CN101169367A - 岩藻糖苷酶诊断试剂盒及岩藻糖苷酶活性浓度测定方法 - Google Patents
岩藻糖苷酶诊断试剂盒及岩藻糖苷酶活性浓度测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101169367A CN101169367A CNA2006100972155A CN200610097215A CN101169367A CN 101169367 A CN101169367 A CN 101169367A CN A2006100972155 A CNA2006100972155 A CN A2006100972155A CN 200610097215 A CN200610097215 A CN 200610097215A CN 101169367 A CN101169367 A CN 101169367A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- reagent
- fucosidase
- cupferron
- stabilizing agent
- coenzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种岩藻糖苷酶诊断试剂盒,同时本发明还涉及测定岩藻糖苷酶活性的方法原理、试剂的组成及成分,属于医学检验测定技术领域。本发明的试剂盒主要成分包括:缓冲液、岩藻糖脱氢酶、岩藻糖苷、辅酶、硫酸铜、新铜试剂及稳定剂;通过将样品与试剂按一定的体积比混合,使之发生一系列的酶促及化学反应,再将反应物置于可见光分析仪下,检测主波长455nm处吸光度上升的速度,从而测算出岩藻糖苷酶的活性大小。采用本发明完全可以通过可见光分析仪器得出所需的测定结果,便于推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种岩藻糖苷酶诊断试剂盒,同时本发明还涉及测定岩藻糖苷酶活性的方法,属于医学检验测定技术领域。
背景技术
1980年法国学者Deugnier等研究发现,原发性肝癌患者血清岩藻糖苷酶升高,并被众多的研究所证实。故有人提出岩藻糖苷酶可作为原发性肝癌的肿瘤标志物,与甲胎蛋白联合或参照应用大大提高了诊疗价值。近年来研究发现,岩藻糖苷酶对某些疾病的发生、发展均具有重要意义。
血清岩藻糖苷酶测定主要有荧光法和比色法。比色法以4-硝基苯α-L-岩藻吡喃糖苷或4-硝基苯α-L-岩藻糖苷为底物显色,本法简便,设备要求不高,国内外广泛采用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是:提出一种利用酶促反应(EnzymaticCatalytic Reaction)技术及偶联化学反应显色技术,连续监测455nm波长处吸光度的变化,得以测定岩藻糖苷酶活性的方法,同时,本发明还将给出用以实现该方法的岩藻糖苷酶诊断试剂盒,采用该试剂盒不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行岩藻糖苷酶活性测定,而且测定速度快、准确度高,因而可以得到切实的推广应用。
本发明岩藻糖苷酶活性测定方法原理如下:
岩藻糖苷 岩藻糖苷酶 岩藻糖+相应醇类
岩藻糖+辅酶 岩藻糖脱氢酶 岩藻酮糖+还原型辅酶
还原型辅酶+Cu2+——→辅酶+Cu+
Cu++新铜试剂——→Cu+-新铜试剂复合物
岩藻酮糖:Fuculose
新铜试剂:Neocuproine
这种方法应用岩藻糖苷酶酶促反应连续监测法,岩藻糖苷酶酶解岩藻糖苷释放岩藻糖,通过岩藻糖脱氢酶的作用产生还原型辅酶,为了增加反应灵敏度,还原型辅酶还原二价铜离子生成一价铜离子,一价铜离子和新铜试剂(Neocuproine)形成黄色复合物。将最终反应物置于可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下,检测Cu+-新铜试剂复合物在主波长455nm吸光度上升的速度,测算出岩藻糖苷酶的活性大小测定结果。
实验表明,从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑,无论是单剂或双剂,如下成分关系的本发明岩藻糖苷酶诊断试剂盒较为理想:
缓冲液 pH 8.5 100mmol/L
稳定剂 20mmol/L
岩藻糖脱氢酶 200U/L
岩藻糖苷 5mmol/L
辅酶(氧化型) 4mmol/L
硫酸铜 50mmol/L
新铜试剂 100mmol/L
本发明的岩藻糖苷酶诊断试剂盒可以是单剂,包括:
缓冲液、稳定剂、岩藻糖脱氢酶、岩藻糖苷、辅酶、硫酸铜、新铜试剂。试剂盒可以是干粉状态,在使用前加水溶解后使用;也可以配制成液体试剂,直接使用。
也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂:
试剂1
缓冲液、稳定剂、辅酶、硫酸铜、新铜试剂。
试剂2
缓冲液、稳定剂、岩藻糖脱氢酶、岩藻糖苷。
岩藻糖脱氢酶、岩藻糖苷、辅酶、硫酸铜、新铜试剂在试剂1或试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态,在使用前加水溶解后使用;也可以配制成液体试剂,直接使用。
也可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂:
试剂1
缓冲液、稳定剂、辅酶。
试剂2
缓冲液、稳定剂、硫酸铜、新铜试剂。
试剂3
缓冲液、稳定剂、岩藻糖脱氢酶、岩藻糖苷。
岩藻糖脱氢酶、岩藻糖苷、辅酶、硫酸铜、新铜试剂在试剂1、试剂2或试剂3中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态,在使用前加水溶解后使用;也可以配制成液体试剂,直接使用。
无论是单剂、双剂还是三剂,本发明测定岩藻糖苷酶活性的方法,其氧化型辅酶可以是NADP+、NAD+或thio-NAD+中的一种。
具体实施方式
下面结合实施例子对本发明作进一步的说明。
实施例一
本实施例的岩藻糖苷酶诊断试剂为单试剂,包括:
三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L
稳定剂 50mmol/L
岩藻糖脱氢酶 200U/L
岩藻糖苷 5mmol/L
辅酶(氧化型) 4mmol/L
硫酸铜 50mmol/L
新铜试剂 100mmol/L
试剂全部溶解配好后,分装入瓶,进行冷冻干燥,制成干粉试剂;使用前,加入纯净水,复溶后使用。
在全自动生化分析仪上设定:温度37℃,反应时间10分钟,起始吸光度≤0.1,测试主波长455nm,测试副波长660nm,被测岩藻糖苷酶样品与试剂的体积比例为1/25,反应方向为正反应(上升反应),延迟时间大约1分钟左右,检测时间2分钟左右。
加入样品和试剂后,使之混合并发生反应,最终将反应物置于生化分析仪下,检测主波长455nm吸光度上升的速度,从而测算出岩藻糖苷酶的活性大小。
实施例二
本实施例的岩藻糖苷酶诊断试剂为双试剂,包括:
试剂1
三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L
稳定剂 50mmol/L
辅酶(氧化型) 4mmol/L
硫酸铜 50mmol/L
新铜试剂 100mmol/L
试剂2
三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L
稳定剂 50mmol/L
岩藻糖脱氢酶 200U/L
岩藻糖苷 5mmol/L
试剂全部溶解配好后,分装入瓶,制成液体双试剂,可以直接使用。
在全自动生化分析仪上设定:温度37℃,反应时间10分钟,起始吸光度≤0.1,测试主波长455nm,测试副波长660nm,被测岩藻糖苷酶样品与试剂1、试剂2的体积比例为2/20/5,反应方向为正反应(上升反应),延迟时间大约1分钟左右,检测时间2分钟左右。
加入样品和试剂后,使之混合并发生反应,最终将反应物置于生化分析
仪下,检测主波长455nm吸光度上升的速度,从而测算出岩藻糖苷酶的
活性大小。
实施例三
本实施例的岩藻糖苷酶诊断试剂为三试剂,包括:
试剂1
三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L
稳定剂 50mmol/L
辅酶(氧化型) 3mmol/L
试剂2
三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L
稳定剂 50mmol/L
硫酸铜 50mmol/L
新铜试剂 100mmol/L
试剂3
三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L
稳定剂 50mmol/L
岩藻糖脱氢酶 200U/L
岩藻糖苷 5mmol/L
试剂全部溶解配好后,分装入瓶,制成液体三试剂,可以直接使用。
测定岩藻糖苷酶活性时,在全自动生化分析仪上设定:温度37℃,反应时间10分钟,起始吸光度≤0.1,测试主波长455nm,测试副波长660nm,被测岩藻糖苷酶样品与试剂1、试剂2、试剂3的体积比例为4/40/5/5,反应方向为正反应(上升反应),延迟时间大约1分钟左右,检测时间2分钟左右。
加入样品和试剂后,使之混合并发生反应,最终将反应物置于生化分析仪下,检测主波长455nm吸光度上升的速度,从而测算出岩藻糖苷酶的活性大小。
总之,实验证明,采用本发明的测定方法完全可以通过一般生化分析仪器得出所需的测定结果,并且灵敏度高、精确度好、不受内外源物质的污染,便于推广应用。
Claims (6)
2.一种岩藻糖苷酶诊断试剂盒,主要成分包括:
缓冲液 20——500mmol/L
稳定剂 1——50mmol/L
岩藻糖脱氢酶 50——10000U/L
岩藻糖苷 2——30mmol/L
辅酶(氧化型) 0.5——9.0mmol/L
硫酸铜 10——100mmol/L
新铜试剂 20——200mmol/L
其特征在于:试剂盒可以是干粉状态,在使用前加水溶解后使用;也可以配制成液体试剂,直接使用。
3.根据权利要求2所述岩藻糖苷酶诊断试剂盒,其特征在于:
由缓冲液、稳定剂、岩藻糖脱氢酶(L-fucose dehydrogenase EC 1.1.1.122、EC 1.1.1.116)、岩藻糖苷、辅酶、硫酸铜(CuSO4)、新铜试剂(2,9-二甲基-1,10-菲罗啉;Neocuproine)组成单剂试剂。
4.根据权利要求2所述岩藻糖苷酶诊断试剂盒,其特征在于:
由缓冲液、稳定剂、岩藻糖脱氢酶(L-fucose dehydrogenase EC 1.1.1.122、EC 1.1.1.116)、岩藻糖苷、辅酶、硫酸铜(CuSO4)、新铜试剂(2,9-二甲基-1,10-菲罗啉;Neocuproine)组成双剂试剂;试剂1,由缓冲液、辅酶、硫酸铜、新铜试剂组成;试剂2,由缓冲液、稳定剂、岩藻糖脱氢酶、岩藻糖苷组成。
5.根据权利要求2所述岩藻糖苷酶诊断试剂盒,其特征在于:
由缓冲液、稳定剂、岩藻糖脱氢酶(L-fucose dehydrogenase EC 1.1.1.122、EC 1.1.1.116)、岩藻糖苷、辅酶、硫酸铜(CuSO4)、新铜试剂(2,9-二甲基-1,10-菲罗啉Neocuproine)组成多剂试剂;试剂1,由缓冲液、稳定剂、辅酶组成;试剂2,由缓冲液、稳定剂、硫酸铜、新铜试剂组成;试剂3,由缓冲液、稳定剂、岩藻糖脱氢酶、岩藻糖苷组成。岩藻糖脱氢酶、岩藻糖苷、辅酶、硫酸铜、新铜试剂在试剂1、试剂2或试剂3中的位置可以不限。
6.根据权利要求2所述岩藻糖苷酶诊断试剂盒,其特征在于:还包括稳定剂1-4000mmol/L或0.1%-100%体积比。所述稳定剂为:硫酸铵(AmmoniaSulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(Propylene Glycol)、乙二醇(Ethylene glycol)及防腐剂中的至少一种。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNA2006100972155A CN101169367A (zh) | 2006-10-24 | 2006-10-24 | 岩藻糖苷酶诊断试剂盒及岩藻糖苷酶活性浓度测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNA2006100972155A CN101169367A (zh) | 2006-10-24 | 2006-10-24 | 岩藻糖苷酶诊断试剂盒及岩藻糖苷酶活性浓度测定方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101169367A true CN101169367A (zh) | 2008-04-30 |
Family
ID=39390063
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNA2006100972155A Pending CN101169367A (zh) | 2006-10-24 | 2006-10-24 | 岩藻糖苷酶诊断试剂盒及岩藻糖苷酶活性浓度测定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN101169367A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111154833A (zh) * | 2020-01-03 | 2020-05-15 | 浙江夸克生物科技有限公司 | 一种α-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒 |
-
2006
- 2006-10-24 CN CNA2006100972155A patent/CN101169367A/zh active Pending
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111154833A (zh) * | 2020-01-03 | 2020-05-15 | 浙江夸克生物科技有限公司 | 一种α-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒 |
CN111154833B (zh) * | 2020-01-03 | 2022-08-23 | 浙江夸克生物科技有限公司 | 一种α-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101329345A (zh) | 谷胱甘肽诊断/测定试剂盒及谷胱甘肽的浓度测定方法 | |
CN101169366A (zh) | 岩藻糖苷酶诊断试剂盒及岩藻糖苷酶活性测定方法 | |
CN101169367A (zh) | 岩藻糖苷酶诊断试剂盒及岩藻糖苷酶活性浓度测定方法 | |
CN101169368A (zh) | 岩藻糖苷酶诊断试剂盒及岩藻糖苷酶活性浓度测定方法 | |
CN101173901A (zh) | N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶诊断试剂盒及N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性测定方法 | |
CN101464332A (zh) | 硒诊断/测定试剂盒及硒的浓度测定方法 | |
CN101173902A (zh) | N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶诊断试剂盒及N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性测定方法 | |
CN101173931A (zh) | 锌诊断/测定试剂盒及锌的浓度测定方法 | |
CN101329264A (zh) | 蔗糖酶诊断/测定试剂盒及蔗糖酶活性浓度测定方法 | |
CN101750354A (zh) | 腺苷脱氨酶诊断试剂(盒)及腺苷脱氨酶活性浓度测定方法 | |
CN101173903A (zh) | N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶诊断试剂盒及N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性浓度的测定方法 | |
CN101169372A (zh) | 谷氨酸脱氢酶诊断试剂盒及谷氨酸脱氢酶活性浓度测定方法 | |
CN101750355A (zh) | 腺苷脱氨酶诊断试剂(盒)及腺苷脱氨酶活性浓度测定方法 | |
CN101173898A (zh) | 单胺氧化酶诊断试剂盒及单胺氧化酶活性浓度测定方法 | |
CN101464328A (zh) | 硒诊断/测定试剂盒及硒的浓度测定方法 | |
CN101464329A (zh) | 硒诊断/测定试剂盒及硒的浓度测定方法 | |
CN101750382A (zh) | 腺苷脱氨酶诊断试剂(盒)及腺苷脱氨酶活性浓度测定方法 | |
CN101620167A (zh) | 腺苷脱氨酶诊断试剂盒及腺苷脱氨酶活性浓度测定方法 | |
CN101329329A (zh) | 草酸诊断/测定试剂盒及草酸浓度测定方法 | |
CN101329332A (zh) | 草酸诊断/测定试剂盒及草酸浓度测定方法 | |
CN101620066A (zh) | 5’核苷酸酶诊断试剂盒及5’核苷酸酶活性浓度测定方法 | |
CN101464339A (zh) | 硒诊断/测定试剂盒及硒的浓度测定方法 | |
CN101464334A (zh) | 硒诊断/测定试剂盒及硒的浓度测定方法 | |
CN101464331A (zh) | 硒诊断/测定试剂盒及硒的浓度测定方法 | |
CN101464337A (zh) | 硒诊断/测定试剂盒及硒的浓度测定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20080430 |