CN101137665A - 脱氧九酯肽类 - Google Patents

Abstract

本发明涉及九酯肽类，它们的生产方法，和它们在制备用于治疗和/或预防疾病、特别是细菌感染性疾病的药物中的应用。

Description

脱氧九酯肽类

本发明涉及九酯肽类(nonadepsipeptides)和它们的制备方法，还涉及它们在制备用于治疗和/或预防疾病、特别是细菌感染性疾病的药物中的应用。

细菌细胞壁是通过许多酶合成的(细胞壁生物合成)并且对微生物的生存和繁殖是必要的。该大分子的结构，还有涉及它的合成的蛋白质，在细菌内是高度保守的。由于它的关键本性和一致性，细胞壁生物合成是新抗生素理想的攻击点(D.W.Green，The bacterial cell wall as a source ofantibacterial targets，Expert Opin.Ther.Targets，2002，6，1-19)。

万古霉素和青霉素是细菌细胞壁生物合成的抑制剂并且代表该作用原理的抗生素功效的成功实例。它们已经在临床上使用了数十年，用于治疗细菌感染，特别是革兰氏阳性病原体的细菌感染。由于耐药微生物的不断出现，例如耐甲氧西林的葡萄球菌(staphylococci)、耐青霉素的肺炎双球菌(pneumococci)和耐万古霉素的肠球菌(enterococci)(F.B aquero，Gram-positive resistance：challenge for the development of new antibiotics，J.Antimicrob.Chemother.，1997，39，Suppl A：1-6；A.P Johnson，D.M.Livermore，G.S.Tillotson，Antimicrobial susceptibility of Gram-positive bacteria：what′scurrent，what′s anticipated？，J.Hosp.Infect.，2001，(49)，Suppl A：3-11)和最近也首次出现的耐万古霉素的葡萄球菌(B.Goldrick，First reported case ofVRSA in the United States，Am.J.Nurs.，2002，102，17)，这些物质正日益丧失它们的治疗功效。

本发明描述了一类新的对于已知类别的抗生素没有交叉抗性的细胞壁生物合成抑制剂。

在US4,754,018中将天然产物溶杆菌素(lysobactin)和一些衍生物描述为具有抗菌活性。在EP-A-196042和JP01132600中还描述了溶杆菌素的分离和抗菌活性。WO04/099239描述了具有抗菌活性的溶杆菌素衍生物。

在O’Sullivan，J.等，J.Antibiot.1988，41，1740-1744，Bonner，D.P等，J.Antibiot.1988，41，1745-1751，Shoji，J.等，J.Antibiot.1988，41，713-718和Tymiak，A.A.等，J.Org.Chem.1989，54，1149-1157中还描述了溶杆菌素和片野菌素A的抗菌活性。

本发明的一个目的是提供具有可比较的或改善的抗菌活性、更好的溶解性和更好的耐受性的备选化合物，该化合物用于人和动物中细菌疾病的治疗。

本发明涉及下式化合物，

其中

R¹表示C₁-C₂-烷基，

其中C₁-C₂-烷基被选自下组的取代基取代：三甲代甲硅烷基，烷氧

羰基，C₃-C₆-环烷基，烷氧基-取代的苯基，2-吡啶基和3-吡啶基，

或

表示C₄-C₈-烷基，

R²表示氢或C₁-C₄-烷基，

R³表示C₁-C₂-烷基，

其中C₁-C₂-烷基被取代基三甲代甲硅烷基取代，

或

表示C₄-C₆-烷基，

R⁴表示氢或甲基，

和它们的盐、它们的溶剂合物和它们的盐的溶剂合物。

本发明的化合物是式(I)和(Ia)的化合物和它们的盐、溶剂合物及其盐的溶剂合物和前药，由式(I)和(Ia)包括的以下提及的各式的化合物和它们的盐、溶剂合物、所述盐的溶剂合物和前药，以及由式(I)和(Ia)包括的作为示例性实施方案的在下文提及的化合物和它们的盐、溶剂合物、所述盐的溶剂合物和前药，就由式(I)和(Ia)所涵盖并且在后来提及的化合物而言，它们还不是盐、溶剂合物、所述盐的溶剂合物和前药。

取决于它们的结构，本发明的化合物以立体异构型(对映异构体，非对映异构体)存在。因此，本发明涉及对映异构体或非对映异构体及其各自的混合物。从对映异构体和/或非对映异构体的这些混合物中，立体异构纯的组分可以以已知方式分离出来是可能的。

如果本发明的化合物可以以互变异构形式存在，本发明包括所有的互变异构形式。

优选用于本发明的目的盐是本发明的化合物的生理可接受的盐。然而，本身不适合于药物应用但是可以用于例如分离或纯化本发明的化合物的盐也被包括在内。

本发明化合物的生理可接受的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸的盐。

本发明的化合物的生理可接受的盐还包括常用的碱的盐，诸如，作为实例，并且优选地碱金属盐(例如，钠和钾盐)，碱土金属盐(例如钙和镁盐)和衍生自氨或具有1-16个碳原子的有机胺的铵盐，所述有机胺诸如作为实例，并且优选地，乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、二甲基氨基乙醇、普鲁卡因、二苄基胺、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸、乙二胺和N-甲基哌啶。

对于本发明的目的而言，溶剂合物指通过与溶剂分子的配位作用形成固体或液体状态的复合物的本发明的化合物的那些形式。水合物是溶剂合物的特殊形式，其中与水发生配位作用。

对于本发明的目的而言，除非另外指出，取代基具有下列含义：

烷基本身以及烷氧基和烷氧羰基中的“alk(烷基)”和“alkyl(烷基)”表示通常具有1至6个、优选1至4个、特别优选1至3个碳原子的直链或支链烷基基团，作为实例并且优选甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、2，2-二甲基丙-1-基、正戊基和正己基。

烷氧基，作为实例并且优选表示甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、叔丁氧基、正戊氧基和正己氧基。

烷氧羰基，作为实例并且优选表示甲氧羰基、乙氧羰基、正丙氧羰基、异丙氧羰基、叔丁氧羰基、正戊氧羰基和正己氧羰基。

环烷基表示通常具有3至6个碳原子的环烷基基团，作为实例并且优选为环丙基，环丁基，环戊基和环己基。

在各基团的分子式中，直线的末端，除了在每种情形中存在^*以外，不表示碳原子或CH₂基团，而是与氮原子的键的组成部分，所述式的基团与所述氮原子连接。

用于本发明目的的优选化合物是下式的那些，

其中

R¹表示C₁-C₂-烷基，

其中C₁-C₂-烷基被选自下组的取代基取代：三甲代甲硅烷基，烷氧羰基，C₃-C₆-环烷基，烷氧基-取代的苯基，2-吡啶基和3-吡啶基，

或

表示C₄-C₈-烷基，

R²表示氢或C₁-C₄-烷基，

R³表示C₁-C₂-烷基，

其中C₁-C₂-烷基被取代基三甲代甲硅烷基取代，

或

表示C₄-C₆-烷基，

和它们的盐，它们的溶剂合物和它们的盐的溶剂合物。

优选的化合物还有式(I)的那些，其中

R¹表示C₁-C₂-烷基

其中C₁-C₂-烷基被取代基三甲代甲硅烷基取代，

或

表示C₄-C₆-烷基，

R²表示氢或甲基，

R³表示C₁-C₂-烷基，

其中C₁-C₂-烷基被取代基三甲代甲硅烷基取代，

或

表示C₄-C₆-烷基，

和它们的盐，它们的溶剂合物和它们的盐的溶剂合物。

特别优选的化合物是式(I)的那些，其中

R¹表示三甲代甲硅烷基甲基或2，2-二甲基丙-1-基，

R²表示氢，

R³表示三甲代甲硅烷基甲基或2，2-二甲基丙-1-基，

和它们的盐，它们的溶剂合物和它们的盐的溶剂合物。

特别优选的化合物是式(I)的那些，其中R¹表示2，2-二甲基丙-1-基。

特别优选的化合物是式(I)的那些，其中R²表示氢。

特别优选的化合物是式(I)的那些，其中R³表示2，2-二甲基丙-1-基。

在原子团的各个组合或优选组合中的具体指出的原子团的定义，也任意地被独立于所述原子团的各个组合的不同组合的原子团定义所替代。

还非常特别优选两个或更多上述优选范围的组合。

本发明进一步涉及制备式(Ia)的化合物的方法，其中下式的化合物

其中

R⁴具有以上所示含义

与下式化合物反应，

其中

R¹，R²和R³具有以上所示含义，并且

X¹表示卤素，优选溴，氯或氟，或羟基。

如果X¹是卤素，则所述反应一般发生在惰性溶剂中，当合适时存在碱，优选在大气压下在-30℃至50℃的温度范围内。

惰性溶剂是，例如，四氢呋喃、二氯甲烷、吡啶、二噁烷或二甲基甲酰胺；优选吡啶或二甲基甲酰胺。

优选的惰性溶剂是四氢呋喃或二氯甲烷。

碱是，例如，三乙胺、二异丙基乙胺或N-甲基吗啉；优选二异丙基乙胺。

如果X¹是羟基，所述反应一般在脱水剂存在下在惰性溶剂中进行，当合适时在碱存在下，优选在大气压下在-30℃至50℃的温度范围内。

惰性溶剂是，例如，卤代烃诸如二氯甲烷或三氯甲烷，烃诸如苯、硝基甲烷、二噁烷、二甲基甲酰胺或乙腈。同样可以采用这些溶剂的混合物。特别优选二氯甲烷或二甲基甲酰胺。

因此适合的脱水剂的实例有碳二亚胺诸如N，N′-二乙基-，N，N，′-二丙基-，N，N′-二异丙基-，N，N′-二环己基碳二亚胺，N-(3-二甲基氨基异丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，N-环己基碳二亚胺-N‘-丙基氧基甲基聚苯乙烯(PS-碳二亚胺)或羰基化合物诸如羰二咪唑，或1，2-噁唑鎓(oxazolium)化合物诸如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-硫酸盐或2-叔-丁基-5-甲基异噁唑鎓高氯酸盐，或酰基氨基化合物诸如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉，或丙烷膦酸酐，或氯甲酸异丁酯，或二(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯，或苯并***基氧基-三-(二甲基氨基)六氟膦酸鏻，或O-(苯并***-1-基)-N，N，N′,N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)，2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TPTU)或O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N，N，N′,N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)，或1-羟基苯并***(HOBt)，或苯并***-1-基氧基三-(二甲基氨基)六氟磷酸鏻(BOP)，或N-羟基琥珀酰亚胺，或这些与碱的混合物。

碱是，例如，碱金属碳酸盐，诸如，例如，碳酸钠或碳酸钾，或碳酸氢盐，或有机碱诸如三烷基胺，例如，三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、4-二甲基氨基吡啶或二异丙基乙胺。

优选利用HATU或利用EDC在HOBt存在下进行所述缩合。

式(III)的化合物任选含有保护基，因此在这些情况下式(II)化合物与式(III)化合物的反应之后根据本领域技术人员已知的方法，例如使用三氟乙酸或通过氢解除去所述保护基。

可以从溶杆菌素(实施例1A)通过双Edmann降解法合成式(II)的化合物，如实验部分中实施例2A至5A的实验部分中所述。

式(III)的化合物是已知的或者可以由相应的原材料通过已知方法、例如通过下列合成方案合成：

合成方案1：

本发明化合物的制备可以通过下列合成方案举例说明。

合成方案2：

合成方案3：

本发明的化合物显示不能被预测的有价值的药理学活性谱。它们显示抗菌活性。

它们因此适用于用作治疗和/或预防人和动物中疾病的药物。

本发明的化合物特征在于与溶杆菌素相比更好的溶解性。

所述九酯肽类作为细菌细胞壁生物合成的抑制剂。

本发明的制剂针对细菌和类细菌的微生物是特别有效的。它们因此特别适于由这些病原体在人和兽医学中所引起的局部和全身感染的预防和化学疗法。

原则上，可以将本发明的制剂用于针对拥有细菌细胞壁(胞壁质球囊)或相应酶***的全部细菌和类细菌的微生物，例如下列病原体或下列病原体的混合物：

革兰氏阴性球菌(淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae))还有革兰氏阴性杆菌诸如肠杆菌科(Enterobacteriaceae)，例如大肠杆菌(Escherichia coli)、流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)、假单胞菌属(Pseudomonas)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)(弗氏柠檬酸杆菌(C.freundii)、C.divernis)、沙门氏菌属(Salmonella)和志贺氏杆菌属(Shigella)；此外还有肠杆菌属(Enterobacter)(产气肠杆菌(E.aerogenes)、成团肠杆菌(E.agglomerans)、哈夫尼菌属(Hafnia)、沙雷氏菌属(Serratia)(粘质沙雷氏菌(S.marcescens))、普罗威登斯菌属(Providencia)、耶尔森氏菌属(Yersinia)，还有不动杆菌属(Acinetobacter)、布兰汉氏球菌属(Branhamella)和衣原体(Chlamydia)。而且，所述抗菌谱包括严格厌氧菌诸如，例如，脆弱拟杆菌(Bacteroidesfragilis)，消化球菌属(Peptococcus)、消化链球菌属(Peptostreptococcus)的代表，还有梭状芽胞杆菌属(Clostridium)；此外还有分枝杆菌属(Mycobacteria)，例如结核分枝杆菌(M tuberculosus)。本发明的化合物显示对于革兰氏阳性球菌的特别显著的效果，所述革兰氏阳性球菌例如葡萄球菌(Staphylococci)(金黄色葡萄球菌(S.aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、溶血葡萄球菌(S.haemolyticus)、肉葡萄球菌(S.carnosus))、肠球菌属(enterococci)(粪肠球菌(E.faecalis)、屎肠球菌(E.faecium))和链球菌属(streptococci)(无乳链球菌(S.agalactiae)、肺炎链球菌(S.pneumoniae)、化脓链球菌(S.pyogenes))。

上述病原体列表仅应被解释为是例举性的而绝非限制性的。可以提到的由所述病原体或混合感染所引起并且可以通过本发明的制剂预防、改善或治愈的疾病例如有：

在人中的感染性疾病，例如，无并发症的和并发的***，无并发症的皮肤和表皮感染，并发的皮肤和软组织感染，医院中获得性肺炎和作为门诊患者、医院的肺炎，慢性支气管炎的急性恶化和继发细菌感染，急性中耳炎，急性鼻窦炎，链球菌咽炎，细菌性脑膜炎，无并发症的***和非-***尿道炎/***，急性***炎，心内膜炎，无并发症的和并发的腹内感染，妇科感染，***疾病，细菌性***病，急性和慢性骨髓炎，急性细菌性关节炎，发热性中性白细胞减少患者(febrile neutropenicpatients)中的经验疗法，还有菌血症(bacteraemias)，MRSA感染，急性传染性腹泻，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染，手术后的感染，牙原性感染(odontogenic infections)，眼科感染，手术后的感染(包括门静脉周脓肿、创伤感染、胆道感染，乳腺炎和急性阑尾炎)，囊性纤维化病和支气管扩张症。

除人之外，还可以在其它物种中治疗细菌感染。可以提到的实例是：

猪：腹泻、肠源性毒血症(enterotoxaemia)、败血症、痢疾、沙门氏菌病、子宫炎-乳腺炎-乳泌缺乏综合征(agalactiae syndrome)、乳腺炎；

反刍动物(牛、绵羊、山羊)：腹泻、败血症、支气管性肺炎、沙门氏菌病、巴斯德菌病、生殖器感染；

马：支气管性肺炎、关节病、分娩的和分娩后感染、沙门氏菌病；

狗和猫：支气管肺炎、腹泻、皮炎、耳炎、***、***炎；

家禽(小鸡、火鸡、鹌鹑、鸽子、观赏鸟类及其它)：大肠杆菌感染、慢性呼吸道疾病、沙门氏菌病、巴斯德菌病、鹦鹉热。

它同样可以在饲养和抚养生产性和观赏用鱼类中治疗细菌病，所述抗菌谱从而在上述病原体上还延伸到病原体诸如，例如，巴斯德菌属(Pasteurella)、布鲁氏菌属(Brucella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、李斯特菌属(Listeria)、丹毒丝菌属(Erysipelothris)、棒状杆菌(Corynebacteria)、疏螺旋体属(Borellia)、密螺旋体(Treponema)、诺卡氏菌属(Nocardia)、立克次氏体(Rickettsia)、耶尔森氏菌属(Yersinia)。

本发明还涉及本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病，特别是细菌感染性疾病的应用。

本发明还涉及本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病，特别是上述疾病的应用。

本发明还涉及本发明的化合物用于生产治疗和/或预防疾病、特别是上述疾病的药物的应用。

优选将本发明的化合物用于生产适于预防和/或治疗细菌疾病的药物。

本发明还涉及利用抗菌有效量的本发明化合物治疗和/或预防疾病的方法，所述疾病特别是上述疾病。

本发明还涉及包含至少一种本发明化合物和至少一种或多种另外的活性化合物的药物，特别是用于治疗和/或预防上述疾病。组合用的优选活性化合物是抗菌活性的化合物，其具有不同的活性谱，特别是补充的活性谱，和/或对本发明的化合物是有协同作用的。

本发明的化合物可以全身和/或局部起作用。为此目的，它们可以以适合的方式进行施用，所述方式诸如，例如通过口服的、肠胃外的、经肺的、经鼻的、舌下的、舌的、颊的、直肠的、皮肤的、透皮的、结膜的、耳的途径，或作为植入物或支架。

本发明的化合物可以以适合于这些给药途径的给药形式进行施用。

适合于口服给药的是这样的给药形式，其按照现有技术发挥功能并且快速地和/或以改进的方式递送本发明的化合物，并且其包括晶体形式和/或非晶形形式和/或溶解形式的本发明的化合物，诸如，例如片剂(未包衣的或包衣片剂，例如具有延迟溶解或者是不可溶的并且控制本发明化合物释放的肠溶衣或包衣)，快速在口腔中崩解的片剂或薄膜/糯米纸囊剂，薄膜/冻干物，胶囊(例如硬或软明胶胶囊)，糖衣片剂，颗粒剂，丸剂，粉末，乳剂，混悬剂，气溶胶或溶液。

肠胃外给药的发生可以避免吸收步骤(例如，静脉内、动脉内、心脏内、脊髓内或腰椎内)，或包含吸收(例如，肌内、皮下、皮内、经皮或腹膜内)。适合于肠胃外给药的给药形式特别是，用于注射和输注的，以溶液、混悬液、乳剂、冻干物或无菌粉末形式存在的制剂。

适合于其它给药途径的实例是用于吸入的药物形式(特别是粉末吸气器，喷雾器)，滴鼻剂，溶液，喷雾剂；可以通过舌、舌下或颊施用的片剂，薄膜/糯米纸囊剂或胶囊；栓剂，用于眼和耳的制剂，***胶囊，水性混悬液(洗剂，振摇混合物)，亲脂性混悬液，软膏剂，乳膏剂，透皮治疗***(如，例如贴片)，乳，糊剂，泡沫，扑粉，植入物或支架。

可以将本发明的化合物转化成为所述的给药形式。这可以以本身已知的方式通过混合以惰性、非毒性的药用的赋形剂来进行。这些赋形剂包括，特别是，载体(例如微晶纤维素，乳糖，甘露醇)，溶剂(例如液体聚乙二醇)，乳化剂和分散剂或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠，聚氧基失水山梨糖醇油酸酯)，粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮)，合成的和天然的聚合物(例如白蛋白)，稳定剂(例如抗氧化剂诸如抗坏血酸)，颜料(例如无机颜料诸如氧化铁)或味道和/或气味矫正剂。

本发明还涉及这样的药物和将其用于前述目的的应用，所述药物包括至少一种本发明的化合物，以及通常地一种或多种惰性、非毒性药用的赋形剂。

通常，以约0.001到100mg/kg，优选地约0.1到10mg/kg体重的静脉内给药量施用从而获得有效效果被证明有利的，并且口服给药所用的剂量是约0.01到50mg/kg，优选地0.5到10mg/kg体重。

然而，可能需要的是，当需要时偏离提及的量，其具体地作为体重、给药途径、对活性成分的个体行为、制剂类型和在施用发生过程中的时间或间隔的函数。因此，在某些情形中以少于前述最小量进行的施用可以是充分的，而在其它情形中，必须超过提及的上限。在更大量的施用的情形中，可以推荐将这些分成一天内的多个单独剂量。

除非另外指出，在下述测试中的百分比是重量百分比；实施例中的产率是摩尔百分比；份是重量份。液体/液体溶液的溶剂比率、稀释比率和浓缩在每种情形中都是基于体积。

A.实施例

缩写

Area               (峰)面积

BHI                脑心浸液

Boc                叔-丁氧羰基

br.                宽信号(在NMR光谱中)

calc.              计算值

conc.              浓缩的

d                  双峰(在NMR光谱中)

DCI                直接化学电离(在MS中)

DCM                氯甲烷

DIEA               N，N-二异丙基乙胺

DMF                N，N-二甲基甲酰胺

DMSO               二甲亚砜

EA                 酸乙酯(乙酸乙基酯)

EDC                1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(也是

                   EDCI)

EDCxHCl            1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐

EI                 电子碰撞电离(MS中)

ESI                电喷雾电离(MS中)

Ex.                实施例

fnd.               实验值

Gen.               一般地

h                  小时

HATU               邻-(7-氮杂苯并***-1-基)-N，N，N‘，N‘-四甲基脲鎓六

                   氟磷酸盐

HOBt               1-羟基苯并***

HPLC               高压或高效液相色谱法

HR                 高分辨率

i.V.               真空

LC-MS              液相色谱-偶联质谱法

LDA                二异丙基氨基化锂

m                  中间(在UV和IR光谱中)

m                  多重峰(在NMR光谱中)

MALDI              基体-辅助的激光脱附/电离

MIC                最低抑制浓度

min                分钟(单数)/分钟(复数)

Mp.                熔点

MRSA               耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌

MS                 质谱法

NCCLS              国家临床实验室标准委员会(National Committee

                   for Clinical Laboratory Standards)

neg.               负的

NMM                N-甲基吗啉

NMR                核磁共振光谱法

ofth.              理论值的

p.a.               分析级(per analysi)

Pd-C               披钯碳

perc.              百分比

pos.               正的

quant.             定量

RP-HPLC            反相HPLC

RT                 室温

R_t                 保留时间(在HPLC中)

s                  强(在UV和IR光谱中)

s                  单峰(在NMR光谱中)

satd.              饱和的

TBTU               邻-(苯并***-1-基)-N，N，N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸

                   盐

TCTU               邻-(1H-6-氯苯并***-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四

                   氟硼酸盐

TFA                三氟乙酸

TFE                2，2，2-三氟乙醇

THF                四氢呋喃

TLC                薄层色谱法

TOF                飞行时间

UV                 紫外线

vis                可见的

VRSA               耐万古霉素的金黄色葡萄球菌

w                  弱(在UV和IR光谱中)

Z，Cbz             苄氧羰基

文献

对于肽和环酯肽(cyclodepsipeptides)的命名法，参考：

1.AGuide to IUPAC Nomenclature of Organic Compounds(Recommendations1993)，1993，Blackwell Scientific publications.

2.Nomenclature and symbolism for amino acids and peptides.Recommendations1983.IUPAC-IUB Joint Commission on BiochemicalNomenclature，UK.Biochemical Journal1984，219，345-373.以及引用的文献。

通用方法LC-MS，HR-MS，HPLC和凝胶色谱法

方法1(HPLC)：仪器：HP1100，具有DAD(G1315A)和自动取样器(G1329A)，自动取样器therm(G1330A，5℃)，脱气器(G1322A)和双泵(G1312A)；前置柱：Waters Symmetry C-18，10x2.1mm，3.5μm；分析柱：Waters Symmetry C-18，50×2.1mm，3.5μm；柱温：45℃；洗脱剂A：水/0.05％三氟乙酸；洗脱剂B：乙腈/0.05％三氟乙酸；流速：0.4ml/min.；梯度9min内0-100％B，此后在100％B下3min，此后再生柱。

方法2(LC-MS)：仪器：Micromass LCT；电离化：ESI正/负；HP1100，具有DAD和自动取样器；炉40℃；柱：Waters Symmetry C-18，50x2.1mm，3.5μm；洗脱剂A：0.1％甲酸/乙腈，洗脱剂B：0.1％甲酸/水；流速：0.5ml/min.；梯度：0-1min0％A，1-6min90％A，6-8min100％A，8-10min100％A，10-150％A。

方法3(HPLC)：仪器：Gilson Abimed HPLC；UV检测器254nm；双泵***；柱：Nucleosil RP-18，7μm；250×50mm；流速：30ml/min；洗脱剂A：水/0.1％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈/0.1％三氟乙酸；梯度：0-40min20-25％B，40-60min25％B，60-110min25-50％B，110-120min50％B，120-130min50-100％B，130-160min100％B，随后再生色谱柱。

方法4(HPLC)：仪器：Gilson Abimed HPLC；UV检测器254nm；双泵***；柱：Nucleosil RP-18，7μm；250×50mm；流速：40ml/min；洗脱剂A：水/0.05％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈/0.05％三氟乙酸；梯度：0-105min20-25％B，105-111min25％B，111-131min25-27％B，131-157min27-35％B，157-192min35-40％B，192-207min40-45％B，随后再生色谱柱。

方法5(HPLC)：仪器：Gilson Abimed HPLC；UV检测器254nm；双泵***；柱：Nucleosil RP-18，7μm；250x50mm；流速：40ml/min；洗脱剂A：水/0.05％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈/0.05％三氟乙酸；梯度：0-40min20-25％B，40-105min25％B，105-130min25-27％B，130-170min27-40％B，170-190min40％B，190-210min40-45％B，随后再生色谱柱。

方法6(在Sephadex LH-20上的凝胶色谱法)：在不加压下在Sephadex LH-20(Pharmacia)上进行凝胶色谱分离。根据UV活性(UV检测器，254nm，Knauer)进行分级(级分收集器ISCO Foxy200)，柱尺寸：32×7cm(1000-100μmol规模)；30×4cm(100-10μmol规模)；25×2cm(10-1μmol规模)。

方法7(制备HPLC；Symmetry)：仪器：Gilson Abimed HPLC；UV检测器210nm；双泵***；柱：SymmetryPrep^TMC₁₈，Waters，7μm；300x19mm；流速：20ml/min；洗脱剂A：水中的0.05％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈中的0.05％三氟乙酸；梯度：0-3min10％B，3-30min梯度斜度(斜度)10-90％B，30-38min90％B，38-45min10％B.

方法8(制备HPLC；Symmetry；TFA)：仪器：Gilson Abimed HPLC；UV检测器210nm；双泵***；柱：SymmetryPrep^TMC₁₈，Waters，7μm；300x19mm；流速：7ml/min；洗脱剂A：水/0.1-0.25％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-8min5％B，8-40min5-60％B，40-60min60％B，60-75min60-100％B，75-80min100％B，随后再生色谱柱。

方法9(制备HPLC；Kromasil，乙酸)：仪器：Gilson Abimed HPLC；UV检测器210nm；双泵***；柱：Kromasil-100A C₁₈，5μm；250×20mm；流速：25ml/min；洗脱剂A：水/0.25-0.5％乙酸，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-3min5％B，3-30min5-100％B，30-38min100％B，随后再生色谱柱。

方法10(制备HPLC；Symmetry；对于终产物灵敏)：仪器：Gilson AbimedHPLC；UV检测器210nm；双泵***；柱：SymmetryPrep^TMC₁₈，Waters，7μm；300×19mm；洗脱剂A：在水中0.05％三氟乙酸，洗脱剂B：在乙腈中0.05％三氟乙酸；梯度：0-5min5％B，流速20ml/min，5-30min的5至60％B的梯度斜度，具有下列流速增加：从6min起22ml/min，从10min起23ml/min，从15min起24ml/min；30-35min的60％至98％B的梯度斜度，从38min起流速降低至21ml/min；40-45min10％B。

方法11(LC-MS)：仪器类型MS：Micromass ZQ；仪器类型HPLC：HP1100系列；UV DAD；柱：Grom-Sil120ODS-4HE50x2mm，3.0μm；洗脱剂A：水/0.025％甲酸/l，洗脱剂B：乙腈/0.025％甲酸；梯度：0-2.9min0-70％B，2.9-3.1min70-90％B，3.1-4.5min70-90％B；炉：50℃，流速：0.8ml/min，UV检测：210nm.

方法12(LC-MS)：仪器类型MS：Micromass LCT(ESI pos./neg.)；仪器类型HPLC：HP1100系列；UV DAD1100系列；柱SymmetryPrep^TMC₁₈，Waters，50x2.1mm，3.5μm；洗脱剂A：水/0.1％甲酸，洗脱剂B：乙腈/0.1％甲酸；梯度：0-1min0％B，1-5.5min0-95％B，5.5-8min95％B，8-8.1min95-0％B，8.1-10min0％B，随后再生色谱柱。炉：40℃，流速：0.5ml/min(在8.1-10min短时间至1ml/min)，UV检测：210nm.

方法13(HPLC)：仪器类型HPLC：HP1050系列；UV DAD1100系列；柱SymmetryPrep^TMC₁₈，Waters，50x2.1mm，3.5μm；洗脱剂A：水/0.05％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-9min0-100％B，9-11min100％B，11-12min100-0％B，随后再生色谱柱。炉：40℃，流速：0.4ml/min，UV检测：210nm。

方法14(LC-MS)：仪器类型MS：Micromass ZQ；仪器类型HPLC：Waters Alliance2795；柱：Phenomenex Synergi2μm Hydro-RP Mercury20x4mm；洗脱剂A：水/0.25％甲酸，洗脱剂B：乙腈/0.25％甲酸；梯度：0.0-2.5min，90-30％A，流速1-2ml/min，2.5-3.0min，30-5％A，流速2.0min，3.0-4.5min，5％A；炉：50℃；UV检测：210nm.

方法15(分析HPLC)：仪器类型HPLC：HP1050系列；UV DAD1100系列；柱：Kromasil C₁₈，60x2mm，3.5μm；洗脱剂A：水/0.5％高氯酸，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-0.5min2％B，0.5-4.5min2-90％B，4.5-9.0min90％B，9.0-9.2min90-2％B，9.2-10.0min2％B；流速：0.75ml/min，炉：30℃，UV检测210nm。

方法16(LC-MS)：仪器：Micromass Quattro LCZ和HPLC Agilent系列1100；柱：Phenomenex Synergi2μHydro-RP Mercury20mm x4mm；洗脱剂A：11水+0.5ml的50％甲酸，洗脱剂B：11的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度：0.0min90％A→2.5min30％A→3.0min5％A→4.5min5％A；流速：0.0min1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min2ml/min；炉：50℃；UV检测：208-400nm。

方法17(LC-MS)：仪器类型MS：Micromass ZQ；仪器类型HPLC：HP1100系列；UV DAD；柱：Phenomenex Synergi2μHydro-RP Mercury20mm x4mm；洗脱剂A：1l水+0.5ml的50％甲酸，洗脱剂B：1l的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度：0.0min90％A→2.5min30％A→3.0min5％A→4.5min5％A；流速：0.0min1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min.2ml/min；炉：50℃；UV检测：210nm。

方法18(LC-MS)：仪器：Micromass Quattro LCZ和HPLC Agilent系列1100；柱：Phenomenex Synergi2μm Hydro-RP Mercury20mm x4mm；洗脱剂A：1l水+0.5ml的50％甲酸，洗脱剂B：1l的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度：0.0min90％A→2.5min30％A→3.0min5％A→4.5min5％A；流速：0.0min1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min2ml/min；炉：50℃；UV检测：208-400nm。

方法19(分析HPLC)：仪器：Agilent1100，具有DAD(G1315B)，双泵(G1312A)，自动取样器(G1313A)，溶剂脱气器(G1379A)和柱恒温器(G1316A)；柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C84.6x150x5mm；柱温：30℃；洗脱剂A：0.05％70％高氯酸，在水中；洗脱剂B：乙腈；流速：2.00ml/min；梯度：0-1min10％B，斜度，4-5min90％B，斜度，5.5min10％B。

方法20(MALDI-MS)：在装配了TOF/TOF离子光学***和200HzNd：YAG激光器(355nm)的4700Proteomics Analyzer(Applied Biosystems，Framingham，MA，USA)上进行MALDI-MS/MS研究。准分子离子在离子源中使用8kV加速，使用电子偏转器(MS1)选择，并在布置在MS1和MS2之间的冲击室中与氩原子撞击。获得的碎片离子使用15kV再加速，并使用第二次飞行质量分析仪(MS2)进行表征。

方法21(TOF-HR-MS)：使用Micromass LCT仪器(毛细管电压：3.2KV，锥形电压(cone voltage)：42V，源极温度：120℃，去溶剂化温度：280℃)记录TOF-HR-MS-ESI+光谱。为此，将输液泵(Harvard Instrument)用于进样。将亮氨酸脑磷脂(enkephalin)(Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu)用作标准。方法22(制备HPLC)：仪器：Gilson Abimed HPLC；UV检测器210nm；双泵***；柱：Reprosil ODS-A，5μm，250x20mm；洗脱剂A：在水中的0.2％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈；流速：25ml/min；柱温40℃；0-10min20％B，10-15min80％B。

方法23(FT-ICR-HR-MS)：在高分辨率Apex II傅里叶变换离子回旋共振质谱计(Bruker Daltonik GmbH，Bremen)上进行质量精密测量，所述质谱计配置了7特斯拉磁铁、外部电喷雾离子源和基于Unix的XMASS数据***。质量分辨率约为40，000(50％谷值定义(valley definition))。方法24(LC-MS)：仪器：Micromass Platform LCZ，具有HPLC Agilent系列1100；柱：Phenomenex Synergi2μHydro-RP Mercury20mm x4mm；洗脱剂A：11水+0.5ml的50％甲酸，洗脱剂B：11的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度：0.0min90％A→2.5min30％A→3.0min5％A→4.5min5％A；流速：0.0min1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min2ml/min；炉：50℃；UV检测：210nm。

方法25(制备HPLC)仪器：Gilson Abimed HPLC；UV检测器210nm；双泵***；柱：Grom-Sil SNo.4051120ODS-4HE，10μm，250×40mm；洗脱剂A：在水中0.1％三氟乙酸，洗脱剂B：在乙腈中0.1％三氟乙酸；流速：50ml/min；0-3min10％B，3-27min梯度斜度，27-35min95％B，35-40min10％B。

一般工作步骤

一般工作步骤1(Edman^0.5和1.5)

在氩气保护气体的气氛下将异硫氰酸苯酯(50mmol)滴加到无水吡啶(30ml)中的无N-末端的肽(0.3mmol)的溶液中。将反应混合物在37℃下搅拌(约1小时)直至分析HPLC检查(方法13)指示充分转化(>95％)。在温度控制下(<40℃)真空浓缩反应混合物，然后冻干。

一般工作步骤2(Edman^1.0和2.0)

在氩气保护气体的气氛下，将肽硫脲(0.2mmol)作为固体用无水三氟乙酸在剧烈搅拌下处理，然后在40℃搅拌(约20min)直至分析HPLC检查指示充分转化(>95％)。将反应混合物在室温下(温控)真空快速浓缩。为了将粗产物与其余的三氟乙酸分离，将粗产物置入二氯甲烷中，再次真空去除溶剂。将该过程使用甲苯(两次)和使用二氯甲烷(两次)重复多次。最后，将粗产物冻干。

一般工作步骤3(还原性胺化)

(脱氧(二肽)酯实施例25A至37A和实施例51A至54A的制备)

将N-保护的氨基醛(1.2-1.3eq.)，胺(氨基酯或实施例3A，为盐酸盐或TFA盐)(1eq.)和乙酸钠(1eq.)最初提供在无水DMF中并在0℃下用氰基硼氢钠(2eq.)处理。从0℃至RT搅拌获得的溶液直至胺完全反应(通过分析HPLC(方法19)或LC-MS(方法17)测定反应)。

对于小批次(可达约0.7mmol)，然后将全部的反应混合物通过HPLC(方法7)纯化。对于较大批次，将混合物首先通过Sephadex柱(方法6)预纯化，随后通过制备HPLC(方法7)再次纯化获得的产物。通过冻干适当的级分来分离产物。

含有吡啶基的化合物通常通过该方法提供吡啶基-氰基硼烷。在本情形中，将这溶解在乙醇中并在回流下加热24小时。获得游离的脱氧二肽酸酯(deoxodipeptidic acid ester)。这用少许二甲亚砜处理，在Rotavapor上除去乙醇并通过HPLC(方法7)纯化。

一般工作步骤4(来自甲酯的脱氧(二肽)酸)

(制备实施例38A至49A)

将脱氧(二肽)甲酯溶解在甲醇中并与过量的氢氧化锂(5-10eq.，在水中的1N溶液)在RT下搅拌直至分析HPLC(方法19)显示完全水解。然后用1N盐酸将混合物酸化，在Rotavapor上浓缩并通过制备HPLC纯化。通过冻干适当的级分分离产物。

一般工作步骤5(从苄基酯氢解释放脱氧(二肽)酸)

(制备实施例50A)

将脱氧(二肽)苄基酯溶解在乙醇(10-15ml/mmol)中并在1atm.的氢下在作为催化剂的Pd(10％，在碳上)(40-50mg/mmol)的存在下氢化。在反应完成后(通过HPLC(方法19)检测)，滤去催化剂并用甲醇洗涤，然后在旋转蒸发仪上浓缩滤液。高真空下干燥残余物。

一般工作步骤6(用Ed2.0缩合脱氧(二肽)酸)

(制备实施例55A至67A)

将脱氧(二肽)酸(2eq.)和实施例5A的化合物(1eq.)在氩气下和冰冷却下提供在DMF中，加入NMM(4eq.)，HATU(2.1eq.)和再次NMM(5eq.)，将混合物在0℃下搅拌直至反应完全(通过分析HPLC(方法19)或LC-MS(方法17)测定反应)。对于小批次(可达约0.2mmol)，然后将全部的反应混合物通过HPLC(方法7)纯化。对于较大批次，将混合物首先通过Sephadex柱(方法6)预纯化，随后通过制备HPLC(方法7)再次纯化获得的产物。通过冻干适当的级分来分离产物。

一般工作步骤7(去除叔丁氧羰基保护基)

(制备实施例1-6)

将Boc-保护的原材料溶解在二氯甲烷/TFA3∶1(20-200ml/mmol)中并在RT下搅拌直至反应完成(5-20min.，通过HPLC(方法19)检查)。随后，将混合物用1，2-二氯乙烷稀释并在Rotavapor上浓缩。将残余物置入水/乙腈，冻干，然后再次溶解在水中并通过制备HPLC(方法10)纯化。通过冻干适当的级分获得终产物。

一般工作步骤8(去除苄氧羰基保护基)

(制备实施例7-17)

将Z-保护的原材料溶解在异丙醇(15-100ml/mmol)中并在1atm的氢下在作为催化剂的Pd(10％，在碳上)(50-200mg/mmol)的存在下氢化。在反应完成后(通过HPLC(方法19)检测)，滤去催化剂并用甲醇洗涤，然后在旋转蒸发仪上浓缩滤液。将残余物溶解在水中并通过制备HPLC(方法10)纯化。通过冻干适当的级分获得终产物。

一般工作步骤9(对于MALDI-MS的水解样品制备)

将待打开的酯肽(例如，溶杆菌素，0.05μmol)首先用硼酸盐-盐酸缓冲液(Merck)pH8(250μl)在微管中处理。使得混合物静置过夜，加入乙酸(100μl)，将样品冻干。在无进一步纯化步骤的情形下通过MALDI-MS测序研究粗产物。

起始化合物

实施例1A

D-亮氨酰-N¹-{(3S，6S，12S，15S，18R，21S，24S，27S，28R)-6-[(1S)-2-氨基-1-羟基-2-氧代乙基]-18-(3-{[氨基(亚氨基)甲基]氨基}丙基)-12-[(1S)-1-羟基乙基]-3-(羟基甲基)-24-[(1R)-1-羟基-2-甲基丙基]-21-异丁基-15-[(1S)-1-甲基-丙基]-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-28-苯基-1-氧杂-4，7，10，13，16，19，22，25-八氮杂环二十八碳烷-27-基}-L-亮氨酰胺(亮氨酰胺)双三氟乙酸盐(溶杆菌素)

发酵：

培养基：

YM：酵母-麦芽琼脂：D-葡萄糖(4g/l)，酵母提取物(4g/l)，麦芽提取物(10g/l)，1升的离子交换树脂水(Lewatit water)。在灭菌(121℃下20分钟)之前将pH调节至7.2。

HPM：甘露糖醇(5.4g/l)，酵母提取物(5g/l)，肉蛋白胨(3g/l)。

工作保藏：将冻干的菌株(ATCC53042)在50ml的YM培养基中培养。

烧瓶发酵：用2ml所述工作保藏接种物1升锥形瓶中的150ml的YM培养基或100ml的HPM培养基并且使其在28℃在240rpm的振荡器上培养30-48小时。

301的发酵：将300ml的烧瓶发酵(HPM培养基)用于接种无菌的301营养培养基溶液(每升1ml消泡剂SAG5693)。将该培养物在28℃，300rpm并用0.3vvm的无菌空气通气下生长21小时。用1M盐酸将pH在pH＝7.2保持恒定。总计，在培养周期期间加入880ml的1M盐酸。

主要培养(2001)：将11锥形瓶中的15×150ml的YM培养基用2ml的工作保藏接种并使其在振荡器上在28℃和240rpm下生长48小时。将2250ml的该培养物用于接种无菌的2001营养培养基溶液(YM)(每升1ml消泡剂SAG5693)并使其在28℃，150rpm和用0.3vvm无菌空气通气下生长18.5小时。

每小时取样(50ml)以检验所述发酵过程。将1ml的甲醇(0.5％三氟乙酸)加入到2ml的该培养液并且将所述混合物通过0.45μm过滤器过滤。将30μl的该悬浮液通过HPLC(方法1和方法2)分析。

在18.5小时后，将主要培养物的培养液在17000rpm下分成上清液和沉淀物。

离析：

利用浓缩的三氟乙酸或氢氧化钠溶液将所述上清液(183 1)调节到pH6.5-7并且装载到Lewapol柱(OC1064，601容量)上。随后用纯水、水/甲醇1∶1并随后用纯甲醇(含有0.1％三氟乙酸)进行洗脱。将该有机相真空浓缩成11.51的残留水残液。

将残留的水相结合到硅胶C18并分离(MPLC，Biotage Flash75，75×30cm，KP-C18-WP，15-20μm，流速：30ml/min；洗脱液：含有0.1％三氟乙酸的乙腈/水；梯度：10％，15％和40％乙腈)。将含有实施例1A主要量的40％乙腈相真空浓缩并随后冷冻干燥(约13g)。将该固体混合物首先在制备HPLC(方法7)上，随后通过Sephadex LH-20(5×70cm，乙腈/水1∶1，在每个情况下含有0.05％三氟乙酸)上的凝胶过滤和进一步的制备HPLC(方法4)分离成1.2g的部分。

该过程提供2250mg的实施例1A。

将所述沉淀物置入41的丙酮/水4∶1中，加入2kg的C盐，将所述混合物利用三氟乙酸调节到pH＝6，搅拌并离心。将所述溶剂真空浓缩，并且将残余物冷冻干燥。将获得的冻干物(89.9g)置入甲醇中，过滤，浓缩并在硅胶(方法5)上分离。然后将实施例1A通过凝胶过滤(Sephadex LH-20，5×68cm，水/乙腈9∶1(含有0.05％三氟乙酸)，流速：2.7ml/min，级分大小13.5ml)纯化而得到纯物质。

该过程得到447mg的实施例1A。

HPLC(方法1)：R_t＝6.19min

MS(ESIpos)：m/z＝1277(M+H)⁺

¹H NMR(500.13MHz，d₆-DMSO)：δ＝0.75(d，3H)，0.78(d，6H)，0.80(t，3H)，0.82(d，3H)，0.90(d，3H)，0.91(d，3H)，0.92(d，3H)，0.95(d，3H)，0.96(d，3H)，1.05(m，1H)，1.19(d，3H)，1.25(m，2H)，1.50(m，4H)，1.51(m，2H)，1.55(m，1H)，1.61(m，1H)，1.65(m，1H)，1.84(m，1H)，1.85(m，1H)，1.86(m，1H)，1.89(m，1H)，1.95(m，1H)，2.75(m，2H)，3.40(m，1H)，3.52(m，2H)，3.53(dd，1H)，3.64(m，2H)，3.66(m，1H)，3.68(dd，1H)，3.73(m，2H)，4.00(dd，1H)，4.02(br.，1H)，4.13(br.，1H)，4.32(dd，1H)，4.39(t，1H)，4.55(m，1H)，4.75(dd，1H)，5.19(t，1H)，5.29(d，1H)，5.30(br.，1H)，5.58(m，2H)，6.68(m，3H)，6.89(d，1H)，6.93(m，3H)，6.94(br.，1H)，6.98(d，1H)，7.12(br.，1H)，7.20(br.，2H)，7.23(m，2H)，7.42(m，2H)，7.54(d，1H)，7.58(d，1H)，8.32(br.，1H)，9.18(br.，1H)，9.20(m，2H)，9.50(br.，1H)。

¹³C-NMR(125.77MHz，d₆-DMSO)：δ＝10.3，15.3，19.0，19.2，19.6，20.0，20.9，22.0，22.4，23.0，23.2，24.3，24.4，25.0，25.4，26.0，27.8，30.9，35.4，39.5，40.8，40.9，41.6，44.1，51.5，52.7，55.9，56.2，56.4，57.9，58.8，60.2，61.1，62.6，70.1，71.6，71.7，75.5，128.1，128.6，136.7，156.8，168.2，170.1，170.4，171.2，171.5，171.9，172.2，172.4，173.7。

根据文献(T.Kato，H.Hinoo，Y.Terui，J.Antibiot.，1988，61，719-725)中描述的指定进行所述信号的指定(assignment)。

实施例2A

N-(苯胺基硫羰基(carbonothioyl))-D-亮氨酰-N¹-{(3S，6S，12S，15S，18R，21S，24S，27S，28R)-6-[(1S)-2-氨基-1-羟基-2-氧代乙基]-18-(3-{[氨基(亚氨基)-甲基]氨基}丙基)-12-[(1S)-1-羟基乙基]-3-(羟基甲基)-24-[(1R)-1-羟基-2-甲基丙基]-21-异丁基-15-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-28-苯基-1-氧杂-4，7，10，13，16，19，22，25-八氮杂环二十八碳烷-27-基}-L-亮氨酰胺单三氟乙酸盐

{N-(苯胺基硫羰基)溶杆菌素单三氟乙酸盐}

按照一般工作步骤1，将溶杆菌素双三氟乙酸盐(500mg，0.33mmol)(实施例1A)反应。获得600mg(quant.)的产物，其可以以未纯化形式进一步反应。

为了进一步纯化，可以将粗产物凝胶-色谱分离(方法6；甲醇/0.1％乙酸)。将含有产物的级分在室温下真空浓缩并然后冻干。以80％产率获得产物。

HPLC/UV-vis(方法13)：R_t＝6.84min，

λ_max(定性的)＝220nm(s)，248(m)，269(m).

LC-MS(方法11)：R_t＝2.64min；

MS(ESIpos.)：m/z(％)＝706.5(50)[M+2H]²⁺，1412(20)[M+H]⁺；

LC-MS(方法12)：R_t＝4.95min；

MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1412(100)[M+H]⁺。

实施例3A

N¹-{(3S，6S，12S，15S，18R，21S，24S，27S，28R)-6-[(1S)-2-氨基-1-羟基-2-氧代乙基]-18-(3-{[氨基(亚氨基)甲基]氨基}丙基)-12-[(1S)-1-羟基乙基]-3-(羟基甲基)-24-[(1R)-1-羟基-2-甲基丙基]-21-异丁基-15-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-28-苯基-1-氧杂-4，7，10，13，16，19，22，25-八氮杂环二十八碳烷-27-基}-L-亮氨酰胺双三氟乙酸盐

{去-D-亮氨酰溶杆菌素双三氟乙酸盐}

按照一般工作步骤2，使得硫脲(实施例2A)(300mg，0.2mmol)反应。将粗产物进行凝胶色谱分离(方法6；甲醇/0.25％乙酸)，然后通过制备HPLC(方法8)精制。获得147mg(理论值的65％)的产物。

HPLC/UV-vis(方法13)：R_t＝4.96min，

λ_max(定性的)＝220nm(s)，255-270(w).

LC-MS(方法12)：R_t＝3.84min；

MS(ESIpos.)：m/z(％)＝582.4(100)[M+2H]²⁺，1164(20)[M+H]⁺。

FT-ICR-HR-MS(方法23)：

C₅₂H₈₈N₁₄O₁₆ [M+2H]²⁺计算值582.32459，实验值582.32460；

C₅₂H₈₇N₁₄NaO₁₆ [M+H+Na]²⁺计算值593.31556，实验值593.31564.

对于氨基酸序列测定，将产物的分析样品按照一般工作步骤9进行水解。

MALDI-MS(方法20)：m/z(％)＝1181.7(100)[M+H]⁺。

备选的大规模制备方法：

在氩气气氛下将实施例1A(6.47g，4.30mmol)溶解在吡啶(90ml)中。然后加入异硫氰酸苯酯(1.16g，8.60mmol，2当量)并将反应混合物在37℃下搅拌1小时。随后，在旋转蒸发仪上蒸馏掉溶剂，将残余物在油泵真空下干燥过夜。以6.60g的粗产率获得中间体实施例2A。在不纯化下将中间体进一步反应。为此，在氩气气氛下将实施例2A(6.60g)溶解在三氟乙酸(107ml)中并在室温下搅拌30min。然后将溶液在旋转蒸发仪上真空浓缩，在油泵真空下简短干燥，置入甲基叔丁基醚(250ml)中并剧烈搅拌直至获得粉末状无定形固体。将这用真空过滤收集并用甲基叔丁基醚(200ml)洗涤，然后将其用二氯甲烷洗涤(两次100ml)。将固体转移到烧瓶中并在油泵真空下干燥。以6.0g(quant.)的粗产率获得实施例3A。该产物可以在不进一步纯化下反应。

实施例4A

N²-(苯胺基硫羰基)-N¹-{(3S，6S，12S，15S，18R，21S，24S，27S，28R)-6-[(1S)-2-氨基-1-羟基-2-氧代乙基]-18-(3-{[氨基(亚氨基)甲基]氨基}丙基)-12-[(1S)-1-羟基乙基]-3-(羟基甲基)-24-[(1R)-1-羟基-2-甲基丙基]-21-异丁基-15-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-28-苯基-1-氧杂-4，7，10，13，16，19，22，25-八氮杂环二十八碳烷-27-基}-L-亮氨酰胺单三氟乙酸盐

按照一般工作步骤1，使得去-D-亮氨酰溶杆菌素双三氟乙酸盐(实施例3A，255mg，0.18mmol)反应。获得322mg(quant.)的产物，其可以以未纯化形式进一步反应。

为了进一步纯化，可以将粗产物凝胶-色谱分离(方法6；甲醇/0.1％乙酸)。将含有产物的级分在室温下真空浓缩并然后冻干。

HPLC/UV-vis(方法13)：R_t＝6.56min，

λ_max(定性的)＝220nm(s)，245(m)，268(m)。

LC-MS(方法12)：R_t＝4.85min；

MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1299(100)[M+H]⁺。

实施例5A

(2S)-2-{(3S，6S，12S，15S，18R，21S，24S，27S，28R)-27-氨基-18-(3-{[氨基(亚氨基)甲基]氨基}丙基)-12-[(1S)-1-羟基乙基]-3-(羟基甲基)-24-[(1R)-1-羟基-2-甲基丙基]-21-异丁基-15-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-28-苯基-1-氧杂-4，7，10，13，16，19，22，25-八氮杂环二十八碳烷-6-基}-2-羟基乙酰胺双三氟乙酸盐

{去(1-D-亮氨酰-2-L-亮氨酰)溶杆菌素双三氟乙酸盐}

按照一般工作步骤2，使得硫脲(实施例4A，66mg，34μmol)反应。将粗产物通过快速凝胶色谱法预纯化(方法6；甲醇/0.25％乙酸)。制备HPLC(方法8或方法9，接着随后通过加入TFA(100μmol)将色谱产物双分解)获得45mg(75％的th.)的产物。

HPLC/UV-vis(方法13)：R_t＝4.71min，

λ_max(定性的)＝220nm(s)，255-270(w).

LC-MS(方法11)：R_t＝1.65min；

MS(ESIpos.)：m/z(％)＝526(100)[M+2H]²⁺，1051(15)[M+H]⁺.

备选的大规模制备方法：

在氩气气氛下将实施例化合物3A(6.00g，4.30mmol)溶解在吡啶(92ml)中。然后加入异硫氰酸苯酯(8.75g，64.68mmol，15当量)并将反应混合物在37℃下搅拌1小时。随后，在旋转蒸发仪上蒸馏掉溶剂，将残余物在油泵真空下干燥过夜。以6.0g的粗产率获得实施例4A。在不纯化下将中间体进一步反应。为此，在氩气气氛下将粗制实施例4A溶解在三氟乙酸(82ml)中，并在室温下搅拌30分钟。然后将溶液在真空下在旋转蒸发仪上浓缩，在油泵真空下简短干燥，置入甲基叔丁基醚(250ml)中并剧烈搅拌直至获得粉末状无定形固体。将其用真空-过滤收集并用另外的甲基叔丁基醚(200ml)洗涤，然后将其用两份每份100ml的二氯甲烷洗涤。将固体转移到烧瓶中并在油泵真空下干燥。以5.4g(quant.)的粗产率获得标题化合物。通过制备HPLC(方法22)进一步纯化产物。获得1.79g的标题化合物(理论值的32％)。

来自氨基酸的前体：

实施例6A和实施例7A

按照M.Merget，K.Günther，M.Bernd，E.Günther，R.Tacke，J.Organomet.Chem.2001628，183-194进行合成。通过在手性相上的制备HPLC分离对映异构体(Gilson Abimed HPLC，UV检测器212nm，柱：Daicel Chiralpak AD-H5μm；250x20mm；流速：15ml/min；洗脱剂A：异己烷，洗脱剂B：0.2％乙酸/1％水/2-丙醇；恒溶剂)。

实施例6A

(2R)-N-叔-丁氧羰基-3-三甲代甲硅烷基丙氨酸

制备HPLC：R_t＝9.27min

[α]_D ²⁰＝-1.6(c＝0.66，甲醇)

实施例7A

(2S)-N-叔-丁氧羰基-3-三甲代甲硅烷基丙氨酸

制备HPLC：R_t＝4.16min

[α]_D ²⁰＝+1.1(c＝0.83，甲醇)

实施例8A

(2R)-3-三甲代甲硅烷基丙氨酸甲酯盐酸盐

将实施例6A的化合物(300mg)溶解在甲醇(3ml)中并冷却至0℃。在30min.的期间内滴加氯化三甲基硅烷(590mg，4.7eq.)并将混合物升温至RT过夜。在Rotavapor上并随后在高真空下去除挥发性组分。获得目标化合物(224mg，理论值的92％)。

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝8.40(br s，3H)，3.93(dd，J＝5.3，10.9Hz，1H)，3.73(s，3H)，1.71-0.97(m，2H)，0.03(s，9H).

实施例9A

(2R)-N-苄氧羰基-3-三甲代甲硅烷基丙氨酸甲酯

在氩气下在0℃下将实施例8A的化合物(2.0g)提供在THF(40ml)中。加入三乙胺(2.3g，2.4eq.)并随后滴加N-苄氧羰基氧基琥珀酰亚胺(2.83g，1.2eq.)在20ml THF中的溶液。然后将混合物在RT下搅拌过夜，浓缩至一半，用乙酸乙酯稀释，用水洗涤两次和用饱和氯化钠溶液洗涤一次。通过硫酸钠干燥有机相，在旋转蒸发仪上浓缩。通过制备HPLC(方法25)纯化残余物。获得目标化合物(2.32g，理论值的79％)。

HPLC(方法15)：R_t＝4.96min.

MS(DCI/NH₃)：m/z＝327[M+NH₄]⁺(100)；310[M+H]⁺(3).

实施例10A

(2R)-N-苄氧羰基-3-三甲代甲硅烷基丙氨醇(alaninol)

将氯化锂(0.64g，15mmol)和氢化硼钠(0.57g，15mmol)和然后22ml乙醇加入实施例9A(2.32g，7.5mmol)在THF(14ml)中的溶液。在RT下搅拌混合物过夜。对于后加工，在使用冰水冷却下将混合物用柠檬酸溶液(在水中10％)调节至pH4，然后用200ml水稀释，用二氯甲烷萃取三次。通过硫酸镁干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩。将残余物通过HPLC(方法25)分离并真空浓缩适当的级分。获得实施例10A，为油(1.24g，理论值的59％)。

HPLC(方法15)：R_t＝4.48min.；

MS(DCI/NH₃)：m/z＝299[M+NH₄]⁺(100)；282[M+H]⁺(13)；

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝7.33(m，5H)，5.08(s，2H)，4.72(br.m，1H)，3.83(br.m，1H)，3.65(br.m，1H)，3.45(br.m，1H)，2.13(br.s，1H)，0.84-0.58(m，2H)，0.03(s，9H)。

实施例11A

(2R)-N-苄氧羰基-3-三甲代甲硅烷基丙氨醛(alaninal)

在氩气下将吡啶-SO₃复合物(2.04g，12.8mmol)在无水DMSO(12ml)中的溶液在10℃下加入实施例10A(0.36g，1.28mmol)和N，N-二异丙基乙胺(1.65g，12.8mmol)在7ml的DMSO中的溶液。去除冷却浴，随后将混合物搅拌20分钟。加入400ml冰水，用二***萃取溶液三次。用柠檬酸溶液(在水中10％)洗涤合并的有机相两次，用水洗涤一次，用饱和碳酸氢盐溶液洗涤一次，和用饱和氯化钠溶液洗涤一次，通过硫酸镁干燥，过滤和在旋转蒸发仪上浓缩。获得实施例11A，为油(0.39g，理论值的93％)并作为粗产物直接使用。

MS(DCI/NH₃)：m/z＝297[M+NH₄]⁺(100)；280[M+H]⁺(25).

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝9.53(s，1H)，7.35(m，5H)，5.13(s，2H)，1.12(dd，J＝5.8，14.0Hz，1H)，0.78(dd，J＝9.4，14.0Hz，1H)，0.07(s，9H)。

实施例12A

(2R)-N-苄氧羰基-D-3-叔丁基丙氨醇

将硼烷-四氢呋喃复合物在THF(1M，8.14ml，8.14mmol)中的溶液缓慢滴加到N-苄氧羰基-D-(3-叔丁基)丙氨酸二环己基胺盐(1.5g，3.26mmol)在无水THF(15ml)中的冰***液中，然后在1.5小时期间内用搅拌将溶液达到RT。在冷却下用水处理混合物，稍微真空浓缩，用饱和氯化钠溶液稀释并用二***萃取三次。用0.1N盐酸洗涤合并的有机相两次，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤两次，用饱和氯化钠溶液洗涤一次，通过硫酸钠干燥并在旋转蒸发仪上浓缩。通过制备HPLC(方法25)纯化残余物并在旋转蒸发仪上浓缩适当的级分，然后在高真空下干燥。

产率：485mg(理论值的56％).

HPLC(方法15)：R_t＝4.4min.

MS(DCI/NH₃)：m/z＝283[M+NH₄]⁺(100)；266[M+H]⁺(60).

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝7.35(m，5H)，5.12(s，2H)，4.72(br.d，J＝ca.5H)，3.83(m，1H)，3.63(dd，J＝4.0，10.7Hz，1H)，3.51(dd，J＝6.3，10.7Hz，1H)，1.44(dd，J＝2.9，14.7Hz，1H)，1.28(dd，J＝8.7，14.7Hz，1H)，0.95(s，9H)。

实施例13A

(2R)-N-叔-丁氧羰基-3-三甲代甲硅烷基丙氨醇

按照实施例12A所述的相同方法，使用硼烷-四氢呋喃复合物(2eq.)，该制备从实施例6A(2.45g，9.37mmol)开始进行。在硅胶上色谱分离(二氯甲烷/甲醇100∶3)后获得实施例13A(1.70g，理论值的73％)。

HPLC(方法15)：R_t＝4.4min.

MS(ESI pos)：m/z＝270[M+Na]⁺(46)；192(100)。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝4.60-4.38(br.m，1H)，3.87-3.72(br.m，1H)，3.69-3.56(br.m，1H)，3.50-3.38(br.m，1H)，2.40(br.s，1H)1.44(s，9H)，0.82-0.66(m，2H)，0.04(s，9H)。

实施例14A

(2R)-N-叔-丁氧羰基-3-三甲代甲硅烷基丙氨醛

类似于实施例11A的合成，该标题化合物制备自实施例13A(620mg，2.51mmol)。产率550mg(理论值的80％)。在不进一步纯化下使得实施例14A反应。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝9.50(s，1H)，4.93-4.82(br.m，1H)，4.26(br.q，J＝ca.7-8Hz，1H)，1.44(s，9H)，1.09(br.dd，J＝5.3，14.8Hz，1H)，0.74(dd，J＝10.0，14.8Hz，1H)，0.08(s，9H)。

类似于上述合成步骤，从可商购的氨基酸衍生物制备下列起始化合物：

实施例15A

(2S)-N-苄氧羰基-L-3-叔丁基丙氨醇

HPLC(方法15)：R_t＝4.42min.；

MS(DCI/NH₃)：m/z＝283[M+NH₄]⁺(100)；266[M+H]⁺(58)；

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝7.33(m，5H)，5.11(s，2H)，4.71(m，1H)，3.83(m，1H)，3.62(dd，J＝4.2，10.5Hz，1H)，3.45(dd，J＝6.3，10.9Hz，1H)，1.43(dd，J＝2.9，14.6Hz，1H)，1.29(dd，J＝8.9，14.6，1H)，0.93(s，9H)。

实施例16A

(2S)-N-苄氧羰基-L-3-叔丁基丙氨醛

MS(DCI/NH₃)：m/z＝281[M+NH₄]⁺(100)；264[M+H]⁺(20).

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝9.58(s，1H)，7.36(m，5H)，5.12(s，2H)，5.06(m，1H)，4.33(dt，J＝3.8，8.7Hz，1H)，1.83(dd，J＝3.8，14.6Hz，1H)，1.30(dd，J＝8.3，14.7Hz，1H)，1.00(s，9H)。

实施例17A

(2R)-N-苄氧羰基-D-3-叔丁基丙氨醛

MS(DCI/NH₃)：m/z＝281[M+NH₄]⁺(100)；264[M+H]⁺(18).

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝9.58(s，1H)，7.36(m，5H)，5.12(s，2H)，5.08(m，1H)，4.33(dt，J＝3.8，8.7Hz，1H)，1.83(dd，J＝3.8，14.6Hz，1H)，1.30(dd，J＝8.3，14.7Hz，1H)，1.00(s，9H)。

实施例18A

(2S)-N-苄氧羰基-L-亮氨醛(leucinal)

MS(DCI/NH₃)：m/z＝267[M+NH₄]⁺(100)；250[M+H]⁺(8).

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)：δ＝9.61(s，1H)，7.38(m，5H)，5.18(m，1H)，5.02(s，2H)，4.35(m，1H)，1.62-1.55(m，2H)，1.41(m，1H)，0.96(d，J＝7Hz，3H)，0.94(d，J＝7Hz，3H)。

实施例19A

(2R)-N-苄氧羰基-D-亮氨醛

MS(DCI/NH₃)：m/z＝267[M+NH₄]⁺(100)；250[M+H]⁺(10).

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝9.61(s，1H)，7.38(m，5H)，5.18(m，1H)，5.12(m，2H)，4.35(m，1H)，1.85-1.50(m，2H)，1.41(m，1H)，0.95(m，6H)。

实施例20A

(2S)-N-叔-丁氧羰基-L-3-叔丁基丙氨醛

MS(DCI/NH₃)：m/z＝247[M+NH₄]⁺(15)；230[M+H]⁺(31)，191(100).

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)：δ＝9.58(s，1H)，4.82(m，1H)，4.25(m，1H)，1.80(dd，J＝2，14.6Hz，1H)，1.44(s，9H)，1.25(dd，J＝8.7，14.6Hz，1H)，1.00(s，9H)。

实施例21A

(2R)-N-叔-丁氧羰基-D-3-叔丁基丙氨醛

MS(DCI/NH₃)：m/z＝247[M+NH₄]⁺(13)；230[M+H]⁺(28)，191(100).

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)：δ＝9.58(s，1H)，4.82(m，1H)，4.25(m，1H)，1.80(dd，J＝2，14.6Hz，1H)，1.44(s，9H)，1.25(dd，J＝8.7，14.6Hz，1H)，1.00(s，9H)。

实施例22A

L-β-(3-吡啶基)丙氨酸甲酯二盐酸盐

类似于制备实施例8A，可商购的Boc-L-β-(3-吡啶基)丙氨酸用甲醇中的氯化三甲基硅烷处理。在反应完成后，将反应混合物用二***处理并氯去沉淀的晶体产物。用冷二***洗涤产物并在高真空下干燥。产率：理论值的94％。

HPLC(方法15)：R_t＝4.29min.

¹H-NMR(DMSO，400MHz)：δ＝8.86(s，1H)，8.82(br.s，3H)，8.80(d，J＝5.5Hz，1H)，8.38(d，J＝8.0Hz，1H)，7.92(dd，J＝5.5，8.0Hz，1H)，4.50(m，1H)，3.74(s，3H)，3.38(m[ABX]，2H)。

实施例23A

L-β-(3，4-二甲氧基苯基)丙氨酸甲酯盐酸盐

将可商购的L-β-(3，4-二甲氧基苯基)丙氨酸(225mg，1mmol)提供在甲醇(5ml)中，加入亚硫酰(二)氯(73μl，1eq.)，将混合物在回流下加热1小时，然后在旋转蒸发仪上浓缩并在高真空下干燥。获得277mg的产物。

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝8.55(br.s，3H)，6.89(d，J＝8.0Hz，1H)，(d，J＝1.9Hz，1H)，6.73(dd，J＝1.9，8.0Hz，1H)，4.25(br.t，J＝ca.6Hz，1H)，3.75(s，3H)，3.73(s，3H)，3.71(s，3H)，3.08(d，J＝6.2Hz，2H)。

实施例24A

L-β-叔丁基丙氨酸甲酯氢三氟乙酸盐(hydrotrifluoroacetate)

将(2S)-N-叔-丁氧羰基-L-3-叔丁基丙氨酸甲酯(529mg，2.04mmol)在RT下在TFA/二氯甲烷1∶3(3ml)中搅拌，然后将溶液在旋转蒸发仪上浓缩并在高真空下干燥。获得540mg(理论值的97％)的产物。

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝8.33(br.s，3H)，3.95(dd，J＝4.7，7.5Hz，1H)，3.76(s，3H)，1.80(dd，J＝7.5，14.4Hz，1H)，1.59(dd，J＝4.7，14.4Hz，1H)，0.92(s，9H)。

脱氧二肽酯

按照一般工作步骤3制备下列实施例25A至37A：

实施例25A

N-[(2R)-2-苄氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-β-叔丁基丙氨酸甲酯氢-三氟乙酸盐

(Z-D-β-tBu-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-tBu-Ala-OMe).TFA

制备自实施例17A和实施例24A.产率：220mg(理论值的65％).

HPLC(方法15)：R_t＝4.7min.；

MS(DCI/NH₃)：m/z＝407[M+H]⁺(100)；

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝7.34(s，5H)，5.52(br.d，J＝6.6Hz，1H)，5.14(q，J＝12Hz，1H)，5.06(q，J＝12Hz，1H)，4.09-3.95(m，2H)，3.79(s，3H)，3.25-3.03(m，2H)，2.01-1.78(m，2H)，1.50(dd，J＝7.8，15，1H)，1.34(m，1H)，0.94(s，9H)，0.92(s，9H)。

实施例26A

N-[(2S)-2-苄氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-β-叔丁基丙氨酸甲酯氢-三氟乙酸盐

(Z-L-β-tBu-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-tBu-Ala-OMe).TFA

制备自实施例16A和实施例24A.产率：860mg(理论值的36％)。

HPLC(方法15)：R_t＝4.7min.；

MS(ESI pos)：m/z＝407[M+H]⁺(100)；

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝7.32(m，5H)，5.73(br.d，J＝8.5Hz，1H)，5.13(d，J＝12Hz，1H)，5.04(d，J＝12Hz，1H)，3.99(m，1H)，3.84(m，1H)，3.80(s，3H)，3.33(dd，J＝10.5，12Hz，1H)，2.89(dd，J＝3.5，12Hz，1H)，1.95-1.68(m，2H)，1.53(dd，J＝8.7，14.7，1H)，1.34(br.d，J＝15，1H)，0.93(s，9H)，0.91(s，1H)。

实施例27A

N-[(2R)-2-苄氧羰基氨基-4-甲基戊基]-β-(3-吡啶基)丙氨酸甲酯双氢-三氟乙酸盐

(Z-D-Leu(ΨCH₂NH)-L-β-(3-吡啶基)-Ala-OMe).2TFA

制备自实施例19A和实施例22A.产率：800mg(理论值的60％).

LC-MS(方法16)：R_t＝1.67min.ES⁺：m/z＝414[M+H]⁺，ES^-：458[M+HCOOH-H]⁺；

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝8.68(s，1H)，8.51(d，J＝4.4Hz，1H)，8.1(b r.d，J＝7.2Hz，1H)，7.54(dd，J＝5.1，7.7Hz，1H)，7.38-7.28(m，5H)，5.12(m，1H)，5.03(d，J＝12.2Hz，1H)，4.97(d，J＝12.2Hz，1H)，3.99(m，1H)，3.84(m，1H)，3.79(s，3H)，3.33-2.99(m，3H)，2.85(m，1H)，11.61(m，1H)，1.42-1.20(m，2H)，0.82-0.98(m，6H)。

实施例28A

N-[(2S)-2-苄氧羰基氨基-4-甲基戊基]-β-(3-吡啶基)丙氨酸甲酯双氢-三氟乙酸盐

(Z-L-Leu(ΨCH₂NH)-L-β-(3-吡啶基)-Ala-OMe).2TFA

制备自实施例18A和实施例22A.产率410mg(理论值的48％).

LC-MS(方法14)：R_t＝1.51min.ES⁺：m/z＝414[M+H]⁺，ES^-：458[M+HCOOH-H]^-.

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)：δ＝8.90(s，1H)，8.66(d，J＝5.5Hz，1H)，8.33(d，J＝8.3Hz，1H)，7.69(dd，J＝5.5，7.8Hz，1H)，7.39-7.28(m，5H)，5.36(d，J＝7.1，1H)，5.06(m[AB]，2H)，4.35(t，J＝5.1Hz，1H)，3.84(s，3H)，3.54(d，J＝5.4Hz，1H)，3.28(t，J＝10.6Hz，1H)，3.08(d，J＝10.5Hz，1H)，1.62(m，1H)，1.45(ddd，J＝5.4，9.1，14.3Hz，1H)，1.29(ddd，J＝4.9，8.4，13.9Hz，2H)，0.90(d，J＝6.6Hz，3H)，0.90(d，J＝6.4Hz，3H)。

实施例29A

N-[(2S)-2-叔-丁氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-β-(3-吡啶基)丙氨酸甲酯双-氢三氟乙酸盐

(Boc-L-β-tBu-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-(3-吡啶基)-Ala-OMe).2TFA

制备自实施例20A和实施例22A.产率：160mg(理论值的59％).

HPLC(方法15)：R_t＝4.0min.；

MS(ESI pos)：m/z＝394[M+H]⁺(92)，338(80)，294(100).

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)：δ＝8.51(s，1H)，8.75(d，J＝5.4Hz，1H)，8.48(d，J＝7.8Hz，1H)，7.83(dd，J＝5.5，7.8Hz，1H)，4.98(br.d，J＝6.1Hz，1H)，4.38(t，J＝5.6Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.67-3.52(m，2H)，3.35(t，J＝10.5Hz，1H)，2.98(d，J＝11.7Hz，1H)，1.44(dd，J＝9.0，14.9Hz，1H)，1.40(s，9H)，1.31(dd，J＝2.6，14.8Hz，1H)，0.93(s，9H)。

实施例30A

N-[(2S)-2-苄氧羰基氨基-4-甲基戊基]-β-(3，4-二甲氧基苯基)丙氨酸甲酯氢三氟乙酸盐

(Z-L-Leu(ΨCH₂NH)-L-β-(3，4-二甲氧基苯基)-Ala-OMe).TFA

制备自实施例18A和实施例23A.产率200mg(理论值的32％).

LC-MS(方法16)：R_t＝1.91min.ES⁺：m/z＝473[M+H]⁺，ES^-：517[M+HCOOH-H]^-。

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝9.50-9.00(br.s，2H)，7.40-723(m，6H)，6.90(d，J＝8.1Hz，1H)，6.82(d，J＝1.5Hz，1H)，6.71(dd，J＝1.6，8.2Hz，1H)，5.05(q[AB]，J＝12.5Hz，2H)，4.30(m，1H)，3.85(m，1H)，3.75(s，3H)，3.73(s，3H)，3.64(s，3H)，3.20(dd，J＝5.1，13.7Hz，1H)，3.07-2.93(m，3H)，1.58(m，1H)，1.38(ddd，J＝4.6，9.5，14.1Hz，1H)，1.22(ddd，J＝4.5，8.8，14Hz，1H)，0.86(t，J＝6.4Hz，6H)。

实施例31A

N-[(2R)-2-苄氧羰基氨基-4-甲基戊基]-β-(3，4-二甲氧基苯基)丙氨酸甲酯氢三氟乙酸盐

(Z-D-Leu(ΨCH₂NH)-L-β-(3，4-二甲氧基苯基)-Ala-OMe).TFA

制备自实施例19A和实施例23A.产率190mg(理论值的31％).

LC-MS(方法16)：R_t＝1.66min.ES⁺：m/z＝473[M+H]⁺，ES^-：517[M+HCOOH-H]^-。

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)：δ＝7.38-7.23(m，5H)，6.82-6.77(m，2H)，6.67(dd，J＝1.8，7.8Hz，1H)，5.18(d，J＝6.2Hz，1H)，4.99(s，2H)，4.23(t，J＝5.4Hz，1H)，3.98(m，1H)，3.90(s，3H)，3.81(s，3H)，3.72(s，3H)，3.34(d，J＝12.0Hz，1H)，3.27(d，J＝5.4Hz，2H)，2.94(t，J＝10.8Hz，1H)，1.59(m，1H)，1.42-1.25(m，2H)，0.90(t，J＝6.5Hz，6H)。

实施例32A

N-[(2R)-2-叔-丁氧羰基氨基-3-三甲代甲硅烷基丙基]-β-(3-吡啶基)丙氨酸甲酯氢三氟乙酸盐

(Boc-L-β-三甲代甲硅烷基-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-(3-吡啶基)-Ala-OMe)TFA

制备自实施例14A和实施例22A.产率：270mg(理论值的73％).

HPLC(方法15)：R_t＝4.2min.；

MS(ESI pos)：m/z(％)＝410[M+H]⁺(100)，354(77)，310(73)，293(70)，221(97).

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝8.85(s，1H)，8.71(d，J＝5.2Hz，1H)，8.47(br.d，J＝7.4Hz，1H)，7.80(br.dd，J＝4.8，7.6Hz，1H)，4.94(br.d，J＝6.0Hz，1H)，4.40-4.30(m，1H)，3.99-3.84(m，1H)，3.89(s，3H)，3.65-3.52(m，2H)，3.32(br.t，J＝ca.10Hz，1H)，2.98(br.d，J＝10.5Hz，1H)，1.41(s，9H)，0.90(dd，J＝10.5，15.0，1H)，0.75(dd，J＝4.5，15.0，1H)，0.05(s，9H)。

实施例33A

N-[(2R)-2-叔-丁氧羰基氨基-3-三甲代甲硅烷基丙基]亮氨酸苄酯氢三氟乙酸盐

(Boc-L-β-三甲代甲硅烷基-Ala(ΨCH₂NH)-L-Leu-OBn)TFA

制备自实施例14A和L-亮氨酸苄酯氢甲苯磺酸盐(hydrotosylate)。产率180mg(理论值的28％)。

HPLC(方法15)：R_t＝5.1min。

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)：δ＝7.41-7.34(m，5H)，5.23(m[AB]，2H)，5.06(br.d，J＝ca.5.0Hz，1H)，4.03-3.92(m，2H)，3.30(t，J＝10.5Hz，1H)，2.91(d，J＝11.0Hz，1H)，1.80(m，2H)，1.66(m，1H)，1.43(s，9H)，0.91(d，J＝2.2Hz，3H)，0.89(d，J＝1.9Hz，3H)，0.85(dd，J＝10.3，14.7Hz，1H)，0.68(dd，J＝5.0，14.6Hz，1H)，0.04(s，9H)。

实施例34A

N-[(2R)-2-苄氧羰基氨基-3-三甲代甲硅烷基丙基]-β-叔丁基丙氨酸甲酯氢三氟乙酸盐。

(Z-L-β-三甲代甲硅烷基-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-tBu-Ala-OMe)TFA

制备自实施例11A和实施例24A.产率390mg(理论值的66％).

HPLC(方法15)：R_t＝4.8min。

MS(ESI pos.)：m/z＝423[M+H]⁺(100)。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝7.33(s，5H)，5.63(d，J＝0.9Hz，1H)，5.16(d，J＝11.5Hz，1H)，5.05(d，J＝11.5Hz，1H)，4.07-3.90(m，1H)，3.85(dd，J＝4.5，7.9Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.35(dd，J＝9.8，11.3Hz，1H)，2.93(dd，J＝2.5，12.5Hz，1H)，1.95-1.80(m，2H)，0.95(dd，J＝10.2，14.7Hz，1H)，0.94(s，9H)，0.76(dd，J＝5.1，14.7Hz，1H)，0.03(s，9H)。

实施例35A

N-[(2S)-2-苄氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-β-三甲代甲硅烷基丙氨酸甲酯氢三氟乙酸盐

(Z-L-β-t-丁基-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-(三甲代甲硅烷基)-Ala-OMe)TFA

制备自实施例16A和实施例8A.产率106mg(理论值的37％)。

HPLC(方法15)：R_t＝4.8min。

MS(DCI/NH₃)：m/z＝423(100)[M+H]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝7.32(br.s，5H)，8.76(br.d，J＝9Hz，1H)，5.15(d，J＝12Hz，1H)，5.05(d，J＝12Hz，1H)，4.03(m，1H)，3.94(dd，J＝12.6，3.8Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.34(dd，J＝10，12Hz，1H)，2.87(dd，J＝4，12Hz，1H)，1.53(dd，J＝8.9，14.7Hz，1H)，1.40-1.22(m，2H)，1.12(dd，J＝12.5，13.5Hz，1H)，0.92(s，9H)，0.06(s，9H)。

实施例36A

N-[(2R)-2-苄氧羰基氨基-3-三甲代甲硅烷基丙基]-β-三甲代甲硅烷基丙氨酸甲酯氢三氟乙酸盐

(Z-L-β-三甲代甲硅烷基-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-(三甲代甲硅烷基)-Ala-OMe)TFA

制备自实施例11A和实施例8A.产率54mg(理论值的24％).

HPLC(方法15)：R_t＝4.93min。

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)：δ＝7.36-7.26(m，5H)，5.47(br d，J＝6Hz，1H)，5.16(d，J＝12.4Hz，1H)，5.04(d，J＝12.4Hz，1H)，4.04(m，1H)，3.96(d，J＝10.8Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.32(t，J＝9.7Hz，1H)，2.91(d，J＝11.3Hz，1H)，1.31(br.d，J＝14.2Hz，1H)，1.12(t，J＝12.7Hz，1H)，0.92(dd，J＝9.8，14.9Hz，1H)，0.74(dd，J＝4.8，14.4Hz，1H)，0.06(s，9H)，0.02(s，9H)。

实施例37A

N-[(2S)-2-苄氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-O⁵-叔丁基天冬氨酸甲酯氢三氟乙酸盐

(Z-L-β-tBu-Ala(ΨCH₂NH)-L-Asp(tBu)-OMe)TFA

制备自实施例16A和H-Asp(tBu)-OMe盐酸盐。产率212mg(理论值的46％).

HPLC(方法15)：Rt＝4.7min.

MS(DCI/NH₃)：m/z＝451(100)[M+H]⁺，317(23).

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝7.37-7.27(m，5H)，8.76(br.d，J＝9Hz，1H)，5.53(d，J＝7.9Hz，1H)，5.09(q[AB]，J＝12.2Hz，2H)，4.13(m，1H)，4.07(t，J＝4.7Hz，1H)，3.82(s，3H)，3.37(br.t，J＝10.8Hz，1H)，3.21-2.99(m，3H)，1.53(dd，J＝8.8，14.5Hz，1H)，1.44(s，9H)，1.32(dd，J＝2.7，14.5Hz，1H)，0.92(s，9H)。

脱氧二肽酸

按照一般工作步骤4制备下列脱氧二肽酸(实施例38A至49A)：

实施例38A

N-[(2R)-2-苄氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-β-叔丁基丙氨酸氢三氟乙酸盐

(Z-D-β-tBu-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-tBu-Ala-OH)TFA

制备自实施例25A.产率：103mg(理论值的51％).

HPLC(方法15)：R_t＝4.5min.；

MS(ESI pos.)：m/z＝393[M+H]⁺，(ESI neg.)：391[M-H]^-.

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝9.30-8.60(b r，1H)，7.40-7.22(m，6H)，5.13(d，J＝12.7Hz，1H)，4.97(d，J＝12.7Hz，1H)，3.92(m，1H)，3.84(br.d，J＝8.9Hz，1H)，2.94(br.d，J＝12.1Hz，1H)，2.81(dd，J＝10.2，12.2Hz，1H)，1.80(dd，J＝9.5，13.8Hz，1H)，1.67(br.d，J＝9.5Hz，1H)，1.44(dd，J＝8.6，14.2Hz，1H)，1.30(dd，J＝2.2，14.2Hz，1H)，0.93(s，9H)，0.87(s，9H)。

实施例39A

N-[(2S)-2-苄氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-β-叔丁基丙氨酸氢三氟乙酸盐

(Z-L-β-tBu-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-tBu-Ala-OH)TFA

制备自实施例26A.产率：895mg(理论值的83％)。

HPLC(方法15)：R_t＝4.5min。

MS(ESI pos.)：m/z＝393[M+H]⁺(100)；ES-：391(4).

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝7.40-7.27(m，5H)，7.07(d，J＝9.0Hz，1H)，5.12(d，J＝12.7Hz，1H)，4.99(d，J＝12.7Hz，1H)，3.99-3.85(m，2H)，2.98(m，1H)，2.88(m，1H)，1.81(dd，J＝9.7，14Hz，1H)，1.64(dd，J＝2，14Hz，1H)，1.45-1.30(m，2H)，0.93(s，9H)，0.89(s，9H)。

实施例40A

N-[(2R)-2-苄氧羰基氨基-4-甲基戊基]-β-(3-吡啶基)丙氨酸双(氢三氟乙酸盐)

(Z-D-Leu(ΨCH₂NH)-L-β-(3-吡啶基)-Ala-OH)2TFA

制备自实施例27A.产率：744mg(理论值的95％).

LC-MS(方法14)：R_t＝1.17min.ES⁺：m/z＝400[M+H]⁺，ES^-：398M-H]^-。

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝9.5-8.9(br，2H)，8.62(d，J＝5.1Hz，1H)，8.61(s，1H)，7.97(d，J＝7.8H，1H)，7.61(dd，J＝5.1，7.8Hz，1H)，7.41-7.28(m，6H)，5.13(d，J＝12.5Hz，1H)，5.00(d，J＝12.5Hz，1H)，4.29(dd，J＝5.0，8.8Hz，1H)，3.81(m，1H)，3.39(dd，J＝4.8，14.2Hz，1H)，3.16(dd，J＝9.0，14.2Hz，1H)，3.12(br.d，J＝12.4Hz，1H)，2.97(dd，J＝9.6，12.4Hz，1H)，1.59(m，1H)，1.39(ddd，J＝4.9，9.5，13.6Hz，1H)，1.23(ddd，J＝4.7，8.9，13.6Hz，1H)，0.89(d，J＝6.6Hz，3H)，0.86(d，J＝6.3Hz，3H)。

实施例41A

N-[(2S)-2-苄氧羰基氨基-4-甲基戊基]-β-(3-吡啶基)丙氨酸双(氢三氟乙酸盐)

(Z-L-Leu(ΨCH₂NH)-L-β-(3-吡啶基)-Ala-OH)2TFA

制备自实施例28A.产率：420mg(理论值的74％).

LC-MS(方法14)：R_t＝1.15min。

MS：ES⁺：m/z＝400[M+H]⁺，ES^-：398[M-H]^-。

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝9.5-8.6(br，1H)，8.62(br.s，2H)，7.97(d，J＝7.9H，1H)，7.61(dd，J＝5.2，7.6Hz，1H)，7.43-7.27(m，6H)，5.10(d，J＝12.5Hz，1H)，5.02(d，J＝12.5Hz，1H)，4.32(dd，J＝5.0，8.4Hz，1H)，3.89(m，1H)，3.16(dd，J＝4.8，14.2Hz，1H)，3.18(dd，J＝8.9，14.2Hz，1H)，3.14-2.98(m，2H)，1.59(m，1H)，1.39(ddd，J＝4.9，8.7，13.8Hz，1H)，1.26(ddd，J＝4.7，8.8，13.8Hz，1H)，0.89(d，J＝6.6Hz，3H)，0.86(d，J＝6.3Hz，3H)。

实施例42A

N-[(2S)-2-叔-丁氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-β-(3-吡啶基)丙氨酸双(氢三氟乙酸盐)

(Boc-L-β-tBu-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-(3-吡啶基)-Ala-OH)2TFA

制备自实施例29A.产率：128mg(理论值的77％)。

HPLC(方法15)：R_t＝3.9min。

MS：ES⁺：m/z＝380[M+H]⁺(100)，324(85)，280(88)。

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝9.4-8.3(br，1H)，8.59(d，J＝ca.5Hz，1H)，8.58(s，1H)，7.93(d，J＝7.8H，1H)，7.56(dd，J＝5.1，7.8Hz，1H)，6.89(d，J＝8.9Hz，1H)，4.31(m，1H)，3.86(m，1H)，3.34(dd，J＝4.9，14.1Hz，1H)，3.34(dd，J＝8.9，14.1Hz，1H)，3.10-2.90(m，2H)，1.44(dd，J＝8.9，14.4Hz，1H)，1.39(s，9H)，1.32(dd，J＝2.5，14.4Hz，1H)，0.90(s，9H)。

实施例43A

N-[(2S)-2-苄氧羰基氨基-4-甲基戊基]-β-(3，4-二甲氧基苯基)丙氨酸氢三氟乙酸盐

(Z-L-Leu-(ΨCH₂NH)-L-β-(3，4-二甲氧基苯基)-Ala-OH)TFA

制备自实施例30A.产率140mg(理论值的72％)。

LC-MS(方法17)：Rt＝1.91min.ES⁺：m/z＝459[M+H]⁺，ES^-：457[M-H]^-。

¹H-NMR(DMSO，400MHz)：δ＝9.3-8.4(br，2H)，7.41-7.29(m，5H)，7.26(d，J＝8.7Hz，1H)，6.88(d，J＝8.2Hz，1H)，6.87(s，1H)，6.75(d，J＝8.2Hz，1H)，5.08(d，J＝11.0Hz，1H)，5.00(d，J＝11.0Hz，1H)，4.11(m，1H)，3.82(m，1H)，3.76(s，3H)，3.72(s，3H)，3.12(dd，J＝5.2，14.1Hz，1H)，3.02(dd，J＝7.5，14.1Hz，1H)，3.0-2.83(m，2H)，1.55(m，1H)，1.34(ddd，J＝4.9，9.8，13.9Hz，1H)，1.21(ddd，J＝4.4，8.5，13.6Hz，1H)，0.87(d，J＝6.6Hz，3H)，0.84(d，J＝6.4Hz，3H)。

实施例44A

N-[(2R)-2-苄氧羰基氨基-4-甲基戊基]-β-(3，4-二甲氧基苯基)丙氨酸氢三氟乙酸盐

(Z-D-Leu-(ΨCH₂NH)-L-β-(3，4-二甲氧基苯基)-Ala-OH)TFA

制备自实施例31A.产率126mg(理论值的99％)。

LC-MS(方法17)：R_t＝1.92min.ES⁺：m/z＝459[M+H]⁺，ES^-：457[M-H]^-。

¹H-NMR(DMSO，400MHz)：δ＝9.4-8.4(br，2H)，7.41-7.29(m，5H)，7.27(d，J＝8.7Hz，1H)，6.88(d，J＝8.0Hz，1H)，6.86(s，1H)，6.75(d，J＝8.0Hz，1H)，5.11(d，J＝12.3Hz，1H)，5.00(d，J＝12.3Hz，1H)，4.09(m，1H)，3.88(m，1H)，3.74(s，3H)，3.72(s，3H)，3.15(dd，J＝4.9，13.6Hz，1H)，2.99(dd，J＝7.9，14.1Hz，1H)，2.97(br.d，J＝ca.12Hz，1H)，2.87(dd，J＝9.7，11.8Hz，1H)，1.55(m，1H)，1.35(ddd，J＝4.9，9.8，13.9Hz，1H)，1.21(ddd，J＝4.9，8.5，13.6Hz，1H)，0.87(d，J＝7.8Hz，3H)，0.83(d，J＝7.9Hz，3H)。

实施例45A

N-[(2R)-2-叔-丁氧羰基氨基-3-三甲代甲硅烷基丙基]-β-(3-吡啶基)丙氨酸氢三氟乙酸盐

(Boc-L-β-三甲代甲硅烷基-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-(3-吡啶基)-Ala-OH)TFA

制备自实施例32A.产率56mg(理论值的20％)。

LC-MS(方法17)：R_t＝1.55min.ES⁺：m/z＝396[M+H]⁺，ES^-：394[M-H]^-。

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)(主要旋转异构体)：δ＝9.10(s，1H)，8.68-8.58(m，2H)，7.81(t，J＝6.6Hz，1H)，5.19(br.d，J＝ca.6Hz，1H)，4.19(m，1H)，3.99(m，1H)，3.71-3.57(m，2H)，3.30-3.13(m，2H)，1.42(s，9H)，0.90(dd，J＝10.8，14.8Hz，1H)，0.75(dd，J＝4.4，15Hz，1H)，0.03(s，9H)。

实施例46A

N-[(2R)-2-苄氧羰基氨基-3-三甲代甲硅烷基丙基]-β-叔丁基丙氨酸氢三氟乙酸盐。

(Z-L-β-三甲代甲硅烷基-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-tBu-Ala-OH)TFA

制备自实施例34A.产率：33mg(理论值的47％)。

HPLC(方法15)：R_t＝4.6min.；

MS(ESI pos)：m/z(％)＝409(100)[M+H]⁺，ESI neg.：407(10)[M-H]^-。

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝7.56-7.43(m，5H)，7.29(d，J＝9.0Hz，1H)，5.13(d，J＝12Hz，1H)，5.01(d，J＝12Hz，1H)，4.03-3.80(m，2H)，3.10(m，1H)，2.88(m，1H)，1.84(dd，J＝9.0，14.5Hz，1H)，1.68(br.d，J＝14.5Hz，1H)，0.95(s，9H)，0.82(m，2H)，0.03(s，9H)。

实施例47A

N-[(2S)-2-苄氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-β-三甲代甲硅烷基丙氨酸氢三氟乙酸盐

(Z-L-β-t-丁基-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-(三甲代甲硅烷基)-Ala-OH)TFA

制备自实施例35A.产率：86mg(理论值的88％).

HPLC(方法15)：R_t＝4.6min。

MS：ES⁺：m/z＝409(100)[M+H]⁺；ES^-：407(9)[M-H]^-，113(100).

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝9.00-8.65(br.，2H)，7.42-7.25(m，5H)，7.28(d，J＝9.1Hz，1H)，5.13(d，J＝12.6Hz，1H)，4.99(d，J＝12.6Hz，1H)，3.95-3.80(m，2H)，3.10(m，1H)，2.89(m，1H)，1.44(dd，J＝10.3，14.3Hz，1H)，1.35(br.d，J＝14.3Hz，1H)，1.21(dd，J＝3.9，14.0Hz，1H)，0.88(s，9H)，0.07(s，9H)。

实施例48A

N-[(2R)-2-苄氧羰基氨基-3-三甲代甲硅烷基丙基]-β-三甲代甲硅烷基丙氨酸氢三氟乙酸盐

(Z-L-β-三甲代甲硅烷基-Ala(ΨCH₂NH)-L-β-(三甲代甲硅烷基)-Ala-OH)TFA

制备自实施例36A.产率43mg(理论值的82％)。

LC-MS(方法16)：R_t＝2.15min.ES⁺：m/z＝425[M+H]⁺，ES^-：423[M-H]^-。

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝9.00-8.55(br，s，2H)，7.39-7.22(m，5H)，7.25(d，J＝10.2Hz，1H)，5.10(d，J＝12.3Hz，1H)，4.98(d，J＝12.3Hz，1H)，4.00-3.82(m，2H)，3.01(m，1H)，2.89(m，1H)，1.20(dd，J＝3.9，14.1Hz，1H)，1.03(t，J＝13.3Hz，1H)，0.89-0.75(m，2H)，0.10(s，9H)，0.05(s，9H)。

实施例49A

N-[(2S)-2-苄氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-O⁵-叔丁基天冬氨酸氢三氟乙酸盐

(Z-L-β-tBu-Ala(ΨCH₂NH)-L-Asp(tBu)-OH)TFA

制备自实施例37A.产率78mg(理论值的42％)。

HPLC(方法15)：R_t＝4.5min。

MS：ES⁺：m/z＝437(100)[M+H]⁺，ES^-：435(12)[M-H]^-。

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝9.5-8.0(br.，2H)，7.39-7.27(m，6H)，5.10(d，J＝12.6Hz，1H)，4.99(d，J＝12.6Hz，1H)，4.12(br.s，1H)，3.94-3.83(m，1H)，3.00-2.82(m，2H)，2.82(d，＝5.6Hz，2H)，1.43(m，1H)，1.41(s，9H)，1.30(dd，J＝2.7，14.2Hz，1H)，0.89(s，9H)。

按照一般工作步骤5制备下列实施例50A：

实施例50A

N-[(2R)-2-叔-丁氧羰基氨基-3-三甲代甲硅烷基丙基]亮氨酸氢三氟乙酸盐

(Boc-L-β-三甲代甲硅烷基-Ala(ΨCH₂NH)-L-Leu-OH)TFA

制备自实施例33A.产率155mg(理论值的95％)。

MS(DCI/NH₃)：m/z＝361(100)[M+H]⁺，315(85).

¹H-NMR(DMSO，300MHz)：δ＝9.1-8.5(br，2H)，6.85(d，J＝9.0，1H)，3.98-3.82(m，2H)，3.00(dd，7.6，12.3Hz，1H)，2.87(dd，J＝5.3，12.3Hz，1H)，1.85-1.60(m，3H)，1.40(s，9H)，0.95(d，J＝ca.2Hz，3H)，0.93(d，J＝ca.2Hz，3H)，0.85-0.78(m，2H)，0.03(s，9H)。

氨基醛的还原性胺化和实施例3A

按照一般工作步骤3，由实施例3A制备实施例51A至54A。在该阶段未测定产率，而是只有在去除N-末端保护基以后才测定产率。

将脱氧二肽酸与实施例5A偶联

按照一般工作步骤6，由实施例5A制备下列实施例55A至67A。在该阶段未测定产率，而是只有在去除N-末端保护基以后才测定产率。

实施例68A

(2RS，3S)-3-苄氧羰基氨基-5，5-二甲基-2-羟基己烷

在氩气下在RT下将180mg(0.68mmol)的实施例16A的化合物在1ml的无水二***中的溶液滴加到635μl(0.89mmol)甲基镁化溴(1.4N，在甲苯：THF3∶1中)。然后将反应混合物在温热油浴(50℃)中加热2小时，冷却并用冰管猝灭。将混合物用1N盐酸酸化并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机相通过硫酸钠干燥并在Rotavapor上浓缩。通过制备HPLC(方法25)纯化残余物。获得50mg(理论值的20％)的标题化合物。

LC-MS(方法17)：R_t＝2.34min.MS(ES⁺)：m/z＝280.3[M+H]⁺。

实施例69A

(3S)-3-苄氧羰基氨基-5，5-二甲基-2-氧代己烷

在10℃下将吡啶-SO₃复合物(285mg，1.79mmol)加入实施例68A的化合物(50mg，0.18mmol)和N，N-二异丙基乙胺(310μl，1.79mmol)在2ml的DMSO中的溶液，将混合物缓慢升温至RT。在2h后，将50ml的冰/水加入反应混合物。将混合物用二***萃取四次。将合并的有机相用10％柠檬酸溶液洗涤三次，然后用水洗涤三次和用饱和氯化钠溶液洗涤两次，通过硫酸镁干燥并且在20℃下在Rotavapor上浓缩。在不进一步纯化下将粗产物(30mg，理论值的60％)反应。

LC-MS(方法14)：R_t＝2.26min.MS(ES⁺)：m/z＝278.4[M+H]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)：δ＝7.40-7.28(m，5H)，5.15-5.06(m，3H)，4.40(dt，J＝2.3，9.1Hz，1H)，2.21(s，3H)，1.68(dd，J＝2.3，14.7Hz，1H)，1.24(dd，J＝9.1，14.7Hz，1H)，0.99(s，9H)。

实施例70A

N-{(2RS，3S)-2-{[(苄氧基)羰基]氨基}-5，5-二甲基己-2-基}-4-甲基-L-亮氨酸甲酯

(Z-L-β-叔丁基-Ala(ΨCHMeNH)-L-β-叔丁基-Ala-OMe)

按照一般工作步骤3，该标题化合物制备自实施例69A的化合物(27mg)和实施例24A的化合物(29mg)。产率6mg(理论值的13％)。

LC-MS(方法17)：R_t＝2.29min.MS(ES⁺)：m/z＝421.2[M+H]⁺。

实施例71A

N-{(2RS，3S)-2-{[(苄氧基)羰基]氨基}-5，5-二甲基己-2-基}-4-甲基-L-亮氨酸

(Z-L-β-叔丁基-Ala(ΨCHMeNH)-L-β-叔丁基-Ala-OH)

按照一般工作步骤4，该标题化合物制备自实施例70A的化合物(6mg)。产率3mg(理论值的50％)。分析数据显示非对映异构体。

LC-MS(方法17)：R_t＝2.11min.MS(ES⁺)：m/z＝407.3[M+H]⁺，(ES^-)：m/z＝405.2[M-H]^-。

¹H-NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ＝7.38-7.25(m，5H)，7.20(d，J＝9.1Hz，1H)，5.04和4.98(in each case d，[AB***]，J＝12.7，in each case1H)，3.51(m，1H)，3.18(t，J＝6.2Hz，1H)，2.53(m，1H)，2.50(s，3H)，1.51(dd，J＝3.6，13.9Hz，1H)，1.34-1.23(m，3H)，0.92(s，9H)，ca.0.9(3H)，0.84(s，9H)。

例举性实施方案

按照一般工作步骤7制备实施例1至6：

按照一般工作步骤8制备实施例7至17：

实施例18

N-{N-[(2RS，3S)-3-氨基-5，5-二甲基戊-2-基]-β-tBu-Ala-去(1-D-亮氨酸-2-亮氨酸)溶杆菌素三氢三氟乙酸盐

在氩气下将5.7mg(4.4μmol)实施例5A的化合物和3.0mg(6.6μmol)实施例71A的化合物提供在0.5ml的DMSO中。加入20μl(4.5eq.)的N-甲基吗啉，2.7mg(1.6eq)的HATU和在15分钟后另外20μl(4.5eq.)的N-甲基吗啉。将混合物在RT下搅拌过夜，然后通过制备HPLC(方法7)直接纯化。通过LC-MS(方法17)检查级分。在冻干适当级分(R_t＝2.02，ES(pos)：m/z＝1440[M+H]⁺)后，将N-苄氧羰基-保护的中间体立即在200μl的异丙醇中在1atm氢下使用2mg钯(10％，在碳上)氢化。在4小时后，过滤混合物，浓缩并通过制备HPLC(方法10)纯化。获得0.5mg(7％的th.)标题化合物。

LC-MS(方法17)：R_t＝1.53min.ES⁺：m/z＝1290.7[M+H]⁺，646[M+2H]²⁺，ES^-：m/z＝1288.7[M-H]^-，644[M-2H]^-。

B.生理活性的评价

可以在下列测定中显示本发明化合物的体外活性：

最低抑制浓度(MIC)的测定：

根据NCCLS准则在液体稀释试验中测定MIC。将金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)133、屎肠球菌(E.faecalis)27159、粪肠球菌(E.faecium)4147和肺炎链球菌(S.pneumoniae)G9a的过夜培养物在1∶2的稀释系列中与所述的测试物质温育。用Isosensitest培养基(Difco，Irvine/USA)中每ml细胞数为10⁵微生物进行MIC测定，除肺炎链球菌在含有10％牛血清的BHI肉汤(Difco，Irvine/USA)中以每ml细胞数为10⁶微生物以外。将所述培养在37℃温育18-24小时，肺炎链球菌在10％CO₂的存在下。

将不再有可见的细菌生长发生的每种情况中的最低物质浓度定义为MIC。MIC的值以μg/ml报道。

在表A中显示了本发明化合物的典型体外活性数据：

表A

实施例No.	MICS.aureus133	MICS.pneumoniae	MICE.faecalis ICB27159
				5	0.5	0.063	1
8	0.5	0.063	1
				14	0.25	0.0156	0.125
15	0.5	0.063	1

可以在下列动物模型中显示本发明化合物对于细菌感染治疗的适合性：

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)133的全身感染：

将金黄色葡萄球菌(S.aureus)133的细胞在BHI肉汤(Oxoid，New York/USA)中过夜培养。将过夜的培养物在新鲜BHI肉汤中1∶100稀释并温育3小时。将当时在对数生长期中的细胞离心出并用缓冲的生理盐水洗涤两次。然后将盐水中的细胞悬浮液光度测定地调节到50个消光单位。在稀释步骤(1∶15)后，将所述悬浮液与10％粘蛋白溶液1∶1混合。腹膜内给药0.25ml/20g小鼠的该感染溶液(相当于1×10⁶微生物/小鼠)。在感染后30分钟在腹膜内或静脉内进行治疗。将雌性CFW1小鼠用于感染实验。在6天的时期内记录所述动物的存活率。

化合物的溶解度按照本领域技术人员已知的方法测定。

C.药物组合物的例举性实施方案

本发明的化合物可以以下列方式转化成药物制剂：

片剂：

组成：

100mg实施例1的化合物，50mg乳糖(一水合物)，50mg玉米淀粉(天然的)，10mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP25)(BASF，Ludwigshafen，德国)和2mg硬脂酸镁。

片剂重量212mg。直径8mm，曲率半径12mm。

制备：

将活性成分、乳糖和淀粉的混合物用水中的5％PVP溶液(m/m)造粒。将所述粒剂干燥然后与硬脂酸镁混合5分钟。将该混合物用常规压片机挤压(参见上面用于片剂的形式)。用于压缩的压缩力指标是15kN。

可以口服给药的混悬剂：

组成：

1000mg实施例1的化合物，1000mg乙醇(96％)，400mg的Rhodigel(来自FMC的黄原胶，宾夕法尼亚，USA)和99g水。

10ml的口服混悬剂对应于100mg本发明化合物的单一剂量。

制备：

将Rhodigel悬浮在乙醇中，并将所述活性化合物加入到所述悬浮液。搅拌的同时加入水。将所述混合物搅拌约6h直到Rhodigel的溶胀是完全的。

可以静脉内给药的溶液剂：

组成：

100-200mg实施例1的化合物，15g聚乙二醇400和250g注射用水。制备：

在搅拌下将实施例1的化合物和聚乙二醇400溶解在水中。通过过滤(孔径0.22μm)将所述溶液消毒并在无菌条件之下分配到热灭菌的输液瓶中。将后者用输注塞和卷曲帽封闭。

Claims (11)

1.下式的化合物，

其中

R¹表示C₁-C₂-烷基，

其中C₁-C₂-烷基被选自下组的取代基取代：

三甲代甲硅烷基，烷氧羰基，C₃-C₆-环烷基，烷氧基-取代的苯基，2-吡啶基和3-吡啶基，

或

表示C₄-C₈-烷基，

R²表示氢或C₁-C₄-烷基，

R³表示C₁-C₂-烷基，

其中C₁-C₂-烷基被取代基三甲代甲硅烷基取代，

或

表示C₄-C₆-烷基，

R⁴表示氢或甲基，

或它的盐、它的溶剂合物或它的盐的溶剂合物中的一种。

2.根据权利要求1的化合物，其特征在于它对应于下式：

其中

R¹表示C₁-C₂-烷基，

其中C₁-C₂-烷基被选自下组的取代基取代：三甲代甲硅烷基，烷氧羰基，C₃-C₆-环烷基，烷氧基-取代的苯基，2-吡啶基和3-吡啶基，

或

表示C₄-C₈-烷基，

R²表示氢或C₁-C₄-烷基，

R³表示C₁-C₂-烷基，

其中C₁-C₂-烷基被取代基三甲代甲硅烷基取代，

或

表示C₄-C₆-烷基，

或它的盐、它的溶剂合物或它的盐的溶剂合物中的一种。

3.根据权利要求2的化合物，其特征在于：

R¹表示C₁-C₂-烷基

其中C₁-C₂-烷基被取代基三甲代甲硅烷基取代，

或

表示C₄-C₆-烷基，

R²表示氢或甲基，

R³表示C₁-C₂-烷基，

其中C₁-C₂-烷基被取代基三甲代甲硅烷基取代，

或

表示C₄-C₆-烷基，

或它的盐、它的溶剂合物或它的盐的溶剂合物中的一种。

4.根据权利要求2或3任一项的化合物，其特征在于：

R¹表示三甲代甲硅烷基甲基或2，2-二甲基丙-1-基，

R²表示氢，

R³表示三甲代甲硅烷基甲基或2，2-二甲基丙-1-基，

或它的盐、它的溶剂合物或它的盐的溶剂合物中的一种。

5.用于制备根据权利要求1的式(Ia)化合物的方法，其特征在于：

式(II)的化合物

其中

R⁴具有权利要求1中所示的含义，

与式(III)的化合物反应，

其中

R¹，R²和R³具有权利要求1中所示的含义，并且

X¹表示卤素，优选溴、氯或氟，或羟基。

6.用于治疗和/或预防疾病的根据权利要求1至4任一项的化合物。

7.根据权利要求1至4任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防疾病的药物中的应用。

8.根据权利要求1至4任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防细菌感染的药物中的应用。

9.药物，其含有与惰性的、非毒性的药用赋形剂组合的根据权利要求1至4任一项的化合物。

10.根据权利要求9的药物，其用于治疗和/或预防细菌感染。

11.用于在人和动物中控制细菌感染的方法，该方法施用抗菌有效量的根据权利要求1至4任一项的至少一种化合物、根据权利要求9或10的药物或根据权利要求7或8获得的药物。