CN101029871A - 光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,适用于干法测试。该试剂配方包括至少一种酶反应试剂,至少一种还原性颜色指示剂,至少一种辅基辅酶类酶促进剂,至少一种有机表面活性剂,至少一种碱金属或碱土金属盐类稳定剂和至少一种中性缓冲剂。该试剂具有使用稳定可靠、反应速度快、内源性干扰小、试剂用量少、测试结果准确、线性测试范围大,方便配制且成本较低等优点,很适合在医学诊断上用于谷丙转氨酶的现场快速检测用。
Description
技术领域
本发明涉及检测试剂技术领域,属于医学临床诊断,是一种光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方。
背景技术
谷丙转氨酶(ALT)是一种非血浆特异酶,广泛存在于机体内各器官组织中,尤其以肝脏含量为最多。当这些富含谷丙转氨酶(ALT)的组织细胞受损时,谷丙转氨酶(ALT)就从细胞中释放增加,导致血液中谷丙转氨酶(ALT)活力迅速上升,谷丙转氨酶(ALT)水平的测定即可反映这些组织的受损情况。
病毒性肝炎在世界范围内广泛传播,已经严重威胁着人类身体健康。谷丙转氨酶升高已普遍被认为是目前临床诊断肝炎活动性最灵敏的指标之一,是目前肝脏疾病诊断和健康体检应用最多的酶类测定项目,也是献血者筛选的一个非特异性指标。酮体粉法、赖氏法是应用了很久的、最为普遍的检测方法。但酮体粉法因没有严格的测定条件,试剂干扰因素较多,判定结果的反应是定性反应,假阳性率高且误差较大,已被***明令淘汰;而赖氏法测定谷丙转氨酶(ALT)只能用常规的手工操作,费工、费时(一次测定需要30min)、且检测试剂很容易受血清中脂肪、溶血、黄疸等因素的影响,推广普及难度较大。
发明内容
本发明的目的是针对谷丙转氨酶(ALT)测试方法的不足,向临床提供一种稳定可靠、反应速度快、内源性干扰小、试剂用量少、测试结果准确、线性测试范围大,方便配制且成本较低、优于常规检测方法且与常规方法有较高相关性的测试试剂,从而建立一种方便快速的谷丙转氨酶现场检测方法,可解决血站、基层医疗单位及大批量标本体检的卫生医疗工作。
本发明的再一目的是提供一种测试试剂配方,该试剂可用于医学临床定量测定谷丙转氨酶,适宜于干法测试;可进行现场快速检测,满足医学体检的需要并能有效的消除个体间的交叉感染。
为达到以上目的,本发明的技术解决方案是提供一种光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其包括至少一种酶反应试剂,至少一种还原性颜色指示剂,至少一种辅基辅酶类酶促进剂,至少一种有机表面活性剂,至少一种碱金属或碱土金属盐类稳定剂和至少一种中性缓冲剂。
所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其所述酶反应试剂,是由L-丙胺酸、α-酮戊二酸、磷酸钠、丙酮酸氧化酶、过氧化物酶等组成。
所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其所述酶反应试剂中,L-丙胺酸浓度范围在50.0~200.0mM/L,优选为90.0mM/L;α-酮戊二酸浓度范围在1.0~50.0mM/L,优选为4.0mM/L;磷酸钠浓度范围10.0~50.0mM/L,优选为30mM/L;丙酮酸氧化酶浓度范围100.0~500.0U/mL,优选为300.0U/mL;过氧化物酶浓度范围50.0~1000.0U/mL,优选为600.0U/mL。
所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其所述还原性颜色指示剂,是从1-氨基-8-萘酚-2,4-二磺酸、苯酚、1,3,5-三硝基苯、4-胺基安替吡啉、3,3-双(4-羟苯基)-1(3H)-异苯并呋喃酮、2,4-二氯酚、对二甲氨基偶氮苯磺酸钠、焦培酸、对硝基苯酚、N,N-二甲基苯胺、二苯基卡巴阱中至少选取一种组成。
所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其所述还原性颜色指示剂,其浓度范围在0.5~50.0mM/L,优选为40.0mM/L。
所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其所述辅基辅酶类酶促进剂,是从N-苯基-N’-环己基对苯二胺、焦磷酸硫胺素、辛基化二苯胺、黄素腺嘌呤二核苷酸、2-巯基苯并咪唑锌盐、5’-磷酸吡哆醛中至少选取一种组成。
所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其所述的辅基辅酶类酶促进剂,其浓度范围在0.10~5.0mM/L,优选为0.30mM/L。
所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其所述有机表面活性剂,是从硬脂酸酰基乳酸钙、曲拉通、烷基酰氨基磺酸钠、亚甲基二萘磺酸钠、椰子酸二乙醇胺缩合物、十二烷基叔胺盐中至少选取一种组成。
所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其所述有机表面活性剂,其浓度范围在0.50~5.0g/L,优选为3.5g/L。
所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其所述碱金属或碱土金属盐类稳定剂,是从氯化钡、硫酸镁、氯化钠、硫酸氢钠、硝酸钾中至少选取一种组成。
所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其所述碱金属或碱土金属盐类稳定剂,其浓度范围在5.0~30.0mM/L,优选为10.0mM/L。
所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其所述中性缓冲剂,是从醋酸、氢氧化钠、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、氨水、碳酸钠-碳酸氢钠中至少选取一种组成。
所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其所述中性缓冲剂,其浓度范围在1.0~10.0g/L,优选为5.0g/L。
所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其所述中性缓冲剂,能调节该光学快速检测用试剂的pH值,其pH值范围在6.0~8.0之间。
附图说明
图1是利用本发明试剂配方检测人体血清谷丙转氨酶与日立7180大型生化分析仪的相关性测试示意图。
具体实施方式
本发明提出了一种光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,该试剂配方至少包括以下六种试剂:
至少一种酶反应试剂,是由L-丙胺酸、α-酮戊二酸、磷酸钠、丙酮酸氧化酶、过氧化物酶等组成。其中,L-丙胺酸浓度范围在50.0~200.0mM/L,优选为90.0mM/L;α-酮戊二酸浓度范围在1.0~50.0mM/L,优选为4.0mM/L;磷酸钠浓度范围10.0~50.0mM/L,优选为30mM/L;丙酮酸氧化酶浓度范围100.0~500.0U/mL,优选为300.0U/mL;过氧化物酶浓度范围50.0~1000.0U/mL,优选为600.0U/mL。
该酶反应试剂可与谷丙转氨酶反应生成最终产物,最终产物生成量与血清中谷丙转氨酶浓度成比例。
至少一种还原性颜色指示剂,是从1-氨基-8-萘酚-2,4-二磺酸、苯酚、1,3,5-三硝基苯、4-胺基安替吡啉、3,3-双(4-羟苯基)-1(3H)-异苯并呋喃酮、2,4-二氯酚、对二甲氨基偶氮苯磺酸钠、焦培酸、对硝基苯酚、N,N-二甲基苯胺、二苯基卡巴阱中选取,所用浓度范围在0.5~50.0mM/L,优选为40.0mM/L。
该还原性颜色指示剂的存在可与最终产物发生颜色变化,颜色深浅与血清中谷丙转氨酶浓度成比例,利用光的反射吸收原理即可定量检测血清中谷丙转氨酶。
至少一种辅基辅酶类酶促进剂,是从N-苯基-N’-环己基对苯二胺、焦磷酸硫胺素、辛基化二苯胺、黄素腺嘌呤二核苷酸、2-巯基苯并咪唑锌盐、5’-磷酸吡哆醛中选取,所用浓度范围在0.10~5.0mM/L,优选为0.30mM/L。
该辅基辅酶类酶促进剂可有效提高反应试剂中酶的活性,从而加快反应速度,缩短反应时间。
至少一种有机表面活性剂,是从硬脂酸酰基乳酸钙、曲拉通、烷基酰氨基磺酸钠、亚甲基二萘磺酸钠、椰子酸二乙醇胺缩合物、十二烷基叔胺盐中选取,所用浓度范围在0.50~5.0g/L,优选为3.5g/L。
所选用的有机表面活性剂可使所滴加试样能够迅速铺开,充分与反应试剂充分接触,加快反应速度。
至少一种碱金属或碱土金属盐类稳定剂,是从氯化钡、硫酸镁、氯化钠、硫酸氢钠、硝酸钾中选取,所用浓度范围在5.0~30.0mM/L,优选为10.0mM/L。
该碱金属或碱土金属盐类稳定剂可以增加反应试剂中酶的稳定性,使显色稳定。
至少一种中性缓冲剂,是从醋酸、氢氧化钠、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、氨水、碳酸钠-碳酸氢钠中选取,所用浓度范围在1.0~10.0g/L,优选为5.0g/L。
所用中性缓冲剂具有调节试剂pH的功能,调节试剂pH值在6.0~8.0之间。
下面结合具体实施例对本发明进行描述:
实施例1
从下列化合物所示浓度制备了一种试剂:
化合物 浓度
L-丙胺酸 90.0mM/L
α-酮戊二酸 4.0mM/L
磷酸钠 30mM/L
丙酮酸氧化酶 300.0U/mL
过氧化物酶 600.0U/mL
4-胺基安替吡啉 40.0mM/L
焦磷酸硫胺素 0.11mM/L
黄素腺嘌呤二核苷酸 0.30mM/L
5’-磷酸吡哆醛 0.50mM/L
烷基酰氨基磺酸钠 0.25g/L
硫酸镁 10.0mM/L
磷酸二氢钠-磷酸氢二钠 5.0g/L
将以上试剂按所示浓度进行混合,并调节pH在6.0~8.0之间,从而制备出一种谷丙转氨酶测试试剂。利用该试剂,通过光学检测,在北京红十字血液中心检验科与日立7180大型生化检测仪做对比实验,测试时间60s,对比结果如图1所示,图中横坐标是日立7180大型生化检测仪测试值,属于标准值,纵坐标是本试剂与配套仪器的检测值,与横坐标日7180大型生化检测仪测试值做对比。两种试剂测试结果相关系数达到0.985,获得了较好的检测结果,可以满足医学临床中现场快速检测的需要。
以上实施例只是为了说明本发明,而不是对本发明的限制。在上述说明的基础上,可以对本发明作许多改进和改变。在所附权利要求书的范围内,本发明可以有不同于上述的其它实现方式,选用其它同性相关试剂、改变试剂浓度等方法均在本发明专利要求保护范围之内。
Claims (20)
1.一种光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,适用于干法测试,包括至少一种酶反应试剂,至少一种还原性颜色指示剂,至少一种辅基辅酶类酶促进剂,至少一种有机表面活性剂,至少一种碱金属或碱土金属盐类稳定剂和至少一种中性缓冲剂。
2.如权利要求1所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所述酶反应试剂,是由L-丙胺酸、α-酮戊二酸、磷酸钠、丙酮酸氧化酶、过氧化物酶组成。
3.如权利要求2所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所选用的酶反应试剂中,L-丙胺酸浓度范围在50.0~200.0mM/L;α-酮戊二酸浓度范围在1.0~50.0mM/L;磷酸钠浓度范围10.0~50.0mM/L;丙酮酸氧化酶浓度范围100.0~500.0U/mL;过氧化物酶浓度范围50.0~1000.0U/mL。
4.如权利要求3所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所选用的酶反应试剂中,L-丙胺酸浓度范围为90.0mM/L;α-酮戊二酸浓度范围为4.0mM/L;磷酸钠浓度范围为30mM/L;丙酮酸氧化酶浓度范围为300.0U/mL;过氧化物酶浓度范围为600.0U/mL。
5.如权利要求1所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所述还原性颜色指示剂,是从1-氨基-8-萘酚-2,4-二磺酸、苯酚、1,3,5-三硝基苯、4-胺基安替吡啉、3,3-双(4-羟苯基)-1(3H)-异苯并呋喃酮、2,4-二氯酚、对二甲氨基偶氮苯磺酸钠、焦培酸、对硝基苯酚、N,N-二甲基苯胺、二苯基卡巴阱中至少选取一种组成。
6.如权利要求4所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所选用的还原性颜色指示剂,其浓度范围为0.5~50.0mM/L。
7.如权利要求5所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所选用的还原性颜色指示剂,其浓度范围为40.0mM/L。
8.如权利要求1所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所述辅基辅酶类酶促进剂,是从N-苯基-N’-环己基对苯二胺、焦磷酸硫胺素、辛基化二苯胺、黄素腺嘌呤二核苷酸、2-巯基苯并咪唑锌盐、5’-磷酸吡哆醛中至少选取一种组成。
9.如权利要求8所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所选用的辅基辅酶类酶促进剂,其浓度范围在0.10~5.0mM/L,优选为0.30mM/L。
10.如权利要求9所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所选用的辅基辅酶类酶促进剂,其浓度范围为0.30mM/L。
11.如权利要求1所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所述有机表面活性剂,是从硬脂酸酰基乳酸钙、曲拉通、烷基酰氨基磺酸钠、亚甲基二萘磺酸钠、椰子酸二乙醇胺缩合物、十二烷基叔胺盐中至少选取一种组成。
12.如权利要求11所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所选用的有机表面活性剂,其浓度范围在0.50~5.0g/L,优选为3.5g/L。
13.如权利要求12所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所选用的有机表面活性剂,其浓度范围为3.5g/L。
14.如权利要求1所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所述碱金属或碱土金属盐类稳定剂,是从氯化钡、硫酸镁、氯化钠、硫酸氢钠、硝酸钾中至少选取一种组成。
15.如权利要求14所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所选用的碱金属或碱土金属盐类稳定剂,其浓度范围在5.0~30.0mM/L。
16.如权利要求15所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所选用的碱金属或碱土金属盐类稳定剂,其浓度范围为10.0mM/L。
17.如权利要求1所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所述中性缓冲剂,是从醋酸、氢氧化钠、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、氨水、碳酸钠-碳酸氢钠中选取一种或多种组成。
18.如权利要求1所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所选用的中性缓冲剂,其浓度范围在1.0~10.0g/L。
19.如权利要求18所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所选用的中性缓冲剂,其浓度范围为5.0g/L。
20.如权利要求1、18或19所述的光学快速检测谷丙转氨酶试剂配方,其特征在于,所选用的中性缓冲剂,能调节该光学快速检测用试剂的pH值,其pH值范围在6.0~8.0之间。
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