CN101291689B

CN101291689B - 用于大规模接种***的活抗原的疫苗稳定化制剂

Info

Publication number: CN101291689B
Application number: CN2005800518503A
Authority: CN
Inventors: 若泽·路易斯·努诺·阿雅拉
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2005-09-01
Filing date: 2005-09-01
Publication date: 2012-12-05
Anticipated expiration: 2025-09-01
Also published as: WO2007027076A1; US20080268000A1; BRPI0520505A2; CN101291689A; BRPI0520505B1

Abstract

本发明涉及一种用于在动物蛋白质生产过程中使用的大规模给药和接种***的活抗原的疫苗稳定化制剂。本发明包括一种形式为能够溶于水中的粉末或液体的产品，它是由有机和无机来源的化合物的均匀混合物形成的。本发明能够用于在接种时稳定水的关键理化参数(pH、硬度和消毒剂的存在)，从而减少接种时由环境暴露所造成的疫苗的微生物和病毒效价损失。本发明的制剂预期用于饮用水给药和接种***以及喷雾给药和接种***。

Description

用于大规模接种***的活抗原的疫苗稳定化制剂

背景技术

本文所公开的发明是一种活疫苗稳定化制剂，其可用于提高疫苗在溶液中的存活时间，从而实现动物的合格免疫。本文也公开了制备与应用方法。

接种，作为一项预防措施，是为了在现代生产体系中实现动物健康而进行的一系列活动中的一部分。它与生物安全体系、充足的饮食一起，使得生产者在整个周期中能够获得生产体系的正确性能，从而获得较高的经济利益。动物控制野外挑战的能力较低会引起传染病爆发，导致显著的经济损失，这一发现证明了适当免疫接种计划的重要性。

在确定接种计划时，有几个因素必须要分析，其中包括所用疫苗的种类、株系、给药途径、所用技术及追踪方法。

在技术方面，使用的施用途径和技术非常重要，因为它们的实施直接决定着可能的操作成败。

疫苗本身并不是较高操作费用的一个因素，然而，它是一项需要更多关注、保障与管理的活动。与这项活动相关的人力成本很高，因为存在错误的可能性、偏差或较低的一致性。

对于活抗原疫苗，为了成功接种而必须给予的处理与保护尤其关键。当前的密集生产体系需要大规模的接种和药物处理技术，这使得生产者能够在短时间内使用少量人力来免疫大量家禽，从而降低相关费用、扩大收益。

这些体系也必须为生产者提供灵活性与安全性，以面对由于新生产体系中家禽密度增加导致传染性疾病增加而引起的新的健康挑战。

考虑到家禽养殖开发的规模，由于病原微生物与不利理化条件的存在，生产农场中所使用的水质难以保证。根据所用供水***的地理位置及其存储类型的不同，水具有不同的硬度(无机钙和镁)状态，远离中性的pH范围，并且含有来自用于去除水中病原体的处理***的卤素、氯化物和碘化物。

这些条件对于动物的健康是不利的，对于接种和给药程序则更为不利。接种和给药(medication)是需要非常特定的水质条件的两个程序：中性pH、不含氯和碘、低硬度，因而在正常的野外条件下很少能达到最佳结果。

然而，为使此项操作能提供最大可能的保护，一些因素必须注意，其中最重要的是所喷水的质量。使用不具备接种所需最低质量特征的水，就会不可避免地降低所用疫苗的有效性，从而使所接种的动物种群的健康受到威胁。

实现接种和给药程序的最大有效性所需要的最低质量条件涉及三个主要参数：pH、水的硬度和作为消毒剂的卤素的存在。

pH是接种和给药程序的效率的一个决定因素。对于前者，病毒和细菌对高于中性酸度或碱度范围引起的变性或失活高度耐受。接种或给药的理想pH是pH 7。

水的硬度是指钙和镁离子的存在，它们主要来自于地下矿床。这些离子对于预防中所使用的病毒、细菌及活性成分具有螯合或凝集作用。理想状态是当接种或给药时水中不含或含有最低可能浓度的这些离子。

由于水中病原体的存在，需要用抗微生物剂来处理，其中最广泛使用的是氯和碘。然而，由于它们对疫苗具有同样的效果而使其失活，从而干扰接种过程。对于此项操作，水中必须完全不含卤素。

在接种时，家禽消化道和呼吸道中存在的介质条件对病毒和细菌的生存能力产生不利影响。因此，在抗原停留于它们必须在其上生长的特定组织上之前，使用一些能够阻止抗原破坏的材料。

每个活的微生物，无论病毒还是细菌，都有空间结构或三级结构，这种结构可被溶液的渗透压所改变，而且当其改变时，能够导致细菌外壁破坏或大部分病毒变性。因此，为了保持活抗原稳定，理想的是接种溶液具有最小的等电电势。

几年前在畜牧业中普遍和广泛使用的做法是使用脱脂牛奶作为活抗原疫苗的稳定剂。由于牛奶具有弱碱性特征，因而牛奶具有pH中和的性质。

由于在许多情况下，牛奶本身含有会破坏疫苗的碘化物残余物，牛奶作为稳定剂使用不是很有利，因而必须考虑只使用经过检定不含碘化物的牛奶或可商购的稳定的制剂。而且，牛奶稳定pH及水中卤素存在的能力非常有限，几乎为零。

其钙含量导致了非常严重的问题，因为钙含量实质上提高了水的硬度水平，因而既能够影响抗原的稳定性，又能造成钙在供水体系管道或喷嘴上的沉积。它也是一种培养基，导致在水分配体系或喷射体系内部形成生物斑块膜，这对于动物健康是非常大的威胁。

因而，需要一种通过解决上述所有三个问题而为溶液中的抗原提供必要稳定性的产品，它具有高稳定效率，直接的作用，而且同时不影响接种所用的机械***。

发明内容

本发明的应用领域为活抗原疫苗的饮用水接种和给药***以及喷雾接种和给药***。疫苗分配介质通常为水，但并不限于水，所以疫苗能够应用其他分配介质，只要它是一种液体介质。

用于大规模接种***的活抗原的疫苗稳定化制剂包含一种多成分的混合物，其配制为给用于动物生产过程的动物接种中所用的活抗原(活病毒或细菌疫苗)提供延长的稳定性。

本发明包括一种产品，它可以是与水混合用于农畜接种的液体或固体的形式。

pH稳定剂用于将疫苗溶液的pH稳定在6.5～7.5范围内，在此范围内大部分细菌和病毒能够存活。pH稳定剂可以是磷酸盐、琥珀酸盐、碳酸氢盐和乳酸盐。优选使用磷酸钾，因为其具有低刺激性并且认为其可安全地用于动物和人类。

水硬度螯合剂用于去除能够导致疫苗中的病毒和细菌失活的溶于水中的矿物质。螯合剂包括乙二胺四乙酸盐。其中，优选使用乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA二钠)，因为认为其可安全使用，不会明显改变溶液的pH，且不会刺激活组织。

还原剂用于中和当地(实施地)水中存在的消毒剂。这些消毒剂可以基于氯、碘、过氧化物、溴、氟、臭氧或高锰酸盐。所有这些都可认为是氧化剂，可用(但不限于)硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠(sodiummetabisulfite)、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、二氧化硫、亚硫酸氢铵及硫代硫酸铵中和。优选使用硫代硫酸钠，因其具有较高的中和能力，且被认为是安全、无腐蚀性的。

必要时，可使用水溶性盐来提供保持疫苗中存在的病毒三级结构稳定和细菌外壁完整所需的渗透压。其中，包括盐酸盐、氢碘酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、碘酸盐、氯酸盐、氢溴酸盐、溴酸盐、氢氟酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、氢硫酸盐、硫酸盐和亚硫酸盐。其中，优选使用氯化钠，因其无毒、无刺激性且被认为可安全使用。

必要时，可使用碳水化合物来保护病毒或细菌结构免受家禽消化道不利条件的影响，其中，包括葡萄糖、右旋糖、乳糖、蔗糖、甘露糖和果糖。优选乳糖，因为其由于粉末粒径而具有高溶解性，且与家禽的正常代谢没有不利的相互作用。

必要时，可使用食品级着色剂来为接种员提供一种可视的确认手段，其可使稳定剂的使用者知道何时已将保护剂加入水中，并最终知道动物已经接受了含有疫苗的水。其中，包括颜料和蓝、红、绿、紫、橙等颜料制剂。优选使用蓝色颜料，因其与活组织的颜色具有对比效果。

必要时，可使用食品级抗湿剂来防止混合物由于其某些盐的吸湿性而湿润。这些抗吸湿剂不会改变产品的理化功能，只是减少混合物变湿。其实例包括二氧化硅、硬脂酸钙、硬脂酸镁、磷酸钙、磷酸镁、氧化镁、硅酸钙、硅酸镁、硅铝酸钠、硅酸铝酸钙等。其中，优选使用硬脂酸镁和二氧化硅，因其无毒、无刺激性且被认为可安全使用。

所述制剂按以下方式组成：乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐，浓度范围为0.03％～34.19％，最佳浓度为3.75％；磷酸二氢钾，浓度范围为0.03％～34.48％，最佳浓度为5％；磷酸氢二钾，浓度范围为0.03％～56.07％，最佳浓度为41.25％；硫代硫酸钠，浓度范围为0.03％～33.73％，最佳浓度为1.75％；氯化钠，浓度范围为0.03％～35.91％，最佳浓度为10.75％；乳糖，浓度范围为0.03％～51.02％，最佳浓度为28％；二氧化硅，浓度范围为0.03％～5％，最佳浓度为1％；硬脂酸镁，浓度范围为0.03％～5％，最佳浓度为1％；亮蓝着色剂，浓度范围为0.03％～44.25％，最佳浓度为7.50％。

生产方法为在最大相对湿度30％、温度15～35℃下，以如下顺序加入原料，每次加入后，持续搅拌下逐步混合这些原料15分钟：磷酸氢二钾、乳糖、磷酸二氢钾、乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐、硫代硫酸钠、氯化钠、硬脂酸镁、二氧化硅和亮蓝着色剂。

当将疫苗与在温度15～35℃下制备的浓度为2.85～5.93克/升溶液的稳定化溶液相混合时，病毒或药物没有暴露于不利条件下，因此其存活能力长期保持。当动物饮用含有疫苗的溶液时，乳糖在病毒外表面上作为保护剂起作用，从而避免其在转运直到到达下消化道***的过程中受到破坏，疫苗在下消化道***中通过肠膜进入血流，开始免疫原性反应。

使用方法限定如下：根据组成不同，在不断搅拌下，缓慢向制备的每升疫苗溶液中加入2.85～5.93克/升的活疫苗稳定剂。一旦溶解，就将所需量加入到疫苗中并应用于待接种的动物。

实施例1

粉末混合物包含0.03％EDTA、5.19％磷酸二氢钾、42.85％磷酸氢二钾、1.82％硫代硫酸钠、11.17％氯化钠、31.16％乳糖、1.04％二氧化硅、1.04％硬脂酸镁和7.79％着色剂。按每升水3.85克该混合物的比例计量制备。

进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度及5ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A)的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。

混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数据：

样品A：水硬度为55ppm总硬度、pH 7.1、游离氯滴定值为0。观察到疫苗效价保持在浓度为起始应用浓度的94％，因而只有6％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为115ppm、pH 7.1、游离氯为4ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的30％，因而有70％的疫苗活性丧失。

实施例2

粉末混合物包含3.75％EDTA、5.00％磷酸二氢钾、41.25％磷酸氢二钾、1.75％硫代硫酸钠、10.75％氯化钠、28％乳糖、1％硬脂酸镁、1％二氧化硅和7.50％着色剂。按每升水4克该混合物的比例计量制备。

进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度及5ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入具有1000剂量效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A)的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。

样品A：水硬度为0ppm总硬度、pH 7.0、游离氯滴定值为0。观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的97％，因而只有3％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为105ppm、pH 5.9、游离氯为5ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的25％，因而有75％的疫苗活性丧失。

实施例3

粉末混合物包含34.19％EDTA、3.42％磷酸二氢钾、28.21％磷酸氢二钾、1.20％硫代硫酸钠、7.35％氯化钠、19.15％乳糖、0.68％硬脂酸镁、0.68％二氧化硅和5.13％着色剂。按每升水5.85克该混合物的比例计量制备。

样品B：测得硬度为110ppm、pH 6.0、游离氯为4ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的30％，因而有70％的疫苗活性丧失。

实施例4

粉末混合物包含3.95％EDTA、0.03％磷酸二氢钾、43.41％磷酸氢二钾、1.84％硫代硫酸钠、11.31％氯化钠、29.47％乳糖、1.05％硬脂酸镁、1.05％二氧化硅和7.89％着色剂。按每升水3.8克该混合物的比例计量制备。

样品A：水硬度为0ppm总硬度、pH 7.6、游离氯滴定值为0。观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的93％，因而只有7％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为102ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的35％，因而有65％的疫苗活性丧失。

实施例6

粉末混合物包含2.59％EDTA、34.48％磷酸二氢钾、28.45％磷酸氢二钾、1.21％硫代硫酸钠、7.41％氯化钠、19.31％乳糖、0.69％硬脂酸镁、0.69％二氧化硅和5.17％着色剂。按每升水5.8克该混合物的比例计量制备。

样品A：水硬度为0ppm总硬度、pH 6.2、游离氯滴定值为0。观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的83％，因而只有17％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为104ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的33％，因而有67％的疫苗活性丧失。

实施例7

粉末混合物包含6.32％EDTA、8.51％磷酸二氢钾、0.03％磷酸氢二钾、2.98％硫代硫酸钠、18.29％氯化钠、47.64％乳糖、1.70％硬脂酸镁、1.70％二氧化硅和12.76％着色剂。按每升水2.35克该混合物的比例计量制备。

样品A：水硬度为2ppm总硬度、pH 5.8、游离氯滴定值为0。观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的73％，因而只有27％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为102ppm、pH 5.9、游离氯为4ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的29％，因而有71％的疫苗活性丧失。

实施例8

粉末混合物包含2.80％EDTA、3.74％磷酸二氢钾、56.07％磷酸氢二钾、1.31％硫代硫酸钠、8.04％氯化钠、20.93％乳糖、0.75％硬脂酸镁、0.75％二氧化硅和5.61％着色剂。按每升水5.35克该混合物的比例计量制备。

样品A：水硬度为3ppm总硬度、pH 7.6、游离氯滴定值为0。观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的91％，因而只有9％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为108ppm、pH 6.1、游离氯为5ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的36％，因而有64％的疫苗活性丧失。

实施例9

粉末混合物包含3.82％EDTA、5.09％磷酸二氢钾、41.97％磷酸氢二钾、0.03％硫代硫酸钠、10.94％氯化钠、28.49％乳糖、1.02％硬脂酸镁、1.02％二氧化硅和7.63％着色剂。按每升水3.93克该混合物的比例计量制备。

样品A：水硬度为4ppm总硬度、pH 7.1、游离氯滴定值为2ppm。观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的72％，因而只有28％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为100ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的35％，因而有65％的疫苗活性丧失。

实施例10

粉末混合物包含2.53％EDTA、3.37％磷酸二氢钾、27.82％磷酸氢二钾、33.73％硫代硫酸钠、7.25％氯化钠、18.89％乳糖、0.67％硬脂酸镁、0.67％二氧化硅和5.06％着色剂。按每升水5.93克该混合物的比例计量制备。

进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度及5ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A)的小瓶中，还包括使用不合产品的空白溶液的重复样品(样品B)。

样品A：水硬度为1ppm总硬度、pH 7.0、游离氯滴定值为0。观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的96％，因而只有4％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为107ppm、pH 6.1、游离氯为5ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的32％，因而有68％的疫苗活性丧失。

实施例11

粉末混合物包含4.20％EDTA、5.60％磷酸二氢钾、46.21％磷酸氢二钾、1.96％硫代硫酸钠、0.03％氯化钠、31.36％乳糖、1.12％硬脂酸镁、1.12％二氧化硅和8.40％着色剂。按每升水3.57克该混合物的比例计量制备。

样品A：水硬度为0ppm总硬度、pH 7.2、游离氯滴定值为0。观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的96％，因而只有4％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为103ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的28％，因而有72％的疫苗活性丧失。

实施例12

粉末混合物包含2.69％EDTA、3.59％磷酸二氢钾、29.62％磷酸氢二钾、1.26％硫代硫酸钠、35.91％氯化钠、20.11％乳糖、0.72％硬脂酸镁、0.72％二氧化硅和5.39％着色剂。按每升水5.57克该混合物的比例计量制备。

样品A：水硬度为3ppm总硬度、pH 6.8、游离氯滴定值为0。观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的91％，因而只有9％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为100ppm、H 6.0、游离氯为5ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的31％，因而有69％的疫苗活性丧失。

实施例13

粉末混合物包含5.21％EDTA、6.94％磷酸二氢钾、57.27％磷酸氢二钾、2.43％硫代硫酸钠、14.93％氯化钠、0.03％乳糖、1.39％硬脂酸镁、1.39％二氧化硅和10.41％着色剂。按每升水2.88克该混合物的比例计量制备。

样品A：水硬度为4ppm总硬度、pH 7.0、游离氯滴定值为0。观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的93％，因而只有7％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为100ppm、pH 5.9、游离氯为4ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的36％，因而有64％的疫苗活性丧失。

实施例14

粉末混合物包含2.55％EDTA、3.40％磷酸二氢钾、28.06％磷酸氢二钾、1.19％硫代硫酸钠、7.31％氯化钠、51.02％乳糖、0.68％硬脂酸镁、0.68％二氧化硅和5.1％着色剂。按每升水6.88克该混合物的比例计量制备。

样品A：水硬度为21ppm总硬度、pH 7.3、游离氯滴定值为0。观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的95％，因而只有5％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为107ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的31％，因而有69％的疫苗活性丧失。

实施例15

粉末混合物包含3.97％EDTA、5.29％磷酸二氢钾、43.64％磷酸氢二钾、1.85％硫代硫酸钠、11.37％氯化钠、31.74％乳糖、0.60％硬脂酸镁、0.60％二氧化硅和0.03％着色剂。按每升水3.78克该混合物的比例计量制备。

进行实验室规模试验，其中将该产品加入到pH 6、100ppm总硬度及5ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A)的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。

样品A：水硬度为2ppm总硬度、pH 7.0、游离氯滴定值为0。观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的97％，因而只有3％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为100ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的25％，因而有75％的疫苗活性丧失。

实施例16

粉末混合物包含2.21％EDTA、2.95％磷酸二氢钾、24.34％磷酸氢二钾、1.03％硫代硫酸钠、6.34％氯化钠、17.70％乳糖、0.59％硬脂酸镁、0.59％二氧化硅和44.25％着色剂。按每升水6.78克该混合物的比例计量制备。

进行实验室规模试验，其中将该产品加入到pH 6、100ppm总硬度及5ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A)的小瓶中，还包括使用不含该产品的空白溶液的重复样品(样品B)。

样品A：水硬度为35ppm总硬度、pH 6.9、游离氯滴定值为0。观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的92％，因而只有8％的疫苗活性丧失。

样品B：测得硬度为109ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的33％，因而有67％的疫苗活性丧失。

已经描述了本发明，认为本发明在应用领域具有新颖性，因而请求专利保护权利要求书的内容。

Claims

1.用于大规模接种***的活抗原的疫苗稳定化制剂，其特征在于它包含以重量百分比计，浓度范围为0.03％～34.19％的乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐，浓度范围为0.03％～34.48％的磷酸二氢钾，浓度范围为0.03％～56.07％的磷酸氢二钾，浓度范围为0.03％～33.73％的硫代硫酸钠，浓度范围为0.03％～35.91％的氯化钠，浓度范围为0.03％～51.02％的乳糖，浓度范围为0.03％～5％的二氧化硅，浓度范围为0.03％～5％的硬脂酸镁，和浓度范围为0.03％～44.25％的亮蓝着色剂。

2.如权利要求1所述的用于大规模接种***的活抗原的疫苗稳定化制剂，其特征在于下列物质的最佳浓度分别为：以重量百分比计，所述乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐为3.75％，所述磷酸二氢钾为5％，所述磷酸氢二钾为41.25％，所述硫代硫酸钠为1.75％，所述氯化钠为10.75％，所述乳糖为28％，所述二氧化硅为1％，所述硬脂酸镁为1％，所述亮蓝着色剂为7.50％。

3.用于制备权利要求1或2的用于大规模接种***的活抗原的疫苗稳定化制剂的方法，其特征在于该方法包括按以下顺序进行逐步混合：

a)磷酸氢二钾，

b)乳糖，

c)磷酸二氢钾，

d)乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐，

e)硫代硫酸钠，

f)氯化钠，

g)硬脂酸镁，

h)二氧化硅，

i)亮蓝着色剂；

其中所述逐步混合在最大相对湿度30％和温度15～35℃下，每次加入后持续搅拌15分钟来进行。

4.权利要求1或2的稳定化制剂用于稳定大规模接种***的活抗原疫苗的用途，其中所述稳定化制剂以2.85～5.93克/升的量加入疫苗溶液中。