CN101434979A - 一种从谷物精粉中提取蛋白质的方法 - Google Patents

一种从谷物精粉中提取蛋白质的方法 Download PDF

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雷菊芳
韩静
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Abstract

本发明提供了一种从谷物精粉中提取蛋白质的方法,该方法是先将谷物精粉进行糖化,再将糖化后的蛋白渣用碱提酸沉法进行分离纯化得到高纯度蛋白。糖化工艺,解决了某些谷物蛋白与淀粉结合紧密、不易分离,蛋白提取困难的技术难题;碱提酸沉工艺,有效的提高了谷物蛋白的提取率和纯度;糖化后的液体可做其他用途,最大限度的节约了资源。本发明提取的蛋白质用凯氏定氮法-GB/T 5009.5进行分析测定,以粗蛋白含量(NX6.25干基)计≥80%,得率为6~10%。

Description

一种从谷物精粉中提取蛋白质的方法
技术领域
本发明属于生物化工技术领域,涉及一种蛋白的分离提取工艺,尤其涉及一种从谷物精粉中分离提取蛋白质的方法。主要适用于大米、普通大麦、青稞等蛋白质不易提取的谷物。
背景技术
蛋白质是人体不可或缺的营养物质。大米、大麦等谷物中含有丰富的蛋白质。目前,从谷物中提取蛋白的方法主要有碱法、酶法、碱酶两步法、膜分离等提取方法。但是由于大米蛋白中二硫键较多,蛋白质结构紧密;而青稞精粉中含有大量的支链淀粉,与青稞蛋白以结合态存在,并且青稞蛋白与肽之间存在大量二硫键,使蛋白不易分离,采用常规的提取方法不易得到高纯度的蛋白质。
发明内容
本发明的目的是提供一种采用糖化结合碱提酸沉法从谷物精粉中提取蛋白质的方法。
本发明从谷物精粉中提取蛋白质的方法,依次包括以下工艺步骤:
①将谷物精粉过100目筛除去杂质后,与水以1:6~1:10的质量比混合,调节pH=4~6;加入谷物精粉质量0.5~2%的氯化钙,钙离子对α-淀粉酶热稳定性有很好的保护作用,搅拌制成精粉浆,本发明所述的谷物精粉是指谷物完全除去麸皮后的面粉,或麸皮含量很少。
②将上述精粉浆加热至45℃~70℃,搅拌使其充分糊化后,加入谷物精粉质量2‰~4‰的α-淀粉酶,于60~80℃液化0.5~2小时,使谷物精粉中的淀粉完全分散。α-淀粉酶采用高温α-淀粉酶。
为了使淀粉彻底液化;同时可加入谷物精粉质量0.5‰~2‰的支链淀粉酶液化支链淀粉。
③加入谷物精粉质量2‰~4‰的糖化酶,于40℃~60℃糖化半小时,得到糖化液;糖化液离心分离,收集固体蛋白渣。
④将上述固体蛋白渣用质量浓度0.6~0.8%的氢氧化钠溶液于30℃~80℃浸提2~10小时,离心;取上清液,用稀盐酸调pH至4.0~4.5,离心得到蛋白固体。
为了有效的去除蛋白渣中的多糖杂质,可先将固体蛋白渣用30℃~80℃的热水洗涤1~3次,离心,弃去上清液,再分别用2‰~4‰的α-淀粉酶和1‰~3‰的纤维素酶洗涤1~3次,除去残留的淀粉以及纤维素,然后将固体蛋白渣用氢氧化钠溶液进行浸提。
为了提高蛋白质的提取率,固体蛋白渣经氢氧化钠溶液浸后,再用粗蛋白渣质量0.5~1‰的中性蛋白酶于30℃~70℃浸提2~10小时,然后离心,取上清液,用稀盐酸调pH至4.0~4.5,离心得到蛋白固体。
⑤将蛋白固体30~50℃下干燥,粉碎,得到高纯度蛋。
本发明制备的蛋白质纯度高:用凯氏定氮法-GB/T 5009.5进行分析测定,以粗蛋白含量(NX6.25干基)计≥80%,得率为6~10%。
本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明采用糖化和碱提酸沉相结合的工艺方法,先将谷物精粉进行糖化,再将糖化后的蛋白渣用碱提酸沉法进行分离纯化得到高纯度蛋白。糖化工艺有效去除谷物精粉中的支链淀粉,并将精粉中青稞蛋白与肽之间的二硫键进行破坏,解决了谷物精粉中蛋白质与淀粉结合紧密不易分离的难题。糖化后粗蛋白渣的含量可达40%,其中80%碱溶性蛋白。碱提酸沉工艺,有效的提高了谷物蛋白的提取率和纯度。
2、本发明采用α-淀粉酶和支链淀粉酶配合使用,液化淀粉,有效的提高了淀粉液化的程度。
3、本发明糖化后的液体为葡萄糖浆或麦芽糖浆,可作为开发其他产品的原料,使副产物得到充分利用,最大限度的节约了资源。
4、本发明在碱提酸沉过程中加入中性蛋白酶,有效的提高的蛋白质的提取率,节约了能源。
5、本发明工艺简单,操作简单易控制,成本低,不污染环境,易于工业化。
具体实施方式
实施例1、从青稞精粉中提取蛋白质的工艺
①将青稞籽粒粉碎成细粉,过100目筛,得到青稞精粉;
②将青稞精粉与水按1:6~1:10的质量比混合,搅拌均匀;用3mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至6.0~6.4,加入精粉质量1%~2%的氯化钙,充分搅拌,制成青稞精粉浆;
③将青稞精粉浆置于加热器中,于40℃~50℃加热糊化半小时,充分搅拌,糊化完全;温度升高至60~70℃,加入精粉质量2‰的中温α-淀粉酶液化1小时,使淀粉完全分散;
④降低温度至50~55℃,加入精粉质量2‰的糖化酶糖化30分钟;卧螺离心分离10分钟,得到淀粉糖浆和固体粗蛋白渣;淀粉糖浆留作它用,固体粗蛋白渣进入下一道工序;
⑤将固体粗蛋白渣用其质量10倍量、质量浓度0.8%~1%的氢氧化钠溶液于60℃~80℃浸提3小时,离心后取上清液;将上清液用1mol/L的盐酸调pH至4.5,以每分钟3500转的转速离心分离;分离的固体于30~50℃干燥,得到蛋白质。
用凯氏定氮法-GB/T 5009.5进行分析测定,以粗蛋白含量(NX6.25干基)计蛋白质含量为64.5%,得率为8.8%。
实施例2、从青稞精粉中提取蛋白质的工艺
①将青稞籽粒粉碎成细粉,过100目筛,得到青稞精粉;
②将青稞精粉与水按1:6~1:8的质量比混合,搅拌均匀;用3mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至6.0~6.4,加入精粉质量2%~3%的氯化钙,充分搅拌,制成青稞精粉浆;
③将青稞精粉浆置于加热器中,加热至70~80℃,糊化半小时(充分搅拌,使其糊化完全);升温至80℃,加入精粉质量2‰的高温α-淀粉酶和0.5‰的直链淀粉酶,液化1小时,使淀粉完全分散和液化;降低温度至55℃,加入精粉质量2‰的糖化酶,糖化30分钟;用卧螺机离心10分钟,得到将淀粉糖浆与固体粗蛋白渣;
④将固体粗蛋白渣用分别用α-淀粉酶和纤维素酶洗涤2~3次,除去淀粉以及纤维素;然后将其用粗蛋白渣质量10倍量、质量浓度1%的氢氧化钠溶液于60℃浸提3小时,离心后取上清液;将上清液用1mol/L的盐酸调pH至4.5,以每分钟3500转的转速离心分离;分离的固体于40~50℃干燥,得到蛋白质。
用凯氏定氮法-GB/T 5009.5进行分析测定,以粗蛋白含量(NX6.25干基)计,蛋白质含量为71.2%,得率为9%。
实施例3、从青稞精粉中提取蛋白质的工艺
①将青稞籽粒粉碎成细粉,过100目筛,得到青稞精粉;
②将青稞精粉与水按1:6的质量比混合,搅拌均匀;用3mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至6.0~6.4,加入精粉质量2%的氯化钙,充分搅拌,制成青稞精粉浆;
③将青稞精粉浆置于加热器中,加热至60~70℃,糊化半小时,充分搅拌,使其糊化完全;升温至80℃,加入精粉质量2‰的高温α-淀粉酶和0.5‰的直链淀粉酶,液化1小时,使淀粉完全分散;降低温度至55℃,加入精粉质量2‰的糖化酶,糖化30分钟;用卧螺机离心10分钟,得到将淀粉糖浆与固体粗蛋白渣;
④将固体粗蛋白渣用70℃的热水洗涤一次,离心弃去上清液;用2‰α-淀粉酶洗涤一次,离心弃去上清液,除去淀粉;再用2‰纤维素酶洗涤2~3,除去纤维素;然后将其用粗蛋白渣质量10倍量、质量浓度0.6%的氢氧化钠溶液于60℃浸提3小时,并加入粗蛋白渣质量1‰中性蛋白酶,离心后取上清液;将上清液用1mol/L的盐酸调pH至4.5,以每分钟3500转的转速离心分离;将分离的固体于45℃干燥,得到蛋白质。
用凯氏定氮法-GB/T 5009.5进行分析测定,以粗蛋白含量(NX6.25干基)计,蛋白质含量为73.2%,得率为9%。
实施例4、从大米粉中提取蛋白质的工艺
①将碎大米粉碎成粉末,过100目筛,并除去杂质,得到大米精粉;
②将大米精粉与水以1:8的质量比混合,搅拌均匀;用1mol/L的盐酸和3mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至6.3,加入大米精粉质量0.5%的氯化钙,充分搅拌,制成大米精粉浆;
③将大米精粉浆置于加热器中,加热至70℃,糊化半小时,充分搅拌,使其糊化完全;升温至80℃,加入精粉质量2‰的高温α-淀粉酶,液化1小时,使淀粉完全分散;降低温度至55℃,加入精粉质量2‰的糖化酶,糖化30分钟;用卧螺机离心10分钟,得到将淀粉糖浆与固体粗蛋白渣;
④将固体粗蛋白渣用其质量10倍量、65℃的热水洗涤3次;再用粗蛋白渣质量10倍量、质量浓度0.6%的氢氧化钠溶液于60℃浸提2小时,离心后取上清液;将上清液用1mol/L的盐酸调pH至4.5,以每分钟3500转的转速离心分离;将分离的固体于45℃干燥,得到蛋白质。
用凯氏定氮法-GB/T 5009.5进行分析测定,以粗蛋白含量(NX6.25干基)计蛋白质含量为74.5%,得率为7.8%。
实施例5、从大米粉中提取蛋白质的工艺
①将碎大米粉碎成粉末,过100目筛,并除去杂质,得到大米精粉;
②将大米精粉与水以1:6的质量比混合,搅拌均匀;用1mol/L的盐酸和3mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至6.0,加入大米精粉质量1%的氯化钙,充分搅拌,制成大米精粉浆;
③将大米精粉浆置于加热器中,加热至60℃,糊化半小时,充分搅拌,使其糊化完全;升温至80℃,加入精粉质量2‰的高温α-淀粉酶,液化1小时,使淀粉完全分散;降低温度至45℃,加入精粉质量2‰的糖化酶,糖化30分钟;用卧螺机离心10分钟,得到将淀粉糖浆与固体粗蛋白渣;
④将固体粗蛋白渣用其质量10倍量、65℃的热水洗涤3次;弃去上清液,再用2‰的α-淀粉酶和2‰的纤维素酶洗涤2~3次,然后用粗蛋白渣质量10倍量、质量浓度0.6%的氢氧化钠溶液于70℃浸提2小时,离心后取上清液;将上清液用1mol/L的盐酸调pH至4.5,以每分钟3500转的转速离心分离;将分离的固体于45℃干燥,得到蛋白质。
用凯氏定氮法-GB/T 5009.5进行分析测定,以粗蛋白含量(NX6.25干基)计蛋白质含量为72.3%,得率为8.2%。

Claims (5)

1、一种从谷物精粉中提取蛋白质的方法,依次包括以下工艺步骤:
①将谷物精粉过100目筛除去杂质后,与水以1:6~1:10的质量比混合,调节pH=4~6;加入谷物精粉质量0.5%~2%的氯化钙,搅拌制成精粉浆;
②将上述精粉浆加热至55℃~70℃,搅拌使其充分糊化后,加入谷物精粉质量2‰~5‰的α-淀粉酶,于60℃~80℃液化0.5~2小时,使谷物精粉中的淀粉完全分散;
③加入谷物精粉质量2‰~4‰的糖化酶,于40℃~60℃糖化0.5~1.5小时,得到糖化液;糖化液离心分离,收集固体蛋白渣;
④将上述固体蛋白渣用质量浓度0.6%~0.8%的氢氧化钠溶液于30℃~70℃浸提2~10小时,离心;取上清液,用稀盐酸调pH至4.0~4.5,离心得到蛋白固体;
⑤将蛋白固体30~50℃下干燥,粉碎,得到高纯度蛋。
2、如权利要求1所述从谷物精粉中提取蛋白质的方法,其特征在于:所述步骤②中,继续加入谷物精粉质量0.5‰~2‰的支链淀粉酶,使淀粉彻底液化,所述支链淀粉酶为异淀粉酶。
3、如权利要求1所述从谷物精粉中提取蛋白质的方法,其特征在于:所述步骤④中,先将固体蛋白渣用30℃~70℃的热水洗涤1~3次,离心,弃去上清液,再分别用2‰~5‰α-淀粉酶和1‰~3‰纤维素酶洗涤1~3次,然后将固体蛋白渣用氢氧化钠溶液进行浸提。
4、如权利要求1所述从谷物精粉中提取蛋白质的方法,其特征在于:所述步骤④中,固体蛋白渣经氢氧化钠溶液浸提后,再用粗蛋白渣质量0.5~1‰得中性蛋白酶于30℃~70℃浸提2~10小时,离心,取上清液,然后用稀盐酸调pH至4.0~4.5,离心得到蛋白固体。
5、如权利要求1所述从谷物精粉中提取蛋白质的方法,其特征在于:所述α-淀粉酶为高温α-淀粉酶。
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