最大耐受剂量或最大允许剂量的对象，并且该对象的凝溶胶蛋白水平未达到某一预定值。在此情况下，增加现有治疗的剂量，直至所述凝溶胶蛋白水平达到某一预定值。在有些情况下，将现有治疗的剂量从现有剂量增加到更高剂量，但该更高剂量不是所述治疗的最大耐受剂量也不是最大允许剂量。在另一些情况下，所述剂量被增加到所述治疗的最大耐受剂量或最大允许剂量。通过降低现有治疗的剂量而将受益于治疗改变的对象例如是这样的对象，利用更低剂量的所述治疗使其治疗中凝溶胶蛋白水平达到或能够达到某一预定值。
将从一种治疗转换为另一种治疗中受益的对象例如是这样的对象，其正接受所述治疗的最大耐受剂量或最大允许剂量并且其凝溶胶蛋白水平未达到某一预定值。另一个实例是这样的对象，其未接受所述治疗的最大耐受剂量或最大允许剂量但由保健专业人员确定更可能受益于另一种治疗。这种确定是基于，例如，在初始治疗中对象中发生了不想要的副作用或者缺乏对初始治疗的反应。
将通过向现有治疗中加入另一种治疗而受益于治疗改变的对象是例如这样的对象，其正接受治疗但其凝溶胶蛋白水平未达到某一预定值。在这些情况下，向现有治疗中添加另一种治疗。被加到现有治疗中的所述治疗在增加凝溶胶蛋白水平方面可以有不同于现有治疗的作用机制。在有些情况下，可以使用前述治疗改变的组合。
本发明还提供用于确定治疗功效的方法。所述功效通常是所述治疗在增加凝溶胶蛋白水平方面的功效。有时这还被称作阳性反应或有利的反应。可通过凝溶胶蛋白血液测试来确定功效，以确定凝溶胶蛋白水平是否作为治疗结果而增加。在一些实施方案中，功效确定是基于治疗法在增加凝溶胶蛋白和校准白细胞(WBC)计数中的功效。
所述凝溶胶蛋白测量通常表示为μM/L(微摩尔/升)，mg/dl(毫克/分升)或者mg/L(毫克/毫升)。
本发明还提供决定正接受疾病(例如神经疾病比如多发性硬化)治疗的对象中治疗过程的方法。这种治疗过程是基于凝溶胶蛋白的水平来决定。在一些实施方案中，所述对象已经具有所述疾病或有发生该疾病的风险。在一些实施方案中，所述对象发生所述疾病的风险增加，所述对象有一种或更多种患所述疾病的风险因素。
治疗量可以变化，例如通过增加或减少凝溶胶蛋白或药用剂或治疗组合物的量，通过改变所施用的治疗组合物，通过改变给药途径，通过改变给药时间安排等。所述有效量将随要治疗的具体病症、所治疗对象的年龄和身体状况、病症严重性、治疗持续时间、并行治疗(如果需要)、特定给药途径以及类似因素，这些都在健康专业人员的知识和技能范围内。例如，有效量可以依赖于个体已经患所述疾病的持续时间。
有效量是足以提供医学可期望结果的治疗剂的剂量。例如，有效量还可以依赖于个体具有异常降低的凝溶胶蛋白水平的程度。很清楚本发明的治疗剂可用于治疗或预防所述疾病(比如多发性硬化)；也就是说，它们可以在有发生所述疾病(比如多发性硬化)之风险的对象中预防性使用。因此，有效量是能够降低发生多发性硬化之风险、减缓或者可能完全预防发生多发性硬化的量。应该认识到，当在急性情况下使用所述治疗剂时，它被用于防止一种或更多种医学上不期望的结果，这种结果通常来自于这些不良反应。
与决定有效量相关的因素对本领域普通技术人员是公知的，并且通过不超出常规试验就能够确定。通常优选使用本发明药用剂(单独或与其它治疗剂联用)的最大剂量；也就是说，根据合理医学判断的最高安全剂量。然而，本领域普通技术人员将会知道，由于医学原因、心理原因或者几乎任何其它理由，患者可以坚持更低剂量或者可耐受剂量。
本发明药用剂的治疗有效量是指可有效治疗所述疾病的量。例如，就神经疾病比如多发性硬化而言，期望的反应是抑制多发性硬化的发展。这可以包括仅仅暂时减缓多发性硬化的发展，尽管更优选地，它包括永久地停止多发性硬化的发展。这可以通过本领域普通技术人员已知的常规诊断方法来监测。治疗多发性硬化的期望反应还可以是延迟多发性硬化的发病或者甚至阻止多发性硬化的发病。
本发明方法中所用的药用剂优选地是无菌的，并含有有效量的凝溶胶蛋白用于产生期望的反应，其以适于施用给对象的重量或体积单元形式存在。施用给对象的药用剂的剂量可以根据不同的参数选择，尤其是根据所用给药方式和对象的状态来选择。另一些因素包括期望的治疗周期。在所用初始剂量下对象中反应不足的情况下，可以利用更高的剂量(或者由于不同的更局限性的递送途径而更高的有效剂量)，直到患者能够耐受或允许的程度。药用剂的剂量可以由医生或兽医独立地调整，尤其是在有任何并发症的情况下。治疗有效量通常在0.01mg/kg到约1000mg/kg之间变化，优选地在约0.1mg/kg到约500mg/kg之间，最优选在约0.2mg/kg到约250mg/kg，每天给药一次或更多次，持续一天或更多天。
各种给药方式是本领域普通技术人员已知的，它们可以有效地将本发明药用剂递送至期望组织、细胞或体液。给药方法在本申请中另外讨论。本发明不限于本文公开的具体给药方式。本领域标准参考书(例如，Remington′s Pharmaceutical Sciences，20th Edition，Lippincott，Williams and Wilkins，Baltimore MD，2001)提供在药物载体中各种药物制剂和配方的给药方式和递送剂型。可用于施用本发明药用剂的其它方案对于一个本领域普通技术人员也将是已知的，其中剂量、施用时间表、施用部位和施用方式等不同于此处所示的这些。
将本发明药用剂施用给除人以外的哺乳动物，例如用于测试目的或兽医治疗目的，其在实际上与如上所述相同的条件下来进行。本领域普通技术人员将会知道，本发明既适用于人类疾病也适用于动物疾病。因此，本发明意图用于畜牧业和兽医学以及用于人类治疗。
当施用时，以药学可接受的量以及在药学可接受的组合物中来应用本发明的药物制剂。所述术语＂药学可接受的＂意思是指不干扰活性成分生物活性之有效性的无毒材料。这些制剂通常可以含有盐、缓冲剂、防腐剂、相容的载体以及任选地其它治疗剂。当用于医学时，所述盐应该是药学可接受的，但是药学不可接受的盐可以方便地用于制备药学可接受的盐，因此并不排除在本发明范围之外。这些药理学以及药学可接受的盐包括但不限于从以下酸制备的那些：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、柠檬酸、甲酸、丙二酸和琥珀酸等。此外，药学可接受的盐可以制备成碱金属或碱土金属盐，比如钠、钾或钙盐。
如果需要，药用剂或药用组合物可以与药学可接受的载体相组合。如本文所用，术语“药学可接受的载体”意思是指适于施用给人的一种或更多种相容的固体或液体填充剂、稀释剂或包封物质。术语“载体”表示天然或合成的有机或无机成分，与活性成分相组合以促进其应用。药物组合物的组分还能够以一定方式与本发明药用剂共混，以及各组分和药用剂之间相互混合，所述方式应使得没有能显著消弱期望药效的相互作用。
所述药物组合物可以含有适当的如上所述的缓冲剂，包括：醋酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、甘氨酸、硼酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、氢氧化物(以及其它碱)以及前述化合物的药学可接受的盐。所述药物组合物任选地还可以含有适当的防腐剂，比如：苯扎氯铵、氯代丁醇、尼泊金酯以及硫柳汞。
所述药物组合物可以方便地以单位剂型来提供，并且可以通过药学领域公知的任何方法来制备。所有的方法包括将活性剂与载体结合的步骤，它们构成了一种或更多种辅助成分。通常，通过均匀和紧密地将活性化合物与液体载体、精细粉碎的固体载体或者两者相结合然后必要时将产品成型来制备所述组合物。
当期望将所述化合物全身递送时，它可以配制成胃肠外经注射施用，例如经快速推注或连续输注。注射制剂可以与添加的防腐剂一起以单位剂型来提供，例如在安瓿中或者多剂量容器中。所述组合物可以采用例如如下形式：在油性或水性介质中的混悬剂、溶液剂或乳剂，并且可以含有成型剂(formulatory agents)比如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。
胃肠外施用的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外，活性化合物的混悬剂可以制备成适当的油性注射混悬剂。合适的亲脂性溶剂或介质包括脂肪油比如芝麻油，或者合成脂肪酸酯比如油酸乙酯或甘油三酯，或者脂质体。水性注射混悬剂可以含有增加混悬剂粘度的物质，比如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或右旋糖苷。任选地，所述混悬剂还可以含有合适的稳定剂或增加所述化合物溶解性的试剂，以允许制备高度浓缩的溶液。
作为替代，所述活性化合物可以是粉末形式，用于在使用前用合适的介质(例如盐水、缓冲液或无菌无热原水)来重构。
适于口服施用的组合物可以作为离散单元来提供，比如胶囊、片剂、丸剂、锭剂，每个分别含有预定量的活性化合物(例如凝溶胶蛋白)。其它组合物包括在水性液体或非水液体中的混悬剂，比如糖浆、酏剂、乳剂或凝胶。
供口服使用的药物制剂可以作为固体赋形剂获得，任选地研磨所得混合物，以及需要时在添加适当助剂后加工颗粒混合物，从而获得片剂或糖锭核心。适当的赋形剂尤其是填充剂，比如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇或纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，还可以添加崩解剂，比如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或海藻酸或其盐比如海藻酸钠。任选地，口服制剂还可以配制在盐水或缓冲液即EDTA中，用于中和内酸条件，或者可以不加任何载体来施用。
此外，还明确包括的是上述一种或多种组分的口服剂型。所述一种或多种组分可以被化学修饰，使得所述衍生物的口服递送是有疗效的。一般来说，预期的化学修饰是将一种部分(moiety)附着至所述组分分子自身，由此所述部分允许(a)抑制蛋白水解；和(b)从胃或肠吸收入血流。还期望的是所述一种或多种组分的整体稳定性的增加以及体内循环时间的增加。这种部分的实例包括：聚乙二醇、乙二醇和丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖苷、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮以及聚脯氨酸。Abuchowski and Davis，1981，＂Soluble Polymer-EnzymeAdducts＂In：Enzymes as Drugs，Hocenberg and Roberts，eds.，Wiley-Interscience，New York，NY，pp.367-383；Newmark，et al.，1982，J.Appl.Biochem.4：185-189.能够使用的另一些聚合物是聚l，3-二氧戊环以及聚l，3，6-tioxocane。如上所示，优选用于药用的是聚乙二醇部分。
对于所述组分(或衍生物)，所述释放位置可以是胃、小肠(十二指肠、空肠或回肠)或大肠。本领域技术人员有可利用的剂型，这些剂型不在胃中溶解而将在十二指肠或在肠中其它地方释放所述物质。优选地，通过保护凝溶胶蛋白或者通过将生物活性物质在胃部环境以外(比如在肠中)释放，所述释放将避免了胃部环境的有害作用。
为了确保完全的胃部抵抗，不可透过至少pH5.0的包衣是必需的。用作肠溶包衣的更常见的惰性成份的实例是醋酸纤维素偏苯三酸酯(CAT)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、HPMCP 50、HPMCP 55、聚醋酸乙烯酯邻苯二甲酸酯(PVAP)、Eudragit L30D、Aquateric、醋酸邻苯二甲酸纤维素(CAP)、Eudragit L、Eudragit S以及虫胶。这些包衣剂可以用作混合膜。
包衣剂或包衣剂混合物还可以用在不是为胃保护而设计的片剂上。这可以包括糖衣、或者使片剂更易于吞咽的包衣。胶囊可以由硬壳(比如明胶)组成，用于递送干的治疗剂即粉末；对于液体形式，可以使用软明胶壳。扁囊剂(cachets)的壳材料可以是厚的淀粉或其它可食用纸。对于丸剂、锭剂、模制片剂或研制片剂，可以使用湿法成团技术。
所述治疗剂可以作为粒径约1mm的颗粒或小丸形式的精细多颗粒包含在制剂中。用于胶囊施用的材料的剂型还可以是粉末剂、轻度压缩的栓塞(plug)或者是片剂。可以通过压缩来制备治疗剂。
着色剂和芳香剂都可以包含。例如，可以配制凝溶胶蛋白(比如通过脂质体或微球包封)，然后进一步包含在可食用制品比如含着色剂和芳香剂的冷冻饮料中。
可以用惰性物质来稀释或增加治疗剂的体积。这些稀释剂可以包括碳水化合物，尤其是甘露醇、α-乳糖、无水乳糖、纤维素、蔗糖、改性右旋糖苷和淀粉。有些无机盐也可以用作填充剂，包括磷酸钙、碳酸镁和氯化钠。一些可商业供应的稀释剂是Fast-Flo、Emdex、STA-Rx1500、Emcompress和Avicell。
崩解剂可以包含在制成固体剂型的治疗剂的制剂中。用作崩解剂的物质包括但不限于淀粉，包括基于淀粉的商品崩解剂Explotab。乙醇酸淀粉钠、Amberlite、羧甲基纤维素钠、超级支链淀粉(ultramylopectin)、海藻酸钠、明胶、橙皮、酸性羧甲基纤维素、天然海绵和膨润土都可以使用。另一种崩解剂形式是不溶性阳离子交换树脂。粉末化树胶可以用作崩解剂和粘合剂，这可以包括比如以下的粉末化树胶：琼脂、刺梧桐树胶或黄蓍胶。海藻酸及其钠盐也可以用作崩解剂。
粘合剂可以用于将治疗剂保持在一起以形成硬片，其包括来自天然产物的材料，比如***胶、黄蓍胶淀粉和明胶。其它还包括甲基纤维素(MC)、乙基纤维素(EC)和羧甲基纤维素(CMC)。聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)都可以用于醇溶液中使治疗剂成颗粒。
抗磨剂(anti-frictional agent)可以包含在治疗剂的制剂中以在制剂过程中防止粘连。润滑剂可以用作治疗剂和模具壁之间的层，这些可以包括但不限于硬脂酸(包括其镁盐和钙盐)、聚四氟乙烯(PTFE)、液体石蜡、植物油和蜡。也可以使用可溶性润滑剂，比如月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁、各种分子量的聚乙二醇、Carbowax4000和6000。
可以添加助流剂，助流剂能够提高配制过程中药物的流动性并在压制过程中辅助重排。助流剂可以包括淀粉、滑石粉、煅制二氧化硅和水化铝硅酸盐。
为了辅助治疗剂溶解到水性环境中，可以添加表面活性剂作为润湿剂。表面活性剂可以包括阴离子去污剂，比如月桂基硫酸钠、磺基琥珀酸二辛基钠和磺酸二辛基钠。可以使用阳离子去污剂，它们可以包括苯扎氯铵或苄索氯铵(benzethomium chloride)。可以作为表面活性剂包含在制剂中的潜在的非离子去污剂的列表是聚桂醇400(lauromacrogol 400)，硬脂酸聚乙二醇酯40(polyoxyl 40 stearate)，聚乙二醇氢化蓖麻油10、50和60，甘油单硬脂酸酯，聚失水山梨醇酯40、60、65和80，蔗糖脂肪酸酯，甲基纤维素和羧甲基纤维素。这些表面活性剂可以单独或作为不同比例的混合物存在于凝溶胶蛋白的制剂中。
可以口服使用的药物制备物包括由明胶制成的推入-契合胶囊(push-fit capsule)，以及由明胶和增塑剂(比如甘油或山梨醇)制成的软密封胶囊。推入-契合胶囊可以含有与填充剂比如乳糖、粘合剂比如淀粉和/或润滑剂比如滑石粉或硬脂酸镁以及任选地稳定剂相混合的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可以溶解或悬浮于适当的液体(比如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇)中。此外，可以添加稳定剂。
还可以使用配制成供口服施用的微球。这种微球已经在现有技术中充分描述。所有的口服施用制剂应该制成适于这种施用的剂量。
对于颊部施用(buccal administration)，组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂形式。
对于吸入施用，用于本发明的化合物可以方便地以气雾剂形式从加压包装或喷雾器中递送，其中使用适当的抛射剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。对于加压气雾剂而言，可以通过提供递送计量量的阀来确定剂量单位。用于吸入器或吹入器中的(例如明胶)胶囊和药筒可以配制成含有化合物和适当粉末基质(比如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
本文还涉及经肺递送凝溶胶蛋白。凝溶胶蛋白通过吸入递送至哺乳动物肺部，并穿过肺部上皮内层进入血流。吸入分子的另一些报道包括：Adjei et al.，1990，Pharmaceutical Research，7：565-569；Adjei et al.，1990，International Journal of Pharmaceutics，63：135-144(醋酸亮丙瑞林)；Braquet et al.，1989，Journal of Cardiovascular Pharmacology，13(suppl.5)：143-146(内皮素-1)；Hubbard et al.，1989，Annals ofInternal Medicine，Vol.III，pp.206-212(αl-抗胰蛋白酶)；Smith et al.，1989，J.Clin.Invest.84：1145-1146(a-1-蛋白酶)；Oswein et al.，1990，＂Aerosolization of Proteins＂，Proceedings of Symposium on RespiratoryDrug Delivery II，Keystone，Colorado，March，(重组人生长激素)；Debset al.，1988，J.Immunol.140：3482-3488(干扰素-γ和肿瘤坏死因子α)以及Plate et al.，美国专利号5,284,656(粒细胞集落刺激因子)。经肺递送用于全身作用的药物的方法和组合物描述于美国专利No.5,451,569，其于1995年9月19日授权给Wong等人。
用于实施本发明的还包括设计用于经肺递送治疗性产品的广泛的机械装置；包括但不限于喷雾器、计量剂量吸入器和粉末吸入器，所有这些都是本领域技术人员熟悉的。
适于实施本发明的商业供应装置的一些具体实例是Ultravent吸入器(制造商为Mallinckrodt，Inc.，St.Louis，Missouri)；Acorn II喷雾器(制造商为Marquest Medical Products，Englewood，Colorado)；Ventolin计量剂量吸入器(制造商为Glaxo Inc.，Research Triangle Park，North Carolina)和Spinhaler粉末吸入器(制造商为Fisons Corp.，Bedford，Massachusetts)。
所有这些装置需要使用适于分配凝溶胶蛋白的剂型。通常，每种剂型特异性针对所用装置类型，可能包括使用适当的抛射剂材料，以及可用于治疗的常用稀释剂、助剂和/或载体。此外，还包括使用脂质体、微囊或微球、包合物或其它类型的载体。根据化学修饰类型或所用装置类型，化学修饰的凝溶胶蛋白还可以制备成不同剂型。
适用于(喷射或超声)喷雾器的剂型通常将包含浓度为约0.1至25mg生物活性凝溶胶蛋白/ml溶液的溶于水中的凝溶胶蛋白。所述剂型还可以包含缓冲剂和单糖(例如用于稳定凝溶胶蛋白和调节渗透压)。喷雾器剂型还可以含有表面活性剂，以减少或防止在形成气雾剂中因溶液雾化引起的表面诱导的凝溶胶蛋白聚集。
用于计量剂量吸入装置的剂型通常将包含含有凝溶胶蛋白的精细粉末，其在表面活性剂辅助下悬浮于抛射剂中。抛射剂可以是用于此目的的任何常规物质，比如氯氟烃、氢氯氟烃(hydrochlorofluorocarbon)、氢氟烃(hydrofluorocarbon)或烃类，包括三氯氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟乙烷和1，1，1，2-四氟乙烷或者它们的组合。合适的表面活性剂包括失水山梨醇三油酸酯和大豆卵磷脂。油酸也可以用作表面活性剂。
用于从粉末吸入装置中分配的剂型将包含含有凝溶胶蛋白的精细干燥粉末，其还可以包含填充剂(bulking agent)，比如乳糖、山梨醇、蔗糖或甘露醇，填充剂的量足以促进从装置中分配粉末，例如制剂重量的50-90％。凝溶胶蛋白最有利地应该制成平均粒径小于10mm(或微米)(最优选0.5-5mm)的颗粒形式，以最有效地递送至远端肺。
本发明药物组合物的经鼻(鼻内)递送也包括在内。经鼻递送允许在将治疗产品施用至鼻后直接将本发明的药物组合物传递血流，而不必将产品沉积在肺中。经鼻递送的剂型包括使用右旋糖苷(dextran)或环状右旋糖苷(cyclodextran)的那些。
对于经鼻递送，可用的装置是附带计量剂量喷雾器的小硬瓶。在一个实施方案中，通过使本发明溶液的药物组合物进入体积确定的腔室来递送所述计量剂量，所述腔室具有能够气雾化的孔径，当腔室中液体被压缩时通过形成喷雾得到气雾剂。压缩所述腔室以施用本发明的药物组合物。在一个具体实施方案中，所述腔室是活塞构造。这种装置有商业供应。
作为替代，使用具有孔或开口的塑料挤瓶，所述孔或开口大小适于通过在压挤时形成喷雾而使气雾剂气溶胶化。所述开口通常发现于瓶子的顶部，并且顶部一般逐渐变细以部分匹配鼻腔通道内，用于高效施用气雾剂。优选地，经鼻吸入器提供计量量的气雾剂，用于施用确定剂量的药物。
所述化合物还可以配制成直肠或***组合物，比如栓剂或置留灌肠剂，例如其中含有常规栓剂基质比如可可脂或其它甘油酯。
除了前面所述的剂型以外，所述化合物还可以配制成储库(depot)制剂。这种长时间作用的剂型可以用适当的聚合物或疏水材料(例如作为可接受油中的乳液)或离子交换树脂来配制，或者配制成低溶解性(sparingly soluble)的衍生物，例如低溶解性的盐。
所述药物组合物还可以包含适当的固体或凝胶相载体或赋形剂。这种载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物比如聚乙二醇。
例如，合适的液体或固体药物制剂形式是供吸入的水溶液或盐水溶液，微囊化、encochleated、包被到显微金颗粒上、包含在脂质体中、喷雾化的气雾剂，供植入皮肤中的小粒(pellet)，或者干燥到供划入皮肤的尖锐物品上。所述药物组合物还可以包括颗粒剂、粉末、片剂、包衣片剂、(微)胶囊、栓剂、糖浆、乳剂、混悬剂、乳膏、滴剂或用于长时间释放活性化合物的制剂，在其制备中如上所述常规使用赋形剂和添加剂和/或助剂，比如崩解剂、粘合剂、包衣剂、膨胀剂、润滑剂、着味剂、甜味剂或助溶剂。所述药物组合物适用于各种药物递送***。关于药物递送方法的简要综述请见Langer，Science 249：1527-1533，1990，其通过引用并入本文。
凝溶胶蛋白和任选地其它治疗可以其自身或以可药用盐的形式来施用。
治疗剂(尤其包括但不限于凝溶胶蛋白)可以在颗粒中提供。本文所用的颗粒是指纳米或微颗粒(或者有时更大)，其可以完全或部分由凝溶胶蛋白或本文所述的其它治疗剂构成。所述颗粒可以在被包衣(包括但不限于肠溶包衣)围绕的核心中含有所述治疗剂。治疗剂还可以分散在颗粒中。治疗剂还可以吸附到颗粒中。所述颗粒可以有任何级别的释放动力学，包括零级释放、一级释放、二级释放、延迟释放、持续释放、立即释放以及其任意组合等。除了治疗剂以外，所述颗粒还可以包含药学和医学领域中常规使用的任何材料，包括但不限于易蚀材料、非易蚀材料、生物降解材料、或非生物降解材料或其组合。所述颗粒可以是处于溶液或半固体状态的含有凝溶胶蛋白的微胶囊。所述颗粒可以是几乎任何形状。
非生物降解材料和生物降解材料都可以用于制造供递送治疗剂的颗粒。这些聚合物可以是天然或合成聚合物。基于期望释放时间来选择所述聚合物。尤其重要的生物粘附聚合物包括下文所述的生物易蚀水凝胶：H.S.Sawhney，CP.Pathak and J.A.Hubell in Macromolecules，(1993)26：581-587，其教导并入本文。这些包括聚透明质酸、酪蛋白、明胶、谷胶酪蛋白、聚酸酐、聚丙烯酸、海藻酸盐、甲壳素、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸基酯)、聚(甲基丙烯酸月桂基酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙基酯)、聚(丙烯酸异丁基酯)和聚(丙烯酸十八醇酯)、
所述治疗剂还可以包含在控制释放***中。术语“控制释放”意思是指从制剂中释放药物的方式和特征谱受到控制的任何含药剂型。这涉及立即释放以及非立即释放剂型，其中非立即释放剂型包括但不限于持续释放和延迟释放剂型。术语“持续释放”(也称“延长释放”)通常用于表示提供在一段长时间中逐渐释放药物的药物剂型，并且尽管不必需但是优选地导致在一段长时间中持续恒定的血药水平。术语“延迟释放”通常用于表示在施用剂型和药物释放之间有时间延迟的药物剂型。“延迟释放”可以包括或不包括药物在一段长时间中的逐渐释放，因此可能是也可能不是“持续释放”。
使用长期持续释放的植入物对于治疗慢性疾病特别适合。如本文所用，“长期”释放是指植入物被构造和配置成在至少7天(优选30至60天)中递送治疗水平的活性成分。长期持续释放植入物是本领域技术人员公知的，包括上述的一些释放***。
本发明还涉及药盒的用途。在本发明的一些方面，所述药盒可以包含药物制剂小管(vial)、药物制剂稀释剂小管以及凝溶胶蛋白。所述含药物制剂之稀释剂的小管是任选的。稀释剂管含有稀释剂比如生理盐水，用于稀释可能的凝溶胶蛋白的浓缩溶液或冻干粉末。使用说明可以包括将特定量的稀释剂与特定量的浓缩药物制剂相混合的说明，从而制备最终的注射剂或输注剂。使用说明可以包括用有效量的凝溶胶蛋白治疗对象的说明。还可以理解，无论含有所述制剂的容器是瓶、带间隔的管、带间隔的安瓿、输注袋等，都可以含有标志比如常规标识，当所述制剂已经高压灭菌或其它灭菌处理时所述标志将改变颜色。
本发明进一步通过以下实施例举例说明，这些实施例无论如何不构成进一步限制。本申请引用的所有参考(包括参考文献、授权专利、专利申请公开和共同未决的专利申请)的全部内容经引用明确并入本文。
实施例
血浆凝溶胶蛋白是一种分泌蛋白，以平均250mg/l的浓度循环于人细胞外液。各种类型的组织损伤导致血浆凝溶胶蛋白水平的长时间降低。在急性创伤、烧伤、脓毒症、大手术和造血干细胞移植患者中遇到的严重组织损伤之后，首先凝溶胶蛋白水平降低至正常水平的大约不到25％，并由此可预见到重要的护理并发症，这可以通过以下来测量：辅助呼吸需要、加护病房居住以及整个住院期的时间长度、死亡和特异性后遗症比如继发性肺损伤(如成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、急性肺损伤(ALI)、多器官功能障碍综合征(MODS))。在动物模型中相似的血浆凝溶胶蛋白减少在肺通透性改变和炎症之前出现，重组血浆凝溶胶蛋白的输注能改善这些作用。
凝溶胶蛋白消耗的推测机制是它结合因组织破坏而暴露的细胞中高丰度肌动蛋白。凝溶胶蛋白结合生物活性炎症介质，如溶血磷脂酸、二腺嘌呤磷酸酯、Aβ肽(推测在阿尔茨海默病中是致病因素)、血小板活化因子以及可能的其它物质；因此，因外周血凝溶胶蛋白消耗所致血中这种结合的丧失可以解释继发性组织损伤的促进以及凝溶胶蛋白置换对它的抑制作用。此外，用血浆凝溶胶蛋白治疗小鼠阻止了内毒素注射的致死性并发症并且在盲肠结扎-穿刺细菌脓毒症模型中显著延迟了死亡。
尽管凝溶胶蛋白的保护性作用机制尚不清楚，证据表明它抑制多种引起关键性护理并发症的炎症介质，这是因为它们晚于原发性损伤才出现或者由于它们的持续性。凝溶胶蛋白在遗传上是高度保守的，没有在人中有免疫原性的证据。滴注重组人血浆凝溶胶蛋白到人的气道中或者经静脉输注到啮齿动物和非人灵长类中没有观察到毒性。
实验性***反应性脑脊髓炎(EAE)发病的时间过程与偏好受凝溶胶蛋白影响的其它继发性损伤的延迟发作相关，在EAE发病过程中，淋巴细胞启动了对神经元髓鞘的免疫反应，然后各种效应细胞参与了神经元破坏。由这些信息推测的假说是：响应于EAE模型中造成的初始损伤，血浆凝溶胶蛋白水平可能下降。如果是这样，外周凝溶胶蛋白置换可能改善继发性损伤。
我们检验了以下假说：外周施用凝溶胶蛋白能够反映和影响中枢神经***的病理过程。实验利用具有EAE实验性***反应性脑脊髓炎(EAE)的小鼠进行，这是人多发性硬化(MS)的一种经典啮齿类动物模型(DittelB，Merchant R，Janeway C，Jr.Evidence for Fas-dependent andFas-independent mechanisms in the pathogenesis of experimentalautoimmune encephalomyelitis.J Immunol 1999；162：6392-6400)。支持该假说的是关于凝溶胶蛋白在阿尔茨海默病(AD)中可能作用的文献。据报道，凝溶胶蛋白是人AD斑块的一种成分，其结合Aβ肽，当腹膜内施用时，从表达高水平Aβ肽的转基因AD小鼠的AD脑中除去Aβ肽(MatsuokaY，Saito M，LaFrancois J，et al.Novel therapeutic approach for thetreatment of Alzheimer′s disease by peripheral administration of agentswith an affinity to β-amyloid.J.Neurosci 2003；23：29-33)。
如图1所示，EAE原发性损伤发作后凝溶胶蛋白水平下降，其包括将已被引发附着髓鞘碱性蛋白的T细胞过继性转移至经辐照的测试小鼠中。“对照”条表明辐照本身急剧降低了血浆凝溶胶蛋白水平，这与以前在经历干细胞移植的人中的发现相一致(DiNubile M，Stossel T，Ljunghusen O，Ferrara J，Antin J.Prognostic implications of decliningplasma gelsolin levels after allogenic stem cell transplantation.Blood 2002；100：4367-4371)。到第四天时，对照和经辐照小鼠具有等同的血浆凝溶胶蛋白水平。然而，对照动物的凝溶胶蛋白水平持续升高至第七天，此后维持恒定。EAE动物的水平进一步降低，虽然其后来有所上升，但是直至21天时仍然持续低于对照中水平。如图2所示，这种间隔对应EAE神经表现的发作、恶化和好转。
进行治疗试验，其中在第十天接受一次皮下(1X)或在第2、5和10天接受三次给药(3X)后，一组测试动物接受8mg牛血清白蛋白或8mg重组人血浆凝溶胶蛋白。这种施用途径和剂量以前已经表现出将因脓毒症减少50％的凝溶胶蛋白水平提高到正常水平。水平下降半衰期为24小时。如图2所示，3次凝溶胶蛋白处理推迟了发作、显著减弱了严重程度并且加强了症状的好转。
图3表示来自现有出版物的结果，其中描述了缺乏整合素功能的动物中的EAE过程，整合素与这种模型和人多发性硬化的神经元破坏有关。两个图板表示抗α4整合素的单克隆抗体的作用，另一个描述缺乏β2整合素之小鼠中EAE的过程(Kent S，Karlik S，Cannon C，et al.A monoclonalantibody to α4 integrin suppresses and reverses active experimentalallergic encephalomyelitis.J Neuroimmunol 1995；58：1-10；Bullard D，HuX，Schoeb T，Axtell R，Raman C，Barnum S.Critical requirement ofCG11b(Mac-2)on T cells and accessory cells for development ofexperimental autoimmune encephalomyelitis.J Immunol 2005；175：6327-62330)。数据显示，在EAE模型中凝溶胶蛋白置换的作用与整合素靶向同样好或比整合素靶向更好。抗α4整合素的抗体是产品Tysabri中的活性成分，它是由Biogen-Idec和Elan开发的，经FDA批准为极有效对抗多发性硬化(Miller D，Khan O，Sheremata W，et al.A controlledtrial of Natalizumab for relapsing multiple sclerosis.N.Engl J Med 2003；348：15-23)，然后因严重的并发症多病灶脑白质炎(polyfocalmeningoleukoencephalitis(PML))而从市场上撤出。
总之，实验从两个方面支持所提出的假说，即血浆凝溶胶蛋白水平的下降出现于EAE的神经表现之前，以及用血浆凝溶胶蛋白***性治疗可以预防和/或抑制这些表现。这些观察的一个临床关联是，连续监测血浆凝溶胶蛋白水平可以成为多发性硬化控制策略的一部分，从而标出在神经性破坏发生之前进行加强治疗的时间。另一个关联是，该治疗强化的一部分可能包括凝溶胶蛋白治疗。第三个关联是，血浆凝溶胶蛋白水平的预防性升高可能保护多发性硬化患者免于神经后遗症。
凝溶胶蛋白和白蛋白测量：
通常通过其刺激肌动蛋白核化的能力在重复样品中测量血浆凝溶胶蛋白(Janmey，P.A.，Chaponnier，C，Lind，S.E.，Zaner，K.S.，Stossel，T.P.& Yin，H.L.(1985)Biochemistry 24，3714-23)。按1:5倍将小鼠血浆稀释于0.1M KCl、0.2mM MgCl2、1mM EGTA、0.5mM ATP、0.5mM β-巯基乙醇、10mM Tris-HCl缓冲液、pH7.4(缓冲液B)中。在6x50mm硼硅酸盐培养管中，将5μl稀释血浆样品加入到280μl补充有1.5mM CaCl2和0.4μM类鬼笔环肽(Phallacidin)的缓冲液B中。通过将15μl 20μM芘肌动蛋白加入到0.5mM ATP、5mM β-巯基乙醇、0.2mM CaCl2、0.2mMTris-HCl缓冲液、pH7.4(缓冲液A)中，来启动肌动蛋白的聚合反应。激发和发射波长分别是366和386nm的条件下，在发光荧光计中持续监测聚合反应200秒。凝溶胶蛋白的浓度从重组人pGSN的标准曲线上估计。用于这些分析的贮备芘肌动蛋白按照Kouyama和Mihashi的方法制备(Kouyama，T.& Mihashi，K.(1981)Eur JBiochem 114，33-8)，-80℃下分装保存，解冻并用10x缓冲液A稀释，放置过夜后250,000xg下离心30分钟。
通过肌动蛋白核化测定来定量凝溶胶蛋白与Western印迹测量得到的水平有很好的相关性(Mounzer，K.C，Moncure，M.，Smith，Y.R.&Dinubile，M.J.(1999)Am J Respir Crit Care Med 160，1673-81)。这种测定有高度特异性。然而，该测定不能区分cGSN和pGSN。也不是物种特异性的，因此仅可以大致估计用重组人pGSN处理的小鼠中总凝溶胶蛋白的水平。复合至pGSN的脂质不影响pGSN的肌动蛋白核化活性(Janmey，P.A.，Iida，K.，Yin，H.L.& Stossel，T.P.(1987)J Biol Chem 262，12228-36)。
根据制造商说明，用市售试剂盒(Stanbio，Boerne，TX)比色法测量白蛋白水平。
等同方案
认为上述书面说明足以使本领域技术人员实施本发明。本发明不限于实施例所提供的范围，因为实施例仅意图举例说明本发明的一个或更多方面。其他功能上等同的实施方案被认为是在本发明的范围内。除了本文所示和描述的以外，基于上述说明，可知本发明的各种变化对于本领域技术人员而言是显而易见的。本发明的每一限定可以包括本发明的各种变化。因此可以预期，涉及任何一种要素或要素组合的本发明的各种限定可以包括在本发明的每个方面中。本发明的应用不限于附图中所列或举例说明的构建细节以及组成安排。本发明能够有其他实施方案，并且能够以各种方式实现或实施。
此外，此处所用措辞和用语用于描述性目的，不应当被视为是限制性的。使用“包括”、“包含”或“具有”、“含有”、“涉及”及其变化意思是包括其后所列的项目及其等同方案以及另外的项目。
本申请所引用的所有参考文献、专利和专利申请通过引用全部并入本文。

Claims (42)

1.表征对象未来发生神经疾病的风险特征的方法，其包括：
获得所述对象中的凝溶胶蛋白水平，
将所述凝溶胶蛋白水平与预定值进行比较，和
基于所述凝溶胶蛋白水平与所述预定值的比较来表征所述对象发生神经疾病的风险特征，其中凝溶胶蛋白水平处于或低于该预定水平指示所述对象有升高的风险发生该神经疾病，以及其中凝溶胶蛋白水平处于或高于该预定水平则指示所述对象没有升高的风险发生该神经疾病。
2.权利要求1的方法，其中所述神经疾病是脱髓鞘疾病。
3.权利要求1的方法，其中所述神经疾病是多发性硬化。
4.权利要求3的方法，其中所述多发性硬化是急性、复发性、缓解型、稳定的、慢性或可能的。
5.权利要求1的方法，其中所述神经疾病是急性播散性脑脊髓炎，横贯性脊髓炎，进行性多病灶脑白质病，肾上腺脑白质营养不良，肾上腺脊髓神经病，脑桥中央髓鞘溶解症，视神经炎，视神经脊髓炎(Devic’s综合征)，Leber’s遗传性视神经病，热带痉挛性下肢轻瘫(HTLV-相关的脊髓病)，或者格林-巴利综合征(也称急性炎症性脱髓鞘多神经病，急性特发性多神经根神经炎，急性特发性多神经炎，French脊髓灰质炎和Landry’s上行性麻痹)。
6.权利要求1的方法，其中所述凝溶胶蛋白水平是所述对象体液中的水平。
7.权利要求6的方法，其中所述体液是血、血浆、血清、脑脊液(CSF)或尿。
8.权利要求1的方法，其中所述凝溶胶蛋白水平是所述对象身体组织中的水平。
9.权利要求8的方法，其中所述身体组织是神经组织。
10.权利要求1的方法，其中所述预定值是约250mg/L血浆或更低。
11.权利要求1的方法，其中所述对象是表面上健康的对象。
12.权利要求1的方法，还包括实施一或更多次检验以评价所述神经疾病。
13.权利要求12的方法，其中所述检验是神经科检查、脑电图(EEG)、脑脊液(CSF)检查、诱发电位(感觉、运动、视觉、本体感觉、或认知)、肌电图(EMG)、神经传导、计算机断层扫描(CT)成像、磁共振成像(MRI)、磁共振血管成像(MRA)、回声-平面MR成像、正电子发射断层扫描(PET)、脊髓造影或血管造影。
14.治疗患有多发性硬化或有发生多发性硬化之风险的对象的方法，其包括：
向需要这种治疗的对象施用有效量的凝溶胶蛋白以治疗所述对象。
15.治疗患有多发性硬化或有发生多发性硬化之风险的对象的方法，其包括：
向需要这种治疗的对象施用有效量的凝溶胶蛋白以将所述对象中的凝溶胶蛋白水平提高到预定值之上。
16.权利要求14或15的方法，其中所述对象在其它方面没有需要用凝溶胶蛋白治疗的适应症。
17.权利要求14或15的方法，其中所述多发性硬化是急性、慢性、复发性、缓解型、稳定的或可能的。
18.权利要求14或15的方法，其中所述凝溶胶蛋白是血浆凝溶胶蛋白(pGSN)、胞浆凝溶胶蛋白(cGSN)、绒毛蛋白样蛋白、绒毛蛋白、capG、非飞行蛋白质、截断蛋白、肌割蛋白、微丝肌割蛋白、原绒毛蛋白或超绒毛蛋白。
19.权利要求14或15的方法，其中经口服、舌下、含服、鼻内、静脉内、肌肉内、鞘内、腹膜内或皮下施用所述凝溶胶蛋白。
20.权利要求14或15的方法，其中预防性施用所述凝溶胶蛋白。
21.权利要求14或15的方法，其还包括施用用于治疗多发性硬化的第二药剂。
22.权利要求21的方法，其中所述第二药剂是干扰素(IFN)-β1b(Betaseron或Betaferon)，干扰素(IFN)-β1a(Avonex，Rebif)，醋酸格拉太咪尔(考帕松)，米托蒽醌(能减瘤)，硫唑嘌呤，环孢菌素，氨甲喋呤，环磷酰胺，静注免疫球蛋白，***，甲基***，***龙，甲基***龙，***，促肾上腺皮质激素(ACTH)，促皮质素，2-氯脱氧腺嘌呤(2-CDA，克拉屈滨)，肌苷，白介素-2抗体(赛尼哌，达利珠单抗)，亚叶酸，特立氟胺，雌孕激素类，去氧孕烯，炔雌醇，BHT-3009，ABT-874，卡介(BCG)苗，T细胞疫苗，CNTO1275，利妥昔单抗，Tysabri(那他珠单抗)，N-乙酰半胱氨酸，米诺环素，RO0506997或他汀类药物。
23.治疗对象以降低多发性硬化之风险的方法，其包括
基于已知对象具有低于正常水平的凝溶胶蛋白来选择对象，和
向所述对象施用有效量的凝溶胶蛋白和/或第二药剂以降低该对象发生多发性硬化的风险。
24.治疗对象以降低多发性硬化之风险的方法，其包括
基于已知对象具有低于正常水平的凝溶胶蛋白来选择对象，和
向所述对象施用有效量的凝溶胶蛋白和/或第二药剂以将该对象中的凝溶胶蛋白水平提高到预定值之上。
25.权利要求23或24的方法，其中所述对象在其它方面没有需要用凝溶胶蛋白治疗的适应症。
26.权利要求23或24的方法，其中所述多发性硬化是急性、复发性、缓解型、稳定的、慢性或可能的。
27.权利要求23或24的方法，其中所述凝溶胶蛋白是血浆凝溶胶蛋白(pGSN)、胞浆凝溶胶蛋白(cGSN)、绒毛蛋白样蛋白、绒毛蛋白、capG、非飞行蛋白质、截断蛋白、肌割蛋白、微丝肌割蛋白、原绒毛蛋白或超绒毛蛋白。
28.权利要求23或24的方法，其中所述对象是表面上健康的。
29.权利要求23或24的方法，其还包括施用用于治疗多发性硬化的第二药剂。
30.权利要求29的方法，其中所述第二药剂是干扰素(IFN)-β1b(Betaseron或Betaferon)，干扰素(IFN)-β1a(Avonex，Rebif)，醋酸格拉太咪尔(考帕松)，米托蒽醌(能减瘤)，硫唑嘌呤，环孢菌素，氨甲喋呤，环磷酰胺，静注免疫球蛋白，***，甲基***，***龙，甲基***龙，***，促肾上腺皮质激素(ACTH)，促皮质素，2-氯脱氧腺嘌呤(2-CDA，克拉屈滨)，肌苷，白介素-2抗体(赛尼哌，达利珠单抗)，亚叶酸，特立氟胺，雌孕激素类，去氧孕烯，炔雌醇，BHT-3009，ABT-874，卡介(BCG)苗，T细胞疫苗，CNTO1275，利妥昔单抗，Tysabri(那他珠单抗)，N-乙酰半胱氨酸，米诺环素，RO0506997或他汀类药物。
31.治疗具有低于正常水平之凝溶胶蛋白的对象的方法，其包括：
(i)使用用于治疗多发性硬化或降低其风险的第一治疗来治疗所述对象，
(ii)获得所述对象中的凝溶胶蛋白水平，
(iii)将在(ii)中所得凝溶胶蛋白水平与预定值进行比较，该预定值对应于预定的凝溶胶蛋白水平，并且如果未达到该预定的凝溶胶蛋白水平，则
(iv)使用用于治疗多发性硬化或降低其风险的第二药剂来治疗所述对象，并重复(ii)和(iii)直至达到该预定的凝溶胶蛋白水平。
32.权利要求31的方法，其中所述预定的凝溶胶蛋白水平是表面上健康的对照群体中的凝溶胶蛋白水平。
33.权利要求31的方法，其中所述预定的凝溶胶蛋白值是约250mg/L血浆或更高。
34.权利要求31的方法，其中所述第二药剂是干扰素(IFN)-β1b(Betaseron或Betaferon)，干扰素(IFN)-β1a(Avonex，Rebif)，醋酸格拉太咪尔(考帕松)，米托蒽醌(能减瘤)，硫唑嘌呤，环孢菌素，氨甲喋呤，环磷酰胺，静注免疫球蛋白，***，甲基***，***龙，甲基***龙，***，促肾上腺皮质激素(ACTH)，促皮质素，2-氯脱氧腺嘌呤(2-CDA，克拉屈滨)，肌苷，白介素-2抗体(赛尼哌，达利珠单抗)，亚叶酸，特立氟胺，雌孕激素类，去氧孕烯，炔雌醇，BHT-3009，ABT-874，卡介(BCG)苗，T细胞疫苗，CNTO1275，利妥昔单抗，Tysabri(那他珠单抗)，N-乙酰半胱氨酸，米诺环素，RO0506997或他汀类药物。
35.评价用于治疗对象中多发性硬化或降低其风险的治疗之功效的方法，其包括：
(i)获得对象中的凝溶胶蛋白水平，其中所述对象接受用于治疗多发性硬化或降低其风险的药剂的治疗，
(ii)将在(i)中所得的凝溶胶蛋白水平与预定值进行比较，该预定值对应于表面上健康的对照群体中的凝溶胶蛋白水平，和
(iii)确定(i)中的凝溶胶蛋白水平是否处于或高于所述预定水平，所述确定用于指示所述治疗是否有效。
36.权利要求35的方法，其中重复步骤(i)和步骤(ii)和/或步骤(iii)，以在一段时间中监测所述对象的凝溶胶蛋白水平。
37.权利要求35的方法，其中所述预定值是约250mg/L血浆或更低。
38.权利要求35的方法，其中所述第二药剂是凝溶胶蛋白，干扰素(IFN)-β1b(Betaseron或Betaferon)，干扰素(IFN)-β1a(Avonex，Rebif)，醋酸格拉太咪尔(考帕松)，米托蒽醌(能减瘤)，硫唑嘌呤，环孢菌素，氨甲喋呤，环磷酰胺，静注免疫球蛋白，***，甲基***，***龙，甲基***龙，***，促肾上腺皮质激素(ACTH)，促皮质素，2-氯脱氧腺嘌呤(2-CDA，克拉屈滨)，肌苷，白介素-2抗体(赛尼哌，达利珠单抗)，亚叶酸，特立氟胺，雌孕激素类，去氧孕烯，炔雌醇，BHT-3009，ABT-874，卡介(BCG)苗，T细胞疫苗，CNTO1275，利妥昔单抗，Tysabri(那他珠单抗)，N-乙酰半胱氨酸，米诺环素，RO0506997或他汀类药物。
39.决定对象中治疗过程的方法，其包括：
(i)获得对象中的凝溶胶蛋白水平，其中所述对象接受治疗多发性硬化或降低其风险的治疗，
(ii)将(i)中所得凝溶胶蛋白水平与预定值进行比较，该预定值对应于凝溶胶蛋白的某一水平，
(iii)确定(i)中所得的凝溶胶蛋白水平是否处于或低于所述预定水平，和
(iv)基于这种确定来决定治疗过程。
40.权利要求39的方法，其中所述预定的凝溶胶蛋白水平是表面上健康的对照群体中的凝溶胶蛋白水平。
41.权利要求39的方法，其中重复步骤(i)和步骤(ii)和/或步骤(iii)，以在一段时间中监测所述对象的凝溶胶蛋白水平。
42.权利要求39的方法，其中所述预定值是约250mg/L血浆或更低。
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