CN101325972A - 具有治疗性质的Aβ1-42特异性单克隆抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于治疗由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症的治疗和诊断的方法和组合物，所述疾病和病症包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白质相关的疾病和异常，诸如阿尔茨海默病。本发明提供包含了高特异性和高效抗体的新的方法和组合物，所述抗体具有特异性识别并结合至一系列β淀粉状蛋白的特异表位的能力。通过本发明的教导而可得到的抗体对于治疗由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症特别有用，所述疾病和病症包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关的淀粉样变性，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)。

Description

具有治疗性质的Aβ1-42特异性单克隆抗体
本发明涉及用于治疗由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症的治疗和诊断的方法和组合物，所述疾病和病症包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白相关的病症和异常，诸如阿尔茨海默病。
淀粉样变性不是单一的疾病实体，而是一群多种以蜡状的、淀粉状的蛋白(称之为淀粉状蛋白，它们积累在一个或一个以上的器官或身体***中)细胞外组织的沉积为特征的进行性疾病过程。随着淀粉状蛋白沉积物堆积，它们开始***官或身体***的正常功能。至少存在15种不同类型的淀粉样变性。主要形式是没有已知前例的原发性淀粉样变性，其它疾病之后的继发性淀粉样变性和遗传性淀淀粉样变性。
继发性淀粉样变性发生在患有慢性感染或炎性疾病，诸如结核病、称为家族性地中海热的细菌感染、骨感染(骨髓炎)、类风湿性关节炎、小肠发炎(肉芽肿性回肠炎)、霍奇金病和麻疯病的人群中。
淀粉状蛋白沉积物通常包含三种组分。占淀粉状蛋白物质的90％的淀粉状蛋白质原纤维(fibril)包含数种不同类型蛋白中的一种。这些蛋白能够折叠为所谓的“β-折叠”片状原纤维，这种独特的蛋白构型显示出对刚果红(Congo red)的结合部位，导致了淀粉状蛋白质的独特的着色性质。此外，淀粉状蛋白沉积物与淀粉状蛋白P(五边形的)组分(AP)(与正常血清淀粉状蛋白P(SAP)相关的糖蛋白)密切相关，以及与硫酸化糖胺聚糖(GAG)(***的复杂碳水化合物)密切相关。
许多老年疾病基于或与淀粉状蛋白样蛋白有关，并且部分地以促进疾病发生和疾病进程的淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样物质的细胞外沉积的积累为特征。这些疾病包括但不限于神经疾病，诸如阿尔茨海默病(AD)，包括以认知记忆能力的损失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆(Lewy body dementia)、唐氏综合征(Down’ssyndrome)、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆综合征。其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病是进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病(Creutzfeld Jacob disease)、帕金森氏病、HIV相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤以及其它疾病，包括黄斑变性。
尽管这些疾病的发病机理可能是不同的，但它们特有的沉积物经常包含许多共同的分子成分。在显著程度上，这些可能归因于促进发炎途径的局部活化从而导致活化的补体组分、急性期反应物、免疫调节剂及其它发炎介质的同时沉积(McGeer等，1994)。
阿尔茨海默病(AD)是一种神经疾病，主要认为由淀粉状蛋白斑，即在脑中蛋白质异常沉积的积累所引起的。在感染个体脑中发现的最常见的淀粉状蛋白的类型主要包含Aβ原纤维。科学证据表明在斑块中β-淀粉状蛋白质的产生和累积的增加导致神经细胞死亡，这促进AD的发展和进程。在关键脑区域的神经细胞的损失又导致神经递质的减少和记忆的减损。主要造成斑块聚集的蛋白质包括淀粉状蛋白前体蛋白(APP)和两种早老蛋白(早老蛋白I和早老蛋白II)。通过酶β和γ分泌酶连续裂解淀粉状蛋白前体蛋白(APP)(它们在大部分细胞中组成型表达和分解代谢)导致39至43个氨基酸的Aβ肽的释放。APPs的降解可能会增加它们在斑块中聚集的倾向。由于其C末端的两个极疏水的氨基酸残基，Aβ(1-42)片段尤其具有构建聚集物的高倾向。因此认为Aβ(1-42)片段主要涉及并造成AD中神经炎斑块形成的起始，并因此具有高病理学潜力。因此需要可以靶向并扩散淀粉状蛋白斑形成的特异性抗体。
AD的症状出现缓慢，第一个症状可能仅仅是轻度健忘。在这一阶段，个体可能忘记新近的事件、活动、熟悉的人或东西的名称以及不能解决简单的数学问题。随着疾病进展，症状能更容易地被注意到并且变得足够严重从而导致患有AD的人们或他们的家人寻求医学帮助。AD的中期症状包括忘记如何做诸如整理清洁的简单任务，以及说话、理解、阅读或书写的问题逐渐显现。后期的AD患者可能变得焦虑或具攻击性，可能从家里走失以及最终需要全面护理。
目前，唯一的明确诊断AD的方法是在个体死后的尸体解剖中鉴别脑组织中的斑块和缠结。因此，当人仍活着的时候，医生只能作出“可能”或“很可能”患有AD的诊断。应用目前的方法，内科医生利用数种诊断“很可能”AD的工具可以至多在90％的时间准确地诊断AD。内科医师询问人的一般健康、过去的医疗问题和此人完成日常活动的任何困难的历史。记忆、问题求解、注意力、计算和语言的行为测试提供认知退化的有关信息，医疗检验诸如血、尿或脊髓液的检验和脑部扫描可以提供一些其它信息。
AD的管理由基于药物的和不基于药物的治疗组成。以改变疾病潜在的过程(延缓或逆转进程)为目的的治疗目前大部分是不成功的。恢复神经细胞的化学信使(神经递质)不足(缺陷)或功能障碍的药物，特别是胆碱酯酶抑制剂(ChEI)(诸如他克林和卡巴拉汀(rivastigmine))已显示出可改善症状。ChEI阻碍神经递质的酶降解，因此增加在脑中可用于传递神经信号的化学信使的量。
对于某些在疾病早期和中期阶段的人们，药物他克林(
Figure A20068004646600271
Morris Plains，NJ)、多奈哌齐(
Figure A20068004646600272
Tokyo，JP)、卡巴拉汀(
Figure A20068004646600273
East Hanover，NJ)或加兰他敏(
Figure A20068004646600274
New Brunswick，NJ)可以在有限的时间内帮助防止某些症状变得更严重。另一种药物美金刚(
Figure A20068004646600275
New York，NY)已被核准治疗中等至严重的AD。也有药物用于对付AD的精神病学表现。有些药物也可以帮助控制AD的行为症状，诸如失眠、兴奋、恍惚、焦虑和抑郁。治疗这些症状通常使得患者更舒服和使对于照顾者来说更容易照顾。不幸的是，尽管显著地治疗进展显示出这一类试剂可靠地比安慰剂好，但是疾病仍继续发展，并且对精神功能的平均作用仅为有限的。很多用于AD药物治疗的药物，例如，诸如ChEI，也具有副作用，包括胃肠功能失调、肝脏毒性和体重减轻。
其它基于淀粉状蛋白样蛋白的聚集和沉积或与它们相关的疾病是轻度认知损害、路易体痴呆(LBD)、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、包涵体肌炎(IBM)和黄斑变性，特别是年龄相关性黄斑变性(AMD)。
轻度认知损害(MCI)是一个笼统的术语，最经常被定义为不明显但可测量的记忆障碍。具有MCI的人比正常随变老所预期的体验到更严重的记忆问题，但是不会显示出其它的痴呆症状，诸如判断或推理损害。MCI是通常反映出AD临床前阶段的症状。
β淀粉状蛋白在内嗅皮质(EC)的沉积被认为在老年人轻度认知损害(MCI)的发展过程中扮演了关键的角色。这与一旦AD变得临床明显，则CSF-A Aβ(1-42)水平即显著下降的观察结果是一致的。与CSF-Aβ(1-42)相反，CSF-τ的水平在MCI阶段显著增加，并且这些值在此之后继续升高，从而表明增加的CSF-τ水平有可能帮助检测预测将发展成AD的MCI受检者。
路易体痴呆(LBD)是可发生在65岁以上人群中的神经变性疾病，其一般引起认知(思考)损伤和异常的行为改变的症状。症状可包括认知损害、神经迹象、睡眠失常和自主神经衰竭。认知损害是在多数患者中LBD所呈现的特征。患者具有精神混乱的反复发作，且日益严重。认知能力的波动通常与注意力和警觉性的转移程度相关。认知损害和思考的波动可随分钟、小时或天而不同。
路易体是由磷酸化和未磷酸化的神经丝蛋白形成的，它们包括突触蛋白α-突触核蛋白，以及参与损伤或异常蛋白消除的遍在蛋白。除路易体之外，也可能存在路易轴突(Lewy neurites)，其为神经细胞细胞突中的包涵体。淀粉状蛋白斑可形成于患有DLB的患者的脑中，然而它们倾向于在数量上比在患有阿尔茨海默病的患者中所见到的要少。AD的另一显微病理学标志，即神经原纤维缠结不是DLB的主要特征，但是除存在淀粉状蛋白斑外还经常存在神经原纤维缠结。
肌萎缩性侧索硬化症(ALS)是以上位和下位运动神经元的变性为特征的。在有些ALS患者中，可能存在痴呆或失语症(ALS-D)。痴呆最通常是额颞痴呆(FTD)，以及很多这些病例在齿状回以及额和颞叶浅层的神经元中具有遍在蛋白阳性、τ阴性包涵物。
包涵体肌炎(IBM)是通常发现于50岁以上人群中的致残疾病，其中肌纤维发展炎症并开始萎缩——但是其中脑部不会受到损伤且患者保持完全的智力。在患有这种老年人最普遍、进行性肌肉疾病的患者肌细胞中，发现参与淀粉状蛋白-β蛋白产生的两种酶增加，其中淀粉状蛋白-β也增加。
另外一种基于淀粉状蛋白样蛋白的聚集和沉积或与其相关的疾病是黄斑变性。
黄斑变性是引起视网膜(在眼睛后部的像纸一样薄的组织，在此感光细胞传送视觉信号至大脑)的中心区域即黄斑区变性的常见的疾病。通过黄斑区处理产生清楚、明晰、“笔直向前”的视觉。损伤黄斑区导致盲点的产生和模糊不清或视物变形。年龄相关性黄斑变性(AMD)在美国是引起视力损伤的主要原因，并且对于65岁以上的人来说，其为高加索人中法定失明的主要原因。大约有180万40岁及以上的美国人患有晚期AMD，以及其它730万患有中等AMD的人具有视力丧失的真实的危险。政府估计到2020年，将会有290万人患有晚期AMD。AMD患者常常惊讶和沮丧的发现对这种盲症状的原因和治疗了解的是如此之少。
存在两种黄斑变性的形式：干性黄斑变性和湿性黄斑变性。有百分之八十五的黄斑变性患者诊断为干性形式，其中黄斑区的细胞缓慢的开始损坏。尽管一只眼睛可能丧失视力而另外一只眼睛保持未受影响，但两只眼睛通常都受到干性AMD的影响。视网膜下的黄色沉积物，即脉络膜小疣是干性AMD的早期征兆。随着脉络膜小疣的数目和大小的增加，发展成晚期干性AMD或湿性AMD的危险也增加。干性AMD可能在不转变为疾病的湿性形式的情况下进一步发展并且导致视力的丧失；然而，早期的干性AMD也有可能突然变为湿性形式。
尽管只占到病例的百分之十五，湿性形式导致了失明的百分之九十，并且被认为是晚期的AMD(没有早期或中期阶段的湿性AMD)。湿性AMD总是处于疾病的干性形式之后。当干性形式变得更严重，一些人在黄斑区的后面开始有异常的血管生长。这些血管非常脆弱并且会泄漏液体和血液(因此是“湿性”黄斑变性)，这导致了对黄斑区的快速损伤。
干性形式的AMD开始会常常引起轻度的视力模糊。特别是视力的中心可能变得模糊不清，并且这一区域随着疾病的发展变得更大。如果只有一只眼睛受到影响，则没有症状可以被注意到。在湿性AMD中，直线可能看起来像波浪状，并且中心视力的丧失可能很快出现。
黄斑变性的诊断一般涉及扩张眼检查、视觉敏感度试验，以及用称之为眼底检查的方法查看眼睛的后部以帮助诊断AMD，并且如果有湿性AMD的嫌疑，则也可能进行荧光素血管造影术。如果干性AMD达到晚期阶段，没有预防视力丧失的现行治疗。然而，抗氧化剂和锌的特定高剂量配方可以延缓或预防中期AMD发展至晚期阶段。(哌加他尼钠注射液)、激光光凝术和光动力学治疗可能可以控制黄斑区中的异常血管生长和流血，这可以对有些患有湿性AMD的患者有用；然而，视力已经丧失的则不能通过这些技术恢复。如果视力已经丧失，存在可以帮助提高生活质量的低视力辅助器。
年龄相关性黄斑变性(AMD)的最早的征兆之一是称之为脉络膜小疣的细胞外沉积物在视网膜色素上皮(RPE)基底层和布鲁赫膜(BM)之间的积累。近来由Anderson等进行的研究已证实脉络膜小疣包含淀粉状蛋白β(Experimental Eye Research 78(2004)243-256)。
进行中的研究继续探索可能促进AMD的环境、遗传和饮食因素。也正在探索新的治疗策略，包括视网膜细胞移植物、能够预防或减缓疾病发展的药物、放射疗法、基因疗法、植入到视网膜的可帮助刺激视力的计算机芯片以及可预防黄斑区下新血管生长的药剂。
开发新药物时，需要考虑的重要因素是对目标患者来说使用的容易性。由于对患者的便利性，口服药物递送(特别是片剂、胶囊剂和软胶剂)占所有消费剂型的70％。药物开发者认同患者更喜欢口服递送，而不是接受注射或其它更具侵入性的药物给药方式。导致短的给药间隔(即一天一次或持续释放)的制剂也是优选的。以口服剂型给药抗生素的容易性导致了治疗期间患者顺从性的增加。
所需的是用于产生高特异性和高效性抗体的方法和组合物，如果要以口服剂型提供抗体的话，这是先决条件。优选的，这类抗体能识别在不同的抗原(诸如淀粉状蛋白)上的特异性表位。
因此，还需要的是处理并发症的有效组合物和方法，这些并发症与由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病相关，所述疾病包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。具体而言，需要的是能消除疾病生理学表现，诸如消除与淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样肽的纤维的聚集相关的斑块形成的特异和高效抗体。
对于人类阿尔茨海默病，已证明与弗氏完全或不完全佐剂混合的由Aβ1-42引起的抗淀粉状蛋白抗体能够减少转基因小鼠的淀粉状蛋白的负荷(Schenk等，1999)。
将在脂质体中重构的四棕榈酰化Aβ1-16腹膜内接种到NORBA转基因小鼠引起显著的抗淀粉状蛋白抗体滴度，这一抗体也能在体外和体内溶解淀粉状蛋白纤维和斑块(Nicolau等，2002)。
Bard等(2000)首先提出了淀粉状蛋白斑和纤维分解发生的可能机制，他们基于他们的数据得出结论，即抗体调理斑块，斑块随后被小神经胶质细胞的巨噬细胞毁坏。De Mattos等(2001)指出抗β-淀粉状蛋白中心结构域的Mab可以结合和完全隔离血浆淀粉状蛋白。他们认为循环***中这些mAbs的存在改变了脑和血浆中的Aβ平衡，有利于外周的清除和分解代谢而不是在脑内沉积。
本发明提供包含高特异性和高效抗体的新的方法和组合物，所述抗体具有特异识别并结合一系列β-淀粉状蛋白抗原的特异表位的能力。通过本发明教导提供的抗体特别对治疗由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病有用，所述疾病包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性；这些仅仅是其中的一些例子。
此外，本发明提供在表现出淀粉状蛋白相关疾病或病症的哺乳动物中保持或提高认知记忆能力的新方法和组合物，包括给需要这一治疗的动物，特别是哺乳动物，更特别是人类施用治疗有效量的根据本发明的单克隆抗体。
附图和序列的简述：
图1：衍生自Aβ序列1-15、1-16和1-16(Δ14)、22-35和29-40的肽。
图2：在蛋白质印迹法(Western blot)和斑点印迹法中mACI-01-Ab7 C2单克隆抗体与淀粉状蛋白种类的结合；
图3：通过透射电子显微法的mACI-01-Ab7 C2单克隆抗体与淀粉状蛋白纤维的结合；
图4：U-13C Tyr10及Val12标记的β-淀粉状蛋白1-42肽的Th-T荧光测定和固态NMR之间的并行实验结果。
SEQ ID NO：1：抗原肽Aβ1-15
SEQ ID NO：2：抗原肽Aβ1-16
SEQ ID NO：3：抗原肽Aβ1-16(Δ14)
SEQ ID NO：4：抗原肽Aβ22-35
SEQ ID NO：5：抗原肽Aβ29-40
SEQ ID NO：6：抗原肽Aβ1-17
SEQ ID NO：7：小鼠C2轻链可变区的氨基酸序列
SEQ ID NO：8：小鼠C2重链可变区的氨基酸序列
SEQ ID NO：9：小鼠C2轻链可变区的核苷酸序列
SEQ ID NO：10：包括信号序列的小鼠C2轻链可变区的核苷酸序列
SEQ ID NO：11：小鼠C2重链可变区的核苷酸序列
SEQ ID NO：12：包括信号序列的小鼠C2重链可变区的核苷酸序列
SEQ ID NO：13-20：Aβ肽上表位区域的氨基酸序列变体
SEQ ID NO：21：小鼠C2轻链的氨基酸序列
SEQ ID NO：22：小鼠C2重链的氨基酸序列
本发明利用了导致增加优选抗原构象的暴露和稳定，并最终导致具有独特性质的抗体的抗原递呈作用。
在本发明的一个实施方案中，提供了包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，或更特别的，包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，该抗体抗超分子抗原构建体，所述超分子抗原构建体包含对应于β-淀粉状蛋白肽，特别是β-淀粉状蛋白肽Aβ1-15、Aβ1-16和Aβ1-16(Δ14)氨基酸序列的抗原肽，所述抗原肽用疏水部分(例如，诸如棕榈酸)或亲水部分(例如，诸如聚乙二醇(PEG))或两者的组合进行修饰，其中所述疏水和亲水部分分别通过至少一个，特别是一个或两个氨基酸，例如，诸如赖氨酸、谷氨酸和半胱氨酸或任何其它的能够用作将亲水和疏水部分偶联到肽片段的连接装置的合适的氨基酸或氨基酸类似物而共价地连接到抗原性肽的每一个末端。当使用PEG作为亲水部分时，游离的PEG末端共价地连接到磷脂酰乙醇胺或任何其它适合于作为锚定元件的化合物上，例如，以将抗原构建体埋在脂质体的双分子层中。
在本发明的另一个实施方案中，提供了包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，其识别淀粉状蛋白的天然构象，因为它特异地结合至淀粉状蛋白寡聚体和纤维，而不是结合至非线性化的淀粉状蛋白种类。
在本发明的另一个实施方案中，提供了根据本发明和如上文描述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，其中抗体或片段以至少约1×10-6至至少约1×10-8，特别地至少约1×10-6至至少约1×10-7，更特别地至少约1×10-7至至少约1×10-8，甚至更特别地至少约1×10-7至至少约4×10-7的结合亲和力与Aβ单体结合，但优选地不显示出任何显著的与淀粉状蛋白前体蛋白(APP)的交叉反应性。
在本发明另一个实施方案中，提供了根据本发明和如上文描述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，其中抗体或片段以至少约1×10-7至至少约1×10-9，特别地至少约1×10-7至至少约1×10-8，更特别地至少约1×10-8至至少约1×10-9，甚至更特别地至少约1×10-8至至少约5×10-8的结合亲和力与Aβ纤维、原纤维或纤丝(filament)结合，但是优选地不显示出任何显著的与淀粉状蛋白前体蛋白(APP)的交叉反应性。
在另外的实施方案中，根据本发明和如上文描述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体表现出比与Aβ单体的结合亲和力高至少5倍，特别地至少10倍，更特别地高至少15倍的与Aβ纤维、原纤维或纤丝的结合亲和力。
根据本发明的抗体能够在体内和体外抑制形成淀粉状蛋白的单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽聚集成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝。
在本发明的特别的实施方案中，提供了包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，所述抗体在与淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽共孵育后，抑制了Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维。
在本发明的另一个实施方案中，提供了包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，所述抗体在与淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽共孵育，特别地以高达1∶100的摩尔浓度比、更特别的以1∶30至1∶100之间的摩尔浓度比、但尤其是以1∶100的摩尔浓度比共孵育后，抑制了Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维。具体而言，当与和缓冲液孵育的分别的淀粉状蛋白肽单体(对照)相比较，所述的抑制达到至少50％，特别地达到至少65％，更特别地达到至少75％，甚至更特别地达到至少80％，但尤其是达到至少85％-90％，或者更多。
具体而言，根据本发明的抗体和淀粉状蛋白单体肽的共孵育在28℃至40℃之间，特别地在32℃和38℃之间，更特别地在37℃的温度进行24小时至60小时，特别地30小时至50小时，更特别地48小时。
在另一个实施方案中，本发明提供包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，所述抗体在37℃以1∶100的摩尔浓度比与淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽共孵育48小时后，当与和缓冲液孵育的分别的淀粉状蛋白肽单体(对照)相比较，能够至少85％，特别地至少89％以及更特别地至少95％抑制淀粉状蛋白单体，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽聚集成高分子聚合体原纤维或纤丝。
在特别的实施方案中，本发明提供包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，其对Aβ1-42单体肽表现出高特异性，但对Aβ1-38、Aβ1-39、β1-40和/或Aβ1-41单体肽显示出实质上没有或仅仅很小的交叉反应性；特别是包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，尤其是单克隆抗体，其对淀粉状蛋白肽Aβ1-42比对Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40、Aβ1-41更敏感高达100倍，特别地50至100倍，更特别地80至100倍，但尤其是100倍；以及抗体对淀粉状蛋白肽Aβ1-42比对Aβ1-38更敏感高达1000倍，特别地500至1000倍，更特别地800至1000倍，但尤其是1000倍；并且因此能够在体外和体内抑制形成淀粉状蛋白的单体肽，但尤其是淀粉状蛋白肽Aβ1-42的聚集。
在本发明的另一个实施方案中，提供了包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，其具有对淀粉状蛋白肽Aβ1-42的高结合敏感性，并且能够检测低至至少0.001μg的浓度，但特别地在0.5μg和0.001μg之间，更特别地在0.1μg和0.001μg之间的浓度范围，但尤其是0.001μg浓度的Aβ1-42纤维。
在本发明非常特别的实施方案中，提供包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，抗体能够检测纤维量低至0.001μg的最小浓度的Aβ1-42纤维以及低至0.1μg的最小浓度的Aβ1-40纤维以及低至1μg的最小浓度的Aβ1-38纤维。
根据本发明和如上文所描述的抗体与形成淀粉状蛋白的单体肽，但特别是与淀粉状蛋白形式(1-42)的结合导致了对形成淀粉状蛋白单体肽聚集成高分子原纤维或纤丝的抑制。通过对形成淀粉状蛋白的单体肽聚集的抑制，根据本发明的抗体能够预防或减缓淀粉状蛋白斑，特别是淀粉状蛋白形式(1-42)的形成，众所周知淀粉状蛋白形式(1-42)通过二级构象的改变变得不可溶，并且是患病动物或人类脑中淀粉状蛋白斑的主要部分。
根据本发明的抗体的聚集抑制潜力可以通过任何本领域所熟知的合适的方法来测定，特别是通过密度梯度超速离心法，随后通过在预先形成梯度上的SDS-PAGE沉降分析法和/或通过硫代黄素T(thioflavin，Th-T)荧光测定法来测定。
本发明还提供抗体，其在与由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝共孵育后，能够解聚所述高分子聚合的淀粉状蛋白原纤维或纤丝。
在本发明的另外一个实施方案中提供了抗体，特别是包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其中抗体在以高达1∶100的摩尔浓度比、更特别地以在1∶30和1∶100之间的摩尔浓度比、但尤其是以1∶100的摩尔浓度比与由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝共孵育后，能够使预形成的高分子聚合的淀粉状蛋白原纤维或纤丝解聚至少35％，特别地至少40％，更特别地至少50％，甚至特别地至少60％，但尤其是至少70％或更高。
具体而言，根据本发明的抗体与淀粉状蛋白预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝在28℃至40℃之间，特别地在32℃至38℃之间，更特别地在37℃的温度共孵育12小时至36小时，特别地18小时至30小时，更特别地是24小时。
在特别的实施方案中，本发明提供包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，其中抗体在37℃以1∶100的摩尔浓度比与由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝共孵育24小时后，当与和对照载体(只有淀粉状蛋白)孵育的分别的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝(对照)相比较，能够使所述的高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝解聚至少35％，特别地少40％，更特别地至少50％，甚至更特别地至少60％，但尤其至少70％或更高。
根据本发明的抗体的解聚潜力可以通过任何本领域所熟知的合适的方法来测定，特别是通过密度梯度超速离心法，随之通过在预先形成的梯度上的SDS-PAGE沉降分析法和/或通过硫代黄素T(Th-T)荧光测定法来测定。
本发明还提供构象敏感的抗体或其功能部分。
在本发明的另外的实施方案中提供了抗体，特别是包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体在与由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝共孵育后，能够引起β折叠构象向α螺旋和/或无规则卷曲构象，但特别是无规则卷曲构象，甚至更特别地是在分子内给定区域(尤其是在Aβ蛋白的Val 12环境中)的无规则卷曲构象的转变，这导致了以β折叠构象为代价的无规则卷曲构象的增加以及预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的改良的溶解。具体而言，当与在缓冲液中孵育的分别的预形成淀粉状蛋白聚合原纤维或纤丝(对照)相比较，β折叠构象减少达到至少30％，特别地达到至少35％，以及更特别地达到至少40％及更多。
具体而言，根据本发明的抗体与淀粉状蛋白预形成的高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝在28℃至40℃之间的温度，特别地在32℃和38℃之间，更特别地在37℃共孵育12小时至36小时，特别地18小时至30小时，特别地的24小时。
具体而言，本发明提供包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，所述抗体在37℃以1∶100的摩尔浓度比与由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝共孵育24小时后，能够引起β折叠构象向α螺旋和/或无规则卷曲构象，但特别是无规则卷曲构象，甚至更特别的是在分子内给定区域(尤其是在Aβ蛋白的Val 12环境中)的无规则卷曲构象的转变，这导致了以β折叠为代价的无规则卷曲构象的增加。当与在缓冲液中孵育的分别的预形成淀粉状蛋白聚合原纤维或纤丝(对照)相比较，β折叠构象减少了至少30％，特别地至少35％，以及更特别地至少40％及更多。
抗体在引起构象转变中的潜力可以通过任何本领域所熟知的合适的方法来测定，特别是通过固态13C NMR光谱学，但具体而言，通过测定Aβ肽，特别是Aβ肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是在Aβ1-42单体肽中的Va1 12 Cβ的构象的积分强度来测定。
通过形成淀粉状蛋白的聚合原纤维或纤丝的解聚，根据本发明的抗体能够预防或减缓淀粉状蛋白斑的形成，这能导致与疾病相关症状的缓解及其进展的延缓或逆转。
因此，本发明另一个实施方案提供了如上文所描述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，所述抗体能够降低患有导致脑中Aβ浓度增加的疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，但尤其是人类脑中Aβ的总量。
在本发明另一个实施方案中，提供了如上文所描述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，所述抗体能够分解斑块，因此能够减少患有导致增加脑中斑块负荷的疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，但尤其是人类脑中的斑块负荷。根据本发明的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体使脑中斑块负荷减少了至少20％，特别地至少25％，更特别地至少30％，甚至更特别地30％以上。
在本发明的另一个实施方案中，提供了如上文所描述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是单克隆抗体，所述抗体能够溶解斑块，导致患有导致脑中斑块负荷增加的疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，但尤其是人类脑中斑块量的减少。根据本发明的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体使脑中斑块量减少了至少10％，特别地至少15％，更特别地至少20％。
应该理解，根据本发明的抗体能够表现出上文描述的特异性质的一种、两种或更多种性质的不同组合。
例如，在一个实施方案中，本发明提供了抗体，特别是包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体表现出双功能，因为它们表现出如上文定义的聚集抑制特性以及解聚特性两者，特别是配以高度构象敏感性。
在本发明的另外一个实施方案中，提供了包括任何功能等效抗体或其功能部分的双功能抗体，但尤其是包括任何功能等效抗体或其功能部分的双功能单克隆抗体，所述抗体与淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽共孵育后，抑制了Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维或纤丝，以及此外，在与由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝共孵育后，能够解聚预形成的聚合原纤维或纤丝。
在本发明的特别的实施方案中，根据本发明的双功能抗体，但尤其是根据本发明的双功能单克隆抗体与淀粉状蛋白单体肽和预形成的高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的共孵育分别以高达1∶100的摩尔浓度比、更特别地以1∶30和1∶100之间摩尔浓度比、以及更特别地以1∶100的摩尔浓度比进行。
具体而言，根据本发明的抗体和淀粉状蛋白单体肽的共孵育在28℃至40℃之间，特别地在32℃至38℃之间，更特别地在37℃的温度进行24小时至60小时，特别地30小时至50小时，更特别地48小时；而与淀粉状蛋白预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的共孵育在28℃至40℃之间，特别地在32℃和38℃之间，更特别地在37℃的温度进行12小时至36小时，特别地18小时至30小时，更特别地24小时。
在本发明的另一个实施方案中，包括任何功能等效抗体或其功能部分的根据本发明的双功能抗体，特别是根据本发明的双功能单克隆抗体，能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少10％，特别地至少25％，更特别地至少35％，甚至更特别地至少50％，但尤其至少60-70％或更多。
在本发明另一个特别的实施方案中，包括任何功能等效抗体或其功能部分的根据本发明的双功能抗体，特别是根据本发明的双功能单克隆抗体，使淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集抑制了至少50％，特别地至少65％，更特别地至少75％，甚至更特别地至少80％，但尤其至少85％-90％，或者更多(与在缓冲液中孵育的分别的淀粉状蛋白肽单体(对照)相比)。
具体而言，本发明提供包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是双功能抗体，但尤其是单克隆抗体，特别是双功能单克隆抗体，所述抗体通过与Aβ纤维特异且直接的结合而引起二级构象转变来介导抑制淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚合作用，和/或诱导由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的溶解。
本发明还提供包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是双功能抗体，但尤其是单克隆抗体，特别是双功能单克隆抗体，所述抗体通过靶向且特异地结合到β-淀粉状蛋白表位区特别是由氨基酸残基aan-aam限制的β-淀粉状蛋白表位区内的表位，直接且特异地结合到β-淀粉状蛋白纤维，例如，诸如包含Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43的纤维，但尤其是结合到包含Aβ1-42单体肽的纤维，和/或诱导由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的溶解，其中所述氨基酸残基aan-aam中的n是2和16之间、特别的5和16之间、更特别的8和16之间、甚至更特别的10和16之间的整数，以及m是3和25之间、特别的3和23之间、特别的3和20之间、特别的3和17之间、特别的6和17之间、更特别的9和17之间、甚至更特别的11和17之间的整数，其中n和m不能是相同的数字并且n必须总是比m小的数字，n和m之间的差≥2。
在本发明的一个实施方案中，n是13和15之间的整数，但尤其是14，且m是22和24之间的整数，但尤其是23。
根据本发明的抗体的结合能够诱导所述蛋白中构象的转变，特别是β折叠构象向α螺旋和/或无规则卷曲构象，但特别是向无规则卷曲构象，甚至更特别的是向在分子内给定区域，尤其是在Aβ蛋白的Val 12环境中的无规则卷曲构象的转变。
在另一个实施方案中，本发明提供包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别单克隆抗体，所述抗体并入了至少一种上文已提到并且选自以下的特性：聚集抑制、解聚、诱导构象转变、识别且直接结合到表位(特别是14-23区域尤其是14-20区域的构象不连续表位)、预防或减缓淀粉状蛋白斑的形成、减少脑中可溶的Aβ总量、降低脑中斑块负荷、减少脑中斑块量、保持或提高认知记忆能力，但尤其是所述特性的两种或以上的组合。
在特别的实施方案中，本发明涉及包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别单克隆抗体，所述抗体并入了至少2种、特别地至少3种、更特别地至少4种、甚至更特别地至少5、6、7或8种，但尤其是所有上面提到的特性。
在特别的实施方案中，本发明提供了包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是双功能抗体，但尤其是单克隆抗体，特别是双功能单克隆抗体，其对Aβ1-42单体肽表现出高特异性，但对Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40和/或Aβ1-41显示出实质上没有或仅仅很小的交叉反应性；特别是提供了包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，但尤其是单克隆抗体，其对淀粉状蛋白肽Aβ1-42比对Aβ1-38，Aβ1-39，Aβ1-40，Aβ1-41更敏感高至100倍，特别地50至100倍，更特别地80至100倍，但尤其是100倍；以及对淀粉状蛋白肽Aβ1-42比对Aβ1-38更敏感高至1000倍，特别地500至1000倍，更特别地800至1000倍，但尤其特别地是1000倍；并且因此能够在体外和体内抑制形成淀粉状蛋白的单体肽，但尤其是淀粉状蛋白肽Aβ1-42的聚集。
在本发明的另一个实施方案中，提供了包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是双功能抗体，但尤其是单克隆抗体，特别是双功能单克隆抗体，其具有对淀粉状蛋白肽Aβ1-42的高结合亲和力，并且能够检测低至至少0.001μg的浓度、但特别地在0.5μg和0.001μg之间、更特别地在0.1μg和0.001μg之间的浓度范围、但尤其是0.001μg浓度的Aβ1-42纤维。
在本发明非常特别的实施方案中，提供了包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是双功能抗体，但尤其是单克隆抗体，特别是双功能单克隆抗体，所述抗体能够检测纤维量低至0.001μg最小浓度的Aβ1-42纤维以及低至0.1μg最小浓度的Aβ1-40纤维以及低至1μg最小浓度的Aβ1-38纤维。
在一个特别的方面，本发明涉及抗体或其片段，其识别并结合β-淀粉状蛋白上的至少一个独特的结合部位，特别是至少两个独特的结合部位。
在特别的实施方案中，本发明涉及包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，所述抗体识别并结合β-淀粉状蛋白上的至少一个独特的结合部位，特别是至少两个独特的结合部位，其中所述的至少一个或所述的至少两个独特的结合部位分别包含主要参与抗体结合的至少一个氨基酸残基和至少两个连续的氨基酸残基，其中在本发明特定的实施方案中，构成第一个独特结合部位的至少一个残基是插在以下核心序列中的Leu，以及构成第二个独特结合部位的至少两个连续的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Phe-Phe-：
-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Xaa7-
其中
Xaa1是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa3是选自Lys、His、Asn、Gln和Arg的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa7是选自Glu和Asp的氨基酸残基。
具体而言，提供了抗体或其片段，其识别并结合β-淀粉状蛋白上的至少一个独特的结合部位，特别是至少两个独特的结合部位，其中所述的至少一个或所述的至少两个独特的结合部位分别包含主要参与抗体结合的至少一个氨基酸残基和至少两个连续的氨基酸残基，其中在本发明特定的实施方案中，构成第一个独特结合部位的至少一个残基是插在以下核心序列中的Leu，以及构成第二个独特结合部位的至少两个连续的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Phe-Phe-：
-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Xaa7-
其中
Xaa1是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa3是选自Lys、His、Asn、Gln和Arg的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa7是选自Glu和Asp的氨基酸残基。
在本发明的另一个实施方案中，提供了抗体或其片段，其中
Xaa1是His或Arg，但特别是His；
Xaa2是Gln或Asn，但特别是Gln；
Xaa3是Lys或Arg，但特别是Lys；
Xaa4是Val或Leu，但特别是Val；
Xaa5是Ala或Val，但特别是Ala；
Xaa6是Glu或Asp，但特别是Glu；以及
Xaa7是Asp或Glu，但特别是Asp。
在另一方面，本发明涉及抗体或其片段，其识别并结合β-淀粉状蛋白上的至少一个独特的结合部位，特别地至少两个独特的结合部位，更特别地至少三个独特的结合部位，其中所述的一个或至少两个或至少三个独特的结合部位各自包含至少一个，特别地至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基。
具体而言，根据本发明的抗体或其片段结合β-淀粉状蛋白上的至少两个独特的结合部位，其中所述的至少两个独特的结合部位各自包含至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中所述的至少两个独特的结合部位在抗原上彼此密切接近地定位，被至少一个不参与抗体结合或与所述的至少两个连续的氨基残基相比参与抗体结合程度显著较小的氨基酸残基隔开，因此形成构象不连续的表位。
在本发明的另一个实施方案中，提供了根据本发明的抗体或其片段，其识别并结合β-淀粉状蛋白上的至少一个独特的结合部位，特别地至少两个独特的结合部位，更特别地至少三个独特的结合部位，其中所述的独特的结合部位分别包含至少一个和至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中被至少一个不参与抗体结合或与主要参与抗体结合的氨基酸残基相比参与抗体结合程度显著较小的氨基酸残基隔开的至少一个和至少两个连续的氨基酸分别是插在以下核心序列中的-His-和-Lys-Leu-：
-His-Xaa2-Lys-Leu-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-
其中
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa3是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa7是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa8是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
并且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa6、Xaa7、Xaa8不参与抗体结合或与-His-和-Lys-Leu-结合部位相比参与抗体结合程度显著较小。
在另一个实施方案中，提供了抗体或其片段，其识别并结合β-淀粉状蛋白上的至少一个独特的结合部位，特别地至少两个独特的结合部位，更特别地至少三个独特的结合部位，其中所述的独特的结合部位分别包含至少一个和至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中代表第一个结合部位的至少两个连续的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Phe-Phe-，且至少一个氨基酸残基是插在以下核心序列中的-His-：
-Xaa1-His-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Phe-Phe-Xaa7-Xaa8-Xaa9-
其中，
Xaa1是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa3是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa4是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Ala、Val、Leu和Ile的氨基酸残基；
Xaa7是选自Ala、Val、Leu和Ile的氨基酸残基；
Xaa8是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa9是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
且其中所述的氨基酸残基Xaa1、Xaa3、Xaa6、Xaa7、Xaa8和Xaa9不参与抗体结合或与-His-和-Phe-Phe-结合部位相比参与抗体结合程度显著较小。
在本发明特定的实施方案中，第一种主要参与抗体结合的至少两个连续的氨基酸残基包含插在以下核心序列中的-Lys-和-Leu-，并且第二种至少两个连续的氨基酸残基包含插在以下核心序列中的-Phe-Phe-：
-Xaa1-Xaa2-Lys-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Xaa7-
其中
Xaa1是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa7是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa7不参与抗体结合或与Lys-Leu和-Phe-Phe-结合部位相比参与抗体结合程度显著较小。
在本发明另一个实施方案中，提供了抗体或其片段，其中
Xaa1是His或Arg，但特别是His；
Xaa2是Gln或Asn，但特别是Gln；
Xaa4是Val或Leu，但特别是Val；
Xaa5是Ala或Val，但特别是Ala；
Xaa6是Glu或Asp，但特别是Glu；以及
Xaa7是Asp或Glu，但特别是Asp。
在本发明另外的实施方案中，根据本发明的抗体或其片段结合β-淀粉状蛋白上的至少三个独特的结合部位，其中所述的至少三个独特的结合部位分别包含至少一个氨基酸残基和至少两个连续的氨基酸残基，所述残基主要参与抗体的结合，其中所述的至少三个独特的结合部位在抗原上彼此密切接近地定位，分别被至少一个不参与抗体结合或与所述的至少一个氨基酸残基及所述的至少两个连续的氨基酸残基相比参与抗体结合程度显著较小的氨基酸残基隔开，因此形成构象不连续的表位。
在本发明特定的实施方案中，第一种至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基包含插在以下核心序列中的-Lys-Leu-，且第二种至少两个连续的氨基酸残基包含插在以下核心序列中的-Phe-Phe-；且第三种至少一个氨基酸残基包含插在以下核心序列中的-His-：
-His-Xaa2-Lys-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Xaa7
其中，
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa7是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6和Xaa7不参与抗体结合或与-His-、-Lys-Leu和-Phe-Phe-结合部位相比参与抗体结合程度显著较小。
在本发明另一个实施方案中，提供了抗体或其片段，其中
Xaa2是Gln或Asn，但特别是Gln；
Xaa4是Val或Leu，但特别是Val；
Xaa5是Ala或Val，但特别是Ala；
Xaa6是Glu或Asp，但特别是Glu；以及
Xaa7是Glu或Asp，但特别是Asp。
在本发明特定的实施方案中，第一种至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基包含插在以下核心序列中的-Lys-Leu-，且第二种至少两个连续的氨基酸残基包含插在以下核心序列中的-Phe-Phe-；且第三种至少一个氨基酸残基包含插在以下核心序列中的-Asp-：
-Xaa1-Xaa2-Lys-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Asp.-
其中，
Xaa1是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6和Xaa7不参与抗体结合或与-Asp-、-Lys-Leu和-Phe-Phe-结合部位相比参与抗体结合程度显著较小。
在本发明另一个实施方案中，提供了抗体或其片段，其中
Xaa1是His或Arg，但特别是His；
Xaa2是Gln或Asn，但特别是Gln；
Xaa4是Val或Leu，但特别是Val；
Xaa5是Ala或Val，但特别是Ala；以及
Xaa6是Glu或Asp，但特别是Glu；
在本发明另外的实施方案中，提供了根据本发明的抗体或其片段，其结合β-淀粉状蛋白上的4个独特的结合部位，其中所述的4个独特的结合部位分别包含一个氨基酸残基和两个连续的氨基酸残基，所述残基主要参与抗体结合，其中所述的4个独特的结合部位在抗原上彼此密切接近地定位，分别被至少一个不参与抗体结合或与4个独特的结合部位的所述一个氨基酸残基及所述两个连续的氨基酸残基相比参与抗体结合程度显著较小的氨基酸残基隔开，因此形成构象不连续的表位。
具体而言，第一种两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Lys-Leu-，且第二种至少两个连续的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Phe-Phe-；第一种单氨基酸残基是插在以下核心序列中的-His-且第二种单氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Asp-：
-His-Xaa2-Lys-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Asp-
其中，
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa7不参与抗体结合或与-His-、-Asp-、-Lys-Leu和-Phe-Phe-结合部位相比参与抗体结合程度显著较小。
在本发明特定的实施方案中，如上文所定义的识别和结合部位形成了位于β-淀粉状蛋白的12至24位氨基酸残基之间、特别地14至23位氨基酸残基之间、更特别地14至20位氨基酸残基之间区域内的构象上不连续的表位，其中分别包含1和2个氨基酸残基的三个独特的识别和结合部位分别位于位置16、17、以及位置19和20、以及位置14，所述残基主要参与β-淀粉状蛋白的结合且其中所述的三个独特的识别和结合部位分别被位于位置15和18的单氨基酸残基隔开，所述氨基酸残基不参与抗体的结合，或至少基本上更小的程度。
在特别的实施方案中，所述的主要参与β-淀粉状蛋白结合的连续氨基酸残基，特别地在位置16和17的-Lys-Leu-和在位置19和20的-Phe-Phe-，被嵌入到以下核心序列内：
Val-  His-  His-  Gln-  Lys-  Leu-  Val-  Phe-  Phe-  Ala-  Glu-  Asp
12    13    14    15    16    17    18    19    20    21    22    23
在另外的特别的实施方案中，所述的主要参与β-淀粉状蛋白结合的连续氨基酸残基，特别的在位置16的-Lys-、在位置17的-Leu-和在位置19和20的-Phe-Phe-、以及在位置14的-His-，被嵌入到以下核心序列内：
Val-  His-  His-  Gln-  Lys-  Leu-  Val-  Phe-  Phe-  Ala-  Glu-  Asp-
12    13    14    15    16    17    18    19    20    21    22    23
在本发明特定的实施方案中，根据本发明的抗体是通过对抗不包含所述的独特的结合部位的抗原片段而产生的。
在表位区域的变动可能至少部分地是由超分子抗原构建体的应用引起的，该超分子抗原构建体包含与β-淀粉状蛋白肽、特别地与β-淀粉状蛋白肽Aβ1-16氨基酸序列相对应的抗原肽，该抗原肽用亲水部分，例如，诸如聚乙二醇(PEG)修饰，其中所述的亲水部分通过至少一个，特别地一个或两个氨基酸，例如，诸如赖氨酸、谷氨酸和半胱氨酸或任何其它能够作为亲水部分偶联到肽片段的连接装置的合适的氨基酸或氨基酸类似物，而共价地连接到每个抗原的末端，如在下文中免疫方法中所描述的那样。如本文所描述的那样，当利用PEG作为亲水部分时，游离PEG末端共价地连接到磷脂酰乙醇胺或任何其它适合于作为锚定元件的化合物上，例如，以将抗原构建体嵌到脂质体的双分子层中。
将脂质A用作免疫方案的一部分也能促进表位区域的变动。
在本发明的特别的实施方案中，提供了包含SEQ ID NO：7的轻链可变区(LCVR)的抗体。
在另一特别的实施方案中，本发明涉及SEQ ID NO：7的轻链可变区(LCVR)。
在本发明的另一个特别的实施方案中，提供了包含SEQ ID NO：8的重链可变区(HCVR)的抗体。
在另一特别的实施方案中，本发明涉及SEQ ID NO：8的重链可变区(HCVR)。
在一个实施方案中，本发明涉及包含SEQ ID NO：8的重链可变区和SEQ ID NO：7的轻链可变区这两者的抗体。
也是本发明的一部分的是包含轻链可变区(LCVR)或重链可变区(HCVR)或轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)这两者的抗体，轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)分别与SEQ ID NO：7和8中提供的任何肽同源。
具体而言，本发明涉及根据本发明和如上文所描述的抗体或其片段，其中轻链可变区(LCVR)具有和SEQ ID NO：7给出的序列90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列。
此外，本发明涉及根据本发明和如上文所描述的抗体或其片段，其中重链可变区(HCVR)具有和SEQ ID NO：8给出的序列90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列。
进一步地，本发明涉及根据本发明和如上文所描述的抗体或其片段，其中轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)一起具有与SEQ ID NO：7和8给出的序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列。
在另一个特别的实施方案中，本发明涉及具有和SEQ ID NO：7给出的序列90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列的轻链可变区。
在另外特别的实施方案中，本发明涉及具有和SEQ ID NO：8给出的序列90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列的重链可变区。
在本发明的另外一个实施方案中，提供了多核苷酸，其包含编码本发明上文所描述的抗体的核苷酸序列。
具体而言，本发明涉及包含编码本发明的抗体的核苷酸序列的多核苷酸，其包含：
a)至少SEQ ID NO：9的轻链可变区的核苷酸序列；
b)由于遗传密码子的简并性在密码子序列上与(a)的核苷酸序列独特的核苷酸序列；
c)(a)和(b)的互补序列；或
d)(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的片段，其包含选自以下的连续核苷酸段：至少20个连续的核苷酸、至少25个连续的核苷酸、至少30个连续的核苷酸、至少35个连续的核苷酸、至少40个连续的核苷酸、至少45个连续的核苷酸和至少50个连续的核苷酸；
在另一个实施方案中，本发明涉及包含编码根据本发明的抗体的核苷酸序列的多核苷酸，其包含：
a)至少SEQ ID NO：10的轻链的核苷酸序列；
b)由于遗传密码子的简并性在密码子序列上与(a)的核苷酸序列独特的核苷酸序列；
c)(a)和(b)的互补序列；或
d)(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的片段，其包含选自以下的连续核苷酸段：至少20个连续的核苷酸、至少25个连续的核苷酸、至少30个连续的核苷酸、至少35个连续的核苷酸、至少40个连续的核苷酸、至少45个连续的核苷酸和至少50个连续的核苷酸；
在又另一个实施方案中，本发明涉及包含编码根据本发明的抗体的核苷酸序列的多核苷酸，其包含：
a)至少SEQ ID NO：11的重链可变区的核苷酸序列；
b)由于遗传密码子的简并性在密码子序列上与(a)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；
c)(a)和(b)的互补序列；或
d)(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的片段，其包含选自以下的连续核苷酸段：至少20个连续的核苷酸、至少25个连续的核苷酸、至少30个连续的核苷酸、至少35个连续的核苷酸、至少40个连续的核苷酸、至少45个连续的核苷酸和至少50个连续的核苷酸；
在又另外一个实施方案中，本发明涉及包含编码根据本发明的抗体的核苷酸序列的多核苷酸，其包括：
a)至少SEQ ID NO：12的重链的核苷酸序列或与其互补的序列；
b)由于遗传密码子的简并性在密码子序列上与(a)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；
c)(a)和(b)的互补序列；或
d)(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的片段，其包含选自以下的连续核苷酸段：至少20个连续的核苷酸、至少25个连续的核苷酸、至少30个连续的核苷酸、至少35个连续的核苷酸、至少40个连续的核苷酸、至少45个连续的核苷酸和至少50个连续的核苷酸；
本发明也包含了多核苷酸，所述多核苷酸包含：
a)编码轻链可变区的SEQ ID NO：9的核苷酸序列；
b)由于遗传密码子的简并性在密码子序列上与(a)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；
c)(a)和(b)的互补序列；或
d)(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的片段，其包含选自以下的连续核苷酸段：至少20个连续的核苷酸、至少25个连续的核苷酸、至少30个连续的核苷酸、至少35个连续的核苷酸、至少40个连续的核苷酸、至少45个连续的核苷酸和至少50个连续的核苷酸；
本发明也包含了多核苷酸，所述多核苷酸包含：
a)编码轻链的SEQ ID NO：10的核苷酸序列；
b)由于遗传密码子的简并性在密码子序列上与(a)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；
c)(a)和(b)的互补序列；或
d)(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的片段，其包含选自以下的连续核苷酸段：至少20个连续的核苷酸、至少25个连续的核苷酸、至少30个连续的核苷酸、至少35个连续的核苷酸、至少40个连续的核苷酸、至少45个连续的核苷酸和至少50个连续的核苷酸；
本发明也包含了多核苷酸，所述多核苷酸包含：
a)编码重链可变区的SEQ ID NO：11的核苷酸序列；
b)由于遗传密码子的简并性在密码子序列上与(a)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；
c)(a)和(b)的互补序列；或
d)(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的片段，其包含选自以下的连续核苷酸段：至少20个连续的核苷酸、至少25个连续的核苷酸、至少30个连续的核苷酸、至少35个连续的核苷酸、至少40个连续的核苷酸、至少45个连续的核苷酸和至少50个连续的核苷酸；
本发明也包含了多核苷酸，所述多核苷酸包含：
a)编码重链的SEQ ID NO：12的核苷酸序列；
b)由于遗传密码子的简并性在密码子序列上与(a)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；
c)(a)和(b)的互补序列；或
d)(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的片段，其包含选自以下的连续核苷酸段：至少20个连续的核苷酸、至少25个连续的核苷酸、至少30个连续的核苷酸、至少35个连续的核苷酸、至少40个连续的核苷酸、至少45个连续的核苷酸和至少50个连续的核苷酸；
在另一个实施方案中，本发明涉及与下列序列杂交的任何核苷酸序列：
a.根据本发明且分别在SEQ ID NO：9、10、11和12给出的核苷酸序列；
b.由于遗传密码子的简并性在密码子序列上与(a)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；
c.(a)和(b)的互补序列；或
d.(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的片段，其包含选自以下的连续核苷酸段：至少20个连续的核苷酸、至少25个连续的核苷酸、至少30个连续的核苷酸、至少35个连续的核苷酸、至少40个连续的核苷酸、至少45个连续的核苷酸和至少50个连续的核苷酸。
具体而言，本发明涉及在常规杂交条件下、特别地在严格杂交条件下与根据本发明和分别在SEQ ID NO：9、10、11和12给出的核苷酸序列、特别是与其互补链杂交的任何核苷酸序列。
在另外的实施方案中，本发明涉及在使用5xSSPE、1％SDS、1x登哈特(Denhardts)溶液作为反应溶液和/或杂交温度在35℃和70℃之间、优选65℃的常规杂交条件下，与根据本发明和分别在SEQ ID NO：9、10、11和12给出的核苷酸序列、特别是其互补链杂交的任何核苷酸序列。杂交后，优选地在35℃和70℃之间、优选65℃的温度，首先用2xSSC、1％SDS且随后用0.2xSSC进行洗涤(关于SSPE、SSC和登哈特溶液的定义参见上述引文中的Sambrook等)。
具体而言，本发明涉及在如上面的Sambrook等描述的严格杂交条件、更特别地在如上面指出的那样在65℃进行杂交和洗涤的严格杂交条件下，与根据本发明和分别在SEQ ID NO：9、10、11和12给出的核苷酸序列、特别是其互补链杂交的任何核苷酸序列。
在特别的实施方案中，本发明提供了包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是双功能抗体，但尤其是单克隆抗体，特别是双功能单克隆抗体，所述抗体具有由选自分别于2005年12月1日和2005年12月9日分别以DSM ACC2752、DSM ACC 2750和DSM ACC2751保藏的FP12H3、FP 12H3-C2和FP 12H3-G2的杂交瘤细胞系产生的抗体的特征性特性。
更具体的说，本发明涉及由分别于2005年12月1日和2005年12月9日以DSM ACC2752保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3产生的抗体，所述抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分。
更具体的说，本发明涉及由分别于2005年12月1日和2005年12月9日以DSM ACC2750保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3-C2产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分。
更具体的说，本发明涉及由分别于2005年12月1日和2005年12月9日以DSM ACC2751保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3-G2产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分。
在另一个特别的实施方案中，本发明提供了包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是双功能抗体，但尤其是单克隆抗体，特别是双功能单克隆抗体，所述抗体具有由2005年12月8日以DSM ACC2755保藏的杂交瘤细胞系ET 7E3产生的抗体的特征性特性。
更具体的说，本发明涉及由2005年12月8日以DSM ACC2755保藏的杂交瘤细胞系ET 7E3产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分。
在另一个特别的实施方案中，本发明提供了包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，特别是双功能抗体，但尤其是单克隆抗体，特别是双功能单克隆抗体，所述抗体具有由2005年12月8日以DSM ACC2756保藏的杂交瘤细胞系EJ 7H3产生的抗体的特征性特性。
更具体的说，本发明涉由2005年12月8日以DSM ACC2756保藏的杂交瘤细胞系EJ 7H3产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分。
本发明另一个目的是提供包含根据本发明和如上文描述的抗体的方法和组合物，例如通过用根据本发明和如上文描述的抗体被动免疫人或动物，用于预防和/或治疗和/或缓解由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症的效应。所述疾病和病症包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性及年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。
本发明另一目的是提供应用根据本发明的单克隆抗体和/或其功能部分和包含根据本发明和在上文中描述的抗体的组合物用于诊断或治疗性干预由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症的方法。所述疾病和病症包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。
具体而言，本发明的一个目的是提供使用根据本发明的单克隆抗体和/或其功能部分和包含根据本发明和如上文描述的抗体、特别地双特异性或双有效性抗体但尤其是双特异性或双有效性单克隆抗体的组合物来减少和预防神经疾病(包括但不限于阿尔茨海默病)的发生的方法。
根据本发明的组合物包含根据本发明和如上文描述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、特别是双特异性或双有效性抗体，特别地是以治疗有效量的，更特别的根据本发明和如上文描述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体、尤其是双特异性或双有效性单克隆抗体，特别地是以治疗有效量的；以及任选的，可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
特别地，根据本发明的组合物包含包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、优选地单克隆抗体，以及任选选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，该抗体能够抑制淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽聚集成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝。
在另外的实施方案中，本发明提供了组合物，其包含包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、优选地单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体在与淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽共孵育后，特别地的以高达1∶100的摩尔浓度比、更特别地以1∶30至1∶100之间的摩尔浓度比、但尤其是以1∶100的摩尔浓度比共孵育后，抑制了Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维或纤丝。具体而言，当与在缓冲液中孵育的分别的淀粉状蛋白肽单体(对照)相比较，所述的抑制作用达到至少50％，特别地达到至少65％，更特别地达到至少75％，甚至更特别地达到至少80％，但尤其是达到至少85％-90％，或者更多。
具体而言，根据本发明的抗体和淀粉状蛋白单体肽的共孵育在37℃的温度进行48小时。
根据本发明的抗体的聚集抑制潜力可以通过密度梯度超速离心法，接着通过在预先形成的梯度上的SDS-PAGE沉降分析法和/或通过硫代黄素T(Th-T)荧光测试法来测定。
本发明还提供组合物，其包含抗体以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体能够解聚由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝。
通过解聚淀粉状蛋白产生的聚合原纤维或纤丝，根据本发明的抗体能够预防或减缓淀粉状蛋白斑的形成，从而导致疾病相关症状的缓解和延缓或逆转它的进展。
在本发明另一个实施方案中，提供了组合物，其包含包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、特别地单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体与由淀粉状蛋白单体肽，优选β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝以1∶30至1∶100之间、特别地1∶100的摩尔浓度比共孵育后，特别地在37℃的温度共孵育24小时后，能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少35％、特别地至少40％、更特别地至少50％、甚至更特别地至少60％、但尤其是至少70％或更高。
根据本发明的抗体的解聚潜力可以通过密度梯度超速离心法，接着通过在预先形成的梯度上的SDS-PAGE沉降分析法和/或通过硫代黄素T(Th-T)荧光测试法来测定。
本发明还提供组合物，其包含特别地有效量的、更特别地治疗有效量的抗体或其功能部分，所述抗体是构象敏感的。
在本发明的其它实施方案中，提供了组合物，其包含包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、优选地单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体与由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝共孵育后，特别地在37℃的温度共孵育24小时后，能够引起β折叠构象向α螺旋和/或无规则卷曲构象，但特别是向无规则卷曲构象，甚至更特别地是向在分子内给定区域，尤其是在Aβ蛋白的Val 12环境中的无规则卷曲构象的转变，这导致了以β折叠构象为代价的无规则卷曲构象的增加以及预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的改良的溶解。具体而言，当与在缓冲液中孵育的分别的预形成淀粉状蛋白聚合原纤维或纤丝(对照)相比较，β折叠构象的减少达到至少30％，特别地达到至少35％，以及更特别地达到至少40％及更多。
抗体诱导二级构象转变的潜力通过固态13C NMR光谱学测定，但具体而言，通过测量Aβ1-42肽中Va1 12 Cβ构象的积分强度而测定。
本发明还提供了组合物，其包含特别地治疗有效量的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、特别是单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体是双功能的，因为它表现出如上文所定义的聚集抑制特性以及解聚特性两者，优选地配以高度构象敏感性。
在本发明的另一个实施方案中，提供了组合物，其包含包括任何功能等效抗体或其功能部分的双功能抗体、但尤其是双功能单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体与淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽共孵育后，抑制了Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维，以及此外，在与由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝共孵育后，能够解聚预形成的聚合原纤维或纤丝。
在本发明特定的实施方案中，根据本发明的双功能抗体，但尤其是根据本发明的双功能单克隆抗体与淀粉状蛋白单体肽和预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的共孵育分别以高达1∶100的摩尔浓度比、特别地以1∶30至1∶100之间的摩尔浓度比、以及更特别地以1∶100的摩尔浓度比进行。
在本发明另外的特别的实施方案中，与淀粉状蛋白单体肽和预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的共孵育在37℃的温度分别进行48小时和24小时。
在本发明的另一个特定的实施方案中，提供了组合物，其包括根据本发明的双功能抗体、但尤其是根据本发明的双功能单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少10％，特别地至少25％，更特别地至少35％，甚至更特别地至少50％，但尤其是至少60-70％或更多。
在本发明另一个实施方案中，提供了组合物，其包括根据本发明的双功能抗体、但尤其是根据本发明的双功能单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，与在缓冲液中孵育的分别的淀粉状蛋白肽单体(对照)相比较，所述抗体使淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集抑制了至少50％，特别地至少65％，更特别地至少75％，甚至更特别地至少80％，但尤其是至少85％-90％，或者更多。
具体而言，本发明提供了组合物，其包含包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、特别是单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体通过与Aβ纤维特异且直接的结合而引起二级构象转变来介导抑制淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚合作用，和/或诱导由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的溶解。
本发明还提供了组合物，其包含包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、特别是单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体通过靶向且特异地结合到β-淀粉状蛋白表位区特别是由氨基酸残基aan-aam限制的β-淀粉状蛋白表位区内的表位，直接且特异地结合到β-淀粉状蛋白纤维，例如，诸如包含Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43的纤维，但尤其是结合到包含Aβ1-42单体肽的纤维，和/或诱导由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的溶解，其中所述氨基酸残基aan-aam中的n是2和15之间、特别的5和15之间、更特别的8和15之间、甚至更特别的10和15之间的整数，以及m是3和17之间、特别的6和17之间、更特别的9和17之间、甚至更特别的11和17之间的整数，其中n和m不能是相同的数字并且n必须总是比m小的数字，n和m之间的差≥2。
根据本发明的抗体的结合能够诱导所述蛋白中构象的转变，特别是β折叠构象向α螺旋和/或无规则卷曲构象，但特别地是向无规则卷曲构象，甚至更特别的是向在分子内给定区域，尤其是在Aβ蛋白的Val 12环境中的无规则卷曲构象的转变。
在另外的实施方案中，本发明提供了组合物，其包含包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、特别是单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体并入了至少一种上文所提到的特性，即抑制聚合、解聚、诱导构象转变、识别且直接结合到4-16和/或14至23，但特别是14至20表位区域、但尤其是所述特性的两种或以上的组合。
在特别的实施方案中，本发明提供组合物，其包含包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、特别是双功能抗体，但尤其是单克隆抗体、特别是双功能单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体对Aβ1-42单体肽显示出高特异性，但对Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40和/或Aβ1-41单体肽显示出实质上没有或仅仅很小的交叉反应性，特别是包含包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、但尤其是单克隆抗体，所述抗体对淀粉状蛋白肽Aβ1-42比对Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40、Aβ1-41更敏感高达100倍，特别地50至100倍，更特别地80至100倍，但尤其是100倍；以及对淀粉状蛋白肽Aβ1-42比对Aβ1-38更敏感高达1000倍，特别地500至1000倍，更特别地800至1000倍，但尤其是1000倍；并且因此能够在体外和体内抑制形成淀粉状蛋白的单体肽，但尤其是淀粉状蛋白肽Aβ1-42的聚集。
在本发明的另一个特别的实施方案中，提供了组合物，其包含包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、特别是双功能抗体，但尤其是单克隆抗体、特别是双功能单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体对淀粉状蛋白肽Aβ1-42具有高结合敏感性，并且能够检测低至至少0.001μg的浓度、但特别地在0.5μg至0.001μg之间的浓度范围、更特别地在0.1μg至0.001μg之间、但尤其是0.001μg浓度的Aβ1-42纤维。
在本发明的非常特别的实施方案中，提供了组合物，其包含包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、特别是双功能抗体，但尤其是单克隆抗体、特别是双功能单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体能够检测纤维量低至0.001μg最小浓度的Aβ1-42纤维以及纤维量低至0.1μg最小浓度的Aβ1-40纤维以及低至1μg最小浓度的Aβ1-38纤维。
在特别的实施方案中，本发明涉及组合物，其包含包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述抗体具有由选自分别于2005年12月1日和2005年12月9日分别以DSM ACC2752、DSM ACC 2750和DSM ACC2751保藏的FP12H3、FP 12H3-C2和FP 12H3-G2的杂交瘤细胞系产生的抗体的特征性特性。
更具体的说，本发明涉及组合物，其包含由分别于2005年12月1日和2005年12月9日以DSM ACC2752保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
更具体的说，本发明涉及组合物，其包含由分别于2005年12月1日和2005年12月9日以DSM ACC2750保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3-C2产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
本发明还涉及组合物，其包含由分别于2005年12月1日和2005年12月9日以DSM ACC2751保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3-G2产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
在另一个实施方案中，本发明涉及组合物，其包含具有由2005年12月8日以DSM ACC2755保藏的杂交瘤细胞系ET 7E3产生的抗体的特征性特性、包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
本发明还涉及组合物，其包含由2005年12月8日以DSM ACC2755保藏的杂交瘤细胞系ET 7E3产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
在另一个特别的实施方案种，本发明涉及组合物，其包含具有由2005年12月8日以DSM ACC2756保藏的杂交瘤细胞系EJ 7H3产生的抗体的特征性特性、包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
本发明还涉及组合物，其包含由2005年12月8日以DSM ACC2756保藏的杂交瘤细胞系EJ 7H3产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
根据本发明的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、特别是单克隆可以与其它用于疾病治疗的生物活性物质和方法联合施用。其它的生物活性物质可以是以混合物的形式成为已经包含根据本发明的抗体的相同组合物的一部分，其中抗体和其它的生物活性物质可以被混合到相同的可药用溶剂和/或载体中或与之相混合，或可以作为单独的组合物的一部分单独提供，其可以单独地或以多部分的试剂盒的形式一起给予。
根据本发明的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、特别是单克隆抗体可以与一种或多种其它生物活性物质同时地、间歇地或相继地施与。例如，根据本发明的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体可以与第一种额外的生物活性物质同时施与，或在抗体施与之后或之前相继施与。如果选择了一种以上额外生物活性物质与至少一种根据本发明的抗体一起施与的施用方案，化合物或物质可以以不同的组合方式部分地同时施与、部分地相继施与。
本发明的另一个目的是提供包含至少一种本发明的抗体、以及任选的一种或以上其它生物活性物质的抗体混合物，以及涉及应用分别的抗体、或包括包含所述抗体的组合物的其混合物或抗体混合物用于预防和/或治疗性治疗和/或缓解由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症的效应的方法，所述疾病和病症包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。
本发明的混合物除了包含本发明的抗体之外，还可以包含生物活性物质，例如，诸如已知的用于治疗由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症的化合物，所述疾病和病症包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白诸如涉及阿尔茨海默病的Aβ蛋白相关的疾病和病症。
在本发明的另一个实施方案中，其它的生物活性物质或化合物也可以是能用于由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症(包括由淀粉状蛋白β引起的淀粉样变性)治疗的治疗剂，或可用于其它神经疾病药物治疗的治疗剂。
其它生物活性物质或化合物可以通过与根据本发明的抗体相同或相似的机理，或通过不相关的作用机理，或通过多种相关和/或不相关的机理发挥它的生物学效果。
一般地，其它的生物活性化合物可以包括中子透射增强剂、精神病治疗药物、乙酰胆碱酯酶抑制剂、钙通道阻断剂、生物胺、苯并二氮
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类镇静剂、乙酰胆碱合成、贮藏或释放增强剂、乙酰胆碱突触后受体激动剂、单胺氧化酶-A或-B抑制剂、N-甲基-D-天冬氨酸谷氨酸受体拮抗剂、非甾体类抗炎药物、抗氧化剂和5-羟色胺能受体拮抗剂。
具体而言，根据本发明的混合物可以包含根据本发明的抗体、至少一种其它生物活性化合物，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述的其它生物活性化合物选自抗氧化应激的化合物、抗细胞凋亡的化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂诸如哌仑西平和代谢产物、3-氨基-1-丙磺酸(3APS)、1，3-丙二磺酸(1，3PDS)、分泌酶活化剂、β-和γ-分泌酶抑制剂、τ蛋白、神经递质、β折叠破坏剂、消炎分子、或胆碱酯酶抑制剂(ChEI)(诸如他克林、卡巴拉汀、多奈哌齐、和/或加兰他敏)以及其它药物和营养补充剂。
在另外的实施方案中，根据本发明的化合物可以包含烟酸或美金刚胺(memantine)、根据本发明的抗体、以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
在本发明的另一个实施方案中，提供了混合物，其包含用于治疗包括幻觉、妄想症、思维障碍(表现为显著的无条理、思维不中肯、言不及义)以及古怪或紊乱的行为和快感缺乏、情感单调、冷淡、和不合群的阳性和阴性精神病症状的“非典型的抗精神病药物”，例如，诸如氯氮平、齐拉西酮、利哌利酮、阿立哌唑或奥氮平，以及根据本发明的抗体，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
在本发明的特别的实施方案中，根据本发明和如上文描述的组合物和混合物包含分别是治疗有效量的抗体和生物活性物质。
适合与根据本发明的抗体联合用于混合物中的其它化合物，例如，描述于WO 2004/058258(特别参见16和17页)，包括治疗性药物靶标(36-39页)、链烷磺酸和烷醇硫酸(39-51页)、胆碱酯酶抑制剂(51-56页)、NMDA受体拮抗剂(56-58页)、***(58-59页)、非甾体抗炎药(60-61页)、抗氧化剂(61-62页)、过氧化物酶增殖物活化的受体(PPAR)激动剂(63-67页)、胆固醇下降剂(68-75页)、淀粉状蛋白抑制剂(77-78页)、金属螯合剂(78-79页)、精神抑制剂和抗抑郁剂(80-82页)、营养补充物(83-89页)、增加脑中生物活性物质可利用性的化合物(参见89-93页)和前体药物(93和94页)，该文献在此处引入作为参考。
还提供制备根据本发明的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体的方法，特别是制备单克隆抗体的方法，所述方法包括产生抗超分子抗原构建体的抗体、但特别是单克隆抗体，所述超分子抗原构建体包含与β-淀粉状蛋白肽，特别是β-淀粉状蛋白肽Aβ1-15，Aβ1-16和Aβ1-16(Δ14)的氨基酸序列相对应的抗原性肽，该抗原性肽用疏水部分(例如，诸如棕榈酸)或亲水部分(例如，诸如聚乙二醇(PEG))或两者的组合进行修饰，其中所述疏水和亲水部分分别通过至少一个，特别是一个或两个氨基酸，例如，诸如赖氨酸或能够用作将亲水及疏水部分偶联到肽片段的连接装置的任何其它合适的氨基酸或氨基酸类似物，例如谷氨酸或半胱氨酸，而共价地连接到每一个抗原性肽的末端。
也是发明的一部分的是根据本发明和如上文描述的单克隆抗体和/或其功能片段，和/或包含所述抗体的药物组合物或混合物在制备治疗或减轻疾病和病症的效应的药物中的应用，其中所述疾病和病症由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起或与其相关，包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，诸如以下疾病，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，以及以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。
在本发明的另一个实施方案中，提供了使用根据本发明的抗体和/或其功能部分、但尤其是单克隆抗体和/或其功能部分或功能等效抗体制备用于治疗或减轻疾病和病症的效应的药物组合物的方法，该方法包括以可药用形式制剂抗体，其中所述疾病和病症由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起或与其相关，包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，诸如以下疾病，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，以及以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。
根据本发明的抗体和/或其功能部分、但尤其是单克隆抗体和/或其功能部分或功能等效抗体以及包含所述抗体的组合物和混合物可以用于制备用于预防、治疗或减轻疾病和病症的效应的药物，其中所述疾病和病症由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起或与其相关，包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。
在本发明另外的实施方案中，提供了用于降低患有导致脑中斑块负荷增加的疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，但尤其是人类脑中斑块负荷的方法，该方法包括给需要该治疗的动物、特别是哺乳动物、更特别是人类施与治疗有效量的根据本发明和如上文描述的抗体和/或其功能部分、但尤其是单克隆抗体和/或其功能部分或功能等效抗体，或包含所述抗体的组合物或混合物。
具体而言，斑块负荷减少了至少20％，特别地至少25％，更特别地至少30％，甚至更特别地30％以上。
在本发明另外的实施方案中，提供了用于降低患有导致脑中斑块负荷增加的疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，但尤其是人类脑中斑块量的方法，该方法包括给需要该治疗的动物、特别是哺乳动物、更特别是人类施与治疗有效量的根据本发明和如上文描述的抗体和/或其功能部分、但尤其是单克隆抗体和/或其功能部分或功能等效抗体，或包含所述抗体的组合物或混合物。
具体而言，脑中的斑块量减少了至少10％，特别地至少15％，更特别地15％以上。
在本发明还另一个的实施方案中，提供了用于降低患有导致脑中可溶解Aβ浓度增加的疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，但尤其是人类脑中可溶解Aβ总量的方法，该方法包括给需要该治疗的动物、特别是哺乳动物、更特别是人类施与治疗有效量的根据本发明和如上文描述的抗体和/或其功能部分、但尤其是单克隆抗体和/或其功能部分或功能等效抗体，或包含所述抗体的组合物或混合物。
本发明的一个目的是提供通过给患有如下症状的动物或人类施与根据本发明的抗体、但尤其是单克隆抗体或包含该抗体的组合物或混合物，从而预防、治疗或减轻疾病和病症的效应的方法，其中所述疾病和病症由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起或与其相关，包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性；所述方法包括给需要该治疗的动物、特别是哺乳动物、更特别地是人类施与治疗有效量的根据本发明和如上文描述的抗体和/或其功能部分、但尤其是单克隆抗体和/或其功能部分或功能等效抗体，或包含所述抗体的组合物或混合物。
在本发明特定的实施方案中，提供了用于保持或增加患有记忆障碍(memory impairment)的动物，特别是哺乳动物或人类的认知记忆能力的方法，通过给需要该治疗的动物、特别是哺乳动物或人类施与根据本发明的抗体、但特别是单克隆抗体，或根据本发明和如上文描述的包含该抗体的组合物或混合物。
在本发明另一个实施方案中，提供了使用根据本发明的抗体和/或其功能部分、但尤其是单克隆抗体和/或其功能部分或功能等效抗体制备用于预防、治疗或减轻疾病和病症的效应的药物组合物的方法，其中所述疾病和病症由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起或与其相关，包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，诸如以下疾病，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。
在本发明特定的实施方案中，提供了使用根据本发明的抗体和/或其功能部分、但尤其是单克隆抗体和/或其功能部分或功能等效抗体制备药物组合物的方法，通过给动物、特别是哺乳动物或人类施与根据本发明和如上文描述的抗体、特别是单克隆抗体或包含该抗体的组合物或混合物来保持或增加患有记忆障碍的动物、特别是哺乳动物或人类的认知记忆能力。
在阅读了以下公开的实施方案的详细描述和所附权利要求后，本发明的这些以及其它目的、特征和优点会变得显而易见。
文中使用的术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”可以互换，并定义为由通过肽键连接的氨基酸组成的生物分子。
除非上下文不合适，否则文中使用的术语“一”、“该”定义为“一个或多个”并且包括复数。
文中使用的术语“检测”定义为用已知的技术(诸如免疫化学或组织学方法)检测生物分子，以及指在研究中定性或定量检测生物分子的存在或浓度。
“淀粉状蛋白β、Aβ或β-淀粉状蛋白”是本领域认可的术语，并且指淀粉状蛋白β蛋白和肽、淀粉状蛋白β前体蛋白(APP)，以及其修饰物、片段或任何功能等效物。具体而言，文中所使用的淀粉状蛋白β是指通过APP的蛋白酶剪切产生的任何片段，但尤其是那些参与淀粉样变性理学或与之相关的片段，包括但不限于Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40、Aβ1-41、Aβ1-42和Aβ1-43。
上面所提到的淀粉状蛋白β肽的结构和序列是本领域技术人员公知的，并且生产所述肽或从脑和其它组织中提取它们的方法描述于，例如Glenner和Wong，Biochem Biophys Res Comm129，885-890(1984)。此外，淀粉状蛋白β肽也以多种形式商业可获得。
“Aβ原纤维”或“Aβ纤丝”或“淀粉状蛋白原纤维”是形成具有恒定纤维直径的单个或成束纤维的单体蛋白的聚合形式，其不溶于水性介质并且在它们的核心包含大量的交叉β结构，大多数具有垂直于原纤维轴的β股1.2，3。
“单体Aβ”或“Aβ单体”是在水性介质中完全溶解而没有聚集复合体的淀粉状蛋白β。
“聚合的可溶淀粉状蛋白”和“寡聚Aβ”和“Aβ寡聚体”指淀粉状蛋白肽、或淀粉状蛋白样肽、或修饰的或截短的淀粉状蛋白肽或形成寡聚体或聚合结构的淀粉状蛋白肽的其它衍生物的多个聚集单体，其在体外水性介质中和在体内哺乳动物或人的身体、特别是脑中都是可溶的；但特别是指淀粉状蛋白β(Aβ)、或修饰的或截短的淀粉状蛋白β(Aβ)肽或其衍生物的多个聚集单体，其分别在哺乳动物或人的身体、更特别是脑中是可溶解的。
“分离的”意思是指生物分子没有至少部分与之天然存在的组分。
文中应用的术语“抗体”是本领域认可的术语，其指结合到已知抗原的分子或分子的活性片段，特别是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性部分，即包含免疫特异结合到抗原的结合部位的分子。根据本发明的免疫球蛋白可以是任何的型(IgG、IgM、IgD、IgE、IgA和IgY)或类(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类的免疫球蛋白分子。
“抗体”在本发明的范围内意图包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、双特异性抗体或双有效性抗体、模拟抗体、人抗体和人源化抗体，以及其活性片段。结合已知抗原的分子的活性片段的实例包括Fab和F(ab′)2片段，包括Fab免疫球蛋白表达文库的产物和上面提到的任何抗体和片段的表位结合片段。
这些活性片段可以通过多种技术从本发明的抗体中衍生。例如，可以用酶，诸如胃蛋白酶切割纯化的单克隆抗体，然后经过HPLC凝胶过滤。然后可以通过膜过滤法等收集和浓缩合适的含有Fab片段的级分。抗原活性片段分离的其它常规用技术的描述可参见，例如Khaw，B.A.等，J.Nucl.Med.23：1011-1019(1982)；Rousseaux等，Methods Enzymology，121：663-69，Academic Press，1986。
“人源化抗体”指一类工程化抗体，它的CDRs衍生自非人供体免疫球蛋白，分子的其它的免疫球蛋白衍生部分衍生自一(或多)种人免疫球蛋白。此外，可以改变构架支持残基以维持结合亲和力。获得“人源化抗体”的方法是本领域技术人员公知的(例如，参见，Queen等，Proc.Natl AcadSci USA，86：10029-10032(1989)，Hodgson等，Bio/Technoloy，9：421(1991))。
“人源化抗体”也可以通过新的基因工程方法得到，其能在大型动物，诸如兔子中产生亲和力成熟的类人多克隆抗体(http://www.rctech.com/bioventures/therapeutic.php)。
术语“单克隆抗体”也是本领域公认的，以及指在实验室中从单个克隆大量生产的并且只识别一个抗原的抗体。单克隆抗体一般通过将正常短命的产生抗体的B细胞和快速生长的细胞诸如癌细胞(有时称为“永生”细胞)融合产生。所产生的杂交细胞或杂交瘤细胞快速增殖，产生生产大量抗体的克隆。
对于本发明的目的，应理解“单克隆抗体”也包含由还没有达到完全单克隆性的母克隆生产的抗体。
“功能等效抗体”在本发明的范围内是指与上面提到的和在此描述的抗体实质上共有至少一种主要的功能特性的抗体，所述功能特性包括：特异结合β-淀粉状蛋白，特别是Aβ1-42蛋白，以及更特别的Aβ1-42蛋白的4-16表位区域、体外的免疫反应性、抑制Aβ1-42单体聚集成高分子的聚合原纤维和/或解聚预形成的Aβ1-42聚合原纤维、和/或β折叠的破坏特性、和当预防性地或治疗性地施与时减轻疾病和病症的效应，其中所述疾病和病症由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起或与其相关，包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。抗体可以是任何类的，诸如IgG、IgM或IgA等，或任何亚类的，诸如IgG1、IgG2a等以及其它在上文提到或本领域公知的其它亚类，但特别是IgG2类。此外，抗体可以通过任何方法生产，诸如噬菌体展示，或在任何生物或细胞系生产，包括细菌、昆虫、哺乳动物或其它生产具有期望特性的抗体(诸如人源化抗体)的细胞类型或细胞系。抗体也可以通过组合来自不同物种的Fab部分和Fc区形成。
术语“双特异性”或“双功能”和“双有效性”在这一申请的范围内同义的使用，以描述同时表现出对淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样纤维形成的抑制特性以及淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样纤维的解聚活性的抗体。
术语“抗原”是指能在生物体、特别是动物、更特别的是包括人类的哺乳动物中诱导免疫反应的实体或其片段。该术语包括免疫原和负责抗原性或抗原决定簇的区域。
如在本文中使用的术语“可溶解的”指在水性溶液中部分或完全溶解。
也在本文中使用的术语“免疫原性的”指引起或增强针对免疫原性物质的抗体、T细胞和其它反应性免疫细胞的产生，且促进人类或动物中免疫反应的物质。
当个体产生足够的抗所施与的本发明的免疫原性组合物的抗体、T细胞和其它反应性免疫细胞的时候，发生免疫反应以缓解或减轻所要治疗的病症。
“聚合的可溶解淀粉状蛋白”指形成寡聚体或聚合结构的淀粉状蛋白肽、或淀粉状蛋白样肽、或修饰的或截短的淀粉状蛋白肽或淀粉状蛋白肽的其它衍生物的多个聚集单体，其在哺乳动物或人类体内、特别是脑中是可溶解的，特别是指淀粉状蛋白β(Aβ)肽、或修饰的或截短的淀粉状蛋白β(Aβ)肽、或其衍生物的多个聚集单体，其在哺乳动物或人类体内特别是脑中是可溶解的。
术语“杂交瘤”是本领域认可的，并且被本领域普通技术人员理解为指由将生产抗体的细胞和永生细胞(例如多发性骨髓瘤细胞)融合产生的细胞。这种杂交细胞能够生产连续的抗体供应。参见上面“单克隆抗体”的定义和下面更详细的描述融合方法的实施例。
在此使用的术语“载体”指抗原肽或超分子构建体能够掺入其中或能够与之结合，因此将抗原肽或肽的部分展现或暴露于人类或动物免***的结构。任何适合应用于动物或人类治疗的微粒，例如，诸如微脂粒、微粒或微粒体均可以在本发明的上下文中用作载体。
术语“载体”还包括递送方法，其中可将包含抗原肽的超分子抗原构建体组合物通过递送装置递送到期望的位点。此类递送***的一个实例包括利用胶体金属，诸如胶体金。
此外，术语“载体”还包括本领域技术人员公知的递送机制，包括但不限于钥孔
Figure A20068004646600751
形血蓝素(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)以及其它佐剂。
在根据本发明的超分子抗原构建体中，脂质体可以具有双功能，因为它能够用作包含上文中描述的超分子构建体的载体，并且同时能够起到佐剂的作用以增加或刺激在将要用根据本发明的治疗性疫苗治疗的目标动物或人类中的免疫反应。应该理解，本发明的超分子抗原构建体组合物可以进一步包含其它的佐剂，例如，脂质A、明矾、磷酸钙、白介素1、和/或多糖和蛋白的微胶囊，但特别是去毒脂质A(诸如单磷酰或双磷酰脂质A)、或明矾、此外包含防腐剂、稀释剂、乳化剂、稳定剂和其它在现有技术的疫苗中已知和使用的组分。此外，任何本领域公知的佐剂***也可应用于本发明的组合物中。这些佐剂包括但不限于弗氏不完全佐剂、弗氏完全佐剂、多分散β-(1，4)连接的乙酰化甘露聚糖(“Acemannan”)、
Figure A20068004646600752
(CytRx Corporation的聚氧化乙烯-聚氧丙烯共聚物佐剂)、Chiron Corporation的改性脂质佐剂、Cambridge Biotech的皂苷衍生物佐剂、杀死的百日咳杆菌(Bordetella pertussis)、革兰氏阴性细菌的脂多糖(LPS)、大聚合阴离子(诸如硫酸葡聚糖)、以及无机凝胶(诸如明矾、氢氧化铝或磷酸铝)。
可以应用于本发明的超分子抗原构建体组合物的载体蛋白包括但不限于麦芽糖结合蛋白“MBP”、牛血清白蛋白“BSA”、钥孔形血蓝素“KLH”、卵清蛋白、鞭毛蛋白、甲状腺球蛋白、任何物种的血清白蛋白、任何生物的γ球蛋白、同系细胞、具有Ia抗原的同系细胞、以及D-和/或L-氨基酸的聚合物。
此外，术语“治疗有效量”指抗体的量，当其施与给人类或动物时，在所述人类或动物中引发足够产生治疗效果的免疫反应。本领域技术人员按照常规方法能很容易的测定治疗有效量。
两个序列之间的“同源性”通过序列同一性确定。如果两条待相互比较的序列在长度上有区别，序列同一性优选的指与较长序列核苷酸残基相同的较短序列的核苷酸残基百分数。序列同一性可以通过使用诸如Bestfit程序(Wisconsin序列分析包，版本8，Unix，Genetics Computer Group，University Research Park，575 Science Drive Madison，WI 53711)的计算机程序照惯例测定。Bestfit利用Smith和Waterman，Advances in AppliedMathematics 2(1981)，482-489的局部同源算法，目的是找出两个序列之间具有最高序列同一性的部分。当使用Bestfit或其它的序列比对程序以确定特定的序列是否与本发明的参考序列具有例如95％的序列同一性时，优选的如此设置参数以使得序列同一性百分比是对于参考序列的全长计算并且允许高达参考序列中核苷酸总数的5％的同源性缺口。当使用Bestfit时，所谓的任选的参数优选地设在它们的预定(“缺省”)值。出现在给定序列和以上所描述的本发明的序列之间的比较中的偏差可能由例如添加、缺失、替换、***或重组所导致。这类序列比较也可以优选的用程序“fasta20u66”(2.0u66版本，1998年9月，William R.Pearson和the University of Virginia；也参见W.R.Pearson(1990)，Methods in Enzymology 183，63-98，所附的实例和http://workbench.sdsc.edu/)。为此目的，可以使用“缺省”参数设置。
所使用的术语“杂交”指常规的杂交条件，优选的指在使用5xSSPE、1％SDS、1x登哈特(Denhardts)溶液作为溶液和/或杂交温度在35℃至70℃之间、优选65℃的杂交条件。杂交后，洗涤优选地在35℃和70℃之间、优选65℃的温度，首先用2xSSC、1％SDS和随后用0.2xSSC进行(关于SSPE、SSC和登哈特溶液的定义参见上述引文中的Sambrook等)。例如描述于上面Sambrook等中的严格杂交条件是特别优选的。如果如上面指出的那样在65℃进行杂交和洗涤，则例如给出了特别优选的严格杂交条件。非严格杂交条件，例如在45℃进行杂交和洗涤是较不优选的，以及在35℃甚至更不优选。
通过参考以下包含于此的特别的实施方案的详细描述，能更容易理解本发明。尽管本发明根据其特定的实施方案的特定细节进行描述，但并不意欲把这些细节当作是对本发明范围的限制。
本发明提供了抗体及其功能部分，所述抗体为构象敏感的抗体。这些抗体识别多种淀粉状蛋白蛋白质抗原上的特异表位。抗体能用于诊断性和治疗性干预由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症，所述疾病和病症包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白(诸如涉及阿尔茨海默病的Aβ蛋白)相关的疾病和病症。
将抗体施与个体，以被动免疫他们来抵抗各种疾病或病症，包括但不限于，与淀粉状蛋白相关的疾病，诸如阿尔茨海默病。
在此提供的抗体是单克隆或多克隆抗体，其对代表淀粉状蛋白相关症状(例如阿尔茨海默病)的抗原肽具有结合特异性。
根据本发明的抗体通过用超分子抗原构建体组合物免疫动物，诸如小鼠、大鼠、兔或任何其它可以产生天然或人类抗体的动物来制备。
在此公开的超分子抗原构建体组合物通常包含修饰的肽，以增强抗原效果，其中这类肽通过聚乙二醇化(用聚乙二醇或修饰的聚乙二醇)修饰，或通过其它的方法，诸如通过棕榈酸、聚氨基酸(例如聚甘氨酸、聚组氨酸)、多糖(例如聚半乳糖醛酸、聚乳酸、聚乙交酯、壳多糖、脱乙酰壳多糖)、合成聚合物(聚酰胺、聚氨酯、聚酯)或共聚物(例如聚(甲基丙烯酸)和N-(2-羟基)丙基甲基丙烯酰胺)等修饰。
当在脂质体双分子层中为肽提供锚时，由棕榈酸的修饰(棕榈酰化)由于C16:0脂肪酸部分相对减少的长度，导致肽几乎位于脂质体表面上。因此，加工抗原的细胞将必须摄取具有肽的整个脂质体，在大多数情况下，其导致了相对而言更缓慢的免疫反应。
在本发明的一个实施方案中，使用修饰的淀粉状蛋白1-15肽用于制备根据本发明的抗体，特别是单克隆抗体。可以按照在Nicolau等2002年报道的方法合成修饰的淀粉状蛋白1-15肽。Nicolau等报道的方法包含通过在树脂上将亲脂或疏水部分接枝到预先形成的肽末端氨基酸残基以修饰抗原肽，这产生了相当高纯度的产物。具体而言，用已知的偶联化学，将经保护的氨基酸，特别是Fmoc保护的氨基酸连接到树脂上。移除保护基团，并偶联第二个经保护的氨基酸残基。然后使用标准自动化肽合成(其使用了公知的保护化学，特别是Fmoc/tBu化学和标准侧链保护基团)通过在淀粉状蛋白Aβ1-42的氨基酸1至15上的偶联来合成Aβ1-15抗原肽，从而产生具有SEQ ID NO：1给出序列的肽片段。在最后的步骤，两个其它的保护氨基酸偶联到生长中的肽片段。然后可以选择性切除Mtt基团并偶联到棕榈酸。在洗涤树脂后，移除保护基团并同时裂解树脂，接着用标准方法进行侧链脱保护。然后可以得到高纯终产物，并且可以通过本领域公知的方法，例如，诸如电喷雾质谱法来证实其身份。
根据本发明的亲脂或疏水部分可以是脂肪酸、甘油三酯或磷脂，其中脂肪酸的碳主链具有至少10个碳原子。特别地，亲脂或疏水部分是碳主链具有至少大约14个碳原子且至多大约24个碳原子的脂肪酸，落在这一范围内的碳原子的单个数值也是本发明的一部分。更特别地，亲脂或疏水部分具有至少14个碳原子的碳主链。疏水部分的实例包括但不限于棕榈酸、硬脂酸、肉豆蔻酸、月桂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸和胆固醇或DSPE。在本发明特定的实施方案中，亲脂或疏水部分是棕榈酸。
为了提高免疫反应，可以应用其它的锚/间隔基以重新构建脂质体中的肽，例如聚乙二醇(PEG)。
将PEG共价地连接到肽两端的氨基酸残基上，特别是Glu、Cys或Lys氨基酸残基或任何其它可以适合用于将PEG共价结合到肽的氨基酸残基。在链的另一末端，可共价连接疏水部分以作为脂质体双分子层中的锚定元件，例如磷脂酰乙醇胺(PEA)。因此，脂质体仍然作为佐剂起作用，且离双分子层足够远的肽可以被单独加工，并且因此与棕榈酰化抗原相比增加了它的免疫原性。
在某些实施方案中，在本发明范围内使用的超分子抗原构建体包含共价连接到聚乙二醇化赖氨酸(每个末端一个)的肽序列。PEG(聚乙二醇)链的长度可以从n＝8至n＝150,000或更多，特别是从n＝10至n＝80,000，更特别的从n＝20至n＝10,000变化。在本发明特定的实施方案中，PEG链的长度不超过n＝45，特别是在n＝5至n＝40之间，更特别的在n＝10至n＝30之间，以及甚至更特别的n＝10。
在此描述的超分子构建体可以用自动化肽合成和公知的保护化学(特别是Fmoc/tBu化学的和标准侧链保护基团)合成。一般地，肽的聚乙二醇化产生区域异构体(regioisomer)的混合物。
为了实现PEG-脂质缀合物与Aβ的C和N末端的位点特异性连接，可以利用部分保护的肽。对于这些包含内部Lys或His残基的肽序列，将正交保护的Lys(ivDde)添加到每一末端。可以将额外的Gly添加到C端末端以促进合成。移除保护基团并且用乙酸酐进行N-乙酰化，随后选择性的切除ivDde基团。
树脂，特别是2-氯三苯甲基树脂是有利的，其是酸敏感的并且使得能够分离保护肽。
在本发明特定的实施方案中，在溶液相中进行偶联反应。然后在温和的条件下选择性的裂解树脂而释放内部的保护肽。
成功的完成衍生自β-淀粉状蛋白蛋白序列的肽(例如，诸如Aβ1-16(SEQID NO：2))与用脂肪酸-磷脂酰胆碱(例如，诸如DSPE)修饰的PEG分子的溶液相偶联。可以通过应用阳离子交换层析法完成在最终侧链去保护之前的单偶联产物与双偶联产物的分离。随后的肽侧链去保护导致分离了具有可接受纯度的目的缀合物。可以通过本领域公知的方法，例如HPLC等完成纯化。
这一应用保护肽的N-和C-末端脂质-PEGβ-淀粉状蛋白抗原的合成方法可以应用于多种肽序列中。
然后可以用如描述于Nicolau等，2002的方法制备根据本发明的脂质体抗原。修饰的淀粉状蛋白Aβ抗原肽，特别是修饰的PEG化和棕榈酰化的Aβ1-15、Aβ1-16、Aβ1-16(Δ14)、Aβ22-35和Aβ29-40抗原肽可以在由脂质体组成，特别是由双肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、双肉豆蔻酰磷脂酰胆胺(DMPEA)、双肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)和胆固醇制成的，任选的包含单磷酰脂质A的脂质体组成的构建体中被重新构成。
在本发明特定的实施方案中，具有脂质A的脂质体被用作佐剂以制备抗淀粉状蛋白的疫苗。混合双肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、双肉豆蔻酰磷脂酰甘油和胆固醇，特别地以0.9∶1.0∶0.7的摩尔比混合。然后将强免疫调节剂，例如单磷酰脂质A以合适的浓度加入，特别地以30mg/mmol至50mg/mmol之间，更特别的40mg/mmol磷脂的浓度加入。然后以1∶30至1∶200之间的肽与磷脂的摩尔比，特别地以1∶50至1∶120之间，更特别地以1∶100的肽与磷脂的摩尔比加入修饰的抗原Aβ肽。例如通过蒸发移除溶剂，并且用无菌缓冲液(例如，诸如PBS)水合所产生的薄膜。
也可通过例如描述于Wagner等(2002)Journal of Liposome ResearchVol 12(3)，pp 259-270的交叉流动注入(crossflow injection)技术制备脂质体。在脂质溶液注入到水性缓冲液***期间，脂质趋于形成“沉淀物”，随后自身排列为微脂粒。所得到的微脂粒的大小取决于诸如脂质浓度、搅拌速率、注入速率以及脂质的选择等因素。制备***可以由交叉流动注入组件、极性相(例如，PBS缓冲液)的容器、乙醇/脂质溶液容器和加压装置，但特别是氮加压装置组成。当通过交叉流动注入组件抽吸水性或极性溶液时，用不同的施加压力将乙醇/脂质溶液注入到极性相中。
脂质体仍然作为佐剂起作用，且离双分子层足够远的肽可以被单独加工，并且因此与棕榈酰化抗原相比增加了它的免疫原性。
游离的PEG端共价的连接到磷脂酰乙醇胺分子(其中脂肪酸可以是：肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸等，或其结合)，以作为锚定元件。这一超分子结构可以通过在由磷脂和胆固醇(以各种摩尔比的磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、胆固醇)组成的脂质体中重构而被锚定。也可以使用其它的磷脂。以大约40μg/pmole磷脂的浓度使用脂质A。
在某些实施方案中，棕榈酰化或聚乙二醇化的超分子抗原构建体包含具有β-淀粉状蛋白的氨基酸序列的肽。肽可以包含或对应于整个淀粉状蛋白β肽和其活性片段。此外，适用于本发明的肽还包括Aβ1-16(SEQ ID NO：2)、Aβ1-16(Δ14)(SEQ ID NO：3)、Aβ1-15(SEQ ID NO：1)、及其活性片段。
为了诱发和制备抗体和测定修饰的Aβ抗原构建体的免疫原性，用抗原肽免疫选自小鼠、大鼠、兔、猪、鸟类等合适的动物，但特别是小鼠，尤其是C57BL/6小鼠。抗原构建体的免疫原性通过在免疫后以合适的时间间隔用免疫测定(例如，诸如ELISA分析)探测血清样本来测定。
可以用本领域熟知的标准的克隆和细胞融合技术来制备本发明的单克隆抗体。通常将感兴趣的免疫原(抗原)施与(例如腹腔内注射)野生型或近交小鼠(例如BALB/c或尤其是C57BL/6小鼠)、大鼠、兔或其它能产生天然或人类抗体的动物物种或转基因小鼠。免疫原可以单独施与或与佐剂混合，或自载体(VEE复制子载体，牛痘)表达、或作为DNA、或作为融合蛋白，以诱导免疫反应。融合蛋白包含偶联到载体蛋白(例如，诸如β半乳糖苷酶、谷胱甘肽S转移酶、钥孔
Figure A20068004646600811
形血蓝素(KLH)以及牛血清白蛋白)的肽，其中针对所述肽的免疫反应是所期望的。在这些情况下，肽作为具有载体蛋白的半抗原。在使动物加强例如二次或更多次后，从免疫的动物中收获脾细胞，并且通过用众所周知的Kohler和Milstein(Nature 256：495-497(1975))以及Harlow和Lane(Antibodies：A Laboratory Manual(Cold SpringHarbor Laboratory，New York 1988))的方法融合敏化的脾细胞和骨髓瘤细胞株(诸如鼠SP2/O骨髓瘤细胞(ATCC，Manassas，VA))以产生杂交瘤。
在本发明特定的实施方案中，将本发明的抗原构建体，特别是药学上可接受形式的包含所述抗原构建体的组合物，以1至10周之间的时间间隔、特别是1至6周之间的时间间隔、更特别是1至4周之间的时间间隔、以及甚至更特别地2至3周之间的时间间隔重复剂量施与，特别是1至15次剂量、更特别地2至10次剂量、甚至更特别地3至7次剂量但尤其是4至6次剂量。通过在加强后合适的时间，特别是加强后3至10天、更特别地加强后4至8天以及更特别地加强后5至6天，取得血清样本并用公知的方法、特别是通常使用的免疫测试法中的一种(例如，诸如ELISA测试法)检测抗原构建体的免疫原性来监测免疫反应。
用根据本发明的抗原构建体、特别是用药学上可接受形式的包含根据本发明的抗原构建体的疫苗组合物进行的免疫导致在经处理的动物中显著的免疫反应。选择具有治疗滴度的动物、特别是小鼠用于将产生抗体的细胞(尤其是B-淋巴细胞)与连续生长的细胞或永生细胞系(诸如骨髓瘤细胞系)融合。通过添加聚乙二醇诱导细胞融合。治疗滴度是1∶4000至1∶6000之间、特别是1∶4500至1∶5500之间、更特别地1∶5000的稀释物在ELISA测定中产生阳性结果的那些。
然后用常规方法，例如用有限稀释法克隆所产生的杂交细胞，并培养所产生的生产期望单克隆抗体的克隆。
通过将细胞接种于包含次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸苷(HAT)的选择培养基中来化学选择这样得到的杂交瘤。
随后依据产生对抗特定淀粉状蛋白相关疾病或病症的单克隆抗体的能力来筛查杂交瘤。克隆、扩大产生感兴趣的抗体的杂交瘤，并冷冻保藏用于进一步的生产。优选的杂交瘤生产具有IgG同种型，更优选的IgG2同种型的单克隆抗体。
通过用上面描述的本发明的抗原构建体组合物免疫动物，诸如小鼠或兔、或其它合适的动物而制备多克隆抗体。随后从动物中收集血清，并且依据对淀粉状蛋白抗原的结合反应性筛查血清中的抗体。
根据本发明的抗体可以用公知的技术制备为生理学上可接受的制剂，并且其可以包含可药用载体、稀释剂和/或赋形剂。例如，根据本发明和在上文中描述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体、特别是包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗与可药用载体、稀释剂和/或赋形剂结合形成药物组合物。适宜的药学载体、稀释剂和/或赋形剂是本领域公知的并且包含例如磷酸缓冲盐溶液、水、乳液(诸如油/水乳液)、各种湿润剂、无菌溶液等。
根据本发明的药物组合物的配制可以根据本领域技术人员公知的标准方法完成。
本发明的组合物可以以固体、液体或气溶胶的形式以合适的、药学有效剂量施与对象。固体组合物的实例包括片剂、乳膏以及可植入的剂量单位。片剂可以口服施与。治疗乳膏可以局部施与。可植入的剂量单位可以局部地例如在肿瘤部位施与；或可以经植入用于全身地释放治疗组合物，例如经皮下植入。液体组合物的实例包括适合肌内、皮下、静脉内、动脉内注射的制剂，以及用于局部或眼内施与的制剂。气溶胶制剂的实例包含用于施与至肺部的吸入制剂。
组合物可以通过标准的施与途径施与。一般来说，组合物可以通过局部、口服、直肠、鼻、真皮内、腹膜内或非肠胃的(例如静脉内、皮下、肌肉内)途径施与。此外，还可将组合物掺入到持续释放基质中，诸如生物可降解的聚合物，将聚合物植入期望递送位置例如肿瘤部位附近。方法包括单剂量的施与、以预定的时间间隔重复剂量施与、以及持续施与预定的一段时间。
本文使用的持续释放基质是由通常可被酶或酸/碱水解或分解的降解的聚合物这样的物质制造的基质。一旦植入到体内，基质受到酶和体液的影响。期望的持续释放基质选择为生物相容性物质，诸如脂质体、聚丙交酯(聚丙交酯酸)、聚乙交酯(乙醇酸的聚合物)、聚丙交酯共乙交酯(乳酸和乙醇酸的共聚物)、聚酐类、聚原酸酯、多肽、透明质酸、胶原、硫酸软骨素、羧酸、脂肪酸、磷脂、多糖、核酸、聚氨基酸、诸如苯丙氨酸、酪氨酸、异亮氨酸的氨基酸、多核苷酸、聚乙烯基丙烯、聚乙烯吡咯烷酮和聚硅氧烷。优选的生物可降解基质是聚丙交酯、聚乙交酯或聚丙交酯共乙交酯(乳酸和乙醇酸的共聚物)之一的基质。
本领域技术人员公知组合物的剂量取决于多种因素，例如，诸如待治疗的症状、所使用的特定组合物、以及其它临床因素(诸如患者的体重、尺寸、性别和一般健康状况)、身体表面面积、待施与的特定的化合物或组合物、同时施与的其它药物以及施与途径。
组合物可以和其它包含生物活性物质或化学物的组合物联合施与，特别是选自下列的化合物的至少一种、以及本发明的抗体、以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂：抗氧化应激的化合物、抗细胞凋亡的化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂诸如哌仑西平和代谢产物、3-氨基-1-丙磺酸(3APS)、1，3-丙二磺酸(1，3PDS)、分泌酶活化剂、β-和γ-分泌酶抑制剂、τ蛋白、神经递质、β折叠破坏剂、消炎分子、“非典型的抗精神病药物”(例如，诸如氯氮平、齐拉西酮、利哌利酮、阿立哌唑或奥氮平)、或胆碱酯酶抑制剂(ChEI)(诸如他克林、卡巴拉汀、多奈哌齐、和/或加兰他敏)和其它药物和营养补充剂，诸如维生素B12、半胱氨酸、乙酰胆碱前体、卵磷脂、胆碱、银杏、乙酰基-L-肉毒碱、艾地苯醌、丙戊茶碱或黄嘌呤衍生物；以及疾病治疗方法。
蛋白质药学活性物质可以以每剂1ng至10mg之间的量存在。一般地，施与方案可以是0.1μg至10mg之间范围的根据本发明的抗体、特别是1.0μg至1.0mg的范围、更特别的1.0μg至100μg之间的范围，所有落入这些范围的单个数值也是本发明的一部分。如果通过连续输注进行施与，更适当的剂量可以是每小时每千克体重0.01μg至10mg之间的范围，所有落入这些范围的单个数值也是本发明的一部分。
施与通常是非肠胃的，例如静脉内地施与。非肠胃施与的制品包括无菌水性或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂包括但不限于丙二醇、聚乙二醇、植物油(诸如橄榄油)、以及可注射的有机酯(诸如油酸乙酯)。水性溶液可以选自水、醇/水溶液、乳液或包括盐和缓冲介质的悬浮液。非肠胃的载体包括氯化钠溶液、林格氏右旋糖、右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液或不挥发油。静脉内载体包括流体和营养补充物、电解质补充物(诸如基于林格氏右旋糖的那些)以及其它物质。也可以存在防腐剂，例如，诸如抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。
药物组合物可以进一步包含蛋白质载体，例如，诸如血清白蛋白或免疫球蛋白，特别是人类来源的。其它的生物活性物质也可以存在于发明的药物组合物中，取决于它的目的用途。
在本发明另外的实施方案中，提供了方法和试剂盒，其可用于检测和诊断淀粉状蛋白相关疾病或病症，诊断对淀粉状蛋白相关疾病或病症的素质，或监测患者中微小的残留疾病，或预测患者对用根据本发明和如上文描述的抗体或疫苗组合物治疗的反应。这些方法包括通常用于检测或定量生物样本中或原位条件下的物质的公知的免疫学方法。
淀粉状蛋白相关疾病或病症或对淀粉状蛋白相关疾病或病症的素质的诊断可以通过检测单克隆抗体或其活性片段与样本或原位淀粉状蛋白表位的免疫特异结合来完成，其包括使怀疑含有淀粉状蛋白抗原的样本或特定身体部分或身体区域与结合淀粉状蛋白表位的抗体接触，允许抗体结合至淀粉状蛋白抗原以形成免疫复合物，检测免疫复合物的形成，并将免疫复合物的存在或不存在与样本或特定身体部分或区域中淀粉状蛋白抗原的存在或不存在相关联，任选地将所述免疫复合物的量与正常对照值比较，其中与正常对照值相比较，所述聚集体的量的增加表明所述的患者患有或有发展成淀粉状蛋白相关疾病或病症的风险。
按照用根据本发明的抗体或免疫组合物治疗的患者的微小残留疾病的监测可以通过检测单克隆抗体或其活性片段与样本或原位淀粉状蛋白表位的免疫特异结合来完成，其包括使怀疑含有淀粉状蛋白抗原的样本或特定身体部分或身体区域与结合淀粉状蛋白表位的抗体接触，允许抗体结合至淀粉状蛋白抗原以形成免疫复合物，检测免疫复合物的形成，并将免疫复合物的存在或不存在与样本或特定身体部分或区域中淀粉状蛋白抗原的存在或不存在相关联，任选地将所述免疫复合物的量与正常对照值比较，其中所述聚集体的量与正常对照值相比的增加表明所述患者可能仍然患有微小残留疾病。
预测患者对用根据本发明的疫苗组合物的治疗的反应可以通过检测单克隆抗体或其活性片段与样本中或原位淀粉状蛋白表位的免疫特异结合来完成，其包括使怀疑含有淀粉状蛋白抗原的样本或特定身体部分或身体区域与结合淀粉状蛋白表位的抗体接触，允许抗体结合至淀粉状蛋白抗原以形成免疫复合物，检测免疫复合物的形成，并将免疫复合物的存在或不存在与样本或特定身体部分或区域中淀粉状蛋白抗原的存在或不存在相关联，任选地比较治疗前和治疗后的所述免疫复合物的量，其中所述聚集体的量的减少表明所述患者具有对治疗产生反应的高潜力。
可以用于诊断淀粉状蛋白相关疾病或病症、用于诊断对淀粉状蛋白相关疾病或病症的素质、或用于监测患者中微小的残留疾病、或用于预测患者对用根据本发明和如上文描述的抗体或疫苗组合物治疗的反应的生物样本是例如流体，诸如血清、血浆、唾液、胃分泌液、黏液、脑脊髓液、淋巴液等；或从机体获得的组织或细胞样本，诸如神经、脑、心脏或血管组织。为检测在样本中淀粉状蛋白的存在或不存在，可以使用任何本领域普通技术人员公知的免疫测定(参见Harlow和Lane，Antibodies：ALaboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory，New York 1988555-612))，例如，利用应用了用于检测的第二试剂的间接检测方法的分析、ELISA和免疫沉淀法和凝集测试。例如Maertens和Stuyver的WO96/13590，Zrein等(1998)和WO96/29605给出了这些测试法的详细描述。
对于原位诊断，可以利用领域公知的方法将抗体或其任何活性和功能部分施与待诊断的生物，例如静脉内、鼻内、腹膜内、大脑内、动脉内注射，从而根据本发明的抗体与淀粉状蛋白抗原上的表位区域之间可能发生特异性结合。可以通过连接至抗体或其功能片段的标记物检测抗体/抗原复合物。
可以用于诊断应用、或应用于诊断对淀粉状蛋白相关疾病或病症的素质、或用于监测患者中微小残留疾病、或用于预测患者对用根据本发明和如上文描述的抗体或疫苗组合物治疗的反应的免疫测定通常依赖于标记的抗原、抗体或用于检测的第二试剂。蛋白或试剂可以用本领域技术人员公知的化合物标记，包括酶、放射性同位素、以及荧光、发光以及显色物质，包括有色粒子，诸如胶体金和乳胶微球。在这些方法中，放射性标记几乎可以应用于所有类型的测试并且具有最多的变化。在必须避免放射性或需要快速结果时，缀合酶的标记特别有用。尽管荧光染料在使用中需要昂贵的设备，但荧光染料提供了非常敏感的检测方法。用于这些检测的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体和经亲和纯化的多克隆抗体。
或者，可以通过与经标记的对免疫球蛋白具有亲和力的物质(诸如蛋白A或蛋白G或第二抗体)的反应来间接地标记抗体。抗体可以与第二物质缀合，并且用标记的对缀合到抗体的第二物质有亲和力的第三物质检测。例如，抗体可以缀合生物素，以及用标记的亲和素或链亲和素检测抗体-生物素缀合物。类似的，抗体可以缀合半抗原，以及用标记的抗半抗原抗体检测抗体-半抗原缀合物。
本领域技术人员公知这些和其它可用于本发明的适合标记物。可以应用本领域普通技术人员普遍公知的标准技术完成这些标记物与抗体或其片段的结合。Kennedy，J.H.，等，1976(Clin.Chim.Acta 70：1-31)，和Schurs，A.H.W.M.等，1977(Clin.Chim Acta 81：1-40)描述了典型的技术。在后者提到的偶联技术是戊二醛法、高碘酸盐法、双马来酰亚胺法以及其它方法，所有的这些都在此引入作为参考。
当前的免疫测定利用双抗体方法以检测分析物的存在，其中，抗体通过与已用可检测的标记物标记的第二抗体反应被间接标记。第二抗体优选的是与单克隆抗体来源动物的抗体结合的抗体。换句话说，如果单克隆抗体是小鼠抗体，则标记的第二抗体是抗小鼠抗体。对于下面描述的测试中使用的单克隆抗体，这种标记物优选地是抗体包被的珠，特别是磁珠。对于将在此描述的免疫测定中应用的多克隆抗体，优选的标记物是可检测的分子，诸如放射性的、荧光的、或电化学发光物质。
也可以在本发明的范围内应用备选的双抗体***，由于它们适合于快速测定分析物的存在，经常被称为快速格式***(fast format systems)。该***需要抗体与分析物之间的高亲和力。根据本发明的一个实施方案，用一对各自对淀粉状蛋白特异的抗体测定淀粉状蛋白抗原的存在。所述的抗原对中的一个在此被称为“检测抗体”，以及所述的抗原对中的另一个在此被称为“俘获抗体”。本发明的单克隆抗体可以用做俘获或检测抗体。本发明的单克隆抗体也可作为俘获和检测抗体一起用于单个分析。本发明的一个实施方案因此应用双抗体夹心法以在生物流体样本中检测淀粉状蛋白抗原。在这一方法中，分析物(淀粉状蛋白抗原)被夹在检测抗体和俘获抗体之间，俘获抗体不可逆的固定在固体支持物上。检测抗体包含可检测的标记物，以鉴定抗体-分析物夹心的存在并且因此鉴定分析物的存在。
示例性固相物质包括但不限于在放射免疫测定和酶免疫测定领域中公知的微量滴定板、聚苯乙烯试管、磁性、塑料或玻璃小珠和玻片。用于将抗体偶联到固相的方法也是本领域技术人员公知的。最近，多种多孔材料诸如尼龙、硝化纤维素、醋酸纤维素、玻璃纤维和其它的多孔聚合物也已被用做固体支持物。
本发明也涉及检测生物样本中淀粉状蛋白抗原的诊断试剂盒，其包含上面定义的组合物。此外，本发明涉及后面的诊断试剂盒，除了如上面定义的组合物外，其还包括上面所定义的检测试剂。术语“诊断试剂盒”一般涉及领域公知的任何诊断试剂盒。更具体地说，后一术语指如在Zrein等(1998)描述的诊断试剂盒。
本发明的另一个目的是提供用于检测和诊断淀粉状蛋白相关疾病和病症的包含根据本发明的抗体的新免疫探针和测试试剂盒。对于免疫探针，抗体直接或间接的与合适的报告分子(例如，酶或放射性核素)相连接。测试试剂盒包含容纳一种或多种根据本发明的抗体的容器，以及使用抗体用于结合淀粉状蛋白抗原以形成免疫复合物及检测免疫复合物的形成从而使免疫复合物的存在或不存在与淀粉状蛋白抗原存在或不存在相关联的说明书。
实施例
用于产生小鼠单克隆抗体的抗原
  小鼠mAb  抗原/序列   连接体   锚   佐剂
  mACI-01-Ab7  Aβ1-16   PEG   DSPE   Lipid A
  mACI-02-Ab6  Aβ1-16(Δ14)   PEG   DSPE   Lipid A
  mACI-11-Ab9  Aβ22-35   PEG   DSPE   Lipid A
  mACI-12-Ab11  Aβ29-40   PEG   DSPE   Lipid A
  mACI-24-Ab4  Aβ1-15   -   Palm   Lipid A
表1：抗体和用于产生所述抗体的抗原构建体
实施例1：制备棕榈酰化Aβ1-15超分子抗原构建体的方法
四(棕榈酰赖氨酸)-Aβ1-15肽抗原的合成
按照改进的之前报道的方法(Nicolau等2002)合成棕榈酰化淀粉状蛋白1-15肽。这一新方法包括在树脂上将棕榈酸接枝到预形成的肽的末端Lys残基，而不是掺入经修饰的氨基酸9-芴基甲氧羰基(Fmoc)-Lys(Pal)-OH的逐步固相合成。这一新的方法改善了偶联效率且提供了相当更高纯度的产物。因此，应用[六氟磷酸2-(1H-苯并***-1-基)-1，1，3，3-四甲脲阳离子](HBTU)偶联化学将正交保护的氨基酸Fmoc-Lys(Mtt)-OH连接到王氏树脂(Wang resin)。用DMF中20％哌啶移除Fmoc基团，并且偶联第二个Fmoc-Lys(Mtt)-OH残基。然后应用使用了Fmoc/tBu化学和标准侧链保护基团的标准自动化肽合成偶联接下来的15个氨基酸以产生SEQ IDNO：1给出的肽序列。最后，偶联的最后的两个氨基酸是Fmoc-Lys(Mtt)-OH。然后用二氯甲烷中1％三氟乙酸(TFA)选择性地切割Mtt基团以释放肽片段，并用HBTU使其偶联到棕榈酸。在树脂洗涤后，用二甲基甲酰胺(DMF)中20％哌啶移除Fmoc基团，并且最后用TFA在标准条件下同时进行树脂切割和侧链去保护。在冷二***中研磨产生白色固体产物。电喷雾质谱法证实了产物的身份(m/z预测值：1097.9([M]3+)；实验值：1096.8([M-3H]3+)，没有检测到其它的三-、二-或单-棕榈酰化肽。
实施例2：超分子抗原构建体的制备方法
聚乙二醇化β-淀粉状蛋白肽抗原的合成
为了增强免疫反应，应用了另一锚/间隔基以重建在脂质体中的肽，例如聚乙二醇(PEG)。将PEG共价地连接到肽两末端的赖氨酸残基。在链的另一末端(PEGn＝70)，共价地结合磷脂酰乙醇胺以作为脂质体双分子层中的锚定元件。因此，脂质体仍然作为佐剂起作用，并且离双分子层足够远的肽可以被单独的加工，并因此与棕榈酰化抗原相比增加了它的免疫原性。
使用标准的Fmoc/tBu氨基酸侧链保护独特地合成在此描述的超分子构建体。一般地，肽的聚乙二醇化产生区域异构体的混合物。在此，用部分保护的肽说明用于使PEG-脂质缀合物与Aβ的C-和N-末端位点特异连接的便利方法。
对于那些包含有内部Lys或His残基的肽序列(1-16，1-16Δ14，22-35)，将正交保护的Lys(ivDde)添加到每一末端。将额外的Gly添加到C-末端以促进合成。用DMF中20％哌啶移除Fmoc基团，并用乙酸酐进行N-乙酰化。用DMF中3％水合肼历时一小时完成ivDde基团的选择性切割。2-氯三苯甲基树脂比更广泛应用的王氏树脂更优选，因为已证实前者对肼解作用更具抗性。此外，与王氏树脂不同，2-氯三苯甲基树脂是极其酸敏感的，并且因此能够分离保护肽。实际上，需要在溶液相中进行偶联反应，因为与树脂结合的肽与预活化聚乙二醇化脂质试剂DSPE-PEG-SPA的偶联不会产生任何偶联产物。因此，在温和条件下(乙酸/三氟乙醇/二氯甲烷，1∶1∶8，1小时，室温)从树脂选择性切割而产生内部经保护的肽。
在DMSO和过量的碱中，成功的完成衍生自序列Aβ1-16(SEQ ID NO：2)的肽与DSPE-PEG-SPA的溶液相偶联。然后通过历时2小时加入过量的乙醇胺终止反应，并冻干溶液。
对于序列29-40，不需要特别的保护策略。
通过HPLC(半制备反相C4柱)的纯化提供了50-70％纯度的N-和C-末端PEG-脂质缀合物，其身份通过MALDI(基质辅助激光解吸电离)证实。每一序列在偶联反应的容易度上显示出相当大的差异，并且相应的调整条件(温度、DSPE-PEG-SPA摩尔当量数、时间)。为了从期望的产物中分离出过量的DSPE-PEG-SPA，应用了HPLC纯化。可以通过使用阳离子交换层析法完成在最后侧链去保护之前的单偶联产物与双偶联产物的分离。随后的肽侧链去保护和分离过量终止的DSPE-PEG-SPA导致具有可接受纯度的期望缀合物的分离。
这一应用保护肽的N-和C-末端脂质-PEGβ-淀粉状蛋白抗原的合成方法可应用于多种肽序列。
实施例3通过超分子抗原构建体引出的抗体
3.1抗棕榈酰化Aβ 1-15 超分子抗原构建体的mAbs的制备
将棕榈酰化抗原(ACI-24，Aβ1-15)以2周时间间隔用于C57BL/6小鼠的免疫。用每一抗原免疫10-12只动物(注射体积：200μl，含8nmol肽)。最后一次注射后4天处死动物。加强5次后，选择具有治疗滴度(当血清的1∶5,000稀释液在ELISA中阳性)的小鼠用于融合。从经免疫动物中收集脾脏细胞，并且通过融合敏感化的脾脏细胞和骨髓瘤细胞系产生杂交瘤。应用众所周知的Kohler和Milstein(Nature 256：495-497(1975))以及Harlow和Lane(Antibodies：A Laboratory Manual(Cold Spring HarborLaboratory，New York 1988))的方法进行来自脾脏的小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞系SP2-0(ATCC，Manassas，VA)的细胞的融合。
通过添加聚乙二醇诱导细胞融合。得到的杂交细胞然后用常规方法培养10±14天以允许克隆生长。用有限稀释进行最初克隆选择。选择产生IgG的杂交瘤细胞克隆并通过ELISA测试它们与Aβ1-42的特异性结合，以及培养所产生的生产期望单克隆抗体的克隆。
这样得到的杂交瘤通过将细胞接种到包含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT)的选择培养基中进行化学选择。
随后依据产生抗特定淀粉状蛋白相关疾病或病症的单克隆抗体的能力对杂交瘤进行筛选。一旦鉴定了母本克隆，就将其亚克隆四次，以保证单克隆性和允许杂交细胞稳定化。
克隆产生感兴趣的抗体的杂交瘤细胞，扩大并冷冻保藏用于进一步的生产。
通过商业可得的小鼠单克隆抗体同种分型试剂盒分型抗体，并且将稳定克隆适应于无血清培养基中并放置于生物反应器中以生产抗体。
优选的杂交瘤细胞生产具有IgG同种型、更优选的IgG1同种型单克隆抗体。
3.2抗乙二醇化PEG-Aβ 1-16 、Aβ 4-11 、Aβ 22-35 和Aβ 29-40 超分子抗原构建 体的mAb的制备
如Nicolau等，2002，PNAS，99，2332-37描述的那样制备脂质体抗体。在含有单磷酰脂质A(40mg/mM磷脂)的由双肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、双肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPEA)、双肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)和胆固醇(0.9∶0.1∶0.1∶0.7摩尔比)制成的脂质体的构建物中重建序列PEG-Aβ1-16、Aβ4-11、Aβ22-35和Aβ29-40(图1)。用这些抗原和聚乙二醇化Aβ1-16以两周的时间间隔对C57BL/6进行免疫。用每种抗原免疫10-12只动物。在加强3至6次后，选择具有治疗滴度的小鼠(当血清的1∶5000稀释液在ELISA中呈阳性时)用于融合。从经免疫动物中收集脾脏细胞，并且通过融合敏感化的脾脏细胞和骨髓瘤细胞系产生杂交瘤。应用众所周知的Kohler和Milstein(Nature 256：495-497(1975))以及Harlow和Lane(Antibodies：A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory，NewYork 1988))的方法进行来自脾脏的小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞系SP2-0(ATCC，Manassas，VA)细胞的融合。
通过添加聚乙二醇诱导细胞融合。得到的杂交细胞然后用常规方法克隆，例如应用有限稀释法。选择产生IgG的杂交瘤细胞克隆并通过ELISA测试它们与Aβ1-42肽的特异性结合，以及培养所产生的生产期望单克隆抗体的克隆。
这样得到的杂交瘤细胞通过将细胞接种到包含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT)的选择培养基中进行化学选择。
随后依据产生抗特定淀粉状蛋白相关疾病或病症的单克隆抗体能力对杂交瘤细胞进行筛选。克隆产生感兴趣的抗体的杂交瘤细胞，扩大并冷冻保藏用于进一步的生产。优选的杂交瘤细胞生产具有IgG同种型、更优选的IgG1同种型的单克隆抗体。
实施例4：抗体mACI-24-Ab4的特异性测定
为分析抗体mACI-24-Ab4的特异性，将不同浓度的预形成的淀粉状蛋白1-42、1-40和1-38原纤维点到Hybond ECL硝酸纤维素膜上(Amersham Biosciences)。在用10％奶粉和0.7％吐温20封闭后，将膜与20μg/ml第一抗体在室温下孵育2小时。洗涤后，用与辣根过氧化物酶偶联的绵羊抗小鼠IgG抗体(Amersham Biosciences)在室温下孵育1小时，洗涤并且用化学发光溶液孵育，随后将膜暴露于X光薄膜。
为测量mAb mACI-24-Ab4与淀粉状蛋白β1-42纤维的结合，在37℃历时七天预形成Aβ1-42、1-40和1-38纤维并将其点在膜上。使用20μg/ml的抗体用于测量结合能力，以及通过辣根过氧化物酶偶联的绵羊抗小鼠IgG抗体暴露20分钟来检测结合的抗体。
如通过斑点印迹分析所证明的那样，抗体mACI-24-Ab4以不同的敏感性结合到不同的预形成Aβ纤维上。抗体显示出与Aβ1-40或Aβ1-38相比对Aβ1-42纤维的最高结合敏感性。能够检测到至少0.001μgAβ1-42纤维，然而对Aβ1-40纤维而言，抗体的检测极限是至少0.1μg以及对Aβ1-38纤维是1μg，意味着对于这些淀粉状蛋白纤维的类型，敏感性为100倍到低于1000倍。这些数据表明，抗体ACI-24-Ab4对淀粉状蛋白形式(1-42)(已知其通过二级构象的改变变得不可溶并且是AD患者脑中淀粉状蛋白斑的主要部分)的敏感性至少高100倍。
实施例5：在蛋白质印迹和斑点印迹中AC免疫单克隆抗体mACI-01-Ab7 C2对淀粉状蛋白种类的结合
为检测小鼠抗体mACI-01-Ab7 C2的结合是否依赖于Aβ的天然构象，通过蛋白质印迹比较了与线性化淀粉状蛋白的结合或在斑点印迹中比较了与天然淀粉状蛋白的结合(图2a和2b)。
通过在HFIP中溶解Aβ1-42肽产生淀粉状蛋白单体，并在氩气中蒸发溶剂。在-80℃保存干燥的肽薄膜直到使用。为制备单体，在DMSO中重悬肽薄膜至2.75μg/μl的浓度并在PBS中稀释至1μg/μl。为制备寡聚体，在DMSO中重悬经干燥的肽薄膜至5mM，超声处理并添加PBS至达到400μM淀粉状蛋白，随后添加SDS至0.2％的终浓度。在37℃孵育6小时后，在水中稀释淀粉状蛋白至100μM的终浓度并在37℃再孵育18小时。在4℃用冰冷的33％甲醇、4％乙酸溶液使淀粉状蛋白寡聚体沉淀1小时，16200g旋转10分钟，将沉淀物重悬于5mM Na2H2PO4、35mM NaCl(pH7.4)中至1μg/μl的终浓度。为制备纤维，在Tris-HCl 50mM缓冲液中稀释肽薄膜至达到1mg/ml淀粉状蛋白的浓度，并且在37℃孵育5天。以10000g旋转试管5分钟，在0.1M碳酸盐缓冲液(pH 9.6)中重悬沉淀物至达到1μg/μl。
将1或5μg单体、寡聚体或纤维稀释于PBS及上样缓冲液中，并且施加至12％SDS-PAGE，将凝胶转移至硝酸纤维素膜。或者，将3或1μg或100和10ng淀粉状蛋白种类稀释于PBS并直接点至硝酸纤维素膜上，并且将膜在室温下干燥1小时。在用酪蛋白溶液(载体)封闭30分钟后，将膜用在酪蛋白溶液中稀释至1μg/ml的mACI-01-Ab7 C2或6E10(Chemicon)抗体孵育30分钟。用酪蛋白溶液洗涤3次后，将膜用在酪蛋白溶液中稀释的HRP标记的山羊抗小鼠IgG(Dako Cytomation)在室温下孵育30分钟，洗涤3次并用DAB底物(Dako Cytomation)显影。
在斑点印迹中，如阳性对照抗体6E10一样，单克隆小鼠抗体mACI-01-Ab7 C2特异地结合到单体、寡聚体和纤维。相反，在蛋白质印迹中mACI-01-Ab7 C2抗体不识别线性化的淀粉状蛋白种类，而6E10抗体清楚地识别所有线性化肽。这一结果证实mACI-01-Ab7 C2与淀粉状蛋白的结合依赖于淀粉状蛋白的天然构象。
实施例6：mACI-01Ab7 C2-Aβ1-42相互作用
应用表面等离子共振研究AC免疫的主要抗体mACI-01-Ab7 C2(mC2)与淀粉状蛋白肽Aβ1-42之间的相互作用。测定了小鼠抗体mACI-01-Ab7 C2与Aβ1-42单体或纤维的结合。
所有的SPR实验都在Biacore X仪器(Biacore AB)上进行。用于固定的试剂(EDC、NHS和乙醇胺)、感应芯片CM5和SA以及运行缓冲液和样品缓冲液HBS-EP均购自Biacore AB。使用乙酸钠(10mM，pH 5.0)作为偶联缓冲液以增加偶联产率。通过将PBS缓冲液添加到Aβ1-42达到3mg/ml的终浓度并将小瓶置于37℃历时7天来制备原纤维Aβ1-42(BAchem)。将原纤维Aβ1-42偶联到包含表面结合羧甲基葡聚糖基质的CM5感应芯片上。将生物素化的单体Aβ1-42(Bachem)偶联到包含与链亲和素共价结合的羧甲基葡聚糖基质的感应芯片SA。通常通过用运行缓冲液系列稀释来分析四至五个浓度的mAb。从最低的浓度开始进行注射，并以30μL/分钟的速率历时3分钟经过fc 1和fc 2。流通池2未被衍生化，并且从fc 1中减去反应以校正仪器噪音和总体折射率改变。完成注射后，立即用运行缓冲液洗涤表面5分钟。为从Aβ1-42原纤维中移除剩余的结合抗体，通过注射10mM NaOH脉冲进行表面再生。用数值积分和整体分析算法使用BIAevaluation 3.0进行动力学分析。覆盖针对不同浓度分析物的注射所得到的曲线并将基线调整至零。对于曲线拟合，同时将所有数据拟合成1∶1同质复合。
小鼠mACI-01-Ab7 C2抗体与淀粉状蛋白的结合被测定为相对较强。如在表2所表明的，小鼠抗体mACI-01-Ab7 C2以3.8×10-4M/s的平均结合常数(ka)、1.1×10-3s-1的解离常数(kd)、并且因此得到3.5×10-8M的平均KD而特异性结合到固定的Aβ1-42纤维。mACI-01-Ab7 C2与Aβ单体的结合类似或略快，具有1.6×10-4M/s的平均ka，但解离更快，得到2.5×10-7M的KD。
表2：
Figure A20068004646600951
实施例7：mACI-01-Ab7 C2单克隆抗体与淀粉状蛋白纤维的结合
为分析在预形成纤维上抗体的分子结合部位，进行了阴性对比透射电子显微法(TEM)(图3a和3b)。
根据4、5，将抗体mACI-01-Ab7 C2与8nm胶体金偶联。对于淀粉状蛋白1-42(Aβ1-42)纤维的共孵育，将6.65μM纤维与金标记的抗体以1∶100的摩尔比在室温下孵育24小时。随后将5μl样本在用派罗啶(parlodium)/C薄膜覆盖的新鲜辉光放电Cu栅格(200目)中孵育45秒，用水洗涤3次并用2％新鲜经稀释并过滤的乙酸双氧铀洗涤1次。使样本在2％乙酸双氧铀中染色15-20秒。吸去栅格中过量的染色剂并因此空气干燥。制备了每个样本的3个栅格。在透射电子显微镜Hitachi 7000中分析栅格。
单克隆抗体mACI-01-Ab7 C2直接结合到Aβ1-42纤维。有趣的是，抗体没有表现出相对于单个纤维轴的对称结合，而是结合到纤维网侧枝的特定的而不是所有区域。似乎抗体靶向侧枝内的特定区域。可能的解释是仅存在在这一特定侧枝的特定二级结构。这一假说得到了NMR数据的支持，NMR数据表明抗体诱导构象转化并因此它的结合可能依赖于包含β-折叠结构的淀粉状蛋白纤维的构象。
实施例8：通过密度梯度超速离心的分级分离
通过基于分布不同大小之间的用抗体和不同抗体孵育后得到的肽纤维的原理的密度梯度超速离心(Rzepecki等，2004)、随后通过在预制梯度(OptiPrepTM)上的SDS-PAGE沉淀作用研究单克隆抗体抑制Aβ1-42纤维聚合和解聚Aβ1-42纤维的特性。同时分析预形成Aβ纤维的总量、共孵育的抗体的解聚和聚集抑制性质、以及抗体与纤维的结合是这一方法明显的优点。
在解聚测定法中分析了所有抗Aβ1-16(mACI-01-Ab7 C2)、Aβ1-16(Δ14)(mACI-02-Ab6)、Aβ1-15(mACI-24-Ab4)、Aβ22-35(mACI-11-Ab9)和Aβ29-40(mACI-12-Ab11)产生的单克隆抗体，其中只对单克隆抗体mACI-02-Ab6、mACI-24-Ab4和mACI-01-Ab7 C2研究了聚集抑制性质。
对于Aβ1-42聚集的抑制，使Aβ1-42单体与mAb以两个不同的摩尔比(单体Aβ1-42比mAb高三十或一百倍的摩尔比)在50μM的Aβ终浓度下孵育。在37℃孵育24小时后，在OptiprepTM的不连续梯度上覆盖样本，并在4℃以259000g将管旋转3小时。收集了15个级分，级分1是来自梯度顶端的密度的最小级分，级分15是来自梯度底端的密度最大的级分。也获得了沉淀物。通过SDS-PAGE用银染分析了收集的级分。用于抑制分析的Aβ1-42的浓度比用于解聚分析的Aβ1-42的浓度低五倍，这降低了淀粉状蛋白聚集动力学并保证在线性相范围内测量。
对于通过与mAb共孵育(mAb+单体Aβ1-42 1∶30和1∶100的两个不同的摩尔比，Aβ的终浓度是246μM)而解聚预形成Aβ1-42原纤维而言，将样本在37℃孵育24小时。24小时后，通过超速离心分级分离并通过以上和之前(Rzepecki等，2004)描述的SDS-PAGE分离样本。
8.1抑制Aβ1-42聚集的测试法
可以证明，在不添加mAb时，Aβ肽在24小时的孵育时间后聚集，并且大多数蛋白出现在级分13-15，这证明Aβ肽单体的完全聚合。成功的和显著的聚集抑制应该导致更小的纤维或聚合的可溶解的淀粉状蛋白β(Aβ)蛋白，其应该出现在具有更低密度的级分(10-13)。在包含mACI-01-Ab7 C2的聚集测试法中这种条带的转移可以得到确切的证实，其显示出Aβ肽分布在级分11、12和13。
这在第二次实验中得到了证实，其中mACI-01-Ab7 C2再次引起多数条带(最强的条带)从14到13的转移，并对进入级分14至沉淀的条带的显著溶解。这意味着mACI-01-Ab7 C2表现出强的抑制Aβ肽单体聚合成纤维的能力并显示出对Aβ纤维的特异结合(在级分13)。
在使用抗体mACI-24-Ab4和mACI-02-Ab6时，也进行了同样的观察。在不加mAb时，Aβ肽在24小时孵育时间后聚集并且大多数蛋白出现在级分13至沉淀中(沉淀在12中是极少的)，表明Aβ肽单体的完全聚合。成功和显著的聚集抑制应该导致更小的纤维或聚合的可溶解的淀粉状蛋白β(Aβ)蛋白，它们应该出现在具有更低密度的级分中。在聚集抑制测试法中，mACI-24-Ab4导致多数条带(最强的条带)从13至11和12的转移以及进入级分13至沉淀的条带的显著溶解，而mACI-02-Ab6导致条带从13至10的转移但额外的对较大纤维形成(分级在级分13至沉淀)的完全抑制。这些数据表明mACI-24-Ab4和mACI-02-Ab6都表现出较强的抑制Aβ肽单体聚合成纤维的能力以及显示出对Aβ纤维的特异结合(在级分11和12中)。
相反，摩尔比1∶30的包含mACI-11-Ab9的聚集测试法显示分布在级分12-15之间和沉淀中的较大聚集物。在mACI-12-Ab11以摩尔比1∶30存在时，聚集物出现在级分11-15和沉淀中，但在级分11和12中具有最强的信号。这意味着mACI-01-Ab7 C2和mACI-24-Ab4表现出最强的抑制Aβ肽单体聚合成纤维的能力。mACI-12-Ab11具有比mACI-01-Ab7 C2显著更低的抑制特性，为获得此弱的抑制活性，需要高于3倍的摩尔比。当与不能抑制Aβ肽纤维聚集的mACI-11-Ab9相比较，仍然能观察到轻微抑制。所有的mAb显示出对Aβ纤维的特异性结合(对于mACI-01-Ab7 C2，在级分11+12中；对于mACI-11-Ab9，在级分12中且在级分13中弱；对于mACI-12-Ab11，在级分11和12中)。
在所有的抑制测试法中，在底部级分均检测到肽。未结合的mAb(37kDa、95kDa以及大于120kDa)出现在梯度的上半部分(分别是级分3-9和4-8)。
8.2Aβ 1-42 纤维的解聚测试法
由于不完全的纤维聚合，单独Aβ1-42原纤维的分布表明于更广范围的级分(11-15)。因此，与预形成纤维共孵育时抗体的成功和显著的解聚特性的证明比聚集分析中更困难。只有多数纤维向更低密度但仍然在单独淀粉状蛋白级分范围内的迁移能表明聚集活性；对于单独淀粉状蛋白，主要条带是级分12。当与单独淀粉状蛋白相比时，以摩尔比1∶100添加mACI-01-Ab7 C2没有显示出淀粉状蛋白纤维向更低密度级分的迁移(仍然在级分11-15中)，但是在级分范围内最强信号从12转移至11。尽管不是纤维不完全形成的最佳环境，但mACI-01-Ab7 C2显示出低但是可检测的解聚活性。
相反，当类似于mACI-01-Ab7 C2以相同的淀粉状蛋白肽∶抗体摩尔比孵育时，预形成Aβ1-42原纤维和mACI-02-Ab6的共孵育没有显示出条带向更低密度级分的迁移。只有当使用高3倍的1∶30的摩尔比时，淀粉状蛋白纤维从12-15(没有抗体共孵育的单独的淀粉状蛋白)迁移至级分11-15。因此，似乎mACI-01-Ab7 C2具有比mACI-02-Ab6略高的解聚性质。
在梯度的下半部分检测到mAb相应的条带证明mACI-02-Ab6和mACI-01-Ab7 C2与Aβ1-42原纤维的结合(对于两个mAb而言，都是级分11至15)。
mACI-01-Ab7 C2的解聚特性可以在另外的实验中证实，其中可以通过在缺乏抗体时Aβ1-42原纤维在级分13至P(沉淀)的分布来证明完全的纤维聚合。这里，纤维向较低密度级分的迁移表明抗体在与预形成纤维共孵育时的解聚活性。以摩尔比1∶100添加mACI-01-Ab7 C2显示大部分淀粉状蛋白纤维从13迁移至12，且此外最低密度的条带从13向11迁移。因此，mACI-01-Ab7 C2也显示出强的解聚活性。
在梯度的下半部分检测到mAb相应的条带证明mACI-01-Ab7 C2与Aβ1-42原纤维的结合(级分11至P)，而在级分4至7的抗体的相应条带显示抗体未结合。
总结这些结果，可以成功的证明靶向淀粉状蛋白Aβ肽的单克隆抗体mACI-01-Ab7 C2结合到预形成纤维上并能够在体外抑制从单体Aβ肽到纤维的聚集并解聚预形成的纤维。
当使用mACI-24-Ab4时，进行了类似的观察。与聚集分析类似，可通过单独Aβ1-42原纤维在级分12至P(沉淀)的分布证实完全纤维聚合。这里，纤维向较低密度级分的迁移表明抗体在与预形成纤维共孵育时的解聚活性。以摩尔比1∶100添加mACI-24-Ab4显示大部分淀粉状蛋白纤维从12迁移至11。因此，mACI-24-Ab4也显示出强解聚活性。
实施例9：通过与mAb共孵育评估抑制Aβ1-42纤丝聚集和解聚预形成Aβ1-42纤丝的荧光测试法
BIS-ANS荧光测试法
为评估mAb的抑制特性，应用了检测单体或非纤维状Aβ1-42纤丝群体的BIS-ANS(LeVine，2002)荧光测试法。在荧光测量前，将Aβ1-42单体与缓冲液(作为对照)或mAb(mAb与Aβ1-42肽的摩尔比1∶100)在37℃预孵育14小时。自动记录相对荧光单位并以相对于对照的变化百分比来表示结果。
与对照相比较，mACI-02-Ab6显示出轻微的抑制能力(125.8±28.5％对100±29.5％)。mACI-01-Ab7 C2似乎具有较弱的活性(108.0±30.0％)，以及与对照相比较，没有观察到mAb mACI-11-Ab9和mACI-12-Ab11有提高(93.5±21.9％和73.2±47.7％)。这一结果证实了超速离心数据，其中mACI-01-Ab7 C2显示出比mACI-11-Ab9和mACI-12-Ab11更大的抑制能力。
实施例10：硫代黄素T(Th-T)荧光测试法
为测量mAb的聚集抑制和解聚特性，应用了硫代黄素T(Th-T)荧光测试法，其特异结合到原纤维Aβ1-42分子且随后的荧光发射强度与溶液中存在的Aβ1-42纤丝量相关联。
在荧光测量之前，将Aβ1-42单体与缓冲液(作为对照)或mAb(mAb与Aβ1-42肽的摩尔比1∶100)在37℃预孵育48小时。自动记录相对荧光单位并以相对于对照的变化百分比来表示结果。
与对照相比较，mACI-01-Ab7 C2显示出显著的抑制能力(11.03±20.7％对100±40.5％)。这一结果证实了超速离心数据，其中mACI-01-Ab7 C2显示出抑制能力。
为测量mAb的解聚特性，应用了硫代黄素T(Th-T)荧光测试法，其特异结合到原纤维Aβ1-42分子且随后的荧光发射强度与溶液中存在的Aβ1-42纤丝量相关联。在测量之前，经过7天(37℃，在PBS中，pH 7.1)预形成Aβ纤维并且随后与mAb或缓冲液(阴性对照)以1∶100的摩尔比(mAb比Aβ1-42)在37℃共孵育24小时。通过ELISA微量滴定板读取器自动记录相对荧光单位并以相对于对照的变化百分比来表示结果。
与超速离心数据一致，mACI-01-Ab7 C2在Th-T解聚分析中在两个独立实验中也显示出最佳特性，与对照相比的解聚能力分别是35±11％和64.57±13.58％(与100.0±15.37％相比)。
在Th-T测试法中，mACI-24-Ab4也显示出显著的解聚特性(62.99±10.34％对100.0±10.03％；p＜0.0001)。
mACI-11-Ab9活性稍低(28±14％)，而ACI-02-Ab6和ACI-12-Ab11没有显示出显著的解聚特性(分别是17±12％和13±11％)。
但总结超速离心和荧光测试法时，mACI-01-Ab7 C2、mACI-01-Ab6和mACI-24-Ab4在离心实验中显示出抑制纤维聚集和减短预形成Aβ1-42纤丝的双功能能力，这能在荧光测试法中得到证实。此外，离心实验证实了mAb与淀粉状蛋白的特异性结合。
当与mACI-01-Ab7 C2相比时，mACI-11-Ab9甚至在3倍更高浓度时，在超速离心实验中mACI-11-Ab9显示出显著更低的抑制能力，这能在BIS-ANS中得到证实。对于解聚分析，在离心分析和ThT测试法中mACI-01-Ab7 C2都显示出减短预形成Aβ1-42纤丝的特性。在离心实验中三倍更高浓度的mACI-02-Ab6在两个测试法中都呈阳性，但是在离心实验中更强。
从以上的结果，显然mACI-01-Ab7 C2和mACI-02-Ab6是显示出与Aβ1-42纤丝相互作用、抑制聚集和解聚预形成纤维的双功能活性的仅有的抗体。
实施例11：mACI-01-Ab7 C2单克隆抗体与13C标记的β-淀粉状蛋白1-42肽相互作用的NMR和荧光特性
为评估mAb溶解预形成纤维或抑制纤维形成的可能机制，进行了U-13C Tyr10和Val12标记的β淀粉状蛋白1-42肽的Th-T荧光测试法和固态NMR之间的并行实验(图4)。因此，这一研究的目的是通过固态NMR光谱法跟踪在β淀粉状蛋白中和在有单克隆抗体存在的情况下β-折叠的转变，以及直接将这与通过Th-T荧光测试法测得的解聚能力比较。
固态NMR光谱法不仅检测二级结构的转变，而且也能定位支配结构转变的Aβ1-42肽结构域。固态NMR已证明它对于该问题的适用性，因为它对Aβ1-42纤维的结构测定作出了贡献(Petkova等，2004，Petkova等，2002)。具体而言，13Cα和13Cβ的化学位移与二级结构之间的相关性(Cornilescu等，1999，Luca等，2001，Iwadate等，1999)是测试肽内二级结构改变的有价值的工具。
通过Fmoc合成方案进行包括在12位13C预标记的缬氨酸(12Val)和在10位13C预标记的酪氨酸(10Tyr)的标记的肽的合成。通过MALDI质谱分析证实肽的身份和纯度。使用标记的β淀粉状蛋白肽(1-42)通过在PBS缓冲液中在37℃孵育肽溶液1周产生纤维。主要的问题，即淀粉状蛋白β肽在PBS缓冲液中的较差的溶解性，可以通过以下的方式解决：通过微量氨使PBS缓冲液的pH值暂时升高以溶解淀粉状蛋白β肽。利用氨挥发的性质，通过在有更大PBS缓冲液浴存在的情况下孵育样本以重新获得PBS缓冲液的初始pH值。
为测量β折叠破坏抗体的作用，将纤维溶液与抗体在37℃孵育24小时用于NMR和Th-T测试法。为实时比较，相同溶液的等分试样用于Th-T荧光测试法并冻干剩余溶液用于NMR测量。
在首先通过与预形成13C标记的淀粉状蛋白β纤维共孵育并用Th-T荧光测试法测定mACI-01-Ab7 C2的解聚能力后，可显示出mAb使纤维解聚38％。然后进行了光谱分析。
为研究PBS(对照)与mAb孵育之间的不同，用PeakFit解卷积每一光谱(http://www.systat.com/products/PeakFit)。通过应用混合Lorentzian/Gaussian拟合程序使线良好匹配，其结果显示于图4。结果总结在表3中，但是最明显的差异是拟合30-33ppm周围的双峰所需的两群体的积分强度。c33ppm处的峰对应于纤维的β折叠，而30ppm处的峰是无规则卷曲构象的结果。在PBS中孵育的样本显示出大部分在β折叠构象中的标记(81.7％)(图2顶部)，当样本与mACI-01-Ab7 C2孵育时，β折叠构象中的标记减少了(53.5％)(图4底部)。如通过Val 12 Cβ研究测定的那样，就无规则卷曲构象而言的β折叠构象总量的减少约35％，并因此与使用荧光测量的减少总量接近一致。
表3：Val12 Cβ两种构象的拟合参数的比较。两种构象的拟合化学位移非常类似但积分强度非常不同，这反映出原始β折叠构象减少了大约35％(1-(53.5/81.7))。这与得自荧光测量的数值相当一致。
如通过密度梯度超速离心实验和通过Th-T荧光测试法证实的那样，总结这些结果，可以成功的证实靶向淀粉状蛋白Aβ肽的N末端1-16区域的单克隆抗体mACI-01-Ab7 C2结合预形成纤维并能够在体外抑制单体Aβ肽聚集成纤维和解聚预形成纤维。此抗体除了结合预形成纤维外，还能诱导Val12的β折叠多数构象向无规则卷曲二级构象环境的转变。这可能是通过结合单克隆mACI-01-Ab7 C2抗体能够溶解纤维的可能机制，也因为Val 12 Cβ峰的详细分析显示β折叠组分减少了35％，这与荧光数据(38％)接近一致。
实施例12：mACI-01-Ab7 C2对淀粉状蛋白纤维的功能性
12.1在结合mACI-01-Ab7 C2抗体后，Aβ1-42纤维的构象改变和解聚的引发
为评估抗体能够解聚预形成β淀粉状蛋白(Aβ1-42)纤维的机制，进行了测量解聚的硫代黄素T(Th-T)荧光测试法和分析二级结构的U-13C酪氨酸10和缬氨酸12标记的Aβ1-42肽的固态核磁共振(NMR)的并行比较。抗体溶解了35.4％的预形成Aβ1-42纤维并同时诱导二级构象从β折叠向无规则卷曲的转变。就无规则卷曲而言，β折叠构象总量的减少约为35％，并因此与用荧光Th-T测试法测量的减少总量接近一致。这些数据表明抗体的结合引发二级结构的转变，其可能引起β折叠的平行分子间排列的不稳定，导致延长的纤维断裂成较小的片段。
12.2 mACI-01-Ab7 C2抗体的构象依赖性结合亲和力
由于在科学文献中公知部分抗体-抗原的结合能量可以用于抗原构象的能量依赖性改变6，因此进行mACI-01-Ab7 C2抗体结合到整个Aβ1-42蛋白与结合到9个氨基酸长的包含抗体的表位的较小肽的结合亲和力的比较实验。为进行此比较，通过ELISA使用生物素化的覆盖mACI-01-Ab7 C2的表位全部氨基酸序列的肽(Aβ1-42序列的氨基酸13-21，Mimotopes生产，购自ANAWA Trading SA)和生物素化的完整Aβ1-42肽(Bachem)分析了抗体mACI-01-Ab7 C2的亲和力。根据制造商(Mimotopes)的说明进行分析。抗体与包含其特异表位(Aβ1-42序列的氨基酸13-21)的肽的结合亲和力比与整个Aβ1-42蛋白的结合亲和力高38.40％。因此提示结合亲和力能力之差被用于淀粉状蛋白二级构象的能量消耗性转变，以在对于抗体相互作用而言更可接受的位置上呈现抗原。这可以解释为什么抗体对天然抗原(整个淀粉状蛋白肽)的亲和力比对分离的亚单位的亲和力低。
实施例13：mACI-01-Ab7 C2与不同类的淀粉状蛋白的构象特异性结合
为了评估mACI-01-Ab7 C2对不同阶段聚合的淀粉状蛋白，即对单体和聚合的可溶淀粉状蛋白、特别是淀粉状蛋白β(Aβ)蛋白和原纤维淀粉状蛋白的特异性，进行了包被有这些不同阶段聚合的β淀粉状蛋白的ELISA。根据修改的7公开的方法制备单体，根据8制备聚合的可溶淀粉状蛋白，特别是淀粉状蛋白β(Aβ)，且通过将淀粉状蛋白(Bachem，瑞士)以在Tris/HCl(pH 7.4)中1μg/μl的终浓度在37℃孵育5天，随后离心(10,000rpm，5分钟)来制备纤维。然后将淀粉状蛋白聚合物以55μg/ml的终浓度包被在ELISA板上，并通过使用碱性磷酸盐标记的抗小鼠IgG单克隆抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories，Inc.)进行结合亲和力ELISA。抗体与聚合可溶的淀粉状蛋白β(Aβ)蛋白的结合亲和力(IC50＝2.53nM)比与纤维的结合亲和力(IC50＝5.27nM)更高，并且与单体的结合亲和力最低(IC50＝8.3nM)。这些数据表明，抗体的结合除受到其表位影响外，抗体的结合还受到不同淀粉状蛋白聚集物的构象的影响。
实施例14：单克隆抗体mACI-01-Ab7 C2的表位作图
通过ELISA使用三种不同的肽文库进行单克隆抗体mACI-01-Ab7 C2的表位作图。一个文库包含总共33个生物素化的覆盖Aβ1-42的完整氨基酸(aa)序列(由Mimotopes制造，购自ANAWA Trading SA)的肽，第二个文库包含生物素化的使用来自第一肽文库的肽12(Aβ的aa12-20)并用丙氨酸替代序列中每一个氨基酸的肽(参见下表4)，以及第三个文库包含生物素化的肽13、14或15(Aβ的aa 13-21、14-22或15-23)并在每种情况下将最后的氨基酸替代为丙氨酸或将已经是丙氨酸的aa 21替代为甘氨酸(参见下表5)。应用生物素化的完整Aβ1-42肽作为阳性对照(Bachem)。根据制造商(Mimotopes)的说明进行表位作图。简单的说，将经链亲和素包被的板(NUNC)在4℃用PBS中的0.1％BSA封闭过夜。用PBS-0.05％吐温20洗涤后，用来自文库的不同肽在室温下包被板1小时，肽在PBS中0.1％BSA、0.1％叠氮化纳中稀释至10μM终浓度。洗涤后，将培养板与mACI-01-Ab7C2抗体或同种型对照小鼠IgG2b抗体在室温下孵育1小时，抗体在PBS中2％BSA、0.1％叠氮化纳中稀释至10μg/ml。再次洗涤板，并用碱性磷酸酶偶联的山羊抗小鼠IgG在室温下孵育1小时。在最终洗涤后，将板与磷酸酶底物(pNPP)孵育并用ELISA板读取器在405nm读数。
显示单克隆抗体mACI-01-Ab7 C2特异结合第一个肽文库的肽12、13、14和15。这4个肽包含Aβ1-42的aa 12-20(VHHQKLVFF)、13-21(HHQKLVFFA)、14-22(HQKLVFFAE)和15-23(QKLVFFAED)，这提示表位位于Aβ的区域12-23。用丙氨酸替代的第二个文库用于测定结合肽12-20(VHHQKLVFF)的关键aa。当aa16、17、19或20被丙氨酸替代后，mACI-01-Ab7 C2抗体的结合完全丧失，表明这些aa对于抗体与Aβ的结合是绝对关键的。当aa15和18被替代时，mACI-01-Ab7 C2抗体的结合部分丧失。
当aa14被替代为丙氨酸时，结合也几乎完全丧失，表明aa14对结合也是非常重要的。
最后，使用第三个文库以测定氨基酸21、21或23对表位的结合是否是关键的。当aa 23被丙氨酸替代时，抗体与aa 15-23的结合降低了，表明aa 23对结合也是重要的。当aa 21被甘氨酸替代时，结合部分丧失，以及当aa 22被丙氨酸替代时，结合轻微丧失。
表4：第二个文库所用肽的概述
用斜体和下划线标记了对于结合重要的aa，并且用斜体和粗体和下划线标记了对结合绝对关键的aa。
p12-20 V  H  H  Q  K  L  V  F  F
A12    A  H  H  Q  K  L  V  F  F
A13    V  A  H  Q  K  L  V  F  F
A14    V  H  A  Q  K  L  V  F  F
A15    V  H  H  A  K  L  V  F  F
A16    V  H  H  Q  A  L  V  F  F
A17    V  H  H  Q  K  A  V  F  F
A18    V  H  H  Q  K  L  A  F  F
A19    V  H  H  Q  K  L  V  A  F
A20    V  H  H  Q  K  L  V  F  A
aa编号 12 13 14 15 16 17 18 19 20
表5：第三个文库所用肽的概述
用斜体和下划线标记了对于结合重要的aa，并且用斜体和粗体和下划线标记了对结合绝对关键的aa。
p13-21     H  H  Q  K  L  V  F  F  A
p13-21 G21 H  H  Q  K  L  V  F  F  G
p14-22        H  Q  K  L  V  F  F  A  E
p14-22 A22    H  Q  K  L  V  F  F  A  A
p15-23           Q  K  L  V  F  F  A  E  D
p15-23 A23       Q  K  L  V  F  F  A  E  A
aa编号     13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
实施例15：用mACI-01-Ab7 C2被动接种对单转基因hAPP小鼠脑中淀粉状蛋白负荷的影响
为评估在体内mACI-01-Ab7 C2单克隆抗体结合可溶淀粉状蛋白及将其清除出脑的能力，使用性别和年龄匹配的6个月龄的单hAPP小鼠9用于不同剂量的被动免疫研究。在研究结束时，通过收集动物的脑及进行Aβ1-40和Aβ1-42特异性ELISA(TGC，德国)分析可溶淀粉状蛋白负荷。
每组8-13只动物以一周的时间间隔接受两次在200μl PBS中100、300和1000μg单克隆抗体的注射，而仅使用PBS注射作为对照。在第二次注射一天后，处死动物用于可溶淀粉状蛋白部分的生物化学分析。为了定量脑匀浆可溶部分和/或脑脊髓液(CSF)中的人Aβ1-40和人Aβ1-42的量，使用了酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒(人淀粉状蛋白β40或β42ELISA，高敏感性，TGC，瑞士)。根据制造商的方案进行ELISA。简单地说，在没有蛋白结合能力的96孔聚丙烯板(Greiner，德国)中制备标准品(合成的Aβ1-40或Aβ1-42的稀释液)和样本。在样本稀释剂中制备终浓度为1000、500、250、125、62.5、31.3和15.6pg/ml的标准品稀释液和样本，装配ELISA试剂盒，达到60μl的终体积。由于淀粉状蛋白的水平随小鼠年龄的增加而增加，以及由于实际评估要求样本的读数在标准曲线的线性部分内，因此用于Aβ40分析的样本以2∶3稀释，用于Aβ42分析的样本没有稀释。
将样本、标准品和空白(50μl)添加到经抗Aβ包被的聚苯乙烯板(俘获抗体选择性识别抗原的C末端)，另外添加选择性抗Aβ抗体缀合物(生物素化的检测抗体)，并在4℃孵育过夜以允许形成抗体-淀粉状蛋白-抗体-复合物。第二天，添加链亲和素-过氧化物酶-缀合物，30分钟后添加TMB/过氧化物混合物，导致底物转变为有颜色的产物，并通过光度测定法用具有450nm滤光片的ELISA读取器测量颜色强度。通过与用合成的Aβ1-40或Aβ1-42制作的标准曲线比较吸光度得到样本中Aβ含量的定量。以相对平均对照值的分别改变表示结果(以相对对照的百分比)。
当以300μg的剂量两次腹膜内注射单克隆抗体ACI-01-Ab7 C2对单hAPP小鼠被动免疫后，其脑匀浆中Aβ40的总量显著减少且Aβ42总量的减少大体上不显著(Aβ40：-27.3±13.9％，p＜0.05；Aβ42：-8.6±22.4，p＝0.56；非配对Student T检验)，而100和1000μg没有达到显著性。用100μg免疫导致脑匀浆中Aβ40和Aβ42的增加(Aβ40：32.3±36.8％；Aβ42：38.3±51.4％)，而用1000μg处理引发淀粉状蛋白负荷降低的正确趋势，并且在每组动物数目增加时潜在有效(Aβ40：-2.2±26.0％；Aβ42：-9.3±15.9％)。这些数据证实在急性免疫方案中，抗体mACI-01-Ab7 C2能够降低这些鼠科AD模型的脑中可溶Aβ的总量。有趣的是，似乎剂量关系是瞬间的，但是需要进行更多的更大组的研究以得到显著的数据。
实施例16：慢性被动施与mACI-01-Ab7 C2对双转基因hAPPxPS1小鼠斑块负荷的影响
为评估体内mACI-01-Ab7 C2单克隆抗体结合并降低脑中淀粉状蛋白斑的能力，应用性别及年龄匹配的3.5月龄的双转基因hAPPxPS1小鼠10用于4个月长的慢性被动免疫研究。在研究结束时，通过硫代黄素S的结合由动物脑的组织化学来分析淀粉状蛋白斑。
15只转基因动物接受16次500μg单克隆抗体的每周注射。仅用PBS注射的15只动物作为对照。所有注射均为腹膜内给予。处死时，将小鼠麻醉并用生理血清在4℃经心脏冲洗以从脑血管中移除血液。随后，从颅中移除脑，并在冠/额平面切割分离前脑和后脑。通过使用中线矢状切割将前脑均匀分为左和右半球。将一个半球后固定于组织学使用的4％低聚甲醛中。切割矢状振动切片机切片(40μm)用于自由漂浮孵育并储存在4℃直到在PBS中用1％叠氮化钠染色。对于密集的斑块，用硫代黄素S染色五个不同水平的切片。所有动物的切片随机染色并盲定量。用装备有SonyDXC-9100P相机的Leica DMR显微镜获得图像，并使用Leica Q-Win软件用计算机分析。在图像获取过程中，显微镜的光强度和聚光器设置保持为常数。所有获得的图像均经过相同计算机子程序处理，以最小化研究者的偏差。在整个分析期间一致的应用密度分割阈值。选择脑下脚区域用于在硫代黄素S染色中淀粉状蛋白负荷的自动定量。
在如上面描述的那样对双hAPP/PS1小鼠被动免疫4个月时，脑下脚区域中总的斑块负荷和斑块的数目能够显著的减少。在斑块负荷中，可以达到31％的显著降低(mACI-01-Ab7 C2：1.11±0.21％，以及对照：1.61±0.35％；p＝0.003，Mann-Whitney U-检验)，而慢性被动免疫使斑块量显著减少了19％(mACI-01-Ab7 C2：8.73±1.36以及对照：10.78±1.36；p＝0.006，Mann-Whitney U-Test)，表明斑块溶解的发生程度略微低于斑块裂解。
实施例17：用mACI-01-Ab7 C2被动接种对单转基因hAPP小鼠记忆能力的影响
为了分析体内mACI-01-Ab7 C2抗体改变或增加认知功能的能力，应用性别和年龄匹配的9个月龄的单hAPP小鼠进行被动免疫研究。在免疫期结束时，通过新物体识别任务(ORT)测量非空间认知。
每组12只动物接受两次200μl PBS中的400μg单克隆抗体的腹膜内注射，而以仅注射PBS作为对照。第二次注射后一天，在新物体识别任务(ORT)12，13中研究认知能力。对于ORT登记，将小鼠置于行为场所中10分钟并面对新的未知物体。记录探索时间。三小时后，将相同的小鼠重新置于相同的场所中经历第二时期，但面对先前已探索过的物体以及额外的新物体。再次记录探索两个物体的时间，并以探索新物体的时间相对于总的探索时间的比值计算，且以相对对照的比例变化来表示认知系数。
用mACI-01-Ab7 C2被动接种导致单转基因AD小鼠认知记忆能力的显著增加(mACI-01-Ab7 C2：131.6±9.1％，以及对照：100.0±9.2％，p＜0.05；非配对Student T检验，且各组n＝12)。
保藏：
以下的杂交瘤细胞系根据布达佩斯条约保藏在位于德国布劳恩斯切魏格，38124布劳恩斯切魏格，马斯切尔奥德尔韦格1B的“德意志微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und ZellkulturenGmbH；DSMZ)”。
  杂交瘤株名称   抗体名称   保藏日  保藏号
  FP 12H3   mACI-01-Ab7   2005年12月1日  DSM ACC2752
  FP 12H3-C2   mACI-01-Ab7C2   2005年12月1日  DSM ACC2750
  FP 12H3-G2   mACI-01-Ab7G2   2005年12月1日  DSM ACC2751
  ET 7E3   mACI-02-Ab6   2005年12月8日  DSM ACC2755
  EJ 7H3   mACI-24-Ab4   2005年12月8日  DSM ACC2756
参考文献
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WO 2004/058258
WO96/1359
WO96/29605
与保藏的微生物或其它生物材料有关的声明
(PCT细则第13条之2)
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 保藏机构名称DSMZ-德意志微生物保藏中心
 保藏单位地址(包括邮政编码和国家)德国，38124布劳恩斯切魏格，马斯切尔奥德尔韦格1b
 保藏日                           保藏号2005年12月1日                    DSM ACC2750
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 EP
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 仅用于接受机构                         仅用于国际局□该页连同国际申请一起收到           □国际局在2006年12月23日收到此页
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 保藏日                           保藏号2005年12月8日                    DSM ACC2755
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 保藏单位地址(包括邮政编码和国家)德国，38124布劳恩斯切魏格，马斯切尔奥德尔韦格1b
 保藏日                           保藏号2005年12月8日                    DSM ACC2756
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 EP
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PCT/RO/134表(1998年7月；2004年1月重印)
序列表
<110>AC免疫有限公司
<120>具有治疗性质的Aβ1-42特异性单克隆抗体
<130>L3017 PCT
<150>EP 05027092.5
<151>2005-12-12
<150>EP 06014729.5
<151>2006-07-14
<150>EP 06020766.9
<151>2006-10-02
<160>22
<170>PatentIn版本3.3
<210>1
<211>15
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>抗原肽Aβ1-15
<400>1
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln
1               5                   10                  15
<210>2
<211>16
<212>PRT
<213>人
<220>
<223>抗原肽Aβ1-16
<400>2
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1               5                   10                  15
<210>3
<211>15
<212>PRT
<213>人
<220>
<223>抗原肽Aβ1-16(Δ14)
<400>3
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His Gln Lys
1               5                   10                  15
<210>4
<211>14
<212>PRT
<213>人
<220>
<223>抗原肽Aβ22-35
<400>4
Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met
1               5                   10
<210>5
<211>12
<212>PRT
<213>人
<220>
<223>抗原肽Aβ29-40
<400>5
Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val
1               5                   10
<210>6
<211>17
<212>PRT
<213>人
<220>
<223>抗原肽Aβ1-17
<400>6
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys Leu
1               5                   10                  15
<210>7
<211>112
<212>PRT
<213>小家鼠(Mus musculus)
<400>7
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
                85                  90                  95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>8
<211>112
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>8
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Leu Val
        35                  40                  45
Ala Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Thr Leu Thr Val Ser Ser
            100                 105                 110
<210>9
<211>336
<212>DNA
<213>小家鼠
<400>9
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc     60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta tatagtaatg gagacaccta tttacattgg    120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt    180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc    240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttcct  300
tggacgttcg gtggaggcac caagctagaa atcaaa                            336
<210>10
<211>417
<212>DNA
<213>小家鼠
<400>10
atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagcagtgat   60
gttgtgatga cccaaactcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc  120
tcttgcagat ctagtcagag ccttgtatat agtaatggag acacctattt acattggtac  180
ctgcagaagc caggccagtc tccaaagctc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct  240
ggggtcccag acaggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagc  300
agagtggagg ctgaggatct gggagtttat ttctgctctc aaagtacaca tgttccttgg  360
acgttcggtg gaggcaccaa gctagaaatc aaacgggctg atgctgcacc aactgta     417
<210>11
<211>336
<212>DNA
<213>小家鼠
<400>11
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggagggtc cctgaaactc   60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctatggca tgtcttgggt tcgccagact  120
ccagacaaga ggctggaatt ggtcgcaagc atcaatagta atggtggtag cacctattat  180
ccagacagtg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtac  240
ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgc aagtggtgac  300
tactggggcc aaggctccac tctcacagtc tcctca                            336
<210>12
<211>408
<212>DNA
<213>小家鼠
<400>12
atgrasttsg ggytcagmtt grttttcctt gcccttattt taaaaggtgt ccaatgtgag   60
gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaactctcc  120
tgtgcagcct ctggattcac tttcagtagc tatggcatgt cttgggttcg ccagactcca  180
gacaagaggc tggaattggt cgcaagcatc aatagtaatg gtggtagcac ctattatcca  240
gacagtgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg  300
caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgcaag tggtgactac  360
tggggccaag gctccactct cacagtctcc tcagccaaaa caacaccc               408
<210>13
<211>10
<212>PRT
<213>人
<220>
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<222>(2)..(2)
<223>Xaa可以是Ash或Gln
<220>
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<222>(5)..(5)
<223>Xaa可以是Ala，Val，Leu，正亮氨酸，Met，Phe，或Ile
<220>
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<222>(6)..(6)
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<222>(7)..(7)
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<222>(8)..(8)
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His Xaa Lys Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1               5                   10
<210>14
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<212>PRT
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Xaa His Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Phe Xaa Xaa Xaa
1               5                   10
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Xaa Xaa Lys Leu Xaa Phe Phe Xaa Xaa Xaa
1               5                   10
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<212>PRT
<213>人
<220>
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<222>(10)..(10)
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His Xaa Lys Leu Xaa Phe Phe Xaa Xaa Xaa
1               5                   10
<210>17
<211>10
<212>PRT
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Xaa Xaa Lys Leu Xaa Phe Phe Xaa Xaa Asp
1               5                   10
<210>18
<211>10
<212>PRT
<213>人
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<222>(2)..(2)
<223>Xaa可以是Asn或Gln
<220>
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<220>
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<222>(9)..(9)
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His Xaa Lys Leu Xaa Phe Phe Xaa Xaa Asp
1               5                   10
<210>19
<211>10
<212>PRT
<213>人
<220>
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<222>(1)..(1)
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<223>Xaa可以是Asn或Gln
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<222>(3)..(3)
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<220>
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<222>(5)..(5)
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<223>Xaa可以是Glu或Asp
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<222>(10)..(10)
<223>Xaa可以是Glu或Asp
<400>19
Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Phe Phe Xaa Xaa Xaa
1               5                   10
<210>20
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>20
Val His His Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp
1               5                   10
<210>21
<211>219
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>21
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1                5                  10                   15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
             20                  25                  30
Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
         35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
     50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
 65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
                 85                  90                  95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
        115                 120                 125
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
    130                 135                 140
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
145                 150                 155                 160
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
                165                 170                 175
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
            180                 185                 190
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
        195                 200                 205
Pro Ile Val Lys Ser Phe Ash Arg Asn Glu Cys
    210                 215
<210>22
<211>448
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>22
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1                5                  10                   15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Leu Val
         35                  40                  45
Ala Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Thr Leu Thr Val Ser Ser
            100                 105                 110
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly
        115                 120                 125
Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
    130                 135                 140
Phe Pro Glu Ser Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
145                 150                 155                 160
Ser Val His Thr Phe Pro Ala Leu Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Met
                165                 170                 175
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val
            180                 185                 190
Thr Cys Ser Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Thr Val Asp Lys Lys
        195                 200                 205
Leu Glu Pro Ser Gly Pro Ile Ser Thr Ile Asn Pro Cys Pro Pro Cys
    210                 215                 220
Lys Glu Cys His Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser
225                 230                 235                 240
Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu
                245                 250                 255
Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro
            260                 265                 270
Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala
        275                 280                 285
Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Ile Arg Val Val
    290                 295                 300
Ser Thr Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe
305                 310                 315                 320
Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr
                325                 330                 335
Ile Ser Lys Ile Lys Gly Leu Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Ile Leu
            340                 345                 350
Pro Pro Pro Ala Glu Gln Leu Ser Arg Lys Asp Val Ser Leu Thr Cys
        355                 360                 365
Leu Val Val Gly Phe Asn Pro Gly Asp Ile Ser Val Glu Trp Thr Ser
    370                 375                 380
Asn Gly His Thr Glu Glu Asn Tyr Lys Asp Thr Ala Pro Val Leu Asp
385                 390                 395                 400
Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asn Met Lys Thr Ser
                405                 410                 415
Lys Trp Glu Lys Thr Asp Ser Phe Ser Cys Asn Val Arg His Glu Gly
            420                 425                 430
Leu Lys Asn Tyr Tyr Leu Lys Lys Thr Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
        435                 440                 445

Claims (118)

1.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体在与淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽共孵育后，抑制Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维。
2.根据权利要求1的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，与在缓冲液中孵育的分别的淀粉状蛋白肽单体(对照)相比较，所述抗体对Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维抑制了至少50％，特别地至少60％，特别地至少65％，更特别地至少75％，甚至更特别地至少80％，但尤其是至少85％-90％，或者更多。
3.根据权利要求1或2的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体以高达1∶100的摩尔浓度比与淀粉状蛋白单体肽共孵育。
4.根据权利要求3的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体在以1∶30至1∶100之间的摩尔浓度比与淀粉状蛋白单体肽共孵育后，表现出它的聚集抑制特性。
5.根据权利要求3或4的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体在37℃的温度与淀粉状蛋白单体肽共孵育48小时后，表现出它的聚集抑制特性。
6.根据权利要求5的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体在以1∶30至1∶100之间的摩尔浓度比，特别是以1∶100的摩尔浓度比，与由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝共孵育后，能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少35％，特别地至少40％，更特别地至少50％，甚至特别地至少60％，但尤其是至少70％或更高。
7.根据权利要求1-6任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体的聚集抑制和解聚潜力分别通过密度梯度超速离心法，接着通过在预先形成的梯度上的SDS-PAGE沉降分析法确定。
8.根据权利要求1-6任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体的聚集抑制和解聚潜力分别通过硫代黄素T(Th-T)荧光测定法来确定。
9.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体在与由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝共孵育后，能够诱导β折叠构象向在分子内给定区域内的无规卷曲构象转变，这导致了以β折叠构象为代价的无规卷曲构象的增加以及预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的改良的溶解。
10.根据权利要求9的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体能够诱导以β折叠构象为代价的无规卷曲构象的增加，当与在缓冲液中孵育的分别的预形成淀粉状蛋白聚合原纤维或纤丝(对照)相比较时，β折叠构象减少了至少30％，特别地至少35％，以及更特别地至少40％及更多。
11.根据权利要求9或10所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其中二级构象的转变发生在Aβ蛋白的Val 12环境中。
12.根据权利要求6-11任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其中与预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的共孵育是在37℃的温度进行24小时。
13.根据权利要求9-12任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其中抗体诱导二级结构转变的潜力通过固态NMR光谱学确定。
14.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体与淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽共孵育后，抑制了Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维或纤丝，并且此外，在与由淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝共孵育后，能够解聚预形成的聚合原纤维或纤丝。
15.根据权利要求14的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其中与淀粉状蛋白单体肽和预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的共孵育分别以高达1∶100的摩尔浓度比进行。
16.根据权利要求15的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其中与淀粉状蛋白单体肽和预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的共孵育分别以1∶30至1∶100之间的摩尔浓度比，特别地以1∶100的摩尔浓度比进行。
17.根据权利要求14-16任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其中与淀粉状蛋白单体肽和预形成高分子聚合淀粉状蛋白原纤维或纤丝的共孵育在37℃的温度分别进行48小时和24小时。
18.根据权利要求14-17任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少10％，特别地至少25％，更特别地至少35％，甚至更特别地至少50％，但尤其至少60-70％或更多。
19.根据权利要求14-17任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，与在缓冲液中孵育的分别的淀粉状蛋白肽单体(对照)相比较，所述抗体对淀粉状蛋白单体肽，特别是β-淀粉状蛋白单体肽，例如，诸如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41、1-42或1-43，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集抑制了至少50％，特别地至少65％，更特别地至少75％，甚至更特别地至少80％，但尤其是至少85％-90％，或者更多。
20.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体并入了根据权利要求1-5和14-19任一项所述的聚集抑制特性和根据权利要求6-8、12和14-19任一项所述的解聚特性，以及根据权利要求9-13任一项所述的破坏β折叠的特性。
21.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体通过靶向由氨基酸残基aan-aam限制的Aβ多肽的表位区，直接且特异地结合至Aβ纤维；其中所述aan-aam中的n是13至15之间的整数，但尤其是14；并且m是22至24之间的整数，但尤其是23；其中n和m不能是相同的数字并且n必须总是比m小的数字，n和m之间的差≥2。
22.根据前述任一权利要求的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其识别淀粉状蛋白的天然构象，因为它特异地结合至淀粉状蛋白寡聚体和纤维，而不是结合至非线性化的淀粉状蛋白种类。
23.根据前述任一权利要求的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体或片段以至少约1×10-6至至少约1×10-8，特别地至少约1×10-6至至少约1×10-7，更特别地至少约1×10-7至至少约1×10-8，甚至更特别地至少约1×10-7至至少约4×10-7的结合亲和力结合到Aβ单体，但是优选地不显示出任何显著的与淀粉状蛋白前体蛋白(APP)的交叉反应性。
24.根据前述任一项权利要求的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其中抗体或片段以至少约1×10-7至至少约1×10-9，特别地至少约1×10-7至至少约1×10-8，更特别地至少约1×10-8至至少约1×10-9，甚至更特别地至少约1×10-8至至少约5×10-8的结合亲和力结合到Aβ纤维、原纤维或纤丝，但是优选地不显示出任何显著的与淀粉状蛋白前体蛋白(APP)的交叉反应性。
25.根据前述任一项权利要求的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体或片段表现出比与Aβ单体的结合亲和力高至少5倍，特别地高至少10倍，更特别地高至少15倍的与Aβ纤维、原纤维或纤丝的结合亲和力。
26.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体并入了至少一种根据权利要求1至25任一项所述的特性，即聚集抑制、解聚、诱导构象转变、识别并直接结合至Aβ多肽的表位区，但尤其是所述特性的两种或以上的组合。
27.根据前述任一项权利要求的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体对Aβ1-42单体肽表现出高特异性，但对Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40和/或Aβ1-41单体肽显示出实质上没有交叉反应性。
28.根据权利要求27的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体对淀粉状蛋白肽Aβ1-42比对Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40、Aβ1-41更敏感高达100倍，特别地50至100倍，更特别地80至100倍，但尤其是100倍，并且能够在体外和体内抑制形成淀粉状蛋白的单体肽的聚集。
29.根据权利要求27或28的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体具有对淀粉状蛋白肽Aβ1-42的高结合敏感性，并且能够检测高达0.01μg的浓度，但特别地在0.5μg至0.01μg之间，更特别地在0.1μg至0.01μg之间的浓度范围，但尤其是0.01μg浓度的Aβ1-42纤维。
30.根据前述权利要求任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体能够降低患有导致脑中可溶Aβ浓度增加的疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，但尤其是人类的脑中可溶Aβ的总量。
31.根据前述权利要求任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体能够破坏斑块，因此减少患有导致脑中斑块负荷增加的疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，但尤其是人类的脑中的斑块负荷。
32.根据权利要求31的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，所述抗体使脑中斑块负荷降低了至少20％，特别地至少25％，更特别地至少30％，甚至更特别地30％以上。
33.根据权利要求31的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆，所述抗体能够溶解斑块，导致患有导致脑中斑块负荷增加的疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，但尤其是人类的脑中斑块量的减少。
34.根据权利要求31的包括任何功能等效抗体或其功能部分的抗体，所述抗体使脑中斑块量减少了至少10％，特别地至少15％，更特别地至少20％。
35.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体并入了选自下列特性中的至少一种特性：聚集抑制、解聚、诱导构象转变、识别并直接结合到表位，特别是在14-23，特别是在14-20区域的构象不连续表位、预防或减缓淀粉状蛋白斑的形成、减少脑中可溶的Aβ总量、降低脑中斑块负荷、减少脑中斑块量、保持或提高认知记忆能力，但尤其是所述特性的两种或以上的组合。
36.根据权利要求35的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体并入了至少2种、特别地至少3种、更特别地至少4种、甚至更特别地至少5、6、7或8种，但尤其是所有上面提到的特性。
37.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体识别并结合至β-淀粉状蛋白上的至少一个独特的结合部位，特别是至少两个独特的结合部位，其中所述的至少一个或所述的至少两个独特的结合部位分别包含主要参与抗体结合的至少一个氨基酸残基和至少两个连续的氨基酸残基，其中在本发明特定的实施方案中，构成第一个独特结合部位的至少一个残基是插在以下核心序列中的Leu，并且构成第二个独特结合部位的至少两个连续的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Phe-Phe-：
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Xaa7-
其中
Xaa1是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa3是选自Lys、His、Asn、Gln和Arg的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa7是选自Glu和Asp的氨基酸残基。
38.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体识别并结合至β-淀粉状蛋白上的至少一个独特的结合部位，特别地至少两个独特的结合部位，更特别地至少三个独特的结合部位，其中所述的独特的结合部位分别包含至少一个和至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中被至少一个不参与抗体结合或与主要参与抗体结合的氨基酸残基相比参与抗体结合程度显著较小的氨基酸残基隔开的至少一个和至少两个连续的氨基酸分别是插在以下核心序列中的-His-和-Lys-Leu-：
-His-Xaa2-Lys-Leu-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-
其中
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa3是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa7是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa8是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa6、Xaa7、Xaa8不参与抗体结合或与-His-和-Lys-Leu-结合部位相比参与抗体结合程度显著较小。
39.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体识别并结合至β-淀粉状蛋白上的至少一个独特的结合部位，特别地至少两个独特的结合部位，更特别地至少三个独特的结合部位，其中所述的独特的结合部位分别包含至少一个和至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中代表第一个结合部位的至少两个连续的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Phe-Phe-以及至少一个氨基酸残基是插在以下核心序列中的-His-：
-Xaa1-His-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Phe-Phe-Xaa7-Xaa8-Xaa9-
其中，
Xaa1是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa3是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa4是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Ala、Val、Leu和Ile的氨基酸残基；
Xaa7是选自Ala、Val、Leu和Ile的氨基酸残基；
Xaa8是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa9是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
且其中所述的氨基酸残基Xaa1、Xaa3、Xaa6、Xaa7、Xaa8和Xaa9不参与抗体结合或与His和-Phe-Phe-结合部位相比参与抗体结合程度显著较小。
40.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体识别并结合至β-淀粉状蛋白上的至少一个独特的结合部位，特别地至少两个独特的结合部位，更特别地至少三个独特的结合部位，其中所述的独特的结合部位分别包含至少一个和至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中第一种至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Lys-和-Leu-，且第二种至少两个连续的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Phe-Phe-：
Xaa1-Xaa2-Lys-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Xaa7-
其中
Xaa1是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa7是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6和Xaa7不参与抗体结合或与Lys-Leu和-Phe-Phe-结合部位相比参与抗体结合程度显著较小。
41.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体识别并结合至β-淀粉状蛋白上的至少一个独特的结合部位，特别地至少两个独特的结合部位，更特别地至少三个独特的结合部位，其中所述的独特的结合部位分别包含至少一个和至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中第一种至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Lys-Leu-，且第二种至少两个连续的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Phe-Phe-；且第三种至少一个氨基酸残基是插在以下核心序列中的-His-：
-His-Xaa2-Lys-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Xaa7
其中，
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa7是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6和Xaa7不参与抗体结合或与-His-、-Lys-Leu和-Phe-Phe-结合部位相比参与抗体结合程度显著较小。
42.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体识别并结合至β-淀粉状蛋白上的至少一个独特的结合部位，特别地至少两个独特的结合部位，更特别地至少三个独特的结合部位，其中所述的独特的结合部位分别包含至少一个和至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中第一种至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Lys-Leu-，且第二种至少两个连续的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Phe-Phe-；且第三种至少一个氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Asp-：
-Xaa1-Xaa2-Lys-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Asp.-
其中，
Xaa1是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6和Xaa7不参与抗体结合或与-Asp-、-Lys-Leu和-Phe-Phe-结合部位相比参与抗体结合程度显著较小。
43.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体结合至β-淀粉状蛋白上的4个独特的结合部位，其中所述的4个独特的结合部位分别包含一个氨基酸残基和两个连续的氨基酸残基，所述残基主要参与抗体结合，其中所述的4个独特的结合部位在抗原上彼此密切接近地定位，分别被至少一个不参与抗体结合或与4个独特的结合部位的所述的一个氨基酸残基及所述的两个连续的氨基酸残基相比参与抗体结合程度显著较小的氨基酸残基隔开，从而形成构象不连续的表位。
44.根据权利要求43的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其中第一种两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Lys-Leu-，且第二种至少两个连续的氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Phe-Phe-；第一种单氨基酸残基是插在以下核心序列中的-His-且第二种单氨基酸残基是插在以下核心序列中的-Asp-：
-His-Xaa2-Lys-Leu-Xaa4-Phe-Phe-Xaa5-Xaa6-Asp-
其中，
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa7不参与抗体结合或与-His-、-Asp-、-Lys-Leu和-Phe-Phe-结合部位相比参与抗体结合程度显著较小。
45.根据权利要求37-44任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其中所述的主要参与β-淀粉状蛋白结合的连续氨基酸残基，特别是在位置16和17的-Lys-Leu-和在位置19和20的-Phe-Phe-，被嵌入到以下核心序列内：
Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp
12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23。
46.根据权利要求1-36任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体识别并结合至权利要求37至45任一项定义的构象不连续的表位。
47.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其包含SEQID NO：7的轻链可变区(LCVR)。
48.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其包含SEQID NO：8的重链可变区(HCVR)。
49.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其包含SEQID NO：8的重链可变区(HCVR)和SEQ ID NO：7的轻链可变区(LCVR)这两者。
50.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其包含轻链可变区(LCVR)或重链可变区(HCVR)或轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)这两者，轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)分别与SEQ IDNO：7和8提供的任一肽同源。
51.根据权利要求50的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其中轻链可变区(LCVR)具有与SEQ ID NO：7给出的序列90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列。
52.根据权利要求50的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其中重链可变区(HCVR)具有与SEQ ID NO：8给出的序列90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列。
53.根据权利要求50的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，其中轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)一起具有与SEQID NO：7和8给出的序列85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列。
54.根据权利要求47-53任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体识别并结合至权利要求37至45任一项定义的构象不连续的表位，并表现出根据权利要求1-36任一项所述的抗体的特异特性。
55.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体具有由分别于2005年12月1日和2005年12月9日以DSM ACC2752保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3产生的抗体的特征性特性。
56.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体具有由分别于2005年12月1日和2005年12月9日以DSM ACC 2750保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3-C2产生的抗体的特征性特性。
57.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体具有由分别于2005年12月1日和2005年12月9日以DSM ACC2751保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3-G2产生的抗体的特征性特性。
58.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体具有由2005年12月8日以DSM ACC2755保藏的杂交瘤细胞系ET 7E3产生的抗体的特征性特性。
59.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体具有由2005年12月8日以DSM ACC2756保藏的杂交瘤细胞系EJ 7H3产生的抗体的特征性特性。
60.由分别于2005年12月1日和2005年12月9日以DSM ACC2752保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分。
61.由分别于2005年12月1日和2005年12月9日以DSM ACC2750保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3-C2产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分。
62.由分别于2005年12月1日和2005年12月9日以DSM ACC2751保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3-G2产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分。
63.由2005年12月8日以DSM ACC2755保藏的杂交瘤细胞系ET7E3产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分。
64.由2005年12月8日以DSM ACC2756保藏的杂交瘤细胞系EJ7H3产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括任何功能等效抗体或其功能部分。
65.包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体对抗超分子抗原构建体而产生，所述超分子抗原构建体包含与β-淀粉状蛋白肽，特别是β-淀粉状蛋白肽Aβ1-15、Aβ1-16和Aβ1-16(Δ14)的氨基酸序列相对应的抗原肽，所述抗原肽用疏水部分，例如，诸如棕榈酸，或亲水部分，例如，诸如聚乙二醇(PEG)，或两者的组合进行修饰，其中所述疏水和亲水部分分别通过氨基酸，例如，诸如赖氨酸或任何其它的能够用作连接分子的合适的氨基酸或氨基酸类似物而共价地连接到每一末端。
66.包含编码包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体的核苷酸序列的多核苷酸，其包含：
a)至少SEQ ID NO：9的轻链可变区的核苷酸序列；
b)由于遗传密码子的简并性在密码子序列上与(a)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；
c)具有(a)和(b)的互补序列的核苷酸序列；或
d)(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的片段，其包含选自以下的连续核苷酸段：至少20个连续的核苷酸、至少25个连续的核苷酸、至少30个连续的核苷酸、至少35个连续的核苷酸、至少40个连续的核苷酸、至少45个连续的核苷酸和至少50个连续的核苷酸。
67.包含编码包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体的核苷酸序列的多核苷酸，其包含：
a)至少SEQ ID NO：10的轻链的核苷酸序列；
b)由于遗传密码子的简并性在密码子序列上与(a)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；
c)具有(a)和(b)的互补序列的核苷酸序列；或
d)(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的片段，其包含选自以下的连续核苷酸段：至少20个连续的核苷酸、至少25个连续的核苷酸、至少30个连续的核苷酸、至少35个连续的核苷酸、至少40个连续的核苷酸、至少45个连续的核苷酸和至少50个连续的核苷酸。
68.包含编码包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体的核苷酸序列的多核苷酸，其包含：
a)至少SEQ ID NO：11的重链可变区的核苷酸序列；
b)由于遗传密码子的简并性在密码子序列上与(a)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；
c)具有(a)和(b)的互补序列的核苷酸序列；或
d)(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的片段，其包含选自以下的连续核苷酸段：至少20个连续的核苷酸、至少25个连续的核苷酸、至少30个连续的核苷酸、至少35个连续的核苷酸、至少40个连续的核苷酸、至少45个连续的核苷酸和至少50个连续的核苷酸。
69.包含编码包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体的核苷酸序列的多核苷酸，其包含：
a)至少SEQ ID NO：12的重链的核苷酸序列；
b)由于遗传密码子的简并性在密码子序列上与(a)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；
c)具有(a)和(b)的互补序列的核苷酸序列；或
d)(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的片段，其包含选自以下的连续核苷酸段：至少20个连续的核苷酸、至少25个连续的核苷酸、至少30个连续的核苷酸、至少35个连续的核苷酸、至少40个连续的核苷酸、至少45个连续的核苷酸和至少50个连续的核苷酸。
70.包含与权利要求66-69任一项所述的核苷酸序列杂交的核苷酸序列的多核苷酸。
71.根据权利要求70的多核苷酸，其中所述的核苷酸序列在常规杂交条件下，特别地在严格杂交条件下，杂交至根据权利要求66-69任一项所述的核苷酸序列。
72.SEQ ID NO：7的轻链可变区(LCVR)。
73.SEQ ID NO：8的重链可变区(HCVR)。
74.编码SEQ ID NO：7的轻链可变区(LCVR)的多核苷酸。
75.编码SEQ ID NO：8的重链可变区(HCVR)的多核苷酸。
76.组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1至65任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体。
77.根据权利要求76的组合物，其是任选地还包含可药用载体的药物组合物。
78.根据权利要求77的组合物，其包含治疗有效量的单克隆抗体。
79.根据权利要求76至78任一项所述的组合物，用于治疗由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症，所述疾病和病症包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白诸如与阿尔茨海默病有关的Aβ蛋白相关的疾病和病症。
80.混合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1至65任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，以及任选地还包含其它的生物活性物质和/或可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
81.根据权利要求79的混合物，其中其它的生物活性物质是用于治疗由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症的化合物，所述疾病和病症包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白诸如与阿尔茨海默病有关的Aβ蛋白相关的疾病和病症。
82.根据权利要求80或81的混合物，除了根据权利要求1至65任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体之外，还包含选自下列的化合物的至少一种：抗氧化应激的化合物、抗细胞凋亡的化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂诸如哌仑西平和代谢产物、3-氨基-1-丙磺酸(3APS)、1，3-丙二磺酸(1，3PDS)、分泌酶活化剂、β-和γ-分泌酶抑制剂、τ蛋白、神经递质、β折叠破坏剂、消炎分子、或胆碱酯酶抑制剂(ChEI)，诸如他克林、卡巴拉汀、多奈哌齐、和/或加兰他敏和其它药物和营养补充剂，与根据本发明的抗体一起，以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
83.根据权利要求82的混合物，其中化合物是胆碱酯酶抑制剂(ChEI)。
84.根据权利要求82的混合物，其中化合物选自他克林、卡巴拉汀、多奈哌齐、加兰他敏、烟酸、美金刚胺。
85.根据权利要求80至84任一项所述的混合物，其包含治疗有效量的单克隆抗体和/或生物活性物质。
86.产生根据权利要求1至65任一项所述的包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体的方法，所述方法包括在合适的宿主生物体中产生抗超分子抗原构建体的抗体，但特别是单克隆抗体，所述超分子抗原构建体包含与β-淀粉状蛋白肽，特别是β-淀粉状蛋白肽Aβ1-15、Aβ1-16和Aβ1-16 (Δ14)的氨基酸序列相对应的抗原肽，所述抗原肽用疏水部分，例如，诸如棕榈酸，或亲水部分，例如，诸如聚乙二醇(PEG)，或两者的组合进行修饰，其中所述疏水和亲水部分分别通过氨基酸，例如，诸如赖氨酸或任何其它的能够用作连接分子的合适的氨基酸或氨基酸类似物而共价地连接到每一末端；以及分离抗体。
87.根据权利要求1至65任一项所述的单克隆抗体和/或其功能部分和/或根据权利要求76至79任一项所述的药物组合物、或根据权利要求80至85任一项所述的混合物在制备治疗或减轻疾病和病症的效应的药物中的用途，其中所述疾病和病症由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起或与其相关，包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，诸如以下疾病，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，以及以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。
88.应用根据权利要求1至65任一项所述的单克隆抗体和/或其功能部分制备根据权利要求76至79任一项所述的药物组合物、或根据权利要求80至85任一项所述的混合物的方法，用于治疗或减轻由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症的影响，所述疾病和病症包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，诸如以下疾病，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，以及以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。
89.应用根据权利要求1至65任一项所述的单克隆抗体和/或其功能部分或功能等效抗体、根据权利要求76至79任一项所述的药物组合物、或根据权利要求80至85任一项所述的混合物制备用于预防或治疗或减轻由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症的效应的药物的方法，所述疾病和病症包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，诸如以下疾病，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，以及以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。
90.应用根据权利要求1至65任一项所述的单克隆抗体和/或其功能部分或功能等效抗体制备根据权利要求76至79任一项所述的药物组合物的方法，包括以药学可接受的形式制剂所述抗体。
91.根据权利要求90的方法，其中抗体以治疗有效量包含于组合物中。
92.减少患有导致脑中斑块负荷增加的疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，但尤其是人类的脑中斑块负荷的方法，包括给需要该治疗的动物、特别是哺乳动物、更特别是人类施与治疗有效量的根据权利要求1至65任一项所述的单克隆抗体，或根据权利要求76至79任一项所述的组合物，或根据权利要求80至85任一项所述的混合物。
93.根据权利要求92的方法，其中脑中斑块负荷减少了至少20％，特别地至少25％，更特别地至少30％，甚至更特别地30％以上。
94.减少患有导致脑中斑块负荷增加的疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，但尤其是人类的脑中斑块量的方法，包括给需要该治疗的动物、特别是哺乳动物、更特别是人类施与治疗有效量的根据权利要求1至65任一项所述的单克隆抗体，或根据权利要求76至79任一项所述的组合物，或根据权利要求80至85任一项所述的混合物。
95.根据权利要求94的方法，其中脑中的斑块量减少了至少10％，特别地至少15％，更特别地至少20％。
96.降低患有导致脑中可溶解的Aβ浓度增加的疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，但尤其是人类的脑中可溶解的Aβ总量的方法，包括给需要该治疗的动物、特别是哺乳动物、更特别是人类施与治疗有效量的根据权利要求1至65任一项所述的单克隆抗体，或根据权利要求76至79任一项所述的组合物，或根据权利要求80至85任一项所述的混合物。
97.通过施与抗体，但特别是单克隆抗体或包含根据权利要求1至39任一项所述抗体的组合物或混合物给受到疾病影响的动物或人类来预防、治疗或减轻由淀粉状蛋白或淀粉状蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和病症的效应的方法，其中所述疾病和病症包括淀粉样变性，这是一组与淀粉状蛋白斑的形成相关的疾病和病症，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，诸如以下疾病，包括但不限于神经疾病诸如阿尔茨海默病(AD)，包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如，诸如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉状蛋白样蛋白或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化、克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性；所述方法包括给需要该治疗的动物、特别是哺乳动物、更特别是人类施与治疗有效量的根据权利要求1至65任一项所述的单克隆抗体，或根据权利要求76至79任一项所述的组合物，或根据权利要求80至85任一项所述的混合物。
98.保持或增加表现出淀粉状蛋白相关疾病或病症的哺乳动物的认知记忆能力的方法，包括给需要该治疗的动物、特别是哺乳动物、更特别是人类施与治疗有效量的根据权利要求1至65任一项所述的单克隆抗体，或根据权利要求76至79任一项所述的组合物，或根据权利要求80至85任一项所述的混合物。
99.根据权利要求98的方法，其中单克隆抗体或包含单克隆抗体的组合物以治疗有效量施与。
100.杂交瘤细胞系，特征在于其产生根据权利要求1-65任一项所述的单克隆抗体。
101.杂交瘤细胞系，特征在于其产生包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体具有由2005年12月1日以DSM ACC2752保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3产生的抗体的特征性特性。
102.杂交瘤细胞系，特征在于其产生包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体具有由2005年12月1日以DSM ACC2750保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3-C2产生的抗体的特征性特性。
103.杂交瘤细胞系，特征在于其产生包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体具有由2005年12月1日以DSM ACC2751保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3-G2产生的抗体的特征性特性。
104.杂交瘤细胞系，特征在于其产生包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体具有由2005年12月8日以DSM ACC2755保藏的杂交瘤细胞系ET 7E3产生的抗体的特征性特性。
105.杂交瘤细胞系，特征在于其产生包括任何功能等效抗体或其功能部分的单克隆抗体，所述抗体具有由2005年12月8日以DSM ACC2756保藏的杂交瘤细胞系EJ 7H3产生的抗体的特征性特性。
106.杂交瘤细胞系，2005年12月1日以DSM ACC2752保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3。
107.杂交瘤细胞系，2005年12月1日以DSM ACC2750保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3-C2。
108.杂交瘤细胞系，2005年12月1日以DSM ACC2751保藏的杂交瘤细胞系FP 12H3-G2。
109.杂交瘤细胞系，2005年12月8日以DSM ACC2755保藏的杂交瘤细胞系ET 7E3。
110.杂交瘤细胞系，2005年12月8日以DSM ACC2756保藏的杂交瘤细胞系EJ 7H3。
111.在患者中诊断淀粉状蛋白相关疾病或病症的方法，包括检测单克隆抗体或其活性片段对样本中或原位的淀粉状蛋白表位的免疫特异性结合，所述方法包括以下步骤：
a)使怀疑含有淀粉状蛋白抗原的样本或特定身体部分或身体区域与根据本发明和在上文中描述的抗体接触，所述抗体结合淀粉状蛋白表位；
b)允许抗体结合至淀粉状蛋白抗原以形成免疫复合物；
c)检测免疫复合物的形成；以及
d)将免疫复合物的存在或不存在与样本或特定身体部分或区域中淀粉状蛋白抗原的存在或不存在相关联。
112.确定组织中产生淀粉状蛋白的斑块负荷的程度的方法，包括：
(a)获得代表所研究的组织的样本；
(b)用根据权利要求1-65任一项所述的抗体测试所述样本中淀粉状蛋白抗原的存在；
(c)确定结合到抗原的抗体的量；以及
(d)计算组织中的斑块负荷。
113.根据权利要求112的方法，其中确定在步骤c)中的免疫复合物的形成，从而使免疫复合物的存在或不存在与淀粉状蛋白抗原的存在或不存在相关联。
114.在患者中诊断对淀粉状蛋白相关疾病或病症的素质的方法，包括检测单克隆抗体或其活性片段对样本中或原位的淀粉状蛋白表位的免疫特异性结合，其包括以下步骤：
(a)使怀疑含有淀粉状蛋白抗原的样本或特定身体部分或身体区域与根据本发明和在上文中描述的抗体接触，所述抗体结合淀粉状蛋白表位；
(b)允许抗体结合至淀粉状蛋白抗原以形成免疫复合物；
(c)检测免疫复合物的形成；以及
(d)将免疫复合物的存在或不存在与样本或特定身体部分或区域中淀粉状蛋白抗原的存在或不存在相关联，
(e)将所述免疫复合物的量与正常对照值相比较，
其中所述聚集体的量与正常对照值相比的增加表明所述的患者患有或有发展成淀粉状蛋白相关疾病或病症的风险。
115.监测用根据前述任一项权利要求的抗体或疫苗组合物治疗后的患者的微小残留疾病的方法，其中所述方法包括：
(a)使怀疑含有淀粉状蛋白抗原的样本或特定身体部分或身体区域与根据本发明和在上文中描述的抗体接触，所述抗体结合淀粉状蛋白表位；
(b)允许抗体结合至淀粉状蛋白抗原以形成免疫复合物；
(c)检测免疫复合物的形成；以及
(d)将免疫复合物的存在或不存在与样本或特定身体部分或区域中淀粉状蛋白抗原的存在或不存在相关联；
(e)将所述免疫复合物的量与正常对照值比较，
其中所述聚集体的量与正常对照值相比的增加表明所述患者仍然患有微小残留疾病。
116.预测用根据前述任一项权利要求的抗体或疫苗组合物治疗的患者的反应性的方法，包括：
(a)使怀疑含有淀粉状蛋白抗原的样本或特定身体部分或身体区域与根据本发明和在上文中描述的抗体接触，所述抗体结合淀粉状蛋白表位；
(b)允许抗体结合至淀粉状蛋白抗原以形成免疫复合物；
(c)检测免疫复合物的形成；以及
(d)将免疫复合物的存在或不存在与样本或特定身体部分或区域中淀粉状蛋白抗原的存在或不存在相关联；
(e)比较治疗开始前和治疗开始后的所述免疫复合物的量，
其中所述聚集体的量的减少表明所述患者具有对治疗产生反应的高潜力。
117.用于检测和诊断淀粉状蛋白相关疾病和病症的测试试剂盒，包含根据权利要求1-65任一项所述的抗体。
118.根据权利要求114的测试试剂盒，包含容纳一种或多种根据本发明的抗体的容器，以及使用抗体用于结合淀粉状蛋白抗原以形成免疫复合物，以及检测免疫复合物的形成，从而使免疫复合物的存在或不存在与淀粉状蛋白抗原存在或不存在相关联的说明书。
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