具体实施方式
质谱测量法,也称为质谱学,是考虑到分子质量测量的仪器方法。几乎每一个质普仪包括:真空***、样本引入装置、离子化源、质量分析计和离子探测器。质谱仪通过离子化、分离、以及按照它们的质荷比(m/z)和/或离子的“分子质量”(这有时简单地作为离子的“质量”)测量分子离子来测定化合物的分子重量。通过诱发要么失去要么得到电荷(如电子喷射、质子化或去质子化)而在离子化源中产生离子。一旦形成气相离子可将其导入质量分析器,按照质量分离然后检测。离子化、离子分离和检测的结果就是质谱,它能提供分子重量或者甚至结构信息。
在无机、有机和生物有机化学分析宽广的应用范围上质普仪是有用的。在许多例子中包括地质样本的年代测定,肽和蛋白质的定序,非共价配合物和免疫学分子的研究,DNA定序,完整病毒分析,药物试验和药物发现,石油、化学以及制药工业加工过程的监控,表面分析和未知结构鉴定。
某种示例性的实施例包括质普仪,其能使用傅立叶变换离子回旋共振(FTICR)技术(在这里也称为“傅立叶变换质谱测量法”或“FTMS”)来确定离子的分子质量。
当在低压下气相离子受到均匀静磁场的作用时,可通过离子速度相对于磁场的大小和方向来确定作为结果的离子行为。如果离子静止或者离子只有平行于所施场的速度,则离子与该场没有交互作用。
如果存在垂直于所加场的离子速度分量,该离子将受到既垂直于该速度分量也垂直于所加磁场的力的作用。这种力导致圆形离子轨迹,称为离子回旋运动。在没有任何其他力作用在离子上时,这种运动的角频率是该离子电荷、离子质量和磁场强度的简单函数,如下面的方程式(1)所示:
omega=qB/m
其中:omega=角频率(弧度/秒)
q=离子电荷(库仑)
B=磁场强度(特斯拉)
m=离子质量(千克)
通过感生大幅度的回旋加速运动,然后确定运动频率,FTMS可利用方程式(1)所描述的基本关系来确定离子的质量。
将要分析的离子能先以小的垂直(径向)速度和偏移引入磁场。由磁场感生的回旋加速运动可实现对离子的径向限制;然而,平行于场轴的离子运动典型地被一对“捕获”电极约束。这些电极典型地由一对垂直于磁轴定向并配置在最初的离子组合的轴向尺寸相对端的平行板组成。维持这些捕获电极与离子电荷同号的电位和足够的大小以实现在电极对之间对离子的轴向限制。
于是所捕获的离子可受到与磁场相垂直的并以所要分析离子的回旋频率振荡的电场的作用。通过给平行于磁轴定向并被配置在最初的离子组合的径向尺寸相对侧的第二对平行板“激发”电极施加适当的差分电位,典型地产生这样一种场。
如果要分析一个以上分子质量的离子,振荡场的频率可扫过适当的频率范围,或者由单独频率分量的适当混合组成。当振荡场的频率与给定离子质量的回旋频率相匹配时,所有那种质量的离子将受到电场的共振加速且它们回旋运动的半径将增大。
在这种共振加速期间,离子最初的径向偏移基本不变。受激离子在新的回旋轨道圆周上将趋向于保持集中在一起,且相对于新的回旋半径偏移小的程度的趋势,它们的运动在相位或相干性上将有交互的趋势。如果最初的离子组合由一个以上分子质量的离子组成,则加速过程能导致多重同质量的离子束,每一个都以各自的回旋频率沿轨道运行。
可继续加速直到回旋轨道的半径将离子带到足够接近一个或多个检测电极,导致在电极感应可检测的镜像电荷。这些“检测”电极典型地由第三对平行板电极组成,其配置在最初离子组合径向尺寸相对侧并垂直于激发和捕获电极定向。于是,这三对用于离子捕获、激发和检测的平行板电极相互垂直,且能共同形成封闭的盒状结构称为捕获离子单元。其他单元设计是可能的,包括如柱装单元。
图1是捕获离子单元1000示例性实施例简图,包括激发电极1010,捕获电极1020和检测电极1030。
由于在单元内相干的回旋运动引起每一个同质量离子束交替地接近和从检测电极1030退回,检测电极上的镜像电荷可相应地增加和减小。如果检测电极1030被作为外部放大电路(没有显示)的一部分,交替的镜像电荷将在外部电路中导致正弦电流。电流幅度与轨道运动离子束的总电荷成比例,因而是出现的离子数的指示。这种电流可以被放大并数字化,且通过时间向频率的变换可以提取频率数据,例如傅立叶变换,这能由使用快速傅立叶变换算法或类似的算法的计算机提供。最后,使用方程(1)的关系可以把作为结果的频谱转换为质谱。
如于此所使用的,术语“离子”的意思是原子或一组原子,其已通过得到或失去一个或多个电子或者是得到或失去一个或多个质子获得有净电荷。离子可以通过许多方式形成,包括在电流、紫外线和某些其他射线的作用和/或高温下拆开气体分子。
如于此所使用的,术语“种类”的意思是物质成分的本体,如离子、分子或原子。例如,典型空气样本中的1 000个分子,我们或许期望这些分子中约78 1个的分子种类是氮或N2,这些分子中约209个的分子种类是氧或O2和/或这些分子中约9个的分子种类是氩或Ar。
如于此所使用的,术语“离子组分”的意思是离子的种类。
如于此所使用的,术语“合成”的意思是测量的组合。例如,如果一块板的长度是2英尺,另一块板的长度是3英尺,假定每块板的长度有为1的加权因子,于是当两块板端到端放在一起时,合成长度是5英尺。合成不必是线性组合。
如于此所使用的,术语“质谱”的意思是分子质量或其函数(例如质荷比(m/z),离子质量等)作为自变量的绘图。因变量典型地是定量测量,如丰度、相对丰度、强度、浓度、离子数、分子数、原子数、计数/毫伏、计数等。例如,在离子的情况下,质谱典型显示质荷比(m/z)作为自变量,其中m是离子种类的质量,z是离子种类的电荷,且因变量最普遍的是每一分子离子和/或其碎片离子的丰度。
如于此所使用的,除非另有描述,术语“量”的意思是任何定量测量。例如,特定种类的离子的量可以是它的丰度、相对丰度、强度、浓度和/或计数等。
如于此所使用的,术语“相对丰度”,在离子的情况下,意思是特定m/z比的离子被检测到的次数。例如,通过为最丰离子种类分配100%的相对丰度,可获得相对丰度的分配。所有其他离子种类可表示为最丰离子种类丰度的百分数。
如于此所使用的,术语“占优势的离子组分”意思是所考虑的所有离子种类中最丰的离子种类。
如于此所使用的,术语“喷射”的意思是使得特定离子种类的离子不可检测。例如,通过将当前明显占优势离子种类的所有离子以足以阻止检测的速率从FTMS单元的检测区域有物理地移除,喷射就出现了。这能有益于使不太丰种类的离子能被更容易检测。
质谱可以用来识别样本中出现的离子种类。例如,质谱或许显示出样本包含氮、氧、二氧化碳和氩离子。而且,充足可再生的质谱能被用于量化样本中出现的每一离子种类的离子的相对数。
对于样本分析、过程监控和/或过程控制,了解样本的离子种类和它们的数量是十分有用的。此外的应用可包括药物质量控制,香料和香味工业中的精密过程监控,芳香化学,生物化学,蛋白质,肽和DNA分析,高分子聚合物定序,蛋白质质量指纹识别,先天性代谢病研究,病毒鉴别,药物代谢,呼吸气体的分析,组合化学,环境研究,水分析,土壤修补研究,地球化学,地质年代学,化石研究,石油勘探,石油化工生产,大气化学,空间探索,为有毒化学和/或生物制剂的引入而对公共场所的监控,***和/或违禁物品检测和/或刑事侦破化学等。
图2是FTMS***2000普通执行过程的示例性实施例框图,其包含各种子***以完成在此所述的某些方法和/或过程,如上面所描述的分析次序。捕获离子单元2100,如图1的捕获离子单元1000,能被容纳在真空***2200内,真空***2200包含有可用适当的泵装置2210抽空的室2220。该室可位于磁体结构2300之内,磁体结构2300能给捕获离子单元2100的整个尺寸范围施加匀强静磁场。虽然磁体结构2300在图2中所示为永磁体,如1特斯拉SmCO5无约束使用磁体,超导磁体也可用于提供该磁场。
泵装置2210可以是作为真空室2220的整体部分的离子泵。这样的离子泵可以使用如捕获离子单元2100所用的来自于磁体结构2300的同一个磁场,可工作在约6.5KV和/或在真空室2220中能自动提供和/或维持低到如约10-10托这样低的真空。可自动维持真空室2220在60℃左右和/或可加热到用户可选择的高达约220℃的温度。
所要分析的样本能通过气相样本引入***2400被导入真空室2220,该***包括例如气色谱柱和/或泄气阀,如带有受控能量关闭的脉冲质谱仪泄气阀和/或脉冲取样阀等。如果使用了阀,入口条件可包括在约20托和约30psia之间的压力,约25℃和约160℃之间用户可选择的温度,低到约1微米的过滤作用和/或约0.5ml/min到约200ml/min之间的流速。
样本引入***2400具有从多个可能的样本源2410中自动选择的能力,并且能够引入用户可调或自动可调从约2微微升到约200微微升容量的样本。因为在阀脉冲期间经过阀引入的气体量基本上是具有约10%或更小标准差的高斯分布,所以每一样本可具有基本相似的分子数。抽样分子在捕获离子单元2100内通过离子化装置2520自动转变为带离子化子,例如穿过单元2100的门控电子束,光子源,化学离子发生器,阴极离子发生器,电子离子化,电喷离子化(ESI),基体辅助激光解吸/离子化(MALDI),大气压力化学离子化(APCI),快速原子轰击(FAB)和/或感应耦合的等离子(ICP)。做为选择,通过许多不同技术中的任何一个,包括任何离子化装置,样本分子可在真空室2220外部产生,然后沿着磁场轴线喷射进室2220和捕获离子单元2100。喷射前,离子会遇到离子导向器,比如四极离子导向器和/或RF四极离子导向器。
一但在离子单元2100内,对每一个“精确”质量离子组,经过时域测量,可自动测量作为结果的回旋运动。测量的离子可作为样本中分子的代表。任何不同的变换,例如傅立叶变换,能被自动应用于从时域向频域变换测量数据。因为频率与质量通过已知的非线性反比例关系相关,所以能自动确定非常精确的质量值。
不同的电子电路能够被用来自动检测记录和/或控制FTMS***的任何操作或功能,像上面描述的那些,并且可容纳在电子组件2600之内,电子组件可由信息装置2700控制和/或执行,如基于数据***的计算机,如windows NT/2000平台。信息装置2700也能被用于自动完成缩减、控制、显示和/或传送所获得的信号数据,如各种所述的变换。通过网络2800(如公共的、专用的、电路交换、分组交换、虚拟的、无线电、电话、蜂窝、电缆、DSL、卫星、微波、交流电源、以太网、Modbus、OPC、LAN、WAN、互联网、内部网、无线、Wi-Fi、蓝牙、Airport、802.11a、802.11b、802.11g等网络),一个或多个远程信息装置2900能够安全监测、控制和/或与信息装置2700和/或电子组件2600通信。
FTMS***2000的某些示例性实施例能自动将数据记录到数据库、电子表格文件、打印机、模拟输出装置等。FTMS***2000的某些示例性实施例在发生特定事件(如特定离子的检测、组分浓度和/或强度的改变高于或低于预先确定的水平、失败的分析等)的情况下能自动提供警报和/或通知。
FTMS***2000的某些示例性实施例能与各种各样的入口、直接***探针、薄膜介入质谱仪测量法(MIMS)探针和/或离析逸出分析(EGA)装置,如热重量分析和/或收集和净化单元进行接口连接。
FTMS***2000的某些示例性实施例能自动地从第一样本流切换到第二样本流,并且当仍在分析第一样本流的样本时从第二样本流引入样本。于是,能多路复用和/或控制高达约64个样本流。这可能从实质上提高总的测量速度,特别是在第一样本流的净化是相对长的过程情况下。
FTMS***2000的某些示例性实施例能自动提供基于非常小样本量的完全分析。例如,FTMS***2000的某些示例性实施例能自动测量从约2到约1000m/z的质量范围,包括其之间的所有值,例如象6.0001、12.47、54.94312、914.356等,并且包括其之间的所有子范围,例如象从约2到约12,从约6到约497等。
FTMS***2000的某些示例性实施例能自动提供质量测定到至少小数点右三位有效数字或低到至少约1/1000m/z。
FTMS***2000的某些示例性实施例能自动提供从约1到约20000的质量测量分辨,包括其之间的所有值和子范围,当测量在约100m/z到约120m/z时,包括其之间的所有值和子范围。
FTMS***2000的某些示例性实施例能自动提供的浓度测量从100%下降到约0.1到约1ppm,包括其之间的所有值,例如约0.2、0.51、0.8、1、2.2、5、10、25.6ppm等,包括其之间的所有子范围,如从约1到约10ppm,从约100ppm到约1%,从约1%到约100%等。
FTMS***2000的某些示例性实施例能自动提供的质量精度从约±0.0002m/z到约±0.001m/z,包括其之间的所有值和子范围,当在28m/z测量时。
FTMS***2000的某些示例性实施例可自动提供质量的可重合性从约0.001m/z(约35ppm)到约0.0025m/z(约90ppm),包括其之间的所有值和子范围,当在28m/z测量时。
FTMS***2000的某些示例性实施例能自动提供从约1到约3个数量级的线性度,包括其之间的所有值和子范围。
图3是信息装置3000示例性实施例的框图,其可代表图2的任何信息装置2700,2900。信息装置3000可包括众所周知的组件,例如一个或多个网络界面3100,一个或多个处理器3200,一个或多个包括指令3400的存储器3300,和/或一个或多个输入/输出(I/O)装置3500等。
如于此所使用的,术语“信息装置”意思是能处理信息的任何装置,例如任何通用和/或专用的计算机,如个人计算机,工作站,服务器,微型计算机,大型机,巨型计算机,计算机终端,膝上型计算机,可佩带计算机和/或个人数字助理(PDA),移动终端,蓝牙装置,通信装置,“智能”电话(例如手翻Treo状装置),消息服务(如黑莓(Blackberry))接收机,传呼机,传真,蜂窝电话,传统电话,电话装置,程控微处理器或微控制器和/或***集成电路单元,ASIC或其他集成电路,硬件电子逻辑电路(如分立元件电路)和/或可编程逻辑装置(象PLD,PLA,FPGA或PAL或相类似的东西)等。一般而言任何装置其上具备有限状态的机器能执行于此所描述的方法、结构和/或或图示用户界面至少一部分,可以用作为信息装置。信息装置可包括众所周知的组件,如一个或多个网络界面、一个或多个处理器、一个或多个包含指令的存储器,和/或一个或多个输入/输出(I/O)装置、一个或多个用户界面等。
如于此所使用的,术语“网络界面”意思是任何装置、***或子***,其能将信息装置连接到网络。例如,网络界面可以是电话、蜂窝电话、蜂窝调制解调器、电话数据调制解调器、传真调制解调器、无线收发机、以太网卡、电缆调制解调器、数字用户线界面、桥接器、集线器、路由器或其他类似装置。
如于此所使用的,术语“处理器”意思是用于处理机器可读指令的装置。处理器可以是中央处理单元、本地处理器、远程处理器、并行处理器和/或分布式处理器等。处理器可以是通用微处理器,如由加利弗尼亚圣克拉拉Intel公司制造的奔腾3系列微处理器。在另一个实施例中,处理器可以是专用集成电路(ASIC)或现场可编程的门阵列(FPGA)其已被设计成用硬件和/或固件执行在此所公开实施例的至少一部分。
如于此所使用的,“存储装置”意思是有数据存储能力的任何硬件单元。存储装置可包括非易失性存储器、易失性存储器、随机存取存储器、RAM、只读存储器、ROM、闪存、磁性媒体、硬盘、软盘、磁带、光学媒体、光盘、高密度磁盘、CD、数字通用盘、DVD和/或磁盘阵列等。
如于此所使用的,术语“固件”意思是存储在只读存储器(ROM)中的机器可读指令。ROM可包括PROM和EPROM。
如于此所使用的,术语“I/O装置”意思是能够向信息装置提供输入和/或从信息装置提供输出的任何装置。I/O装置可以是任何感觉定向输入和/或输出装置,如听觉、视觉、触觉(包括温度、压力、疼痛、组织等)、嗅觉和/或味觉定向装置,包括,例如,监视器、显示器、键盘、小键盘、触摸垫、指向装置、麦克风、扬声器、视频摄像机、照相机、扫描仪和/或打印机、可包括I/O装置能附着或连接的端口。
如于此所使用的,术语“用户界面”意思是用于向用户再现信息和/或向用户请求信息的任何装置。图示用户界面可包括一个或多个单元,例如象窗口、标题条、面板、页面、制表、下拉窗口、矩阵、表格、日历、轮廓视图、框架、对话框、静态文本、文本框、列表、检选列表、弹出列表、下拉列表、菜单、工具条、悬停窗口、复选框、单选按钮、超链接、浏览器、图像、图标、按钮、控件、拨号盘、滑块、滚动条、光标、状态栏、步进控制器和/或进程指示器等。音响用户界面可包括音量控制、音调控制、速度控制、声音选择器等。
在某些示例性实施例中,FTMS***2000(如图2所示)的信息装置3000用户界面可以提供一个或多个单元用于参数调节、参数观察和/或质谱的访问和/或比较。在某些示例性实施例中,用户界面可提供重要分析和/或工作参数的现场工作状态窗口;当前和/或早先质谱的同时显示,可能加上原始的时域测量;双组分趋势曲线的平行比较;工艺仪表动态运行控制;和/或多个FTMS***控制。
图4是自动地基本优化一个或多个FTMS变量的方法的示例性实施例4000的流程图,例如离子化电流通量或束电流密度,它与气体脉冲一起能确定FTMS单元中出现的离子数;离子化阶段的捕获板电压;检测阶段的捕获板电压;和/或FTMS单元中离子的位置等。
在优化化之前,可出现几个预备的活动。例如在方法4000的活动4100,自动化的FTMS优化***能初始化其变量,如任何工作或程序设计变量。
在活动4200中,***能请求和/或接收关于样本阀设置(如电压)的用户输入,这使基本固定量的气体(如分子数)被引入到FTMS单元,以及选定启动离子化电流通量。这两个参数-阀电压和通量-能共同决定单元内所形成的电荷的初始数。在活动4300中,***可以创建并装入包括数据采集扫描的工作事件(按照事件表或时间表)定时系列。
在活动4400中,***能完成足够数量的数据采集以允许***稳定,也就是达到一个稳定的工作状态。获得的数据包括有测量幅度和时间的电流信号,通过傅立叶变换可将其转换为幅度和频率的数据集;典型地经过应用线性校准曲线,另外可将其转化为质量函数(例如分子质量、质荷比(m/z)等)和幅度的数据集。样本中出现的每一离子种类将产生依赖于离子种类的分子质量和施加在单元上的磁场的特征频率,以及依赖于在单元中出现的那种特定离子种类的量的幅度。于是,当幅度对频率作图时,将出现多个幅度峰,每一个代表着特定的离子种类。这些幅度峰的值,或质量校正幅度峰,可被数学组合,例如通过求和,得出合成幅度。注意,通过给一个或多个频域幅度或组成离子种类的质量校正幅度应用加权因子,可以形成合成幅度。于是,如果加权因子1应用于三种最占优势离子种类的幅度,加权因子0应用于其余离子种类的幅度,合成幅度将代表三个最占优势种类的总幅度。
在活动4500中,基于例如用户输入、优化迭代循环计数和/或预编程参数,***能选择对哪一个FTMS变量做基本优化。***也能为所选择的FTMS变量选择初值。
在活动4600,***能获得FTMS输出数据,例如幅度、时间、频率和/或者输出信号的质量函数和优化参数,例如输出信号的合成幅度,或者那个合成幅度的方差。这种数据采集能重复预先确定的(例如用户选择的或者***选择的)迭代次数,每次采集包括用户指定的谱采集数,每一数据采集包含幅度和频率或者质量数据。
在活动4700,***能改变FTMS变量的值。
活动4600和4700能重复,直到在活动4800,***能确定优化参数已经基本收敛,作为FTMS变量值最新改变的结果,从而指示对于FTMS变量已经找到基本优化的值。
在活动4900,例如FTMS变量、其值、优化参数、和/或其值等结果可以被输出到例如文件、存储装置、I/O装置、控制***和/或用户界面等。输出结果可以为其他方法利用。然后,***可重复活动4500到4900直到所有FTMS变量被优化。
大量的FTMS变量能被优化。例如,通过基本上使离子化电流通量值在离子化电流通量的变化基本是线性的范围内极大化,也就是,通过找到最大线性响应的离子化电流通量,离子化电流通量可被基本优化。这样,实际上,线性响应离子化电流通量就是要优化的FTMS变量。
例如,可以在离子电流通量加倍之前和之后比较合成幅度,以确定FTMS单元是否基本非线性地响应,这意味着单元有过多的离子出现,并且这可以通过小于约1.8到约1.999之间的因子的合成幅度或总信号电流中的改变来指示,包括其之间的所有值,例如约1.832、1.85、1.9、1.977等,以及其之间的所有子范围,例如约1.88到约1.93等,或大于约2.001到约2.2,包括其之间的所有值,例如约2.003、2.05、2.1、2.177等,和其之间的所有子范围,例如约2.07到约2.12等。换句话说,当优化参数的改变小于离子化电流通量改变的约90%到约99.95%,或者大于约100.05%到约110%(包括其中间的所有值和子范围)时,指示为非线性。
如果单元里出现过多离子,通过例如约20%到约80%的因子(包括其之间的所有值,例如约0.25、0.333、0.4481、0.5、0.667等,及其之间的所有子范围,例如约0.42到约0.60等),***可降低离子化电流通量,然后继续试验。否则,通过例如,约1.2到约3的因子,包括其之间的所有值,例如约1.55、2、2.4973等,以及其之间的所有子范围,例如约1.92到约2.1等,***可增加离子化电流,然后,重新检验线性。这种模式可根据需要重复,直到优化参数基本收敛(例如达到一个最大值,在该值处维持基本的线性),从而指示找到了基本优化的离子化电流通量值。
在试验的离子化阶段***能尝试优化捕获板的电压。为了这样做,在某些示例性实施例中,***能完成几个子活动。例如,***可从用户选定的起动值降低电压并采集多个合成幅度。在与早先电压值相关联的合成幅度和与当前电压值相关联的合成幅度之间,***也能比较优化参数,例如方差。而且,***能决定考虑了测量的谱数的优化参数是发散还是收敛(例如是在增加或在减小),并采取适当的动作以继续调节电压,直到找到电压的基本优化值,这基于优化参数的收敛性(例如,最小方差)。
为了使优化参数基本收敛(例如,使总的平均合成谱幅度的方差最小)从而确定该电压基本的优化值,***能将相似的算法应用于在试验的检测阶段所出现的捕获电压。
通过使优化参数基本收敛(例如,使总信号电流强度(合成幅度)基本最大化),在单元内检测之前***能基本优化相对于固定检测板的离子位置。
注意,其他FTMS变量的基本优化化是可能的且也考虑到了,例如样本的引入与检测之间的时间延迟、通过选样阀引入FTMS的气体脉冲大小、在单个采集间的等待时间和/或任何测量的FTMS变量的函数。而且,能确定并利用优化任一选定组的FTMS变量序列的最佳。
而且,虽然这里所描述的优化参数已经包括了合成幅度本身或合成幅度方差,但是其他统计判断优化参数,该参数可以是合成幅度的函数,也是可能的且也考虑到了。例如,至少下列优化参数是可能的:三个最丰种类平均幅度的合成、占优势的种类幅度的方差、平均合成幅度、合成幅度的众数(mode)、合成幅度方差的众数、最大合成幅度方差、最小合成幅度方差、时间加权合成幅度方差、第二中心矩、偏倚校正方差、协方差、相关性、均方根、平均偏差、样本方差、方差分布、标准差、最大合成幅度标准差、最小合成幅度标准差、时间加权合成幅度标准差和/或分布等。
于是,FTMS变量的值通过经重复改变要优化的FTMS变量的值而基本收敛在收敛目标,例如与其优化参数相联系的值和/或范围(例如在局部的或绝对的最小数、最大数、渐近线和/或拐点等上基本地收敛等),能被基本优化。收敛目标可预先确定或动态找到。
例如,在变化FTMS变量中,合成幅度的方差降低到百分之二或某种其他预先确定的范围之内时,认为优化化出现了。作为另一个例子,在重复变化FTMS变量的值中,作为结果的合成幅度在FTMS变量特定的、动态确定的值处基本最大时,可认为FTMS变量的优化化出现了。作为又一个例子,在重复变化FTMS变量的值中作为结果的合成幅度的平均值基本最小时,可认为FTMS变量的优化出现了。
图5是使用FTMS自动分析样本的方法的一种示例性实施例5000的流程图。通过方法5000,FTMS***可在定量FTMS试验中自动交换动态量程。也就是,FTMS***能将未优化的FTMS***的3个数量级的动态量程扩展到覆盖更宽的量程(例如从100%到PPM(6个数量级)),这是通过将量程划分为每一个都覆盖预先确定的数量级(如2个数量级)的多个试验(如3个试验)。
例如,试验1能寻定所出现的从约1%到约100%的组分(即离子种类),试验2能寻定所出现的从约100PPM到约10000PPM的组分,试验3能寻定所出现的从约1PPM到约100PPM的组分。
每一个试验被设计好并各自基本优化(如经过上述方法4000的自动FTMS优化过程)之后,结果可被传输给方法5000的自动FTMS分析过程,并能生成分析方法。运行方法5000能在全量程内生成完全的定量分析,该***分析时能够不要或很少要操作者介入。
执行方法5000,分析之前,能出现几个初步的活动。例如,在方法5000的活动5100,自动FTMS分析***能初始化它的变量,如任何运算或程序变量。在活动5200,***可从用户处获得若干分析周期以及为每一个周期所收集的谱数。
在活动5300,使用自动FTMS优化过程,如方法4000的自动FTMS优化过程,***基本能优化任何数目的FTMS变量,如离子化电流通量、设定FTMS变量到它们优化值和/或确定相应的阀值电压并设定阀为那个电压值。
在活动5400,***可生成并装入包括数据采集扫描的时控工作事件列表(例如至少一个事件表或时间表),该列表包括任何适当的分析参数、FTMS变量、确定合成幅度的因子、优化参数、收敛值和/或范围、组分、校正、锁定质量等。
在活动5500,***通过收集用户选定的谱数能为试验获取数据,每一个包含有用户选定的重复采集数目,每一个数据采集包括时间系列数据,其可转换为包括有幅度和频率数据的谱数据。
在活动5600,***也能处理收集的数据集以获得谱数;识别与占优势的离子种类相关联的定性数据(例如,样本离子组分的识别,样本的识别,样本化学结构等);确定与占优势的离子种类相关联的定量数据(例如,样本中离子种类的百分率、浓度、丰度、相对丰度和/或相对百分率等);和/或确定需要喷射这些占优势离子种类的喷射电压。
在某些FTMS***示例性的实施例中,通过在其谐振频率充分激发这些离子以引起它们自旋进和/或越过单元的检测板从而阻止检测,能够发生喷射。一旦占优势的离子种类被喷射,将检测不到它。所以,单元可装载基本更多的离子,包括更多不占优势的离子,从而提高这些不占优势离子的视在浓度与实际的可检测性。
在活动5700,***能输出所取得和处理过的数据,例如给文件、存储装置、I/O装置、控制***和/或用户界面以使其他方法可以得到这些数据。
在活动5800,***于是能依次完成每一个后续试验,直到完成所有试验,通过首先完成活动5300和5400,在此期间离子化电流通量被设置在下一级设定点且阀被设定在下一个阀电压;设定需要喷射被确定为前一个试验中占优势的全部离子种类的喷射电压;然后,完成活动5500至5700。
在活动5900,***能监控所检测的离子种类数量的变化或不变化,这是通过按预先确定的时间、预先确定的重复次数连续重复多个试验,和/或直到预先确定的变化和/或数量被检测到。每次重复之前,可清除掉占优势离子种类的本体和它们相关联的喷射电压以使重复发生之间没有遗留物出现。
图6是强度对时间的示例性曲线图6000。曲线图6000说明的是由FTMS分析***的示例性实施例基于在发展的专有试验性工厂的取样所产生的实际实时数据。***检测到了样本的四个组分,包括一个在该试验性工厂创造的料想不到的材料,对此该试验性工厂的所有者并没有意识到,直到使用了FTMS分析***。
图7是强度对扫描数的示例性曲线图7000。曲线图7000包括扫描周期7100到7800,这图解性地说明了方法4000的优化活动对包含有空气的FTMS样本的实际影响。注意,对每一个标绘的组分即氩、氮和氧,方法4000的活动是同时完成。
曲线图7000图解的扫描周期能对应于方法4000优化活动的某些实施例,如下面的表1所示:
表1:曲线图7000与方法4000的对应
扫描周期 |
活动 |
7100 |
4400 |
7200 |
4700离子化电流通量初始加倍之后 |
7300 |
4700周期7200中的通量加倍之后 |
7400 |
4700周期7300中的通量加倍之后 |
7500 |
4800周期7400中的通量减半之后 |
7600 |
4500-4800(对离子化阶段的捕获电压,保持周期7500的通量) |
7700 |
4500-4800(对检测阶段的捕获电压) |
7800 |
4500-4800(对单元中离子的位置) |
图8是强度对质荷比(m/z)的示例性曲线图8000。曲线图8000所示的数据产生于FTMS***的输出,其从时间域变换到频域,然后再变换到质量域。图解的质量范围是从约16.99到约17.06m/z。在图解的范围内有两个峰8100和8200,峰8100出现在约17.0027m/z处,这与水气或氢氧基离子(OH)的质量相对应,峰8200出现在约17.0265m/z处,这与氨离子(NH3)的质量相对应。
图9是示例性图形用户界面9000,其以发酵罐顶部空间实际样本的几个强度对质荷比(m/z)曲线图为特征。曲线图9100显示的是N2、CO2和氩为占优势组分的最初曲线。曲线图9200显示的是占优势组分已经被基本喷射后的曲线。这样,图9就说明通过在分析的离子化阶段有选择地喷射离子,除去某些占优势组分的强度峰并提高与较低浓度组分相关联的较弱峰的灵敏度是可能的。
FTMS***和方法的示例性实施例被用于现场,现场示范对生物技术公司的发酵罐(其用于生产某些产品(烹调))产生的废气进行连续分析和监控。本具体示范是在试验规模发酵罐实现,其尺寸小于1000升(<250加仑)。所使用的小型、可移动、高分辨率FT-MS***被用卡车运到试验研究所且测量在没有质量校准分析器的情况下开始。
在决定发酵液的呼吸商或新陈代谢上,测量和监控发酵罐的废气被确定为是有效的方法。依据发酵作用的速度和分析的频率,通过控制养料的比例、允许和/或评估反应的程度和/或证实可能的非理想化合物的出现,示范显示该装置可用于改进工艺过程控制、提高产量和/或加快发酵作用的速率。
例如,大家知道虽然对发酵罐的许多测量只着眼于N2、O2、CO2和一些其他单一气体,然而在发酵作用中实际上会涉及各种各样的组分且在发酵罐的顶部空间能被检测到。大家也知道,单个的组分能用作有助于建立最适宜工作参数的线索以在任何给定的时间内得到最好的收益。
表2呈现的是在发酵罐顶部空间所检测的组分,这是基于每次分析少于一分钟的频率(每共同累计数据点一秒)完成的分析。如在表中可看到的,大量的离子碎片数出现在质量数从10到60之间范围内的谱中。在那个范围内有10个两元组和甚至一个有三个几乎相同(同量异位数)的质量的三元组。
表2:质量测量和校正分配
注意许多这些两元组和三元组出现的多么稠密。例如,对氮和CH2组分的两元组跨越小于0.016m/z的范围,且对O、NH2和CH4碎片的三元组跨越小于0.0363m/z的质量范围。知道本体和/或各种发酵罐顶部空间组分的浓度有助于改进工艺控制、设定发酵作用速率、减少发酵作用的持续时间和提高产量。
在搜寻目标化合物时,如此的精确性可有助于避免错误的确认。如此的精确性可避免对气相色谱仪分离的需要。
继续表2,值得注意有细微的偏倚在观察的测量质量和理论质量之间。然而,该偏倚与质量范围在数学上是一致的。于是,当标绘图时,这些质量偏倚与多项式线符合得很好,如图10所示的发酵罐质量校正示例性曲线图10000。
这里所做的质量校正是在事后完成的。对3或4个已知组分的频率测量被用于建造对所出现的其他质量的简单线性拟和,从而允许组分的正确识别。
使用锁定质量可以回避掉对质量校正的需要。FTMS***可包括使用甚至多个锁定质量的能力以校正可能影响测量精确性的变量。频率和温度上的变化是两个校正量,一双锁定质量可以解决。
回到分辨离子对的概念,表3提供的试验数据显示,某些两元组的分辨对某些FTMS***的实施例是可能的。
表3:可分辨的离子对
化合物 |
两元组离子 |
精确质量(m/z) |
质量差 |
分辨(m/Δm) |
次乙基 |
C2H4 |
28,03129 |
|
|
氮气 |
N2 |
28.00614 |
0.02515 |
1113 |
一氧化碳 |
CO |
27.99292 |
0.01322 |
2118 |
|
|
|
|
|
四氢呋喃 |
C4H8O |
72.05751 |
|
|
N-戊烷 |
C5H12 |
72.09389 |
0.03638 |
1980 |
|
|
|
|
|
苯 |
C6H6 |
78.04694 |
|
|
吡啶 |
C5H4N |
78.03437 |
0.01257 |
6200 |
|
|
|
|
|
水 |
OH |
17.00274 |
|
|
氨 |
NH3 |
17.02655 |
0.02381 |
713 |
因为每种离子种类的本体能稳定和精确地确定,所以幅度能被用于精确确定每一离子种类所出现的离子相对量和/或实际量。例如,图11是浓度对时间的示例性曲线图11000。曲线图11000源自于对有催化剂的条件下产生光气的反应通过FTMS***采样的实际数据。FTMS***也用于监控反应堆的关闭以决定何时所有的剧毒光气从反应堆移走。注意FTMS***的某些示例性实施例能提供任何量的测量(如丰度、相对丰度、浓度、相对浓度、百分比、相对百分比、ppk、ppm、ppb、权和/或计数等)对任何适当自变量(如时间、分子质量、m/z比、分子种类、离子种类等)的曲线图。
某些示例性试验证明FTMS***的某些示例性实施例的各种定量特征。例如,FTMS***的某些示例性实施例可以例如从非常易反应的三氟化氮(“NF3”)气体混合物中产生稳定的定量信息。某些示例性实施例即使在使用传统的EI离子化灯丝时也能长期产生稳定的定量数据。在某些示例性实施例中,在瞬时的基准之上大约5%浓度的相对变化能够容易地被检测到。某些示例性实施例产生定量数据,对大于约50的信噪比,其相对约1%到约5%的标准差在至少一个数量级的浓度上其是线性的,包括其中间的所有值和子范围。某些示例性实施例能继续使用单个的已知样本基于日常的校正产生稳定的定量数据。
使用示例性实施例,在不同的浓度下分析NF3。经过这些试验,可回答某些问题,包括:
A.在完成分析时FTMS***有多么稳定?
B可由FTMS***再显地检测的变化量是多少?
C.FTMS***需要多长时间校正一次?
为了完成试验,用到两个气体圆筒。一个包含有已知的20%NF3混合物;第二个是纯氮。使用两个质量流量控制器。控制器1具有5000sccm(标准立方厘米/分钟)的满量程,控制器2具有100sccm的满量程。由于两个控制器流量量程的巨大差别,控制NF3的浓度是通过变化它的流速决定的,而不是调节稀释的N2气流速。由于质量流量控制器通常是不准确的,低于其额定量的2%,用于N2的控制器1以150sccm(额定量的3%)的流速而被使用。控制器2用于NF3混合物。控制器2的流速被调节在50sccm和39sccm之间。这对应于样本中NF3的浓度,在5.0%和0.5%之间。
两种气体钩连接到流量控制器,控制器1处于室温。控制器2维持在约75℃度的温度。气体混合装置的输出连到FTMS采样阀的外部隔板连接上。样本气体经过阀并经过出口隔板连接而退出。样本然后流经1/8英寸的聚四氟乙烯管从出口隔板连接到工作罩,在那里它被耗尽。
在头两个小时,维持5.0%NF3的浓度。这之后NF3的浓度被调整为4.5%一个小时,然后4.0%一个小时,然后3.0%一个小时,然后2.0%一个小时,然后1.0%一个小时,然后0.5%一个小时,然后5.0%三十分钟。这数据用于建造校准曲线。然后,选择NF3的若干随机流速,如表2所给出的。这些流速的每一种维持10分钟。这数据用于计算测量的NF3浓度,其与预测的NF3浓度相比较。最后NF3浓度重新设定为5.0%并做另外约8个小时的数据采集。
FTMS***的某些示例性实施例有产生许多不同类型数据文件的能力。在试验中,自动产生五份数据文件。一份文件是峰的测量文件,它为要求的定量峰记录粗略的峰高,在这种情况下对NF3的质量为51.9998和70.9982。第二文件记录其他相关参数在逗号划界的文本文件中。这些参数包括通过离子泵电流读数测量的样本压力,52和71峰的质量位置以及阀和传感器的温度。第三类文件为每一个处理过的谱记录峰检测质量谱。在试验一旦结束时第四文件类型将仪器状态窗口的状态存档。最后的文件是末尾的样本引入峰的ASCII表示,这考虑了对峰的形状和泵响应的检查。当在取新的数据点时所有这些文件每30秒更新一次。所有这些文件存储在工作站上的数据子目录里,对应于用于获得数据的试验方法。
基于试验,下面的表4说明当在执行分析时试验的FTMS***的稳定性,于是解答了第一个问题。
图12是强度对浓度的示例性曲线图在这种情况下标绘的表4中的数据作为校准曲线,其中强度依赖于NF3百分数。
一些早的试验数据显示示例性FTMS***需要一个小时达到稳定,此后维持稳定超过10小时。也是在七小时末FTMS***的灵敏度是开始运行时的4%以内。
表4
%NF3 |
平均强度 |
中值强度 |
Std.Dev. |
FSD(%) |
信噪比 |
5 |
6334 |
6329 |
85.2 |
1.3 |
159 |
4.5 |
5527 |
5528 |
91.1 |
1.6 |
138 |
4.0 |
4917 |
4920 |
59.8 |
1.2 |
123 |
3.0 |
3596 |
3601 |
52.9 |
1.5 |
90 |
2.0 |
2335 |
2334 |
40.0 |
1.7 |
58 |
1.0 |
1061 |
1061 |
30.5 |
2.9 |
27 |
0.5 |
453 |
452 |
24.1 |
5.3 |
11 |
要解答第二个问题,试验中取得的数据显示对1%和5%间的NF3绝对浓度10%的相对变化是可容易检测的。另外,十分相容的标准差的检查和所获得的RSD’s显示在99%的置信水平,5%的相对浓度变化是可检测的。因为FTMS***的某些示例性实施例可在引入的分子数目的基础上工作,这些相同的检测值能被用于20%浓度的对象。在那个水平,19%和20%之间的差别能被容易地检测。所用FTMS***的响应几乎即时的,只依赖于样本的流速和分析速率(在这为每分钟两个点)。这如图13所示,它是强度对扫描数的示例性曲线图13000。
在10分钟的间隔内运行一串已知的浓度完成试验方法有效性的快速检验。这数据呈现在图13的曲线上在扫描900和1050之间,并且还概括成表5。
回答第三个问题,如通过分析的稳定性所显示,使用单个已知样本的日常校正维持约5%的RSD’s。在示例性试验FTMS***暴露于样本的大约两周期间每天的灵敏度的变化不超过15%。
于是,NF3试验中收集的数据表明FTMS***的某些示例性实施例
表5
能产生基本稳定的定量信息。
用某些示例性FTMS***,质量和数量都能自动提供。例如,使用已知的样本,包括约25ppm的丁烷在氮中,基峰处在43.0548m/z,也能确定其他的碎片峰,连同每一个峰的相对强度,于是形成以质量和强度的收集为特征的丁烷图样。类似地,可对丁烷其他浓度下的强度数据收集以生成基本线性的校准曲线。这样一种校准曲线能基于固定的已知样本温度、穿过样本阀测量的固定已知压差(例如,样本的入口压力与离子单元之间的差)、以及示例性FTMS***在离子化电流通量线性范围内的运行。
这种质量和强度数据可被收集并存储在例如数据库中。在某些示例性FTMS***中,通过各种各样已知样本的质量和强度数据的这样一种数据库,未知样本能被自动识别(即,定性)及定量。例如,如果任何未知样本,即使包含有大量种类的样本,呈现具有与丁烷基本相同图样的峰(包括它的基和碎片峰),某些示例性实施例能认识与丁烷相对应的未知样本中的图样,从而以高的预先确定的确定度预知丁烷出现在样本中。使用从强度对浓度数据生成的丁烷的校准曲线,在预先确定的置信区间内,能估算未知样本中出现的丁烷量。如果以与生成校准曲线不同的温度和差压收集未知样本,则使用理想气体定律能估算新的校准曲线。
在某些示例性FTMS***中,种类的半定量测量能自动相对独立地完成,且不要存取或需要预先生成校准曲线或数据。例如,如表6所示,对各种不同的轻气体,它们的每一种以25ppm的浓度出现在分离的氮气样本中,示例性FTMS***生成类似的强度信号和信噪比。于是,不使用校准曲线或数据情况下未知样本能被识别且至少能半定量地确定。
通过对上述详细描述和某些示例性实施例附图的阅读,还有其他实施例对本领域的那些熟练的技术人员也将变得很显而易见。应当明白众多的变更、修改和另外的实施例是可能的,相应地所有这种变更、修改和另外的实施例被认为是在后附的权利要求的精神和
表6:化合物独立半定量
种类 |
信号基峰质量(m/z) |
噪音 |
信号强度 |
信号/噪音 |
二氧化碳 |
43.9898 |
12 |
653 |
54 |
丁烷 |
43.0548 |
12 |
611 |
51 |
丙酮 |
43.0184 |
12 |
637 |
53 |
SO2 |
63.9619 |
12 |
610 |
51 |
乙硫醇 |
46.9956 |
12 |
603 |
50 |
范围之内。例如,不论本申请任何部分(如标题、领域、背景、概要、摘要、绘图等)的内容,除非清楚地详细说明相反,没有要求在任何权利要求中包含任何具体描述或图示活动或单元、这种活动的任何特定次序或这种单元的任何特定相互关系。而且,任何活动可以重复,任何活动可以由多个实体完成,和/或任何单元可以复制。进而,任何活动或单元可以去除,活动的次序可以变化,和/或单元的相互关系可以变化。因此,说明书和附图应认为是在性质上说明性的而并不是限制性的。此外,在此描述任何数字或数字区间时,除非清楚说明外,那数字或区间是大概的。当在此描述任何数字区间时,除非清楚说明外,那区间包括其中的所有数字和其中的所用子区间。