CN101007049A - 一氧化氮供体和中草药制剂对对虾非特异性免疫功能用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及到由一氧化氮的供体和中草药组成的制剂，该制剂可以显著提高对虾非特异性免疫功能，提高对虾的抵抗疾病的能力，效果明显。适用于对虾养殖过程中的病害预防等免疫防治领域。本发明特征总结为：它是以一氧化氮供体和中草药制剂按一定比例混合而成，可以调节对虾非特异性免疫功能；中草药制剂的成分为黄芪和甘草，比例为3∶1；所述的一氧化氮供体，特征在于供体为精氨酸；一氧化氮供体和中草药制剂的比例为1∶5。
Description
技术领域：
本发明涉及到一种对虾免疫增强剂，适用于贝类，甲壳类等动物的免疫功能的增加，属于免疫制剂领域，确切地说是一氧化氮供体和中草药制剂对对虾非特异性免疫功能用途。
背景技术：
随着水产养殖规模的扩大、集约化程度的提高以及水质的恶化，病害的发生也越来越频繁，危害程度也越来越大，严重影响水产养殖业的健康、持续发展。据初步估计，2005年因疾病而造成的经济损失高达数亿元之多。频频暴发的疾病问题不但给养殖场造成极大的经济损失，严重影响了水产养殖业的发展，而且提出了一个迫切需要解决的问题。如何防治水产动物疾病？
但常规药物和方法对水产动物重大流行性疾病难以有效地控制，迄今未有突破性进展，且药物的残留对人类食品的安全隐患已引起世界各国政府和消费者的高度重视。通过免疫学技术激发机体自身的免疫防御***，提高机体对各种疾病的抵抗能力，是目前公认的最有效的途径之一，也符合人们对“绿色”水产品的需求。因此，在采取其他防治措施的同时，人们已经把注意力转移到如何调动或激活水产动物自身免疫***，提高其非特异性免疫功能和抗病力，以达到预防和抵抗疾病的目的。
一氧化氮(Nitric oxide，NO)是一种新发现的生物信使分子、效应分子和免疫调节分子，其生成依赖于一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase，NOS)。NO广泛分布于生物体的各个器官和组织中，参与机体多种重要的生理病理活动，既是血液循环、神经传递及免疫杀伤的生理学信使，又是许多病理状态下的活性介质。最近的研究表明NO具有广泛的免疫学意义，它对机体的免疫功能的影响是多方面的，可以通过非特异性杀伤细菌、真菌、寄生虫及病毒等，增强机体的非特异性免疫；也可以控制机体的特异性免疫；还可以调节多种免疫活性介质，更为广泛的影响机体的免疫功能。生物体内的NO是由NOS以L-精氨酸和分子氧为底物，催化L-精氨酸的两个等价胍基氮之一，经5电子氧化反应，产生L-瓜氨酸和NO。
我国具有丰富的中草药资源，民间应用中草药物来防治水产动物疾病有着悠久的历史。中(兽)医学上的研究及渔业生产实践均已证明，中草药作为混饲剂或饲料添加剂尤其适用于当前水产养殖业的集约化、规模化生产的需要，便于进行养殖鱼类病害的群体防治。应用中草药防治鱼病不但可以解决化学药物、抗生素等引发的抗(耐)药性和养殖鱼类药残超标等问题，而且完全符合发展无公害水产业、生产绿色水产品的病害防治准则。近年来，随着中药化学和中药免疫药理学研究的进展，现已证明200余种中草药有多方面的免疫活性物质，能影响和调节动物机体的免疫功能。
发明内容：
本发明的目的在于：开发一种增强对虾非特异性免疫功能的制剂，降低对虾养殖过程中病害的发生，同时又不会对水产品造成药物残留。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：以中草药制剂为基础，添加少量一氧化氮供体，从而提高对虾的非特异性免疫功能。中草药的混合比例为黄芪∶甘草＝3∶1。
本发明特征总结为：它是以一氧化氮供体和中草药制剂按一定比例混合而成，可以调节对虾非特异性免疫功能；中草药制剂的成分为黄芪和甘草，比例为3∶1；所述的一氧化氮供体，特征在于供体为精氨酸；一氧化氮供体和中草药制剂的比例为1∶5。
采用本发明所述的制剂具有以下明显的特点与有用效果：
1.具有较好的促生长作用；
2.可以显著提高对虾的养殖成活率；
3.可以显著提高非特异性免疫功能。
具体实施例：
1供体和中草药添加剂的制备
中草药添加剂自行配置，黄芪∶甘草＝3∶1，然后与精氨酸按5∶1的比例混合均匀；
2实验虾苗
试验用虾取自深圳市农科中心水产实验基地养殖的幼虾，平均体长为(4.75±0.51)cm、平均体重为(0.77±0.24)g，暂养7天以后，挑选规格基本一致的用于实验。
3实验饲料
试验用基础饲料组成为优质鱼粉、虾壳粉、面粉、饼粕、酵母粉、多矿、多维、诱食剂等，在此基础上再添加中草药制剂，添加量分别为0.5g/kg(A组)、1.0g/kg(B组)和1.5g/kg(C组)。各营养成分大致如下：粗蛋白40％，粗脂肪4％，粗灰分15％，水分12％，粗纤维5％，钙4％，磷1％。
4试验条件
实验是在300L的圆形塑料桶中进行，实验期间有效水体250L。为了防止实验虾跳出，实验桶上面盖有遮光网目。
5统计指标
经过60d的养殖，生长统计指标如下。
日生长速度＝(终末平均体重-初始平均体重)/试验天数；
相对率重率＝(末重-初重)/初重×100％；
饵料系数＝投喂饲料的重量/虾体重增加量；
成活率＝收获尾数/放养尾数×100％。
6免疫指标测定
试验结束后，每个实验组随机抽取3尾试验对虾的肌肉，称重后于冰浴中匀浆，加入无菌生理盐水，使浓度达到0.1g/ml，于4℃条件下，以4000r/min离心10min后，除去沉淀后即为凡纳滨对虾肌肉组织提取液。放置于-20℃冰箱中待测。选用超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)、抗菌活力、酚氧化酶(PO)和一氧化氮合酶(NOS)活性作为非特异性免疫指标。
7人工感染实验
实验结束后，每组随机抽取30尾用于人工感染实验，以探讨中草药制剂对凡纳滨对虾的保护率。感染方法如下：将白斑综合症病毒粗提取液用PBS缓冲液稀释100倍，注射到对虾腹部肌肉中，每尾注射100μl。观察7天的累计死亡率。
8实验结果
生长结果见表1，免疫指标结果见表2，人工感染结果见表3。
表1生长实验结果
| 日生长速度 | 相对率重率(％) | 饵料系数 | 成活率(％) | |
| 对照组 | 0.01333±0.00076a | 48.81±5.13a | 1.93±0.21a | 86.67±4.99a |
| A | 0.01406±0.00105b | 55.23±4.56b | 1.78±0.32b | 89.33±5.52a |
| B | 0.01633±0.00119c | 63.02±3.33c | 1.69±0.42b | 94.00±2.70b |
| C | 0.01600±0.00098c | 62.35±4.88c | 1.71±0.36b | 95.67±3.47b |
注：同列中不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。下同。
表2.对凡纳滨对虾肌肉中ACP、LZM、SOD、酚氧化酶和杀菌活力的影响
| 免疫指标 | 对照组 | A组 | B组 | C组 |
| ACP | 3.97±0.65b | 4.86±0.64b | 6.21±0.35a | 9.95±1.39c |
| LZM | 7.29±4.92a | 12.02±1.96a | 25.13±17.62b | 34.06±4.55b |
| SOD | 127.91±9.04a | 122.20±8.06ab | 113.70±10.42b | 134.89±4.65c |
| NOS | 5.37±1.52a | 5.78±0.95a | 7.12±1.44b | 8.56±0.67c |
| 酚氧化酶 | 1.33±0.09a | 1.26±0.11a | 1.65±±0.23b | 1.74±0.13b |
| 杀菌活力 | 0.183±0.014a | 0.234±0.011b | 0.328±0.014c | 0.387±0.017d |
表2人工感染结果(累计死亡尾数)
| 天数 | 对照组 | A组 | B组 | C组 |
| 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 2 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 3 | 1 | 0 | 0 | 0 |
| 4 | 2 | 1 | 0 | 0 |
| 5 | 4 | 2 | 2 | 1 |
| 6 | 10 | 6 | 4 | 3 |
| 7 | 21 | 12 | 8 | 4 |
从表1可以看出，添加免疫增强剂后，无论是日增长速度，个体增重率、饲料系数，还是成活率方面均明显优于对照组；从表2可以看出，添加免疫增强剂后，各免疫指标均有不同程度的升高；从表3可以看出，添加免疫增强剂后，人工感染后的成活率大大提高。证实该免疫增强剂具有促生长、提高成活率和增强抗病力的功效。
Claims (4)
1、一种一氧化氮供体和中草药制剂对对虾非特异性免疫功能用途，其特征在于：它是以一氧化氮供体和中草药制剂按一定比例混合而成，可以调节对虾非特异性免疫功能。
2、根据权利要求1所述的一氧化氮供体和中草药制剂对对虾非特异性免疫功能用途，其特征在于：中草药制剂的成分为黄芪和甘草，比例为3∶1。
3、根据权利要求1所述的一氧化氮供体和中草药制剂对对虾非特异性免疫功能用途，其特征在于：供体为精氨酸。
4、根据权利要求1所述的一氧化氮供体和中草药制剂对对虾非特异性免疫功能用途，其特征在于：一氧化氮供体和中草药制剂的比例为1∶5。
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| CN114868846A (zh) * | 2022-04-25 | 2022-08-09 | 闽江学院 | 外源性一氧化氮供体gsno作为饲料添加剂的应用 |
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2007
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