CN100400661C

CN100400661C - 芳族甲基转移酶及其应用

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Publication number: CN100400661C
Application number: CNB02821210XA
Authority: CN
Inventors: S·R·诺里斯; K·林科恩; J·C·斯泰因; H·E·瓦伦廷; A·范埃宁纳尔姆
Original assignee: Monsanto Technology LLC
Current assignee: Monsanto Technology LLC
Priority date: 2001-10-25
Filing date: 2002-10-24
Publication date: 2008-07-09
Anticipated expiration: 2022-10-24
Also published as: EP1444348B1; US7262339B2; WO2003034812A3; US20030150015A1; AR036962A1; ATE456657T1; EP1444348A2; BR0213499A; EP1444348A4; DE60235252D1; CA2463398A1; US20080083045A1; AU2002342114B2; WO2003034812A2; AU2002342114A2; CN1578835A

Abstract

本发明涉及与生育酚生物合成通路相关的基因。更具体地说，本发明提供并且包括与编码具有甲基转移酶活性的多肽的基因有关的核酸分子、蛋白和抗体。本发明也提供了应用这些因子的方法，例如用于基因分离、基因分析和转基因植物的产生。此外，本发明包括经修饰而表达上述多肽的转基因植物。本发明也包括从生育酚生物合成通路生成产物的方法。

Description

芳族甲基转移酶及其应用

本发明涉及植物遗传学和生物化学领域。更具体地说，本发明涉及与生育酚生物合成通路相关的基因，即编码具有甲基转移酶活性的基因，及其这些基因的用途。

生育酚是哺乳动物饮食中的一种重要组分。流行病学调查表明添加生育酚可以使罹患心血管疾病和癌症的机率降低，可以增强免疫功能，还可以预防或延缓大量人体退行性疾病进程(Traber和Sies，Annu.Rev.Nutr.16：321-347(1996))。生育酚部分地通过稳定生物膜的脂双层(Skrypin和Kagan，Biochim.Biophys.Acta 815：209(1995)；Kagan，N.Y.Acad.Sci.p 121，(1989)；Gomez-Fernandez等，Ann.N.Y.Acad.Sci.p 109(1989))、还原脂质氧化产生的多不饱和脂肪酸(PUFA)自由基(Fukuzawa等，Lipids 17：511-513(1982))，清除氧自由基、脂质过氧基以及单线态氧类(Diplock等，Ann.N Y Acad.Sci.570：72(1989)；Fryer，Plant Cell Environ.15(4)：381-392(1992))起作用。

α-生育酚通常又被称作维生素E，属于一类脂溶性抗氧化剂，后者包括α，β，γ和δ-生育酚以及α，β，γ和δ-生育三烯酚。尽管α，β，γ和δ-生育酚以及α，β，γ和δ-生育三烯酚有时合称作“维生素E”，但维生素E在化学上更恰当的定义是指α-生育酚.维生素E或α-生育酚对人体健康很重要，部分是因为它在人体内容易吸收和保留，因而比其他生育酚类具有更高的生物活性(Traber和Sies，Annu.Rev.Nutr.16：321-347(1996))。然而，其他的生育酚如β，γ和δ-生育酚也有重要的健康和营养价值。

生育酚主要由植物及有光合作用的其他生物(包括蓝细菌)合成。因此，哺乳动物饮食中的生育酚几乎都是从这些来源获得的。植物组织在总的生育酚含量及生育酚的组成上有很大的不同。在绿色、光合植物组织中主要是α-生育酚。每克新鲜的叶组织可含有10-50μg的总生育酚，但世界主要农作物(如稻、玉米、小麦、土豆)中的多数仅产生少量或极少量的总生育酚，其中又仅有一小部分为α-生育酚(Hess，高等植物中的维生素E、α-生育酚及抗氧化剂，R.Alscher和J.Hess，Eds.CRC Press，Boca Raton.pp.111-134(1993))。油籽作物通常含有较多的总生育酚，但在多数油籽中仅有一小部分为α-生育酚(Taylor和Barnes，Chemy Ind.Oct：722-726(1981))。

从普通的美国饮食中，要达到每天摄取15-30mg维生素E的建议量是很困难的。例如，要达到建议的每天维生素E的摄取量，需要消耗超过750克的菠菜叶，其中α-生育酚占总生育酚的60％，或者200-400克的大豆油。尽管可以在饮食中加入添加剂，但多数添加剂含有的主要是合成的维生素E，其中含有8个立体异构体，而天然维生素E主要由单一异构体组成。而且，添加剂相对来说比较昂贵，普通人群不会进行常规使用。因此，需要寻找组合物和方法，来提高植物来源的生育酚的总量或提高其中α-生育酚所占的相对百分比。

生育酚除对健康有利外，农作物生育酚水平的提高还可以增强其稳定性，延长植物产品的货架期(Peterson，Cereal-Chem.72(1)：21-24(1995)；Ball，食品分析中的脂溶性维生素分析，综述，London，ElsevierScience Publishers Ltd.(1988))。而且，已证明猪、牛及家禽饲料中生育酚的添加可以大大提高肉的质量，并通过延缓加工后脂质的氧化来延长加工后肉制品的货架期。加工后脂质氧化会产生具有不良气味的组分(Sante和Lacourt，J.Sci.Food Agric.65(4)：503-507(1994)；Buckley等，J.of Animal Science 73：3122-3130(1995)).

生育酚的生物合成

高等植物的质体通过相互关联的生化通路，产生包括生育酚在内的次级代谢产物。高等植物生育酚的生物合成通路涉及尿黑酸及叶绿基焦磷酸的缩合，以形成2-甲基叶绿基质体醌醇(methylphytylplastoquinol)(Fiedler等，Planta 155：511-515(1982)；Soll等，Arch.Biochem.Biophys.204：544-550(1980)；Marshall等，Phytochem.24：1705-1711(1985))。这种植物生育酚通路可分为四部分：1)尿黑酸(HGA)的合成，为生育酚提供芳香环；2)叶绿基焦磷酸的合成，为生育酚提供侧链；3)HGA和叶绿基焦磷酸经由异戊二烯基转移酶结合，随后环化；4)芳香环的S-腺苷蛋氨酸依赖性的甲基化，这一步影响每类生育酚的相对丰度。参见图1。

下表列出了生育酚生物合成中涉及的各种基因及其编码蛋白。

如本文所用，尿黑酸叶绿基转移酶(HPT)，叶绿基异戊二烯基转移酶(PPT)，slr1736以及ATPT2指的是具有相同酶活性的蛋白或编码蛋白的基因。

尿黑酸的合成

尿黑酸是生育酚和质体醌共有的前体。在至少一些细菌，尿黑酸的生物合成要经过如下步骤：分支酸转换成代丙酮酸，再经由双功能代丙酮酸脱氢酶作用生成对羟苯基丙酮酸。双功能细菌代丙酮酸脱氢酶的例子包括由草生欧文氏菌(Erwinia herbicola)和大肠杆菌的tyrA基因编码的蛋白。TyrA基因产物催化从分支酸到代丙酮酸的产生以及随后的代丙酮酸脱氢生成对羟苯基丙酮酸(p-HPP)，p-HPP是尿黑酸的直接前体。然后，p-HPP在羟苯基丙酮酸双加氧酶(HPPD)作用下转换成尿黑酸。与此相反，植物缺乏代丙酮酸脱氢酶活性，因此，通常认为，从分支酸到尿黑酸的合成要经过中间体arogenate(酪氨酸前体)的合成和转换。由于尿黑酸合成涉及的通路也参予酪氨酸的形成，所以这些通路的任何改变也会引起酪氨酸及其他芳香族氨基酸合成的改变。

叶绿基焦磷酸的合成

生育酚是异戊二烯类化合物家族的一个成员。其他异戊二烯类包括类胡萝卜素、赤霉素、萜烯、叶绿素和脱落酸。异戊二烯类生成的一个中间中间体是异戊烯基双磷酸(IPP)。关于胞浆和质体产生IPP的通路已有报道。胞浆通路涉及乙酰乙酰辅酶A硫解酶、HMG辅酶A合成酶、HMG辅酶A还原酶、甲羟戊酸激酶、磷酸甲羟戊酸激酶和甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶。

最近，Rohmer和Arigoni研究小组的研究证据表明，存在另外一种质体的异戊二烯类生物合成通路(Eisenreich等，Chem.Bio.5：R221-R233(1998)；Rohmer，Prog.Drug.Res.50：135-154(1998)；Rohmer，Comprehensive Natural Products Chemistry，Vol.2，pp.45-68，Barton和Nakanishi(eds.)，Pergamon Press，Oxford，England(1999))。他们在对某些真细菌和植物的萜类化合物的研究中发现，同位素标记的结果按照甲羟戊酸通路无法解释。Arigoni及其同事随后发现1-脱氧木酮糖或其衍生物是新通路的中间体，新通路现在被称为MEP通路(Rohmer等，Biochem.J.295：5 17-524(1993)；Schwarz，Ph.D.thesis，

Technische Hochschule，Zurich，Switzerland(1994))。最近的研究表明，通过一种dxs基因编码的酶(Lois等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95：2105-2110(1997)；和Lange等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95：2100-2104(1998))可以从各一分子的甘油醛3-磷酸(Rohmer，Comprehensive Natural Products Chemistry，Vol.2，pp.45-68，Barton和Nakanishi，eds.Pergamon Press，Oxford，England(1999))和丙酮酸(Eisenreich等，Chem.Biol.5：R223-233(1998)；Schwarz supra；Robmer等，J.Am.Chem.Soc.118：2564-2566(1996)；和Sprenger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94：12857-12862(1997))形成1-脱氧木酮糖5-磷酸(Broers，Ph.D.thesis(

TechnischeHochschule，Zurich，Switzerland)(1994))。1-脱氧木酮糖5-磷酸可进一步被dxr基因编码的还原异构酶(Bouvier el al.Plant Physiol，117：1421-1431(1998)；和Rohdich等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，96：11758-11763(1999))转换成2-C-甲基赤藓醇4-磷酸(Arigoni等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94：10600-10605(1997))。

已报道的MEP通路涉及的基因还包括ygbP和ygbB。其中，ygbP催化2-C-甲基赤藓醇4-磷酸转换成各自的胞苷焦磷酸衍生物，ygbB催化4-磷酸胞苷-2C-甲基-D-赤藓醇转换成2C-甲基-D-赤藓醇，3，4-环磷酸盐。这些基因在大肠杆菌基因组上紧密连接(Herz等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.97(6)：2485-2490(2000))。

一旦IPP通过MEP通路形成，就在GGDP合成酶的作用下，转换成GGDP，进一步变成叶绿基焦磷酸，后者是生育酚侧链的核心组分。

结合和环化

尿黑酸通过叶绿基/异戊烯基转移酶与叶绿基-焦磷酸或solanyl焦磷酸结合，分别形成2-甲基叶绿基质体醌醇或2-甲基solanyl质体醌醇。2-甲基solanyl质体醌醇是质体醌生物合成的前体，而2-甲基叶绿基质体醌醇最终转换成生育酚。

芳香环的甲基化

各种生育酚亚型主要结构的区别在于苯环周围甲基的位点。2-甲基叶绿基质体醌醇和2-甲基solanyl质体醌醇都是植物2-甲基叶绿基质体醌醇和2-甲基solanyl质体醌醇转移酶(生育酚甲基转移酶2；甲基转移酶2；MT2；tMT2)的底物，后者可以使生育酚前体甲基化。在γ生育酚甲基转移酶(GMT)作用下，γ-生育酚5位点甲基化产生α-生育酚。

生成α-生育酚的另一可能通路涉及在生育酚环化酶作用下，2-甲基叶绿基质体醌醇环化产生δ-生育酚。δ-生育酚在GMT作用下，5位点甲基化转换成β-生育酚。δ-生育酚在tMT2作用下，3位点甲基化，然后在GMT作用下，5位点甲基化转换成α-生育酚。还有一种可能是β-生育酚在tMT2作用下，3位点甲基化直接转换成α-生育酚(参见，例如Biochemical Society Transactions，11：504-510(1983)；植物生化入门，第二版，11章(1983)；维生素激素，29：153-200(1971)；Biochemical Journal，109：577(1968)；和Biochemicaland Biophysical Research Communication，28(3)：295(1967))。由于产生α-生育酚的所有主要机制都涉及tMT2的催化，所以这一活性缺陷的植物体内会出现β和δ-生育酚的堆积，而这一活性增强的植物体内则会出现α和γ-生育酚的堆积。由于许多植物的的种子没有GMT活性，所以这些植物会积累γ-生育酚。

因此有必要寻找编码与生育酚生物合成相关的酶的核酸分子，以及增强或改变植物生育酚产生的相关的酶和抗体，并进一步发展表达生育酚生物合成相关核酸分子的转基因生物，后者可以加强食品和饲料的营养。

发明简述

本发明包括并提供编码tMT2酶的基本纯化的核酸分子。

本发明包括并提供一种基本纯化的核酸分子，其中包含选自SEQID NOs：1和2的核苷酸序列。

本发明包括并提供一种基本纯化的核酸分子，其中包含选自SEQID NOs：3-7的核苷酸序列。

本发明包括并提供一种基本纯化的核酸分子，其中包含选自SEQID NOs：8-14的核苷酸序列。

本发明包括并提供一种基本纯化的核酸分子，其编码一种具有2-甲基叶绿基质体醌醇(Methylphytylplastoquinol)甲基转移酶活性的植物多肽分子。

本发明包括并提供一种基本纯化的具有2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶活性的植物多肽分子。

本发明包括并提供一种基本纯化的突变多肽分子，其相对于非突变多肽来讲，具有改变的2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶活性。

本发明包括并提供一种基本纯化的多肽分子，其中包含选自SEQID NOs：16和28的氨基酸序列。

本发明包括并提供一种基本纯化的多肽分子，其中包含选自SEQID NOs：17-21以及29-32的氨基酸序列。

本发明包括并提供一种基本纯化的多肽分子，其中包含选自SEQID NOs：22-27和33-38的氨基酸序列。

本发明包括并提供一种能与一种多肽特异结合的抗体，该多肽包含选自SEQ ID NOs：16-38的氨基酸序列。

本发明包括并提供一种包含导入核酸分子的转化植物，该导入的核酸分子包含一种选自SEQ ID NOs：1，2，8-15及其互补序列的核酸序列。

本发明包括并提供一种包含导入核酸分子的转化植物，该导入的核酸分子编码一种多肽分子，所述多肽分子包含选自SEQ ID NOs：16，22-28和33-38的氨基酸序列。

本发明包括并提供一种包含导入核酸分子的转化植物，该导入的核酸分子编码一种多肽分子，其中多肽分子包含选自SEQ ID NOs：17-21和29-32的氨基酸序列。

本发明包括并提供一种包含导入第一核酸分子和第二核酸分子的转化植物，其中导入的第一核酸分子包含一种选自SEQ ID NOs：1，2，8-15及其互补序列的序列，导入的第二核酸分子编码一种酶，该酶选自tyrA、slr1736，HPT、GMT、生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、AANT1、slr1737、IDI、GGH等，及其互补序列、植物直向同源物(ortholog)和尿黑酸双加氧酶的反义构建体。

本发明包括并提供一种包含导入第一核酸分子和第二核酸分子的转化植物，其中导入的第一核酸分子编码一种多肽分子，该多肽分子包含一种选自SEQ ID NOs：16，22-28，33-38的氨基酸序列，导入的第二核酸分子编码一种酶，该酶选自tyrA、slr1736，HPT、GMT、生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、AANT1、slr1737、IDI、GGH等，及其互补序列、植物直向同源物和尿黑酸双加氧酶的反义构建体。

本发明包括并提供一种包含导入第一核酸分子和第二核酸分子的转化植物，其中导入的第一核酸分子包含一种选自SEQ ID NOs：1，2，8-15及其互补序列的核酸序列，导入的第二核酸分子包含选自SEQ ID NOs：39-54及其互补序列的序列.

本发明包括并提供一种包含导入第一核酸分子和第二核酸分子的转化植物，其中导入的第一核酸分子编码一种多肽分子，该多肽分子包含一种选自SEQ ID NOs：16，22-28，33-38的氨基酸序列，导入的第二核酸分子包含选自SEQ ID NOs：39-54及其互补序列的序列。

本发明包括并提供一种降低植物tMT2基因表达的方法，其包括：A)用一种核酸分子转化植物，其中的核酸分子具有导入的启动子区域，能在植物细胞引起mRNA分子的产生，其中的启动子区域与具有转录链和非转录链的转录的核酸分子相连接，其中的转录链与包含选自SEQ ID NOs：1-15的核酸序列的核酸分子互补，其中转录的核酸分子与3’非翻译序列相连，后者在植物细胞会引起转录的终止以及在mRNA序列3’端添加聚腺苷酸化核糖核苷酸；B)培育转化的植物。

本发明包括并提供包含核酸分子的转化植物，所述核酸分子包含导入的启动子区域，所述启动子在植物中引起mRNA分子产生，它与具有转录链和非转录链的转录的核酸分子相连接，其中的转录链与包含选自SEQ ID NOs：1-15的核酸序列的核酸分子互补，其中所述转录的核酸分子与3’非翻译序列相连，后者在植物细胞会引起转录的终止以及在mRNA序列3’端添加聚腺苷酸化核糖核苷酸。

本发明包括并提供一种产生植物的方法，该植物的种子中γ-生育酚的含量较高，所述方法包括：A)用一种导入的核酸分子转化上述植物，其中的核酸分子包含编码一种多肽分子的序列，其中的多肽分子包含选自SEQ ID NOs：16，22-28，33-3 8的氨基酸序列；B)培育转化的植物。

本发明包括并提供一种产生一种植物的方法，该植物的种子中γ-生育酚的含量较高，具体包括：A)用导入的第一核酸分子和第二核酸分子转化所述植物，其中所述第一核酸分子包含选自SEQ IDNOs：1，2，8-15的核酸序列，导入的第二核酸分子编码一种酶，该酶选自tyrA、slr1736，HPT、GMT、生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、AANT1、slr1737、IDI、GGH，及其互补序列、植物直向同源物和尿黑酸双加氧酶的反义构建体；B)培育转化的植物。

本发明包括并提供一种产生一种植物的方法，该植物的种子中γ-生育酚的含量较高，具体包括：A)用导入的第一核酸分子和第二核酸分子转化上述植物，其中导入的第一核酸分子包含一段序列，该序列编码一种多肽分子，该多肽分子包含选自SEQ ID NOs：16，22-28，33-38的氨基酸序列，导入的第二核酸分子编码一种酶，该酶选自tyrA、slr1736，HPT、GMT、生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、AANT1、slr1737、IDI、GGH，及其互补序列、植物直向同源物和尿黑酸双加氧酶的反义构建体；B)培育转化的植物。

本发明包括并提供一种产生一种植物的方法，该植物的种子中α-生育酚的含量较高，具体包括：A)用导入的第一核酸分子和第二核酸分子转化上述植物，其中导入的第一核酸分子包含选自SEQ IDNOs：1，2，8-15的核酸序列，导入的第二核酸分子包含一种选自SEQ ID NOs：39-54及其互补序列的序列；B)培育转化的植物。

本发明包括并提供一种产生一种植物的方法，该植物的种子中α-生育酚的含量较高，具体包括：A)用导入的第一核酸分子和第二核酸分子转化上述植物，其中导入的第一核酸分子包含一段序列，该序列编码一种多肽分子，该多肽分子包含选自SEQ ID NOs：16，22-28，33-38的氨基酸序列，导入的第二核酸分子包含选自SEQ IDNOs：39-54及其互补序列的序列；B)培育转化的植物。

本发明包括并提供一种种子，其来源于一种包含导入核酸分子的植物，其中的核酸分子包含选自SEQ ID NOs：1，2，8-15的核酸序列。

本发明包括并提供一种种子，其来源于一种包含导入的第一核酸分子和第二核酸分子的植物，其中导入的第一核酸分子包含选自SEQID NOs：1，2，8-15的核酸序列，导入的第二核酸分子编码一种酶，该酶选自tyrA、slr1736，HPT、GMT、生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、AANT1、slr1737、IDI、GGH等，及其互补序列、植物直向同源物和尿黑酸双加氧酶的反义构建体。

本发明包括并提供一种种子，其来源于一种包含导入的第一核酸分子和第二核酸分子的植物，其中导入的第一核酸分子包含选自SEQID NOs：1，2，8-15的核酸序列，导入的第二核酸分子包含选自SEQID NOs：39-54及其互补序列的序列。

本发明包括并提供一种包含导入第一核酸分子、第二核酸及第三核酸分子的转化植物，其中导入的第一核酸分子包含选自SEQ IDNOs：1，2，8-15及其互补序列的核酸序列，导入的第二核酸分子包含选自SEQ ID NOs：39-54及其互补序列的序列，导入的第三核酸分子编码一种酶，该酶选自tyrA、slr1736，HPT、GMT、生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、AANT1、slr1737、IDI、GGH等，及其互补序列、植物直向同源物和尿黑酸双加氧酶的反义构建体。

本发明包括并提供一种包含导入第一核酸分子、第二核酸及第三核酸分子的转化植物，其中导入的第一核酸分子编码一种多肽分子，该多肽分子包含选自SEQ ID NOs：16，22-28，33-38的氨基酸序列，导入的第二核酸分子包含选自SEQ ID NOs：39-54及其互补序列的序列，导入的第三核酸分子编码一种酶，该酶选自tyrA、slr1、HPT、GMT、生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、AANT1、slr1737、IDI、GGH等及其互补序列、植物直向同源物和尿黑酸双加氧酶的反义构建体。

本发明包括并提供一种包含导入第一核酸分子和第二核酸分子的转化植物，其中的第一核酸分子编码tMT2酶，第二核酸分子编码GMT酶。

本发明包括并提供一种产生一种植物的方法，该植物的种子中α-生育酚的含量较高，所述方法包括：A)用编码tMT2酶的核酸分子和编码GMT酶的核酸分子转化所述植物；B)培育所述植物。

核酸和氨基酸序列简述

SEQ ID NO：1提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码一种野生型拟南芥Columbia生态型的tMT2酶。

SEQ ID NO：2提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码一种野生型拟南芥Landsberg生态型的tMT2酶。

SEQ ID NO：3提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码拟南芥Landsberg生态型的tMT2酶的hdt2突变。

SEQ ID NO：4提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码拟南芥Columbia生态型的tMT2酶的hdt6突变。

SEQ ID NO：5提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码拟南芥Columbia生态型的tMT2酶的hdt9突变。

SEQ ID NO：6提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码拟南芥Landsberg生态型的tMT2酶的hdt10突变。

SEQ ID NO：7提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码拟南芥Columbia生态型的tMT2酶的hdt16突变

SEQ ID NO：8提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码玉米的tMT2酶。

SEQ ID NO：9提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码陆地棉(Gossypium hirsutum)的tMT2酶。

SEQ ID NO：10提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码韭葱(Allium porrum)的tMT2酶。

SEQ ID NO：11提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码大豆的tMT2酶。

SEQ ID NO：12提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码稻的tMT2酶。

SEQ ID NO：13提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码欧洲油菜(Brassica napus)的tMT2酶。

SEQ ID NO：14提供了一种DNA分子的核酸序列，该DNA分子编码一种与SEQ ID NO：13序列不同的欧洲油菜的tMT2酶。

SEQ ID NO：15提供一种野生型拟南芥tMT2酶的核酸编码序列。

SEQ ID NO：16提供野生型拟南芥Columbia和Landsberg生态型的tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：17提供野生型拟南芥Landsberg生态型hdt2突变株tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：18提供野生型拟南芥Columbia生态型hdt6突变株tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：19提供野生型拟南芥Columbia生态型hdt9突变株tMT2酶的氨基酸序列。

sEQ ID NO：20提供野生型拟南芥Landsberg生态型hdt10突变株tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：21提供野生型拟南芥Columbia生态型hdt16突变株tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：22提供玉米tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：23提供陆地棉tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：24提供韭葱tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：25提供大豆tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：26提供稻tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：27提供欧洲油菜tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：28提供一种成熟的野生型拟南芥Columbia生态型tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：29提供一种成熟的野生型拟南芥Landsberg生态型hdt2突变株tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：30提供一种成熟的野生型拟南芥Columbia生态型hdt6突变株tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：31提供一种成熟的野生型拟南芥Landsberg生态型hdt10突变株tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：32提供一种成熟的野生型拟南芥Columbia生态型hdt16突变株tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：33提供一种成熟的欧洲油菜tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：34提供一种成熟的稻tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：35提供一种成熟的玉米tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：36提供一种成熟的大豆tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：37提供一种成熟的韭葱tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：38提供一种成熟的陆地棉tMT2酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：39提供一种编码拟南芥γ-生育酚甲基转移酶的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：40提供一种编码拟南芥Columbia生态型γ-生育酚甲基转移酶的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：41提供一种编码稻γ-生育酚甲基转移酶的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：42提供一种编码玉米γ-生育酚甲基转移酶的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：43提供一种编码陆地棉γ-生育酚甲基转移酶的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：44提供一种编码pulcherrium萼距花γ-生育酚甲基转移酶的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：45提供一种编码欧洲油菜S8γ-生育酚甲基转移酶的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：46提供一种编码欧洲油菜P4γ-生育酚甲基转移酶的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：47提供一种编码番茄γ-生育酚甲基转移酶的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：48提供一种编码大豆γ-生育酚甲基转移酶1的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：49提供一种编码大豆γ-生育酚甲基转移酶2的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：50提供一种编码大豆γ-生育酚甲基转移酶3的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：51提供一种编码万寿菊γ-生育酚甲基转移酶1的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：52提供一种编码两色蜀黍γ-生育酚甲基转移酶的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：53提供一种编码点形念珠藻γ-生育酚甲基转移酶的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：54提供一种编码鱼腥藻γ-生育酚甲基转移酶的DNA分子的核酸序列。

SEQ ID NO：55和56提供MAA21_40_1引物对的核酸序列。

SEQ ID NO：57和58提供MAA21_40_2引物对的核酸序列。

SEQ ID NO：59和60提供MAA21_40_3引物对的核酸序列。

SEQ ID NO：61和62提供MAA21_40_4引物对的核酸序列.

SEQ ID NO：63和64提供MAA21_40_5引物对的核酸序列.

SEQ ID NO：65和66提供MAA21_40_6引物对的核酸序列。

SEQ ID NO：67和68提供MAA21_40_7引物对的核酸序列。

SEQ ID NO：69和70提供MAA21_40_8引物对的核酸序列.

SEQ ID NO：71和72提供MAA21_40_9引物对的核酸序列。

SEQ ID NO：73和74提供MAA21_40_10引物对的核酸序列。

SEQ ID NO：75和76提供MAA21_10_11引物对的核酸序列。

SEQ ID NO：77和78提供用于扩增编码一种成熟欧洲油菜tMT2酶的基因的引物的核酸序列。

SEQ ID NO：79和80提供用于扩增编码一种成熟稻tMT2酶的基因的引物的核酸序列。

SEQ ID NO：81和82提供用于扩增编码一种成熟玉米tMT2酶的基因的引物的核酸序列。

SEQ ID NO：83和84提供用于扩增编码一种成熟大豆tMT2酶的基因的引物的核酸序列。

SEQ ID NO：85和86提供用于扩增编码一种成熟韭葱tMT2酶的基因的引物的核酸序列。

SEQ ID NO：87和88提供用于扩增编码一种成熟陆地棉tMT2酶的基因的引物的核酸序列。

SEQ ID NO：89和90提供用于扩增编码全长拟南芥tMT2酶的基因的引物#17286和#17181的核酸序列。

SEQ ID NO：91提供拟南芥γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：92提供拟南芥Columbia生态型γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：93提供稻γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：94提供玉米γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：95提供陆地棉γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：96提供pulcherrima萼距花γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：97提供欧洲油菜S8γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：98提供欧洲油菜P4γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：99提供番茄γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：100提供大豆γ-生育酚甲基转移酶1的氨基酸序列。

SEQ ID NO：101提供大豆γ-生育酚甲基转移酶2的氨基酸序列。

SEQ ID NO：102提供大豆γ-生育酚甲基转移酶3的氨基酸序列。

SEQ ID NO：103提供万寿菊γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：104提供两色蜀黍γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：105提供asiaticum百合γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：106提供点形念珠藻γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。

SEQ ID NO：107提供鱼腥藻γ-生育酚甲基转移酶的氨基酸序列。生育酚甲基转移酶。

SEQ ID NO：108提供图3a和图3b所示多肽对比中的氨基酸一致序列。

附图简述

图1是生育酚生物合成通路的图解。

图2表示一些农作物tMT2基因的核苷酸序列与拟南芥tMT2基因(NCBI General Identifier Number gi7573324)的TBLASTN同源对比结果。

图3a和3b表示不同植物种类tMT2蛋白序列的Pretty Alignment结果。

图4描述重组表达的鱼腥藻MT1甲基转移酶活性(阳性对照)。酶活性通过携带pMON67174的大肠杆菌粗细胞提取物进行检测。

图5描述重组表达的成熟拟南芥tMT2甲基转移酶活性。酶活性通过携带pMON67191的大肠杆菌粗细胞提取物进行检测。

图6描述重组表达的成熟拟南芥tMT2 hdt2突变甲基转移酶活性。酶活性通过携带pMON67207的大肠杆菌粗细胞提取物进行检测。

图7为重组表达的鱼腥藻MT1无2-甲基叶绿基质体醌醇底物的甲基转移酶活性(阴性对照)。酶活性通过携带pMON67174的大肠杆菌粗细胞提取物进行检测。

图8描述分离的豌豆叶绿体中甲基转移酶I活性(阳性对照)。

图9为pMON67205的质粒图。

图10为pMON67220的质粒图。

图11为pMON67226的质粒图。

图12为pMON67225的质粒图。

图13为pMON67227的质粒图。

图14为pMON67224的质粒图。

图15为pMON67223的质粒图。

图16a和16b描述δ-生育酚在各种类型拟南芥中的表达水平。

图17描述hdt2突变品系中，napin启动子(pMON67205)控制下，来自两个表达tMT2品系的T3种子中的δ-生育酚(％)。

图18a-d描述10个种子的tMT2库中α，β，γ和δ-生育酚的含量。

图19a-d描述10个种子的tMT2/GMT库中α，β，γ和δ-生育酚的含量。

图20描述一个来自pMON67226转化大豆品系(28072)的单种子中的生育酚组成。

图21a-d描述来自pMON67226 R1大豆单种子中的α，β，γ和δ-生育酚含量。

图22描述一个来自pMON67227转化大豆品系(28906)的单种子中的生育酚组成。

图23a-d描述来自pMON67227 R1大豆单种子中的α，β，γ和δ-生育酚含量。

图24描述各种2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶的分析结果。

发明详述

本发明提供了一些的因子(agent)，如与生育酚合成相关的核酸分子和多肽等，而且还提供了这些因子的用途。

因子

本发明的因子优选具有一定的“生物学活性”，该活性既可以是结构特征方面的，如一种核酸分子与另一种核酸分子杂交的能力；也可以是一种蛋白被一种抗体结合的特性(或与另一种分子竞争这样的结合)。这种活性也可以是催化作用，因而涉及因子介导一种化学反应的性能。本发明的因子优选“基本纯化的”。这里提到的“基本纯化的”这一术语是指一种分子基本从所有其他在自然状况下与其相关的分子中分离出来。更优选，一种基本纯化的分子在制备物占大多数。其在自然混合物(除溶剂外)中的纯度可以超过60％，优选75％，更优选90％，最优选95％。“基本纯化的”这一术语的目的就是排除自然状况下与其混在一起的其他分子。

本发明的因子也可以是重组的。这里的“重组的”是指因子(如DNA、肽等)来源于人对核酸分子的操作，或是人对核酸分子操作的间接结果。

可以理解，本发明的因子也可以被一些试剂标记，以方便检测(如荧光标记，Prober等，Science 238：336-340(1987)；Albarella等，EP144914；化学标记，Sheldon等，U.S.Patent 4,582,789；Albarella等，U.S.Patent 4,563,417；修饰碱基，Miyoshi等，EP 119448)。

核酸分子

本发明的因子包含核酸分子。本发明优选其中的核酸分子包含编码生育酚甲基转移酶的核酸序列。其中的甲基转移酶是指能特异催化2-甲基叶绿基质体醌醇、2-甲基-5-叶绿基质体醌醇、2-甲基-3-叶绿基质体醌醇、δ-生育酚或β-生育酚苯环的3位点甲基化的任何一种植物蛋白(参见，Photosyn.Research，31：99-111(1992)和Phytochemistry 19：215-218(1980))。tMT2优选来自以下生物：拟南芥、玉米、棉花、韭葱、大豆、稻及油籽油菜。tMT2的一个更优选的例子是一种多肽，该多肽含有选自SEQ ID NOs：16-38的氨基酸序列.在一个更优选的实施方案中，tMT2由SEQ ID NOs：1-15中任何一项的序列所编码。

本发明还优选其中的核酸分子包含一种选自SEQ ID NOs：1-15及其互补序列或两者的片段的核酸序列.本发明还优选其中的核酸分子包含一种选自SEQ ID NOs：1和2及其互补序列的核酸序列。本发明还优选其中的核酸分子包含一种选自SEQ ID NOs：3-7及其互补序列的核酸序列。本发明还优选其中的核酸分子包含一种选自SEQID NOs：8-14及其互补序列的核酸序列。本发明还优选其中的核酸分子包含一种选自SEQ ID NO：15及其互补序列的核酸序列。本发明进一步优选其中的核酸分子包含编码一种氨基酸分子的核酸序列，其中的氨基酸序列选自SEQ ID NOs：16-38和其片段.本发明还进一步优选其中的核酸分子包含编码一种氨基酸分子的核酸序列，其中的氨基酸序列选自SEQ ID NO：16和其片段。

在另一实施方案中，本发明提供包含一种序列的核酸分子，所述序列编码SEQ ID NO：108，及其互补序列。另一方面，本发明提供包含一种序列的核酸分子，该序列编码SEQ ID NO：108的残基83-356，及其互补序列。另一方面，本发明提供包含一种序列的核酸分子，该序列编码SEQ ID NO：108的残基83-356的一个片段，其中的片段的长度至少为25、50、75、100、150、200或250残基，及其互补序列。另一方面，本发明提供核酸分子，该核酸分子编码一或多种SEQ ID NO：108的下述片段：82-123，132-146及269-295，及其互补序列。

本发明包含上述序列及其片段在转基因植物和其他生物中的用途以及下述的其他用途。

本发明的核酸分子进一步包含编码一种氨基酸序列的核酸序列，其中的氨基酸序列选自SEQ ID NOs：17-21及其片段。本发明的核酸分子进一步包含编码一种氨基酸序列的核酸序列，其中的氨基酸序列选自SEQ ID NOs：22-27及其片段。本发明的核酸分子进一步包含编码一种氨基酸序列的核酸序列，其中的氨基酸序列选自SEQ IDNOs：28-38及其片段.本发明的核酸分子进一步包含编码SEQ IDNOs：28及其片段的氨基酸序列的核酸序列。本发明的核酸分子进一步包含编码一种氨基酸序列的核酸序列，其中的氨基酸序列选自SEQ ID NOs：29-32及其片段。本发明的核酸分子进一步包含编码一种氨基酸序列的核酸序列，其中的氨基酸序列选自SEQ ID NOs：33-38及其片段。

本发明还优选其中的核酸分子包含编码一种质体转运肽的核苷酸序列，其中的质体转运肽可操作地与编码本发明的一种蛋白或其片段的核酸分子相融合。

在另一优选实施方案中，本发明的核酸分子编码突变的tMT2酶。其中的“突变”的酶或多肽是指含有一个与其同类的野生型的同一位点的氨基酸不同的氨基酸的酶或多肽。本发明的合适的突变的例子包括但不局限于本申请中的实施例1中给出的。

可以这样理解，本发明的核酸序列进一步能编码一种蛋白，该蛋白不同于任何已提到的蛋白之处在于，其一或多个氨基酸位点发生了缺失、替换或添加，但并不改变其功能。例如，现有技术已知某些密码子可以编码这样的保守的氨基酸替换。

另一方面，本发明的核酸是导入的核酸分子。如果一种核酸分子被人为地***一种细胞或生物体，那么无论如何间接，都可以称作“导入”。导入的核酸分子的例子包括任何经由转化、转染、注射和发射等的方式进入细胞的核酸分子，以及经由接合、内吞和吞噬等方式导入生物体的核酸分子。

本发明核酸分子的一个子集(subset)是片段核酸分子.片段核酸分子可以由本发明核酸分子的重要部分，或实际上大部分组成，如特别公开所示的那些.片段也可以包含更小的寡核苷酸(具有大约15-400个核苷酸残基，更优选具有大约15-30，或大约50-100，或大约100-200，或大约200-400，或大约275-350个核苷酸残基)。

本发明的一或多种核酸分子的片段可以作为探针，尤其是PCR探针。PCR探针是一种核酸分子，它在与另一核酸分子形成双链时起始多聚酶活性。现有技术中有各种决定PCR探针结构和PGR技巧的方法.例如，可以使用Primer3(www-genome.wi.mit.edu/cgi-bin/primer/primer3.cgi)、STSPipeline(www-genome.wi.mit.edu/cgi-bin/www-STS_Pipeline)，或GeneUp(Pesole等，BioTechniques 25：112-123(1998))等计算机搜索程序寻找有效的引物。

本发明的核酸分子及其片段在一定条件下能与其他核酸分子特异地杂交。本发明的核酸分子包括能特异地与下述核酸分子杂交的核酸分子，其中的下述核酸分子具有选自SEQ ID NOs：1-15及其互补序列的核酸序列。本发明的核酸分子还包括能特异地与下述核酸分子杂交的核酸分子，其中的下述核酸分子编码选自SEQ ID NOs：16-38及其片段的氨基酸序列。

其中，如果两个核酸分子能形成反向平行的双链结构，就称之为两种核酸分子能特异杂交。

如果它们完全互补的话，那么一种核酸分子就可以称为另一种核酸分子的“互补序列”。其中，完全互补是指一种分子的每一个核苷都与另一分子的核苷互补。如果两种分子在至少常规的“低严谨”条件下，能杂交且具有足够的稳定性保持退火状态，那么将其称为“最小互补”。同样的，如果两种分子在常规的“高严谨”条件下，能杂交且具有足够的稳定性保持退火状态，那么将其称为“互补”。常规的严谨条件见Sambrook等，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，2nd Ed.Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，New York(1989)，以及Haymes等，Nucleic Acid Hybridization，A PracticalApproach，IRL Press，Washington，DC(1985)所述。因而，与完全互补有偏差是允许的，只要这种偏差不完全排除分子形成双链结构的能力.因此，核酸分子要作为引物或探针，只需在序列上足够互补，从而可以在特定的溶剂和盐浓度条件下形成稳定的双链结构。

促进DNA杂交的合适的严谨条件为本领域的技术人员所知晓或者可以在Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons，N.Y.(1981)，6.3.1-6.3.6中找到，例如，约45℃条件下6.0×氯化钠/柠檬酸钠(SSC)，然后用2.0×SSC在20-25℃条件下洗涤。再例如，洗脱步骤的盐浓度可以从低严谨的约2.0×SSC在50℃到高严谨的约0.2×SSC在65℃。再者，洗脱步骤的温度可以从低严谨的室温，约22℃，到高严谨的约65℃。温度和盐浓度均可以不同，或者将温度或盐浓度保持恒定而改变其他变量。

在一个优选的实施方案中，本发明的核酸将在中度严谨条件下，如在约2×SSC及约65℃条件下，特异地与一个或多个SEQ ID NOs：1-15及其互补序列所示的核酸分子杂交。

在一个更优选的实施方案中，本发明的核酸将包括能在高严谨条件如0.2×SSC及约65℃下，与一个或多个SEQ ID NOs：1-15及其互补序列所示的核酸分子特异杂交的核酸分子。

一方面，本发明的核酸具有一个或多个SEQ ID NOs：1-15及其互补序列所示的核酸序列.另一方面，本发明的一个或多个核酸分子与SEQ ID NOs：1-15所示的核酸序列及其互补序列和两者的片段中的一个或多个有90％-100％的序列一致性。另一方面，本发明的一个或多个核酸分子与SEQ ID NOs：1-15所示的核酸序列及其互补序列和两者的片段中的一个或多个有95％-100％的序列一致性.更为优选，本发明的一个或多个核酸分子与SEQ ID NOs：1-15所示的核酸序列及其互补序列和两者的片段中的一个或多个有98％-100％的序列一致性。更为优选，本发明的一个或多个核酸分子与SEQ ID NOs：1-15所示的核酸序列及其互补序列和两者的片段中的一个或多个有99％-100％的序列一致性。

在一个优选的实施方案中，相似性百分比的计算使用BLASTN或BLASTP((default，parameters，version 2.0.8，Altschul等，Nucleic AcidsRes.25：3389-3402(1997))。

本发明的核酸也可以编码一种直向同源物多肽。其中的直向同源物多肽分子或其片段指的是另一种类中相应的多肽分子或其片段(如玉米的核酮糖-1，5-二磷酸羟化/加氧酶小亚基是拟南芥核酮糖-1，5-二磷酸羟化/加氧酶的一种直向同源物)。直向同源物也可以通过分子进化或DNA改组技术得到，以便该分子保留原多肽的至少一种功能或结构特征(参见，例如，U.S.Patent 5,811,238)。

在另一实施方案中，直向同源物选自以下种类紫苜蓿、拟南芥、大麦、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、花椰菜、卷心菜、卡诺拉(canola)、柑橘、棉花、大蒜、燕麦、葱属植物、亚麻、一种观赏植物、花生、胡椒、土豆、油菜子、稻、裸麦、高粱、草莓、甘蔗、甜菜、西红柿、小麦、白杨、松树、冷杉、桉树、苹果、莴苣、小扁豆、葡萄、香蕉、茶、草坪草、向日葵、大豆、玉米、菜豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、芝麻、棉花子、亚麻子、红花和油棕。优选直向同源物选自卡诺拉、玉米、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、大豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、花生、芝麻、棉花子、亚麻子、油菜子、红花、油棕、亚麻和向日葵.在一更优选的实施方案中，直向同源物选自卡诺拉、油菜子、玉米、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、大豆、向日葵、红花、油棕和花生。在一个更优选的实施方案中，直向同源物是大豆。在一个更优选的实施方案中，直向同源物是卡诺拉。在一个更优选的实施方案中，直向同源物是油籽油菜。

在一个优选的实施方案中，核酸分子具有SEQ ID NOs：1-15及其互补序列或两者的片段；更为优选，SEQ ID NOs：1-15及其互补序列能用来获得这样的直向同源物。

更进一步，本发明的核酸分子还包括与SEQ ID NOs：1-15所示的编码多肽或其片段的序列所不同的序列。因为多肽可以有一或多个保守性氨基酸改变，因此编码多肽的核酸序列也可以不同。可以理解，编码这样的保守性氨基酸替换的密码子为本领域人员所知晓。

本领域众所周知，原序列中的一或多个氨基酸可以用其他与其电荷和极性相似的氨基酸替换，即保守性替换。原多肽序列中氨基酸的保守性替换可以从原氨基酸所属类别的其他氨基酸中选择。氨基酸可以分为以下四类：(1)酸性氨基酸，(2)碱性氨基酸，(3)中性极性氨基酸，(4)中性非极性氨基酸。这些种类中代表性的氨基酸包括但不局限于(1)酸性(负电)氨基酸，如天冬氨酸和谷氨酸；(2)碱性(正电)氨基酸，如精氨酸、组氨酸和赖氨酸；(3)中性极性氨基酸，如甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺；及(4)中性非极性(疏水性)氨基酸，如丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和蛋氨酸。

原多肽序列中保守性氨基酸替换可以通过将一个氨基酸用与其同属一类的其他氨基酸替换来实施。优选本发明的蛋白及其片段的生物功能类似物有10或更少的保守性氨基酸改变，更优选7或更少的保守性氨基酸改变，最优选5或更少的保守性氨基酸改变。编码核苷酸序列也会有相应的碱基替换，以编码本发明多肽的生物功能类似物形式。

可以理解，一个蛋白结构中某些氨基酸可以替换成其他氨基酸而并不影响其与其他结构(如抗体的抗原结合区域或底物分子的结合位点)相互作用的结合特性。蛋白的生物功能活性是通过相互作用特性和蛋白的本质来定义的，所以可以通过蛋白序列中某些氨基酸的改变(基于DNA编码序列改变)来得到具有相似特性的蛋白。因此，发明者考虑可以对本发明的蛋白或片段的肽序列或编码所述肽的相应DNA序列做各种改变，而并不影响其生物应用或活性。可以理解，能编码这样的氨基酸改变的密码子为本领域人员所知晓。

在进行替换时，可能要考虑氨基酸的亲水性指数(hydropathicindex)。本领域人员通常都知道亲水性氨基酸指数在赋予蛋白相互作用生物功能方面的重要性(Kyte和Doolittle，J.Mol.Biol.157，105-132(1982))。通常认为，氨基酸的相对亲水性指数促进多肽二级结构的形成，后者又反过来定义蛋白与其他分子如酶、底物、受体、DNA、抗体、抗原等的相互作用。

每种氨基酸以其疏水性及荷电性为基础，都有亲水性指数(Kyte和Doolittle，J.Mol.Biol.157：105-132(1982))，具体如下异亮氨酸(+4.5)、缬氨酸(+4.2)、亮氨酸(+3.8)、苯丙氨酸(+2.8)、胱/半胱氨酸(+2.5)、蛋氨酸(+1.9)、丙氨酸(+1.8)、甘氨酸(-0.4)、苏氨酸(-0.7)、丝氨酸(-0.8)、色氨酸(-0.9)、酪氨酸(-1.3)、脯氨酸(-1.6)、组氨酸(-3.2)、谷氨酸(-3.5)、谷氨酰胺(-3.5)、天冬氨酸(-3.5)、天冬酰胺(-3.5)、赖氨酸(-3.9)和精氨酸(-4.5)。

在进行替换时，优选替换氨基酸亲水性指数在±2范围内，更优选±1范围内，更优选±0.5范围内。

相似氨基酸的替换也可以在亲水性基础上有效进行。U.S.Patent4,554,101表明一个蛋白的最大局部平均亲水性由其邻近氨基酸的亲水性决定，与蛋白的生物学特性相关。

如U.S.Patent 4,554,101所详述，以下列举了各氨基酸残基的亲水性值：精氨酸(+3.0)、赖氨酸(+3.0)、天冬氨酸(+3.0±1)、谷氨酸(+3.0±1)、丝氨酸(+0.3)、天冬酰胺(+0.2)、谷氨酰胺(+0.2)、甘氨酸(0)、苏氨酸(-0.4)、脯氨酸(-0.5±1)、丙氨酸(-0.5)、组氨酸(-0.5)、半胱氨酸(-1.0)、蛋氨酸(-1.3)、缬氨酸(-1.5)、亮氨酸(-1.8)、异亮氨酸(-1.8)、酪氨酸(-2.3)、苯丙氨酸(-2.5)和色氨酸(-3.4)。

在进行替换时，优选替换氨基酸亲水性值在±2范围内，更优选±1范围内，更优选±0.5范围内。

另一方面，本发明还包括与发明中描述的特异序列不同的一或多个核酸分子，因为原编码的氨基酸发生了保守性替换，所以编码密码子也要进行相应的改变。

本发明的因子包含核酸分子，其编码本发明的多肽的相邻接的至少约10个氨基酸区域，更优选至少约25，40，50，100或125个氨基酸区域。

在优选实施方案中，本发明的任何核酸分子都能可操作性连接于启动子区域，后者在植物细胞引起mRNA分子的产生。其中与启动子相连接的核酸分子相对该启动子来讲是异源性的。其中，“异源性的”指非自然在一起。

蛋白和肽分子

还有一类因子包括本发明的核酸因子所编码的一或多个多肽分子。特别优选一类蛋白具有选自SEQ ID NOs：16-38及其片段的氨基酸序列。另一方面，本发明的多肽分子包含选自SEQ ID NOs：17-21及其片段的氨基酸序列。另一方面，本发明的多肽分子包含选自SEQ ID NOs：22-27及其片段的氨基酸序列。另一方面，本发明的多肽分子包含选自SEQ ID NOs：28-38及其片段的氨基酸序列。另一方面，本发明的多肽分子包含一个编码SEQ ID NO：28及其片段中的一个氨基酸的氨基酸序列。另一方面，本发明的多肽分子包含选自SEQ ID NOs：29-32及其片段的氨基酸序列。另一方面，本发明的多肽分子包含选自SEQ ID NOs：33-38及其片段的氨基酸序列。

在另一实施方案中，本发明提供了一个含有SEQ ID NO：108的氨基酸序列的多肽。另一方面，本发明提供含有SEQ ID NO：108的残基83-356氨基酸序列的多肽。另一方面，本发明提供含有SEQ IDNO：108中的残基83-356氨基酸序列的多肽，其中的多肽长度至少为约25，50，75，100，150，200或250个残基。另一方面，本发明提供含有一或多个下述片段氨基酸序列的多肽，其中下述片段指SEQ ID NO：108中的残基82-123，132-146和269-295。

多肽因子可含有C或N末端氨基酸序列延伸。在一个优选实施方案中用到的一类N末端延伸是质体转运肽。操作时将肢体转运肽连接于N末端序列，从而可以使多肽因子定位于质体。本发明的实施方案中，可以使用任何合适的质体靶向序列。如果合适的话，质体靶向序列可替换为原质体靶向序列，例如，tMT2蛋白原来的CTP。另一实施方案中，与任何tMT2蛋白或此处所述片段异源性的质体靶向序列均可使用。另一实施方案中，任何合适的、修饰的质体靶向序列均可使用。另一实施方案中，质体靶向序列是CTP1序列(参见WO00/61771)。

本发明的蛋白优选使用原转运肽序列或异源性转运肽序列定位于质体.就相应于非高等植物如蓝细菌的核酸序列的核酸序列来讲，核酸序列可以进行修饰，将蛋白的编码序列与质体转运肽的核酸序列相连。

此处所用的术语“蛋白”、“肽分子”或“多肽”包括任何含有5个或5个以上氨基酸的分子。本领域众所周知，蛋白、肽或多肽可以进行修饰，包括翻译后修饰，如二硫键形成、糖基化、磷酸化或寡聚化，但不限于此。因而，此处术语“蛋白”、“肽分子”或“多肽”包括任何经过生物或非生物途径修饰的蛋白。术语“氨基酸”指任何自然存在的L-氨基酸。这样定义的目的是为了包含正亮氨酸、正缬氨酸、鸟氨酸、同型半胱氨酸和同型丝氨酸。

一或多个蛋白或其片段、肽分子或多肽可以通过化学合成产生，或优选通过细菌或真核宿主表达。合适的方法在Sambrook等编写的Molecular Cloning，A Laboratory Manual，2nd Edition，Cold SpringHarbor Press，Cold Spring Harbor，New York(1989)及类似书中均有描述。

“蛋白片段”指肽或多肽分子，其氨基酸序列包含该蛋白的氨基酸序列的亚群。如果一个蛋白或其片段中包含一或多个非该蛋白来源的额外肽区域，则称之为“融合”蛋白。这样的分子可进一步延伸为包括碳水化合物或其他部分(如钥孔

血蓝蛋白)。本发明的融合蛋白或肽分子优选通过重组方式产生。

另一类因子包括蛋白、肽分子或多肽或其片段或其融合，其中包含SEQ ID NOs：16-38及其片段，且其中保守性的、非关键的或非相关的氨基酸残基发生了添加、置换或缺失。用计算机进行蛋白结构的设计修饰为本领域人员所知晓(Dahiyat和Mayo，Science 278：82-87(1997))。

本发明的蛋白、肽或多肽也可以是直向同源物蛋白、肽或多肽。所谓直向同源物蛋白、肽、多肽或其片段是其在另一种类中的相应的蛋白、肽、多肽或其片段。直向同源物也可以通过分子进化或DNA改组技术得到，以便读分子保留原分子的至少一种功能或结构特征(参见，如U.S.Patent 5,811,238)。

在另一实施方案中，直向同源物选自以下种类紫苜蓿、拟南芥、大麦、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、花椰菜、卷心菜、卡诺拉、柑橘、棉花、大蒜、燕麦、葱属植物、亚麻、观赏植物、花生、胡椒、土豆、油菜子、稻、裸麦、高粱、草莓、甘蔗、甜菜、西红柿、小麦、白杨、松树、冷杉、桉树、苹果、莴苣、小扁豆、葡萄、香蕉、茶、草坪草、向日葵、大豆、玉米、菜豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、芝麻、棉花子、亚麻子、红花和油棕。优选直向同源物选自卡诺拉、玉米、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、大豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、花生、芝麻、棉花子、亚麻子、油菜子、红花、油棕、亚麻和向日葵。在一更优选的实施方案中，直向同源物选自卡诺拉，油菜子、玉米、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、大豆、向日葵、红花、油棕和花生。在一个更优选的实施方案中，直向同源物是大豆。在一个更优选的实施方案中，直向同源物是卡诺拉。在一个更优选的实施方棠中，直向同源物是油籽油菜。

在一优选的实施方案中，本发明的核酸分子或其互补序列及两者的片段可以用来获得这些直向同源物。

本发明的因子包括蛋白和其片段，其中的蛋白和其片段至少包含本发明的蛋白邻近的约10个氨基酸区域，优选约20个氨基酸区域，更优选25、35、50、75或100个氨基酸区域。在另一优选的实施方案中，本发明的蛋白包括约10-25个氨基酸区域，更优选约20-50个邻近的氨基酸区域，更优选约40-80个邻近的氨基酸区域。

植物构建和植物转化

本发明的一或多个核酸分子可以用于植物的转化或转染。外源基因物质转入植物细胞，植物细胞再发育为完整的、有或无生育能力的植物.外源基因物质指任何基因物质，天然或非天然，来源于能被***任何生物体的物质。

本发明的外源基因物质优选包含编码生育酚转移酶的核酸序列。本发明的外源基因物质还优选包含选自SEQ ID NOs：1-15及其互补序列和两者的片段。本发明的外源基因物质进一步优选包含编码选自SEQ ID NOs：16-38及其片段的核酸序列。本发明的外源基因物质进一步优选包含编码选自SEQ ID NOs：17-21及其片段的核酸序列。本发明的外源基因物质进一步优选包含编码选自SEQ ID NOs：22-27及其片段的核酸序列。本发明的外源基因物质进一步优选包含编码选自SEQ ID NOs：28-38及其片段的核酸序列。本发明的外源基因物质进一步优选包含编码SEQ ID NO：28及其片段的核酸序列。本发明的外源基因物质进一步优选包含编码选自SEQ ID NOs：29-32及其片段的核酸序列。本发明的外源基因物质进一步优选包含编码选自SEQ ID NOs：33-38及其片段的核酸序列。本发明的核酸序列进一步还编码细胞内定位、输出或翻译后修饰所涉及的肽。

在本发明的一个实施方案中，包含tMT2酶或其片段的外源基因物质与一或多个额外基因被导入植物细胞。在一实施方案中，优选基因连接包括一或多个下述基因：tyrA、slr1736、HPT、GMT、生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、GMT、tMT2、AANT1、slr1737、IDI、GGH或其植物直向同源物及尿黑酸双加氧酶的反义构建体(Kridl等，Seed Sci.Res.1：209：219(1991)；Keegstra，Cell 56(2)：247-53(1989)；Nawrath，等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91：12760-12764(1994)；Xia等，J.Gen.Microbiol.138：1309-1316(1992)；Cyanobase，www.kazusa.orjp/cyanobase；Lois等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95(5)：2105-2110(1998)；Takahashi等。Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95(17)，9879-9884(1998)；Norris等，Plant Physiol.117：1317-1323(1998)；Bartley和Scolnik，Plant Physiol.104：1469-1470(1 994)，Smith等，PlantJ.11：83-92(1997)；WO 00/32757；WO 00/10380；Saint Guily，等，PlantPhysiol.100(2)：1069-1071(1992)；Saro等，J.DNA Res.7(1)：31-63(2000))。

在另一优选实施方案中，tMT2与GMT相结合。此处公开的任何使用编码GMT的核酸分子的实施方案中，核酸分子优选地选自：包含选自SEQ ID NOs：39-54的核酸序列的核酸分子，和编码具有选自SEQ ID NOs：39-54的氨基酸序列的GMT的核酸分子。在另一优选实施方案中，tMT2与GMT及上述的一或多个基因相连接。在这样的连接中，通过使用质体靶向序列，一或多个基因产物可以被定位于质体。或者，一或多个基因产物被定位于胞浆。这些基因可以如下导入植物细胞：与tMT2或GMT或两者在同一构建体中，与tMT2的片段或GMT的片段或两者在同一构建体中，或者在不同的构建体但同批转化，或转入不同的植物但随后进行一或多次杂交以产生理想的基因连接。在上述连接中，优选启动子是napin启动子，优选质体靶向序列是CTP1序列。优选基因产物定位于质体。

优选将编码tMT2多肽的核酸分子与编码下述任何一种酶tyrA、slr1736、HPT、GMT、生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、tMT2、AANT1、slr1737、IDI、GGH或其植物直向同源物及尿黑酸双加氧酶的反义构建体的核酸分子的连接导入植物。更优选导入植物细胞的连接是编码tMT2多肽的核酸分子和编码GMT多肽的核酸分子，其中两种多肽都定位于质体，其中两种多肽之一为原有，另一种为导入的。编码这两种多肽的核酸序列可以通过同一基因构建体导入，也可以通过分别构建体导入。在另一实施方案中，tMT2与GMT及tyrA、slr1736、HPT生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、AANT1、slr1737、IDI和GGH中的一或多种相连接。

另一优选的组合(不是连接)是，将编码tMT2蛋白的核酸分子与编码一种GMT酶的核苷酸分子与tyrA、slr1736、HPT生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、AANT1、slr1737、IDI和GGH中的一或多种一起导入植物。

另一优选的可以导入的连接是，编码tMT2蛋白的核酸分子与导致GMT蛋白下调的核酸分子的组合。在此方面，优选植物堆积Γ-生育酚或Γ-生育三烯酚或两者。

这些基因物质可以转移入单子叶植物或双子叶植物，其中包括但不局限于卡诺拉、玉米、大豆、拟南芥、菜豆、花生、紫苜蓿、小麦、稻、燕麦、油菜子、裸麦、tritordeum、小米、牛毛草、常年生黑麦草、甘蔗、酸果蔓果实、木瓜、香蕉、红花、油棕、亚麻、香瓜、苹果、黄瓜、石槲兰、剑兰、菊花、百合花、棉花、桉树、向日葵、芸苔、油籽油菜、草坪草、甜菜、咖啡和薯蓣(Christou，In：ParticleBombardment for Genetic Engineering of Plants，BiotechnologyIntelligence Unit.Academic Press，San Diego，California(1996))，优选卡诺拉、玉米、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、油菜子、大豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、花生、芝麻、棉花子、亚麻子、红花、油棕、亚麻和向日葵。优选卡诺拉、油菜子、玉米、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、大豆、向日葵、红花、油棕和花生。在一更优选的实施方案中，基因物质转入卡诺拉。在一更优选的实施方案中，基因物质转入油籽油菜。在另一优选的实施方案中，基因物质转入大豆。

编码蛋白的核酸的导入可以导致该多肽在转化细胞或转基因植物中的表达或过表达。本发明的核酸编码的一或多种蛋白或其片段可以在转化细胞或转基因植物中表达或过表达。这种表达或过表达是外源基因物质的瞬时或稳定转移所致。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种多肽在植物中的表达或过表达，可以使该植物相对于与其具有相似基因背景但未转化的植物来说，α-生育酚的水平提高。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种多肽在植物中的表达或过表达，可以使该植物相对于与其具有相似基因背景但未转化的植物来说，γ-生育酚的水平提高。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种多肽在植物中的表达的降低、表达或过表达，可以使该植物相对于与其具有相似基因背景但未转化的植物来说，δ-生育酚的水平提高。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种多肽在植物中的表达的降低、表达或过表达，可以使该植物相对于与其具有相似基因背景但未转化的植物来说，β-生育酚的水平提高。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种多肽在植物中的表达或过表达，可以使该植物相对于与其具有相似基因背景但未转化的植物来说，生育三烯酚的水平提高。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种多肽在植物中的表达或过表达，可以使该植物相对于与其具有相似基因背景但未转化的植物来说，α-生育三烯酚的水平提高。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种多肽在植物中的表达或过表达，可以使该植物相对于与其具有相似基因背景但未转化的植物来说，γ-生育三烯酚的水平提高。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种多肽在植物中的表达的降低、表达或过表达，可以使该植物相对于与其具有相似基因背景但未转化的植物来说，δ-生育三烯酚的水平提高。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种多肽在植物中的表达的降低、表达或过表达，可以使该植物相对于与其具有相似基因背景但未转化的植物来说，β-生育三烯酚的水平提高。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种多肽与编码下述任何一种酶tyrA、slr1736、HPT、GMT、生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、tMT2、AANT1、slr1737、IDI、GGH或其植物直向同源物及尿黑酸双加氧酶的反义构建体的核酸分子的连接在植物中的表达或过表达，可以使该植物相对于与其具有相似基因背景但未转化的植物来说，总生育酚的水平提高。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种多肽在植物中的表达或过表达，可以使该植物相对于与其具有相似基因背景但未转化的植物来说，质体醌的水平提高。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种多肽在植物中的表达或过表达，可以使该植物相对于与其具有相似基因背景但未转化的植物来说，总生育酚的水平提高。

本文所述任何实施方案中，γ-生育酚、α-生育酚或两者水平的提高会导致β-生育酚、δ-生育酚或两者的相对比例降低。同样地，γ-生育三烯酚、α-生育三烯酚或两者水平的提高会导致β-生育三烯酚、δ-生育三烯酚或两者的相对比例降低。

在另一实施方案中，本发明的一种多肽在植物中的表达或过表达，可以使该植物或植物的一种组织相对于与其具有相似基因背景但未转化的植物或植物组织来说，tMT2蛋白或其片段的水平提高。

在一些实施方案中，生育酚生物合成通路的一或多种产物(包括生育酚、α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、β-生育酚、生育三烯酚、α-生育三烯酚、γ-生育三烯酚、δ-生育三烯酚和β-生育三烯酚)的水平升高超过约10％。更优选超过25％、35％、50％、75％、80％、90％、100％、150％、200％、1,000％、2,000％或2,500％。产物水平的提高可以是在整个生物体如植物或局限于该生物体的一或多个特异的器官或组织。例如，产物水平的提高可以是在植物的一或多个组织和器官，包括但不局限于根、块茎、茎、叶、柄、果实、浆果、坚果、茎皮、荚、种子或花。优选器官是种子。

在一些实施方案中，生育酚生物合成通路的一或多种产物(包括生育酚、α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、β-生育酚、生育三烯酚、α-生育三烯酚、γ-生育三烯酚、δ-生育三烯酚和β-生育三烯酚)的水平升高，以至于其在器官或组织的总生育酚中的含量超过约10％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。产物水平的提高可以是在整个生物体如植物或局限于该生物体的一或多个特异的器官或组织。例如，产物水平的提高可以是在植物的一或多个组织和器官，包括但不局限于根、块茎、茎、叶、柄、果实、浆果、坚果、茎皮、荚、种子或花。优选器官是种子。

在一优选的实施方案中，种子中涉及生育酚、生育三烯酚或质体醌醇合成的酶的表达会由于那些组织中重要的GMT活性的缺乏而导致γ-生育酚水平的提高。在另一优选的实施方案中，光合组织中涉及生育酚、生育三烯酚或质体醌醇合成的酶的表达，会由于那些组织相对于种子组织来说GMT活性水平较高而导致α-生育酚水平的提高。

在另一优选的实施方案中，种子中涉及生育酚、生育三烯酚或质体醌醇合成的酶的表达会导致总生育酚、生育三烯酚或质体醌水平的提高。

在一些实施方案中，生育酚或其中一类如α-生育酚的水平可以改变。在一些实施方案中，生育三烯酚的水平可以改变。这些改变是相对于具有相同背景的植物而言。

在另一实施方案中，产生高水平的α-生育酚或α-生育三烯酚或两者的植物(如红花)中的α-生育酚或α-生育三烯酚或两者的水平可以通过导入编码tMT2酶的基因而提高。

在一个优选的方面，相似的基因背景指互相对比的生物体核内的基因物质有50％或更高相同。更优选，相似的基因背景指互相对比的生物体核内的基因物质有75％或更高相同，更优选90％或更高相同。在另一更优选的方面，相似的基因背景所对比的生物体是植物，这些植物除原先用植物转化技术导入的基因物质外，是等基因(isogenic)的。

在另一优选实施方案中，本发明的一种多肽在一种转化植物中的表达的降低、表达或过表达，可以提供对各种应激的耐受，如氧化应激耐受如对氧或臭氧、UV耐受、冷耐受或真菌/微生物病原耐受。

如此处所述，在一个优选的方面，对应激的抵抗或耐受是由植物在受到应激如寒冷刺激时的能力决定的，耐受的植物比不耐受的产量要高。更优选，对应激的耐受或抵抗是相对于与耐受或抵抗植物具有相似基因背景的植物而言，只是耐受植物降低表达、表达或过表达本发明的蛋白或其片段。

外源基因物质可以通过为此目的而设计的DNA载体或构建体而转入宿主细胞。载体的设计基本都在现有技术范围内(参见PlantMolecular Biology：A Laboratory Manual，Clark(ed.)，Springer，NewYork(1997))。

构建体或载体包括一种植物启动子，以表达所选多肽。在一个优选实施方案中，所述任何核酸分子可操作的连接于启动子，后者在植物细胞中引起mRNA分子的产生。例如，可以在植物细胞中引起mRNA分子产生的任何启动子如本发明所述启动子，无任何限制，均可使用。在一个优选的实施方案中，启动子是植物启动子。

文献中描述了大量在植物细胞中有活性的启动子。包括胭脂碱合成酶(NOS)启动子(Ebert等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)84：5745-5749(1987))、章鱼碱合成酶(OCS)启动子(在根瘤农杆菌的肿瘤诱导质粒中发挥作用)、花椰菜花叶病毒启动子如花椰菜花叶病毒(CaMV)19S启动子(Lawton等，Plant Mol.Biol.9：315-324(1987))及CaMV35S启动子(Odell等，Nature313：810-812(1985))、玄参花叶病毒35S-启动子、核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶小亚基(ssRUBISCO)的光诱导启动子、Adh启动子(Walker等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)84：6624-6628(1987))、蔗糖合成酶启动子(Yang等，Proc.Natl.Acad.Sci.(US.A.)87：4144-4148(1990))、R基因复合物启动子(Chandler等，The Plant Cell 1：1175-1183(1989))和叶绿素a/b结合蛋白基因启动子等。这些启动子已被用于在植物中表达的DNA构建体中；参见，如PCT出版WO 84/02913。在植物中优选使用CaMV35S启动子。其他已知或发现能在植物细胞引起DNA转录的启动子均可用于本发明。

为了在植物的源组织如叶、种子、根或茎中表达，优选使用在特异组织中相对高表达的启动子。本发明的蛋白的组织特异表达是一个更为优选的实施方案。为达此目的，可以从大量的启动子中选择适于基因进行组织或细胞特异或增强表达的启动子。文献中报道的这样的启动子的例子包括豌豆的叶绿体谷氨酰胺合成酶GS2(Edwards等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)87：3459-3463(1990))、小麦的叶绿体果糖-1，6-二磷酸酶(FBPase)启动子(Lloyd等，Mol.Gen.Genet.225：209-216(1991))、土豆的核光合ST-LS1启动子(Stockhaus等，EMBOJ.8：2445-2451(1989))、拟南芥的丝氨酸/苏氨酸激酶(PAL)启动子和葡糖淀粉酶(CHS)启动子。报道的在光合活性组织有活性的启动子有美洲落叶松(larix laricina)来源的核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶(RbcS)启动子、松树来源的cab基因，cab6启动子(Yamamoto等，Plant Cell Physio 35：773-778(1994))、小麦来源的Cab-1基因启动子(Fejes等，Plant Mol.Biol.15：921-932(1990))、菠菜来源的CAB-1基因启动子(Lubberstedt等，Plant Physiol.104：997-1006(1994))、稻来源的cab1R基因启动子(Luan等，Plant cell.4：971-981(1992))、玉米来源的丙酮酸、正磷酸双激酶(PPDK)启动子(Matsuoka等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA.)90：9586-9590(1993))、烟草Lhcb1*2基因启动子(Cerden等，Plant Mol.Biol.33：245-255(1997))、拟南芥SUC2蔗糖-H+共运输启动子(Truernit等。Planta.196：564-570(1995))及菠菜来源的类囊体膜蛋白启动子(psaD、psaF、psaE、PC、FNR、atpC、atpD、cab、rbcS)。其他叶绿素a/b结合蛋白启动子如白芥菜来源的LhcB和PsbP基因启动子也可以在本发明中使用(Sinapis alba；Kretsch等，Plant Mol.Biol.28：219-229(1995))。

为了在植物的库组织如土豆的块茎、西红柿的果实、玉米、小麦、稻和大麦的种子中表达，优选本发明所用的启动子在这些特异组织中有相对的高表达。有大量启动子可以用于基因块茎特异或块茎增强表达，包括I类patatin启动子(Bevan等，EMBO J 8：1899-1906(1986)；Jefferson el al.Plant Mol.Biol.14：995-1006(1990))、土豆块茎ADPGPP基因(包括大亚基和小亚基)启动子、蔗糖合成酶启动子(Salanoubat和Belliard，Gene 60：47-56(1987)，Salanoubat和Belliard，Gene 84：181-185(1989))、包括22kd蛋白复合物和蛋白酶抑制剂的主要块茎蛋白启动子(Hannapel，Plant Physiol.101：703-704(1993))、颗粒束缚淀粉合成酶(GBSS)基因(Visser等，Plant Mol.Biol.17：691-699(1991))和其他I和II类patatin启动子(Koster-Topfer等，Mol.Gen.Genet.219：390-396(1989)；Mignery等，Gene.62：27-44(1988))。

其他启动子也可以用来在特异组织如种子或果实中表达多肽。事实上，在一个优选的实施方案中，所用的启动子是种子特异的启动子。这样的启动子包括来自基因如napin(Kridl等，Seed Sci.Res.1：209：219(1991))、菜豆蛋白(Bustos，等，Plant Cell，1(9)：839-853(1989))、大豆胰蛋白酶抑制剂(Riggs，等，Plant Cell 1(6)：609-621(1989))、ACP(Baerson，等，Plant Mol.Biol.22(2)：255-267(1993))、硬脂酰-ACP脱氢酶(Slocombe，等，Plant Physiol.104(4)：167-176(1994)))、大豆b-conglycinin的a’亚基(Chen el al.Proc.NatL Acad.Sci.83：8560-8564(1986))和油质蛋白等的5’调节区域。进一步的例子包括β-conglycinin启动子。也包括玉米醇溶蛋白，后者是在玉米胚乳发现的一组储藏蛋白。玉米醇溶蛋白基因的基因组的克隆已分离出(Pedersen等，Cell 29：1015-1026(1982)，和Russell等，TransgenicRes.6(2)：157-168))，这些克隆的启动子包括15kD、16kD、19kD、22kD、27kD和基因也可以使用。其他已知在玉米发挥作用的示例启动子包括如下基因的启动子：waxy、Brittle、Shrunken 2、分支酶I和II、淀粉合成酶、去分支酶、油质蛋白、谷蛋白和蔗糖合成酶。玉米胚乳表达的优选启动子是来自稻的谷蛋白基因启动子，更优选Osgt-1启动子(Zheng等，Mol.Cell Biol.13：5829-5842(1993))。适于小麦表达的示例启动子包括ADP蔗糖焦合酶(ADPGPP)亚基、颗粒束缚和其他淀粉合成酶、分支和去分支酶、胚胎发生高丰度蛋白、麦醇溶蛋白和麦谷蛋白等基因的启动子。稻的示例启动子包括ADPGPP亚基、颗粒束缚和其他淀粉合成酶、分支和去分支酶、蔗糖合成酶和谷蛋白基因的启动子。优选启动子是稻谷蛋白和Osgt-1启动子.大麦的示例启动子包括ADPGPP亚基、颗粒束缚和其他淀粉合成酶、分支和去分支酶、蔗糖合成酶、大麦醇溶蛋白、胚球蛋白和糊粉特异蛋白的启动子。优选在种子特异表达的启动子是napin启动子。另一优选启动子是Arcelin5启动子。

也可以用根特异的启动子。其中一个例子是酸性几丁质酶基因的启动子(Samac等，Plant Mol.Biol.25：587-596(1994)))。在根组织的表达也可以通过利用已识别的根特异的CaMV35S启动子的亚域(Lam等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)86：7890-7894(1989))。其他根细胞特异启动子包括Conkling等所报道的(Conkling等，PlantPhysiol.93：1203-1211(1990))。

其他可以使用的启动子在U.S.Patents 5,378,619；5,391,725；5,428,147；5,447,858；5,608,144；5,614,399；5,633,441；5,633,435和4,633,436中有记载。另外，组织特异的增强子也可以使用(Fromm等，The Plant Cell 1：977-984(1989))中所述。

载体或构建体中除目的基因编码区外，还应该包括终止该区域转录的核酸序列，后者的全部或部分发挥终止作用。已分离出大量这样的序列，包括Tr7 3’序列和NOS 3’序列(Ingelbrecht等，The Plant Cell1：671-680(1989)；Bevan等，Nucleic Acids Res.11：369-385(1983))。本发明的植物表达构建体中也提供了调节性转录终止区。转录终止区可以通过编码目的基因的DNA序列提供或是从不同基因来源的方便的转录终止区，例如，与转录起始区自然相关的转录终止区。技术人员应该能意识到任何能在植物细胞终止转录的方便的转录终止区均可用于本发明的构建体。

载体或构建体还可以包括调节元件。这种例子包括Adh内含子1(Callis等，Genes和Develop.1：1183-1200(1987))、蔗糖合成酶内含子(Vasil等，Plant Physio.91：1575-1579(1989))及TMVω元件(Gallie等，The Plant Cell 1：301-311(1989))。适当时可以包括这些及其他一些调节元件。

载体或构建体还可以包括可选择性标记。选择性标记也可以用来选择含有外源基因物质的植物或植物细胞。示例性选择标记包括但不局限于：neo基因(Potrykus等，Mol.Gen.Genet.199：183-188(1985))，其编码卡那霉素抗性，可以用卡那霉素、RptII、G418、hpt等来筛选；编码双丙氨膦抗性的bar基因；编码草甘膦抗性的突变的EPSP合成酶基因(Hinchee等，BiolTechnology 6：915-922(1988)；Reynaerts等，Selectable and Screenable Markers.In Gelvin andSchilperoort，Plant Molecular Biology Manual，Kluwer，Dordrecht(1988)；Reynaerts等，Selectable and screenable markers.In Gelvin andSchilperoort。Plant Molecular Biology Manual，Kluwer，Dordrecht(1988))，aadA(Jones等，Mol.Gen.Genet.(1987))，)；编码溴苯腈抗性的腈水解酶基因(Stalker等，J.Biol.Chem.263：6310-6314(1988))；编码咪唑啉酮或磺脲抗性的突变乙酰乳酸合成酶(EuropeanPatent Application 154，204(Sept.11，1985))，ALS(D′Halluin等，Bio/Technology 10：309-314(1992))，以及氨甲蝶呤抗性DHFR基因(Thillet等，J.Biol.Chem.263：12500-12508(1988))。

载体或构建体还可以包括转运肽.可以使用合适的质体转运肽(European Patent Application Publication Number 0218571)。也可以整合入翻译增强子作为载体DNA的一部分。DNA构建体还可以包括5’非翻译前导序列，后者可能增强mRNA转录子的基因产物的表达。这样的序列可以来源于表达基因的启动子，或者经过特异修饰来提高mRNA的翻译。这样的区域也可以来自病毒RNAs、合适的真核基因或合成的基因序列。优化转基因表达的综述参见Koziel等，Plant Mol.Biol.32：393-405(1996)。优选的转运肽是CTP1。

载体或构建体还可以包括一个筛选标记。可以用筛选标记来监测表达。示例性的筛选标记包括：β-葡糖醛缩酶或uidA基因(GUS)，其编码的酶可以作用于多种已知的显色底物(Jefferson，Plant Mol.Biol.Rep.5：387-405(1987)；Jefferson等，EMBO J.6：3901-3907(1987))；R-基因座基因，其编码产物调节植物组织花青素色素(红色)的产生(Dellaporta等，Stadler Symposium 11：263-282(1988))；β-内酰胺酶基因(Sutcliffe等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.5：3737-3741(1978)，其编码的酶可以作用于多种已知的显色底物(如PADAC，一种显色头孢菌素)；一种荧光酶基因(Ow等，Science 234：856-859(1986)))；xylE基因(Zukowsky等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)80：1101-1105(1983))，其编码儿茶酚双加氧酶，可以转换显色儿茶酚；一种α-淀粉酶基因(Ikatu等，BiolTechnol.8：241-242(1990)；一种酪氨酸酶基因(Katz等，J.Gen.Microbiol.129：2703-2714(1983))，其编码的酶能氧化酪氨酸生成DOPA和多巴醌，后两者又缩合成黑色素；α-半乳糖苷酶，作用于显色的α-半乳糖底物.

“选择或筛选标记基因”这一术语还包括编码分泌标记的基因，对分泌物的检测可以作为鉴别或选择转化细胞的一种方式.示例标记包括编码可分泌抗原的标记(通过与抗体的相互作用来识别)，甚至还包括可分泌的酶标记(通过催化作用来识别).分泌蛋白包括很多类，如小的，可扩散的蛋白，可通过如ELISA等来检测；小的活性酶，在胞外溶液中可以检测(如α-淀粉酶、β-内酰胺酶、膦丝菌素转移酶)或***或嵌入细胞壁的蛋白(如包括前导序列的蛋白如表达单元所见或烟草PR-S)。现有技术中还有其他可能的选择和/或筛选标记基因。

有许多方法可以将转化核酸分子转入植物细胞。合适的方法实际上包括任何可以将核酸分子导入细胞的方法，如通过农杆菌感染或直接转移的方法如PEG-介导的转化、电穿孔或通过DNA包被颗粒的加速作用等(Potrykus，Ann.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.42：205-225(1991)；Vasil，Plant Mol.Biol.25：925-937(1994))。例如，电穿孔已被用于转化玉米原生质体(Fromm等，Nature 312：791-793(1986))。

其他适于将转化DNA导入宿主植物细胞的载体***包括但不局限于二等分人工染色体(BIBAC)载体(Hamilton等，Gene 200：107-116(1997))；以及用RNA病毒载体转染(Della-Cioppa等，Ann.N.Y.Acad.Sci.(1996)，792(Engineering Plants for CommercialProducts and Applications)，57-61)).其他的载体***还包括植物选择性YAC载体，如Mullen等，Molecular Breeding 4：449-457(1988)所述。

DNA导入细胞的技术在本领域众所周知，主要有如下四种：(1)化学方法(Graham和van der Eb，Virology 54：536-539(1973))；(2)物理方法，如微注射(Capecchi，Cell 22：479-488(1980))、电穿孔(Wong和Neumann，Biochem.Biophys.Res.Commun.107：584-587(1982)；Fromm等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)82：5824-5828(1985)；U.S.Patent 5,384,253)、基因枪(Johnston和Tang，Methods CellBiol.43：353-365(1994))和真空渗入(Bechtold等，C.R.Acad.Sci.Paris，LifeSci.316：1194-1199.(1993))；(3)病毒载体(Clapp，Clin.Perinatol.20：155-168(1993)；Lu等，J Exp.Med.178：2089-2096(1993)；Eglitis和Anderson，Biotechniques 6：608-614(1988))和(4)受体介导机制((Curiel等，Hum.Gen.Ther.3：147-154(1992)，Wagner等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)89：6099-6103(1992))。

可以使用的加速方法包括微粒轰击等。将转化核酸分子导入植物细胞的方法的例子是微粒轰击。Yang和Christou(eds.)在ParticleBombardment Technology for Gene Transfer，Oxford Press，Oxford，England(1994)中对该方法进行了综述。非生物颗粒(微粒)可以用来包被核酸，然后通过推进力转移入细胞。示例微粒包括钨、黄金、白金等。

微粒轰击除可以作为一种有效的可重复的转化单子叶的方式外，还有一个特别的优势在于不需要分离原生质体(Cristou等，PlantPhysiol.87：671-674(1988))也不需要对农杆菌易感。一种通过加速作用将DNA转移入玉米细胞的方法的说明性实施方案是生物弹α-微粒转移***，用此***将附着DNA的微粒推进，穿过阻挡网如不锈钢的或Nytex阻挡网，到达覆盖有在悬液中培养的玉米细胞的滤器表面。Gordon-Kamm等，描述了用DNA包被钨微粒的基本程序(Gordon-Kamm等，Plant Cell 2：603-618(1990))。阻挡网分散了钨核酸微粒以便其不会以大量聚集物的形式转移入受体细胞。适于本发明使用的一种微粒转移***是氦加速PDS-1000/He枪，可从Bio-Rad实验室购得(Bio-Rad，Hercules，California)(Sanford等，Technique3：3-16(1991))。

为了进行轰击，将悬液中的细胞浓集于滤器。含待轰击细胞的滤器置于微粒阻挡板下适当的距离处。如果需要的话，可以在枪和待轰击细胞之间放置一或多个阻挡网。

另外，未成熟的胚胎或其他靶细胞也可以培养在固态培养基上。待轰击细胞置于微粒阻挡板下适当的距离处.如果需要的话，可以在加速装置和待轰击细胞之间放置一或多个阻挡网。通过这里提出的方法，可以得到1000或以上细胞的基因座瞬时表达标记基因。轰击后48小时，一个转化灶中表达外源基因的细胞数通常有1-10个，平均1-3个。

在轰击转化中，可以优化轰击前的培养条件以及轰击参数来获得最大量的稳定转化子。该技术中，物理的和生物的参数都很重要。物理的参数包括控制DNA/微粒沉淀的参数、影响大或微粒飞行和速率的参数等.生物参数包括轰击前或轰击后即刻对细胞的所有处理步骤、靶细胞的渗透性调节来缓解轰击所带来的损伤以及转化DNA的性质如线形DNA或完整的超螺旋DNA。通常认为，轰击前的处理对未成熟胚胎的成功转化非常重要。

在另一实施方案中，质体可以被稳定转化。高等植物质体转化的方法包括含选择性标记DNA的离子枪转移以及通过同源重组将DNA定位于染色体(Svab等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)87：8526-8530(1990)；Svab和Maliga，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)90：913-917(1993)；Staub和Maliga，EMBO J.12：601-606(1993)；U.S.Patents5,451,513和5,545,818)。

因而，可以考虑在小批量的研究中，调整各种轰击参数，充分优化条件。尤其可以考虑调整物理参数如间距、飞行距离、组织距离和氦的压力。还可以调整影响受体细胞生理状态，进而影响转化和整合效率的的参数，最小化创伤还原因子。例如，受体细胞的渗透压、组织水化状态和亚培养阶段或细胞循环均可以进行调整，以优化转化。

农杆菌介导的转移在将基因导入植物细胞方面广为应用，因为用此方法DNA可以被导入完整的植物组织，不需要再从原生质体产生完整的植物。将DNA导入植物细胞所用的农杆菌介导的植物整合载体在本领域众所周知。参见Fraley等，Bio/Technology 3：629-635(1985)和Rogers等，Methods Enzymol.153：253-277(1987)所述方法。而且，Ti-DNA的整合是一个相对精确的过程，很少导致重排。DNA的被转移的区域由边界序列所限定，转入DNA通常如所述(Spielmann等，Mol.Gen.Genet.205：34(1986)))***植物基因组。

较新的农杆菌转化载体既能在农杆菌复制也能在大肠杆菌复制，如所述(Klee等，In：Plant DNA Infectious Agents，Hohn和Schell(eds.)，Springer-Verlag，New York，pp.179-203(1985))，便于操作。而且，农杆菌介导基因转移的载体已有很大改进，改进了基因和限制位点的排列，便于能表达各种多肽编码基因的载体的构建体。所提及的载体提供了非常方便的多接头区，其两侧是启动子和聚腺苷酸化酸位点，可以直接表达***的多肽编码基因，适合需要(Rogers等，MethodsEnzymol.153：253-277(1987))。另外，包含装甲和卸甲Ti基因的农杆菌均可用于转化。在农杆菌介导转化有效的植物株，首选农杆菌介导转化，因为其简便且符合基因转移的特性。

用农杆菌转化方法形成的转基因植物通常在一个染色体上含有单基因。对转入的基因来说，这样的转基因植物可以被称为杂合的。优选对转入的结构基因来说，转基因植物是纯合的，即：转基因植物含有两个转入的基因，分别位于一个染色体对的两条染色体的相同位点。纯合基因植物可以通过下述方式得到：***配(自交)一种独立的分离子，即含有单个转入基因的转基因植物，然后培育产生的种子，分析所得的含有目的基因的植物。

很容易理解，两个不同的转基因植物也可以交配，产生含有两个独立的分离的外源基因的子代。合适的子代自交能产生对两个转入的编码目的多肽的外源基因来讲都是纯合子的植物。还可以考虑，象植物繁殖那样，与亲本回交以及与非转基因植物异型杂交。

植物原生质体的转化还可以通过使用基于磷酸钙沉淀、聚乙二醇处理、电穿孔以及这些方法的结合来完成(参见，例如，Potrykus等，Mol.Gen.Genet.205：193-200(1986)；Lorz等，Mol.Gen.Genet.199：178(1985)；Fromm等，Nature319：791(1986)；Uchimiya等，Mol.Gen.Genet.204：204(1986)；Marcotte等，Nature335：454-457(1988)))。

这些***在不同植株的应用取决于从原生质体产生该植株的能力.从原生质体生成谷物的例证方法已有描述(Fujimura等，PlantTissue Culture Letters 2：74(1985)；Toriyama等，Theor.Appl.Genet.205：34(1986)；Yamada等，Plant Cell Rep.4：85(1986)；Abdullah等，Biotechnology 4：1087(1986))。

要转化不能从原生质体成功再生的植株，可以使用其他将DNA导入完整细胞或组织的方法。例如，谷物从不成熟的胚胎或外植体的再生可以如所述受到影响(Vasil，Biotechnology 6：397(1988)).另外，可以使用“微粒枪”或高速微粒技术(Vasil等，BiolTechnology 10：667(1992))。

使用微粒枪技术，DNA附着于小的金属颗粒表面，穿过细胞壁进入细胞浆(Klein等，Nature328：70(1987)；Klein等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85：8502-8505(1988)；McCabe等，Bio/technology6：923(1988))。金属微粒穿过细胞的一些层，使组织外植体中的细胞发生转化。

还可以使用其他细胞转化的方法，包括但不局限于直接将DNA转入花粉(Hess等，Intern Rev.Cytol.107：367(1987)；Luo等，PlantMol Biol.Reporter 6：165(1988))、直接将DNA注射于植物的繁殖器官(Pena等，Nature 325：274(1987))或直接将DNA注射入不成熟的胚胎细胞，然后使干燥的胚胎再水化(Neuhaus等，Theor.Appl.Genet.75：30(1987))。

植物从单个植物原生质体转化子或各种转化的外植体的再生、发育和培育在现有技术中已有(Weissbach和Weissbach，In：Methods forPlant Molecular Biology，Academic Press，San Diego，CA，(1988)))。这种再生和生长过程通常包括转化细胞的选择、个体细胞从通常的胚胎阶段到根胚阶段的培育。转基因胚胎和种子也用同样方法再生.接着将转基因苗种植于土壤等合适的植物培养基上。

含有编码目的蛋白的外源基因的植物的发育或再生在现有技术中已有.优选再生植物为自身授粉，以提供纯合的转基因植物。否则，将从再生植物得到的花粉与农学上重要种系的种子发育的植物杂交。反过来，用这些重要种系植物的花粉给再生植物授粉。本发明的含有目的多肽的转基因植物用众所周知的现有技术培育。

有各种各样的方法可以从植物组织再生植物.再生的方法的选用取决于起始的植物组织和再生的植物种类。

转化双子叶植物获得转基因植物的方法，主要是通过根瘤农杆菌，在棉花(U.S.Patent 5,004,863；U.S.Patent 5,159,135；U.S.Patent5,518,908)、大豆((U.S.Patent 5,569,834；U.S.Patent 5,416,011；McCabe等，Biotechnology 6：923(1988)；Christou等，Plant Physio.87：671-674(1988))、芸苔(U.S.Patent 5,463,174)、花生(Cheng等，Plant Cell Rep.15：653-657(1996)，McKently等，Plant Cell Rep.14：699-703(1995))、木瓜、豌豆(Grant等，Plant Cell Rep.15：254-258(1995))、和拟南芥(Bechtold等，C.R.Acad.Sci.Paris，Life Sci.316：1194-1199(1993))等中的应用已出版.转化拟南芥的方法通常称作“浸涂”或真空渗入或胚质转化。

用电穿孔、微粒轰击和农杆菌方法转化单子叶植物也已有报道.转化和植物再生已在芦笋(Bytebier等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)84：5354(1987)))、大麦((Wan和Lemaux，Plant Physiol 104：37(1994))、玉米(Rhodes等，Science240：204(1988)；Gordon-Kamm等，Plant Cell2：603-618(1990)；Fromm等，Bio/Technology 8：833(1990)；Koziel等，Bio/Technology 11：194(1993)；Armstrong等，Crop Science 35：550-557(1995))、燕麦(Somers等，Bio/Technology 10：1589(1992))、鸭茅(Horn等，Plant Cell Rep.7：469(1988))、稻(Toriyama等，Theor Appl.Genet.205：34(1 986)；Part等，Plant Mol.Biol.32：1135-1148(1996)；Abedinia等，Aust.J.Plant Physiol.24：133-141(1997)；Zhang和Wu，Theor.Appl.Genet.76：835(1 988)；Zhang等，Plant Cell Rep.7：379(1988)；Battraw和Hall，Plant Sci.86：191-202(1992)；Christou等，Bio/Technology 9：957(1991))、裸麦(De la Pena等，Nature 325：274(1987)、甘蔗(Bower和Birch，Plant J.2：409(1992))、高牛毛草(Wang等，Bio/Technology 10：691(1992))以及小麦((Vasil等，Bio/Technology 10：667(1992)；U.S.Patent 5,631,152)中完成。

已发展出一些基于克隆核酸构建体的瞬时表达的基因表达分析方法，其中核酸分子通过聚乙二醇处理、电穿孔或微粒轰击(Marcotte等，Nature 335：454-457(1988)；Marcotte等，Plant Cell1：523-532(1989)；McCarty等，Cell 66：895-905(1991)；Hattori等，Genes Dev.6：609-618(1992)；Goff等，EMBO J.9：2517-2522(1990))导入植物细胞。瞬时表达也可以用于功能性分离基因构建体(参见Mailga等，Methods in Plant Molecular Biology，Cold Spring Harbor Press(1995))。

本发明的任何核酸均可以与其他基因元件如载体、启动子、增强子等组合，以永久或瞬时的方式导入植物细胞。另外，本发明的任何核酸分子均可以导入植物细胞，以允许其所编码的蛋白或其片段表达或过表达。

共抑制指的是某一内源基因或基因家族表达水平(通常是在RNA水平)的降低，其原因是所转录mRNA链与内源基因相同的同源正义构建体的表达(Napoli等，Plant Cell 2：279-289(1990)；van der Krol等，Plant Cell 2：291-299(1990))。共抑制可以是由与细胞某一核酸序列同源的核酸分子的单拷贝稳定转化所引起(Prolls和Meyer，PlantJ.2：465-475(1992))，也可以是由多拷贝转化引起(Mittlesten等，Mol.Gen.Genet.244：325-330(1994))。与同源启动子连接的基因，即使不同，也会引起邻接基因的共抑制(Vaucheret，C.R.Acad.Sci.III 316：1471-1483(1993)；Flavell，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)91：3490-3496(1994))；van Blokland等，Plant J.6：861-877(1994)；Jorgensen，Trends Biotechnol.8：340-344(1990)；Meins和Kunz，In：GeneInactivation and Homologous Recombination in Plants，Paszkowski(ed.)，pp.335-348，Kluwer Academic，Netherlands(1994))。

可以理解，本发明的一或多个核酸可以导入植物细胞，并用合适的启动子转录，导致内源蛋白的共抑制。

反义途经是通过靶向于基因物质而防止或降低基因功能的一种方法(Mol等，FEBS Lett.268：427-430(1990)).反义途经的目的是通过使用与靶基因互补的序列，来阻断靶基因表达，导致靶蛋白水平选择性降低或完全缺失的突变细胞系或生物体。反义技术相对于其他的“反基因”方法有一些优点。失活位点及其对发育的影响可以通过反义基因启动子的选择或外部应用的时间选择或显微注射来操纵。反义可以通过选择靶基因特有的区域或与其他相关基因同源的区域来控制其特异性(Hiatt等，In：Genetic Engineering，Setlow(ed.)，Vol.11，NewYork：Plenum 49-63(1989))。

反义RNA技术涉及将与靶mRNA互补的RNA导入细胞，然后通过反义底物与靶mRNA的碱基配对形成特异的RNA:RNA双链(Green等，Annu.Rev.Biochem.55：569-597(1986))。在一个实施方案中，过程涉及到了反义基因序列的导入和表达。反义序列指的是这样的序列，其中将正常基因序列的部分或全部反向置于启动子的下游，以便“错误的”或互补的链转录为非编码的反义RNA，从而与靶RNA杂交并干扰其表达(Takayama和Inouye，Crit.R ev.Biochem.Mol.Biol.25：155-184(1990))。反义载体的构建体用标准方法进行，通过转化、转染、电穿孔、微注射及感染等导入细胞。转化的类型及载体的选择将决定是瞬时表达还是稳定表达。反义基因所用的启动子会影响反义抑制的水平、时间、组织、特异性或诱导性。

可以理解，如果植物细胞含有一种核酸，其非转录链编码一种蛋白或其片段，那么该植物细胞中此种蛋白的活性便会降低或受到抑制.活性通过任何方法降低或受到抑制的蛋白优选tMT2。在本发明的一个实施方案中，优选δ-生育酚或δ-生育三烯酚的浓度升高。活性通过任何方法降低或受到抑制的另一个优选蛋白是尿黑酸双加氧酶。

转录后基因沉默(PTGS)会导致植物的病毒免疫或基因沉默。PTGS由dsRNA诱导，通过胞浆RNA-依赖性RNA聚合酶(要求有dsRNA模板)介导。dsRNA通过互补的转基因mRNA或该转录子的互补区域区域杂交形成。双链形成可以通过共同定位于植物基因组的正义基因和反义基因的转录子、自身互补的单转录子以及通过杂交而到一起的正义和反义转录子来完成。dsRNA依赖性的RNA聚合酶从转基因mRNA和附着于这一互补链(cRNA)的RNAse分子形成互补的链。这些cRNA-RNAse分子与内源mRNA杂交，并切割与杂交体相邻的单链RNA。切割的单链RNA进一步被其他宿主Rnases降解，因为其缺乏其中一个缺乏5’端帽状结构，另一个缺乏poly(A)尾(Waterhouse等，PNAS 95：13959-13964(1998))。

可以理解，将本发明的一或多个核酸分子导入植物细胞，用适当的启动子转录，转录后进一步导致内源转录子的转录后基因沉默。

已有抗体在植物中表达(Hiatt等，Nature 342：76-78(1989)；Conrad和Fielder，Plant Mol.Biol.26：1023-1030(1994)).已报道，一种scFv(单链Fv抗体)的胞浆表达可以延缓artichoke mottled crinkle病毒感染。表达抗内源蛋白抗体的转基因植物也会呈现生理效应(Hiatt等，Nature 342：76-78(1989)；Conrad和Fielder，Plant Mol.Biol.26：1023-1030(1994))。例如，已报道，表达的抗脱落的抗体导致总体种子发育的干扰(Philips等，EMBO J16：4489-4496(1997))。

催化性的抗体也可以在植物表达(抗体酶)。抗体酶的机理是这样的：抗体可以针对许多分子，这种识别能力也可以定向的产生与转换态结合的抗体，促进化学反应(Persidas，Nature Biotechnology15：1313-1315(1997))。抗体酶的催化能力可以通过定点突变得到增强。示例性抗体酶如U.S.Patent：5,658,753；U.S.Patent 5,632,990；U.S.Patent 5,631,137；U.S.Patent 5,602,015；U.S.Patent 5,559,538；U.S.Patent 5,576,174；U.S.Patent 5,500,358；U.S.Patent 5,318,897；U.S.Patent 5,298,409；U.S.Patent 5,258,289和U.S.Patent 5,194,585，所述。

可以理解，本发明的任何抗体都可以在植物表达，这种表达可导致一定的生理效应。也可以理解，任何表达的抗体都可以是催化性的。

本发明也提供植物的部分，尤其是繁殖和储藏部分。植物的部分无任何限制的包括种子、胚乳、胚珠和花粉。在本发明的一个优选实施方案中，植物部分指种子。在一个实施方案中，种子是动物饲料的一个组成。

在另一实施方案中，植物部分是果实，更优选货架期增强的果实。在另一优选实施方案中，果实中的一种生育酚水平升高。在另一优选实施方案中，果实中的一种生育三烯酚水平升高。

本发明还提供一种容器，其中种子的含量超过约10,000，优选约20,000，更优选约40,000，其中衍生于本发明所述植物的种子含量超过约10％，优选约25％，更优选约50％，更优选约75％，更优选约90％。

本发明还提供一种容器，其中种子的重量超过约10kg，优选约25kg，更优选约50kg，其中衍生于本发明所述植物的种子含量超过约10％，优选约25％，更优选约50％，更优选约75％，更优选约90％。

本发明的任何一种植物或其部分都可加工成饲料、食物、蛋白活油制剂，包括总生育酚含量高的油制剂以及此处所述任何一种或多种生育酚含量高的油制剂。优选的植物部分是种子。在一个优选的实施方案中，饲料、食物、蛋白或油制剂为家畜或人或两者而设计。现有技术已有制备饲料、食物、蛋白或油制剂的方法。参见，如U.S.Patent4,957,748，5,100,679，5,219,596，5,936,069，6,005,076，6,146,669和6,156,227。在一个优选的实施方案中，蛋白制剂是一种高蛋白制剂。高蛋白制剂优选蛋白含量超过约5％，更优选约10％，更优选约15％w/v。在一个优选的实施方案中，油制剂是一种液体，体积超过约1，5，10或50升。本发明提供从本发明的植物制备或用本发明的方法制备的油。这种油表现出增强的氧化稳定性。而且，这种油也可以是其他产物的一小部分或一大部分。另外，这种油还可以与其他油混合。在一个优选的实施方案中，从本发明的植物制备或用本发明的方法制备的油，在一种产物的体积或重量中的百分比超过约0.5％、1％、5％、10％、25％、50％、75％或90％。在另一个优选的实施方案中，油制剂可以混合，在一种产物的体积中的百分比超过约10％、25％、35％、50％或75％。从本发明的植物制备的油可以与一或多种有机溶剂或石油蒸馏物混合。

本发明的植物可以是育种项目的一部分或来自于育种项目.育种方法的选择有赖于植物繁殖的方式、要改进的遗传性状以及商业用的品种的类型(如F₁杂交品种、纯系品种等)。如下提供了培育本发明的植物的可选方法，但方法并不仅限于此。通过使用辅助筛选杂交子代的标记，可以促进育种项目。可以理解，任何商业或非商业的品种均可以在杂交项目中使用。一些因素如突出势、营养势、压力耐受、疾病抗性、分支、开花、结籽率(seed set)、种子体积、种子密度、坚韧度以及脱粒率等都会影响选择。

对于高遗传性的性状，通过单位点的评价来选择个体植株是有效的。但对于低遗传性性状，筛选应当在对相关植物家族的重复评价的平均值基础上进行。常用的筛选方法包括谱系筛选、改进的谱系筛选、群体筛选和回复筛选。在一个优选的实施方案中，进行了回交或回复育种项目。

遗传的复杂性影响育种方法的选择。可以用回交育种的方法将一个或一些具有高度遗传性状的基因转移入一个理想的品种。这种方法已在培育疾病抗性品种中广泛应用。各种回复筛选的技术被用来提高大量基因控制的数量遗传性状。回复筛选在自身授粉作物的使用取决于授粉的难易、每次授粉成功杂交的机率以及从成功杂交产生杂交子代的数量等。

对培育的种系进行检测，并与合适的标准在商业目标区域的代表性环境中进行两或更多代的对比。优良种系作为新的商业品种的候选；那些仍就缺乏性状的种系可作为亲本，产生新的子代，进行进一步的筛选。

其他识别优良植物的方法是观察其相对于其他实验植物和广泛生长的标准品系的表现。如果单一的观察不具有结论性，则进行重复的观察，提供对其遗传价值的更好的估计。育种者可以筛选和杂交两个或更多的亲本，然后重复自交和筛选，产生许多新的遗传组合。

新的品系的形成需要经过对多个植株的培育和筛选、这些植株的杂交以及较好杂交体的筛选.杂交种子可以通过选择的雄性生育亲本之间的人工杂交或者通过利用雄性生育***来产生。杂交体通过特定的表明种子是一个真的杂交体的单基因性状如荚的颜色、花的颜色、种子的产量、软毛颜色或杀虫剂抗性等来进行筛选。另外一些杂交体的表型以及亲本的数据影响育种者的判断，来决定是否继续进行特异的杂交交配。

可以利用纯种育种和回复筛选育种的方法从育种群体中形成品系。育种项目将来源于两个或多个品系或各种各样更为广泛基础上的性状结合起来，形成培育库，然后通过自交和理想表型的筛选来培育品系。进一步对新的品系进行评价，以确定哪个具有商业潜力。

纯种培育被广泛用于自身授粉作物的改进.两个携带有理想的互补性状的亲本互相杂交，产生F₁。通过一个或几个F₁的自身交配得到F₂。从最优家族筛选最优个体。家族的重复检测可以从F₄代开始，以提高低遗传性状筛选的有效性.在近交的高级阶段(即F₆和F₇)，对最优种系和表型相似种系的混合物进行检测，来确定其作为新品系的潜力。

回复育种已被用于将一个简单遗传的具有高度遗传性状的基因转移入一个理想的同源品系或近交品系(作为回复亲本)。被转移的性状的来源称为供体亲本。所得的植物应该具有回复亲本的特性(如品系)以及从供体亲本来的理想性状。起始杂交后，选择具有供体亲本表型的个体，与回复亲本进行重复杂交(回交)。所得的植物应该具有回复亲本的特性(如品系)以及从供体亲本来的理想性状。

从严格意义上讲，单种子世代方法指每株植物单种子收集一个样品。利用单种子样品种植下一代。当群体已从F₂进展到近交的理想水平时，追踪其种系衍生的不同F₂个体。因为一些种子不发芽，或者一些植物没有产生至少一个种子，所以群体中植物的数量随传代而减少。因而，当传代完成时，不是所有从群体中采样的F₂植株都能在子代中找到其代表。

多种子方法中，育种者通常从群体的每个植株中收获一或多个荚，然后一起脱粒，形成一批。一批中的一部分种植产生下一代，一部分保存下来。这种方法称为改良的单种子世代方法或荚批技术。

多种子方法已被用于节省收获时的劳动力。用机器脱粒显著快于单种子方法中的手工脱粒。而且，多种子方法还使每代近交每个群体种植同样数量的种子称为可能。

常用的其他不同性状不同作物的育种方法在一些参考书中可以找到(例如Fehr，Principles of Cultivar Development Vol.1，pp.2-3(1987))。

本发明的转基因植物也可以通过无配生殖来繁殖。无配生殖是植物中的一种遗传控制的繁殖方法，其中胚胎不经过卵和***的结合而形成。有四种基本的无配生殖方式：1)无孢子生殖，其中胚胎从衍生于细胞核的胚囊中的染色体未降解的卵发育而来，2)二倍性孢子形成，其中胚胎从衍生于巨孢子母细胞的胚囊中的未降解的卵发育而来，3)不定胚，其中胚胎直接来源于体细胞.在多数的无配生殖方式中，假受精或极核受精以产生胚乳对种子活力是必须的。在无孢子生殖，保育品系可作为种子胚乳形成的花粉源。保育品系不影响无孢子生殖的无配生殖品系，因为虽然品系的未降解的卵单性生殖而来，但却使胚乳的产生成为可能。无配生殖在经济上非常重要，尤其在转基因植物，因为它使任何基因型(无论多么外源)的培育称为现实。因而，通过无配生殖繁殖，外源基因经过反复的生活周期，仍能保留其遗传保真性。产生无配生殖植物的方法在现有技术中为已知。参见U.S.Patent 5,811,636。

其他生物

本发明的核酸分子可以导入任何细胞或生物体，如哺乳动物细胞、哺乳动物、鱼的细胞、鱼、鸟的细胞、鸟、藻类细胞、藻类、真菌细胞、真菌或细菌细胞。本发明的蛋白可以在适当的细胞或生物体产生.优选的宿主或转化体包括：真菌细胞如曲霉、酵母、哺乳动物、尤其是牛和猪、昆虫、细菌和藻类。更优选的细菌是根瘤农杆菌和大肠杆菌。

现有技术已有转化这些细胞或生物体的方法(EP 0 238 023；Yelton等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)，81：1470-1474(1984)；Malardier等，Gene，78：147-156(1989)；Becker和Guarente，In：Abelson and Simon(eds.)，Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology，Method Enzymol.Vol.194，pp.182-187，Academic Press，Inc.New York；Ito等，J.Bacteriology，153：163(1983)Hinnen等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)，75：1920(1978)；Bennett和LaSure(eds.)，More GeneManipualtionins in fungi，Academic Press，CA(1991))。也已有产生本发明蛋白的方法(Kudla等，EMBO，9：1355-1364(1990)；Jarai和Buxton，Current Genetics，26：223 8-2244(1994)；Verdier，Yeast，6：271-297(1990；MacKenzie等，Journal of Gen.Microbiol.139：2295-2307(1993)；Hartl等，TIBS，19：20-25(1994)；Bergenron等，TIBS，19：124-128(1994)；Demolder等，J.Biotechnology，32：179-189(1994)；Craig，Science，260：1902-1903(1993)；Gething和Sambrook，Nature，355：33-45(1992)；Puig和Gilbert，J.Biol.Chem.269：7764-7771(1994)；Wang和Tsou，FASEB Journal，7：1515-1517(1993)；Robinson等，Bio/Technology，1：381-384(1994)；Enderlin和Ogrydziak，Yeast，10：67-79(1994)；Fuller等，Proc.Natl. Acad.Sci.(U.S.A.)，86：1434-1438(1989)；Julius等，Cell，37：1075-1089(1984)；Julius等，Cell 32：839-852(1983))。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种蛋白或其片段在细胞或生物体的过表达，使该细胞或生物体相对于与其具有相似遗传背景的未转化的细胞或生物体来讲，生育酚的含量增高。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种蛋白或其片段在细胞或生物体的过表达，使该细胞或生物体相对于与其具有相似遗传背景的未转化的细胞或生物体来讲，α-生育酚的含量增高。

在一个优选的实施方案中，本发明的一种蛋白或其片段在细胞或生物体的过表达，使该细胞或生物体相对于与其具有相似遗传背景的未转化的细胞或生物体来讲，γ-生育酚的含量增高。

在另一优选的实施方案中，本发明的一种蛋白或其片段在细胞或生物体的过表达，使该细胞或生物体相对于与其具有相似遗传背景的未转化的细胞或生物体来讲，α-生育三烯酚的含量增高。

在另一优选的实施方案中，本发明的一种蛋白或其片段在细胞或生物体的过表达，使该细胞或生物体相对于与其具有相似遗传背景的未转化的细胞或生物体来讲，γ-生育三烯酚的含量增高。

抗体

本发明一方面涉及抗体，单链抗原结合分子或其他与本发明的一个或多个蛋白或多肽分子特异结合的蛋白及其直向同源物、融合或片段.在一个更为优选的实施方案中，抗体特异的与具有SEQ ID NOs：16-38所示氨基酸序列的蛋白或其片段结合。在另一实施方案中，抗体特异的与包含SEQ ID NOs：16-38所示氨基酸序列的融合蛋白或其片段结合。本发明的抗体可用于对本发明的蛋白或多肽分子或蛋白的翻译后修饰进行定量或定性检测.此处所谓的一种抗体或多肽“特异结合”于本发明的一种蛋白或多肽分子，是指其结合不受非相关分子出现的竞争性抑制。

编码本发明的蛋白或其片段的核酸分子可以经由重组的方式进行表达，所产生的蛋白或多肽又可以反过来用于激发能与其结合的抗体。这些抗体可以用于所述蛋白的免疫分析。这样的蛋白编码分子或其片段可以是一种“融合”分子(即大的核酸分子的一部分)，因而，表达后会产生一种融合蛋白。可以理解，本发明的任何核酸分子均可以经由重组的方式进行表达，产生由这些核酸分子编码的蛋白或多肽。

与本发明的蛋白或其片段特异结合的抗体可以是多克隆或单克隆的，可以包含完整的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的抗原结合部分(如((F(ab′)，F(ab′)₂)或单链免疫球蛋白，经由如重组等方式产生。容易理解，操作者熟悉描述抗体构建、操作及分离的特异条件和程序的标准的参考资料(参见Harlow和Lane，Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，New York(1988))。

如下所讨论，这些抗体分子或其片段可用于诊断的目的。当用于诊断目的时，最好将其与如一个配体基团(如生物素)或一个可检测的标记基团(如荧光基团、放射性同位素或酶)相结合。

产生能与本发明的蛋白或多肽分子结合的抗体的能力允许对衍生于这些分子的拟态化合物的识别。这些拟态化合物可以包含蛋白或多肽的一个片段或仅仅一个结构类似区，但却呈现出与该化合物的抗体特异结合的能力。

示例性应用

本发明的核酸分子或其片段可以用于从同类来获得其他的核酸分子(玉米来源的核酸分子可以用于获得其他玉米来源的核酸分子)。这样的核酸分子包括编码一种蛋白的完整的编码序列的核酸分子和启动子及其这些分子的侧翼序列。而且，这样的核酸分子还包括编码其他同工酶或基因家族成员的核酸分子。通过利用上述的核酸分子或其片段来筛选cDNA或基因组文库，可以很容易的获得这样的分子。现有技术已知构建这些文库的方法。

本发明的核酸分子或其片段还可以用于获得核酸直向同源物。这样的直向同源物包括植物及其他生物体(包括细菌和真菌)的核酸分子，包括全部或部分编码其他植物种类和其他生物体的蛋白直向同源物的核酸分子，还包括基因元件序列(如启动子和转录调控元件)。通过利用上述的核酸分子或其片段来筛选这样的植物种类的cDNA或基因组文库，可以很容易的获得这样的分子。现有技术已知构建这些文库的方法。这样的直向同源物的核酸序列与一或多个来自于SEQID NOs：1-15及其互补序列的序列可以不同，因为完全互补并非稳定杂交所必须。因而，本发明的核酸分子还包括能与核酸分子特异杂交但又缺乏“完全互补性”的分子。

多种方法中的任何一种均可用来获得一或多个上述的核酸分子(Zamechik等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)83：4143-4146(1986)；Goodchild等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85：5507-5511(1988)；Wickstrom等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85：1028-1032(1988)；Holt等，Molec.Cell.Viol.8：963-973(1988)；Gerwirtz等，Science242：1303-1306(1988)；Anfossi等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)86：3379-3383(1989)；Becker等，EMBO J.8：3685-3691(1989))。自动核酸合成仪可用于达到此目的。在此情况下，公开的核酸分子可用来定义一对可用于聚合酶链式反应的引物(Mullis等，Cold SpringHarbor Symp.Quant.Biol.51：263-273(1986)；Erlich等，EuropeanPatent 50,424；European Patent 84,796；European Patent 258,017；European Patent 237,362；Mullis，European Patent 201,184；Mullis等，U.S.Patent 4,683,202；Erlich，U.S.Patent 4,582,788；和Saiki等，U.S.Patent 4,683,194))，从而扩增得到任何理想的核酸分子或其片段。

还可以用此处公开的核酸序列来获得与一或多个公开的核酸序列相连的启动子序列及其他基因元件(包括但不限于转录调控侧翼序列).在一个实施方案中，通过将本发明的核酸分子与基因组文库成员孵育，回收与这些核酸分子杂交的克隆。在另一实施方案中，用“染色体步移(walking)”或反向PCR方法来获得这样的序列(Frohman等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85：8998-9002(1988)；Ohara等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)86：5673-5677(1989)；Pang等，Biotechniques 22：1046-1048(1977)；Huang等，Methods Mol.Biol.69：89-96(1997)；Huang等，Method Mol.Biol.67：287-294(1997)；Benkel等，Genet.Anal.13：123-127(1996)；Hartl等，Methods Mol.Biol.58：293-301(1996))。“染色体步移”这一术语指通过连续的杂交步骤来扩展基因图谱的过程。

本发明的核酸分子可以用来分离细胞增强的、细胞特异的、组织增强的、组织特异的、发育或环境调节表达分布图的启动子。用基因组筛选方法和PCR技术从基因组文库对这些基因的5’侧翼启动子序列进行分离和功能分析，会分离出有用的启动子序列和转录调控元件。这些方法在现有技术为已知，已有相关描述(参见，例如Birren等，Genome Analysis：Analyzing DNA，1，(1997)，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.)。可以对用本发明的核酸分子获得的启动子进行修饰以影响其控制特性。示例性的修饰方法包括但不局限于增强子序列。此类基因元件可以用来增强新的或已存在的性状的基因表达，以改进作物。

本发明的另一核酸分子子集包括作为标记的核酸分子。标记在分子遗传学中广为应用。此类标记包括SEQ ID Nos：1-15及其互补序列或两者的片段中可以作为标记的核酸分子或本发明的其他可作为标记的核酸分子。

本发明的基因标记包括“显性”或“共显性”标记。“共显性标记”表明一个基因座有两个或以上的等位基因(每个二倍体个体两个)。“显性标记”表明每个基因座只有一个等位基因。显性标记表型的出现(例如DNA的一条带)表明一种等位基因处于纯合或杂合的状况。显性标记表型的缺失(如DNA条带的消失)仅表明“一些其他的”未定义的等位基因出现了。在一个其中的个体主要是纯合，基因座主要是双态的群体中，显性或共显性标记具有同等价值。随着群体越来越杂合和多-等位基因，共显性标记比显性标记更能体现基因型。标记分子可以用来检测如多态性，如单核苷酸多态性(SNPs)。

动物和植物在其连续的进化过程中，会经历自发的变异(Gusella，Ann.Rev.Biochem.55：831-854(1986))。“多态性”是指在某个种类的一些成员中出现的基因或其侧翼区的序列的改变或差异。改变的序列和“原始”序列共存于该种类的群体中。某些情况下，这样的共存处于稳定或准稳定的平衡中。

多态性也可以称为“等位的”，因为由于多态性的存在，群体中的一些成员具有原始序列(即原来的“等位基因”)，而其他成员可能含有变异的序列(即变异的“等位基因”)。在最简单的例子中，只有一种变异序列存在，多态性因而被称为双等位的。在其他例子中，种类的群体可以包括多个等位基因，多态性被称为三等位的，等等。单基因可以有多个非相关的多态性。例如，它可以在一个位点有双等位的多态性，而在另一个位点有多等位的多态性。

限定多态性的突变可以从单核苷酸突变到基因内扩展区域的***或缺失.某些情况下，基因组中DNA序列的突变位于具有短串联重复(STRs)特征的区域，包括两个或三个核苷酸重复基序。以串联重复为特征的多态性称为“数目可变串联重复”(VNTR)多态性。VNTRs已被用于鉴定分析(Weber，U.S.Patent 5,075,217；Armour等，FEBS Lett.307：113-115(1992)；Jones等，Eur.J.Haematol.39：144-147(1987)；Horn等，PCT Patent Application WO91/14003；Jeffreys，European Patent Application 370,719；Jeffreys，U.S.Patent 5,175,082；Jeffreys等，Amer.J.Hum.Genet.39：11-24(1986)；Jeffreys等，Nature316：76-79(1985)；Gray等，Proc.R.Acad.Soc.Lond.243：241-253(1991)；Moore等，Genomics 10：654-660(1991)；Jeffreys等，Anim.Genet.18：1-15(1987)；Hillel等，Anim.Genet.20：145-155(1989)；Hillel等，Genet.124：783-789(1990))。

使用核酸扩增技术，可以很方便地检测样品DNA中的多态位点。这些方法可以特异地提高多核苷酸的浓度，其中多核苷酸跨越多态位点或包含多态位点以及多态位点近端或远端的序列。这样的扩增分子可以很容易的通过凝胶电泳或其他方式进行检测。

在一个可选的实施方案中，可以通过使用与多态位点物理连接的标记核酸分子检测多态性。其中，标记的核酸分子包含位于多态性1mb范围内的多核苷酸，更优选位于100kb范围内，最优选位于10kb范围内。

多态性的识别有多种方式。在植物，通过将其出现与缺失与一种表型的出现或缺失相联系，可以预测植物的表型。如果多态性增加或破坏了一个限制性内切酶位点，或者它导致DNA的缺失或***(如VNTR多态性)，那么将会改变用该限制性内切酶消化后所产生DNA片段的大小和分布图.因此，可以用限制性片段分析将突变序列与原始序列区别开来。可以用此方式识别的多态性称为“限制性片段长度多态性”(“RFLPs”)(Glassberg，UK Patent Application 2135774；Skolnick等，Cytogen.Cell Genet.32：58-67(1982)；Botstein等，Ann.J.Hum.Genet.32：314-331(1980)；Fischer等，(PCT ApplicationWO90/13668；Uhlen，PCT Application W090/11369))。

多态性还可以通过单链构象多态性(SSCP)分析来识别(Elles，Methods in Molecular Medicine：Molecular Diagnosis of GeneticDiseases，Humana Press(1996))；Orita等，Genomics5：874-879(1989))。大量的方案描述了SSCP，包括但不限于Lee等，Anal.Biochem.205：289-293(1992)；Suzuki等，Anal.Biochem.192：82-84(1991)；Lo等，Nucleic Acids Research 20：1005-1009(1992)；Sarkar等，Genomics 13：441-443(1992)。可以理解，本发明的一或多个核酸可以作为标记或探针通过SSCP分析来检测多态性。

多态性还可以通过称为扩增片段长度多态性(AFLP)的DNA指纹技术来检测，该技术以从总的基因组DNA消化产物中，选择性PCR扩增限制性片段为基础来分析DNA(Vos等，Nucleic Acids Res.23：4407-4414(1995))。该方法特异地共扩增大量的限制性片段，不需知道核酸序列也可以通过PCR识别。可以理解，本发明的一或多个核酸可以作为标记或探针，通过AFLP分析来检测多态性，也可以作为指纹RNA中的标记或探针。

多态性还可以通过随机扩增多态性DNA(RAPD)(Williams等，Nucl.Acids Res.18：6531-6535(1990))和切割扩增多态性序列(CAPS)分析来识别(Lyamichev等，Science 260：778-783(1993))。可以理解，本发明的一或多个核酸可以作为标记或探针通过RAPD或CAPS分析来检测多态性。

单核苷酸多态性(SNPs)较其他多态性标记发生的频率高，而且较其他已报道的多态性方式在整个基因组所处的位置也更一致。SNPs的更高的发生频率和一致性意味着，在目的基因位点内或其邻近发现SNPs的可能性较其他多态性为高。SNPs位于基因组的蛋白编码区或非编码区。一些SNPs会导致缺陷或突变的蛋白表达(如突变或缺陷性拼接的结果)。特征性SNPs的分析(基因型)只要求+/-，而不要求长度检测，更容易自动化。

可以用多种方法对SNPs进行特征性分析。其中包括位点的直接或间接测序、限制酶的使用(Botstein等，Am.J.Hum.Genet.32：314-331(1980)；Konieczny和Ausubel，Plant J.4：403-410(1993))、酶及化学错配分析(Myers等，Nature 313：495-498(1985))、等位基因特异PCR(Newton等，Nucl.Acids Res.17：2503-2516(1989)；Wu等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：2757-2760(1989))、连接酶链式反应(Barany，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：189-193(1991))、单链构象多态性分析(Labrune等，Am.J.Hum.Genet.48：1115-1120(1991))、单碱基引物延伸(Kuppuswamy等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：1143-1147(1991))，Goelet US 6,004,744；Goelet 5,888,819))、固相ELISA为基础的寡核苷酸连接分析(Nikiforov等，Nucl.Acids Res.22：4167-4175(1994))、双脱氧指纹(Sarkar等，genomics 13：441-443(1992))、寡核苷酸荧光淬灭分析(Livak等，PCR Methods Appl.4：357-362(1995a))、5’-核酸酶等位基因-特异杂交TaqMan^TM分析(Livak等，Nature Genet.9：341-342(1995))、模板定向染色终止剂整合(TDI)分析(Chen and Kwok，Nucl.Acids Res.25：347-353(1997))、等位基因特异分子信标分析(Tyagi等，Nature Biotech.16：49-53(1998))、PinPoint分析(Haff和Smirnov，Genome Res.7：378-388(1997))、dCAPS分析(Neff等，Plant J.14：387-392(1998))、pyrosequencing(Ronaghi等，Analytical Biochemistry 267：65-71(1999)；Ronaghi等PCT application WO 98/13523；Nyren等PCT applicationWO 98/28440；www.pyrosequencing.com)、用质谱分析，如Masscode^TM***(Howbert等PCT application，WO 99/05319；Howbert等PCTapplication WO97/27331；www.rapigene.com；Becker等PCTapplication WO 98/26095；Becker等PCT application；WO 98/12355；Becker等PCT application WO 97/33000；Monforte等US 5,965,363))、寡核苷酸探针的攻击性切割(Lyamichev等NatureBiotechnology 17：292-296；www.twt.com)以及使用高密度寡核苷酸分析(Hacia等Nature Genetics 22：164-167；www.affymetrix.com))。

多态性还可以通过使用等位基因-特异寡核苷酸(ASO)进行检测，ASO可以，例如，与基于杂交的技术联合使用。后者包括Southern、Northern、斑点印记杂交、反向斑点印记杂交以及微阵列上进行的杂交及其相关技术。

多态性检测时杂交的严谨性高度依赖于各种因素，包括等位基因特异的寡核苷酸的长度、序列组成、互补的程度(即碱基错配的出现或缺失)、盐浓度及其他因素如甲酰胺和温度。这些因素在杂交以及随后的洗脱过程都很重要，洗脱的目的是去除未特异杂交的靶多核苷酸。实际操作中。最后的最严谨的洗脱条件是最关键的。而且，能与等位基因特异的寡核苷酸杂交的靶多核苷酸的量也受以下因素影响：ASO和靶多核苷酸的浓度、“锁定”水分子的因子的出现及浓度，“锁定”水分子的目的是为了有效地浓缩试剂(如PEG、葡聚糖、硫酸葡聚糖等)，无论核酸分子是固相化的还是处于溶液中，以及杂交的持续和洗脱步骤。

杂交优选在ASO的融解温度(Tm)之下进行。杂交和/或洗脱步骤的温度越接近Tm，严谨性越高。寡核苷酸的Tm值可以估计出来，例如，按如下的公式：Tm＝81.5+16.6×(log10[Na+])+0.41×(％G+C)-675/n；其中，[Na+]是Na+或其他合适阳离子浓度的摩尔数，n＝寡核苷酸的碱基数。还有其他一些估算Tm值的公式，为现有技术中已知的普通技术。

优选对严谨性进行调整，以便给定的ASO能与含有正确等位基因的靶寡核苷酸以及含有错误等位基因的靶寡核苷酸分别杂交。优选，ASO与含有正确等位基因的靶寡核苷酸杂交所产生的信号与ASO与含有错误等位基因的靶寡核苷酸交叉杂交(如突变等位基因特异的ASO与野生型等位基因交叉杂交)所产生的信号至少有两倍的差异。在本发明的一个更优选的实施方案中，有至少五倍的信号差异。特别优选，有至少一个数量级的差异。

尽管这里提出一些检测多态性的方法，但其他方法也可以使用.例如，如下提出的一些已知方法Birren等，Genome Analysis，4：135-186，A Laboratory Manual.Mapping Genomes，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，NY(1999)；Maliga等，Methodsin Plant Molecular Biology.A Laboratory Course Manual，Cold SpringHdarbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY(1995)；Paterson，Biotechnology Intelligence Unit：Genome Mapping in Plants，R.G.Landes Co.Georgetown，TX，and Academic Press，San Diego，CA(1996)；The Corn Handbook，Freeling and Walbot，eds.Springer-Verlag，NewYork，NY(1994)；Methods in Molecular Medicine：Molecular Diagnosisof Genetic Diseases，Elles，ed.Humana Press，Totowa，NJ(1996)；Clark，ed.Plant Molecular Biology：A Laboratory Manual，Clark，ed.Springer-Verlag，Berlin，Germany(1997)。

在植物育种项目中，标记辅助筛选的因素有：(1)标记应当共分离或与理想性状密切相连；(2)应该有从大批群体中筛选分子标记的有效方法；(3)筛选技术在不同实验室之间有较好的重复性，优选使用上较为经济较为友好的。

标记分子的基因连接可以通过以下的基因图谱模式来建立，例如(无限制)Lander和Botstein在Genetics 121：185-199(1989)中所报道的侧翼标记模式以及Lander和Botstein在Genetics 121：185-199(1989)中所报道的基于最大可能性方法的间隔图谱以及软件包MAPMAKER/QTL中所实施的(Lincoln和Lander，Mapping GenesControlling Quantitative Traits Using MAPMAKER/QTL，WhiteheadInstitute for Biomedical Research，Massachusetts，(1990))。其他的软件包括Qgene，Version 2.23(1996))。优选使用Qgene软件。

计算标记出现的最大可能性估计值(MLE)，结合假定无QTL效应的MLE，以避免假阳性。优势比率的常用对数(LOD)如下式计算：LOD＝1g(QTL出现的MLE/无连锁QTL的MLE)。

LOD值表明QTL出现比不出现的可能性大多少。避免假阳性的LOD阈值(给定的可信度为95％)依赖于标记的数目和基因组的长度.表明LOD阈值的图由Lander和Botstein在Genetics 121：185-199(1989)中提出，并进一步由Arus and Moreno-González，PlantBreeding，Hayward等，(eds.)Chapman & Hall，London，pp.314-331(1993)所描述。

在本发明的一个优选实施方案中，目的性状或表型的核酸标记的LOD值优选超过2.0，更优选2.5，特别优选超过3.0或4.0.在一个优选实施方案中，目的性状是改变的生育酚水平或组合物或改变的生育三烯酚或组合物。

另外，还可以使用其他的模式。已经报道了许多间隔图谱的修饰和改变方法，包括非参数方法的使用(Kruglyak和Lander，Genetics 139：1421-1428(1995))。也可以使用多回归方法或模式，其中性状就大量标记回归(Jansen，Biometrics in Plant Breeding，van Oijen和Jansen(eds.)，Proceedings of the Ninth Meeting of the Eucarpia SectionBiometrics in Plant Breeding，The Netherlands，pp.116-124(1994)；Weber和Wricke，Advances in Plant Breeding，Blackwell，Berlin，16(1994))。Jansen和Stam，Genetics 136：1447-1455(1994)，以及Zeng，Genetics136：1457-1468(1994)已报道将间隔图谱与回归分析相结合的方法，其中表型在一个给定的标记间隔回归为单个推断QTL，同时回归为作为辅因子的大量标记。通常，辅因子的使用可以降低估计QTL位点的偏性和样品误差(Utz和Melchinger，Biometrics in PlantBreeding，van Oijen和Jansen(eds.)Proceedings of the Ninth Meeting ofthe Eucarpia Section Biometrics in Plant Breeding，The Netherlands，pp.195-204(1994))。这些模式还可以扩展到多环境实验，分析基因型和环境的相互作用(Jansen等，Theo.Appl.Genet.91：33-37(1995))。

可以理解，本发明的一或多个核酸可以作为分子标记。也可以理解，本发明的一或多个蛋白分子也可以作为分子标记。

在一个优选实施方案中，出现了多态性，并在一个作图群体(例如带有多态性等标记的一个植物群体)中进行筛选，以便作出性状的基因位点图。适当的作图群体的选择通常依赖于所用标记***的类型(Tanksley等，J.P.Gustafson和R.Appels(eds.).Plenum Press，NewYork，pp.157-173(1988))。在作图群体中必须考虑亲本的来源(适应种对引进种).在广交(适应种×引进种)时，染色体配对和重组率会受到严重干扰(抑制)，通常导致连接距离的大大降低.与狭交(引进种×引进种)相比，广交通常提供给分离群体相对高数量的多态性。

杂交体种子产生后，F₂群体是自交(自身授粉)的第一代。通常，单个F₁植株自交，产生按照孟德尔规律(1∶2∶1)分离所有基因的群体。最大的基因信息是通过使用共显性标记***(Mather，Measurement of Linkage in Heredity：Methuen and Co.(1938))，从完全分类的F2群体中获得的。为了给群体分类，在显性标记情况下，要进行子代实验(如F3、BCF2)来识别杂合子。然而，子代实验所耗费的时间和资金使该方法的使用受到限制。F₂个体的子代实验常常在图谱构建中使用，其中表型未必总是反应基因型(如疾病抗性)或者性状表达受控于QTL。子代实验(如F₃、BCF₂)的分离数据可用于图谱构建。在标记性状图谱结合的基础上，标记辅助筛选可用于交叉子代(F₂，F₃)，其中连锁基团还没有被重组完全分离开(即最大失衡)。

重组的近交系(RIL)(遗传相关品系；通常＞F₅，从F2品系向纯合子的连续自交发育而来)可以作为作图群体。通过使用RIL，可以使从显性标记而来的信息最大化，因为所有位点都是纯合或近似纯合的.在紧密连锁的情况下(即大约＜10％的重组)，在RIL群体评价的显性和共显性标记比在回交群体的评价能提供更多的每个个体的信息(Reiter.Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)89：1477-1481(1992))然而，随着标记间距离的增大(即基因座更为独立)，RIL群体的信息与共显性标记对比，显著降低。

回交群体(即由成功的品种(回复亲本)和携带前者不具有性状的品种(供体亲本)杂交而来)也可以作为作图群体。可以进行一系列的向回复亲本的回交，以恢复其多数理想性状。由此，构建一个由与回复亲本近似的个体组成的群体，但每个个体携带不同数量的供体亲本的基因组区域或嵌合体。如果回复亲本所有的基因座都是纯合的且供体和回复亲本具有相对比的多态性标记等位基因，那么回交群体可用于给显性标记作图(Reiter等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)89：1477-1481(1992))。用共显性或显性标记从回交群体获得的信息比从F2群体获得的信息要少，因为每个植株只取一个而不是两个重组配子。然而，回交群体又比RILs能提供更多的信息(低标记饱和时)，因为RIL群体中连锁基因座之间的距离增大(即大约0.15％的重组)。重组的增加有利于对紧密连锁的分辨，单对于低标记饱和的图谱构建则不太理想。

近纯合系(由许多次回交，产生一群除所研究的性状或基因组区域外在基因组成上相近似的群体)也可以作为作图群体。用NILs作图时，只有多态性基因座的一部分可以对所选区域作图。

集团分离分析(BSA)是一种发展起来的快速识别标记和目的性状之间连锁的方法(0.BSA中，从单杂交来源的分离群体采集两个集团的DNA样品。这些集团包含某种性状或基因组区域(对某种疾病的抗性或易感性)相似但不连锁区域不同(即杂合)的个体。BSA许多个体的集团样品之间，与靶区域不连锁的区域不一定不同。

一方面，本发明的一或多个核酸分子用来判定植物(优选卡诺拉、玉米、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、油菜子、大豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、花生、芝麻、棉花子、亚麻子、红花、油棕、亚麻或向日葵)中的水平(即样品中mRNA的浓度)以及部分或全部由本发明的一或多个核酸分子编码的蛋白的表达模式(集体用语，细胞或组织的“表达应答”)

此处细胞或组织的表达应答发生改变是指，与不呈现该表型的植物相比，细胞或组织的表达应答有所不同.要判断表达应答是否发生改变，要将呈现该表型的植物的细胞或组织与不呈现该表型的相似的细胞或组织样品进行对比。令人欣慰的是，不需要每次对比都对不呈现该表型的细胞或组织样品进行检测，而是某种植物的表达应答可以与以前获得的正常植物的表达应答进行对比.此处所指的生物体的表型指生物体的一或多个特征(如疾病抗性、害虫耐受、环境耐受如非生物压力耐受、雄性不育、质量改善或产量等)。基因型或表型的改变可以是瞬时的也可以是永久的。此处的组织样品指任何包含多于一个细胞的样品.优选组织样品包含具有共同特征的细胞(如衍生于根、种子、花、叶、茎或花粉等)。

本发明一方面可以进行评价，来判断某个mRNA分子是否出现.本发明的一或多个核酸分子用于检测mRNA种类的出现及数量.在足以允许核酸杂交的条件下，将这些分子与植物细胞或组织提取物孵育。检测到双链探针-mRNA杂交分子则表明有mRNA出现；形成的杂交体的数量与mRNA的数量成正比。因此，这种探针可用于对植物细胞或组织中mRNA的种类和含量进行检测。这种核酸杂交也可以在定量条件下进行(因而提供一个mRNA出现含量的数值)。另外，这种分析也可以作为一个定性分析，表明mRNA的出现或者其水平超过用户预先设定值。

有许多方法可以用来对两个或多个细胞或组织样品的表达应答进行对比。这些方法包括杂交分析，如Northern、RNA酶保护分析及原位杂交。此外，还包括PCR类型的分析。在一个优选方法中，将两个或多个样品的核酸分子与一个核酸阵列进行杂交，比较其表达应答。阵列包括大量已知的可疑序列或可疑在样品细胞或组织出现的序列。

在检测核酸方面，原位杂交较其他更常规的技术有一个优势，即可以精确判断空间上的群体(Angerer等，Dev.Biol.101：477-484(1984)；Angerer等，Dev.Biol.112：157-166(1985)；Dixon等，EMBO J.10：1317-1324(1991)).原位杂交可用于检测RNA积累的稳定状态水平(Hardin等，J.Mol.Biol.202：417-431(1989)).关于原位杂交已设计出大量的程序，均包括组织制备、杂交和洗脱条件(Meyerowitz，Plant Mol.Biol.Rep.5：242-250(1987)；Cox和Goldberg，In：PlantMolecular Biology：A Practical Approach，Shaw(ed.)，pp.1-35，IRLPress，Oxford(1988)；Raikhel等，In situ RNA hybridization in planttissues，In：Plant Molecular Biology Manual，vol.B9：1-32，KluwerAcademic Publisher，Dordrecht，Belgium(1989))。原位杂交还可以对蛋白进行组织或细胞内定位(Wilkinson，In Situ Hybridization，OxfordUniversity Press，Oxford(1992)；Langdale，In Situ Hybridization In：TheCorn Handbook，Freeling和Walbot(eds.)，pp.165-179，Springer-Verlag，New York(1994))。可以理解，本发明的一或多个分子，优选一或多个核酸分子及其片段或一或多个抗体，可以用于原位杂交来检测蛋白或mRNA水平及模式。

通过原位杂交的荧光可以对特定DNA序列进行染色体定位，可以用于基因作图、追踪杂交品系中的染色体或检测染色体中的转座、转换或缺失，当然还有其他应用。原位杂交已被用于在一些植物种类中识别染色体(Griffor等，Plant Mol.Biol.17：101-109(1991)；Gustafson等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)87：1899-1902(1990)；Mukai和Gill，Genome 34：448-452(1991)；Schwarzacher和Heslop-Harrison，Genome 34：317-323(1991)；Wang等，Jpn.J.Genet.66：313-316(1991)；Parra和Windle，Nature Genetics 5：17-21(1993))。可以理解，本发明的核酸分子可以作为探针或标记，对序列进行染色体定位。

另一个对分子的表达进行定位的方法是组织印迹。组织印迹提供了一种同时，在同一张膜上筛选许多不同植物不同发育阶段来源的组织样品的方法(Yomo和Taylor，Planta 112：35-43(1973)；Harris和Chrispeels，Plant Physiol.56：292-299(1975)；Cassab和Varner，J.Cell.Biol.105：2581-2588(1987)；Spruce等，Phytochemistry 26：2901-2903(1987)；Barres等，Neuron 5：527-544(1990)；Reid和Pont-Lezica，Tissue Printing：Tools for the Study of Anatomy，Histochemistry andGene Expression，Academic Press，New York，New York(1992)；Reid等，Plant Physiol.93：160-165(1990)；Ye等，Plant J.1：175-183(1991))。

本领域的技术人员可以参照通常的参考书，对此处讨论的已有技术或相当技术的详细描述进行了解.这些参考书包括Current Protocolsin Molecular Biology Ausubel，等，eds.John Wiley & Sons，N.Y.(1989)，and supplements through September(1998)，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Sambrook等，2nd Ed.Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，New York(1989)，Genome Analysis：A LaboratoryManual 1：Analyzing DNA，Birren等，Cold Spring Harbor Press，ColdSpring Harbor，New York(1997)；Genome Analysis：A LaboratoryManual 2：Detecting Genes，Birren等，Cold Spring Harbor Press，ColdSpring Harbor，New York(1998)；Genome Analysis：A LaboratoryManual 3：Cloning Systems，Birren等，Cold Spring Harbor Press，ColdSpring Harbor，New York(1999)；Genome Analysis：A LaboratoryManual 4：Mapping Genomes，Birren等，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，New York(1999)；Plant Molecular Biology：ALaboratory Manual，Clark，Springer-Verlag，Berlin，(1997)，Methods inPlant Molecular Biology，Maliga等，Cold Spring Harbor Preas，ColdSpring Harbor，New York(1995)。当然，在实施本发明时也可以参考这些书。可以理解，本发明的任何因子都是基本纯化的和/或具有生物活性的和/或重组的。

以上对本发明进行了大体的描述。通过参考以下提供的一些说明性的例子，将更容易理解。除非特别指明，这些例子并不用来限制本发明。

实施例1

突变的hdt2拟南芥生态型Landsberg的识别和特征

诱变的(M₂)拟南芥种子生态型Landsberg，购自Lehle Seeds(Round Rock，Texas，U.S.A.)，并经过标准的EMS突变方法获得。将种子M₂在温室条件下培养，每株植株用一个2.5英寸的罐，得到M₂植株.从M₂植株获得M₃种子，并分析其生育酚含量。

用下述方法，对从大约10,000个M₃品系获得的拟南芥种子生态型Landsberg或Col-O，进行生育酚含量的分析。将5mg从个体植株来的种子种植于用1/8”钢球产生的优质粉末中，剧烈振摇。然后，加入200微升99.5％乙醇/0.5％邻苯三酚，混合30秒，40℃孵育1h。每个样品加入50μg/ml母育酚(Matreya，Inc.Pleasant Gap，PA)，将此作为注射标准品。离心后，去除残渣，上清过滤(PVDF 0.45μm，Whatman)。然后用高效液相层析(HPLC)分析滤液中的生育酚含量，用无梯度级90％己烷/10％甲基-t-丁基酯，Zorbax硅柱(4.6×250mm，Agilent Technologies，Atlanta，GA)及荧光检测(model2790 HPLC with model 474 detector；Waters Corporation，Bedford，MA)(激发290nm，发射336nm，30nm带通和狭缝)。然后检测α，β，γ，δ-生育酚含量以及注射标准品母育酚。δ-生育酚含量较野生型升高的个体植株品系在下一代(M4)再进行分析，以确认其可遗传性。分离出δ-生育酚含量升高的5株拟南芥高δ-生育酚(hdt)突变株。

下表1显示了5个突变株δ-生育酚含量的百分比(测量干重)及其相对于野生型亲本生态型的升高。结果表明，相对于相应的野生型对照，5个突变株δ-生育酚含量均有明显升高。升高倍数为2-25倍。

表1

突变体	WT生态型	δ组合物	比WT提高
突变体	WT生态型	δ组合物	比WT提高	hdt2	Ler	48％	25倍
hdt6	Col-0	45％	20倍	hdt2	Ler	48％	25倍
hdt6	Col-0	45％	20倍	hdt9	Col-0	6％	2倍
hdt10	Ler	25％	7倍	hdt9	Col-0	6％	2倍
hdt10	Ler	25％	7倍	hdt16	Col-0	50％	17倍

实施例2

拟南芥，Landsberg erecta(Ler)高δ-生育酚突变株中突变hdt2基因的识别和序列测定

使用图谱为基础的克隆技术(USSN 09/803,736，Plant PolymorphicMarkers and Uses Thereof，filed March 12，2001)，突变hdt2基因定位于染色体3端粒标记T12C14_1563，85cM。这一区域包含大约60个预测基因。我们对该区域的分析表明，其中的一个基因，MAA21_40，与已知的辅酶Q甲基转移酶同源。基于这种同源以及MAA21_40靶向于原生质体的预测，推测该基因可能包含导致hdt2突变株高δ-生育酚表型的突变。PCR扩增野生型及hdt2突变株中MAA21_40基因座的序列，然后用标准测序方法测序。用下述的测序引物对基因座进行扩增。

引物对名称

正向引物

反向引物

引物对名称

正向引物

反向引物

引物对名称

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反向引物

引物对名称

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反向引物

引物对名称

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反向引物

引物对名称

正向引物

反向引物

引物对名称

正向引物

反向引物

每个引物对制备如下的聚合酶链式反应(PCR)混合物：

PCR混合物

5μl 10X Taq Buffer

5μl 25mM MgCl₂

4μl 10mM dNTPs

2μl 模板 DNA

0.5ul Taq Gold

5μl F/R 测序引物

28.5ul dH2O

用如下的程序进行PCR扩增：

1.94℃ 10min

2.94℃ 15sec

3.56℃ 15sec

4.72℃ 1min 30sec

5.步骤2-4重复44次

6.72℃ 10min

7.4℃保持

PCR产物用标准测序方法测序.

野生型Col-0 MMAA21_40基因座的序列见SEQ ID NO：1。野生型Ler MMAA21_40基因座的序列见SEQ ID NO：2。Columbia和Landsberg生态型野生型编码DNA和肽序列分别见SEQ ID NO：15和16。

hdt2突变株中MAA21_40基因的序列测出后，将其与野生型基因的序列进行对比。高δ-生育酚突变株hdt2的MAA21_40基因被认为含有SEQ ID NO：3所示的核酸序列.相对于SEQ ID NO：17所示的拟南芥MAA21_40的ATG，这个序列在氨基酸位点292处谷氨酸被替换为赖氨酸。

另一个高δ-生育酚突变株hdt6的MAA21_40基因被认为含有SEQ ID NO：4所示的核酸序列.相对于SEQ ID NO：18所示的野生型拟南芥MAA21_40，这个序列在氨基酸位点72处谷氨酸被替换为赖氨酸。

另一个高δ-生育酚突变株hdt9的MAA21_40基因被认为含有SEQ ID NO：5所示的核酸序列.相对于SEQ ID NO：19所示的野生型拟南芥MAA21_40，这个序列在氨基酸位点13处脯氨酸被替换为丝氨酸。

另一个高δ-生育酚突变株hdt10的MAA21_40基因被认为含有SEQ ID NO：6所示的核酸序列.相对于SEQ ID NO：20所示的野生型拟南芥MAA21_40，这个序列在氨基酸位点116处天冬氨酸被替换为天冬酰胺。

另一个高δ-生育酚突变株hdt16的MAA21_40基因被认为含有SEQ ID NO：7所示的核酸序列。相对于SEQ ID NO：21所示的野生型拟南芥MAA21_40，这个序列在氨基酸位点94处苏氨酸被替换为异亮氨酸。

表2总结了上述突变。

表2

突变体	核苷酸突变	氨基酸改变
突变体	核苷酸突变	氨基酸改变	hdt2	G1041A	E292K
hdt6	G214A	E72K	hdt2	G1041A	E292K
hdt6	G214A	E72K	hdt9	C37T	P13S
hdt10	G346A	D116N	hdt9	C37T	P13S
hdt10	G346A	D116N	hdt16	C281T	T94I

实施例3

与拟南芥tMT2基因同源的各种来源的基因的识别

用TBLASTN(Altschul等，Nucleic Acids Res.25：3389-3402(1997)；也可以参见(www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)，在数据库的植物序列中，对拟南芥tMT2蛋白序列(NCBI General Identifier Numbergi7573324)进行同源性检索；发现SEQ ID NO：8-15与拟南芥序列具有高度同源性。

用BLASTP将拟南芥tMT2蛋白序列与上述的tMT2植物蛋白序列进行对比(Altschul等，Nucleic Acids Res.25：3389-3402(1997)；也可以参见(www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)。图2显示每个序列与拟南芥序列相比的蛋白一致性计算值。还显示了用Pretty alignmentprogram(Genetics Computer Group，MadisonWI))进行的蛋白序列对比。

实施例4

在原核表达***，表达拟南芥野生型和突变tMT2基因序列以及其他农作物植物种类tMT2基因序列的构建体的制备

用计算机程序预测植物tMT2蛋白原生质靶向肽切割位点(″ChloroP″，Center for Biological Sequence Analysis，Lyngby，Denmark)。搜索结果如下：

名称	长度	分值	cTP	CS-分值	cTP-长度
名称	长度	分值	cTP	CS-分值	cTP-长度	拟南芥	338	0.585	Y	6.467	51

基于该信息，用基因工程方法，将拟南芥生态型Landsberg的tMT2蛋白的预测的原生质体靶向肽去除，以便在大肠杆菌中表达成熟的蛋白。蛋白在原核***表达，氨基端需要有蛋氨酸。为了加入5’ATG，从拟南芥生态型Columbia的野生型及高δ-生育酚突变株hdt6和hdt16以及拟南芥生态型Landsberg高δ-生育酚突变株hdt2和hdt10的cDNA扩增tMT2编码序列。

用基于Roche Molecular Biochemicals(Indianapolis，IN)的“mRNACapture Kit”的改进的生物素/链亲合素程序，从每一来源中分离PolyA⁺RNA.将一个大约1cm高的根组织去除的胚珠在CTAB缓冲液(50mMTris-HCl pH9，0.8MNaCl，0.5％CTAB，lOmM EDTA)中匀浆，然后用氯仿抽提，离心沉淀。如制造商的说明书所述，将在溶液部分的PolyA⁺RNA与生物素标记的oligo-dT杂交，固相化于链亲合素包被的PCR管，然后洗脱。按照制造商的说明书，用“RT-PCR第一链cDNA合成试剂盒”(Roche Molecular Biochemicals)在50μl体积中合成第一链cDNA。cDNA合成后，试管里的溶液部分用等体积的扩增反应液替换。混合液中组分的终浓度如下：

●1 X Buffer 2(Expand High Fidelity PCR System，Roche MolecularBiochemicals)

●200μM dNTPs

●300nM各寡核苷酸引物

#17180 正向-NcoI

#17181 反向-Sse8387I

每种引物含有进行GATEWAY^TM克隆的区域(Life TechnologicsDivision，Invitrogcn Corporation)以及常规的限制性内切酶位点

●0.4μl Expand^TM High Fidelity Polymerase(Roche MolecularBiochemicals)

另外，还进行构建，在原核表达载体直接表达欧洲油菜、稻、玉米、大豆、韭葱及陆地棉等的工程株tMT2序列。用下述的寡核苷酸引物，通过聚合酶链式反应从质粒DNA扩增带有氨基端蛋氨酸的每个tMT2成熟蛋白编码区(如上所述)。

用下述合成的寡核苷酸引物，从LIB4153-013-R1-K1-B7(SEQ IDNO：13)扩增成熟的欧洲油菜tMT2编码序列：

油菜正向 (17509)

油菜反向 (17181)

用下述合成的寡核苷酸引物，从LIB4371-041-R1-K1-F7(SEQ IDNO：12)扩增成熟的稻tMT2编码序列：

水稻正向 (17512)

水稻反向 (17513)

用下述合成的寡核苷酸引物，从LIB3587-273-Q1-K6-C5(SEQ IDNO：8)扩增成熟的玉米tMT2编码序列：

玉米正向 (17510)

玉米反向 (17511)

用下述合成的寡核苷酸引物，从LIB3049-032-Q1-E1-G8(SEQ IDNO：11)扩增成熟大豆tMT2编码序列：

大豆正向 (17516)

大豆反向 (17517)

用下述合成的寡核苷酸引物，从LIB4521-015-Q1-K1-D6(SEQ IDNO：10)扩增成熟的韭葱tMT2编码序列：

韭葱正向 (17518)

韭葱反向 (17519)

用下述合成的寡核苷酸引物，从LIB3272-054-P1-K1-C11(SEQ IDNO：9)扩增成熟的陆地棉tMT2编码序列：

陆地棉正向 (17514)

陆地棉反向 (17515)

每100μl PCR反应液中各组分的终浓度组成如下：

●0.5μl质粒DNA用1∶20水稀释

●1 X Buffer 2(Expand High Fidelity PCR System，Roche MolecularBiochemicals)

●200μM dNTPs

●300nM 各寡核苷酸引物

●0.8μl Expand High Fidelity Polymerase(Roche MolecularBiochemicals)

用下述的“touchdown”循环程序，将每一来源的tMT2基因PCR扩增30个循环。每次反应，都将PCR反应混合液在95℃预孵育5分钟，以使聚合酶掺入。然后扩增15个循环，每个循环由94℃30sec变性，60℃30sec退火以及72℃1.5min延伸组成。前15个循环中，每个循环退火温度较前降低1℃。接着再进行15个循环，每个循环由94℃30sec，45℃30sec以及72℃1.5min组成，接着在72℃再保持7分钟。每个种类的扩增产物在0.8％的凝胶电泳上均可以看到合适大小的清晰的条带。

然后用GATEWAY克隆***(Life Technologies，A Division ofInvitrogen Corp.Rockville，MD)，将PCR产物亚克隆入pDONR^TM201(Life Technologies，A Divisionof Invitrogen Corp.Rockville，MD)。

为了验证PCR扩增未引入错误，用标准的测序技术对双链DNA测序。然后，用GATEWAY克隆***(Life Technologies，A DivisionofInvitrogen Corp.Rockville，MD)，将tMT2序列置于原核表达载体pET-DEST42(Life Technologies，A Divisionof Invitrogen Corp.Rockville，MD)中T7启动子之后。

以下序列表示野生型和突变基因的成熟氨基酸序列，在加入氨基端蛋氨酸后，可以在大肠杆菌表达。黑体和斜体氨基酸残基表示每个突变中的替换位点。

大肠杆菌中表达的成熟野生型拟南芥tMT2蛋白

大肠杆菌中表达的成熟突变体hdt2拟南芥tmt2蛋白

大肠杆菌中表达的成熟突变体hdt6拟南芥tmt2蛋白

大肠杆菌中表达的成熟突变体hdt10拟南芥tmt2蛋白

大肠杆菌中表达的成熟突变体hdt16拟南芥tmt2蛋白

大肠杆菌中表达的成熟欧洲油菜tMT2

大肠杆菌中表达的成熟水稻tMT2

大肠杆菌中表达的成熟玉米tMT2

大肠杆菌中表达的成熟大豆tMT2

大肠杆菌中表达的成熟韭葱tMT2

大肠杆菌中表达的成熟陆地棉tMT2

实施例5

2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶的活性分析在大肠杆菌成熟克隆基因表达的基础上进行，来验证编码蛋白的功能。

过夜培养大肠杆菌BL21(DE3)，其中含有实施例4所述原核表达载体。然后将其接种入100mL的LB培养基中，同时加入适当的抗生素。接种后的光密度为OD₆₀₀＝0.1，然后在25℃培养，至终密度为OD₆₀₀＝0.6。接着加入终浓度为0.4mM的IPTG来诱导表达，将细胞在25℃孵育3小时直到收获。

将细胞冰浴5分钟，然后5000×g离心10分钟。细胞沉淀在完全去除上清后，置于-80℃过夜。

细胞沉淀在冰上融化，重悬于4mL提取缓冲液XB(10mMHEPES-KOH pH7.8，5mM DTT，1mM AEBSF，0.1mM抑肽酶，1mg/mlleupeptin)。用French press以20,000psi两次通过压力细胞来破坏细胞。加入终浓度为1％的Triton X-100，然后冰浴1小时。接着将细胞匀浆在5000×g，4℃离心10分钟。

细胞提取的当天进行酶分析。分析在10mL的聚丙烯管中进行，终体积为1mL。制备如下组成的反应混合液，加入双蒸水至终体积为950μl。

反应混合液：

50mM Tris-HCl pH8.0

5mM二硫苏糖醇(DTT，100mM水储存液)

100μM 2-甲基叶绿基质体醌醇(404g/mol)

0.5％Tween 80(溶剂蒸发完之后，直接加入叶绿基质体醌醇)

1.7μM ¹⁴C-SAM(58pCi/pmole)

2-甲基叶绿基质体醌醇和2-甲基-香叶基香叶基质体醌醇用如下方法合成：

新鲜BF₃-醚合物(0.3ml)逐滴加入含400mg甲基醌醇、1000mg异植醇的10ml干二噁烷溶液中，混合液在暗处N₂下搅拌，然后50℃保持2小时。反应混合液用冰水解，用3×15ml石油醚/二***(1∶1)，提取物用水洗几次，以去除未用的甲基醌，然后用MgSO₄干燥。接着，用旋转蒸发将溶剂蒸发，产生含有甲基质体醌醇混合物的象原油反应产物一样的油。在这个阶段，反应混合液通过急骤层析及随后的HPLC纯化，被分离成各种甲基叶绿基质体醌醇，或者氧化产生更稳定的甲基质体醌醇。这一步通过加入少量的Ag₂O(200mg)于溶解于二***的反应产物中作用1小时完成。过滤除去Ag₂O，即可得甲基叶绿基质体醌醇混合物。

上述甲基叶绿基质体醌醇的合成得到6个同分异构体，即2-甲基-3-叶绿基质体醌醇、2-甲基-5-叶绿基质体醌醇以及2-甲基-6-叶绿基质体醌醇的2’-顺式和2’-反式同分异构体。将甲基叶绿基质体醌醇混合物在TLC(PSC-Fertigplatten Kieselgel 60 F_254+366，Merck，Darmstadt)上分离成两条带，所用溶剂***为石油醚∶二***(7∶3)，从而将6种同分异构体纯化。同分异构体的最终纯化通过半制备型HPLC完成。

HPLC在由HP G1329A Auto Sampler，HP G1311A QuaternaryPump，HP G1315A Diode Array Detector，HP G1321A FluorescenceDetector组成的HP1100系列HPLC***上进行。激发在290nm进行，发射在336nm检测。相应地，吸收用设置为210和254nm的二极阵列检测仪检测。流速控制在5ml/min。质体醌醇用90％己烷∶甲基-叔丁基-醚(90∶10)，Agilent Zorbax Silica 9.4×250mm柱，无梯度HPLC进行分离。

2-甲基-香叶基香叶基质体醌醇的合成如2-甲基-6-叶绿基质体醌醇，只是将其中的异植醇替换为香叶基芳樟醇。纯化如前所述，通过急骤层析及其随后的重复TLC进行。

为了进行甲基转移酶活性分析，将50μL细胞提取液加入分析混合液中，充分混合。然后加入¹⁴C-SAM(ICN)，置于暗处30℃孵育1小时。然后转入配有Teflon帽的15mL螺帽玻璃管。然后将反应混合物用含有1mg/mL丁化羟基甲苯(BHT)的4mL 2∶1 CHCl₃/MeOH提取，涡漩振荡30秒混合。接着离心5分钟分层，将有机相(底部)转入一个新的玻璃管。在氮气流存在下，37℃15分钟，使其中的CHCl₃挥发。残留物进一步溶于含1％焦焙酚的200μL EtOH中，涡漩振荡30秒混合。重悬液过滤入一个带盖的棕色LC小瓶中，然后用正常相柱(Agilent 4.6×250 mm Zorbax Sil，Agilent Technologies)HPLC分析。洗脱条件为无梯度洗脱，己烷中含10％甲基-叔-丁基-醚(MTBE)，流速1.5ml/分，12分钟。每次注射前，用75％MTBE的己烷清洗3分钟，10％MTBE的己烷再平衡3分钟。

已知含有tMT2活性的豌豆叶绿体浓缩液，通过Arango和Heise，Bioche J.336：531-533(1998)所述方法制备，作为阳性对照。

酶分析的结果见图4-8。一系列层析谱表明，用Anabaena(已知具有tMT2活性)的MT1及拟南芥(图5)的tMT2转化的细胞有与2，3-二甲基-5-叶绿基质体醌醇标准品共迁移的甲基化产物的积累。拟南芥(hdt2)的突变tMT2基因积累的甲基化产物(图6)明显少于野生型tMT2基因(图5)，表明其tMT2活性降低。通过对比发现，底物受到Anabaena的MT1转化的细胞抑制的阴性对照没有一个明显的对应于甲基化产物的峰(图7)。另外，作为阳性对照的豌豆叶绿体有相应于甲基化产物的峰，其中的甲基化产物来自于携带有MT1和tMT2表达构建体的大肠杆菌的提取物(图8)。

农作物tMT2直向同源物的表达和酶分析

来自于芸苔(pMON67223)、玉米(pMON67234)、韭葱(pMON67235)、大豆(pMON67245)、稻(pMON67232)和棉花(pMON67244)以及野生型拟南芥(pMON67191)、hdt2突变株(pMON67207)和hdt10突变株(pMON67243)的tMT2直向同源物在大肠杆菌中表达为成熟蛋白(实施例4)。鱼腥藻hdt2直向同源物表达自pMON67190。鱼腥藻MT1(pMON67174)及空载体(pMON67179)分别作为阳性和阴性对照。细胞生长、收获、破坏以及酶分析按照实施例5进行。HPLC-纯化的2-甲基-6-叶绿基质体醌醇作为甲基基团的受体。

表3：重组表达的tMT2基因的2-甲基-6-叶绿基质体醌醇活性

pMON#	基因	酶活(μU/毫克蛋白)
pMON#	基因	酶活(μU/毫克蛋白)	67174	Anabaena MT1	6.5
67179	质粒对照	＜1	67174	Anabaena MT1	6.5
67179	质粒对照	＜1	67190	Anabaena tMT2直向同源物	＜1
67191	拟南芥tMT2	10	67190	Anabaena tMT2直向同源物	＜1
67191	拟南芥tMT2	10	67207	拟南芥hdt2突变体	1.1
67232	稻tMT2直向同源物	4	67207	拟南芥hdt2突变体	1.1
67232	稻tMT2直向同源物	4	67233	芸苔tMT2直向同源物	2
67234	玉米tMT2直向同源物	＜1	67233	芸苔tMT2直向同源物	2
67234	玉米tMT2直向同源物	＜1	67235	韭葱tMT2直向同源物	＜1
67243	拟南芥hdt10突变体	＜1	67235	韭葱tMT2直向同源物	＜1
67243	拟南芥hdt10突变体	＜1	67244	棉花tMT2直向同源物	23.4
67245	大豆tMT2直向同源物	16.8	67244	棉花tMT2直向同源物	23.4

用HPLC-纯化的2-甲基-6-叶绿基质体醌醇、2-甲基-5-叶绿基质体醌醇或2-甲基-3-叶绿基质体醌醇作为甲基基团的受体，按照实施例5的方法，对拟南芥tMT2、稻tMT2、棉花tMT2和大豆tMT2的成熟蛋白以及表达鱼腥藻MT1的大肠杆菌提取物进行分析。分析表明tMT2直向同源物比细菌MT1的底物范围宽(图24)。

用2-甲基-6-香叶基质体醌醇、δ-生育酚、γ-生育酚、β-生育酚作为甲基基团的受体，对表达拟南芥、稻、棉花和大豆tMT2成熟蛋白以及鱼腥藻MT1的无细胞大肠杆菌提取物进行甲基转移酶活性分析。所有四个底物，酶活性均在检测限以下。

实施例6

野生型拟南芥tMT2基因在拟南芥中的转化和表达

tMT2的编码区从EST克隆Lib 3177-021-P1-K1-A3(SEQ IDNO：1)扩增而来，所用引物如下：

扩增反应液组成如下：1.0μl的EST模板、2.5μl的20×dNTPs，寡核苷酸引物各2.5μl，5μl的10×PCR缓冲液，35.75μl的H2O以及0.75μl的Expand High Fidelity DNA Polymerase。PCR扩增条件如下：

●1个循环94℃2min，10个循环的94℃-15sec；55℃-30sec；72℃-1.5min，

●15个循环94℃-15sec；55℃-30sec；72℃-1.5min，每个循环72℃延伸增加5sec，

●1个循环72℃7min，

扩增后，样品用Qiagen PCR纯化柱(Qiagen Company，Valencia，California)进行纯化，悬于30μl水中。然后用标准方法进行琼脂糖凝胶电泳分离和检测。用GATEWAY克隆***(Life Technologies，ADivisionof Invitrogen Corp.Rockville，MD)，将PCR产物亚克隆入pDONR^TM201(Life Technologies，A Divisionof Invitrogen Corp.Rockville，MD)，将由此而得质粒命名为pMON67204，并进一步用标准DNA测序方法证实tMT2基因。

然后用GATEWAY Tecnology试剂盒(Life Technologies，ADivisionof Invitrogen Corp.Rockville，MD)，按照制造商的说明，将野生型拟南芥tMT2序列从pMON67204供体载体克隆到目的载体pMON671510。目的载体是一个从pCGN3223(如U.S.Patent No.5,639,790所述)衍生而来的含有napin盒的GATEWAY兼容双元载体。所得的表达载体命名为pMON67205(图9)，用于驱动tMT2序列在种子的表达。

上述的植物双元构建体用于拟南芥转化，指导tMT2基因在胚胎的表达。用Holsters等，Mol.Gen.Genet.163：181-187(1978)的方法，将双元载体构建体转化入ABI株农杆菌细胞。如Valverkens等，Proc.Nat.Acad.Sci.85：5536-5540(1988)，Bent等，Science 265：1856-1860(1994)，和Bechtold等，C.R.Acad.Sci.Life Sciences 316：1194-1199(1993).所述通过农杆菌介导的拟南芥野生型、δ-生育酚突变株hdt2，hdt10和hdt16的转化，获得转基因拟南芥植物。将转化的T1种子直接喷洒入土壤中，4℃无光情况下，春化4天。然后，将种子转移到21℃，有光处16小时。并在播种后7天和14天，喷洒1∶200稀释的Finale(AgrEvo Environmental Health，Montvale，NJ)。转化植株发育成熟后，所得的T2种子用于分析生育酚含量。表4和5所得的生育酚的数据证实，在高δ-生育酚突变株和野生型拟南芥品系，δ-生育酚的降低有利于γ和α-生育酚的升高。表4和5包含用Savidge等，Plant Phys.129：321-332(2000)，集胞藻sp PCC6803和拟南芥来源的尿黑酸叶绿基转移酶基因的分离和特征中所述方法(稍做变动)，进行HPLC分析的结果。

表4详细列出了T2种子分析的结果

表4

mp：表示“代谢特征(profiling)”

表5描述了含有pMON67205的hdt2突变品系的T3种子数据分析的结果

表5

实施例7

制备大豆和拟南芥表达的双基因构建体的方法

构建含有启动子，可以使tMT2基因单独或与GMT基因联合在大豆种子特异表达的载体。另外，tMT2基因克隆于一个含有拟南芥的HPT基因的双元载体中，napin启动子之后。在另一个双基因构建体中，则是与Synechocystis的异戊烯转移酶(PT)基因(slr1736)一起(分别如图14和15所示的pMON67224和pMON67223)。

大豆构建体

将野生型拟南芥tMT2基因克隆于载体pCGN3892的7S启动子和豌豆SSU Rubisco 3’UTR之间，得到pMON67220(图10)。然后用NotI消化该克隆，所得表达盒亚克隆于植物双表达载体pCGN11121，得到pMON67226(图11)。将此载体转化大豆。另外，将pMON36503载体7S启动子和豌豆SSU Rubisco 3’UTR之间的拟南芥GMT基因切下来，克隆入pMON67220，得到pMON67225(图12)。进而，用NotI将pMON67225中7S启动子控制之下的两个基因切下来，克隆入pCGN11121的NotI位点，得到pMON67227(图13)。然后将此双基因构建体，按照WO 00/61771 A3的99-100页的方法，转入大豆，培育成熟，所得种子用于分析总生育酚含量和组成。

表3和5所示的生育酚数据表明，在含有tMT2表达构建体的大豆种子中，β-生育酚含量的降低有利于γ和α-生育酚，δ-生育酚更是如此。表4和6表明，在含有tMT2和γ-甲基转移酶双基因表达构建体的大豆种子中，生育酚几乎全部(R0代98％)转换为α-生育酚。

下面的表6描述了含有pMON67226大豆的各种大豆品系分析的结果。表6和9包含用Savidge等，Plant Phys.129：321-332(2000)，集胞藻sp PCC6803和拟南芥来源的尿黑酸叶绿基转移酶基因的分离和特征中所述方法(稍做变动)，进行HPLC分析的结果。

表6

下面的表7给出了用pMON67227转化的各种大豆品系的分析结果。表7

下面的表8给出了用pMON67226转化的单一大豆种子的分析结果。表8

下面的表9给出了用pMON67227转化的单一大豆种子的分析结果。

表9

表6至9中％β之后的^*表示β-生育酚与未知化合物共迁移(comigrates)，使得它难以定量。

拟南芥双构建体

用限制酶NotI(平端)/PstI，将tMT2基因从载体pMON67204上切割下来，克隆入用SalI(平端)/PstI消化的napin穿梭载体pCGN3223中。然后用NotI将含有tMT2基因的napin盒从载体上切割下来，并用Klenow酶dNTPs将其末端补平。进而将所得片段***载体pMON16602(用PmeI消化)和pCGN10822(用SnaBI消化)中，分别得到pMON67224和pMON67223(图14和15)。载体pMON16602和pCGN10822在PCT申请WO 0063391中有描述。

这种双构建体在napin种子特异启动子控制下，表达来源于拟南芥(HPT)或集胞藻(slr1736)的tMT2基因和异戊烯转移酶。这种构建体用于转化拟南芥，转化植株发育成熟，详见实施例6。所得的T2种子，用实施例1所述分析方法分析总的生育酚含量和组成。

序列表

<110>Lincoln，Kim

Valentin，Henry

Van Eenennaam，Alison

Stein，Joshua

Norris，Susan

<120>芳族甲基转移酶及其应用

<130>MONS：043CN

<150>60/330,563

<151>2001-10-25

<160>108

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>1184

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>1

atggcctctt tgatgctcaa cggggccatt accttcccca aaggtttagg ttcccctggt 60

tccaatttgc atgccagatc gattcctcgg ccgaccttac tctcagttac ccgaacctcc 120

acacctagac tctcggtggc tactagatgc agcagcagca gcgtgtcgtc ttcccggcca 180

tcggcgcaac ctaggttcat tcagcacaag aaggaggctt actggttcta caggttctta 240

tccatcgtat acgaccatgt catcaatcct gggcattgga ccgaggatat gagagacgac 300

gctcttgagc cagcggatct cagccatccg gacatgcgag tggtcgatgt cggcggcgga 360

actggtttca ctactctggg catagtcaag acagtgaagg ccaagaatgt gaccattctg 420

gaccagtcgc cacatcagct ggccaaagca aagcaaaagg agccgttgaa agaatgcaag 480

atcgtcgagg gagatgctga ggatcttcct tttccaaccg attatgctga cagatacgtt 540

tctgctggaa ggtatccttt tcttcttctt cttcttcttc ttcttcttct tcttataatc 600

gtcttctttc cggtgggttt gattgtgtgt ctcatcatca cacagcattg agtactggcc 660

ggacccgcag aggggaataa gggaagcgta cagggttctc aagatcggtg gcaaagcgtg 720

tctcatcggc cctgtctacc caaccttctg gctctctcgc ttcttttctg atgtctggat 780

gctcttcccc aaggaggaag agtacattga gtggttcaag aatgccggtt tcaaggacgt 840

tcagctcaag aggattggcc ccaagtggta ccgtggtgtt cgcaggcacg gccttatcat 900

gggatgttct gtcactggtg ttaaacctgc ctccggtgac tctcctctcc aggtctttta 960

cctcccactt cacctttttt actttcttct ctctttgata cactaaactt atcactcaaa 1020

tgctgcagct tggtccaaag gaagaggacg tagagaagcc tgtcaacaac cccttctcct 1080

tcttgggacg cttcctcctg ggaactctag cagctgcctg gtttgtgtta atccctatct 1140

acatgtggat caaggatcag atcgttccca aagaccaacc catc 1184

<210>2

<211>1181

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>2

atggcctctt tgatgctcaa cggggccatt accttcccca aaggtttagg ttcccctggt 60

tccaatttgc atgccagatc gattcctcgg ccgaccttac tctcagttac ccgaacctcc 120

acacctagac tctcggtggc tactagatgc agcagcagca gcgtgtcgtc ttcccggcca 180

tcggcgcaac ctaggttcat tcagcacaag aaggaggctt actggttcta caggttctta 240

tccatcgtat acgaccatgt catcaatcct gggcattgga ccgaggatat gagagacgac 300

gctcttgagc cagcggatct cagccatccg gacatgcgag tggtcgatgt cggcggcgga 360

actggtttca ctactctggg catagtcaag acagtgaagg ccaagaatgt gaccattctg 420

gaccagtcgc cacatcagct ggccaaagca aagcaaaagg agccgttgaa agaatgcaag 480

atcgtcgagg gagatgctga ggatcttcct tttccaaccg attatgctga cagatacgtt 540

tctgctggaa ggtatccttt tcttcttctt cttcttcttc ttcttcttct tataatcgtc 600

ttctttccgg tgggtttgat tgtgtgtctc atcatcacac agcattgagt actggccgga 660

cccgcagagg ggaataaggg aagcgtacag ggttctcaag atcggtggca aagcgtgtct 720

catcggccct gtctacccaa ccttctggct ctctcgcttc ttttctgatg tctggatgct 780

cttccccaag gaggaagagt acattgagtg gttcaagaat gccggtttca aggacgttca 840

gctcaagagg attggcccca agtggtaccg tggtgttcgc aggcacggcc ttatcatggg 900

atgttctgtc actggtgtta aacctgcctc cggtgactct cctctccagg tcttttacct 960

cccacttcac cttttttact ttcttctctc tttgatacac taaacttatc actcaaatgc 1020

tgcagcttgg tccaaaggaa gaggacgtag agaagcctgt caacaacccc ttctccttct 1080

tgggacgctt cctcctggga actctagcag ctgcctggtt tgtgttaatc cctatctaca 1140

tgtggatcaa ggatcagatc gttcccaaag accaacccat c 1181

<210>3

<211>1181

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>3

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tccaatttgc atgccagatc gattcctcgg ccgaccttac tctcagttac ccgaacctcc 120

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tccatcgtat acgaccatgt catcaatcct gggcattgga ccgaggatat gagagacgac 300

gctcttgagc cagcggatct cagccatccg gacatgcgag tggtcgatgt cggcggcgga 360

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gaccagtcgc cacatcagct ggccaaagca aagcaaaagg agccgttgaa agaatgcaag 480

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tctgctggaa ggtatccttt tcttcttctt cttcttcttc ttcttcttct tataatcgtc 600

ttctttccgg tgggtttgat tgtgtgtctc atcatcacac agcattgagt actggccgga 660

cccgcagagg ggaataaggg aagcgtacag ggttctcaag atcggtggca aagcgtgtct 720

catcggccct gtctacccaa ccttctggct ctctcgcttc ttttctgatg tctggatgct 780

cttccccaag gaggaagagt acattgagtg gttcaagaat gccggtttca aggacgttca 840

gctcaagagg attggcccca agtggtaccg tggtgttcgc aggcacggcc ttatcatggg 900

atgttctgtc actggtgtta aacctgcctc cggtgactct cctctccagg tcttttacct 960

cccacttcac cttttttact ttcttctctc tttgatacac taaacttatc actcaaatgc 1020

tgcagcttgg tccaaaggaa aaggacgtag agaagcctgt caacaacccc ttctccttct 1080

tgggacgctt cctcctggga actctagcag ctgcctggtt tgtgttaatc cctatctaca 1140

tgtggatcaa ggatcagatc gttcccaaag accaacccat c 1181

<210>4

<211>1184

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>4

atggcctctt tgatgctcaa cggggccatt accttcccca aaggtttagg ttcccctggt 60

tccaatttgc atgccagatc gattcctcgg ccgaccttac tctcagttac ccgaacctcc 120

acacctagac tctcggtggc tactagatgc agcagcagca gcgtgtcgtc ttcccggcca 180

tcggcgcaac ctaggttcat tcagcacaag aagaaggctt actggttcta caggttctta 240

tccatcgtat acgaccatgt catcaatcct gggcattgga ccgaggatat gagagacgac 300

gctcttgagc cagcggatct cagccatccg gacatgcgag tggtcgatgt cggcggcgga 360

actggtttca ctactctggg catagtcaag acagtgaagg ccaagaatgt gaccattctg 420

gaccagtcgc cacatcagct ggccaaagca aagcaaaagg agccgttgaa agaatgcaag 480

atcgtcgagg gagatgctga ggatcttcct tttccaaccg attatgctga cagatacgtt 540

tctgctggaa ggtatccttt tcttcttctt cttcttcttc ttcttcttct tcttataatc 600

gtcttctttc cggtgggttt gattgtgtgt ctcatcatca cacagcattg agtactggcc 660

ggacccgcag aggggaataa gggaagcgta cagggttctc aagatcggtg gcaaagcgtg 720

tctcatcggc cctgtctacc caaccttctg gctctctcgc ttcttttctg atgtctggat 780

gctcttcccc aaggaggaag agtacattga gtggttcaag aatgccggtt tcaaggacgt 840

tcagctcaag aggattggcc ccaagtggta ccgtggtgtt cgcaggcacg gccttatcat 900

gggatgttct gtcactggtg ttaaacctgc ctccggtgac tctcctctcc aggtctttta 960

cctcccactt cacctttttt actttcttct ctctttgata cactaaactt atcactcaaa 1020

tgctgcagct tggtccaaag gaagaggacg tagagaagcc tgtcaacaac cccttctcct 1080

tcttgggacg cttcctcctg ggaactctag cagctgcctg gtttgtgtta atccctatct 1140

acatgtggat caaggatcag atcgttccca aagaccaacc catc 1184

<210>5

<211>1184

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>5

atggcctctt tgatgctcaa cggggccatt accttctcca aaggtttagg ttcccctggt 60

tccaatttgc atgccagatc gattcctcgg ccgaccttac tctcagttac ccgaacctcc 120

acacctagac tctcggtggc tactagatgc agcagcagca gcgtgtcgtc ttcccggcca 180

tcggcgcaac ctaggttcat tcagcacaag aaggaggctt actggttcta caggt tctta 240

tccatcgtat acgaccatgt catcaatcct gggcattgga ccgaggatat gagagacgac 300

gctcttgagc cagcggatct cagccatccg gacatgcgag tggtcgatgt cggcggcgga 360

actggtttca ctactctggg catagtcaag acagtgaagg ccaagaatgt gaccattctg 420

gaccagtcgc cacatcagct ggccaaagca aagcaaaagg agccgttgaa agaatgcaag 480

atcgtcgagg gagatgctga ggatcttcct tttccaaccg attatgctga cagatacgtt 540

tctgctggaa ggtatccttt tcttcttctt cttcttcttc ttcttcttct tcttataatc 600

gtcttctttc cggtgggttt gattgtgtgt ctcatcatca cacagcattg agtactggcc 660

ggacccgcag aggggaataa gggaagcgta cagggttctc aagatcggtg gcaaagcgtg 720

tctcatcggc cctgtctacc caaccttctg gctctctcgc ttcttttctg atgtctggat 780

gctcttcccc aaggaggaag agtacattga gtggttcaag aatgccggtt tcaaggacgt 840

tcagctcaag aggattggcc ccaagtggta ccgtggtgtt cgcaggcacg gccttatcat 900

gggatgttct gtcactggtg ttaaacctgc ctccggtgac tctcctctcc aggtctttta 960

cctcccactt cacctttttt actttcttct ctctttgata cactaaactt atcactcaaa 1020

tgctgcagct tggtccaaag gaagaggacg tagagaagcc tgtcaacaac cccttctcct 1080

tcttgggacg cttcctcctg ggaactctag cagctgcctg gtttgtgtta atccctatct 1140

acatgtggat caaggatcag atcgttccca aagaccaacc catc 1184

<210>6

<211>1181

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>6

atggcctctt tgatgctcaa cggggccatt accttcccca aaggtttagg ttcccctggt 60

tccaatttgc atgccagatc gattcctcgg ccgaccttac tctcagttac ccgaacctcc 120

acacctagac tctcggtggc tactagatgc agcagcagca gcgtgtcgtc ttcccggcca 180

tcggcgcaac ctaggttcat tcagcacaag aaggaggctt actggttcta caggttctta 240

tccatcgtat acgaccatgt catcaatcct gggcattgga ccgaggatat gagagacgac 300

gctcttgagc cagcggatct cagccatccg gacatgcgag tggtcaatgt cggcggcgga 360

actggtttca ctactctggg catagtcaag acagtgaagg ccaagaatgt gaccattctg 420

gaccagtcgc cacatcagct ggccaaagca aagcaaaagg agccgttgaa agaatgcaag 480

atcgtcgagg gagatgctga ggatcttcct tttccaaccg attatgctga cagatacgtt 540

tctgctggaa ggtatccttt tcttcttctt cttcttcttc ttcttcttct tataatcgtc 600

ttctttccgg tgggtttgat tgtgtgtctc atcatcacac agcattgagt actggccgga 660

cccgcagagg ggaataaggg aagcgtacag ggttctcaag atcggtggca aagcgtgtct 720

catcggccct gtctacccaa ccttctggct ctctcgcttc ttttctgatg tctggatgct 780

cttccccaag gaggaagagt acattgagtg gttcaagaat gccggtttca aggacgttca 840

gctcaagagg attggcccca agtggtaccg tggtgttcgc aggcacggcc ttatcatggg 900

atgttctgtc actggtgtta aacctgcctc cggtgactct cctctccagg tcttttacct 960

cccacttcac cttttttact ttcttctctc tttgatacac taaacttatc actcaaatgc 1020

tgcagcttgg tccaaaggaa gaggacgtag agaagcctgt caacaacccc ttctccttct 1080

tgggacgctt cctcctggga actctagcag ctgcctggtt tgtgttaatc cctatctaca 1140

tgtggatcaa ggatcagatc gttcccaaag accaacccat c 1181

<210>7

<211>1184

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>7

atggcctctt tgatgctcaa cggggccatt accttcccca aaggtttagg ttcccctggt 60

tccaatttgc atgccagatc gattcctcgg ccgaccttac tctcagttac ccgaacctcc 120

acacctagac tctcggtggc tactagatgc agcagcagca gcgtgtcgtc ttcccggcca 180

tcggcgcaac ctaggttcat tcagcacaag aaggaggctt actggttcta caggttctta 240

tccatcgtat acgaccatgt catcaatcct gggcattgga tcgaggatat gagagacgac 300

gctcttgagc cagcggatct cagccatccg gacatgcgag tggtcgatgt cggcggcgga 360

actggtttca ctactctggg catagtcaag acagtgaagg ccaagaatgt gaccattctg 420

gaccagtcgc cacatcagct ggccaaagca aagcaaaagg agccgttgaa agaatgcaag 480

atcgtcgagg gagatgctga ggatcttcct tttccaaccg attatgctga cagatacgtt 540

tctgctggaa ggtatccttt tcttcttctt cttcttcttc ttcttcttct tcttataatc 600

gtcttctttc cggtgggttt gattgtgtgt ctcatcatca cacagcattg agtactggcc 660

ggacccgcag aggggaataa gggaagcgta cagggttctc aagatcggtg gcaaagcgtg 720

tctcatcggc cctgtctacc caaccttctg gctctctcgc ttcttttctg atgtctggat 780

gctcttcccc aaggaggaag agtacattga gtggttcaag aatgccggtt tcaaggacgt 840

tcagctcaag aggattggcc ccaagtggta ccgtggtgtt cgcaggcacg gccttatcat 900

gggatgttct gtcactggtg ttaaacctgc ctccggtgac tctcctctcc aggtctttta 960

cctcccactt cacctttttt actttcttct ctctttgata cactaaactt atcactcaaa 1020

tgctgcagct tggtccaaag gaagaggacg tagagaagcc tgtcaacaac cccttctcct 1080

tcttgggacg cttcctcctg ggaactctag cagctgcctg gtttgtgtta atccctatct 1140

acatgtggat caaggatcag atcgttccca aagaccaacc catc 1184

<210>8

<211>1059

<212>DNA

<213>玉米

<400>

atggcgatgg cctccaccta cgcgccgggc ggaggcgcgc gggcgctcgc gcagggtaga 60

tgcagggtcc gcggtcccgc ggggctgggc ttcctcggcc cctccaaggc cgccggcctc 120

ccccgccccc tcgccctcgc cctcgccagg cggatgagca gccccgtcgc ggtgggcgcc 180

aggctgcgat gcgcggcgtc gtcgtccccc gcggcggcgc ggcccgccac ggcgccgcgc 240

ttcatccagc acaagaagga ggccttctgg ttctaccgct tcctctccat cgtgtacgac 300

cacgtcatca atccgggcca ctggaccgag gacatgcgcg acgacgcgct ggaacctgcc 360

gacctcttca gccgccacct cacggtcgtc gacgtcggcg gcggcacggg gttcaccacg 420

ctcggcatcg tcaagcacgt caacccggag aacgtcacgc tgctcgacca gtccccgcac 480

cagctcgaca aggcccggca gaaggaggcc ctcaaggggg tcaccatcat ggagggcgac 540

gccgaggacc tcccgttccc caccgactcc ttcgaccgat acatctccgc cggcagcatc 600

gagtactggc cagacccaca gcgggggatc aaggaagcct acagggtcct gagatttggt 660

gggctagctt gtgtgatcgg cccggtctac ccgaccttct ggctgtcccg cttcttcgcc 720

gacatgtgga tgctcttccc caaggaggaa gagtacatcg agtggttcaa gaaggctggg 780

tttagggatg tcaagctgaa gaggattgga ccgaagtggt accgcggtgt ccgaaggcat 840

ggcctcatca tgggctgctc cgtcacaggc gtcaagagag agcgcggtga ctctcccttg 900

gagcttggtc ccaaggcgga ggatgtcagc aagccagtga atccgatcac cttcctcttc 960

cgcttcctcg taggaacgat atgtgctgcc tactatgttc tggtgcctat ttacatgtgg 1020

ataaaggacc agatcgtgcc aaaaggcatg ccaatctga 1059

<210>9

<211>1026

<212>DNA

<213>陆地棉

<400>9

atggcttctt ccatgctgaa tggagctgaa accttcactc tcatccgagg tgttacccca 60

aaaagtattg gttttttggg gtcaggttta catgggaaac agttttccag tgcgggttta 120

atctacagtc cgaagatgtc cagggtagga acgacgatag ccccgaggtg cagcttatca 180

gcgtcaaggc cagcttcaca accaagattc atacaacaca aaaaagaggc cttttggttc 240

tacaggttcc tctcaattgt ctatgaccat gtcataaacc caggtcactg gactgaagac 300

atgagggatg atgcacttga gccggctgat ctcaatgaca gggacatggt agttgtagat 360

gttggtggtg gaactggttt cactactttg ggtattgttc agcatgtgga tgctaagaat 420

gttacaatcc ttgaccaatc tcctcaccag cttgcaaagg ctaaacagaa ggagcctctc 480

aaggaatgca acataattga aggtgatgca gaagatcttc cttttcctac tgattatgcc 540

gatagatatg tgtctgctgg aagcatagag tactggccag acccacaacg ggggatcaag 600

gaagcataca gggtgttgaa acaaggagga aaagcttgct taattggtcc tgtgtaccct 660

acattttggt tgtctcgttt ctttgcagac gtttggatgc ttttccctaa ggaggaagaa 720

tatatagagt ggtttgaaaa ggctggattt aaggatgtcc aactcaaaag gattggccct 780

aaatggtatc gtggagttcg ccgacatggt ttgatcatgg ggtgctctgt aaccggtgtt 840

aaacccgcat ctggggactc tcctttgcag cttggaccta aggcagagga tgtatcaaag 900

ccggtaaatc cgtttgtatt tctcttacgc ttcatgttgg gtgccactgc agcagcatat 960

tatgtactgg ttcctatcta catgtggctc aaagatcaaa ttgtaccaga gggtcaacca 1020

atctaa 1026

<210>10

<211>1035

<212>DNA

<213>韭葱

<400>10

atggcttcct ccatgctcag cggagcagaa agcctctcaa tgctccgaat ccaccaccaa 60

cccaaactca ccttctcgag cccatccctc cattccaaac ccacaaacct caaaatggat 120

ctcatccctt tcgccaccaa gcatcaaaaa acgaaaaaag cttcgatctt tacatgcagc 180

gcgtcctcat catcccgacc tgcttctcag ccgaggttca tccagcacaa gcaggaggcg 240

ttctggttct acaggttcct gtcgatagtg tacgaccatg tgataaaccc agggcactgg 300

accgaggaca tgagagacga tgcgttggag ccagccgagc tgtacgattc caggatgaag 360

gtggtggacg taggaggagg aactgggttc accaccttgg ggattataaa gcacatcgac 420

cctaaaaacg ttacgattct ggatcagtct ccgcatcagc ttgagaaggc taggcagaag 480

gaggctttga aggagtgtac tattgttgaa ggtgatgctg aggatctccc ttttcctact 540

gatactttcg atcgatatgt atctgctggc agcatagaat actggccaga cccacaaaga 600

gggataaagg aagcataccg ggttctaaaa ctgggaggcg ttgcctgctt gataggaccc 660

gtgcacccta ccttctggct ttccaggttc ttcgccgaca tgtggatgtt gttccccacc 720

gaagaagaat acatagagtg gtttaaaaag gccgggttca aagatgtgaa gttgaagagg 780

attggcccaa aatggtaccg tggtgtgcgt agacacgggc tcatcatggg ctgttccgtc 840

actggtgtta aacgtctctc tggtgactcc cctcttcagc ttggaccgaa ggcggaggat 900

gtgaagaagc cgatcaatcc attctcgttc cttctgcgct tcattttggg tacgatagca 960

gctacttact acgttttggt gccgatatac atgtggataa aggatcagat tgtaccgaaa 1020

ggccagccca tatga 1035

<210>11

<211>1029

<212>DNA

<213>大豆

<400>11

atgggttcag taatgctcag tggaactgaa aagctcactc tcagaaccct aaccgggaac 60

ggcttaggtt tcactggttc ggatttgcac ggtaagaact tcccaagagt gagtttcgct 120

gctaccacta gtgctaaagt tcccaacttt agaagcatag tagtacccaa gtgtagtgtc 180

tcggcttcca ggccaagctc gcagccaagg ttcattcagc acaaaaaaga ggccttttgg 240

ttctataggt ttctctcaat tgtgtatgac catgtcatta accctggcca ttggaccgag 300

gacatgaggg atgatgccct tgaacccgct gatctcaatg acaggaacat gattgtggtg 360

gatgttggtg gcggcacggg tttcaccact cttggtattg tcaagcacgt ggatgccaag 420

aatgtcacca ttcttgacca gtcaccccac cagctcgcca aggccaagca gaaggagcca 480

ctcaaggaat gcaaaataat cgaaggggat gccgaggatc tcccctttcg aactgattat 540

gccgatagat atgtatccgc aggaagtatt gagtactggc cggatccaca gcgtggcatc 600

aaggaggcat acagggtttt gaaacttgga ggcaaagcgt gtctaattgg tccggtctac 660

ccaacatttt ggttgtcacg tttctttgca gatgtttgga tgcttttccc caaggaggaa 720

gagtatattg agtggtttca gaaggcaggg tttaaggacg tccaactaaa aaggattggc 780

ccaaaatggt atcgtggggt tcgccgtcat ggcttgatta tgggttgttc agtgaccggt 840

gttaaacctg catctggaga ttctcctttg cagcttggtc caaaggaaga agatgttgaa 900

aagcccgtta atccttttgt ctttgcactg cgcttcgttt tgggtgcctt ggcagcgaca 960

tggtttgtgt tggttcctat ttacatgtgg ctgaaagatc aagttgttcc caaaggtcag 1020

ccaatctaa 1029

<210>12

<211>1047

<212>DNA

<213>稻

<400>12

atggcgatgg cctcctccgc ctacgcccca gcgggcggcg ttggcaccca ctccgcgccg 60

ggcaggatca ggccgccgcg cggcctcggc ttctccacca ccaccaccaa gtcgaggccc 120

ctcgtgctca ccaggcgtgg gggaggcggc ggcaacatct ccgtggctcg gctgaggtgc 180

gcggcgtcgt cgtcgtcggc ggcggcgagg ccgatgtcgc agccgcggtt catccagcac 240

aagaaggagg cgttctggtt ctaccgcttc ctctccatcg tctacgacca cgtcatcaac 300

ccgggccact ggacggagga catgcgggac gacgccctcg agcccgccga cctctacagc 360

cgcaagctca gggtcgtcga cgtcggcggc gggacggggt tcaccacgct cgggatcgtc 420

aagcgcgtcg acccggagaa cgtcacgctg ctcgaccagt ccccgcacca gctcgagaag 480

gcccgggaga aggaggccct caagggcgtc accatcatgg agggcgacgc cgaggacctc 540

cccttcccca ccgacacctt cgaccgctac gtctccgccg gcagcatcga gtattggccc 600

gatccgcagc gaggaatcaa ggaagcttac agggttttga ggcttggtgg agtggcttgc 660

atgattggcc ccgtgcaccc aaccttctgg ctgtctcgct ttttcgctga catgtggatg 720

ctcttcccga aggaagagga gtatattgag tggttcaaaa aggcagggtt caaggatgtc 780

aagctcaaaa ggattggacc aaaatggtac cgtggtgtcc gaaggcatgg cctgattatg 840

ggatgctctg tgacgggcgt caaaagagaa catggagact cccctttgca gcttggtcca 900

aaggttgagg atgtcagcaa acctgtgaat cctatcacct tcctcttccg cttcctcatg 960

ggaacaatat gtgctgcata ctatgttctg gtgcctatct acatgtggat aaaggaccag 1020

attgtgccca aaggcatgcc gatctaa 1047

<210>13

<211>1014

<212>DNA

<213>欧洲油菜

<400>13

atggcttctc tcatgctcaa cggggccatc accttcccca agggattagg cttccccgct 60

tccaatctac acgccagacc aagtcctccg ctgagtctcg tctcaaacac agccacgcgg 120

agactctccg tggcgacaag atgcagcagc agcagcagcg tgtcggcgtc aaggccatct 180

gcgcagccta ggttcatcca gcacaagaaa gaggcctact ggttctacag gttcctgtcc 240

atcgtgtacg accacatcat caatcccggc cactggacgg aggatatgag ggacgacgct 300

ctcgagcctg cggatctgag ccatccggac atgcgagttg tcgacgtcgg aggcggaacg 360

ggtttcacca cgctgggaat cgtcaagacg gtgaaggcta agaacgtgac gattctggac 420

cagtcgccgc atcagctggc aaaggcgaag cagaaggagc cgttgaagga gtgcaagatc 480

gttgaaggag atgcggagga tctccctttt cctactgatt atgctgacag atacgtctct 540

gctggaagca ttgagtactg gcccgacccg cagaggggga taagggaagc gtacagagtt 600

ctcaagatcg gtgggaaagc atgtctcatt ggccctgtcc acccgacgtt ttggctttct 660

cgtttctttg cagatgtgtg gatgcttttc cccaaggagg aggagtacat tgagtggttc 720

aagaatgctg gtttcaagga cgttcagctt aagaggattg gccccaagtg gtaccgtggt 780

gttcgcaggc acggacttat catgggatgc tctgttactg gtgtcaaacc tgcctctgga 840

gactctcctc tccagcttgg accaaaggaa gaggacgtgg agaagcctgt aaacaatcct 900

ttctccttct tgggacgctt cctcttggga accttagcgg ctgcctggtt tgtgttaatc 960

ccaatctaca tgtggatcaa ggatcagatc gttcccaaag accaacccat ctga 1014

<210>14

<211>1014

<212>DNA

<213>欧洲油菜

<400>14

atggcttctc tcatgctcaa cggggccatc accttcccca agggattagg cttccccgct 60

tccaatctac acgccagacc aagtcctccg ctgagtctcg tctcaaacac agccacgcgg 120

agactctccg tggcgacaag atgcagcagc agcagcagcg tgtcggcgtc aaggccatct 180

gcgcagccta ggttcatcca gcacaagaaa gaggcctact ggttctacag gttcctgtcc 240

atcgtgtacg accacatcat caatcccggc cactggacgg aggatatgag ggacgacgct 300

ctcgagcctg cggatctgag ccatccggac atgcgagttg tcgacgtcgg aggcggaacg 360

ggtttcacca cgctgggaat cgtcaagacg gtgaaggcta agaacgtgac gattctggac 420

cagtcgccgc atcagctggc aaaggcgaag cagaaggagc cgttgaagga gtgcaagatc 480

gtggaaggag atgcggagga tctccctttt cctactgatt atgctgacag atacgtctct 540

gctggaagca ttgagtactg gcccgacccg cagaggggta taagggaagc gtacagagtt 600

ctcaagatcg gtgggaaagc atgtctcatt ggccctgtcc acccgacgtt ttggctttca 660

cgcttctttg cagatgtgtg gatgcttttc cccaaggagg aggagtacat tgagtggttc 720

aagaatgctg gtttcaagga cgttcagctt aagaggattg gccccaagtg gtaccgtggt 780

gttcgcaggc acggacttat catgggatgc tctgttactg gtgtcaaacc tgcctctgga 840

gactctcctc tccagcttgg accaaaggaa gaggacgtgg agaagcctgt aaacaatcct 900

ttctccttct tgggacgctt cctcttgggt accctagcgg ctgcctggtt tgtgttaatc 960

ccaatctaca tgtggatcaa ggatcagatc gttcccaaag accaacccat ctga 1014

<210>15

<211>1017

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>15

atggcctctt tgatgctcaa cggggccatt accttcccca aaggtttagg ttcccctggt 60

tccaatttgc atgccagatc gattcctcgg ccgaccttac tctcagttac ccgaacctcc 120

acacctagac tctcggtggc tactagatgc agcagcagca gcgtgtcgtc ttcccggcca 180

tcggcgcaac ctaggttcat tcagcacaag aaggaggctt actggttcta caggttctta 240

tccatcgtat acgaccatgt catcaatcct gggcattgga ccgaggatat gagagacgac 300

gctcttgagc cagcggatct cagccatccg gacatgcgag tggtcgatgt cggcggcgga 360

actggtttca ctactctggg catagtcaag acagtgaagg ccaagaatgt gaccattctg 420

gaccagtcgc cacatcagct ggccaaagca aagcaaaagg agccgttgaa agaatgcaag 480

atcgtcgagg gagatgctga ggatcttcct tttccaaccg attatgctga cagatacgtt 540

tctgctggaa gcattgagta ctggccggac ccgcagaggg gaataaggga agcgtacagg 600

gttctcaaga tcggtggcaa agcgtgtctc atcggccctg tctacccaac cttctggctc 660

tctcgcttct tttctgatgt ctggatgctc ttccccaagg aggaagagta cattgagtgg 720

ttcaagaatg ccggtttcaa ggacgttcag ctcaagagga ttggccccaa gtggtaccgt 780

ggtgttcgca ggcacggcct tatcatggga tgttctgtca ctggtgttaa acctgcctcc 840

ggtgactctc ctctccagct tggtccaaag gaagaggacg tagagaagcc tgtcaacaac 900

cccttctcct tcttgggacg cttcctcctg ggaactctag cagctgcctg gtttgtgtta 960

atccctatct acatgtggat caaggatcag atcgttccca aagaccaacc catctga 1017

<210>16

<211>338

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>16

Met Ala Ser Leu Met Leu Asn Gly Ala Ile Thr Phe Pro Lys Gly Leu

1 5 10 15

Gly Ser Pro Gly Ser Asn Leu His Ala Arg Ser Ile Pro Arg Pro Thr

20 25 30

Leu Leu Ser Val Thr Arg Thr Ser Thr Pro Arg Leu Ser Val Ala Thr

35 40 45

Arg Cys Ser Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Arg Pro Ser Ala Gln Pro

50 55 60

Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Tyr Trp Phe Tyr Arg Phe Leu

65 70 75 80

Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Thr Glu Asp

85 90 95

Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Ser His Pro Asp Met

100 105 110

Arg Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu Gly Ile

115 120 125

Val Lys Thr Val Lys Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln Ser Pro

130 135 140

His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu Cys Lys

145 150 155 160

Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp Tyr Ala

165 170 175

Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp Pro Gln

180 185 190

Arg Gly Ile Arg Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Ile Gly Gly Lys Ala

195 200 205

Cys Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg Phe Phe

210 215 220

Ser Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile Glu Trp

225 230 235 240

Phe Lys Asn Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg Ile Gly Pro

245 250 255

Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly Cys Ser

260 265 270

Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln Leu Gly

275 280 285

Pro Lys Glu Glu Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Asn Pro Phe Ser Phe

290 295 300

Leu Gly Arg Phe Leu Leu Gly Thr Leu Ala Ala Ala Trp Phe Val Leu

305 310 315 320

Ile Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys Asp Gln

325 330 335

Pro Ile

<210>17

<211>338

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>17

Met Ala Ser Leu Met Leu Asn Gly Ala Ile Thr Phe Pro Lys Gly Leu

1 5 10 15

Gly Ser Pro Gly Ser Asn Leu His Ala Arg Ser Ile Pro Arg Pro Thr

20 25 30

Leu Leu Ser Val Thr Arg Thr Ser Thr Pro Arg Leu Ser Val Ala Thr

35 40 45

Arg Cys Ser Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Arg Pro Ser Ala Gln Pro

50 55 60

Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Tyr Trp Phe Tyr Arg Phe Leu

65 70 75 80

Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Thr Glu Asp

85 90 95

Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Ser His Pro Asp Met

100 105 110

Arg Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu Gly Ile

115 120 125

Val Lys Thr Val Lys Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln Ser Pro

130 135 140

His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu Cys Lys

145 150 155 160

Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp Tyr Ala

165 170 175

Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp Pro Gln

180 185 190

Arg Gly Ile Arg Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Ile Gly Gly Lys Ala

195 200 205

Cys Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg Phe Phe

210 215 220

Ser Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile Glu Trp

225 230 235 240

Phe Lys Asn Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg Ile Gly Pro

245 250 255

Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly Cys Ser

260 265 270

Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln Leu Gly

275 280 285

Pro Lys Glu Lys Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Asn Pro Phe Ser Phe

290 295 300

Leu Gly Arg Phe Leu Leu Gly Thr Leu Ala Ala Ala Trp Phe Val Leu

305 310 315 320

Ile Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys Asp Gln

325 330 335

Pro Ile

<210>18

<211>338

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>18

Met Ala Ser Leu Met Leu Asn Gly Ala Ile Thr Phe Pro Lys Gly Leu

1 5 10 15

Gly Ser Pro Gly Ser Asn Leu His Ala Arg Ser Ile Pro Arg Pro Thr

20 25 30

Leu Leu Ser Val Thr Arg Thr Ser Thr Pro Arg Leu Ser Val Ala Thr

35 40 45

Arg Cys Ser Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Arg Pro Ser Ala Gln Pro

50 55 60

Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Lys Ala Tyr Trp Phe Tyr Arg Phe Leu

65 70 75 80

Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Thr Glu Asp

85 90 95

Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Ser His Pro Asp Met

100 105 110

Arg Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu Gly Ile

115 120 125

Val Lys Thr Val Lys Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln Ser Pro

130 135 140

His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu Cys Lys

145 150 155 160

Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp Tyr Ala

165 170 175

Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp Pro Gln

180 185 190

Arg Gly Ile Arg Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Ile Gly Gly Lys Ala

195 200 205

Cys Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg Phe Phe

210 215 220

Ser Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile Glu Trp

225 230 235 240

Phe Lys Asn Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg Ile Gly Pro

245 250 255

Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly Cys Ser

260 265 270

Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln Leu Gly

275 280 285

Pro Lys Glu Glu Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Asn Pro Phe Ser Phe

290 295 300

Leu Gly Arg Phe Leu Leu Gly Thr Leu Ala Ala Ala Trp Phe Val Leu

305 310 315 320

Ile Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys Asp Gln

325 330 335

Pro Ile

<210>19

<211>338

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>19

Met Ala Ser Leu Met Leu Asn Gly Ala Ile Thr Phe Ser Lys Gly Leu

1 5 10 15

Gly Ser Pro Gly Ser Asn Leu His Ala Arg Ser Ile Pro Arg Pro Thr

20 25 30

Leu Leu Ser Val Thr Arg Thr Ser Thr Pro Arg Leu Ser Val Ala Thr

35 40 45

Arg Cys Ser Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Arg Pro Ser Ala Gln Pro

50 55 60

Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Tyr Trp Phe Tyr Arg Phe Leu

65 70 75 80

Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Thr Glu Asp

85 90 95

Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Ser His Pro Asp Met

100 105 110

Arg Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu Gly Ile

115 120 125

Val Lys Thr Val Lys Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln Ser Pro

130 135 140

His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu Cys Lys

145 150 155 160

Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp Tyr Ala

165 170 175

Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp Pro Gln

180 185 190

Arg Gly Ile Arg Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Ile Gly Gly Lys Ala

195 200 205

Cys Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg Phe Phe

210 215 220

Ser Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile Glu Trp

225 230 235 240

Phe Lys Asn Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg Ile Gly Pro

245 250 255

Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly Cys Ser

260 265 270

Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln Leu Gly

275 280 285

Pro Lys Glu Glu Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Asn Pro Phe Ser Phe

290 295 300

Leu Gly Arg Phe Leu Leu Gly Thr Leu Ala Ala Ala Trp Phe Val Leu

305 310 315 320

Ile Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys Asp Gln

325 330 335

Pro Ile

<210>20

<211>338

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>20

Met Ala Ser Leu Met Leu Asn Gly Ala Ile Thr Phe Pro Lys Gly Leu

1 5 10 15

Gly Ser Pro Gly Ser Asn Leu His Ala Arg Ser Ile Pro Arg Pro Thr

20 25 30

Leu Leu Ser Val Thr Arg Thr Ser Thr Pro Arg Leu Ser Val Ala Thr

35 40 45

Arg Cys Ser Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Arg Pro Ser Ala Gln Pro

50 55 60

Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Tyr Trp Phe Tyr Arg Phe Leu

65 70 75 80

Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Thr Glu Asp

85 90 95

Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Ser His Pro Asp Met

100 105 110

Arg Val Val Asn Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu Gly Ile

115 120 125

Val Lys Thr Val Lys Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln Ser Pro

130 135 140

His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu Cys Lys

145 150 155 160

Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp Tyr Ala

165 170 175

Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp Pro Gln

180 185 190

Arg Gly Ile Arg Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Ile Gly Gly Lys Ala

195 200 205

Cys Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg Phe Phe

210 215 220

Ser Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile Glu Trp

225 230 235 240

Phe Lys Asn Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg Ile Gly Pro

245 250 255

Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly Cys Ser

260 265 270

Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln Leu Gly

275 280 285

Pro Lys Glu Glu Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Asn Pro Phe Ser Phe

290 295 300

Leu Gly Arg Phe Leu Leu Gly Thr Leu Ala Ala Ala Trp Phe Val Leu

305 310 315 320

Ile Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys Asp Gln

325 330 335

Pro Ile

<210>21

<211>338

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>21

Met Ala Ser Leu Met Leu Asn Gly Ala Ile Thr Phe Pro Lys Gly Leu

1 5 10 15

Gly Ser Pro Gly Ser Asn Leu His Ala Arg Ser Ile Pro Arg Pro Thr

20 25 30

Leu Leu Ser Val Thr Arg Thr Ser Thr Pro Arg Leu Ser Val Ala Thr

35 40 45

Arg Cys Ser Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Arg Pro Ser Ala Gln Pro

50 55 60

Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Tyr Trp Phe Tyr Arg Phe Leu

65 70 75 80

Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Ile Glu Asp

85 90 95

Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Ser His Pro Asp Met

100 105 110

Arg Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu Gly Ile

115 120 125

Val Lys Thr Val Lys Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln Ser Pro

130 135 140

His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu Cys Lys

145 150 155 160

Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp Tyr Ala

165 170 175

Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp Pro Gln

180 185 190

Arg Gly Ile Arg Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Ile Gly Gly Lys Ala

195 200 205

Cys Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg Phe Phe

210 215 220

Ser Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile Glu Trp

225 230 235 240

Phe Lys Asn Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg Ile Gly Pro

245 250 255

Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly Cys Ser

260 265 270

Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln Leu Gly

275 280 285

Pro Lys Glu Glu Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Asn Pro Phe Ser Phe

290 295 300

Leu Gly Arg Phe Leu Leu Gly Thr Leu Ala Ala Ala Trp Phe Val Leu

305 310 315 320

Ile Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys Asp Gln

325 330 335

Pro Ile

<210>22

<211>352

<212>PRT

<213>玉米

<400>22

Met Ala Met Ala Ser Thr Tyr Ala Pro Gly Gly Gly Ala Arg Ala Leu

1 5 10 15

Ala Gln Gly Arg Cys Arg Val Arg Gly Pro Ala Gly Leu Gly Phe Leu

20 25 30

Gly Pro Ser Lys Ala Ala Gly Leu Pro Arg Pro Leu Ala Leu Ala Leu

35 40 45

Ala Arg Arg Met Ser Ser Pro Val Ala Val Gly Ala Arg Leu Arg Cys

50 55 60

Ala Ala Ser Ser Ser Pro Ala Ala Ala Arg Pro Ala Thr Ala Pro Arg

65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu Gly Ile Val

130 135 140

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145 150 155 160

Gln Leu Asp Lys Ala Arg Gln Lys Glu Ala Leu Lys Gly Val Thr Ile

165 170 175

Met Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp Ser Phe Asp

180 185 190

Arg Tyr Ile Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp Pro Gln Arg

195 200 205

Gly Ile Lys Glu Ala Tyr Arg Val Leu Arg Phe Gly Gly Leu Ala Cys

210 215 220

Val Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg Phe Phe Ala

225 230 235 240

Asp Met Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile Glu Trp Phe

245 250 255

Lys Lys Ala Gly Phe Arg Asp Val Lys Leu Lys Arg Ile Gly Pro Lys

260 265 270

Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly Cys Ser Val

275 280 285

Thr Gly Val Lys Arg Glu Arg Gly Asp Ser Pro Leu Glu Leu Gly Pro

290 295 300

Lys Ala Glu Asp Val Ser Lys Pro Val Asn Pro Ile Thr Phe Leu Phe

305 310 315 320

Arg Phe Leu Val Gly Thr Ile Cys Ala Ala Tyr Tyr Val Leu Val Pro

325 330 335

Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys Gly Met Pro Ile

340 345 350

<210>23

<211>341

<212>PRT

<213>陆地棉

<400>23

Met Ala Ser Ser Met Leu Asn Gly Ala Glu Thr Phe Thr Leu Ile Arg

1 5 10 15

Gly Val Thr Pro Lys Ser Ile Gly Phe Leu Gly Ser Gly Leu His Gly

20 25 30

Lys Gln Phe Ser Ser Ala Gly Leu Ile Tyr Ser Pro Lys Met Ser Arg

35 40 45

Val Gly Thr Thr Ile Ala Pro Arg Cys Ser Leu Ser Ala Ser Arg Pro

50 55 60

Ala Ser Gln Pro Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Phe Trp Phe

65 70 75 80

Tyr Arg Phe Leu Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His

85 90 95

Trp Thr Glu Asp Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Asn

100 105 110

Asp Arg Asp Met Val Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr

115 120 125

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130 135 140

Asp Gln Ser Pro His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu

145 150 155 160

Lys Glu Cys Asn Ile Ile Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro

165 170 175

Thr Asp Tyr Ala Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp

180 185 190

Pro Asp Pro Gln Arg Gly Ile Lys Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Gln

195 200 205

Gly Gly Lys Ala Cys Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu

210 215 220

Ser Arg Phe Phe Ala Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu

225 230 235 240

Tyr Ile Glu Trp Phe Glu Lys Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys

245 250 255

Arg Ile Gly Pro Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile

260 265 270

Met Gly Cys Ser Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro

275 280 285

Leu Gln Leu Gly Pro Lys Ala Glu Asp Val Ser Lys Pro Val Asn Pro

290 295 300

Phe Val Phe Leu Leu Arg Phe Met Leu Gly Ala Thr Ala Ala Ala Tyr

305 310 315 320

Tyr Val Leu Val Pro Ile Tyr Met Trp Leu Lys Asp Gln Ile Val Pro

325 330 335

Glu Gly Gln Pro Ile

340

<210>24

<211>344

<212>PRT

<213>韭葱

<400>24

Met Ala Ser Ser Met Leu Ser Gly Ala Glu Ser Leu Ser Met Leu Arg

1 5 10 15

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Lys Pro Thr Asn Leu Lys Met Asp Leu Ile Pro Phe Ala Thr Lys His

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Gln Lys Thr Lys Lys Ala Ser Ile Phe Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser

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Ser Arg Pro Ala Ser Gln Pro Arg Phe Ile Gln His Lys Gln Glu Ala

65 70 75 80

Phe Trp Phe Tyr Arg Phe Leu Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn

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Gly Phe Thr Thr Leu Gly Ile Ile Lys His Ile Asp Pro Lys Asn Val

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Thr Ile Leu Asp Gln Ser Pro His Gln Leu Glu Lys Ala Arg Gln Lys

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Glu Ala Leu Lys Glu Cys Thr Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu

165 170 175

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180 185 190

Glu Tyr Trp Pro Asp Pro Gln Arg Gly Ile Lys Glu Ala Tyr Arg Val

195 200 205

Leu Lys Leu Gly Gly Val Ala Cys Leu Ile Gly Pro Val His Pro Thr

210 215 220

Phe Trp Leu Ser Arg Phe Phe Ala Asp Met Trp Met Leu Phe Pro Thr

225 230 235 240

Glu Glu Glu Tyr Ile Glu Trp Phe Lys Lys Ala Gly Phe Lys Asp Val

245 250 255

Lys Leu Lys Arg Ile Gly Pro Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His

260 265 270

Gly Leu Ile Met Gly Cys Ser Val Thr Gly Val Lys Arg Leu Ser Gly

275 280 285

Asp Ser Pro Leu Gln Leu Gly Pro Lys Ala Glu Asp Val Lys Lys Pro

290 295 300

Ile Asn Pro Phe Ser Phe Leu Leu Arg Phe Ile Leu Gly Thr Ile Ala

305 310 315 320

Ala Thr Tyr Tyr Val Leu Val Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln

325 330 335

Ile Val Pro Lys Gly Gln Pro Ile

340

<210>25

<211>342

<212>PRT

<213>大豆

<400>25

Met Gly Ser Val Met Leu Ser Gly Thr Glu Lys Leu Thr Leu Arg Thr

1 5 10 15

Leu Thr Gly Asn Gly Leu Gly Phe Thr Gly Ser Asp Leu His Gly Lys

20 25 30

Asn Phe Pro Arg Val Ser Phe Ala Ala Thr Thr Ser Ala Lys Val Pro

35 40 45

Asn Phe Arg Ser Ile Val Val Pro Lys Cys Ser Val Ser Ala Ser Arg

50 55 60

Pro Ser Ser Gln Pro Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Phe Trp

65 70 75 80

Phe Tyr Arg Phe Leu Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly

85 90 95

His Trp Thr Glu Asp Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu

100 105 110

Asn Asp Arg Asn Met Ile Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe

115 120 125

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130 135 140

Leu Asp Gln Ser Pro His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro

145 150 155 160

Leu Lys Glu Cys Lys Ile Ile Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe

165 170 175

Arg Thr Asp Tyr Ala Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr

180 185 190

Trp Pro Asp Pro Gln Arg Gly Ile Lys Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys

195 200 205

Leu Gly Gly Lys Ala Cys Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp

210 215 220

Leu Ser Arg Phe Phe Ala Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu

225 230 235 240

Glu Tyr Ile Glu Trp Phe Gln Lys Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu

245 250 255

Lys Arg Ile Gly Pro Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu

260 265 270

Ile Met Gly Cys Ser Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser

275 280 285

Pro Leu Gln Leu Gly Pro Lys Glu Glu Asp Val Glu Lys Pro Val Asn

290 295 300

Pro Phe Val Phe Ala Leu Arg Phe Val Leu Gly Ala Leu Ala Ala Thr

305 310 315 320

Trp Phe Val Leu Val Pro Ile Tyr Met Trp Leu Lys Asp Gln Val Val

325 330 335

Pro Lys Gly Gln Pro Ile

340

<210>26

<211>348

<212>PRT

<213>稻

<400>26

Met Ala Met Ala Ser Ser Ala Tyr Ala Pro Ala Gly Gly Val Gly Thr

1 5 10 15

His Ser Ala Pro Gly Arg Ile Arg Pro Pro Arg Gly Leu Gly Phe Ser

20 25 30

Thr Thr Thr Thr Lys Ser Arg Pro Leu Val Leu Thr Arg Arg Gly Gly

35 40 45

Gly Gly Gly Asn Ile Ser Val Ala Arg Leu Arg Cys Ala Ala Ser Ser

50 55 60

Ser Ser Ala Ala Ala Arg Pro Met Ser Gln Pro Arg Phe Ile Gln His

65 70 75 80

Lys Lys Glu Ala Phe Trp Phe Tyr Arg Phe Leu Ser Ile Val Tyr Asp

85 90 95

His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Thr Glu Asp Met Arg Asp Asp Ala

100 105 110

Leu Glu Pro Ala Asp Leu Tyr Ser Arg Lys Leu Arg Val Val Asp Val

115 120 125

Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu Gly Ile Val Lys Arg Val Asp

130 135 140

Pro Glu Asn Val Thr Leu Leu Asp Gln Ser Pro His Gln Leu Glu Lys

145 150 155 160

Ala Arg Glu Lys Glu Ala Leu Lys Gly Val Thr Ile Met Glu Gly Asp

165 170 175

Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp Thr Phe Asp Arg Tyr Val Ser

180 185 190

Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp Pro Gln Arg Gly Ile Lys Glu

195 200 205

Ala Tyr Arg Val Leu Arg Leu Gly Gly Val Ala Cys Met Ile Gly Pro

210 215 220

Val His Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg Phe Phe Ala Asp Met Trp Met

225 230 235 240

Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile Glu Trp Phe Lys Lys Ala Gly

245 250 255

Phe Lys Asp Val Lys Leu Lys Arg Ile Gly Pro Lys Trp Tyr Arg Gly

260 265 270

Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly Cys Ser Val Thr Gly Val Lys

275 280 285

Arg Glu His Gly Asp Ser Pro Leu Gln Leu Gly Pro Lys Val Glu Asp

290 295 300

Val Ser Lys Pro Val Asn Pro Ile Thr Phe Leu Phe Arg Phe Leu Met

305 310 315 320

Gly Thr Ile Cys Ala Ala Tyr Tyr Val Leu Val Pro Ile Tyr Met Trp

325 330 335

Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys Gly Met Pro Ile

340 345

<210>27

<211>337

<212>PRT

<213>欧洲油菜

<400>27

Met Ala Ser Leu Met Leu Asn Gly Ala Ile Thr Phe Pro Lys Gly Leu

1 5 10 15

Gly Phe Pro Ala Ser Asn Leu His Ala Arg Pro Ser Pro Pro Leu Ser

20 25 30

Leu Val Ser Asn Thr Ala Thr Arg Arg Leu Ser Val Ala Thr Arg Cys

35 40 45

Ser Ser Ser Ser Ser Val Ser Ala Ser Arg Pro Ser Ala Gln Pro Arg

50 55 60

Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Tyr Trp Phe Tyr Arg Phe Leu Ser

65 70 75 80

Ile Val Tyr Asp His Ile Ile Asn Pro Gly His Trp Thr Glu Asp Met

85 90 95

Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Ser His Pro Asp Met Arg

100 105 110

Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu Gly Ile Val

115 120 125

Lys Thr Val Lys Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln Ser Pro His

130 135 140

Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu Cys Lys Ile

145 150 155 160

Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp Tyr Ala Asp

165 170 175

Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp Pro Gln Arg

180 185 190

Gly Ile Arg Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Ile Gly Gly Lys Ala Cys

195 200 205

Leu Ile Gly Pro Val His Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg Phe Phe Ala

210 215 220

Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile Glu Trp Phe

225 230 235 240

Lys Asn Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg Ile Gly Pro Lys

245 250 255

Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly Cys Ser Val

260 265 270

Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln Leu Gly Pro

275 280 285

Lys Glu Glu Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Asn Pro Phe Ser Phe Leu

290 295 300

Gly Arg Phe Leu Leu Gly Thr Leu Ala Ala Ala Trp Phe Val Leu Ile

305 310 315 320

Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys Asp Gln Pro

325 330 335

Ile

<210>28

<211>292

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>28

Ala Thr Arg Cys Ser Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Arg Pro Ser Ala

1 5 10 15

Gln Pro Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Tyr Trp Phe Tyr Arg

20 25 30

Phe Leu Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Thr

35 40 45

Glu Asp Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Ser His Pro

50 55 60

Asp Met Arg Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu

65 70 75 80

Gly Ile Val Lys Thr Val Lys Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln

85 90 95

Ser Pro His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu

100 105 110

Cys Lys Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp

115 120 125

Tyr Ala Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp

130 135 140

Pro Gln Arg Gly Ile Arg Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Ile Gly Gly

145 150 155 160

Lys Ala Cys Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg

165 170 175

Phe Phe Ser Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile

180 185 190

Glu Trp Phe Lys Asn Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg Ile

195 200 205

Gly Pro Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly

210 215 220

Cys Ser Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln

225 230 235 240

Leu Gly Pro Lys Glu Glu Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Asn Pro Phe

245 250 255

Ser Phe Leu Gly Arg Phe Leu Leu Gly Thr Leu Ala Ala Ala Trp Phe

260 265 270

Val Leu Ile Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys

275 280 285

Asp Gln Pro Ile

290

<210>29

<211>292

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>29

Ala Thr Arg Cys Ser Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Arg Pro Ser Ala

1 5 10 15

Gln Pro Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Tyr Trp Phe Tyr Arg

20 25 30

Phe Leu Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Thr

35 40 45

Glu Asp Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Ser His Pro

50 55 60

Asp Met Arg Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu

65 70 75 80

Gly Ile Val Lys Thr Val Lys Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln

85 90 95

Ser Pro His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu

100 105 110

Cys Lys Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp

115 120 125

Tyr Ala Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp

130 135 140

Pro Gln Arg Gly Ile Arg Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Ile Gly Gly

145 150 155 160

Lys Ala Cys Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg

165 170 175

Phe Phe Ser Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile

180 185 190

Glu Trp Phe Lys Asn Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg Ile

195 200 205

Gly Pro Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly

210 215 220

Cys Ser Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln

225 230 235 240

Leu Gly Pro Lys Glu Lys Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Asn Pro Phe

245 250 255

Ser Phe Leu Gly Arg Phe Leu Leu Gly Thr Leu Ala Ala Ala Trp Phe

260 265 270

Val Leu Ile Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys

275 280 285

Asp Gln Pro Ile

290

<210>30

<211>292

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>30

Ala Thr Arg Cys Ser Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Arg Pro Ser Ala

1 5 10 15

Gln Pro Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Lys Ala Tyr Trp Phe Tyr Arg

20 25 30

Phe Leu Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Thr

35 40 45

Glu Asp Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Ser His Pro

50 55 60

Asp Met Arg Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu

65 70 75 80

Gly Ile Val Lys Thr Val Lys Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln

85 90 95

Ser Pro His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu

100 105 110

Cys Lys Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp

115 120 125

Tyr Ala Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp

130 135 140

Pro Gln Arg Gly Ile Arg Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Ile Gly Gly

145 150 155 160

Lys Ala Cys Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg

165 170 175

Phe Phe Ser Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile

180 185 190

Glu Trp Phe Lys Asn Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys ArgIle

195 200 205

Gly Pro Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly

210 215 220

Cys Ser Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln

225 230 235 240

Leu Gly Pro Lys Glu Glu Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Asn Pro Phe

245 250 255

Ser Phe Leu Gly Arg Phe Leu Leu Gly Thr Leu Ala Ala Ala Trp Phe

260 265 270

Val Leu Ile Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys

275 280 285

Asp Gln Pro Ile

290

<210>31

<211>292

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>31

Ala Thr Arg Cys Ser Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Arg Pro Ser Ala

1 5 10 15

Gln Pro Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Tyr Trp Phe Tyr Arg

20 25 30

Phe Leu Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Thr

35 40 45

Glu Asp Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Ser His Pro

50 55 60

Asp Met Arg Val Val Asn Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu

65 70 75 80

Gly Ile Val Lys Thr Val Lys Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln

85 90 95

Ser Pro His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu

100 105 110

Cys Lys Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp

115 120 125

Tyr Ala Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp

130 135 140

Pro Gln Arg Gly Ile Arg Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Ile Gly Gly

145 150 155 160

Lys Ala Cys Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg

165 170 175

Phe Phe Ser Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile

180 1 85 190

Glu Trp Phe Lys Asn Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg Ile

195 200 205

Gly Pro Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly

210 215 220

Cys Ser Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln

225 230 235 240

Leu Gly Pro Lys Glu Glu Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Asn Pro Phe

245 250 255

Ser Phe Leu Gly Arg Phe Leu Leu Gly Thr Leu Ala Ala Ala Trp Phe

260 265 270

Val Leu Ile Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys

275 280 285

Asp Gln Pro Ile

290

<210>32

<211>292

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>32

Ala Thr Arg Cys Ser Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Arg Pro Ser Ala

1 5 10 15

Gln Pro Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Tyr Trp Phe Tyr Arg

20 25 30

Phe Leu Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Ile

35 40 45

Glu Asp Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Ser His Pro

50 55 60

Asp Met Arg Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu

65 70 75 80

Gly Ile Val Lys Thr Val Lys Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln

85 90 95

Ser Pro His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu

100 105 110

Cys Lys Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp

115 120 125

Tyr Ala Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp

130 135 140

Pro Gln Arg Gly Ile Arg Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Ile Gly Gly

145 150 155 160

Lys Ala Cys Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg

165 170 175

Phe Phe Ser Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile

180 185 190

Glu Trp Phe Lys Asn Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg Ile

195 200 205

Gly Pro Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly

210 215 220

Cys Ser Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln

225 230 235 240

Leu Gly Pro Lys Glu Glu Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Asn Pro Phe

245 250 255

Ser Phe Leu Gly Arg Phe Leu Leu Gly Thr Leu Ala Ala Ala Trp Phe

260 265 270

Val Leu Ile Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys

275 280 285

Asp Gln Pro Ile

290

<210>33

<211>293

<212>PRT

<213>欧洲油菜

<400>33

Ala Thr Arg Cys Ser Ser Ser Ser Ser Val Ser Ala Ser Arg Pro Ser

1 5 10 15

Ala Gln Pro Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Tyr Trp Phe Tyr

20 25 30

Arg Phe Leu Ser Ile Val Tyr Asp His Ile Ile Asn Pro Gly His Trp

35 40 45

Thr Glu Asp Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Ser His

50 55 60

Pro Asp Met Arg Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr

65 70 75 80

Leu Gly Ile Val Lys Thr Val Lys Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp

85 90 95

Gln Ser Pro His Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys

100 105 110

Glu Cys Lys Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr

115 120 125

Asp Tyr Ala Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro

130 135 140

Asp Pro Gln Arg Gly Ile Arg Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Ile Gly

145 150 155 160

Gly Lys Ala Cys Leu Ile Gly Pro Val His Pro Thr Phe Trp Leu Ser

165 170 175

Arg Phe Phe Ala Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr

180 185 190

Ile Glu Trp Phe Lys Asn Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg

195 200 205

Ile Gly Pro Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met

210 215 220

Gly Cys Ser Val Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu

225 230 235 240

Gln Leu Gly Pro Lys Glu Glu Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Asn Pro

245 250 255

Phe Ser Phe Leu Gly Arg Phe Leu Leu Gly Thr Leu Ala Ala Ala Trp

260 265 270

Phe Val Leu Ile Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro

275 280 285

Lys Asp Gln Pro Ile

290

<210>34

<211>292

<212>PRT

<213>稻

<400>34

Arg Leu Arg Cys Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ala Ala Ala Arg Pro Met

1 5 10 15

Ser Gln Pro Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Phe Trp Phe Tyr

20 25 30

Arg Phe Leu Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp

35 40 45

Thr Glu Asp Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Tyr Ser

50 55 60

Arg Lys Leu Arg Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr

65 70 75 80

Leu Gly Ile Val Lys Arg Val Asp Pro Glu Asn Val Thr Leu Leu Asp

85 90 95

Gln Ser Pro His Gln Leu Glu Lys Ala Arg Glu Lys Glu Ala Leu Lys

100 105 110

Gly Val Thr Ile Met Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr

115 120 125

Asp Thr Phe Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro

130 135 140

Asp Pro Gln Arg Gly Ile Lys Glu Ala Tyr Arg Val Leu Arg Leu Gly

145 150 155 160

Gly Val Ala Cys Met Ile Gly Pro Val His Pro Thr Phe Trp Leu Ser

165 170 175

Arg Phe Phe Ala Asp Met Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr

180 185 190

Ile Glu Trp Phe Lys Lys Ala Gly Phe Lys Asp Val Lys Leu Lys Arg

195 200 205

Ile Gly Pro Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met

210 215 220

Gly Cys Ser Val Thr Gly Val Lys Arg Glu His Gly Asp Ser Pro Leu

225 230 235 240

Gln Leu Gly Pro Lys Val Glu Asp Val Ser Lys Pro Val Asn Pro Ile

245 250 255

Thr Phe Leu Phe Arg Phe Leu Met Gly Thr Ile Cys Ala Ala Tyr Tyr

260 265 270

Val Leu Val Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys

275 280 285

Gly Met Pro Ile

290

<210>35

<211>292

<212>PRT

<213>玉米

<400>35

Arg Leu Arg Cys Ala Ala Ser Ser Ser Pro Ala Ala Ala Arg Pro Ala

1 5 10 15

Thr Ala Pro Arg Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Phe Trp Phe Tyr

20 25 30

Arg Phe Leu Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp

35 40 45

Thr Glu Asp Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Phe Ser

50 55 60

Arg His Leu Thr Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr

65 70 75 80

Leu Gly Ile Val Lys His Val Asn Pro Glu Asn Val Thr Leu Leu Asp

85 90 95

Gln Ser Pro His Gln Leu Asp Lys Ala Arg Gln Lys Glu Ala Leu Lys

100 105 110

Gly Val Thr Ile Met Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr

115 120 125

Asp Ser Phe Asp Arg Tyr Ile Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro

130 135 140

Asp Pro Gln Arg Gly Ile Lys Glu Ala Tyr Arg Val Leu Arg Phe Gly

145 150 155 160

Gly Leu Ala Cys Val Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser

165 170 175

Arg Phe Phe Ala Asp Met Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr

180 185 190

Ile Glu Trp Phe Lys Lys Ala Gly Phe Arg Asp Val Lys Leu Lys Arg

195 200 205

Ile Gly Pro Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met

210 215 220

Gly Cys Ser Val Thr Gly Val Lys Arg Glu Arg Gly Asp Ser Pro Leu

225 230 235 240

Glu Leu Gly Pro Lys Ala Glu Asp Val Ser Lys Pro Val Asn Pro Ile

245 250 255

Thr Phe Leu Phe Arg Phe Leu Val Gly Thr Ile Cys Ala Ala Tyr Tyr

260 265 270

Val Leu Val Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys

275 280 285

Gly Met Pro Ile

290

<210>36

<211>288

<212>PRT

<213>大豆

<400>36

Val Pro Lys Cys Ser Val Ser Ala Ser Arg Pro Ser Ser Gln Pro Arg

1 5 10 15

Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Phe Trp Phe Tyr Arg Phe Leu Ser

20 25 30

Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Thr Glu Asp Met

35 40 45

Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Asn Asp Arg Asn Met Ile

50 55 60

Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu Gly Ile Val

65 70 75 80

Lys His Val Asp Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln Ser Pro His

85 90 95

Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu Cys Lys Ile

100 105 110

Ile Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Arg Thr Asp Tyr Ala Asp

115 120 125

Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp Pro Gln Arg

130 135 140

Gly Ile Lys Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Leu Gly Gly Lys Ala Cys

145 150 155 160

Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg Phe Phe Ala

165 170 175

Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile Glu Trp Phe

180 185 190

Gln Lys Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg Ile Gly Pro Lys

195 200 205

Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly Cys Ser Val

210 215 220

Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln Leu Gly Pro

225 230 235 240

Lys Glu Glu Asp Val Glu Lys Pro Val Asn Pro Phe Val Phe Ala Leu

245 250 255

Arg Phe Val Leu Gly Ala Leu Ala Ala Thr Trp Phe Val Leu Val Pro

260 265 270

Ile Tyr Met Trp Leu Lys Asp Gln Val Val Pro Lys Gly Gln Pro Ile

275 280 285

<210>37

<211>289

<212>PRT

<213>韭葱

<400>37

Ile Phe Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ser Arg Pro Ala Ser Gln Pro

1 5 10 15

Arg Phe Ile Gln His Lys Gln Glu Ala Phe Trp Phe Tyr Arg Phe Leu

20 25 30

Ser Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Thr Glu Asp

35 40 45

Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Glu Leu Tyr Asp Ser Arg Met

50 55 60

Lys Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu Gly Ile

65 70 75 80

Ile Lys His Ile Asp Pro Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln Ser Pro

85 90 95

His Gln Leu Glu Lys Ala Arg Gln Lys Glu Ala Leu Lys Glu Cys Thr

100 105 110

Ile Val Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp Thr Phe

115 120 125

Asp Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp Pro Gln

130 135 140

Arg Gly Ile Lys Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Leu Gly Gly Val Ala

145 150 155 160

Cys Leu Ile Gly Pro Val His Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg Phe Phe

165 170 175

Ala Asp Met Trp Met Leu Phe Pro Thr Glu Glu Glu Tyr Ile Glu Trp

180 185 190

Phe Lys Lys Ala Gly Phe Lys Asp Val Lys Leu Lys Arg Ile Gly Pro

195 200 205

Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly Cys Ser

210 215 220

Val Thr Gly Val Lys Arg Leu Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln Leu Gly

225 230 235 240

Pro Lys Ala Glu Asp Val Lys Lys Pro Ile Asn Pro Phe Ser Phe Leu

245 250 255

Leu Arg Phe Ile Leu Gly Thr Ile Ala Ala Thr Tyr Tyr Val Leu Val

260 265 270

Pro Ile Tyr Met Trp Ile Lys Asp Gln Ile Val Pro Lys Gly Gln Pro

275 280 285

Ile

<210>38

<211>288

<212>PRT

<213>陆地棉

<400>38

Ala Pro Arg Cys Ser Leu Ser Ala Ser Arg Pro Ala Ser Gln Pro Arg

1 5 10 15

Phe Ile Gln His Lys Lys Glu Ala Phe Trp Phe Tyr Arg Phe Leu Ser

20 25 30

Ile Val Tyr Asp His Val Ile Asn Pro Gly His Trp Thr Glu Asp Met

35 40 45

Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Asp Leu Asn Asp Arg Asp Met Val

50 55 60

Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu Gly Ile Val

65 70 75 80

Gln His Val Asp Ala Lys Asn Val Thr Ile Leu Asp Gln Ser Pro His

85 90 95

Gln Leu Ala Lys Ala Lys Gln Lys Glu Pro Leu Lys Glu Cys Asn Ile

100 105 110

Ile Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Pro Thr Asp Tyr Ala Asp

115 120 125

Arg Tyr Val Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp Pro Gln Arg

130 135 140

Gly Ile Lys Glu Ala Tyr Arg Val Leu Lys Gln Gly Gly Lys Ala Cys

145 150 155 160

Leu Ile Gly Pro Val Tyr Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg Phe Phe Ala

165 170 175

Asp Val Trp Met Leu Phe Pro Lys Glu Glu Glu Tyr Ile Glu Trp Phe

180 185 190

Glu Lys Ala Gly Phe Lys Asp Val Gln Leu Lys Arg Ile Gly Pro Lys

195 200 205

Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly Cys Ser Val

210 215 220

Thr Gly Val Lys Pro Ala Ser Gly Asp Ser Pro Leu Gln Leu Gly Pro

225 230 235 240

Lys Ala Glu Asp Val Ser Lys Pro Val Asn Pro Phe Val Phe Leu Leu

245 250 255

Arg Phe Met Leu Gly Ala Thr Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Leu Val Pro

260 265 270

Ile Tyr Met Trp Leu Lys Asp Gln Ile Val Pro Glu Gly Gln Pro Ile

275 280 285

<210>39

<211>1047

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>39

atgaaagcaa ctctagcagc accctcttct ctcacaagcc tcccttatcg aaccaactct 60

tctttcggct caaagtcatc gcttctcttt cggtctccat cctcctcctc ctcagtctct 120

atgacgacaa cgcgtggaaa cgtggctgtg gcggctgctg ctacatccac tgaggcgcta 180

agaaaaggaa tagcggagtt ctacaatgaa acttcgggtt tgtgggaaga gatttgggga 240

gatcatatgc atcatggctt ttatgaccct gattcttctg ttcaactttc tgattctggt 300

cacaaggaag ctcagatccg tatgattgaa gagtctctcc gtttcgccgg tgttactgat 360

gaagaggagg agaaaaagat aaagaaagta gtggatgttg ggtgtgggat tggaggaagc 420

tcaagatatc ttgcctctaa atttggagct gaatgcattg gcattactct cagccctgtt 480

caggccaaga gagccaatga tctcgcggct gctcaatcac tctctcataa ggcttccttc 540

caagttgcgg atgcgttgga tcagccattc gaagatggaa aattcgatct agtgtggtcg 600

atggagagtg gtgagcatat gcctgacaag gccaagtttg taaaagagtt ggtacgtgtg 660

gcggctccag gaggtaggat aataatagtg acatggtgcc atagaaatct atctgcgggg 720

gaggaagctt tgcagccgtg ggagcaaaac atcttggaca aaatctgtaa gacgttctat 780

ctcccggctt ggtgctccac cgatgattat gtcaacttgc ttcaatccca ttctctccag 840

gatattaagt gtgcggattg gtcagagaac gtagctcctt tctggcctgc ggttatacgg 900

actgcattaa catggaaggg ccttgtgtct ctgcttcgta gtggtatgaa aagtattaaa 960

ggagcattga caatgccatt gatgattgaa ggttacaaga aaggtgtcat taagtttggt 1020

atcatcactt gccagaagcc actctaa 1047

<210>40

<211>1047

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>40

atgaaagcaa ctctagcagc accctcttct ctcacaagcc tcccttatcg aaccaactct 60

tctttcggct caaagtcatc gcttctcttt cggtctccat cctcctcctc ctcagtctct 120

atgacgacaa cgcgtggaaa cgtggctgtg gcggctgctg ctacatccac tgaggcgcta 180

agaaaaggaa tagcggagtt ctacaatgaa acttcgggtt tgtgggaaga gatttgggga 240

gatcatatgc atcatggctt ttatgaccct gattcttctg ttcaactttc tgattctggt 300

cacaaggaag ctcagatccg tatgattgaa gagtctctcc gttttgccgg tgttactgat 360

gaagaggagg agaaaaagat aaagaaagta gtggatgttg ggtgtgggat tggaggaagc 420

tcaagatatc ttgcctctaa atttggagct gaatgcattg gcattactct cagccctgtt 480

caggccaaga gagccaatga tctcgcggct gctcaatcac tcgctcataa ggcttccttc 540

caagttgcgg atgcgttgga tcagccattc gaagatggaa aattcgatct agtgtggtcg 600

atggagagtg gtgagcatat gcctgacaag gccaagtttg taaaagagtt ggtacgtgtg 660

gcggctccag gaggtaggat aataatagtg acatggtgcc atagaaatct atctgcgggg 720

gaggaagctt tgcagccgtg ggagcaaaac atcttggaca aaatctgtaa gacgttctat 780

ctcccggctt ggtgctccac cgatgattat gtcaacttgc ttcaatccca ttctctccag 840

gatattaagt gtgcggattg gtcagagaac gtagctcctt tctggcctgc ggttatacgg 900

actgcattaa catggaaggg ccttgtgtct ctgcttcgta gtggtatgaa aagtattaaa 960

ggagcattga caatgccatt gatgattgaa ggttacaaga aaggtgtcat taagtttggt 1020

atcatcactt gccagaagcc actctaa 1047

<210>41

<211>1095

<212>DNA

<213>稻

<400>41

atggcccacg ccgccgcggc cacgggcgca ctggcaccgc tgcatccact gctccgctgc 60

acgagccgtc atctctgcgc ctcggcttcc cctcgcgccg gcctctgcct ccaccaccac 120

cgccgccgcc gccgcagcag ccggaggacg aaactcgccg tgcgcgcgat ggcaccgacg 180

ttgtcctcgt cgtcgacggc ggcggcagct cccccggggc tgaaggaggg catcgcgggg 240

ctctacgacg agtcgtccgg cgtgtgggag agcatctggg gcgagcacat gcaccacggc 300

ttctacgacg ccggcgaggc cgcctccatg tccgaccacc gccgcgccca gatccgcatg 360

atcgaggaat ccctcgcctt cgccgccgtc cccggtgcag atgatgcgga gaagaaaccc 420

aaaagtgtag ttgatgttgg ctgtggcatt ggtggtagct caagatactt ggcgaacaaa 480

tacggagcgc aatgctacgg catcacgttg agtccggtgc aggctgaaag aggaaatgcc 540

ctcgcggcag agcaagggtt atcagacaag gtgcgtattc aagttggtga tgcattggag 600

cagccttttc ctgatgggca gtttgatctt gtctggtcca tggagagtgg cgagcacatg 660

ccagacaaac ggcagtttgt aagcgagctg gcacgcgtcg cagctcctgg ggcgagaata 720

atcattgtga cctggtgcca taggaacctc gagccatccg aagagtccct gaaacctgat 780

gagctgaatc tcctgaaaag gatatgcgat gcatattatc tcccagactg gtgctctcct 840

tctgattatg tcaaaattgc cgagtcactg tctcttgagg atataaggac agctgattgg 900

tcagagaacg tcgccccatt ctggcctgcg gttataaaat cagcattgac atggaaaggt 960

ttaacttctc tgctaagaag tgggtggaag acgataagag gtgcaatggt gatgcctctg 1020

atgatcgaag gatacaagaa agggctcatc aaattcacca tcatcacctg tcgcaagccc 1080

gaaacaacgc agtag 1095

<210>42

<211>1059

<212>DNA

<213>玉米

<400>42

atggctcacg cggcgctgct ccattgctcc cagtcctcca ggagcctcgc agcctgccgc 60

cgcggcagcc actaccgcgc cccttcgcac gtcccgcgcc actcccgccg tctccgacgc 120

gccgtcgtca gcctgcgtcc gatggcctcg tcgacggctc aggcccccgc gacggcgccg 180

ccgggtctga aggagggcat cgcggggctg tacgacgagt cgtcggggct gtgggagaac 240

atctggggcg accacatgca ccacggcttc tacgactcga gcgaggccgc ctccatggcc 300

gatcaccgcc gcgcccagat ccgcatgatc gaggaggcgc tcgccttcgc cggtgtccca 360

gcctcagatg atccagagaa gacaccaaaa acaatagtcg atgtcggatg tggcattggt 420

ggtagctcaa ggtacttggc gaagaaatac ggagcgcagt gcactgggat cacgttgagc 480

cctgttcaag ccgagagagg aaatgctctc gctgcagcgc aggggttgtc ggatcaggtt 540

actctgcaag ttgctgatgc tctggagcaa ccgtttcctg acgggcagtt cgatctggtg 600

tggtccatgg agagtggcga gcacatgccg gacaagagaa agtttgttag tgagctagca 660

cgcgtggcgg ctcctggagg gacaataatc atcgtgacat ggtgccatag gaacctggat 720

ccatccgaaa cctcgctaaa gcccgatgaa ctgagcctcc tgaggaggat atgcgacgcg 780

tactacctcc cggactggtg ctcaccttca gactatgtga acattgccaa gtcactgtct 840

ctcgaggata tcaagacagc tgactggtcg gagaacgtgg ccccgttttg gcccgccgtg 900

ataaaatcag cgctaacatg gaagggcttc acctctctgc tgacgaccgg atggaagacg 960

atcagaggcg cgatggtgat gccgctaatg atccagggct acaagaaggg gctcatcaaa 1020

ttcaccatca tcacctgtcg caagcctgga gccgcgtag 1059

<210>43

<211>1038

<212>DNA

<213>陆地棉

<400>43

atggctgccg cgttacaatt acaaacacac ccttgcttcc atggcacgtg ccaactctca 60

cctccgccac gaccttccgt ttccttccct tcttcctccc gctcgtttcc atctagcaga 120

cgttccctgt ccgcgcatgt gaaggcggcg gcgtcgtctt tgtccaccac caccttgcag 180

gaagggatag cggagtttta cgatgagtcg tcggggattt gggaagacat atggggtgac 240

catatgcacc atggatatta cgagccgggt tccgatattt cgggttcaga tcatcgtgcc 300

gctcagattc gaatggtcga agaatcgctc cgttttgctg gaatatcaga ggacccagca 360

aacaggccca agagaatagt tgatgttggg tgtgggatag gaggcagttc taggtatcta 420

gcaaggaaat atggggcaaa atgccaaggc attactttga gccctgttca agctggaaga 480

gccaatgctc ttgctaatgc tcaaggacta gcagaacagg tttgttttga agttgcagat 540

gccttgaacc aaccattccc tgatgaccaa tttgatcttg tttggtctat ggaaagcgga 600

gaacacatgc ctgacaaacc caagtttgtt aaagagctgg tgcgagtggc agctccagga 660

ggcacaataa tagtagtgac atggtgccat agggatcttg gtccatctga agagtctttg 720

cagccatggg agcaaaagct tttaaacaga atatgtgatg cttactattt accagagtgg 780

tgttctactt ctgattatgt caaattattt cagtccctat ctctccagga tataaaggca 840

ggagactgga ctgagaatgt agcacccttt tggccagcag tgatacgttc agcattgaca 900

tggaagggct tcacatcgct gctacgaagt ggattaaaaa caataaaagg tgcactggtg 960

atgccattga tgatcgaagg tttccagaaa ggggtgataa agtttgccat cattgcttgc 1020

cggaagccag ctgagtag 1038

<210>44

<211>1131

<212>DNA

<213>pulcherrima萼距花

<400>44

atgccgataa catctatttc cgcaaaccaa aggccattct tcccctcacc ttatagaggc 60

agctccaaga acatggcacc gcccgaactg gctcagtcgc aagtacctat gggaagtaac 120

aagagcaaca agaaccacgg cttggtcggt tcggtttctg gttggagaag gatgtttggg 180

acatgggcta ctgccgacaa gactcagagt accgatacgt ctaatgaagg cgtggttagt 240

tacgatactc aggtcttgca gaagggtata gcggagttct atgacgagtc gtcgggtata 300

tgggaggata tatggggaga tcacatgcat catggctact atgatggttc cactcctgtc 360

tccctcccag accatcgctc tgcgcagatc cgaatgattg acgaggctct ccgctttgcc 420

tcggttcctt caggagaaga agatgagtcc aagtctaaga ttccaaagag gatagtggat 480

gtcgggtgtg ggataggggg aagctccaga tacctggcta gaaaatatgg cgccgagtgt 540

cggggcatca ctctcagtcc tgtccaggct gagaggggca attcacttgc acggtctcaa 600

ggtctttctg acaaggtctc ctttcaagtc gccgatgctt tggcacagcc atttcccgat 660

ggacagtttg atttggtctg gtccatggag agcggggaac acatgcccga caagagcaag 720

tttgtcaatg agctagtaag agtagcagct ccgggtggca cgataataat tgtcacatgg 780

tgccatagag atctcaggga agacgaagat gcgctgcagc ctcgggagaa agagatattg 840

gacaagatat gcaacccctt ttatcttccc gcctggtgtt ctgctgccga ctatgttaag 900

ttgctccagt cacttgatgt cgaggacatt aaatctgcgg actggactcc atatgttgcc 960

ccattttggc cagctgtgct gaagtccgct ttcactataa agggcttcgt gtctctattg 1020

aggagcggaa tgaagaccat aaagggagca tttgcaatgc cgctgatgat cgaaggatac 1080

aagaaaggtg tcatcaagtt ttccatcatc acatgccgta agcccgaata g 1131

<210>45

<211>2045

<212>DNA

<213>欧洲油菜

<400>45

atgaaagcga ctctcgcacc ctcctctctc ataagcctcc ccaggcacaa agtatcttct 60

ctccgttcac cgtcgcttct ccttcagtcc caacggccat cctcagcctt aatgacgacg 120

acgacggcat cacgtggaag cgtggctgtg acggctgctg ctacctcctc cgttgaggcg 180

ctgcgggaag gaatagcgga attctacaac gagacgtcgg gattatggga ggagatttgg 240

ggagatcata tgcatcacgg cttctacgat cctgattcct ctgttcaact ttcagattcc 300

ggtcaccggg aagctcagat ccggatgatc gaagagtctc tacgtttcgc cggcgttact 360

ggttcgcttc tcatgctata cagttagagt ttgattcgtt gtttgttatg aatgataaac 420

ctacacatga acactttcta gatttattat aaacattctt tttgaactta tattataaac 480

aattcttaca aacaaaatgc tctttgaact cttaaaaata tataacaatg gtttagtttt 540

gatttgtcgg taagagaaat gagtagggat gtttgaagcc agataaagcc tttcttttat 600

ccctggggag aggcttacag taagccacgt cccatccaga agcagaccca ttccctaact 660

aggctggatg atgataaata agttcttcct catttcaaga ttaagaaaac aatctaaact 720

gaaataataa cgcgcagtcg gtgaaaatat ctttatgctt gggattgttg ttgttattat 780

taatttatat tataaacaca tgaccttttt aaagaagagg agaaaaagat aaagagagta 840

gtggatgttg ggtgtgggat cggcggaagc tcaaggtata ttgcctctaa atttggtgcc 900

gaatgcattg gcatcacact cagtcccgtt caagccaaga gagccaatga tctcgccgcc 960

gctcaatcac tctctcataa ggtgtcttct tgtacattcg accatttttt tctgcggaat 1020

ctgagctaac tgagacgcca ctggaccagg tttccttcca agttgcagat gcactggagc 1080

aaccatttga agatggtata ttcgatcttg tgtggtcaat ggaaagcggt gagcatatgc 1140

ctgacaaggc caaggtatac tacctagctc accataatct ttatactaga tttagtagac 1200

aatatccatc ttttggatgt caatgatgtc cattaatttt taaataaaca aaataaaaaa 1260

tgagagtaaa attttttttt gtcaaactta tctaataaat attatgtaat aataccacgt 1320

ttttctattt aattatggca tggtttcttt tttttttgtc taaaaaaaat tgtagtatct 1380

gttagaaaac agaatctaag tatgatattt ttgaaactca ttcagtcttc gttgtggaag 1440

tatatttacc gtgtgtgcga aatgagtgta gttcgtgaag gaattggtac gtgtggcggc 1500

tccaggagga aggataataa tagtgacatg gtgccacaga aatctatctc caggggaaga 1560

ggctttgcag ccatgggagc agaacctctt ggacagaatc tgcaaaacat tttatctccc 1620

agcctggtgc tccacctcgg attatgtcga tttgcttcag tccctctcgc tccaggttat 1680

tatatttctc acgctccaat tgctaaaatt agtacttgga gctagttaag tagtgtctca 1740

aatatatgtg tgtttgtagg atattaagtg tgcagattgg tcagagaacg tagctccttt 1800

ctggccggcg gttatacgaa ccgcattaac gtggaagggc cttgtgtctc tgcttcgtag 1860

tggtatgttt ccgcaatgtt gttcacattc atgattttta taagattaga actaaggttg 1920

ttgggtgtcg gaaacgcaca ggtatgaaga gtataaaagg agcattgaca atgccattga 1980

tgattgaagg gtacaagaaa ggtgtcatta agtttggcat catcacttgc cagaagcctc 2040

tctaa 2045

<210>46

<211>2973

<212>DNA

<213>欧洲油菜

<400>46

atgaaagcga cactcgcacc accctcctct ctcataagcc tccccaggca caaagtatct 60

tccctccgtt caccgtcgct tctccttcag tcccaacggc gatcctcagc cttaatgacg 120

acgacggcat cacgtggaag cgtggctgtg acggctgctg ctacctcctc cgctgaggcg 180

ctgcgagaag gaatagcgga attctacaac gagacgtcgg gattatggga ggagatttgg 240

ggagatcata tgcatcacgg cttctacgat cccgattcct ctgttcaact ttcagattcc 300

ggtcaccggg aagctcagat ccggatgatt gaagagtctc tacgtttcgc cggcgttact 360

ggttcgcttc tcatgctcta cacttgagtt tgatacgttg tttattataa acattttttt 420

gaacttttat tataaacaat tcttacaaac aaattactct ttgaactctt taaaatctat 480

aacaaaggtt tagttttact ttttatttgt tgttggtaac agaaatgagt agggatgttt 540

gaagtcagat atagcctttc tgtttatccc ttgggaagaa aggcttacag taagccacgt 600

cccatccaga agcagaccca ttccctaact aatcattttt atgaacaatt tgtaacacta 660

ttattcctag atattttttt tttacgttta gttaccctaa ctctttgtat ataagacaag 720

aggtgatttt tcacattata tatcaaaaca tagacatagt ttttttgaga aaatatatca 780

tacatagttg taacttagaa ttatatattt ttgagaaaaa aactcagtaa taattttctt 840

ataattattc atagttttat atttattaat aataagattt tgtaagctct ttttgaaact 900

attatggata atgaataagt tccccatttc aagattaaga aaacaattta aactgaaata 960

ataatgcgca ttcggtgaaa atatctttct gcttgggatt gttgttgtta atctatatta 1020

ttaaaactga agtacatttt ggtactgttt ggaaacttag atagtagatt aaatgaaaat 1080

tgtttggaaa caaggatagc agattaaata tttttttatt tacatattta gtcactgtat 1140

ttctttctca tttacagatt ctgtcgtttg gaaacttgga tagcagatta aatgaaaaat 1200

gtttggaaac acagttaaca tattaaatat ctatttttat ttcatattta gccattgcat 1260

ttctttctta tttacaaatc tgccacttca cttaaaataa aaaaattaaa ttaattacaa 1320

tgaattgtta tttctttttg ctgaaaataa aaacgcaaac tgcaatatat agtatatatt 1380

aatctgctac aatacaattt tcaagaaaac caaatatcat aaaattaata ataatttata 1440

aaaacctaca gtaaaaaaat aaatcatttt taaataaata aacaaaaaaa atcaataggt 1500

tgatatatga atattacaat tacatcaaat tgcatcaagt tataaaatta taaatataat 1560

attacgtaca aataaaaatt attatcaaac atctatttta taatataata tattctactc 1620

taaatatatt tacaaaacat aaaaatataa atggacattt tataaaatca atggtttata 1680

agtttacatt gaacgcaagt taaattccaa catccgcgcg gggcgcgggt caagatctag 1740

tattaattta tattataaac acatgacttt ttttaaagaa gaggagaaaa agataaagag 1800

agtggtggat gttgggtgtg ggatcggagg aagctcaagg tatattgcct ctaaatttgg 1860

tgccgaatgc attggcatca cactcagtcc cgttcaagcc aagagagcaa atgatctcgc 1920

caccgctcaa tcactctctc ataaggtgtc ttctcgtaca ttcgaccatt ctttctgcgg 1980

ataatctgat ctaactgaga cgccattgga ccaggtttcc ttccaagttg cagatgcatt 2040

ggaccaacca tttgaagatg gtatatccga tcttgtttgg tcaatggaaa gcggtgagca 2100

tatgcctgac aaggccaagg tatactagct cagcataact tttatactag atttactaga 2160

caatatctat cttttcatgt caatgatgtc caataatttt aaaataaaca aaagaaggat 2220

gtgagggtaa aattttgtca aatttatata acaacacgtt ttctatttag ttatgtcatg 2280

gtttcttttt gtctaaaaaa ttttaggcag agtttacaaa aagaaaattg tagtatctgt 2340

tcgaaaacag aatcttagtg tggtatttta gaaactcatt cagtcttcct tgtggaagca 2400

tatttactgt gtgtgcgaaa tgagtgtagt tcgtgaagga attggtacgt gtgacggctc 2460

caggaggaag gataataata gtgacatggt gccacagaaa tctatctcaa ggggaagaat 2520

ctttgcagcc atgggagcag aacctcttgg acagaatctg caaaacattt tatctcccgg 2580

cctggtgctc caccactgat tatgtcgagt tgcttcaatc cctctcgctc caggttatta 2640

tatttctcac gctccgatgc taaaatcagt aagtattgtc tcaaatatat gtgtgtttgt 2700

aggatattaa gtatgcagat tggtcagaga acgtagctcc tttctggccg gcggttatac 2760

gaaccgcatt aacgtggaag ggccttgtgt ctctgcttcg tagtggtatg tttccgcaat 2820

gttgtttaca ttcatgattc caaatgttta taagattaga aacatacagg tatgaagagt 2880

ataaaaggag cattgacaat gccattgatg attgaagggt acaagaaagg tgtcattaag 2940

tttggcatca tcacttgcca gaagcctcta taa 2973

<210>47

<211>933

<212>DNA

<213>番茄

<400>47

atggctagtg ttgctgcgat gaatgctgtg tcttcgtcat ctgtagaagt tggaatacag 60

aatcaacagg agctgaaaaa aggaattgca gatttatatg atgagtcttc tgggatttgg 120

gaagatattt ggggtgacca tatgcatcat ggatattatg aacctaaatc ctctgtggaa 180

ctttcagatc atcgtgctgc tcagatccgt atgattgaac aggctctaag ttttgctgct 240

atttctgaag atccagcgaa gaaaccaacg tccatagttg atgttggatg tggcatcggt 300

ggcagttcta ggtaccttgc aaagaaatat ggcgctacag ctaaaggtat cactttgagt 360

cctgtacaag cagagagggc tcaagctctt gctgatgctc aaggattagg tgataaggtt 420

tcatttcaag tagcagacgc cttgaatcag ccttttccag atgggcaatt cgacttggtt 480

tggtccatgg agagtggaga acacatgccg aacaaagaaa agtttgttgg cgaattagct 540

cgagtggcag caccaggagg cacaatcatc cttgtcacat ggtgccacag ggacctttcc 600

ccttcggagg aatctctgac tccagaggag aaagagctgt taaataagat atgcaaagcc 660

ttctatcttc cggcttggtg ttccactgct gattatgtga agttacttca atccaattct 720

cttcaggata tcaaggcaga agactggtct gagaatgttg ctccattttg gccagcagtc 780

ataaagtcag cactgacatg gaagggcttc acatcagtac tacgcagtgg atggaagaca 840

atcaaagctg cactggcaat gccactgatg attgaaggat acaagaaagg tctcatcaaa 900

tttgccatca tcacatgtcg aaaacctgaa taa 933

<210>48

<211>909

<212>DNA

<213>大豆

<400>48

atgtcggtgg agcagaaagc agcagggaag gaggaggagg gaaaactgca gaagggaatt 60

gcagagttct acgacgagtc gtctggcata tgggagaaca tttggggcga tcacatgcac 120

cacggctttt atgacccgga ttccaccgtt tctgtttctg atcatcgcgc tgctcagatc 180

cgaatgatcc aagaatctct tcgttttgcc tctctgcttt ctgagaaccc ttctaaatgg 240

cccaagagta tagttgatgt tgggtgtggc atagggggca gctccagata cctggccaag 300

aaatttggag caacgagcgt aggcattact ctgagtcctg ttcaagctca aagagcaaat 360

gctcttgctg ctgctcaagg attggctgat aaggtttcct ttcaggttgc tgacgctcta 420

cagcaaccat tctctgacgg ccagtttgat ctggtgtggt ccatggagag tggagagcat 480

atgcctgaca aagctaagtt tgttggagag ttagctcggg tagcagcacc aggtgccact 540

ataataatag taacatggtg ccacagggat cttggccctg acgaacaatc cttacatcca 600

tgggagcaag atctcttaaa gaagatttgc gatgcatatt acctccctgc ctggtgctca 660

acttctgatt atgttaagtt gctccaatcc ctgtcacttc aggacatcaa gtcagaagat 720

tggtctcgct ttgttgctcc attttggcca gcagtgatac gctcagcctt cacatggaag 780

ggtctaactt cactcttgag cagtggacaa aaaacgataa aaggagcttt ggctatgcca 840

ttgatgatag agggatacaa gaaagatcta attaagtttg ccatcattac atgtcgaaaa 900

cctgaataa 909

<210>49

<211>1053

<212>DNA

<213>大豆

<400>49

atggccaccg tggtgaggat cccaacaatc tcatgcatcc acatccacac gttccgttcc 60

caatcccctc gcactttcgc cagaatccgg gtcggaccca ggtcgtgggc tcctattcgg 120

gcatcggcag cgagctcgga gagaggggag atagtattgg agcagaagcc gaagaaggag 180

gaggagggga aactgcagaa gggaatcgca gagttctacg acgagtcgtc tggcttatgg 240

gagaacattt ggggcgacca catgcaccat ggcttttatg acccggattc cactgtttct 300

gtttctgatc atcgcgctgc tcagatccga atgatccaag agtctcttcg ctttgcctct 360

gtttctgagg agcgtagtaa atggcccaag agtatagttg atgttgggtg tggcataggt 420

ggcagctcca gatacctggc caagaaattt ggagcaacca gcgtaggcat tactctgagt 480

cctgttcaag ctcaaagagc aaatgctctt gctgctgctc aaggattggc tgataaggtt 540

tcctttcagg ttgctgacgc tctacagcaa ccattctctg acggccagtt tgatctggtg 600

tggtccatgg agagtggaga gcatatgcct gacaaagcta agtttgttgg agagttagct 660

cgggtagcag caccaggtgc cactataata atagtaacat ggtgccacag ggatcttggc 720

cctgacgaac aatccttaca tccatgggag caagatctct taaagaagat ttgcgatgca 780

tattaccttc ctgcctggtg ctcaacttct gattatgtta agttgctcca atccctgtca 840

cttcaggaca tcaagtcaga agattggtct cgctttgttg ctccattttg gccagcagtg 900

atacgctcag ccttcacatg gaagggtcta acttcactct tgagcagtgg acttaaaacc 960

ataaaaggag ctttggctat gccattgatg atagagggat acaagaaaga tctaattaag 1020

tttgccatca ttacatgtcg aaaacctgaa taa 1053

<210>50

<211>1053

<212>DNA

<213>大豆

<400>50

atggccaccg tggtgaggat cccaacaatc tcatgcatcc acatccacac gttccgttcc 60

caatcccctc gcactttcgc cagaatccgg gtcggaccca ggtcgtgggc tcctattcgg 120

gcatcggcag cgagctcgga gagaggggag atagtattgg agcagaagcc gaagaaggat 180

gacaaggaga aactgcagaa gggaatcgca gagttttacg acgagtcttc tggcttatgg 240

gagaacattt ggggcgacca catgcaccat ggcttttatg acccggattc cactgtttcg 300

ctttcggatc atcgtgctgc tcagatccga atgatccaag agtctcttcg ctttgcctct 360

gtttctgagg agcgtagtaa atggcccaag agtatagttg atgttgggtg tggcataggt 420

ggcagctcca gatacctggc caagaaattt ggagcaacca gtgtaggcat cactctgagt 480

cctgttcaag ctcaaagagc aaatgctctt gctgctgctc aaggattggc tgataaggtt 540

tcctttcagg ttgctgacgc tctacagcaa ccattctctg acggccagtt tgatctggtg 600

tggtccatgg agagtggaga gcatatgcct gacaaagcta agtttgttgg agagttagct 660

cgggtagcag caccaggtgc cactataata atagtaacat ggtgccacag ggatcttggc 720

cctgacgaac aatccttaca tccatgggag caagatctct taaagaagat ttgcgatgca 780

tattacctcc ctgcctggtg ctcaacttct gattatgtta agttgctcca atccctgtca 840

cttcaggaca tcaagtcaga agattggtct cgctttggtg ctccattttg gccagcagtg 900

atacgctcag ccttcacatg gaagggtcta acttcactct tgagcagtgg ccaaaaaacg 960

ataaaaggag ctttggctat gccattgatg atagagggat acaagaaaga tctaattaag 1020

tttgccatca ttacatgtcg aaaacctgaa taa 1053

<210>51

<211>933

<212>DNA

<213>万寿菊

<400>51

gcccttagcg tggtcgcggc cgaggtacca gttacggtta ctccggcgac gacgaaggcg 60

gaggatgtgg agctgaagaa aggaattgca gagttctacg atgaatcgtc ggagatgtgg 120

gagaatatat ggggagaaca catgcatcat ggatactata acactaatgc cgttgttgaa 180

ctctccgatc atcgttctgc tcagatccgt atgattgaac aagccctact tttcgcatct 240

gtttcagatg atccagtaaa gaaacctaga agcatcgttg atgttgggtg tggcataggt 300

ggtagctcaa ggtatctggc aaagaaatac gaagctgaat gccatggaat cactctcagc 360

cctgtgcaag ctgagagagc tcaagctcta gctgctgctc aaggattggc cgataaggct 420

tcatttcaag ttgctgatgc tttagaccaa ccatttcctg atggaaagtt tgatctggtc 480

tggtcaatgg agagtggtga acacatgcct gacaaactaa agtttgttag tgagttggtt 540

cgggttgctg ccccaggagc cacgattatc atagttacat ggtgccatag ggatctttct 600

cctggtgaaa agtcccttcg acccgatgaa gaaaaaatct tgaaaaagat ttgttccagc 660

ttttatcttc ctgcttggtg ttcaacatct gattatgtaa aattactaga gtccctttct 720

cttcaggaca tcaaagctgc agactggtca gcaaacgtgg ctccattttg gcctgctgta 780

ataaaaacag cattatcttg gaagggcatt acttcgctac ttcgtagtgg atggaagtca 840

ataagagggg caatggtaat gccattgatg attgaaggat ttaagaagga tataatcaaa 900

ttctccatca tcacatgcaa aaagcctgaa taa 933

<210>52

<211>1230

<212>DNA

<213>两色蜀黍

<400>52

cgaacggcga gcagcaggag ggcgtcgcga acccttgggc ggcggatcgg tacccgtagg 60

cagccactac tactaccgcg ccccttcgca cgtcccgcgc cgctcccgcc cccgcggacg 120

cggcggcgtc gtcagcctgc gtccgatggc ctcgtcgacg gcggctcagc cccccgcgcc 180

ggcgcccccg ggcctgaagg agggcatcgc ggggctgtac gacgagtctt cggggctgtg 240

ggagaacatc tggggcgacc acatgcacca cggcttctac gactcgggcg aggccgcgtc 300

catggccgac caccgacgcg cccagatccg catgatcgag gaggcgctcg ccttcgccgc 360

cgtcccatcc ccagatgatc cggagaaggc accaaaaacc atagtagatg ttggatgtgg 420

cattggtggt agctcaaggt acttggctaa gaaatacgga gcacagtgca aggggatcac 480

attgagccct gttcaagctg aaagaggaaa tgctcttgct acagcgcagg ggttgtcgga 540

tcaggttact ctgcaagttg ctgatgctct ggagcaaccg tttcctgatg ggcagtttga 600

tctggtatgg tccatggaga gtggcgagca catgccggac aagagaaagt ttgttagtga 660

gctggcacgc gtcgctgctc ctggagggac aataatcatc gtgacatggt gccataggaa 720

cctcgaacca tctgagactt cgctaaaacc cgatgaactg agtctcttga agaggatttg 780

cgatgcgtac tacctcccag actggtgctc accttcagac tatgtgaaca tcgccaaatc 840

actgtctctg gaggatatca aggcagctga ttggtcagag aatgtggccc cattttggcc 900

cgctgtgata aaatcagcac taacatggaa gggcctcacc tctctactga caagcggatg 960

gaagacgatc agaggggcga tggtgatgcc gctgatgatc caaggttaca agaaggggct 1020

catcaaattc accatcatca cctgtcgcaa gcctggagca gcgtaggtga ccaaggggca 1080

gaagttactg tcaaagcacc tctgctaagt ccaataatgt agatccatgg ccccatcacc 1140

gtctattgta ctgtactgta ctgtaccaga atgaacagtc tcctgggaca tgttttccaa 1200

ttgccatgac atgtcaaatg atcttctacc 1230

<210>53

<211>843

<212>DNA

<213>念珠藻

<400>53

atgagtgcaa cactttacca gcaaattcag caattttacg atgcttcatc tggtctgtgg 60

gaacagatat ggggcgaaca catgcaccac ggctattacg gcgctgatgg tacccagaaa 120

aaagaccgcc gtcaggctca aattgattta atcgaagaat tgcttaattg ggcaggggta 180

caagcagcag aagatatact agatgtgggt tgtggaattg gcggtagttc tttatacctg 240

gcgcaaaagt ttaatgctaa agctacaggg attacattga gtcctgtaca agctgcaaga 300

gcaacagaac gcgcattgga agctaatttg agtctgagaa cacagttcca agtcgctaat 360

gctcaagcaa tgccctttgc tgacgattct tttgacttgg tttggtcgct ggaaagtggc 420

gaacacatgc cagataaaac caagtttctt caggagtgct atcgagtact gaagcctggt 480

ggcaagttaa ttatggtgac ttggtgtcat cgaccaactg atgaatctcc attaacggca 540

gatgaggaaa agcacttgca ggatatttat cgggtgtatt gtttgcctta tgtgatttct 600

ttgccagagt atgaagcgat cgcacatcaa ctaccattac ataatatccg cactgctgat 660

tggtcaactg ctgtcgcccc cttttggaat gtggtaattg attctgcatt cactccccaa 720

gcgctttggg gtttactaaa tgctggttgg actaccattc aaggggcatt atcactggga 780

ttaatgcgtc gcggttatga acgtgggtta attcggtttg gcttactgtg cggcaataag 840

tag 843

<210>54

<211>843

<212>DNA

<213>鱼腥草

<400>54

atgagtgcaa cactttacca acaaattcag caattttacg atgcttcctc tgggctgtgg 60

gaagagattt ggggcgaaca tatgcaccac ggctattatg gtgcagacgg tactgaacaa 120

aaaaaccgcc gtcaggcgca aattgattta attgaagaat tactcacttg ggcaggagta 180

caaacagcag aaaatatact agatgtgggt tgtggtattg gtggtagttc tctgtatttg 240

gcaggaaagt tgaatgctaa agctacagga attaccctga gtccagtgca agccgctaga 300

gccacagaaa gagccaagga agctggttta agtggtagaa gtcagttttt agtggcaaat 360

gcccaagcaa tgccttttga tgataattct tttgacttgg tgtggtcgct agaaagtggc 420

gaacatatgc cagataaaac caagtttttg caagagtgtt atcgagtctt gaaaccgggc 480

ggtaagttaa tcatggtgac atggtgtcat cgtcccactg ataaaacacc actgacggct 540

gatgaaaaaa aacacctaga agatatttat cgggtgtatt gtttgcctta tgtaatttcg 600

ttgccggagt atgaagcgat cgcacgtcaa ctaccattaa ataatatccg caccgccgac 660

tggtcgcaat ccgtcgccca attttggaac atagtcatcg attccgcctt taccccccaa 720

gcaatattcg gcttactccg cgcaggttgg actaccatcc aaggagcctt atcactaggc 780

ttaatgcgtc gcggctatga gcgcgggtta attcggtttg ggttgctttg tggggataag 840

tga 843

<210>55

<211>40

<212>DNA

<213>引物

<400>55

tgtaaaacga cggccagttg ctgaaagttg aaaagagcaa 40

<210>56

<211>40

<212>DNA

<213>引物

<400>56

caggaaacag ctatgaccca atttgatcaa tgttccacga 40

<210>57

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>57

tgtaaaacga cggccagtag ctatgcggat tgatggtc 38

<210>58

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>58

caggaaacag ctatgacctc ctcctgggaa ctctagca 38

<210>59

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>59

tgtaaaacga cggccagttg ctgacttgcg agtttttg 38

<210>60

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>60

caggaaacag ctatgacccc tgtcaacaac cccttctc 38

<210>61

<211>39

<212>DNA

<213>引物

<400>61

tgtaaaacga cggccagtcc acaagagggg tttacaatg 39

<210>62

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>62

caggaaacag ctatgaccac ccaaccttct ggctctct 38

<210>63

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>63

tgtaaaacga cggccagtgg tctttgggaa cgatctga 38

<210>64

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>64

caggaaacag ctatgaccag ggaagcgtac agggttct 38

<210>65

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>65

tgtaaaacga cggccagtcc tcttgagctg aacgtcct 38

<210>66

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>66

caggaaacag ctatgaccgg cggaactggt ttcactac 38

<210>67

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>67

tgtaaaacga cggccagttg tcagcataat cggttgga 38

<210>68

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>68

caggaaacag ctatgacctc cccaaaggtt taggttcc 38

<210>69

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>69

tgtaaaacga cggccagtaa gcctccttct tgtgctga 38

<210>70

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>70

caggaaacag ctatgacccg acttttccct tccatttg 38

<210>71

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>71

tgtaaaacga cggccagttg gaggttcggg taactgag 38

<210>72

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>72

caggaaacag ctatgacccatcc tctcgct agcaggtc 38

<210>73

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>73

tgtaaaacga cggccagtgg aaccagggga acctaaac 38

<210>74

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>74

caggaaacag ctatgaccgc cgtgagaaac agactcct 38

<210>75

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>75

tgtaaaacga cggccagtca aatggaaggg aaaagtcg 38

<210>76

<211>38

<212>DNA

<213>引物

<400>76

caggaaacag ctatgaccga tccaaagaga acccagca 38

<210>77

<211>74

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>77

gggacaagtt tgtacaaaaa agcaggctta gaaggagata gaaccatggc gacaagatgc 60

agcagcagca gcag 74

<210>78

<211>62

<212>DNA

<213>人工引物

<400>78

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtc ctgcaggtca gatgggttgg tctttgggaa 60

cg 62

<210>79

<211>72

<212>DNA

<213>人工引物

<400>79

gggacaagtt tgtacaaaaa agcaggctta gaaggagata gaaccatgcg gctgaggtgc 60

gcggcgtcgt cg 72

<210>80

<211>61

<212>DNA

<213>人工引物

<400>80

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtc ctgcaggtta gatcggcatg cctttgggca 60

c 61

<210>81

<211>72

<212>DNA

<213>人工引物

<400>81

gggacaagtt tgtacaaaaa agcaggctta gaaggagata gaaccatgag gctgcgatgc 60

gcggcgtcgt cg 72

<210>82

<211>62

<212>DNA

<213>人工引物

<400>82

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtc ctgcaggtca gattggcatg ccttttggca 60

cg 62

<210>83

<211>71

<212>DNA

<213>人工引物

<400>83

gggacaagtt tgtacaaaaa agcaggctta gaaggagata gaaccatggt acccaagtgt 60

agtgtctcgg c 71

<210>84

<211>61

<212>DNA

<213>人工引物

<400>84

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtc ctgcaggtta gattggctga cctttgggaa 60

c 61

<210>85

<211>70

<212>DNA

<213>人工引物

<400>85

gggacaagtt tgtacaaaaa agcaggctta gaaggagata gaaccatgat ctttacatgc 60

agcgcgtcct 70

<210>86

<211>61

<212>DNA

<213>人工引物

<400>86

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtc ctgcaggtca tatgggctgg cctttcggta 60

c 61

<210>87

<211>72

<212>DNA

<213>人工引物

<400>87

gggacaagtt tgtacaaaaa agcaggctta gaaggagata gaaccatggc cccgaggtgc 60

agcttatcag cg 72

<210>88

<211>61

<212>DNA

<213>人工引物

<400>88

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtc ctgcaggtta gattggttga ccctctggta 60

c 61

<210>89

<211>65

<212>DNA

<213>引物

<400>89

ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggctg cggccgctga acaatggcct ctttgatgct 60

caacg 65

<210>90

<211>62

<212>DNA

<213>引物

<400>90

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtc ctgcaggtca gatgggttgg tctttgggaa 60

cg 62

<210>91

<211>348

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>91

Met Lys Ala Thr Leu Ala Ala Pro Ser Ser Leu Thr Ser Leu Pro Tyr

1 5 10 15

Arg Thr Asn Ser Ser Phe Gly Ser Lys Ser Ser Leu Leu Phe Arg Ser

20 25 30

Pro Ser Ser Ser Ser Ser Val Ser Met Thr Thr Thr Arg Gly Asn Val

35 40 45

Ala Val Ala Ala Ala Ala Thr Ser Thr Glu Ala Leu Arg Lys Gly Ile

50 55 60

Ala Glu Phe Tyr Asn Glu Thr Ser Gly Leu Trp Glu Glu Ile Trp Gly

65 70 75 80

Asp His Met His His Gly Phe Tyr Asp Pro Asp Ser Ser Val Gln Leu

85 90 95

Ser Asp Ser Gly His Lys Glu Ala Gln Ile Arg Met Ile Glu Glu Ser

100 105 110

Leu Arg Phe Ala Gly Val Thr Asp Glu Glu Glu Glu Lys Lys Ile Lys

115 120 125

Lys Val Val Asp Val Gly Cys Gly Ile Gly Gly Ser Ser Arg Tyr Leu

130 135 140

Ala Ser Lys Phe Gly Ala Glu Cys Ile Gly Ile Thr Leu Ser Pro Val

145 150 155 160

Gln Ala Lys Arg Ala Asn Asp Leu Ala Ala Ala Gln Ser Leu Ser His

165 170 175

Lys Ala Ser Phe Gln Val Ala Asp Ala Leu Asp Gln Pro Phe Glu Asp

180 185 190

Gly Lys Phe Asp Leu Val Trp Ser Met Glu Ser Gly Glu His Met Pro

195 200 205

Asp Lys Ala Lys Phe Val Lys Glu Leu Val Arg Val Ala Ala Pro Gly

210 215 220

Gly Arg Ile Ile Ile Val Thr Trp Cys His Arg Asn Leu Ser Ala Gly

225 230 235 240

Glu Glu Ala Leu Gln Pro Trp Glu Gln Asn Ile Leu Asp Lys Ile Cys

245 250 255

Lys Thr Phe Tyr Leu Pro Ala Trp Cys Ser Thr Asp Asp Tyr Val Asn

260 265 270

Leu Leu Gln Ser His Ser Leu Gln Asp Ile Lys Cys Ala Asp Trp Ser

275 280 285

Glu Asn Val Ala Pro Phe Trp Pro Ala Val Ile Arg Thr Ala Leu Thr

290 295 300

Trp Lys Gly Leu Val Ser Leu Leu Arg Ser Gly Met Lys Ser Ile Lys

305 310 315 320

Gly Ala Leu Thr Met Pro Leu Met Ile Glu Gly Tyr Lys Lys Gly Val

325 330 335

Ile Lys Phe Gly Ile Ile Thr Cys Gln Lys Pro Leu

340 345

<210>92

<211>348

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>92

Met Lys Ala Thr Leu Ala Ala Pro Ser Ser Leu Thr Ser Leu Pro Tyr

1 5 10 15

Arg Thr Asn Ser Ser Phe Gly Ser Lys Ser Ser Leu Leu Phe Arg Ser

20 25 30

Pro Ser Ser Ser Ser Ser Val Ser Met Thr Thr Thr Arg Gly Asn Val

35 40 45

Ala Val Ala Ala Ala Ala Thr Ser Thr Glu Ala Leu Arg Lys Gly Ile

50 55 60

Ala Glu Phe Tyr Asn Glu Thr Ser Gly Leu Trp Glu Glu Ile Trp Gly

65 70 75 80

Asp His Met His His Gly Phe Tyr Asp Pro Asp Ser Ser Val Gln Leu

85 90 95

Ser Asp Ser Gly His Lys Glu Ala Gln Ile Arg Met Ile Glu Glu Ser

100 105 110

Leu Arg Phe Ala Gly Val Thr Asp Glu Glu Glu Glu Lys Lys Ile Lys

115 120 125

Lys Val Val Asp Val Gly Cys Gly Ile Gly Gly Ser Ser Arg Tyr Leu

130 135 140

Ala Ser Lys Phe Gly Ala Glu Cys Ile Gly Ile Thr Leu Ser Pro Val

145 150 155 160

Gln Ala Lys Arg Ala Asn Asp Leu Ala Ala Ala Gln Ser Leu Ala His

165 170 175

Lys Ala Ser Phe Gln Val Ala Asp Ala Leu Asp Gln Pro Phe Glu Asp

180 185 190

Gly Lys Phe Asp Leu Val Trp Ser Met Glu Ser Gly Glu His Met Pro

195 200 205

Asp Lys Ala Lys Phe Val Lys Glu Leu Val Arg Val Ala Ala Pro Gly

210 215 220

Gly Arg Ile Ile Ile Val Thr Trp Cys His Arg Asn Leu Ser Ala Gly

225 230 235 240

Glu Glu Ala Leu Gln Pro Trp Glu Gln Asn Ile Leu Asp Lys Ile Cys

245 250 255

Lys Thr Phe Tyr Leu Pro Ala Trp Cys Ser Thr Asp Asp Tyr Val Asn

260 265 270

Leu Leu Gln Ser His Ser Leu Gln Asp Ile Lys Cys Ala Asp Trp Ser

275 280 285

Glu Asn Val Ala Pro Phe Trp Pro Ala Val Ile Arg Thr Ala Leu Thr

290 295 300

Trp Lys Gly Leu Val Ser Leu Leu Arg Ser Gly Met Lys Ser Ile Lys

305 310 315 320

Gly Ala Leu Thr Met Pro Leu Met Ile Glu Gly Tyr Lys Lys Gly Val

325 330 335

Ile Lys Phe Gly Ile Ile Thr Cys Gln Lys Pro Leu

340 345

<210>93

<211>364

<212>PRT

<213>稻

<400>93

Met Ala His Ala Ala Ala Ala Thr Gly Ala Leu Ala Pro Leu His Pro

1 5 10 15

Leu Leu Arg Cys Thr Ser Arg His Leu Cys Ala Ser Ala Ser Pro Arg

20 25 30

Ala Gly Leu Cys Leu His His His Arg Arg Arg Arg Arg Ser Ser Arg

35 40 45

Arg Thr Lys Leu Ala Val Arg Ala Met Ala Pro Thr Leu Ser Ser Ser

50 55 60

Ser Thr Ala Ala Ala Ala Pro Pro Gly Leu Lys Glu Gly Ile Ala Gly

65 70 75 80

Leu Tyr Asp Glu Ser Ser Gly Val Trp Glu Ser Ile Trp Gly Glu His

85 90 95

Met His His Gly Phe Tyr Asp Ala Gly Glu Ala Ala Ser Met Ser Asp

100 105 110

His Arg Arg Ala Gln Ile Arg Met Ile Glu Glu Ser Leu Ala Phe Ala

115 120 125

Ala Val Pro Gly Ala Asp Asp Ala Glu Lys Lys Pro Lys Ser Val Val

130 135 140

Asp Val Gly Cys Gly Ile Gly Gly Ser Ser Arg Tyr Leu Ala Asn Lys

145 150 155 160

Tyr Gly Ala Gln Cys Tyr Gly Ile Thr Leu Ser Pro Val Gln Ala Glu

165 170 175

Arg Gly Asn Ala Leu Ala Ala Glu Gln Gly Leu Ser Asp Lys Val Arg

180 185 190

Ile Gln Val Gly Asp Ala Leu Glu Gln Pro Phe Pro Asp Gly Gln Phe

195 200 205

Asp Leu Val Trp Ser Met Glu Ser Gly Glu His Met Pro Asp Lys Arg

210 215 220

Gln Phe Val Ser Glu Leu Ala Arg Val Ala Ala Pro Gly Ala Arg Ile

225 230 235 240

Ile Ile Val Thr Trp Cys His Arg Asn Leu Glu Pro Ser Glu Glu Ser

245 250 255

Leu Lys Pro Asp Glu Leu Asn Leu Leu Lys Arg Ile Cys Asp Ala Tyr

260 265 270

Tyr Leu Pro Asp Trp Cys Ser Pro Ser Asp Tyr Val Lys Ile Ala Glu

275 280 285

Ser Leu Ser Leu Glu Asp Ile Arg Thr Ala Asp Trp Ser Glu Asn Val

290 295 300

Ala Pro Phe Trp Pro Ala Val Ile Lys Ser Ala Leu Thr Trp Lys Gly

305 310 315 320

Leu Thr Ser Leu Leu Arg Ser Gly Trp Lys Thr Ile Arg Gly Ala Met

325 330 335

Val Met Pro Leu Met Ile Glu Gly Tyr Lys Lys Gly Leu Ile Lys Phe

340 345 350

Thr Ile Ile Thr Cys Arg Lys Pro Glu Thr Thr Gln

355 360

<210>94

<211>352

<212>PRT

<213>玉蜀黍

<400>94

Met Ala His Ala Ala Leu Leu His Cys Ser Gln Ser Ser Arg Ser Leu

1 5 10 15

Ala Ala Cys Arg Arg Gly Ser His Tyr Arg Ala Pro Ser His Val Pro

20 25 30

Arg His Ser Arg Arg Leu Arg Arg Ala Val Val Ser Leu Arg Pro Met

35 40 45

Ala Ser Ser Thr Ala Gln Ala Pro Ala Thr Ala Pro Pro Gly Leu Lys

50 55 60

Glu Gly Ile Ala Gly Leu Tyr Asp Glu Ser Ser Gly Leu Trp Glu Asn

65 70 75 80

Ile Trp Gly Asp His Met His His Gly Phe Tyr Asp Ser Ser Glu Ala

85 90 95

Ala Ser Met Ala Asp His Arg Arg Ala Gln Ile Arg Met Ile Glu Glu

100 105 110

Ala Leu Ala Phe Ala Gly Val Pro Ala Ser Asp Asp Pro Glu Lys Thr

115 120 125

Pro Lys Thr Ile Val Asp Val Gly Cys Gly Ile Gly Gly Ser Ser Arg

130 135 140

Tyr Leu Ala Lys Lys Tyr Gly Ala Gln Cys Thr Gly Ile Thr Leu Ser

145 150 155 160

Pro Val Gln Ala Glu Arg Gly Asn Ala Leu Ala Ala Ala Gln Gly Leu

165 170 175

Ser Asp Gln Val Thr Leu Gln Val Ala Asp Ala Leu Glu Gln Pro Phe

180 185 190

Pro Asp Gly Gln Phe Asp Leu Val Trp Ser Met Glu Ser Gly Glu His

195 200 205

Met Pro Asp Lys Arg Lys Phe Val Ser Glu Leu Ala Arg Val Ala Ala

210 215 220

Pro Gly Gly Thr Ile Ile Ile Val Thr Trp Cys His Arg Asn Leu Asp

225 230 235 240

Pro Ser Glu Thr Ser Leu Lys Pro Asp Glu Leu Ser Leu Leu Arg Arg

245 250 255

Ile Cys Asp Ala Tyr Tyr Leu Pro Asp Trp Cys Ser Pro Ser Asp Tyr

260 265 270

Val Asn Ile Ala Lys Ser Leu Ser Leu Glu Asp Ile Lys Thr Ala Asp

275 280 285

Trp Ser Glu Asn Val Ala Pro Phe Trp Pro Ala Val Ile Lys Ser Ala

290 295 300

Leu Thr Trp Lys Gly Phe Thr Ser Leu Leu Thr Thr Gly Trp Lys Thr

305 310 315 320

Ile Arg Gly Ala Met Val Met Pro Leu Met Ile Gln Gly Tyr Lys Lys

325 330 335

Gly Leu Ile Lys Phe Thr Ile Ile Thr Cys Arg Lys Pro Gly Ala Ala

340 345 350

<210>95

<211>345

<212>PRT

<213>陆地棉

<400>95

Met Ala Ala Ala Leu Gln Leu Gln Thr His Pro Cys Phe His Gly Thr

1 5 10 15

Cys Gln Leu Ser Pro Pro Pro Arg Pro Ser Val Ser Phe Pro Ser Ser

20 25 30

Ser Arg Ser Phe Pro Ser Ser Arg Arg Ser Leu Ser Ala His Val Lys

35 40 45

Ala Ala Ala Ser Ser Leu Ser Thr Thr Thr Leu Gln Glu Gly Ile Ala

50 55 60

Glu Phe Tyr Asp Glu Ser Ser Gly Ile Trp Glu Asp Ile Trp Gly Asp

65 70 75 80

His Met His His Gly Tyr Tyr Glu Pro Gly Ser Asp Ile Ser Gly Ser

85 90 95

Asp His Arg Ala Ala Gln Ile Arg Met Val Glu Glu Ser Leu Arg Phe

100 105 110

Ala Gly Ile Ser Glu Asp Pro Ala Asn Arg Pro Lys Arg Ile Val Asp

115 120 125

Val Gly Cys Gly Ile Gly Gly Ser Ser Arg Tyr Leu Ala Arg Lys Tyr

130 135 140

Gly Ala Lys Cys Gln Gly Ile Thr Leu Ser Pro Val Gln Ala Gly Arg

145 150 155 160

Ala Asn Ala Leu Ala Asn Ala Gln Gly Leu Ala Glu Gln Val Cys Phe

165 170 175

Glu Val Ala Asp Ala Leu Asn Gln Pro Phe Pro Asp Asp Gln Phe Asp

180 185 190

Leu Val Trp Ser Met Glu Ser Gly Glu His Met Pro Asp Lys Pro Lys

195 200 205

Phe Val Lys Glu Leu Val Arg Val Ala Ala Pro Gly Gly Thr Ile Ile

210 215 220

Val Val Thr Trp Cys His Arg Asp Leu Gly Pro Ser Glu Glu Ser Leu

225 230 235 240

Gln Pro Trp Glu Gln Lys Leu Leu Asn Arg Ile Cys Asp Ala Tyr Tyr

245 250 255

Leu Pro Glu Trp Cys Ser Thr Ser Asp Tyr Val Lys Leu Phe Gln Ser

260 265 270

Leu Ser Leu Gln Asp Ile Lys Ala Gly Asp Trp Thr Glu Asn Val Ala

275 280 285

Pro Phe Trp Pro Ala Val Ile Arg Ser Ala Leu Thr Trp Lys Gly Phe

290 295 300

Thr Ser Leu Leu Arg Ser Gly Leu Lys Thr Ile Lys Gly Ala Leu Val

305 310 315 320

Met Pro Leu Met Ile Glu Gly Phe Gln Lys Gly Val Ile Lys Phe Ala

325 330 335

Ile Ile Ala Cys Arg Lys Pro Ala Glu

340 345

<210>96

<211>376

<212>PRT

<213>pulcherrima萼距花

<400>96

Met Pro Ile Thr Ser Ile Ser Ala Asn Gln Arg Pro Phe Phe Pro Ser

1 5 10 15

Pro Tyr Arg Gly Ser Ser Lys Asn Met Ala Pro Pro Glu Leu Ala Gln

20 25 30

Ser Gln Val Pro Met Gly Ser Asn Lys Ser Asn Lys Asn His Gly Leu

35 40 45

Val Gly Ser Val Ser Gly Trp Arg Arg Met Phe Gly Thr Trp Ala Thr

50 55 60

Ala Asp Lys Thr Gln Ser Thr Asp Thr Ser Asn Glu Gly Val Val Ser

65 70 75 80

Tyr Asp Thr Gln Val Leu Gln Lys Gly Ile Ala Glu Phe Tyr Asp Glu

85 90 95

Ser Ser Gly Ile Trp Glu Asp Ile Trp Gly Asp His Met His His Gly

100 105 110

Tyr Tyr Asp Gly Ser Thr Pro Val Ser Leu Pro Asp His Arg Ser Ala

115 120 125

Gln Ile Arg Met Ile Asp Glu Ala Leu Arg Phe Ala Ser Val Pro Ser

130 135 140

Gly Glu Glu Asp Glu Ser Lys Ser Lys Ile Pro Lys Arg Ile Val Asp

145 150 155 160

Val Gly Cys Gly Ile Gly Gly Ser Ser Arg Tyr Leu Ala Arg Lys Tyr

165 170 175

Gly Ala Glu Cys Arg Gly Ile Thr Leu Ser Pro Val Gln Ala Glu Arg

180 185 190

Gly Asn Ser Leu Ala Arg Ser Gln Gly Leu Ser Asp Lys Val Ser Phe

195 200 205

Gln Val Ala Asp Ala Leu Ala Gln Pro Phe Pro Asp Gly Gln Phe Asp

210 215 220

Leu Val Trp Ser Met Glu Ser Gly Glu His Met Pro Asp Lys Ser Lys

225 230 235 240

Phe Val Asn Glu Leu Val Arg Val Ala Ala Pro Gly Gly Thr Ile Ile

245 250 255

Ile Val Thr Trp Cys His Arg Asp Leu Arg Glu Asp Glu Asp Ala Leu

260 265 270

Gln Pro Arg Glu Lys Glu Ile Leu Asp Lys Ile Cys Asn Pro Phe Tyr

275 280 285

Leu Pro Ala Trp Cys Ser Ala Ala Asp Tyr Val Lys Leu Leu Gln Ser

290 295 300

Leu Asp Val Glu Asp Ile Lys Ser Ala Asp Trp Thr Pro Tyr Val Ala

305 310 315 320

Pro Phe Trp Pro Ala Val Leu Lys Ser Ala Phe Thr Ile Lys Gly Phe

325 330 335

Val Ser Leu Leu Arg Ser Gly Met Lys Thr Ile Lys Gly Ala Phe Ala

340 345 350

Met Pro Leu Met Ile Glu Gly Tyr Lys Lys Gly Val Ile Lys Phe Ser

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Ile Ile Thr Cys Arg Lys Pro Glu

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<210>97

<211>347

<212>PRT

<213>欧洲油菜

<400>97

Met Lys Ala Thr Leu Ala Pro Ser Ser Leu Ile Ser Leu Pro Arg His

1 5 10 15

Lys Val Ser Ser Leu Arg Ser Pro Ser Leu Leu Leu Gln Ser Gln Arg

20 25 30

Pro Ser Ser Ala Leu Met Thr Thr Thr Thr Ala Ser Arg Gly Ser Val

35 40 45

Ala Val Thr Ala Ala Ala Thr Ser Ser Val Glu Ala Leu Arg Glu Gly

50 55 60

Ile Ala Glu Phe Tyr Asn Glu Thr Ser Gly Leu Trp Glu Glu Ile Trp

65 70 75 80

Gly Asp His Met His His Gly Phe Tyr Asp Pro Asp Ser Ser Val Gln

85 90 95

Leu Ser Asp Ser Gly His Arg Glu Ala Gln Ile Arg Met Ile Glu Glu

100 105 110

Ser Leu Arg Phe Ala Gly Val Thr Glu Glu Glu Lys Lys Ile Lys Arg

115 120 125

Val Val Asp Val Gly Cys Gly Ile Gly Gly Ser Ser Arg Tyr Ile Ala

130 135 140

Ser Lys Phe Gly Ala Glu Cys Ile Gly Ile Thr Leu Ser Pro Val Gln

145 150 155 160

Ala Lys Arg Ala Asn Asp Leu Ala Ala Ala Gln Ser Leu Ser His Lys

165 170 175

Val Ser Phe Gln Val Ala Asp Ala Leu Glu Gln Pro Phe Glu Asp Gly

180 185 190

Ile Phe Asp Leu Val Trp Ser Met Glu Ser Gly Glu His Met Pro Asp

195 200 205

Lys Ala Lys Phe Val Lys Glu Leu Val Arg Val Ala Ala Pro Gly Gly

210 215 220

Arg Ile Ile Ile Val Thr Trp Cys His Arg Asn Leu Ser Pro Gly Glu

225 230 235 240

Glu Ala Leu Gln Pro Trp Glu Gln Asn Leu Leu Asp Arg Ile Cys Lys

245 250 255

Thr Phe Tyr Leu Pro Ala Trp Cys Ser Thr Ser Asp Tyr Val Asp Leu

260 265 270

Leu Gln Ser Leu Ser Leu Gln Asp Ile Lys Cys Ala Asp Trp Ser Glu

275 280 285

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290 295 300

Lys Gly Leu Val Ser Leu Leu Arg Ser Gly Met Lys Ser Ile Lys Gly

305 310 315 320

Ala Leu Thr Met Pro Leu Met Ile Glu Gly Tyr Lys Lys Gly Val Ile

325 330 335

Lys Phe Gly Ile Ile Thr Cys Gln Lys Pro Leu

340 345

<210>98

<211>347

<212>PRT

<213>欧洲油菜

<400>98

Met Lys Ala Thr Leu Ala Pro Pro Ser Ser Leu Ile Ser Leu Pro Arg

1 5 10 15

His Lys Val Ser Ser Leu Arg Ser Pro Ser Leu Leu Leu Gln Ser Gln

20 25 30

Arg Arg Ser Ser Ala Leu Met Thr Thr Thr Ala Ser Arg Gly Ser Val

35 40 45

Ala Val Thr Ala Ala Ala Thr Ser Ser Ala Glu Ala Leu Arg Glu Gly

50 55 60

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210 215 220

Arg Ile Ile Ile Val Thr Trp Cys His Arg Asn Leu Ser Gln Gly Glu

225 230 235 240

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245 250 255

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260 265 270

Leu Gln Ser Leu Ser Leu Gln Asp Ile Lys Tyr Ala Asp Trp Ser Glu

275 280 285

Asn Val Ala Pro Phe Trp Pro Ala Val Ile Arg Thr Ala Leu Thr Trp

290 295 300

Lys Gly Leu Val Ser Leu Leu Arg Ser Gly Met Lys Ser Ile Lys Gly

305 310 315 320

Ala Leu Thr Met Pro Leu Met Ile Glu Gly Tyr Lys Lys Gly Val Ile

325 330 335

Lys Phe Gly Ile Ile Thr Cys Gln Lys Pro Leu

340 345

<210>99

<211>310

<212>PRT

<213>番茄

<400>99

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1 5 10 15

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20 25 30

Tyr Asp Glu Ser Ser Gly Ile Trp Glu Asp Ile Trp Gly Asp His Met

35 40 45

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50 55 60

Arg Ala Ala Gln Ile Arg Met Ile Glu Gln Ala Leu Ser Phe Ala Ala

65 70 75 80

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85 90 95

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245 250 255

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260 265 270

Val Leu Arg Ser Gly Trp Lys Thr Ile Lys Ala Ala Leu Ala Met Pro

275 280 285

Leu Met Ile Glu Gly Tyr Lys Lys Gly Leu Ile Lys Phe Ala Ile Ile

290 295 300

Thr Cys Arg Lys Pro Glu

305 310

<210>100

<211>302

<212>PRT

<213>大豆

<400>100

Met Ser Val Glu Gln Lys Ala Ala Gly Lys Glu Glu Glu Gly Lys Leu

1 5 10 15

Gln Lys Gly Ile Ala Glu Phe Tyr Asp Glu Ser Ser Gly Ile Trp Glu

20 25 30

Asn Ile Trp Gly Asp His Met His His Gly Phe Tyr Asp Pro Asp Ser

35 40 45

Thr Val Ser Val Ser Asp His Arg Ala Ala Gln Ile Arg Met Ile Gln

50 55 60

Glu Ser Leu Arg Phe Ala Ser Leu Leu Ser Glu Asn Pro Ser Lys Trp

65 70 75 80

Pro Lys Ser Ile Val Asp Val Gly Cys Gly Ile Gly Gly Ser Ser Arg

85 90 95

Tyr Leu Ala Lys Lys Phe Gly Ala Thr Ser Val Gly Ile Thr Leu Ser

100 105 110

Pro Val Gln Ala Gln Arg Ala Asn Ala Leu Ala Ala Ala Gln Gly Leu

115 120 125

Ala Asp Lys Val Ser Phe Gln Val Ala Asp Ala Leu Gln Gln Pro Phe

130 135 140

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Met Pro Asp Lys Ala Lys Phe Val Gly Glu Leu Ala Arg Val Ala Ala

165 170 175

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195 200 205

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245 250 255

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290 295 300

<210>101

<211>350

<212>PRT

<213>大豆

<400>101

Met Ala Thr Val Val Arg Ile Pro Thr Ile Ser Cys Ile His Ile His

1 5 10 15

Thr Phe Arg Ser Gln Ser Pro Arg Thr Phe Ala Arg Ile Arg Val Gly

20 25 30

Pro Arg Ser Trp Ala Pro Ile Arg Ala Ser Ala Ala Ser Ser Glu Arg

35 40 45

Gly Glu Ile Val Leu Glu Gln Lys Pro Lys Lys Glu Glu Glu Gly Lys

50 55 60

Leu Gln Lys Gly Ile Ala Glu Phe Tyr Asp Glu Ser Ser Gly Leu Trp

65 70 75 80

Glu Asn Ile Trp Gly Asp His Met His His Gly Phe Tyr Asp Pro Asp

85 90 95

Ser Thr Val Ser Val Ser Asp His Arg Ala Ala Gln Ile Arg Met Ile

100 105 110

Gln Glu Ser Leu Arg Phe Ala Ser Val Ser Glu Glu Arg Ser Lys Trp

115 120 125

Pro Lys Ser Ile Val Asp Val Gly Cys Gly Ile Gly Gly Ser Ser Arg

130 135 140

Tyr Leu Ala Lys Lys Phe Gly Ala Thr Ser Val Gly Ile Thr Leu Ser

145 150 155 160

Pro Val Gln Ala Gln Arg Ala Asn Ala Leu Ala Ala Ala Gln Gly Leu

165 170 175

Ala Asp Lys Val Ser Phe Gln Val Ala Asp Ala Leu Gln Gln Pro Phe

180 185 190

Ser Asp Gly Gln Phe Asp Leu Val Trp Ser Met Glu Ser Gly Glu His

195 200 205

Met Pro Asp Lys Ala Lys Phe Val Gly Glu Leu Ala Arg Val Ala Ala

210 215 220

Pro Gly Ala Thr Ile Ile Ile Val Thr Trp Cys His Arg Asp Leu Gly

225 230 235 240

Pro Asp Glu Gln Ser Leu His Pro Trp Glu Gln Asp Leu Leu Lys Lys

245 250 255

Ile Cys Asp Ala Tyr Tyr Leu Pro Ala Trp Cys Ser Thr Ser Asp Tyr

260 265 270

Val Lys Leu Leu Gln Ser Leu Ser Leu Gln Asp Ile Lys Ser Glu Asp

275 280 285

Trp Ser Arg Phe Val Ala Pro Phe Trp Pro Ala Val Ile Arg Ser Ala

290 295 300

Phe Thr Trp Lys Gly Leu Thr Ser Leu Leu Ser Ser Gly Leu Lys Thr

305 310 315 320

Ile Lys Gly Ala Leu Ala Met Pro Leu Met Ile Glu Gly Tyr Lys Lys

325 330 335

Asp Leu Ile Lys Phe Ala Ile Ile Thr Cys Arg Lys Pro Glu

340 345 350

<210>102

<211>350

<212>PRT

<213>大豆

<400>102

Met Ala Thr Val Val Arg Ile Pro Thr Ile Ser Cys Ile His Ile His

1 5 10 15

Thr Phe Arg Ser Gln Ser Pro Arg Thr Phe Ala Arg Ile Arg Val Gly

20 25 30

Pro Arg Ser Trp Ala Pro Ile Arg Ala Ser Ala Ala Ser Ser Glu Arg

35 40 45

Gly Glu Ile Val Leu Glu Gln Lys Pro Lys Lys Asp Asp Lys Glu Lys

50 55 60

Leu Gln Lys Gly Ile Ala Glu Phe Tyr Asp Glu Ser Ser Gly Leu Trp

65 70 75 80

Glu Asn Ile Trp Gly Asp His Met His His Gly Phe Tyr Asp Pro Asp

85 90 95

Ser Thr Val Ser Leu Ser Asp His Arg Ala Ala Gln Ile Arg Met Ile

100 105 110

Gln Glu Ser Leu Arg Phe Ala Ser Val Ser Glu Glu Arg Ser Lys Trp

115 120 125

Pro Lys Ser Ile Val Asp Val Gly Cys Gly Ile Gly Gly Ser Ser Arg

130 135 140

Tyr Leu Ala Lys Lys Phe Gly Ala Thr Ser Val Gly Ile Thr Leu Ser

145 150 155 160

Pro Val Gln Ala Gln Arg Ala Asn Ala Leu Ala Ala Ala Gln Gly Leu

165 170 175

Ala Asp Lys Val Ser Phe Gln Val Ala Asp Ala Leu Gln Gln Pro Phe

180 185 190

Ser Asp Gly Gln Phe Asp Leu Val Trp Ser Met Glu Ser Gly Glu His

195 200 205

Met Pro Asp Lys Ala Lys Phe Val Gly Glu Leu Ala Arg Val Ala Ala

210 215 220

Pro Gly Ala Thr Ile Ile Ile Val Thr Trp Cys His Arg Asp Leu Gly

225 230 235 240

Pro Asp Glu Gln Ser Leu His Pro Trp Glu Gln Asp Leu Leu Lys Lys

245 250 255

Ile Cys Asp Ala Tyr Tyr Leu Pro Ala Trp Cys Ser Thr Ser Asp Tyr

260 265 270

Val Lys Leu Leu Gln Ser Leu Ser Leu Gln Asp Ile Lys Ser Glu Asp

275 280 285

Trp Ser Arg Phe Gly Ala Pro Phe Trp Pro Ala Val Ile Arg Ser Ala

290 295 300

Phe Thr Trp Lys Gly Leu Thr Ser Leu Leu Ser Ser Gly Gln Lys Thr

305 310 315 320

Ile Lys Gly Ala Leu Ala Met Pro Leu Met Ile Glu Gly Tyr Lys Lys

325 330 335

Asp Leu Ile Lys Phe Ala Ile Ile Thr Cys Arg Lys Pro Glu

340 345 350

<210>103

<211>310

<212>PRT

<213>万寿菊

<400>103

Ala Leu Ser Val Val Ala Ala Glu Val Pro Val Thr Val Thr Pro Ala

1 5 10 15

Thr Thr Lys Ala Glu Asp Val Glu Leu Lys Lys Gly Ile Ala Glu Phe

20 25 30

Tyr Asp Glu Ser Ser Glu Met Trp Glu Asn Ile Trp Gly Glu His Met

35 40 45

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50 55 60

Arg Ser Ala Gln Ile Arg Met Ile Glu Gln Ala Leu Leu Phe Ala Ser

65 70 75 80

Val Ser Asp Asp Pro Val Lys Lys Pro Arg Ser Ile Val Asp Val Gly

85 90 95

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100 105 110

Glu Cys His Gly Ile Thr Leu Ser Pro Val Gln Ala Glu Arg Ala Gln

115 120 125

Ala Leu Ala Ala Ala Gln Gly Leu Ala Asp Lys Ala Ser Phe Gln Val

130 135 140

Ala Asp Ala Leu Asp Gln Pro Phe Pro Asp Gly Lys Phe Asp Leu Val

145 150 155 160

Trp Ser Met Glu Ser Gly Glu His Met Pro Asp Lys Leu Lys Phe Val

165 170 175

Ser Glu Leu Val Arg Val Ala Ala Pro Gly Ala Thr Ile Ile Ile Val

180 185 190

Thr Trp Cys His Arg Asp Leu Ser Pro Gly Glu Lys Ser Leu Arg Pro

195 200 205

Asp Glu Glu Lys Ile Leu Lys Lys Ile Cys Ser Ser Phe Tyr Leu Pro

210 215 220

Ala Trp Cys Ser Thr Ser Asp Tyr Val Lys Leu Leu Glu Ser Leu Ser

225 230 235 240

Leu Gln Asp Ile Lys Ala Ala Asp Trp Ser Ala Asn Val Ala Pro Phe

245 250 255

Trp Pro Ala Val Ile Lys Thr Ala Leu Ser Trp Lys Gly Ile Thr Ser

260 265 270

Leu Leu Arg Ser Gly Trp Lys Ser Ile Arg Gly Ala Met Val Met Pro

275 280 285

Leu Met Ile Glu Gly Phe Lys Lys Asp Ile Ile Lys Phe Ser Ile Ile

290 295 300

Thr Cys Lys Lys Pro Glu

305 310

<210>104

<211>354

<212>PRT

<213>两色蜀黍

<400>104

Glu Arg Arg Ala Ala Gly Gly Arg Arg Glu Pro Leu Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

Val Pro Val Gly Ser His Tyr Tyr Tyr Arg Ala Pro Ser His Val Pro

20 25 30

Arg Arg Ser Arg Pro Arg Gly Arg Gly Gly Val Val Ser Leu Arg Pro

35 40 45

Met Ala Ser Ser Thr Ala Ala Gln Pro Pro Ala Pro Ala Pro Pro Gly

50 55 60

Leu Lys Glu Gly Ile Ala Gly Leu Tyr Asp Glu Ser Ser Gly Leu Trp

65 70 75 80

Glu Asn Ile Trp Gly Asp His Met His His Gly Phe Tyr Asp Ser Gly

85 90 95

Glu Ala Ala Ser Met Ala Asp His Arg Arg Ala Gln Ile Arg Met Ile

100 105 110

Glu Glu Ala Leu Ala Phe Ala Ala Val Pro Ser Pro Asp Asp Pro Glu

115 120 125

Lys Ala Pro Lys Thr Ile Val Asp Val Gly Cys Gly Ile Gly Gly Ser

130 135 140

Ser Arg Tyr Leu Ala Lys Lys Tyr Gly Ala Gln Cys Lys Gly Ile Thr

145 150 155 160

Leu Ser Pro Val Gln Ala Glu Arg Gly Asn Ala Leu Ala Thr Ala Gln

165 170 175

Gly Leu Ser Asp Gln Val Thr Leu Gln Val Ala Asp Ala Leu Glu Gln

180 185 190

Pro Phe Pro Asp Gly Gln Phe Asp Leu Val Trp Ser Met Glu Ser Gly

195 200 205

Glu His Met Pro Asp Lys Arg Lys Phe Val Ser Glu Leu Ala Arg Val

210 215 220

Ala Ala Pro Gly Gly Thr Ile Ile Ile Val Thr Trp Cys His Arg Asn

225 230 235 240

Leu Glu Pro Ser Glu Thr Ser Leu Lys Pro Asp Glu Leu Ser Leu Leu

245 250 255

Lys Arg Ile Cys Asp Ala Tyr Tyr Leu Pro Asp Trp Cys Ser Pro Ser

260 265 270

Asp Tyr Val Asn Ile Ala Lys Ser Leu Ser Leu Glu Asp Ile Lys Ala

275 280 285

Ala Asp Trp Ser Glu Asn Val Ala Pro Phe Trp Pro Ala Val Ile Lys

290 295 300

Ser Ala Leu Thr Trp Lys Gly Leu Thr Ser Leu Leu Thr Ser Gly Trp

305 310 315 320

Lys Thr Ile Arg Gly Ala Met Val Met Pro Leu Met Ile Gln Gly Tyr

325 330 335

Lys Lys Gly Leu Ile Lys Phe Thr Ile Ile Thr Cys Arg Lys Pro Gly

340 345 350

Ala Ala

<210>105

<211>128

<212>PRT

<213>asiaticum百合

<400>105

Glu Ser Gly Glu His Met Pro Asp Lys Thr Lys Phe Val Gly Glu Leu

1 5 10 15

Ala Arg Val Ala Ala Pro Gly Ala Thr Ile Ile Ile Val Thr Trp Cys

20 25 30

His Arg Asp Leu Leu Pro Ser Glu Asp Ser Leu Arg Pro Asp Glu Ile

35 40 45

Ser Leu Leu Asn Lys Ile Cys Asp Ala Tyr Tyr Leu Pro Lys Trp Cys

50 55 60

Ser Ala Val Asp Tyr Val Lys Ile Ala Glu Ser Tyr Ser Leu Glu Lys

65 70 75 80

Ile Arg Thr Ala Asp Trp Ser Glu Asn Val Ala Pro Phe Trp Pro Ala

85 90 95

Val Ile Arg Ser Ala Leu Thr Trp Lys Gly Phe Thr Ser Leu Leu Arg

100 105 110

Ser Gly Trp Lys Thr Ile Arg Gly Ala Leu Val Met Pro Leu Met Ile

115 120 125

<210>106

<211>280

<212>PRT

<213>点形念珠藻

<400>106

Met Ser Ala Thr Leu Tyr Gln Gln Ile Gln Gln Phe Tyr Asp Ala Ser

1 5 10 15

Ser Gly Leu Trp Glu Gln Ile Trp Gly Glu His Met His His Gly Tyr

20 25 30

Tyr Gly Ala Asp Gly Thr Gln Lys Lys Asp Arg Arg Gln Ala Gln Ile

35 40 45

Asp Leu Ile Glu Glu Leu Leu Asn Trp Ala Gly Val Gln Ala Ala Glu

50 55 60

Asp Ile Leu Asp Val Gly Cys Gly Ile Gly Gly Ser Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Ala Gln Lys Phe Asn Ala Lys Ala Thr Gly Ile Thr Leu Ser Pro Val

85 90 95

Gln Ala Ala Arg Ala Thr Glu Arg Ala Leu Glu Ala Asn Leu Ser Leu

100 105 110

Arg Thr Gln Phe Gln Val Ala Asn Ala Gln Ala Met Pro Phe Ala Asp

115 120 125

Asp Ser Phe Asp Leu Val Trp Ser Leu Glu Ser Gly Glu His Met Pro

130 135 140

Asp Lys Thr Lys Phe Leu Gln Glu Cys Tyr Arg Val Leu Lys Pro Gly

145 150 155 160

Gly Lys Leu Ile Met Val Thr Trp Cys His Arg Pro Thr Asp Glu Ser

165 170 175

Pro Leu Thr Ala Asp Glu Glu Lys His Leu Gln Asp Ile Tyr Arg Val

180 185 190

Tyr Cys Leu Pro Tyr Val Ile Ser Leu Pro Glu Tyr Glu Ala Ile Ala

195 200 205

His Gln Leu Pro Leu His Asn Ile Arg Thr Ala Asp Trp Ser Thr Ala

210 215 220

Val Ala Pro Phe Trp Asn Val Val Ile Asp Ser Ala Phe Thr Pro Gln

225 230 235 240

Ala Leu Trp Gly Leu Leu Asn Ala Gly Trp Thr Thr Ile Gln Gly Ala

245 250 255

Leu Ser Leu Gly Leu Met Arg Arg Gly Tyr Glu Arg Gly Leu Ile Arg

260 265 270

Phe Gly Leu Leu Cys Gly Asn Lys

275 280

<210>107

<211>280

<212>PRT

<213>鱼腥藻

<400>107

Met Ser Ala Thr Leu Tyr Gln Gln Ile Gln Gln Phe Tyr Asp Ala Ser

1 5 10 15

Ser Gly Leu Trp Glu Glu Ile Trp Gly Glu His Met His His Gly Tyr

20 25 30

Tyr Gly Ala Asp Gly Thr Glu Gln Lys Asn Arg Arg Gln Ala Gln Ile

35 40 45

Asp Leu Ile Glu Glu Leu Leu Thr Trp Ala Gly Val Gln Thr Ala Glu

50 55 60

Asn Ile Leu Asp Val Gly Cys Gly Ile Gly Gly Ser Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Ala Gly Lys Leu Asn Ala Lys Ala Thr Gly Ile Thr Leu Ser Pro Val

85 90 95

Gln Ala Ala Arg Ala Thr Glu Arg Ala Lys Glu Ala Gly Leu Ser Gly

100 105 110

Arg Ser Gln Phe Leu Val Ala Asn Ala Gln Ala Met Pro Phe Asp Asp

115 120 125

Asn Ser Phe Asp Leu Val Trp Ser Leu Glu Ser Gly Glu His Met Pro

130 135 140

Asp Lys Thr Lys Phe Leu Gln Glu Cys Tyr Arg Val Leu Lys Pro Gly

145 150 155 160

Gly Lys Leu Ile Met Val Thr Trp Cys His Arg Pro Thr Asp Lys Thr

165 170 175

Pro Leu Thr Ala Asp Glu Lys Lys His Leu Glu Asp Ile Tyr Arg Val

180 185 190

Tyr Cys Leu Pro Tyr Val Ile Ser Leu Pro Glu Tyr Glu Ala Ile Ala

195 200 205

Arg Gln Leu Pro Leu Asn Asn Ile Arg Thr Ala Asp Trp Ser Gln Ser

210 215 220

Val Ala Gln Phe Trp Asn Ile Val Ile Asp Ser Ala Phe Thr Pro Gln

225 230 235 240

Ala Ile Phe Gly Leu Leu Arg Ala Gly Trp Thr Thr Ile Gln Gly Ala

245 250 255

Leu Ser Leu Gly Leu Met Arg Arg Gly Tyr Glu Arg Gly Leu Ile Arg

260 265 270

Phe Gly Leu Leu Cys Gly Asp Lys

275 280

<210>108

<211>356

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>共有序列

<220>

<221>misc_特性

<222>(1)..(2)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(4)..(4)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(6)..(12)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(14)..(66)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(68)..(71)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(73)..(76)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(79)..(81)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(89)..(89)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(92)..(92)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(105)..(105)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(124)..(124)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(126)..(131)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(147)..(153)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(157)..(157)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(166)..(166)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(169)..(170)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(173)..(173)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(176)..(178)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(180)..(180)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(190)..(190)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(193)..(194)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(198)..(198)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(214)..(214)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(221)..(222)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(225)..(225)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(228)..(228)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(233)..(233)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(243)..(243)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(245)..(245)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(251)..(251)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(260)..(261)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(265)..(265)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(268)..(268)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(296)..(298)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(304)..(304)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(309)..(309)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(313)..(313)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(316)..(317)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(320)..(321)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(323)..(324)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(327)..(328)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(330)..(332)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(334)..(336)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(339)..(339)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(345)..(345)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(349)..(349)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(352)..(352)

<223>未知残基.

<220>

<221>misc_特性

<222>(353)..(354)

<223>未知残基.

<400>108

Xaa Xaa Met Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa

1 5 10 15

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

20 25 30

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

35 40 45

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

50 55 60

Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Pro Xaa Xaa

65 70 75 80

Xaa Pro Arg Phe Ile Gln His Lys Xaa Glu Ala Xaa Trp Phe Tyr Arg

85 90 95

Phe Leu Ser Ile Val Tyr Asp His Xaa Ile Asn Pro Gly His Trp Thr

100 105 110

Glu Asp Met Arg Asp Asp Ala Leu Glu Pro Ala Xaa Leu Xaa Xaa Xaa

115 120 125

Xaa Xaa Xaa Val Val Asp Val Gly Gly Gly Thr Gly Phe Thr Thr Leu

130 135 140

Gly Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Val Thr Xaa Leu Asp Gln

145 150 155 160

Ser Pro His Gln Leu Xaa Lys Ala Xaa Xaa Lys Glu Xaa Leu Lys Xaa

165 170 175

Xaa Xaa Ile Xaa Glu Gly Asp Ala Glu Asp Leu Pro Phe Xaa Thr Asp

180 185 190

Xaa Xaa Asp Arg Tyr Xaa Ser Ala Gly Ser Ile Glu Tyr Trp Pro Asp

195 200 205

Pro Gln Arg Gly Ile Xaa Glu Ala Tyr Arg Val Leu Xaa Xaa Gly Gly

210 215 220

Xaa Ala Cys Xaa Ile Gly Pro Val Xaa Pro Thr Phe Trp Leu Ser Arg

225 230 235 240

Phe Phe Xaa Asp Xaa Trp Met Leu Phe Pro Xaa Glu Glu Glu Tyr Ile

245 250 255

Glu Trp Phe Xaa Xaa Ala Gly Phe Xaa Asp Val Xaa Leu Lys Arg Ile

260 265 270

Gly Pro Lys Trp Tyr Arg Gly Val Arg Arg His Gly Leu Ile Met Gly

275 280 285

Cys Ser Val Thr Gly Val Lys Xaa Xaa Xaa Gly Asp Ser Pro Leu Xaa

290 295 300

Leu Gly Pro Lys Xaa Glu Asp Val Xaa Lys Pro Xaa Xaa Asn Pro Xaa

305 310 315 320

Xaa Phe Xaa Xaa Arg Phe Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Xaa

325 330 335

Val Leu Xaa Pro Ile Tyr Met Trp Xaa Lys Asp Gln Xaa Val Pro Xaa

340 345 350

Xaa Xaa Pro Ile

355

Claims

1.一种基本纯化的核酸分子，其编码维管植物多肽，所述多肽选自：

(a)其氨基酸序列为SEQ ID NO：16所示的多肽，

(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶活性的由(a)衍生的多肽。

2.权利要求1的基本纯化的核酸分子，其中所述植物选自拟南芥Columbia生态型或拟南芥Landsberg生态型植物。

3.权利要求1的基本纯化的核酸分子，其中所述核酸分子编码具有2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶活性的突变的植物多肽。

4.一种基本纯化的核酸分子，其选自：

(a)其核酸序列为SEQ ID NOs：1、2和15及其互补序列所示的核酸分子，

(b)在严格条件下与(a)限定的DNA序列杂交且编码具有2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶活性的多肽的核酸分子。

5.一种基本纯化的维管植物多肽分子，其中所述多肽分子选自：

(a)其氨基酸序列为SEQ ID NO：16所示的多肽分子，

6.权利要求5的基本纯化的植物多肽分子，其中所述多肽分子是选自拟南芥Columbia生态型、拟南芥Landsberg生态型的生物体所固有的。

7.一种包含基本纯化的核酸分子的转化植物细胞，所述的核酸分子选自：

(a)其核酸序列为权利要求1的基本纯化的核酸分子、SEQ IDNOs：1，2和15及其互补序列所示的核酸分子，

8.权利要求7的转化植物细胞，其中所述植物选自：紫苜蓿、拟南芥、大麦、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、花椰菜、卷心菜、柑橘、卡诺拉、棉花、大蒜、燕麦、葱属植物、亚麻、观赏植物、花生、胡椒、土豆、油菜子、稻、裸麦、高粱、草莓、甘蔗、甜菜、西红柿、小麦、白杨、松树、冷杉、桉树、苹果、莴苣、小扁豆、葡萄、香蕉、茶、草坪草、向日葵、大豆、鹰嘴豆、玉米、菜豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、芝麻、棉花子、亚麻子、红花和油棕。

9.权利要求7的转化植物细胞，其中与具有相似的遗传背景但缺乏所述核酸分子的植物相比，所述转化植物所产生的种子中γ-生育酚的含量升高。

10.权利要求7的转化植物细胞，其中所述核酸分子进一步包括一种可操作性连接于所述核酸序列的外源启动子，方向为5’到3’。

11.权利要求10的转化植物细胞，其中所述启动子为种子特异性启动子。

12.权利要求7的转化植物细胞，其进一步包含编码一种酶的第二基本纯化的核酸分子，所述酶选自tyrA、slr1736、HPT、GMT、生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、AANT1、slr1737、IDI、GGH，它们的互补序列、植物直向同源物以及尿黑酸双加氧酶的反义构建体。

13.权利要求12的转化植物细胞，其中所述植物选自：紫苜蓿、拟南芥、大麦、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、花椰菜、卷心菜、柑橘、卡诺拉、棉花、大蒜、燕麦、葱属植物、亚麻、观赏植物、花生、胡椒、土豆、油菜子、稻、裸麦、高粱、草莓、甘蔗、甜菜、西红柿、小麦、白杨、松树、冷杉、桉树、苹果、莴苣、小扁豆、葡萄、香蕉、茶、草坪草、向日葵、大豆、鹰嘴豆、玉米、菜豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、芝麻、棉花子、亚麻子、红花和油棕。

14.权利要求12的转化植物细胞，其中所述第二核酸编码GMT，所述转化植物含有具有如下特性的组织：与具有相似的遗传背景但缺乏所述第一和第二核酸分子的植物相比，该组织中α-生育酚的含量升高。

15.权利要求12的转化植物细胞，其中与具有相似的遗传背景但缺乏所述第一和第二核酸分子的植物相比，所述转化植物产生的种子中γ-生育酚的含量升高。

16.权利要求12的转化植物细胞，其中所述第一和第二核酸分子中至少有一个还包括可操作性连接的外源启动子，方向为5’到3’。

17.权利要求16的转化植物细胞，其中所述启动子为种子特异性启动子。

18.权利要求7的转化植物细胞，其进一步包含第二基本纯化的核酸分子，所述核酸分子选自：

(a)其核酸序列为SEQ ID NOs：39-54及其互补序列所示的核酸分子，

(b)在严格条件下与(a)限定的DNA序列杂交且编码具有γ-生育酚甲基转移酶活性的多肽的核酸分子。

19.权利要求18的转化植物细胞，其中所述植物选自：紫苜蓿、拟南芥、大麦、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、花椰菜、卷心菜、柑橘、卡诺拉、棉花、大蒜、燕麦、葱属植物、亚麻、观赏植物、花生、胡椒、土豆、油菜子、稻、裸麦、高粱、草莓、甘蔗、甜菜、西红柿、小麦、白杨、松树、冷杉、桉树、苹果、莴苣、小扁豆、葡萄、香蕉、茶、草坪草、向日葵、大豆、鹰嘴豆、玉米、菜豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、芝麻、棉花子、亚麻子、红花和油棕。

20.权利要求18的转化植物细胞，其中与具有相似的遗传背景但缺乏所述第一和第二核酸分子的植物相比，所述转化植物产生的种子中α-生育酚的含量升高。

21.权利要求18的转化植物细胞，其中所述第一和第二核酸分子中至少有一个包括可操作性连接的外源启动子，方向为5’到3’。

22.权利要求21的转化植物细胞，其中所述启动子为种子特异性启动子。

23.一种在植物中降低基因表达的方法，所述基因编码具有2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶活性的植物多肽，所述方法包括：(A)用核酸分子转化植物，其中所述核酸分子具有导入的启动子区域，所述启动子区域在植物细胞引导mRNA分子的产生，所述导入的启动子区域与具有转录链和非转录链的转录核酸分子相连接，其中的转录链与选自(i)其核酸序列为权利要求1的基本纯化的核酸分子、SEQ ID Nos：1、2和15所示的核酸分子，(ii)在严格条件下与(i)限定的DNA序列杂交且编码具有2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶活性的多肽的核酸分子互补，所述转录核酸分子与3’非翻译序列相连接，后者在植物细胞中终止转录，并在mRNA序列的3’末端添加聚腺苷酸化核糖核苷酸；(B)培育所述转化植物。

24.包含一种核酸分子的转化植物细胞，所述核酸分子包含导入的启动子区域，该启动子区域在植物细胞中引导mRNA分子的产生，所述导入的启动子区域与具有转录链和非转录链的转录核酸分子相连接，其中的转录链与选自(i)其核酸序列为权利要求1的基本纯化的核酸分子、SEQ ID Nos：1、2和15所示的核酸分子，(ii)在严格条件下与(i)限定的DNA序列杂交且编码具有2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶活性的多肽的核酸分子互补，所述转录核酸分子与3’非翻译序列相连接，后者在植物细胞中终止转录，并在mRNA序列的3’末端添加聚腺苷酸化核糖核苷酸。

25.权利要求24的转化植物细胞，与具有相似遗传背景但缺乏所述导入的核酸分子的植物相比，编码一种具有2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶活性的植物多肽的基因的表达降低。

26.产生种子中γ-生育酚含量升高的植物的方法，包括：(A)用一种核酸分子转化植物，所述核酸分子选自权利要求1的基本纯化的核酸分子、SEQ ID NOs：1，2和15以及其互补序列的核酸序列；(B)培育所述转化植物。

27.权利要求26的产生植物的方法，其中所述植物选自：紫苜蓿、拟南芥、大麦、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、花椰菜、卷心菜、卡诺拉、柑橘、棉花、大蒜、燕麦、葱属植物、亚麻、观赏植物、花生、胡椒、土豆、油菜子、稻、裸麦、高粱、草莓、甘蔗、甜菜、西红柿、小麦、白杨、松树、冷杉、桉树、苹果、莴苣、小扁豆、葡萄、香蕉、茶、草坪草、向日葵、大豆、玉米、菜豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、芝麻、棉花子、亚麻子、红花和油棕。

28.产生种子中γ-生育酚含量升高的植物的方法，包括：(A)用权利要求1的基本纯化的核酸分子转化植物；(B)培育转化的植物。

29.权利要求28的产生植物的方法，其中所述植物选自：紫苜蓿、拟南芥、大麦、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、花椰菜、卷心菜、卡诺拉、柑橘、棉花、大蒜、燕麦、葱属植物、亚麻、观赏植物、花生、胡椒、土豆、油菜子、稻、裸麦、高粱、草莓、甘蔗、甜菜、西红柿、小麦、白杨、松树、冷杉、桉树、苹果、莴苣、小扁豆、葡萄、香蕉、茶、草坪草、向日葵、大豆、玉米、菜豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、芝麻、棉花子、亚麻子、红花和油棕。

30.产生种子中γ-生育酚含量升高的植物的方法，包括：(A)用第一核酸分子和导入的第二核酸分子转化植物，其中第一核酸分子选自权利要求1的基本纯化的核酸分子、SEQ ID NOs：1，2，15，以及其互补序列的核酸序列，导入的第二核酸分子编码一种酶，该酶选自tyrA、slr1736、HPT、生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、AANT1、slr1737、IDI、GGH，及其互补序列、植物直向同源物以及尿黑酸双加氧酶的反义构建体；(B)培育转化的植物。

31.权利要求30的产生植物的方法，其中所述植物选自：紫苜蓿、拟南芥、大麦、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、花椰菜、卷心菜、卡诺拉、柑橘、棉花、大蒜、燕麦、葱属植物、亚麻、观赏植物、花生、胡椒、土豆、油菜子、稻、裸麦、高粱、草莓、甘蔗、甜菜、西红柿、小麦、白杨、松树、冷杉、桉树、苹果、莴苣、小扁豆、葡萄、香蕉、茶、草坪草、向日葵、大豆、玉米、菜豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、芝麻、棉花子、亚麻子、红花和油棕。

32.产生种子中γ-生育酚含量升高的植物的方法，包括：(A)用权利要求1的核酸分子和第二基本纯化的核酸分子转化植物，其中第二基本纯化的核酸分子编码一种酶，该酶选自tyrA、slr1736、HPT、生育酚环化酶、dxs、dxr、GGPPS、HPPD、AANT1、slr1737、IDI、GGH，及其互补序列、植物直向同源物以及尿黑酸双加氧酶的反义构建体；(B)培育转化的植物。

33.权利要求32的产生植物的方法，其中所述植物选自：紫苜蓿、拟南芥、大麦、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、花椰菜、卷心菜、卡诺拉、柑橘、棉花、大蒜、燕麦、葱属植物、亚麻、观赏植物、花生、胡椒、土豆、油菜子、稻、裸麦、高粱、草莓、甘蔗、甜菜、西红柿、小麦、白杨、松树、冷杉、桉树、苹果、莴苣、小扁豆、葡萄、香蕉、茶、草坪草、向日葵、大豆、玉米、菜豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、芝麻、棉花子、亚麻子、红花和油棕。

34.产生种子中α-生育酚含量升高的植物的方法，包括：(A)用基本纯化的第一核酸分子和第二基本纯化的核酸分子转化植物，其中第一核酸分子选自(i)其核酸序列为SEQ ID NOs：1，2，15及其互补序列所示的核酸分子，(ii)在严格条件下与(i)限定的DNA序列杂交且编码具有2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶活性的多肽的核酸分子，第二基本纯化的核酸分子选自(i)其核酸序列为SEQ IDNOs：39-54及其互补序列所示的核酸分子，(ii)在严格条件下与(i)限定的DNA序列杂交且编码具有γ-生育酚甲基转移酶活性的多肽的核酸分子序列；(B)培育转化的植物。

35.权利要求34的产生植物的方法，其中所述植物选自：紫苜蓿、拟南芥、大麦、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、花椰菜、卷心菜、卡诺拉、柑橘、棉花、大蒜、燕麦、葱属植物、亚麻、观赏植物、花生、胡椒、土豆、油菜子、稻、裸麦、高粱、草莓、甘蔗、甜菜、西红柿、小麦、白杨、松树、冷杉、桉树、苹果、莴苣、小扁豆、葡萄、香蕉、茶、草坪草、向日葵、大豆、玉米、菜豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、芝麻、棉花子、亚麻子、红花和油棕。

36.产生种子中α-生育酚含量升高的植物的方法，包括：(A)用权利要求1的基本纯化的核酸分子和第二基本纯化的核酸分子转化植物，其中第二基本纯化的核酸分子编码的多肽序列选自SEQ IDNOs：39-54，及其互补序列；(B)培育转化的植物。

37.权利要求36的产生植物的方法，其中所述植物选自：紫苜蓿、拟南芥、大麦、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、花椰菜、卷心菜、卡诺拉、柑橘、棉花、大蒜、燕麦、葱属植物、亚麻、观赏植物、花生、胡椒、土豆、油菜子、稻、裸麦、高粱、草莓、甘蔗、甜菜、西红柿、小麦、白杨、松树、冷杉、桉树、苹果、莴苣、小扁豆、葡萄、香蕉、茶、草坪草、向日葵、大豆、玉米、菜豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、芝麻、棉花子、亚麻子、红花和油棕。

38.来源于权利要求7的转化植物细胞的种子细胞。

39.权利要求38的种子细胞，其中与具有相似的遗传背景但缺乏所述基本纯化的核酸分子的植物的种子相比，所述种子中γ-生育酚的含量升高。

40.来源于权利要求12的转化植物细胞的种子细胞。

41.权利要求40的种子细胞，其中与具有相似的遗传背景但缺乏所述第一和第二核酸分子的植物的种子相比，所述种子中γ-生育酚的含量升高。

42.来源于权利要求18的转化植物细胞的种子细胞。

43.权利要求42的种子细胞，其中与具有相似的遗传背景但缺乏所述第一和第二核酸分子的植物的种子相比，所述种子中α-生育酚的含量升高。

44.一种包含基本纯化的第一核酸分子和基本纯化的第二核酸分子的转化植物细胞，其中第一核酸分子编码氨基酸序列如SEQ IDNO.16所示的tMT2酶，第二核酸分子编码GMT酶。

45.产生种子中α-生育酚含量升高的植物的方法，包括：(A)用编码选自(i)其氨基酸序列为SEQ ID NOs：16所示的酶，(ii)在(i)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶活性的由(i)衍生的酶的tMT2酶的第一核酸分子和编码GMT酶的第二核酸分子转化植物；(B)培育所述植物。

46.来源于权利要求38、40或42的种子细胞的油，其中与具有相似的遗传背景但缺乏所述核酸分子的种子细胞中的油相比，所述种子细胞中的油中γ-生育酚的含量升高。

47.包含权利要求38、40或42的种子细胞的动物饲料。

48.产生种子中总生育酚含量升高的植物的方法，包括：(A)用一种基本纯化的核酸分子转化植物，其中所述核酸分子选自(i)其核酸序列为权利要求1的基本纯化的核酸分子、SEQ ID NOs：1，2和15所示的的核酸分子，(ii)在严格条件下与(i)限定的DNA序列杂交且编码具有2-甲基叶绿基质体醌醇甲基转移酶活性的多肽的核酸分子；(B)培育转化的植物。

49.权利要求48的产生植物的方法，其中所述植物选自：紫苜蓿、拟南芥、大麦、芸苔、欧洲油菜、油籽油菜、花椰菜、卷心菜、卡诺拉、柑橘、棉花、大蒜、燕麦、葱属植物、亚麻、观赏植物、花生、胡椒、土豆、油菜子、稻、裸麦、高粱、草莓、甘蔗、甜菜、西红柿、小麦、白杨、松树、冷杉、桉树、苹果、莴苣、小扁豆、葡萄、香蕉、茶、草坪草、向日葵、大豆、玉米、菜豆、海甘蓝、芥菜、蓖麻子、芝麻、棉花子、亚麻子、红花和油棕。