CN101428091A

CN101428091A - 一种药物在制备抑制过氧化物的药物中的应用

Info

Publication number: CN101428091A
Application number: CNA2007101500692A
Authority: CN
Inventors: 韩晶岩; 徐想顺
Original assignee: Tianjin Tasly Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Tianjin Tasly Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2007-11-06
Filing date: 2007-11-06
Publication date: 2009-05-13

Abstract

本发明涉及一种药物在制备抑制过氧化物的药物中的应用。该药物由以下重量百分含量的生药材制成：当归4～9％，川芎4～9％，白芍2～8％，熟地2～8％，勾藤10～15％，鸡血藤10～15％，夏枯草10～15％，决明子10～15％，珍珠母10～15％，元胡4～9％，细辛0.5～2％。

Description

一种药物在制备抑制过氧化物的药物中的应用

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种中药在制备抑制过氧化物的药物中的应用。

背景技术

很多疾病过程都会导致过氧化物的产生。例如，缺血再灌注后，血管内皮细胞通过次黄嘌呤和黄嘌呤脱氢酶产生负氧阴离子，进而，负氧阴离子在SOD的催化下转换成过氧化氢，一部分过氧化氢通过Haber-Weiss反应生成羟基自由基。过氧化氢，羟基自由基等过氧化物既可以脂质过氧化，断裂DNA等损伤血管内皮细胞和血管基底膜细胞，又可以活化NF-κB，诱导选择素，黏附分子和炎性分子的释放。抑制过氧化物的产生是改善再灌注后微循环障碍的主要环节。

本发明一种药物[专利号：93100050.5]是由当归、川芎等组成。它是在祖国医学理论的指导下，并经多年临床实践总结而成，具有治疗内伤引起的头痛的作用，临床上适用于血管神经性头痛、偏头痛以及高血压引起的头晕、头痛等症状。按本处方比例，可以制成药剂学上任何一种剂型。其中的颗粒剂型由天津天士力制药股份有限公司生产，名称为“养血清脑颗粒”。获准的“功能与主治”为养血平肝，活血通络。用于血虚肝亢所致各种头痛、创伤性脑神经综合症、眩晕眼花、心烦易怒、失眠多梦等。临床上主要用于治疗血虚、血瘀、阴虚阳亢所致的头痛。由于其确切的疗效，自上市以来，赢得了广大患者的信赖。

以往的研究已经证明过养血清脑颗粒中的白芍的主要成份芍药甙，川芎的主要成份川芎嗪，当归的主要成份阿魏酸，熟地的主要成份地黄甙在体外有抑制过氧化物产生的作用。但是，含有上述成分的中药复方制剂养血清脑颗粒是否有抑制过氧化物的作用，特别是在体内是否具有抑制过氧化物的作用等尚未见报道。

发明内容

本发明是在已有中国专利(专利号为93100050.5)的基础上，完成的新用途发明，处方的组成按重量配比如下：

当归4～9％，川芎4～9％，白芍2～8％，熟地2～8％，勾藤10～15％，鸡血藤10～15％，夏枯草10～15％，决明子10～15％，珍珠母10～15％，元胡4～9％，细辛0.5～2％；

最佳配比为：

当归6.75％，川芎6.75％，白芍5.4％，熟地5.4％，勾藤13.5％，鸡血藤13.5％，夏枯草13.5％，决明子13.5％，珍珠母13.5％，元胡6.75％，细辛1.34％。

该专利药物组合物通过以下方案予以实施：

按上述比例取生药材，加水提取3次，每次1小时；合并提取液，浓缩，加入2倍其重量的乙醇，静置沉淀；取上清液，浓缩成浸膏，相对密度为1.3～1.4，出膏率为10％；加入药剂上可接受的辅料，按照常规的工艺方法制成药学上可接受的剂型。其中所述静置的时间优选为为24小时。药剂上可接受的辅料优选为蔗糖和糊精，优选比例为浸膏、蔗糖和糊精按1：3：1的重量比，按照常规的工艺方法制成颗粒剂。

本发明的药物组合物具有治疗内伤引起的头痛的作用，临床上适用于血管神经性头痛、偏头痛以及高血压引起的头晕、头痛等症状。

经过近年来的临床与实验研究，申请人还发现了本发明药物组合物增加脑血流、治疗脑卒中后遗症等作用，还可以改善微循环障碍和预防脑卒中。但还未有文献报道用于抑制过氧化物的产生。

下面以蒙古沙鼠脑细静脉为例，考察了本发明药物组合物抑制过氧化物产生的用途。

实验中用到的药物为本发明药物的颗粒剂型——养血清脑颗粒。具体研究了养血清脑颗粒对缺血再灌注后蒙古沙鼠脑细静脉壁过氧化物产生的影响。

1.材料与方法

(1)动物

蒙古沙土鼠，雄性，体重65～90g，购于首都医科大学实验动物部，合格证号：SCXK(京)2000-0012。在北京大学医学部动物中心，按北京大学医学部实验动物处理规定，自由进食饮水，单笼饲养，温度22℃，相对湿度40％，12小时切换灯源(早晨7点开灯)。

(2)试验药物

试验药物(养血清脑颗粒)为按照本发明实施例2的方法制成的颗粒剂，实验前配制成80mg/ml和160mg/ml的水溶液。

(3)化学试剂

二氢罗达明123(Dihydrorhodamine 123，DHR 123)购买于美国Eugene公司，异硫氰酸荧光素标记白蛋白(FITC-albumin)购买于美国SIGMA公司，罗达明6G高氯酸盐(Rhodamine6G perchlorate)购买于美国FLUKA公司，乌拉坦(Urethane)购买于中国上海天莲精细化工有限公司。

(4)动物模型

取20％乌拉坦，按2.0g/kg.bw的用量，经腹腔注射麻醉蒙古沙土鼠。在颈部正中切开，分离气管，连接小动物呼吸机(ALC-V8)，在整个观察过程保持机械通气。特殊设计的闭合器(一根细的聚乙烯导管和一根粗的塑料管组成的套索)放置在双侧颈总动脉而不影响血流。暴露股静脉，***并留置直径为5mm的聚乙烯导管。切开脑部皮毛，用手提式颅钻在前囟点前开一3×3mm的颅窗。将37℃的人工脑脊液连续滴加在颅窗上以保持大脑表面湿润。用连接于荧光摄像机(C7190，HAMAMATSU，Japan)的正立生物显微镜(DMLFS，LEICA，Germany)，用10倍物镜选择直径在30-50μm，200μm长没有明显弯曲的细静脉，在监视器上基础观察(J2118A，TCL，Huizhou，China)10分后，闭索蒙古沙土鼠双侧颈动脉(缺血)，30分后解除闭索(再灌注)。连续观察并用连接于荧光摄像机刻录机(DVR-R25，Malata，China)记录微循环动态60分钟。假手术组不闭索双侧颈动脉，其他操作同缺血再灌注组。养血清脑颗粒0.4g/kg+缺血再灌注组，养血清脑颗0.8g/kg+缺血再灌注组在缺血再灌注90分钟前，分别用灌胃管，灌胃给予养血清脑颗粒水溶液0.4g/kg.bw和0.8g/kg.bw。

(5)细静脉壁过氧化物产生动态测定

在基础观察前10分钟，将10umol/ml浓度的过氧化物荧光探针二氢罗达明123连续滴加在脑观察部位的表面。当过氧化物与DHR相遇时，可以将DHR还原成rhodamine 123，用连接于生物显微镜的超敏感摄像机(Hamamatsu EB-CCD Camera C7190 Japan)观察并纪录DHR的发光部位和强度(激发波长510nm，发射波长534nm)。为了测量血管内皮组织荧光强度的差别，用图像分析软件Image-Pro plus 5.0测量血管内腔和血管壁的平均荧光强度。测量每一个血管内腔和血管壁的平均荧光强度，它们的差值(DI)反应了DHR被氧化的程度。测量缺血前(Ibase)，以及再灌注开始0分、10分、20分、30分、40分、50分、60分时细静脉壁和血管内荧光强度差值(Ix)，以缺血前的数值为基础值，用各时间的值(Ix)与基础值(Ibase)的比表示DHR萤光强度的变化，以判定细静脉壁过氧化物的产生动态。

(6)统计

所有数值用平均值±标准误表示。数据分析用单因素方差分析one-way analysis ofvariance(ANOVA)处理和Fisher s post Hoc test检验。设p<0.05为显著性差异。

2.结果

养血清脑颗粒对缺血再灌注后蒙古沙鼠脑细静脉壁DHR荧光强度的影响。

由图1可见，缺血再灌注蒙古沙鼠(a)和养血清脑颗粒+缺血再灌注组蒙古沙鼠(c)在缺血前，没有观察到细静脉壁DHR荧光发光部位。在再灌注60分时，可以观察到缺血再灌注蒙古沙鼠沿脑细静脉壁DHR荧光强度增强的部位(b)，而养血清脑颗粒+缺血再灌注组蒙古沙鼠没有观察到脑细静脉壁DHR荧光强度的增强(d)。

从图2可以看到，假手术组蒙古沙鼠脑细静脉壁的DHR荧光强度比在本观察期间内几乎没有变化。缺血再灌注组蒙古沙鼠脑静脉壁的DHR荧光强度比在再灌注10分后开始增加，且持续增加。养血清脑颗粒0.4g/kg+缺血再灌注组和养血清脑颗粒0.8g/kg+缺血再灌注组在再灌注10分钟后，显著地抑制了缺血再灌注引起的脑细静脉壁的DHR萤光强度的增加。

DHR与过氧化氢等过氧化物反应后转化成罗达明123(rhodamine 123)，罗达明123可进入细胞内，结合在线立体膜上，用荧光显微镜可以观察到DHR反应后的发光部位和荧光强度。用该方法测定过肠系膜细静脉壁过氧化物的产生动态。本发明用此法直接观察到了养血清脑颗粒的预给药可以抑制缺血再灌注后沙鼠大脑皮层细静脉壁过氧化物的产生。进一步证明养血清脑颗粒可以保护脑血管内皮细胞，改善脑微循环。

本发明药物组合物可以口服或冲服，或通过其他常规的给药方法给药。每天用量为相当于5～20g生药材重量。

经过大量的研究发现，本发明的药物组合物能明显地抑制过氧化物产生，从而对由于过氧化物产生引发的相关疾病具有潜在的治疗价值。

附图说明

图1是假手术组，缺血再灌注组，养血清脑颗粒0.4g/kg+缺血再灌注组，养血清脑颗粒0.8g/kg+缺血再灌注组在缺血前和再灌注后蒙古沙鼠脑细静脉壁DHR荧光强度的连续变化。

数据是每组6只沙鼠平均值±标准误。* P<0.05vs基础值；# P<0.05vs缺血再灌注组。

具体实施方式

下面通过具体的实施方式进一步说明本发明中的药物组合物在制备抑制过氧化物产生的药物中的应用，但不作为对本发明的限制。

实施例1

(1)取当归80g，川芎80g，白芍80g，熟地80g，勾藤120g，鸡血藤120g，夏枯草120g，决明子120g，珍珠母120g，元胡70g，细辛10g；

(2)将上述药材加水提取3次，每次1小时，合并提取液，适当浓缩，加2倍量的乙醇，静置24小时沉淀，取上清液浓缩成浸膏，相对密度为1.3，出膏率为10％，取浸膏、蔗糖和糊精按1：3：1的重量比例制成片剂200片。

实施例2

(1)取当归67.5g，川芎67.5g，白芍54g，熟地54g，勾藤135g，鸡血藤135g，夏枯草135g，决明子135g，珍珠母135g，元胡67.5g，细辛13.4g；

(2)将上述药材加水提取3次，每次1小时，合并提取液，适当浓缩，加2倍量的乙醇，静置24小时沉淀，取上清液浓缩成浸膏，相对密度为1.4，出膏率为10％，取浸膏、蔗糖和糊精按1：3：1的重量比例制成颗粒剂125袋。

Claims

1.一种药物组合物在制备抑制过氧化物的药物中的应用，该药物由以下重量百分含量的生药材制成：

当归4～9％，川芎4～9％，白芍2～8％，熟地2～8％，勾藤10～15％，鸡血藤10～15％，夏枯草10～15％，决明子10～15％，珍珠母10～15％，元胡4～9％，细辛0.5～2％。

2.权利要求1所述的应用，其特征在于所述过氧化物的产生由缺血再灌注引起。

3.权利要求2所述的应用，其特征在于过氧化物产生于细静脉血管内皮。

4.权利要求1所述的应用，其特征在于所述的药物组合物由以下重量百分含量的生药材制成：

5.权利要求1-4任意一项所述的应用，其特征在于所述的药物组合物是按照下述方法制备的：

按比例取生药材，加水提取3次，每次1小时；合并提取液，浓缩，加入2倍其重量的乙醇，静置沉淀；取上清液，浓缩成浸膏，相对密度为1.3～1.4；加入药剂上可接受的辅料，制成制剂。

6.权利要求5所述的应用，其特征在于所述静置的时间为24小时。

7.权利要求5所述的应用，其特征在于药剂上可接受的辅料为蔗糖和糊精。

8.权利要求7所述的应用，其特征在于浸膏、蔗糖和糊精按1：3：1的重量比，制成颗粒剂。