CN101208697A - 用于代谢物谱的定量分析的装置 - Google Patents

用于代谢物谱的定量分析的装置 Download PDF

Info

Publication number
CN101208697A
CN101208697A CNA2006800229423A CN200680022942A CN101208697A CN 101208697 A CN101208697 A CN 101208697A CN A2006800229423 A CNA2006800229423 A CN A2006800229423A CN 200680022942 A CN200680022942 A CN 200680022942A CN 101208697 A CN101208697 A CN 101208697A
Authority
CN
China
Prior art keywords
insert
medicine
sample
biological sample
metabolite profile
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA2006800229423A
Other languages
English (en)
Other versions
CN100594501C (zh
Inventor
S·L·拉姆赛
W·古根比希勒
K·M·魏因贝格尔
A·格拉贝
W·M·施托格尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Biocrates Life Sciences AG
Original Assignee
Biocrates Life Sciences AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biocrates Life Sciences AG filed Critical Biocrates Life Sciences AG
Publication of CN101208697A publication Critical patent/CN101208697A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100594501C publication Critical patent/CN100594501C/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
    • G01N33/5038—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects involving detection of metabolites per se
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6848—Methods of protein analysis involving mass spectrometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N35/00584—Control arrangements for automatic analysers
    • G01N35/00594—Quality control, including calibration or testing of components of the analyser
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
    • G16B50/00—ICT programming tools or database systems specially adapted for bioinformatics
    • G16B50/30—Data warehousing; Computing architectures
    • H—ELECTRICITY
    • H01—ELECTRIC ELEMENTS
    • H01J—ELECTRIC DISCHARGE TUBES OR DISCHARGE LAMPS
    • H01J49/00—Particle spectrometers or separator tubes
    • H01J49/0027—Methods for using particle spectrometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2560/00—Chemical aspects of mass spectrometric analysis of biological material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2570/00—Omics, e.g. proteomics, glycomics or lipidomics; Methods of analysis focusing on the entire complement of classes of biological molecules or subsets thereof, i.e. focusing on proteomes, glycomes or lipidomes
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
    • G16B50/00—ICT programming tools or database systems specially adapted for bioinformatics

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Theoretical Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Evolutionary Biology (AREA)
  • Databases & Information Systems (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Bioethics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Quality & Reliability (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Sampling And Sample Adjustment (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Analysing Materials By The Use Of Radiation (AREA)

Abstract

本方面涉及一种装置，特别涉及用于定量分析生物样品中的药物和/或代谢物谱的样品制备装置。而且，本发明涉及用于此装置的浸渗至少一种内标的***件，涉及内标本身，还涉及包含该装置的试剂盒。进一步，本发明还涉及含有此装置的设备，并涉及使用该装置来定量分析生物样品中药物和/或代谢物谱的方法。

Description

用于代谢物谱的定量分析的装置
技术领域
本发明涉及一种装置，特别是用于定量分析生物样品中的药物和/或代谢物谱的样品制备装置。而且，本发明涉及用于此种装置的浸有至少一种内标的***件、涉及内标本身、和包含本装置的试剂盒。另外，本发明还涉及含有此装置的设备，且涉及使用本装置定量分析生物样品中的药物和/或代谢物谱的方法。
背景技术
代谢组学通常定义为对人或动物体内参与特定代谢过程所必需的物质或物质组的分析。也称为代谢组分析。代谢组学是研究反映代谢变化的独特的化学指纹图谱的进化学科，所述代谢变化与疾病的发作和发展相关。代谢物谱是代谢组学内的一个领域，检测人细胞、组织或器官中含有的参与初级和中间代谢的小分子或代谢物。来自代谢物分析的生物化学信息揭示了与生理学和病理生理学过程相关的功能终点，所述功能终点受到遗传诱因和环境因素例如营养、锻炼或药物疗法的影响(Harrigan，G.G.&Goodacre，R.(2003)Metabolic profiling：Its role in biomarker discoveryand gene function analysis.Kluwer Academic Publishers，Boston/Dordrecht/London；Schmidt，C.(2004)，Journal of the NationalCancer Institute，96，732-734；Raudys，S.(2001)Statistical and neuralclassifiers.Springer-Verlag，London；Daviss，B.(2005)The Scientist，19，25-28)。
代谢物谱与数据利用方法相结合能够革新临床诊断和药物开发。特别是，大的制药公司正处于下述持续的压力下：发现新靶标和新的更有效和更安全的化合物，及加快生物标记和药物发现，以及通常更低的药物开发成本。因此，它们日益依赖于生物技术公司来填补此创新差距和将来的途径。在此上下文中，创新的生物分析和数据利用技术将通过减少上市的时间和药物消耗速率在节约成本方面发挥基础作用。
最近，由于在高通量技术方面的显著进步，目前可获得更广泛的一套人代谢物组——从而更大量未经调查的生物信息来源(Beecher，C.(2003).Harrigan，G.G.，Goodacre，R.(Ed).Metabolic profiling：Its role inbiomarker discovery and gene function analysis(pp.311-319).KluwerAcademic Publishers，Boston/Dordrecht/Londong；Dunn，，W.B.，Bailey，N.J.& Johnson，H.E.(2005)Analyst，130，606-625)。代谢物谱的统计学比较可揭示多变量模式，其能够通过在任何疾病症状显现之前特异捕获即将来临的疾病的潜在预警信号来创新卫生保健***。与晚期疾病检测和昂贵的治疗干预相反，早期疾病筛选和预防可能是将来提供卫生保健覆盖的首要解决办法。通过定义，这些所称作的生物标记是“以流行病学、治疗学、病理生理学或其它科学证据为基础，客观测定的正常生物过程、病理过程或对治疗干预的药理学反应的指示物，并可能代替临床终点(预示益处或损害)。”(Biomarkers Definitions Working Group.(2001)ClinicalPharmacology and Therapeutics，69，89-95)。发现新的生物标记的重要性来源于它们大范围的潜在应用和对制药工业动力学和当前卫生保健部分原则的基础影响。药物发现中生物标记的成功实现可减少药物开发的时间和成本，而分子诊断学的应用将提高病人在临床背景中的依从性并减少除晚期疾病检测外来错误诊断引起的不必要费用(Stoughton，R.B.& Friend，S.H.(2005)Nature Reviews.Drug Discovery，4，345-350；Morris，M.，&Watkins，S.M.(2005).Current Opinion in Chemical Biology.，9，407-412；McCandless，S.E.(2004).Primary Care，31，583-604)。
定性和定量代谢物谱技术包含一系列高级分析和数据加工工具，其目的是利用从比较生物***的小分子成分所获得的潜在标志物。例如，串连质谱法(MS)可从微升量的生物样品例如微量的全血、血清、血浆、尿或其它体液中以高精确度和灵敏度同时检测数百种代谢物(Roschinger，W.，Olgemoller，B.，Fingerhut，R.，Liebl，B.& Roscher，A.A.(2003).EuropeanJournal of Pediatrics，162(Suppl 1)，S67-76；Strauss，A.W.(2004).J ClinInvest 2004；113：354-356；Kaltashov，LA.& Eyles，S.J.(2005)Massspectrometry in biophysics：Conformation and dynamics of biomolecules.Wiley)。通过参考多种合适的内标可完成定量。
例如，WO 03/005628描述了用于产生、观察、解释和分析代谢物的定量数据库的方法。另外，US 2002/0009740描述了利用代谢组学进行药物发现、疾病治疗和诊断的方法。US 6,455,321描述了用于解释用于临床诊断的串连质谱法数据的方法。US 6,258,605描述了用于从血液样品中筛选新生人口的酰基肉毒碱和氨基酸的分析方法。US 6,627,444描述了用于帮助校准现场仪器的采样装置。
而且，US 2006/0057554描述了样品收集装置，其包含承载用于液体样品的惰性吸收基质的支持体，其中基质优选地包含预先校准的挑选的无机分析物作为内标。而且，US 2003/0199102公开了包含多种细胞的测试盘，其中细胞含有经过试验的内标。该测试盘用于对生物液体进行大量测试。
为了处理所要评估的生物样品，现有技术中已知有更多的样品装置。例如Tanaka等人，Clinical Chemistry 47：10，1829-1835(2001)描述了低溶血和高一致性产量的血清成分的微量血液取样装置。
然而，已知的样品装置显示出几个缺点。特别是，US 6,627,444中所述的装置是设计用于仅通过加热来释放校准化合物的。它也仅设计用于校正仪器。
如US 2006/0057554中所公开的装置的其它装置，不能使用预先包埋于特别设计的装置中的标记有稳定同位素的同样的有机化合物用于提取和衍生。
考虑到如上所引用的现有技术的问题，本发明的目的是提供一种对生物样品中药物谱或代谢物谱的改良的定量分析，即对主要内源的但不排除外源化合物如药物和其代谢物及来自多种生物样品的代谢物浓度的改良的定量分析，该分析是非常有效和可靠的。另外，一个目的是提供一种如上所述的相对无盐的改良分析，这是质谱法分析所需的。特别地，本发明的目的是提供样品制备装置，其可用于生物样品中的药物和/或代谢物谱的定量分析。而且，本发明的另一目的是提供用于此种装置的***件，包含此装置的试剂盒以及含有此装置的设备。
发明概述
根据包含下列方面的本发明，本发明潜在的问题已令人惊奇地得以解决。
在本发明的第一方面中，提供了用于适合对生物样品中的药物谱和/或代谢物谱进行定量分析的装置的***件，其包含(a)支持体，其浸渗(b)至少一种内标。
在本发明的第二方面中，提供了用于定量分析生物样品中的药物和/或代谢物谱的装置，其包含(a)一个或多个孔或小瓶，和(b)根据本发明第一方面的***件。
在本发明的第三方面中，提供了用于定量分析生物样品中的药物和/或代谢物谱的内标，其被封装并适于根据第一方面来使用。
在本发明的第四方面中，提供了用于定量分析生物样品中的药物和/或代谢物谱的试剂盒，其包含根据本发明第二方面的装置。
在本发明的第五方面中，提供了用于定量分析生物样品中的药物和/或代谢物谱的设备，其包含(a)用于制备所要筛选的药物和/或代谢物的处理单元，该单元包含(a1)自动液体处理***，和(a2)至少一个根据本发明第二方面的装置，其用于样品中存在的药物和/或代谢物的衍生和接下来衍生物的提取；(b)质谱仪，其用于定量靶向的基于质谱法的分析，和(c)用于储存分析结果的数据库。
在本发明的第六方面中，提供了用于定量分析生物样品中的药物和/或代谢物谱的方法，其使用本发明的***件和/或装置和/或内标和/或试剂盒和/或设备。
附图描述
图1描述了根据本发明的单个装置的横断面视图，其含有孔或小瓶及其单个组件的组装。参考编号(1)显示了孔/小瓶。参考编号(2)显示了根据本发明的***件，其包含固定的固定相的玻璃、纤维素或其它合适的材料(即多孔支持体)，该***件含有任选(微)囊化的内标；参考编号(3)显示了用于在孔或小瓶中支撑多孔支持体的固位体，其对于衍生物和溶剂是化学上惰性的；参考编码(4)显示了滤器；参考编码(5)显示了出口，其在离心力或重力或真空的压力下打开。
图2描述了利用离子串联质谱法在阴离子模式下对苯硫脲氨基酸衍生物(PTU)进行的135的中性丢失扫描，其显示来自红细胞样品的氨基酸及其相应的利用实施例2中所述的多重装置制备的稳定同位素内标。
图3A描述了在阳离子模式下的母离子扫描184(A)，显示了多重装置从实施例2的红细胞样品中提取磷脂的能力。例如鞘磷脂和卵磷脂在m/z范围700-840中、溶血卵磷脂在m/z范围400-650中可观察到。
图3B描述了实施例2的阳离子模式下的MRM扫描(多反应监测)。
图4描述了如何利用LCMS对免疫疗法药物西罗莫司、依维莫司、环孢菌素A、他克莫司，及来自质量对照血液样品的内标子囊霉素和环孢菌素D进行分析，从而产生定量数据。在含有已知浓度数量的五种质量对照样品中，将已知浓度的内标环孢菌素D和子囊霉素的积分的峰下方面积用于与免疫抑制剂的峰下方面积进行比较。这提供了对所有四种药物精确的测定。
图5描述了对从带有纤维素***件的多重装置获得的西罗莫司的校正的校正曲线(实施例3)。
图6描述了对从带有纤维素***件的多重装置中获得的依维莫司的校正的校正曲线(实施例3)。
图7描述了对从带有纤维素***件的多重装置中获得的环孢菌素A的校正的校正曲线(实施例3)。
图8描述了对从带有纤维素***件的多重装置中获得的他克莫司的校正的校正曲线(实施例3)。
发明详述
本发明将通过参考其特别优选的实施方案在下文中更详细地进行描述。
本发明主要涉及在小瓶或孔中含有预先测定的内标(通常是参考化合物)的简单装置，可向小瓶或孔中加入所要测定的生物样品进行进一步处理并通过例如质谱法进行最终分析。该装置包含可为多孔的并含有已知摩尔量的一种或多种内标的***件。另外，这些内标也可为封装的/包埋在保护基质中以延长保存期限。保护基质包含但不限于，非天然存在的卵磷脂、聚乙二醇聚合物或粘性的甘油或山梨醇溶液。该装置可用于分析生物样品中的代谢物谱和/或分析药物谱(即治疗药物监测，TDM)。因此，应该理解为，即使本发明将在下面对代谢物谱进行描述，但其不限于此。完全相反，同样的考虑也适用于对药物谱的分析。
接下来将对根据本发明的装置的组成成分以及装置的使用进行解释。
根据本发明的装置含有(A)一个或多个孔/小瓶、和(B)至少一种***件。所述***件包含(a)支持体，其浸渗(b)至少一种内标。图1中***件如参考编号(2)所示。
***件
本发明中所用的术语“***件”应当理解为多孔支持体，其含有带任选的化学保护剂的内标。***件可具有任何几何形式，只要***件适合放入装置的孔或小瓶中。在优选的实施方案中，通过利用固位体将***件安放在装置的孔或小瓶内。所述固位体在图1中指示为参考编号(3)。在特别优选的实施方案中，固位体(3)允许将***件安放于孔内，在***件和孔之间无任何直接接触。因此，通过利用固位体将***件定位于孔底上方，优选地在2至10mm的距离内，更优选地3至5mm的距离内。换句话说，在优选的实施方案中，在孔底和***件和/或孔壁和***件之间有所称作的“间隙”或“距离”。作为优选实施方案中的固位体，任何固位体都是合适的，只要其允许孔底和***件之间间隙的形成。此种安放允许使样品沉淀在支持体的最大表面积上。此设计进一步保证了***件周围的气流或其它干燥气体可完全到达***件，以便能够在应用样品后快速干燥。此设计原理还保证了来自所有边上的溶剂流完全达到***件，使样品的代谢物或药物提取具有最少的蛋白质或盐污染物。因此，支持体的孔允许在支持体本身的内部进行反应(衍生作用)，使溶剂的使用最小化，且随后随多余衍生物的蒸发而除去，且溶剂通过最大表面积提供给以样品周围的循环干燥气体(空气或氮气)。增加的表面积和整个支持体周围的溶剂流动性还保证了利用合适溶剂的高提取效率。换句话说，上述间隙允许***件在孔内几乎自由的安放和流过孔的液体的增强的循环。
而且，根据本发明的优选的实施方案，该装置可包含一个以上堆叠安放的***件，其中各***件优选地以具有上述彼此之间的间隙来安放，以便允许液体循环。
支持体
本发明中所使用的支持体可为任何支持体，优选地具有至少中等程度、优选地高等程度的孔隙率。此类支持体在现有技术中原则上是已知的，并也可从商业上获得。
将介质(即支持体)的孔隙率“”定义为非固体体积与材料总体积的比例，并通过比例：＝Vp/Vm来定义，其中Vp是非固体体积(孔和液体)，Vm是材料的总体积，包括固体和非固体部分。
因此，孔隙率是0至1之间的值，通常在对于固体花岗岩而言小于0.01至对于泥煤和粘土而言大于0.5的范围之间，尽管其也可通过乘以分数100％来以百分数的形式表示。本发明的多孔支持体具有至少30％的孔隙度，更优选地至少50％，甚至更优选地至少70％，和最优选地至少90％。
***件中所用的多孔支持体可为任何合适的材料，但优选地为固体支持体。更优选地多孔支持体包含液体的吸着剂材料(也称为液体吸着剂材料)。甚至更优选地该支持体由液体吸着剂料组成。吸着剂材料可为吸附剂或吸收剂材料。
本发明中所用的液体吸着剂材料应当理解为任何一种材料，其允许内标的溶解和随后要分析的样品被均匀地吸附或吸收穿过孔，另外允许通过蒸发除去载体溶剂。
允许通过支持体材料进行吸附或吸收的液体可为任何种类的液体，但优选地为在大气压下挥发性的液体，例如在大气压下具有低于大约250摄氏度(℃)的沸点的液体。
更优选地，根据本发明的液体吸着剂材料包含至少一种糖类材料，例如纤维素材料、玻璃纤维、玻璃珠、聚丙烯酰胺凝胶、多孔塑料惰性聚合物和多孔石墨。所述多孔吸着剂材料可更优选地包含糖类或其衍生物，例如琼脂糖、琼脂、纤维素、葡聚糖、壳聚糖或konjac、角叉藻聚糖、吉兰糖或藻酸盐。然而，液体吸着剂材料更优选地由纤维素或玻璃纤维制成。支持体或液体吸着剂材料的形状不是特别限制于，但优选地为圆形、正方形或涡卷状或鹦鹉螺形。根据本发明，支持体或吸着剂材料的形状与装置的孔或小瓶的形状相适合。如所述的，通过固定结构例如固位体(如图1中(3)所示的)可使多孔支持体或吸着剂材料在孔或小瓶的其位置中得以固定或稳固。
包含液体吸附剂材料的多孔支持体主要具有两种功能。第一种是如下所述以预先确定的浓度的包埋内标(参考材料)以备加入生物样品。第二种是固定每个样品中的内容物。此固定步骤引起来自每种样品的细胞裂解、蛋白质固定/沉淀以及盐和许多其它药物或代谢物滞留。然后支持体的孔隙度对于最大程度暴露于为分析所加的衍生试剂和提取溶剂是必需的。
内标
本发明中所用的内标应当理解为具有已知绝对量的任何参考材料，用于与相似或相同的化合物比较，以便定量给定样品中存在的未知量的化合物。优选地内标是有机内标。本发明中所用的内标可属于生物样品中待分析的相同组或家族的化合物。然而，它们优选地用同位素标记以便适当地允许样品的代谢物和内标之间进行区分。然而，将样品的代谢物与内标区分出来的任何其它方式也可使用。例如，非天然存在的化合物也可用作内标。
本发明中所使用的内标的特定实例在下面的表1中列出。
表1
脂类
  缩写   全称   注释
  脂肪酸链长度
  SM(d18:1/6:0)   N-己酰-鞘氨醇-4-醇-1-磷酸胆碱   6
  GPCho(9:0/0:0)   1-壬酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱   9
  GPCho(14:0/14:0)   1，2-双十四烷酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱   28
  GPIns(16:0/16:0)   1，2-双十六烷酰-sn-甘油-3-磷酸-(1’-肌醇) 32
  GPCho(20:0/20:0)   1，2-二-(3，7，11，15四甲基十六烷酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱 40
  GPSer(20:0/20:0)   1，2-二-(3，7，11，15四甲基十六烷酰)-sn-甘油-3-磷酸丝氨酸 40
  GPSer(6:0/6:0)   1，2-双己酰-sn-甘油-3-磷酸丝氨酸   12
氨基酸
  缩写   全称   注释
  13C2-15N-Gly   13C2-15N-甘氨酸
  D4-DL-Ala   D4-DL-丙氨酸
  15N2-L-Argl   15N2-L-精氨酸HCl
  D3-DL-Asp   D3-DL-天冬氨酸
  15N2-L-Asn   15N2-L-天冬酰胺H2O
  D3-L-Glu   D3-L-谷氨酸
  D5-L-Gln   D5-L-谷氨酰胺
  13C6-L-His   13C6-L-组氨酸H2O
  13C6-L-Ile   13C6-L-异亮氨酸
  13C-L-Lys   13C6-L-赖氨酸2HCl
  D3-L-Met   D3-L-甲硫氨酸
  D6-L-Orn   D6-L-鸟氨酸HCl
  D5-L-Phe   D5-L-苯丙氨酸(环5-苯丙氨酸)
  D7-L-Pro   D7-L-脯氨酸
  D3-DL-Se   D3-DL-丝氨酸
  13C4-L-Thr   13C4-L-苏氨酸
  15N2-L-Trp   15N2-L-色氨酸
  D4-L-Tyr   D4-L-酪氨酸(环4-酪氨酸)
  D8-DL-Val   D8-DL-缬氨酸
酰基肉毒碱
  缩写   全称   侧链长度
  D3-C0   [d3-甲基]-肉毒碱.HCl   C＝0
  D9-C0   [d9-三甲基]-肉毒碱.HCl   C＝0
  D3-C2   [d3]-乙酰-L-肉毒碱.HCl   C＝2
  D3-C3   [3，3，3-d3]-丙酰-L-肉毒碱.HCl   C＝3
  D3-C4   [4，4，4-d3]-丁酰-L-肉毒碱.HCl   C＝3
  D7-C4   [d7]-异丁酰-L-肉毒碱.HCl   C＝4
  D3-C5   [5，5，5-d3]-戊酰-L-肉毒碱.HCl   C＝4
  D9-C5   [d9]-异戊酰-L-肉毒碱.HCl   C＝5
  D3-C6   [6，6，6-d3]-己酰-L-肉毒碱.HCl   C＝6
  D3-C8   [8，8，8-d3]-辛酰-L-肉毒碱.HCl   C＝8
  D3-C10   [10，10，10-d3]-癸酰-L-肉毒碱.HCl   C＝10
D3-C12   [12，12，12-d3]-十二烷酰-L-肉毒碱.HCl C＝12
  D3-C14   [14，14，14-d3]-十四烷酰-L-肉毒   C＝14
  碱.HCl
D3-C16   [16，16，16-d3]-十六烷酰-L-肉毒碱.HCl C＝16
D3-C18   [18，18，18-d3]-十八烷酰-L-肉毒碱.HCl C＝18
还原型单糖
  缩写   全称   注释
  13C6-Glc   13C6-葡萄糖
丙酮酸/乳酸
  缩写   全称   注释
  13C3-Pyr   13C3-丙酮酸
肌酸酐
  缩写   全称   注释
  [d3-甲基]-肌酸酐
免疫抑制剂
  缩写   全称   注释
  子囊霉素
  环孢菌素D
  32-脱甲氧基雷帕霉素
生物样品
本发明中所用的生物样品应当理解为下述任何样品，与生命或活的生物体、生物过程例如生长和消化相关、由生命或活的生物体、生物过程引起，或者影响生命或活的生物体、生物过程。
生物样品的实例可包括但不限于血液、细胞培养上清液、唾液、眼泪、尿、血液、血清、血浆、汗、***液体、***、粪便、粘液、母乳、腹水、淋巴、胸腔积液、滑液、骨髓、脑脊髓液、或来自体腔的洗涤液(例如，支气管灌洗)、头发、组织、骨头或牙齿。
优选地，生物样品是液体样品。更优选地，生物样品是血液，最优选人血液。液体意味着在25℃下具有确定的体积但无确定形状的物质状态，例如水。
代谢物谱
本发明中所用的代谢物谱应当理解为代谢物的定量结果的任何一确定组的值，其可用于与参考值或来自于另一样品或样品组的谱进行比较。例如，来自病人样品的代谢物谱可与来自类似匹配的健康病人样品的代谢物谱显著不同。
可检测和/或定量代谢物，例如，但不限于氨基酸、肽、酰基肉毒碱、单糖、脂类和磷脂、***素、羟基二十碳四烯酸、羟基十八碳二烯酸、类固醇、胆汁酸及糖脂和磷脂。
能适用于根据本发明的质谱法分析的代谢物的实例列于表2中。特别是，显示了在任何给定的脂肪酸残基中从C4:X至C46:X(其中饱和度X为0至8)的脂类种类。脂类还包括鞘脂和糖鞘脂。
能得到检测和定量的氨基酸可以是产蛋白质(proteogenic)或非产蛋白质氨基酸。如表2中所显示的产蛋白质和非产蛋白质氨基酸是优选的。
C4:X至C18:X的酰基肉毒碱(其中X是饱和度，且在任何给定酸性残基中范围为0至8)可得到检测和/或分析。优选的酰基肉毒碱的实例也列于表2中。
单糖优选地为还原型或非还原型糖类。单糖的实例也列于表2中。
表2
脂类
  缩写   脂类亚型的全称   注释
  甘油磷脂、鞘脂和糖鞘脂   脂肪酸链长度
  Sph   鞘氨醇   无
  Cer   神经酰胺   C6:X-C36:X
  SM   鞘磷脂   C6:X-C36:X
  Sph pchol   鞘氨醇基磷酸胆碱   无
  Sph dh   二氢鞘氨醇   无
  PC   磷脂酰胆碱   C4:X-C46:X
  PI   磷脂酰肌醇   C4:X-C46:X
  PS   磷脂酰丝氨酸   C4:X-C46:X
  PC(a)   溶血卵磷脂   C4:X-C32:X
  PI(a)   溶血磷脂酰肌醇   C4:X-C32:X
  PS(a)   溶血磷脂酰丝氨酸   C4:X-C32:X
  PC(e)   plasmenyl磷脂酰胆碱   C4:1-C32:X
  PC(e)   plasmanyl磷脂酰胆碱   C4:0-C32:0
氨基酸
产蛋白质氨基酸
  缩写   全称   注释
  A   Ala   丙氨酸
  D   Asp   天冬氨酸
  E   Glu   谷氨酸
  F   Phe   苯丙氨酸
  G   Gly   甘氨酸
  H   His   组氨酸
  Xle   亮氨酸/异亮氨酸
  K   Lys   赖氨酸
  M   Met   甲硫氨酸
  P   Pro   脯氨酸
  R   Arg   精氨酸
  S   Ser   丝氨酸
  T   Thr   苏氨酸
  V   Val   缬氨酸
  W   Trp   色氨酸
  Y   Tyr   酪氨酸
  ADMA   不对称的二甲基精氨酸  LC MS方法
  SDMA   对称的二甲基精氨酸  LC MS方法
  Q   Gln   谷氨酰胺
  N   Asn   天冬酰胺
  硝基酪氨酸  LC MS方法
  羟脯氨酸  LC MS方法
  犬尿氨酸  LC MS方法
  3-羟基犬尿氨酸  LC MS方法
非产蛋白质氨基酸
  缩写   全称   注释
  O   Orn   鸟氨酸
  Cit   瓜氨酸
酰基肉毒碱
  缩写   全称   注释
  C0   肉毒碱(游离肉毒碱)   C0
  C2:X到C18:X   酰基肉毒碱   C0:X到C26:X
  C3:X-OH到C18:2-OH   羟基酰基肉毒碱   C3-OH到C18:2-OH
  C3:0-DC到C18:2-DC   二羧基酰基肉毒碱   C3:0-DC到C12:0-DC
还原性单糖
  缩写   全称   注释
  H   己糖
  P   戊糖
  dH   脱氧己糖
其它
  缩写   全称   注释
  Cr   肌酸酐
  亚精胺   LC MS方法
  精胺   LC MS方法
  腐胺   LC MS方法
  多巴胺   LC MS方法
  5-羟色胺   LC MS方法
  ***素   LC MS方法
  羟基二十碳四烯酸(HETE)   LC MS方法
  羟基十八碳二烯酸(HODE)   LC MS方法
  白三烯   LC MS方法
  血栓烷   LC MS方法
  胆汁酸   LC MS方法
  固醇   LC MS方法
  胆固醇   LC MS方法
  维生素和辅因子
  药物和药物代谢物   LC MS方法
药物谱
本发明中所用的药物谱应当理解为特定样品中一种或多种药物代谢物的定量结果的任一限定组的值。而且，作为特定实例的免疫抑制剂也可得到检测和定量。例如，移植病人的药物谱使医生获得一种或多种所使用的药物治疗的立即循环量，并可根据所测定的量增加或降低未来的剂量以获得最佳治疗范围。将此类分析称作治疗药物监测(TDM)。根据本发明的免疫抑制剂可理解为可用于免疫抑制治疗以抑制或阻止免疫***活性的药物。临床上将它们用于防止移植器官和组织的排斥以及治疗自身免疫疾病，例如类风湿性关节炎、重症肌无力、***性红斑狼疮、克隆病和溃疡性结肠炎。此处所定义的免疫抑制剂基本上可分类为四组：糖皮质激素、细胞抑制剂、抗体和作用于抑免蛋白的药物。本发明中所用的免疫抑制剂的优选的实例是环孢菌素A、西罗莫司、依维莫司和他克莫司。
标准品的封装
根据本发明的内标优选地用包装材料或保护材料来包装，保护内标以防止使用之前的降解和化学反应。保护内标防止降解和化学反应可防止内标多种形式的分解或化学修饰，例如防止日照、温度和微生物的作用，特别是防止将内标转化为分解或降解产物从而影响定量分析结果的任何过程。
本发明中所用的保护/覆盖材料应当理解为任何用于防护或设计用于防护内标以免于降解的材料。
根据本发明的保护/覆盖材料可为适合于保护内标免受如上所述的环境影响的任何材料。根据本发明的覆盖材料优选地包含至少一种聚合物、形成微团的化合物、形成脂质体的化合物和多羟基化合物，或其任何混合物。
如果覆盖材料是聚合物，用于本发明的所述聚合物并不受特别限制，并可理解为高分子量有机化合物，例如具有至少500g/mol或至少1000g/mol或至少5000g/mol或至少10000g/mol的重量平均分子量的有机化合物，其为天然的或合成的，其结构可表现为单体的重复小单位。合成的聚合物是以本领域中已知的方式来形成的，例如通过单体的加成或缩合聚合反应。当涉及两种或多种不同的单体时，本发明的聚合物还可为共聚物。均聚物是仅由一种类型的单体形成的聚合物。
根据本发明的聚合物优选地为聚亚烷基二醇均聚物或共聚物或其混合物。重量平均分子量优选地为大约1000道尔顿(Da)。更优选地，根据本发明的聚合物是聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇(PPG)，优选地具有大约1000Da的重量平均分子量的PEG1000，由于其对于高极性溶剂是可溶的或易混溶的并且对于非极性溶剂极性较低。
如果覆盖材料是形成微团的化合物，本发明中所用的所述化合物应当理解为可引起分子的亚微观聚合如胶体***中的小滴的任何化合物。根据本发明的形成微团的化合物优选地为表面活性剂。
本发明中所用的表面活性剂应理解为减小两液体之间表面张力的任何化合物；或任何表面活性剂，其增加产物的乳化、起泡、分散、扩散、和润湿特性，特别是其分子一端含有亲水基团并在另一端含有亲脂基团的任何有机化合物。合适的表面活性剂包含阳离子、阴离子、非离子和两性表面活性剂。优选地表面活性剂是磷脂酰(C17:0)2。
如果覆盖材料为形成脂质体的化合物，本发明中所用的所述化合物应当理解为可构建显微囊泡的任何化合物，所述显微囊泡由包裹在一层或多层磷脂层中的水性核心组成，用于将疫苗、药物、酶、或其它物质运输至靶细胞或器官。
本发明中所用的磷脂是以本领域中的一般方式来理解，并应包含含有磷的脂类，例如卵磷脂和脑磷脂，由甘油和脂肪酸构成，具有连接的磷酸基团。更优选地，形成脂质体的化合物是磷脂，例如磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺或其衍生物。
如果覆盖材料是多羟基化合物，本发明中所用的所述化合物应当理解为包含至少两个羟基基团。最优选地，多羟基化合物是山梨醇和/或甘油。
优选地，根据本发明的封装是微囊化。本发明中所用的微囊化应当理解为任何微囊的封装，该微囊为小的，优选地显微胶囊，其设计用于当受到压力而破裂、溶解或熔化时释放其内容物。特别是，本发明的囊优选地具有小于100微米、更优选地小于10微米和最优选地小于1微米的直径。
微囊化的内标在储存和运送方面是稳定的，并对于氧化和降解过程是稳定的，且它们具有相对长的保存期限。优选地将微囊化标准化，以制备基于微囊化的成分的合成质量对照材料。这通常通过将内标和其它保护的样品与溶剂中的覆盖材料一起干燥来获得，所述溶剂是适合于这些化合物的溶剂，例如对磷脂而言的氯仿/甲醇混合物。一般向这些样品中添加水会引起微团和/或脂质体形成的发生，而然后这些内标或外标亲脂性保护的化合物的包埋在水中得以形成。
例如，如下制备该装置：用移液器将溶于合适溶剂的内标以已知量移至多孔支持体上并干燥。对用于该装置中的每种内标或每类内标，重复进行此步骤。如果提供封装，作为最后的步骤，将优选在合适的溶剂中的封装/覆盖材料置于包含内标的支持体(即***件)上并进行干燥。然后将***件***孔中，优选地通过利用固定装置或固定结构例如固位体。作为备选，在将内标和任选地覆盖材料移在支持体上前，可将支持体***孔中。
多重装置
本发明中所用的多重装置应当理解为连接在一起以形成多重装置的任何多个装置，例如微量滴定板标准形式。
本发明中所用的微量滴定板应当理解为用于生物或化学研究设备的任何塑料样品容器。微量滴定板标准是由生物分子筛选协会(SBS)于1996年制定形成的。其一般具有分布于2∶3的矩形基质中的6、24、96、384或1536个样品孔。此标准规定了孔的尺寸(例如直径、间隔和深度)以及板的属性(例如尺寸和硬度)。
对于多重装置，如上所述的组成成分的描述同样适用。因此，多重装置也包括多孔的支持体，例如纤维素或玻璃纤维，优选地通过化学惰性支持结构保持于至少一个孔中。多孔支持体已在其中包埋了处于干燥状态的内标；任选地用保护性或覆盖性材料或化学品的混合物进行微囊化(包衣)，例如所述化学品为聚乙二醇1000、磷脂酰胆碱、甘油或山梨醇。
此处称为多重装置的多重形式的装置还可具有不同的形式。预包埋的几个小瓶，举例来说6个孔，给出利用多种校正化合物的6点校正。含有已知代谢物和/或多种药物浓度的质量对照样品也是预包埋的。
孔
本发明中所用的孔应当理解为任何由下述材料组成的小瓶或管，所述材料优选地为溶剂和衍生物耐受的，在其中可发生提取或化学反应。
该装置的一个或多个孔(如图1中参考编号(1)所示的)优选地包含至少一种滤器(如图1中(4)所示的)，用于分离微米大小的固体，更优选地精确地用于分离微米大小的固体滤器(4)。该装置的一个或多个孔优选地包含至少一个图1中的出口(5)用于排出滤液。
本发明中所用的包含于孔中的滤器应当理解为液体或气体将从中通过以便分离液体与悬浮的颗粒物的任何多孔材料。滤器(4)优选地具有50至0.01微米的孔径大小，更优选地5至0.1微米，甚至更优选地1至0.3微米。最优选地，滤器(4)具有0.45微米的孔径大小。
根据本发明，滤器(4)优选地位于***件(2)和出口(5)之间。
而且，根据本发明出口(5)优选地在施加的离心力或减压下打开，优选地低于500毫巴。优选地在孔(1)的出口(5)一侧施加减压。备选地，可在***件(2)的一侧施加增加的压力，以确保从***件(2)向出口(5)流动。
试剂盒
根据本发明的装置可进一步用在试剂盒中，该试剂盒用于定量分析生物样品中的药物和/或代谢物谱。本发明中所用的试剂盒应当理解为由试剂、溶剂、包括软件的装置组成的任何***，其能够制备代谢物，用于通常与分析仪器相结合来定量靶向分析一系列代谢物。
设备
此外，根据本发明的装置还可用在设备中，用于定量分析生物样品中的药物和/或代谢物谱。所述设备包含(a)用于制备所要筛选的药物和/或代谢物的处理单元，该单元包含(a1)自动化的液体处理***，和(a2)至少一种如上所定义的装置，用于样品中存在的药物和/或代谢物的衍生和接下来衍生物的提取；(b)质谱仪，用于定量靶向的基于质谱法的分析和(c)用于储存分析结果的数据库。
本发明中所用的设备(或平台)应当理解为能够完成准备用于通过质谱法进行分析的生物样品制备的任何设备。这包括提取、衍生、脱盐和浓缩步骤。这还包括完全自动化方法中这些步骤的一些或所有的全部可能的组合，优选地将液体处理***与样品离心装置、样品加热和冷却装置、样品摇动装置、样品干燥装置、样品移取装置和样品匀化装置相结合。
本发明中所用的液体处理***应当理解为任何机械装置，其能够将多种类型的溶剂准确抽吸和分配进出小瓶和微量滴定板。液体处理***可经过此类液体处理***中的计算机和软件来操作。
本发明中所用的数据库应当理解为任何用于方便和加快搜索和检索的数据的集合。
本发明中所用的靶向质谱法分析应当理解为质谱法分析，其中使用了一种或多种预先设定的离子对，特别通过已知碎裂方式来定义和代表已知的代谢物，所述碎裂方式是相应分析物的特征性的，用于鉴定靶代谢物。将所获得的离子强度与合适的内标一起使用来计算靶代谢物的浓度。通过使用一种特征性离子对(或几种)来鉴定内标，将其所获得的强度与内标的已知浓度相联系，使相应的靶代谢物得以定量。靶代谢物的组是预先已知的并可为预先注释的。因此，所检测和定量的代谢物已被注解，允许快速而直接的解释。作为能够进行MSMS分析以更特异地区分离子种类的质谱仪，串联质谱仪是特别优选的。优选地，设备允许自动化的标准化样品制备和高分辨率的串联质量分析过程。特别是，自动化的样品制备过程增加了可靠结果的每日重复性和较低变异系数(CVs)。例如，当利用母离子扫描来分析衍生糖时，可通过质谱仪来分析衍生物本身。在阳离子模式下，在m/z 175下形成苯基甲基吡唑啉酮(PMP)(MH)+离子是优选的。糖类本身的组成或分离的异构体是可检测的。
当利用根据本发明的装置开展代谢物组分析时，利用预分析步骤可以高的速度、精确度和灵敏度同时从微滴定量的生物材料中分析出数百种代谢物的量。在几分钟内从个体样品产生质量保证(QA)的数据，并使用切缘(cutting edge)统计学软件工具来进行解释。此方法通过预分析标准化和自动化、以及用户友好的统计学和生物化学数据解释，还克服了至今存在的分析瓶颈。将本发明方法中的所有组件集成到新技术平台中将促使“生物化学指纹图谱”达到广泛应用并将加速代谢组学的发展。
实施例
通过下列非限制性的实施例将对本发明作进一步解释。
多重装置的制备和条件
利用7mm纤维素点(从通用卡片-10539859切割，Schleicher SchuellBiosciences GmbH，Dassel，德国)作为在Solvinert微量滴定板(MSRP N04，Millipore Corp.MA，USA)的96孔中每个孔中多孔支持体，制备一个多重装置。将这些用由聚丙烯(Biocrates，Tirol，Austria)制造的人造固位体将这些固定到位。
为分析所选择的代谢物亚组，在此情况下，使用了来自样品的氨基酸、酰基肉毒碱和磷脂，标记有稳定同位素的氨基酸、酰基肉毒碱和脂类的合适内标的集合以代表所有20种产蛋白质的磷脂酰胆碱、鞘磷脂，以及每种的溶血类型。通过移入已知量的每种内标类别将这些预包埋在多重装置的多孔支持体中，使每种内标在多孔支持体的内部干燥，然后加入内标的下一混合物，使其干燥等等。在此实施例中，在加入酰基肉毒碱之后加入氨基酸，并在最后加入水溶液中的磷脂内标混合物，该水溶液含有0.1％w/w的聚乙二醇1000(PEG1000)，其是具有双重目的的化合物。作为表面活性剂，PEG1000存在于多孔支持体的孔中，覆盖所有内标，提供保护性屏障以免暴露于氧气和水的降解作用。
当多重装置完全干燥后，将技术验证样品加入多重装置的前五个孔中。
孔1：空白
孔2和3：未标记的代谢物的对照混合物
孔4：用低浓度代谢物的质量对照(正常水平或1倍)，和
孔5：用高浓度代谢物的质量对照(正常水平的10倍)
然后将含有预包埋内标和在孔1至5中的另外的对照样品的多重装置在4℃储存备用。
使用多重装置的方法
[实施例1]
仅为举例的目的，下面描述了如何使用上述装置来处理用于一组代谢物的分析的样品。
为分析代谢物的亚组，使用了来自样品的氨基酸、酰基肉毒碱和磷脂，一组用稳定同位素标记的氨基酸、酰基肉毒碱和脂类的合适内标用于代表所有20种产蛋白质的氨基酸、大多数丰富的酰基肉毒碱和磷脂，包括磷脂酰胆碱、鞘磷脂，以及每种的溶血种类。当加入预定量的样品时，通常在***件孔的范围内混合10μl血浆、内标和样品的氨基酸。任何引起代谢物损失或降解的随后处理均将通过内标相关联。然后氨基酸的衍生可在***件孔的范围内发生。在此实施例中的衍生试剂由15μl存在于嘧啶、水、乙醇1∶1∶1的溶液中的5％异硫氰酸苯酯组成。室温下在小于20分钟内发生此衍生过程。因为衍生溶液是完全挥发性的，在室温下温和的氮气流或真空中即可将其简单地除去。加入含有10mM乙酸铵的甲醇溶液从多孔装置中同时提取衍生的氨基酸、酰基肉毒碱和磷脂进入甲醇溶剂中。选择用于此目的的微量滴定板具有其它特性。其具有安装于每个孔底部的0.45微米的滤器和液体出口，该出口仅在离心力或真空下打开。然后仅通过离心将来自样品的甲醇提取物收集入捕获微量滴定板，该滴定板放置于含有微量滴定板的装置之下。然后可进行每孔溶液的质谱法分析，通常利用自动加样设备来将样品递送至质谱仪。
[实施例2]
下面将证实本装置可用于处理用于一组代谢物的分析的样品。
将已向每孔中精确加入来自一名病人的10μl血液样品的多重装置与内标在多孔支持体(***件)的孔的范围内相混合。任何随后引起代谢物损失或降解的处理均将因此与内标相关联。如实施例1进行衍生，然后将每孔所获得的溶液通过质谱法进行分析，通常利用自动加样设备将样品递送至质谱仪。
对用多重装置衍生和提取的代谢物的质谱法测定的结果在图2和图3中描绘，分别显示了氨基酸、磷脂和酰基肉毒碱。
氨基酸和酰基肉毒碱代谢物的量显示于下面的表3中，也显示了利用该多重装置所获得的值的准确度和方差。
表3-来自同一样品、测量了10次的氨基酸、脂类、乳酸、肌酸酐和葡萄糖的量的精确度和重复性显示于表3中，并为利用多重装置所获得的。
氨基酸
样品名 QAlowC2   QAlowC3   QAlowC4   QAlowC5   QAlowC6   QAlowC7   QAlowC8   QAlowC9   QAlowC10   QAlowC11   QAlowC12   平均值[μmol/l]   标准差   CV[％]
  精氨酸-PTC   64.8   71.0   67.5   68.7   62.3   63.1   67.9   65.6   67.4   66.5   63.7   66.2   2.6   4.0
  苯丙氨酸-PTC   74.0   71.6   72.1   81.5   70.1   69.2   70.4   73.6   72.5   72.9   76.2   73.1   3.4   4.7
  脯氨酸-PTC   114.4   117.1   124.5   120.4   120.2   120.6   137.2   118.2   127.5   126.3   120.6   122.5   6.2   5.1
  赖氨酸-PTC   102.2   94.4   108.4   110.5   93.0   102.1   102.1   98.1   98.9   101.8   102.1   101.2   5.2   5.1
  组氨酸-PTC   90.0   97.0   95.4   89.4   93.0   89.2   97.7   82.5   88.5   95.3   100.6   92.6   5.2   5.6
  色氨酸-PTC   35.8   39.0   42.7   38.2   36.6   36.6   37.4   38.9   34.8   34.8   35.7   37.3   2.3   6.2
  酪氨酸-PTC   93.4   99.9   95.7   92.7   94.8   103.7   95.2   97.2   86.1   87.4   83.6   93.6   6.0   6.4
  x-亮氨酸-PTC   174.5   181.2   158.1   191.9   164.1   153.8   167.5   157.2   150.2   158.6   157.1   164.9   12.8   7.8
  缬氨酸-PTC   117.0   96.9   108.7   121.7   116.3   114.6   115.7   134.2   111.7   116.9   121.0   115.9   9.1   7.9
  鸟氨酸-PTC   78.7   81.7   58.8   67.9   69.3   68.9   71.6   68.9   74.8   74.9   74.4   71.8   6.2   8.6
  甲硫氨酸-PTC   44.4   38.2   34.9   41.5   44.7   38.8   37.8   43.2   36.2   36.0   36.3   39.3   3.6   9.1
  瓜氨酸-PTC   28.3   24.8   28.0   23.5   20.6   25.2   26.1   25.0   28.0   29.4   25.8   25.9   2.5   9.7
  谷氨酰胺-PTC   455.8   455.6   445.7   364.4   352.0   372.8   369.0   374.2   322.0   355.7   369.1   385.1   45.6   11.8
  丝氨酸-PTC   182.1   153.7   176.7   177.1   191.9   188.5   173.4   137.8   132.6   134.0   154.9   163.9   22.1   13.5
  苏氨酸-PTC   21.3   26.0   31.0   34.4   23.5   29.5   25.7   29.4   25.0   24.2   29.0   27.2   3.8   14.0
  丙氨酸-PTC   219.6   316.7   227.8   282.3   298.7   267.5   205.8   177.8   203.0   245.4   210.9   241.4   44.4   18.4
  天冬酰胺-PTC   236.4   250.9   204.5   179.4   168.4   136.5   170.1   192.4   230.5   206.7   157.0   193.9   35.7   18.4
  甘氨酸-PTC   320.9   282.0   272.0   297.9   412.6   422.9   252.8   268.5   225.1   226.8   278.0   296.3   66.2   22.4
  谷氨酸-PTC   2115.4   1508.6   1694.6   1220.8   2118.8   1560.0   2137.9   2770.8   2137.9   1563.6   1984.8   1892.1   431.0   22.8
酰基肉毒碱
样品名   QAlowC2   QAlowC3   QAlowC4   QAlowC5   QAlowC6   QAlowC7   QAlowC8   QAlowC9   QAlowC10   QAlowC11   QAlowC12  平均值[μmol/l]   标准差   CV[％]
  C2   8.487   9.674   9.529   9.007   8.845   9.105   9.847   9.477   9.928   8.552   9.137   9.24   0.49   5.4
  C18:1   0.161   0.233   0.218   0.216   0.193   0.193   0.207   0.225   0.205   0.191   0.180   0.20   0.02   10.4
  C8:1   0.161   0.233   0.218   0.216   0.193   0.193   0.207   0.225   0.205   0.191   0.180   0.20   0.02   10.4
  C0   38.351   48.949   51.179   53.867   53.869   52.218   61.745   60.195   56.018   52.762   56.524   53.24   6.21   11.7
  C12-DC   0.021   0.015   0.017   0.013   0.015   0.017   0.015   0.017   0.016   0.017   0.017   0.02   0.00   12.4
  C14:2   0.041   0.050   0.044   0.035   0.047   0.052   0.041   0.050   0.035   0.047   0.045   0.04   0.01   13.1
  C8   0.232   0.306   0.352   0.274   0.200   0.212   0.264   0.250   0.258   0.276   0.299   0.27   0.04   16.4
  C12   0.043   0.051   0.071   0.047   0.043   0.043   0.044   0.048   0.046   0.045   0.055   0.05   0.01   16.7
  C12:1   0.028   0.025   0.030   0.031   0.027   0.035   0.035   0.030   0.040   0.034   0.019   0.03   0.01   18.6
  C16:1   0.038   0.016   0.036   0.037   0.030   0.035   0.030   0.033   0.024   0.030   0.035   0.03   0.01   20.2
  C3   0.293   0.401   0.524   0.376   0.274   0.324   0.309   0.435   0.423   0.473   0.423   0.39   0.08   20.5
  C14:1   0.110   0.106   0.103   0.113   0.113   0.141   0.174   0.118   0.172   0.108   0.117   0.13   0.03   20.6
  C4:1   0.110   0.106   0.103   0.113   0.113   0.141   0.174   0.118   0.172   0.108   0.117   0.13   0.03   20.6
  C7-DC   0.050   0.036   0.044   0.052   0.040   0.039   0.066   0.055   0.036   0.064   0.041   0.05   0.01   22.5
  C5-M-DC   0.192   0.204   0.184   0.202   0.191   0.209   0.210   0.316   0.177   0.136   0.160   0.20   0.05   22.7
  C4-OH   0.106   0.080   0.100   0.167   0.138   0.129   0.170   0.151   0.175   0.115   0.121   0.13   0.03   23.7
  C11   0.006   0.008   0.010   0.010   0.013   0.008   0.010   0.007   0.012   0.008   0.006   0.01   0.00   23.9
  C16   0.136   0.204   0.188   0.169   0.127   0.096   0.132   0.137   0.100   0.124   0.178   0.14   0.04   24.6
  C4:1-DC   0.148   0.182   0.241   0.167   0.111   0.097   0.165   0.146   0.226   0.127   0.218   0.17   0.05   28.3
脂类
样品名   QAlowC2   QAlowC3   QAlowC4   QAlowC5   QAlowC6   QAlowC7   QAlowC8   QAlowC9   QAlowC10   QAlowC11   QAlowC12   平均值[μmol/l]   标准差   CV[％]
  GPCho 36:3a   190.12   219.29   195.68   224.00   250.66   236.77   231.16   199.46   207.93   210.60   198.76   214.9   19.2   8.9
  SM d18:1/16:0   311.11   387.86   330.25   339.33   346.71   381.94   419.57   307.61   337.20   348.34   380.74   353.7   34.8   9.8
  GPCho 36:2e   22.84   25.00   20.99   22.67   21.71   21.29   23.19   23.91   27.44   19.20   21.12   22.7   2.2   9.9
  GPCho 32:1a   55.79   50.54   58.33   55.17   58.33   67.42   64.89   62.50   67.03   56.25   48.00   58.6   6.4   10.9
  GPCho 32:0a   7.69   7.37   7.73   5.20   7.87   6.71   7.82   6.63   7.74   9.23   7.07   7.4   1.0   13.6
  LGPCho 18:2a   6.17   6.43   6.17   6.00   8.55   6.45   6.52   4.35   7.93   7.28   6.21   6.6   1.1   16.7
  GPCho 34:1p   76.84   76.34   87.50   93.10   73.96   82.02   80.85   127.50   82.42   83.33   82.00   86.0   14.7   17.2
  GPCho 36:1p   243.16   268.82   354.16   327.59   300.00   277.53   288.30   425.00   290.11   269.79   259.00   300.3   51.8   17.3
  LGPCho 18:1p   160.00   174.19   215.28   168.97   165.62   180.90   156.38   257.50   180.22   138.54   164.00   178.3   32.4   18.2
  LGPCho 18:0e   40.24   47.37   51.38   43.35   47.19   65.10   53.63   59.64   50.97   67.69   37.88   51.3   9.7   18.8
  GPCho 38:1a   18.95   21.51   29.17   17.24   25.00   22.47   28.72   25.00   26.37   25.00   34.00   24.9   4.8   19.3
  LGPCho 18:0p   17.28   28.57   21.61   16.67   24.34   21.94   27.54   19.02   17.68   26.49   18.01   21.7   4.4   20.2
  GPCho 30:0a   11.73   21.43   12.35   12.67   14.47   14.19   15.22   9.78   13.41   15.89   16.15   14.3   3.0   21.2
  GPCho 38:2a   41.86   56.25   63.42   80.00   65.85   87.50   78.12   82.35   70.27   79.31   50.00   68.6   14.6   21.3
  GPCho 34:0e   6.79   8.57   6.79   9.33   11.84   9.03   11.59   13.04   12.20   10.60   9.32   9.9   2.1   21.3
  GPCho 32:1p   25.26   15.05   30.56   19.54   19.79   22.47   22.34   23.75   16.48   17.71   16.00   20.8   4.6   22.3
  GPIns 38:4   13.52   20.27   15.11   14.77   10.75   17.97   16.27   15.24   15.62   13.51   11.61   15.0   2.7   18.0
  GPIns 36:2   7.32   5.48   4.00   8.00   3.58   5.22   6.78   6.35   6.88   4.32   3.23   5.6   1.6   29.2
乳酸，葡萄糖和肌酸酐
  样品表   QAlowC2   QAlowC3   QAlowC4   QAlowC5   QAlowC6   QAlowC7   QAlowC8   QAlowC9   QAlowC10   QAlowC11   QAlowC12  平均值[μmol/l]   标准差   CV[％]
  乳酸   21513   24282   25798   25443   22912   22519   23778   21673   22400   24968   23625   23537   1473   6.3
  葡萄糖   3826   4250   4383   4104   4235   4288   4486   4156   3949   3983   3981   4149   202   4.9
  肌酸酐   213.62   270.39   247.02   243.48   242.64   233.51   280.19   263.16   262.74   238.50   244.91   249.1   18.7   7.5
[实施例3]
治疗性药物监测
在移植后需要用免疫抑制剂来抑制器官排斥。所用的免疫抑制剂是依维莫司、环孢菌素A、他克莫司、西罗莫司和霉酚酸。此处显示了治疗性药物监测结果来进一步阐明多重装置的用途和支持本发明的权利要求，所述监测结果是从如上述适当制备的多重装置所获得的。
多重装置的制备和条件
用与上述完全相同的方法制备多重装置，但用单个8mm纤维素点(来自通用卡片-10539859，Schleicher Schuell Biosciences GmbH，Dassel，德国)代替作为多孔支持体。
向两个多重装置孔中加入含有依维莫司(200ng/ml)(Sigma，Vienna，Austria)的甲醇溶液(20μl)、用于西罗莫司和他克莫司和环孢菌素D的内标(400ng/mL)(Sigma，Vienna，Austria)，将用于环孢菌素A的内标移取(Gilson 20μl移液器)至多重装置的多孔支持体上，并使其在室温干燥30分钟。根据产品说明书重构校准混合物和质量对照水平I-V(用于免疫抑制剂的全血校准物组(水平0-6)，用于免疫抑制剂的ClinChek R全血控制，Recipe Chemicals and Instruments GmbH，Munich，德国)，并将它们储存于-20℃。在使用之前，将具有增加浓度的环孢菌素D和依维莫司的六种校准物溶液和具有不同浓度环孢菌素A、他克莫司、西罗莫司和依维莫司的五种质量对照溶液解冻并使其达到室温大约23℃。移取(20μl Gilson移液器)六种校准物中的每种20μl加入六个孔中置于多重装置的多孔支持体上。移取五种质量对照放入多重装置的五个分离孔的多孔支持体中。立即向多重装置中加入乙腈(HPLC级)(Gilson 20ml移液器)于多重装置多孔支持体上，并立即用定轨摇床以600转/分摇动30分钟。通过将300μl容量的微量滴定捕获板置于装置下来收集洗脱液，然后在500g离心两次各6分钟。然后通过基于公开方法的质谱法技术(T.Koal，M.Deters，B.Casetta，V.Kaever，Simultaneous determination of four immunosuppressants bymeans of high speed and robust on-line solid phase extraction-highperformance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，J.Chromator.B，Analyt.Technol.Biomed.Life Sci.2004 Jun 15，805(2)；215-222)对洗脱液进行分析。对于用LCMS分析环孢菌素A以产生定量数据，如何获得和计算结果的代表性的实例呈现于图4中。将内标环孢菌素D的积分的峰下方面积用于与含有已知量的五种质量对照样品中的免疫抑制剂环孢菌素A的峰下方面积相比较。
图5至8显示了在多重装置内部利用纤维素支持体作为***件，所有四种免疫抑制剂环孢菌素A、他克莫司、依维莫司和西罗莫司的线性标准曲线。表4显示了计算的浓度和所分析的五种质量保证材料的精确度比较的实际值。
表4
  分析物浓度(ng/mL)   计算的浓度(ng/mL) 准确度(％)   分析物浓度(ng/mL)   计算的浓度(ng/mL) 准确度(％)
  cyc A   校准物0   0.2   0.201   101   西罗莫司   校准物0   0   无峰   N/A
  校准物1   46.7   43.8   93.7   校准物1   2.4   2.81   117
  校准物2   115   116   101   校准物2   6.6   6.38   96.7
  校准物3   304   315   103   校准物3   12.7   12.8   101
  校准物4   483   472   97.7   校准物4   19.6   19.6   99.8
  校准物5   777   820   106   校准物5   29   31.5   109
  校准物6   1940   1900   97.9   校准物6   49.4   46.7   94.4
  QA1   61   45.3   74.2   QA1   3.04   2.46   80.8
  QA2   116   95.5   82.3   QA2   8.65   10.1   117
  QA3   254   220   86.7   QA3   15.3   12.6   82.4
  QA4   474   391   82.6   QA4   0   无峰   N/A
  QA5   1340   1310   98.1   QA5   0   无峰   N/A
  他克莫司   校准物0   0.1   无峰   N/A   依维莫司   校准物0   0   ＜0   N/A
  校准物1   2.1   2.17   103   校准物1   2.1   2.46   117
  校准物2   5.6   5.38   96   校准物2   6   5.71   95.1
  校准物3   10.9   10.5   95.9   校准物3   12.3   12.5   101
  校准物4   15.8   16.1   102   校准物4   18.2   18.3   100
  校准物5   21.9   22   101   校准物5   25.3   27.1   107
  校准物6   38.8   38.9   100   校准物6   46.5   44.4   95.5
  QAl   3.23   3.69   114   QA1   3.48   3.18   91.3
  QA2   6.6   7.35   111   QA2   11.1   10.8   97.3
  QA3   13.2   14.8   112   QA3   18.2   18.5   102
  QA4   0   0.246   N/A   QA4   0   无蜂   N/A
  QA5   0   0.355   N/A   QA5   0   无峰   N/A
工业实用性
本发明使多种生物液体和组织的通用和标准化分析为可能。例如，目前内部容量可实现同时和完全自动化的样品制备及分析，在6分钟的MS机器时间内从10μl干燥血液产生多于1000个定量和注释的数据点，覆盖在100个以上注释的途径内的多种类别的代谢物。因此本发明首次克服了存在于(预)分析、自动化以及数据加工和解释中的大多数瓶颈，这些瓶颈已阻止了目前普遍的定量代谢组学挖掘。
与现有技术分析方法和装置相比，本发明的定量分析是非常严格的且结果是高度可重复的。特别是，代谢物数据更优于可比较的蛋白质组或转录物组数据。仅需要10μl血液或血清或者20μl尿液或者少于100,000个培养的细胞。
分析方法和装置的性能特点可满足研究(发现)应用和随后的临床诊断标准的需要。这确保或使质量保证数据、标准化数据成为可能，该数据在各实验室之间是可比较的，快速的周转时间，“容易”执行(采样数)，容易接收的数据解释和可视化及非常高度的自动化和标准化(SOPs)。总体成本/数据点促使代谢物组信息比蛋白质组信息便宜几个数量级。
通过本发明的方法或装置获得的定量信息以***(***生物学)背景和可缩放方式覆盖了通路和代谢物。因此，中间代谢的代表性功能图谱或屏幕拍摄或代谢指纹图谱可最终从标志代谢物的阵列中获得。
而且，经注释的功能终点信息可方便地与蛋白质组、转录物组和基因组的信息来源相连接，为***生物学需要补充代谢物组信息。
装置和方法可用于集成工具(软件和分析)，该工具适合为同时产生大规模定量鉴定和注释的代谢物谱以及复杂和动态的多重生物标记模式的研究建立新的“标准”。而且，商业上可获得的硬件组成，由用于自动化和标准化样品制备的液体处理***和用于MS-MS分析的质谱仪组成，可被基于专有的和受保护的设计的可消耗的产品以及应用软件整合，其包含用于质量对照数据加工、技术验证和记载、统计学分析和生物化学解释的(预)分析步骤和创新的模块。
本发明中的样品制备时间(在90个样品批中基于采样数/微量滴定盘中)仅大概2小时，并将通过进度软件的并行化进一步缩短。用专有的化学方法预先配制用于定量的多种特定内标作为通常一步或两步反应制备和应用命中的整合部分，如包含于所有用于与软件和SOPs相结合的QC和QA中的必需材料。
工业应用包括生物标记发现和商业化，目的是利用经验证的生物标记进行疾病诊断、治疗功效或毒性。药物开发中的主要应用包括药物代谢和药物动力学、毒物学和安全性、药物功效和药效学领域。其它领域包含临床诊断学和治疗诊断学，其中，例如，早期灵敏和特异诊断以及精确的分期促使疾病预防，代替了昂贵的干预并允许个人化治疗，并且其中可对治疗效果进行特异监测以支持个人化治疗。进一步的应用领域包括但不限于，营养工业、健康、本土安全和基础生物学。
在本发明优选的实施方案中，该装置包含含有吸着剂材料的支持体，和多种浸入支持体并干燥的质谱法的有机代谢物标准品。更优选地，质谱法的有机代谢物标准包含标记有稳定同位素的氨基酸、标记有稳定同位素的多肽、标记有稳定同位素的脂类、或标记有稳定同位素的酰基肉毒碱。
在本发明的另一优选的实施方案中，该装置包含含有吸着剂材料的支持体、和多种浸入支持体并干燥的质谱法的免疫抑制药物标准品。更优选地，免疫抑制药物标准品包含依维莫司和环孢菌素D中的一种或多种。

Claims (17)

1.用于装置的***件，所述装置适合于定量分析生物样品中的药物和/或代谢物谱，该***件包含
(a)支持体，其浸渗
(b)至少一种内标。
2.根据权利要求1的***件，其中所述支持体包含液体的吸着剂材料。
3.根据权利要求2的***件，其中所述吸着剂材料包含纤维素材料、玻璃纤维、玻璃珠、聚丙烯酰胺凝胶、多孔塑料惰性聚合物和多孔石墨的至少一种。
4.根据权利要求1至3中任意一项的***件，其中所述内标是利用覆盖材料封装的，该材料保护内标免于使用前的降解和化学反应。
5.根据权利要求4的***件，其中所述覆盖材料包含聚合物、形成微团的化合物、形成脂质体的化合物和多羟基化合物的至少一种。
6.根据权利要求5的***件，其中所述封装是微囊化。
7.根据权利要求5和/或6的***件，其中所述聚合物是聚亚烷基二醇均聚物或共聚物或其混合物，和/或多羟基化合物为山梨醇和/或甘油。
8.根据权利要求5至7中任意一项的***件，其中所述聚合物是聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇(PPG)，优选为PEG1000。
9.根据权利要求5和/或6的***件，其中形成微团的化合物是表面活性剂和/或形成脂质体的化合物是磷脂，优选磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺或其衍生物。
10.用于定量分析生物样品中药物和/或代谢物谱的装置，其包含
(a)一个或多个孔(1)，和
(b)位于孔(1)中的如权利要求1至9中任意一项所述的一个或多个***件(2)；和
(c)任选地，用于孔(1)中***件(2)的固位体(3)。
11.根据权利要求10的装置，其中一个或多个孔(1)包含滤器(4)，其用于分离微米大小、优选大于5微米的固体，和用于排出滤液的出口(5)。
12.根据权利要求11的装置，其中滤器(4)位于***件(2)和出口(5)之间。
13.根据权利要求11和/或权利要求12的装置，其中出口(5)在施加的离心力或减压下打开，所述压力优选地低于500毫巴。
14.内标，其用于定量分析生物样品中的药物和/或代谢物谱，所述内标如权利要求4至9中任意一项所述地被封装。
15.试剂盒，其用于定量分析生物样品中的药物和/或代谢物谱，所述试剂盒包含如权利要求10至13中任意一项所述的装置。
16.设备，其用于定量分析生物样品中药物和/或代谢物谱，所述设备包含
(a)用于制备待筛选的药物和/或代谢物的处理单元，其包含
(a1)自动化液体处理***，和
(a2)至少一个权利要求10至13中任意一项所述的装置，用于样品中存在的药物和/或代谢物的衍生和接下来衍生物的提取；
(b)质谱仪，其用于定量靶向的基于质谱法的分析，和
(c)用于储存分析结果的数据库。
17.用于定量分析生物样品中药物和/或代谢物谱的方法，其使用如权利要求1至9中任意一项所述的***件或如权利要求10至13中任意一项所述的装置或如权利要求14中所述的内标或如权利要求15中所述的试剂盒或如权利要求16中所述的设备。
CN200680022942A 2005-06-30 2006-06-29 用于代谢物谱的定量分析的装置 Active CN100594501C (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US69498405P 2005-06-30 2005-06-30
US69498305P 2005-06-30 2005-06-30
US60/694,983 2005-06-30
US60/694,984 2005-06-30
PCT/EP2006/006328 WO2007003344A2 (en) 2005-06-30 2006-06-29 Device for quantitative analysis of a metabolite profile

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101208697A true CN101208697A (zh) 2008-06-25
CN100594501C CN100594501C (zh) 2010-03-17

Family

ID=36783737

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200680022942A Active CN100594501C (zh) 2005-06-30 2006-06-29 用于代谢物谱的定量分析的装置

Country Status (16)

Country Link
US (2) US8116983B2 (zh)
EP (2) EP1897014B1 (zh)
JP (2) JP5155160B2 (zh)
KR (1) KR100967573B1 (zh)
CN (1) CN100594501C (zh)
AU (1) AU2006265381B2 (zh)
BR (1) BRPI0613478B8 (zh)
CA (2) CA2608965C (zh)
DK (2) DK1897014T3 (zh)
ES (1) ES2452025T3 (zh)
IL (1) IL187470A (zh)
IN (1) IN2014DN02241A (zh)
NO (1) NO339319B1 (zh)
NZ (1) NZ563431A (zh)
RU (1) RU2391672C2 (zh)
WO (2) WO2007003343A1 (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102460160A (zh) * 2009-06-02 2012-05-16 比奥克拉泰斯生命科学股份公司 用于评估肾脏疾病的新生物标记物
CN104769434B (zh) * 2012-08-13 2018-01-02 亥姆霍兹慕尼黑中心德国研究健康与环境有限责任公司 用于2型糖尿病的生物标志物
CN107727850A (zh) * 2017-10-10 2018-02-23 北京康华源科技发展有限公司 一种侧向流层析检测反应启动控制方法
CN107798981A (zh) * 2017-10-31 2018-03-13 楚雄医药高等专科学校 一种永久性教学用微囊标本片及其制作方法
CN109030673A (zh) * 2018-07-04 2018-12-18 易达精准（杭州）科技有限公司 干血片中免疫抑制剂的检测方法以及检测试剂盒
CN111704654A (zh) * 2020-06-18 2020-09-25 上海交通大学医学院附属仁济医院 肽类化合物及其制备方法与应用
CN117538530A (zh) * 2023-11-07 2024-02-09 中国医学科学院肿瘤医院 一种检测转移性乳腺癌的生物标志组合物和试剂盒及其应用

Families Citing this family (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4303315B2 (ja) 1994-05-09 2009-07-29 オックスフォード バイオメディカ（ユーケー）リミテッド 非交差性レトロウイルスベクター
US8969089B2 (en) 2004-10-12 2015-03-03 Quest Diagnostics Investments, Inc. Analysis of amino acids in body fluid by liquid chromatography-mass spectrometry
NZ563431A (en) * 2005-06-30 2012-05-25 Biocrates Life Sciences Ag Device for quantitative analysis of a metabolite profile
WO2007130629A1 (en) * 2006-05-05 2007-11-15 Perkinelmer Las, Inc Quantitative analysis of surface-derived samples using mass spectrometry
EP1923806A1 (en) * 2006-11-14 2008-05-21 Metanomics GmbH Fast metabolomic analysis and system therefor
US7999084B2 (en) 2007-05-16 2011-08-16 Agilent Technologies, Inc. Devices and methods for reducing matrix effects
US20100173342A1 (en) * 2007-05-31 2010-07-08 Weinberger Klaus Michael Biomarker and Method for Determining an Oxidative Stress Level
AU2008256444A1 (en) * 2007-05-31 2008-12-04 Biocrates Life Sciences Ag Inflammation and oxidative stress level assay
EP3543691A1 (en) * 2007-06-29 2019-09-25 Quest Diagnostics Investments Incorporated Analysis of amino acids in body fluid by liquid chromatography-mass spectrometry
US8273575B2 (en) * 2007-07-26 2012-09-25 Phenomenome Discoveries Inc. Methods for the diagnosis, risk assessment, and monitoring of autism spectrum disorders
DE102007043614B3 (de) * 2007-09-13 2008-11-20 Biocrates Life Sciences Gmbh Halterung für ein Trägermittel zum Einsetzen in eine zylinderförmige Öffnung
WO2009043149A1 (en) * 2007-10-01 2009-04-09 Mds Analytical Technologies, A Business Unit Of Mds Inc., Doing Business Through Its Sciex Division Analysis of conjugated metabolites of alcohol consumption
WO2009070233A1 (en) * 2007-11-26 2009-06-04 Waters Technologies Corporation Internal standards and methods for use in quantitatively measuring analytes in a sample
US9983099B2 (en) * 2008-06-13 2018-05-29 Smiths Detection Montreal Inc. Analytical instrument with temporal control of ion mobility spectrometer control parameters
CN107254538A (zh) 2008-11-12 2017-10-17 卡里斯生命科学瑞士控股有限责任公司 使用外来体来确定表现型的方法和***
EP2192196A1 (en) 2008-11-27 2010-06-02 Helmholtz Zentrum München Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) Prediction of lipid-metabotype-related physiological susceptibilities
CN102326073B (zh) 2009-03-05 2013-11-13 株式会社日立高新技术 分析装置
US9500572B2 (en) 2009-04-30 2016-11-22 Purdue Research Foundation Sample dispenser including an internal standard and methods of use thereof
KR20120027182A (ko) * 2009-04-30 2012-03-21 퍼듀 리서치 파운데이션 습윤된 다공성 재료를 사용하는 이온 생성
ES2799327T3 (es) 2009-05-05 2020-12-16 Infandx Ag Método para diagnosticar asfixia
CA2782284A1 (en) 2009-11-30 2011-06-03 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. Methods and systems for isolating, storing, and analyzing vesicles
WO2011088226A2 (en) 2010-01-13 2011-07-21 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings Detection of gastrointestinal disorders
JP5808349B2 (ja) 2010-03-01 2015-11-10 カリス ライフ サイエンシズ スウィッツァーランド ホールディングスゲーエムベーハー セラノーシスのためのバイオマーカー
CA2795776A1 (en) 2010-04-06 2011-10-13 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. Circulating biomarkers for disease
EP2633327B1 (en) * 2010-10-29 2019-11-20 Thermo Fisher Scientific OY System layout for an automated system for sample preparation and analysis
US8941059B2 (en) * 2010-10-29 2015-01-27 Atonarp, Inc. Sampling apparatus
EP2492690A1 (en) * 2011-02-22 2012-08-29 BIOCRATES Life Sciences AG Method and use of metabolites for the diagnosis of inflammatory brain injury in preterm born infants
EP2587264A1 (en) 2011-10-25 2013-05-01 InfanDx AG Method and use of metabolites for the diagnosis and differentiation of neonatal encephalopathy
WO2013078222A1 (en) 2011-11-23 2013-05-30 Quest Diagnostics Investments Incorporated Kisspeptin-54 detection by tandem mass spectrometry
JP6198408B2 (ja) * 2012-04-02 2017-09-20 株式会社日立ハイテクノロジーズ サンプル液に含まれる揮発性物質の分析方法
US8870028B2 (en) 2012-05-25 2014-10-28 Restek Corporation Dispensing device
WO2014072537A1 (de) 2012-11-12 2014-05-15 Biocrates Life Sciences Ag Verwendung von qualitätsindikatoren zum nachweis von auftauprozessen in gefrorenen gewebeproben
WO2014110196A1 (en) * 2013-01-10 2014-07-17 Restek Corporation Dispensing device and method
CN108287209B (zh) 2013-01-31 2021-01-26 普度研究基金会 分析原油的方法
US10008375B2 (en) 2013-01-31 2018-06-26 Purdue Research Foundation Systems and methods for analyzing an extracted sample
WO2014209474A1 (en) 2013-06-25 2014-12-31 Purdue Research Foundation Mass spectrometry analysis of microorganisms in samples
CN103558354B (zh) 2013-11-15 2015-07-15 南京大学 一种基于生物组学整合技术的水体毒性分析方法
JP2017101924A (ja) * 2014-03-31 2017-06-08 積水メディカル株式会社 内部標準物質試薬
CN104200087B (zh) * 2014-06-05 2018-10-02 清华大学 用于机器学习的参数寻优及特征调优的方法及***
US9786478B2 (en) 2014-12-05 2017-10-10 Purdue Research Foundation Zero voltage mass spectrometry probes and systems
JP6948266B2 (ja) 2015-02-06 2021-10-13 パーデュー・リサーチ・ファウンデーションＰｕｒｄｕｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ プローブ、システム、カートリッジ、およびその使用方法
EP3171173A1 (en) 2015-11-19 2017-05-24 Medizinische Universität Innsbruck Method of diagnosis of a thoracic aortic aneurysm
US10001501B2 (en) 2015-12-31 2018-06-19 Universal Diagnostics, S. L. Systems and methods for automated, customizable sample preparation for detection of metabolites and lipids
DE102017112612A1 (de) 2016-06-10 2017-12-14 Hitachi High-Tech Science Corporation Flüssigkeitschromatograph und Verfahren zum Korrigieren von Schwankungen eines Detektorausgabewerts des Flüssigkeitschromatographen
US10607723B2 (en) 2016-07-05 2020-03-31 University Of Kentucky Research Foundation Method and system for identification of metabolites using mass spectra
EP3535418B1 (en) 2016-11-07 2021-12-15 Battelle Memorial Institute Nanoscale biochemical sample preparation and analysis
US11719702B2 (en) * 2016-11-07 2023-08-08 Battelle Memorial Institute Methods and systems of proteome analysis and imaging
EP3351938A1 (en) * 2017-01-18 2018-07-25 BIOCRATES Life Sciences AG New biomarkers for assessing ovarian cancer
EP3376230A1 (en) 2017-03-13 2018-09-19 Biocross, S.L. Identification of signatures for neurodegeneration diseases diagnoses
WO2018174876A1 (en) * 2017-03-22 2018-09-27 Mprobe Inc. Methods and compositions for providing a preeclampsia assessment with metabolites
US11638544B2 (en) * 2017-05-17 2023-05-02 Radiometer Medical Aps Porous optical fiber for the detection of an analyte in a fluid
CN107561150A (zh) * 2017-07-03 2018-01-09 宁波华仪宁创智能科技有限公司 吸毒的检测方法
CN109298115B (zh) * 2018-10-19 2020-07-28 深圳市绘云生物科技有限公司 生物样品中多种代谢物定量检测方法及代谢芯片
WO2020099683A1 (en) 2018-11-16 2020-05-22 Biocrates Life Sciences Ag Metabolites for use in ovarian cancer detection and diagnosis
FR3091351B1 (fr) 2018-12-27 2021-05-21 Univ Rouen Centre Hospitalier Biomarqueur de la maladie de fabry
KR102035162B1 (ko) * 2019-03-12 2019-11-08 한국과학기술원 질병 표적 대사 효소에 특이적인 인체 대사 물질을 이용하여 질병에 대한 약물 후보를 예측하는 방법
GB201916046D0 (en) * 2019-11-04 2019-12-18 Amazentis Sa Diagnostic method
CN111579665B (zh) * 2020-05-20 2021-11-05 苏州帕诺米克生物医药科技有限公司 一种基于uplc/hrms的代谢组学相对定量分析方法
US20230204544A1 (en) * 2020-05-21 2023-06-29 Mayo Foundation For Medical Education And Research Calibration methods for mass spectrometry measurements
US11754536B2 (en) 2021-11-01 2023-09-12 Matterworks Inc Methods and compositions for analyte quantification
JP7206365B1 (ja) * 2021-12-22 2023-01-17 浜松ホトニクス株式会社 試料支持体
KR102547430B1 (ko) * 2022-11-16 2023-06-23 (주)애터미오롯 노니 함유 조성물의 정성 분석 방법

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5756362A (en) * 1993-10-12 1998-05-26 Cornell Research Foundation, Inc. Liposome-enhanced immunoaggregation assay and test device
US6358752B1 (en) 1996-09-27 2002-03-19 Cornell Research Foundation, Inc. Liposome-enhanced test device and method
GB9718129D0 (en) * 1997-08-27 1997-10-29 Isis Innovation Branched structures
US6258605B1 (en) * 1999-03-26 2001-07-10 Neo Gen Screening, Inc. Clinical method for the genetic screening of newborns using tandem mass spectrometry
US6455321B1 (en) * 1999-01-30 2002-09-24 Neo Gen Screening, Inc. Method for interpreting tandem mass spectrometry data for clinical diagnosis
US20020009394A1 (en) 1999-04-02 2002-01-24 Hubert Koster Automated process line
ATE343130T1 (de) * 1999-12-29 2006-11-15 Perkinelmer Life Sciences Inc Testtablett, kit und verfahren zum screening von körperflüssigkeiten von neugeborenen durch tandem-massenspektrometrie
EP1285092A4 (en) * 2000-04-14 2003-07-16 Metabolon Inc METHOD FOR DISCOVERY OF MEDICINES, DISEASE TREATMENT AND DIAGNOSIS USE THE METABOLOMICS
US6680203B2 (en) 2000-07-10 2004-01-20 Esperion Therapeutics, Inc. Fourier transform mass spectrometry of complex biological samples
EP1313543A4 (en) * 2000-07-18 2004-06-30 Invitrogen Corp DEVICE AND METHODS FOR SUBDIVISION AND FILTRATION OF GEL MATERIAL AND FOR EXTRACTION OF MOLECULES THEREOF
US6627444B1 (en) * 2000-08-07 2003-09-30 Smiths Detection - Toronto Ltd. Method and solid phase calibration sample for calibration of analytical instructions
US20020155587A1 (en) 2001-04-20 2002-10-24 Sequenom, Inc. System and method for testing a biological sample
CA2452660A1 (en) 2001-07-06 2003-01-16 Lipomics Technologies, Inc. Generating, viewing, interpreting, and utilizing a quantitative database of metabolites
CA2457695A1 (en) 2001-08-14 2003-02-27 President And Fellows Of Harvard College Absolute quantification of proteins and modified forms thereof by multistage mass spectrometry
US6929944B2 (en) * 2001-08-31 2005-08-16 Beckman Coulter, Inc. Analysis using a distributed sample
US6939716B2 (en) * 2001-09-19 2005-09-06 Washington University Method for detecting conditions indicative of sepsis
JP2005536714A (ja) * 2001-11-13 2005-12-02 カプリオン ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド 質量強度プロファイリングシステムおよびその使用法
US6873914B2 (en) * 2001-11-21 2005-03-29 Icoria, Inc. Methods and systems for analyzing complex biological systems
GB0128498D0 (en) 2001-11-28 2002-01-23 Inst Of Child Health International standards for sphingolipids
EP1456667B2 (en) * 2001-12-08 2010-01-20 Micromass UK Limited Method of mass spectrometry
AUPS177202A0 (en) * 2002-04-16 2002-05-23 Diakyne Pty Ltd Multi-element screening of trace elements
AU2003272234A1 (en) 2002-10-24 2004-05-13 Warner-Lambert Company, Llc Integrated spectral data processing, data mining, and modeling system for use in diverse screening and biomarker discovery applications
WO2004038381A2 (en) 2002-10-25 2004-05-06 Metabolon, Inc. Methods for drug discovery, disease treatment, and diagnosis using metabolomics
EP1556684A4 (en) * 2002-11-01 2008-01-23 Univ Colorado Regents QUANTITATIVE ANALYSIS OF PROTEIN ISOFORMS USING FLIGHT TIME MASS SPECTROMETRY BY MATRIX ASSISTED LASER DESORPTION / IONIZATION
US20040121305A1 (en) 2002-12-18 2004-06-24 Wiegand Roger Charles Generation of efficacy, toxicity and disease signatures and methods of use thereof
US6909981B2 (en) * 2003-01-27 2005-06-21 Ciphergen Biosystems, Inc. Data management system and method for processing signals from sample spots
US7964343B2 (en) 2003-05-13 2011-06-21 Ibis Biosciences, Inc. Method for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture
US20050112635A1 (en) * 2003-09-22 2005-05-26 Becton, Dickinson And Company Quantification of analytes using internal standards
KR20050050714A (ko) * 2003-11-26 2005-06-01 매그나칩 반도체 유한회사 반도체소자의 트랜지스터 제조방법
US7745226B2 (en) * 2005-04-06 2010-06-29 Quest Diagnostics Investments Incorporated Methods for detecting vitamin D metabolites
NZ563431A (en) * 2005-06-30 2012-05-25 Biocrates Life Sciences Ag Device for quantitative analysis of a metabolite profile

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102460160A (zh) * 2009-06-02 2012-05-16 比奥克拉泰斯生命科学股份公司 用于评估肾脏疾病的新生物标记物
CN102460160B (zh) * 2009-06-02 2015-08-19 比奥克拉泰斯生命科学股份公司 用于评估肾脏疾病的新生物标记物
CN104769434B (zh) * 2012-08-13 2018-01-02 亥姆霍兹慕尼黑中心德国研究健康与环境有限责任公司 用于2型糖尿病的生物标志物
CN107727850A (zh) * 2017-10-10 2018-02-23 北京康华源科技发展有限公司 一种侧向流层析检测反应启动控制方法
CN107798981A (zh) * 2017-10-31 2018-03-13 楚雄医药高等专科学校 一种永久性教学用微囊标本片及其制作方法
CN109030673A (zh) * 2018-07-04 2018-12-18 易达精准（杭州）科技有限公司 干血片中免疫抑制剂的检测方法以及检测试剂盒
CN111704654A (zh) * 2020-06-18 2020-09-25 上海交通大学医学院附属仁济医院 肽类化合物及其制备方法与应用
CN111704654B (zh) * 2020-06-18 2021-12-03 上海交通大学医学院附属仁济医院 肽类化合物及其制备方法与应用
CN117538530A (zh) * 2023-11-07 2024-02-09 中国医学科学院肿瘤医院 一种检测转移性乳腺癌的生物标志组合物和试剂盒及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2007003344A2 (en) 2007-01-11
NZ563431A (en) 2012-05-25
CN100594501C (zh) 2010-03-17
ES2452025T3 (es) 2014-03-31
US8265877B2 (en) 2012-09-11
CA2608963C (en) 2014-08-26
EP1875401A2 (en) 2008-01-09
JP2008547030A (ja) 2008-12-25
JP2008547031A (ja) 2008-12-25
DK1875401T3 (da) 2014-04-07
RU2391672C2 (ru) 2010-06-10
BRPI0613478B8 (pt) 2021-07-27
NO339319B1 (no) 2016-11-28
US20070003965A1 (en) 2007-01-04
KR100967573B1 (ko) 2010-07-05
US8116983B2 (en) 2012-02-14
CA2608965C (en) 2014-08-19
US20070004044A1 (en) 2007-01-04
CA2608965A1 (en) 2007-01-11
AU2006265381A1 (en) 2007-01-11
AU2006265381B2 (en) 2010-06-10
JP4829297B2 (ja) 2011-12-07
IL187470A (en) 2015-02-26
RU2008102835A (ru) 2009-08-10
KR20080025092A (ko) 2008-03-19
EP1897014B1 (en) 2014-01-15
DK1897014T3 (en) 2014-03-10
BRPI0613478B1 (pt) 2019-07-09
IL187470A0 (en) 2008-03-20
WO2007003344A3 (en) 2007-04-26
NO20080559L (no) 2008-01-30
EP1897014A1 (en) 2008-03-12
BRPI0613478A2 (pt) 2012-01-17
WO2007003343A1 (en) 2007-01-11
IN2014DN02241A (zh) 2015-07-10
JP5155160B2 (ja) 2013-02-27
CA2608963A1 (en) 2007-01-11
EP1875401B1 (en) 2014-03-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100594501C (zh) 用于代谢物谱的定量分析的装置
Frey et al. Emerging trends in paper spray mass spectrometry: Microsampling, storage, direct analysis, and applications
BRPI0711557A2 (pt) métodos para determinar uma quantidade de um primeiro analito em uma amostra pela espectroscopia de massa e para triar sangue pela espectroscopia de massa quanto a pelo menos um distúrbio, e, substrato sólido
Anderton et al. Identification of a lipid‐related peak set to enhance the interpretation of TOF‐SIMS data from model and cellular membranes
WO2011076859A1 (en) Method and kit for determining metabolites on dried blood spot samples
Saunders et al. Spatial single cell metabolomics: current challenges and future developments
Ayre et al. Dried matrix spoting–an innovative sample preparation tool in bioanalysis
Anschütz et al. Atmospheric‐pressure scanning microprobe matrix‐assisted laser desorption/ionization mass spectrometry imaging of Neospora caninum‐infected cell monolayers
Savelieva Scopes of bioanalytical chromatography–mass spectrometry
CN113330314A (zh) 用于关于完整蛋白质水平的基于LC-MS的HbA1c测量的自动化样品工作流程
Li et al. Development and validation of an LC-MS/MS method for quantification of dipalmitoylphosphatidylcholine as a promising biomarker for renal failure in urine
US20230333130A1 (en) System and Method for Disposing of a Reaction Vessel of a Mass Spectrometry System
Rathore et al. Omics and systems view of innate immune pathways
Alolga et al. Dried Blood Spots in Therapeutic Drug Monitoring and Toxicology
CN114791465A (zh) 氨基酸与肉碱串联质谱衍生化检测法
Kaur et al. Quantitation of heat-shock proteins in clinical samples using mass spectrometry
Bakker et al. Modern chemical ion sensor concepts based on electrochemically and optically triggered phase transfer

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant