发明内容
本发明所述的槐角,指豆科(Leguminosae)槐属(Sophora Linn.)植物的果实,包括例如槐(Sophorajaponica L.)、白刺花槐(Sophora viciifolia Hunce.)、砂生槐(Sophora moorcroftiana)、绒毛槐(Sophora tomentosa)、偏花槐(Sophorasecundiflora)、澳大利亚槐(Sophora fraseri)、大果槐(Sophora macrocarpa)、闽槐(Sophora franchetiana)、四翅槐(Sophora tetraptera)、丝毛槐(Sophoranuttaliana)、黄叶槐(Sophora chrysophylla)、厚果槐(Sophora pachycarpa)、小叶槐(Sophora nicrophylla)、费尔南德斯槐(Sophora fernandeziana)、智利槐(Sophora masafuerana)、稀见槐(Sophora exigua)、硬脊槐(Sophora mollis var.griffthii)、柳叶槐(Sophora dunnii)等槐属植物的果实;优选为豆科(Leguminosae)槐属(Sophora Linn.)植物槐(Sophorajaponica L.)的果实。本发明所述的槐角,即果实,包括未成熟的幼果,也包括成熟的果实。本发明所述的槐角,即果实,可以是生品,也可以是经炮制的,如炒炙品、酒炙品或醋炙品等。本发明的槐角,包括果实的果皮和/或种子。
通过本发明,发明人惊喜地发现,从槐角中可工业规模的获得高纯度的槐角异黄酮、槐角黄酮醇和槐角总黄酮,将高纯度的槐角异黄酮、槐角黄酮醇或槐角总黄酮制备成药物制剂,或加入一般的食品、饮料、乳制品中,或加入一般的护肤品中,具有预防或者治疗与***缺乏相关的疾病,具有预防或治疗与氧化作用有关的疾病。可以预防或治疗骨质疏松症、女性更年期综合症、***增生症、肿瘤癌症等,还具有预防或者治疗老年痴呆症、动脉硬化、脑血栓、冠心病、心绞痛、心肌缺血和心血管***的慢性退化性疾病、抑郁症、记忆力减退以及皮肤衰老、色斑或雀斑等。
因此,本发明的目的之一是提供一种高纯度的槐角异黄酮提取物、高纯度的槐角黄酮醇提取物以及主要含异黄酮和黄酮醇的高纯度的槐角总黄酮提取物;
本发明的目的之二是提供一种制备上述提取物的方法;
本发明的目的之三是提供一种含有上述提取物的药物制剂;
本发明的目的之四是提供一种含有上述提取物的功能性食品;
本发明的目的之五是提供一种含有上述提取物的护肤品;
本发明的目的之六是提供上述提取物的用途。
本发明的目的通过下述的技术方案来实现:
一种槐角异黄酮提取物,主要含具有式(I)结构的异黄酮,以5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷计算,异黄酮占提取物的重量百分含量为20%~100%,但不为100%;优选50%~100%,但不为100%;更优选90%~100%,但不为100%;
其中,R1、R2分别选自氢、甲基、葡萄糖和新橙皮糖,R1和R2彼此相同或不同。
优选上述槐角异黄酮提取物含有5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷、5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-葡萄糖苷和4′,5-二羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷。
一种槐角黄酮醇提取物,主要含具有式(II)结构的黄酮醇,以4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-槐糖苷计算,黄酮醇占提取物的重量百分含量为20%~100%,但不为100%;优选50%~100%,但不为100%;更优选90%~100%,但不为100%;
其中,R1、R2和R3分别选自氢、甲基、葡萄糖、鼠李糖以及由葡萄糖和/或鼠李糖组成的双糖或三糖,R1、R2和R3彼此相同或不同;R4选自氢、羟基和甲基。
优选上述槐角黄酮醇提取物含有4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-槐糖苷、4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷和3′,4′,5,7-四羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷。
一种槐角总黄酮提取物,主要含具有式(I)结构的异黄酮和具有式(II)结构的黄酮醇,以5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷计算的异黄酮和以4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-槐糖苷计算的黄酮醇相加后得到的总黄酮,占提取物的重量百分含量为20%~100%,但不为100%;优选50%~100%,但不为100%;更优选为90%~100%,但不为100%;
其中,R1、R2分别选自氢、甲基、葡萄糖和新橙皮糖,R1和R2彼此相同或不同;
其中,R1、R2和R3分别选自氢、甲基、葡萄糖、鼠李糖以及由葡萄糖和/或鼠李糖组成双糖或三糖,R1、R2和R3彼此相同或不同;R4选自氢、羟基和甲基。
优选上述槐角总黄酮提取物含有5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷、5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-葡萄糖苷、4′,5-二羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷、4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-槐糖苷、4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷和3′,4′,5,7-四羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷。
上述的槐角异黄酮提取物、槐角黄酮醇提取物以及槐角总黄酮提取物,通过本领域中常规的水解方法,例如酸水解、碱水解、酶解或加热等方法,使黄酮苷发生水解,得到部分水解的产物或者完全水解成苷元的产物。
上述的槐角异黄酮提取物、槐角黄酮醇提取物以及槐角总黄酮提取物,与可药用的碱通过常规的化学反应,可以使异黄酮、黄酮醇与碱之间形成盐的形式。所述的可药用碱,优选为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、醋酸钠、醋酸钾等。例如,上述的提取物,在常压下,与0.01-5N的氢氧化钠溶液反应,可以得到相应异黄酮、黄酮醇的钠盐衍生物。
上述的槐角异黄酮提取物、槐角黄酮醇提取物以及槐角总黄酮提取物,与金属离子盐,例如锌、镁、铬、铁、铝、铜、钙、钴、钡、锶、或锆等金属离子盐之间,经常规反应,得到槐角异黄酮或黄酮醇的金属复合物。所述的金属复合物除具有槐角异黄酮或黄酮醇的药效和应用外,还具有其它新的用途。例如所述的铁盐复合物还具有补铁功能,所述的锌盐复合物还具有补锌功能,所述的钙盐复合物还具有补钙功能,从而分别可以用于与缺铁、缺锌或缺钙有关的疾病;又例如,所述的铬盐复合物,还有预防、治疗或者改善糖尿病等用途。向槐角异黄酮提取物、黄酮醇提取物或者总黄酮提取物的水溶液或者酸性溶液中,加入0.01-5N的上述金属离子盐溶液,在适当温度下搅拌反应,便得到槐角异黄酮或黄酮醇的金属复合物盐。
本发明的槐角异黄酮提取物、黄酮醇提取物或者总黄酮提取物,可以通过下述的方法制取得到,该方法包括:
a.以水溶性溶剂作为提取溶剂提取槐角原料,提取液浓缩至干或者浓缩至适量,得到提取浓缩物,所述的水溶性溶剂选自水、乙醇、甲醇、丙酮中的一种溶剂或两种以上溶剂组成的混合溶剂;
b.上述a得到的提取浓缩物悬浮于体积比为0-50∶100-50的乙醇∶水或甲醇∶水或丙酮∶水溶剂中,放置后,析出固体,过滤,得到固体和滤液,固体干燥后即得到提取物A;
c.上述b得到的滤液适量浓缩后,用层析柱进行分离,以体积比为0-100∶100-0的乙醇∶水或者甲醇∶水或者丙酮∶水进行梯度洗脱,分段收集流出液,其中所述的层析柱选自大孔树脂柱、聚酰胺柱或者葡聚糖凝胶柱;
d.将上述c流出液中主含式(I)异黄酮的流出液合并,回收溶剂,浓缩至干,干燥后得到提取物B;
e.将上述c流出液中主含式(II)黄酮醇的流出液合并,回收溶剂,浓缩至干,干燥后得到提取物C;
或者将上述的d和e合二为一,成为:
f.将上述c流出液中主含式(I)异黄酮和/或式(II)黄酮醇的流出液合并,回收溶剂,浓缩至干,干燥后得到提取物D;
其中,上述所述的提取物A、B即为本发明所述的槐角异黄酮提取物;所述的提取物C即为本发明所述的槐角黄酮醇提取物;所述的提取物D或由提取物A和/或B与提取物C形成的混合物即为本发明所述的槐角总黄酮提取物。
如果需要,将上述所得到的提取物A、B、C、D,再经精制过程,便能得到纯度更高的提取物,精制方法例如是分别以上述所述的柱层析方法再进行分离纯化一次或多次,便可以按照需要得到更高纯度的提取物;或者是将上述所得到的提取物A、B、C、D,分别以合适极性的溶剂进行提取,提取液回收尽溶剂,浓缩至干,干燥后,便可以按照需要得到更高纯度的提取物。所述合适极性的溶剂选自体积比为75-100∶25-0的甲醇∶水、乙醇∶水、丙酮∶水以及乙酸乙酯、氯仿。
本发明所用的提取溶剂,当是混合溶剂时,各溶剂之间的比例,可以是本领域中常用的配比,例如30%、60%、70%、90%%(体积)的乙醇水或甲醇水或丙酮水
本发明所述的提取,可以是本领域中常规的提取方法,如回流提取、超声提取、渗漉提取、超临界二氧化碳提取等。
当用水作提取溶剂时,采用适当碱性的碱水提取,例如PH8-10的石灰水或碳酸氢钠溶液,可以提高黄酮成分的提取率。对于本领域普通技术人员来说,这是显而易见的。
本发明所用的大孔树脂、聚酰胺树脂、葡聚糖凝胶树脂等,分别可以是本领域中常用的树脂材料。例如大孔树脂为天津农药厂的D101型大孔树脂,葡聚糖凝胶树脂为Sephadex LH-20树脂等。各种树脂的预处理和再生处理等,均是本领域普通技术人员所熟知的。
所述层析柱分离操作,是本领域中熟练人员所熟知的;所述的梯度洗脱,洗脱剂中醇浓度变化的梯度,是本领域中熟练人员根据树脂柱的情况很容易确定的。
分段收集时,可以通过肉眼观看树脂柱的色带情况进行分段收集,也可以进行等体积收集后,通过常规的鉴定例如薄层板鉴定后,含相同组分的进行合并,也可以通过薄层色谱技术等常规的手段进行流出液跟踪鉴别,含相同组分合并收集等。这是所属领域技术人员熟知的。薄层色谱技术,可以参见“徐任生《天然产物化学》科学出版社出版1997年6月第589页。”对本领域技术人员来说,这是显而易见的。
本发明所述的干燥,可以是本领域中常规的干燥方法,如常压干燥、减压干燥、喷雾干燥或冷冻干燥等。
黄酮类成分的含量测定,现有技术中有大量文献报道,因而是所属领域技术人员根据现有技术很容易进行本发明提取物中黄酮的含量测定。本发明提取物中异黄酮、黄酮醇含量测定,可以用本领域中常规的含量测定方法,例如比色法、紫外分光光度法、薄层扫描法、酸碱滴定法、高效液相色谱法等进行测定,优选采用高效液相色谱法进行含量测定。高效液相色谱法测定提取物中异黄酮、黄酮醇含量,其测定方法,本领域技术人员根据现有技术很容易进行测定。
这里描述一种高效液相色谱法(HPLC)测定本发明提取物中黄酮含量的方法,但对本发明所述的含量没有任何的限定作用。
岛津高效液相色谱仪,SPD-10AV型紫外可见光检测器,LC-10AD型溶剂输送泵单元;25微升进样器;十万分之一分析天平。
色谱分离条件:ODS-C18柱,5um,250mm×4.6mm,柱温:22±2℃,
流动相:甲醇/水梯度洗脱
进样量:10ul
流速:1ml/min
检测波长:260nm,365nm
对照品均为自制,经过波谱和高效液相色谱鉴定、纯度检测,符合要求。
将提取物以酸水解后,通过HPLC法测定4′,5,7-三羟基异黄酮量,再换算成5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷量,以计算异黄酮的含量;测定4′,3,5,7-四羟基黄酮醇和3′,4′,3,5,7-五羟基黄酮醇量,再换算成4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-槐糖苷量,以计算黄酮醇的含量;异黄酮的量和黄酮醇的量相加后,得到总黄酮的量;所述黄酮苷元与黄酮苷之间的含量的换算,通过它们的分子量比值进行换算。
本发明的槐角黄酮提取物,具有***样活性。特别适用于治疗、预防或者改善与***缺乏有关的疾病。
本发明的槐角黄酮提取物,还具有很强的抗氧化作用,可以预防、改善或治疗与氧化反应有关的疾病。
本发明的槐角黄酮提取物,在治疗、预防或者改善骨质疏松症尤其是绝经后的骨质疏松症、女性更年期综合症或绝经综合症(具有潮热、焦虑、抑郁、盗汗、头痛或情绪不稳定等症状)、绝经后皮肤感觉异常、***尤其是月经前期综合症(具有痛经、周期性乳腺痛、流质潴留等症状)、老年痴呆症、衰老、雷纳德(Reynaud)综合症、伯格氏病等方面具有特别的作用和效力。
本发明的槐角黄酮提取物,在治疗、预防或者改善肿瘤或癌症,尤其是乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、子宫内膜癌、大肠癌、***癌等癌症方面,具有很好的医疗效果。
本发明的槐角黄酮提取物,在治疗、预防或者改善心脑血管***疾病方面,尤其是对高血脂、动脉硬化、高血压、脑血栓、脑梗塞、冠心病、心肌缺血以及心血管***的慢性退化性疾病方面,具有良好的预防、改善或治疗效果。
本发明的槐角黄酮提取物,对于皮肤衰老、色斑、雀斑、女性绝经后皮肤感觉异常等有很好的预防、改善或治疗效果。
本发明的槐角黄酮提取物,在男性***增生症、痤疮或青春痘、脱发尤其是男性斑秃、遗传性脱发、风湿病尤其是类风湿性关节炎等方面,具有很理想的治疗、预防或者改善效果。
在本发明中,所述的槐角异黄酮提取物、槐角黄酮醇提取物以及槐角总黄酮提取物,使用的剂量与许多因素有关,包括应用的方式、给药的方式、病人的疾病情况、病人的个体状况等有关系。例如,按功能性食品或饮料方式服用本发明的槐角黄酮提取物,以达到预防或改善所述疾病的效果,那么日剂量可以小一些,可以长期服用;如果为达到特定医疗目的而按药物制剂方式服用,那么日剂量可以大一些,服用的疗程可以短一些。本发明提取物的剂量,可以按所含的黄酮量进行计算,通常,单个病人的日剂量可以是0.5mg-5g;优选剂量是0.05g-2g;更优选为0.25g-1g。本发明提取物可以以常规方式和剂量使用,例如参见Goodmanand Gilman,the pharmacological basis of therapeutica,p1299(第7版,1985年)。所用的具体剂量与进行治疗的疾病的状态、受治疗者的状况、给药途径以及其它已知因素有关。
本发明的槐角黄酮提取物,毒性十分小。以寇氏改良法静脉注射本发明所得的提取物,在50mg-2000mg/Kg范围的剂量给药与小鼠时,也未显示明显的毒性;小鼠口服给药LD50>5g/kg/日,相当于人体用量的5000倍,无毒。用Ames试验分点试验法和平皿试验法研究诱变活性,结果表明本发明的槐角黄酮提取物均没有显示出诱变活性。
尤其是,本发明的槐角黄酮提取物对子宫无作用,其作用的靶器官不在子宫,没有一般的***对子宫所致的毒副作用。
制备用于预防、治疗或改善所述的疾病或适应症的药物制剂,是将本发明的槐角异黄酮提取物、槐角黄酮醇提取物或槐角总黄酮提取物(为方便起见,下文称为“有效部位”),与一种或多种本领域所熟知的可药用的载体和/或赋形剂混合。
当然,载体必须是药物可接受的,也就是与制剂中的有效成分之间不发生化学反应,并且对受治疗者安全无害。载体或赋形剂可以是固体或液体或者二者都是,并且优选制成有效部位为一个剂量单位的制剂,例如,一种片剂,其中可以含有0.5%-60%重量比的有效部位,或高达100%重量比的有效部位。本发明的药物制剂,可以使用本领域中所公知的药物制剂技术来制备。
本发明的制剂,包括适于口服、直肠、口腔(例如舌下)、肠胃外(例如皮下、肌内、静脉注射等)和透皮给药制剂等。在具体用药中,最合适的给药途径与所治疗的疾病特性和受治疗者状况等有关系。
适于口服给药的药物制剂,可以制成单个的单位剂量,例如胶囊、片剂、软胶囊、滴丸剂、口服液、浸膏剂等等,其中每一单位剂量中含有预定剂量的本发明的槐角有效部位。这些制剂可以用本领域所熟知的合适的制剂技术进行制备,其中包括将本发明的有效部位与合适的药用载体和/或赋形剂混合这一步骤。例如,片剂可以通过将含有本发明的有效部位的粉末或颗粒压片或铸模制备得到,其中所述的粉末或颗粒中含有一种或多种合适的载体或赋形剂,如惰性稀释剂、粘合剂、润滑剂和/或表明活性剂(分散剂)等。
适于口腔(舌下)给药的制剂包括将本发明的有效部位与合适的惰性基质或调味基质混合一起,调味基质通常是蔗糖或***胶等,惰性基质通常是明胶、甘油或***胶等。
本发明中适于肠胃外给药的制剂通常包括含有本发明的有效部位的无菌水针剂、粉针剂、静脉输液剂等。可以通过将本发明的有效部位与水或甘氨酸缓冲液混合,然后将得到的溶液调到与血液等渗并且进行灭菌便得到这些制剂。根据本发明的注射制剂,通常含有0.1%-80%w/w的有效部位。
适于直肠给药的制剂优选制成单位剂量的栓剂。这些栓剂可以将活性化合物与一种或多种常规载体,例如椰子油混合,然后定型便得到。
适于透皮给药制剂优选为乳膏、喷雾剂、气溶胶、软膏等。可使用的载体包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇等,有效部位的含量通常是0.1%-20%w/w,这些制剂还包括皮肤用化妆品乳膏。
适于透皮给药的制剂也可以通过离子电渗疗法释放活性化合物,可以参见“pharmaceutical research,1986,3(6):318”,并且典型的使用形式是活性化合物任选的缓冲水溶液。合适的制剂中包括柠檬酸盐缓冲液(PH6)或乙醇/水,并且含有0.05M-1M的有效部位。
本发明所述的功能性食品,指含有本发明槐角黄酮提取物(即有效部位)的食品、饮料或乳制品等类似食品,有效部位可以以加入、混合、包衣、结合或其它途径加到食品中去,或以溶解、悬浮或混悬于饮料、乳制品中。含有本发明的槐角黄酮有效部位的食品、饮料或乳制品,能依据标准方法容易地制备得到。
本发明的槐角有效部位,具有抗氧化活性,因此也能广泛地应用于护肤品中,例如防止皮肤衰老、色斑、雀斑的护肤乳膏、防晒剂、洗面奶等类似物品当中。这些护肤品能够依据标准的方法很容易地制备得到。
另外,本发明的产物可以与其它物质联合使用以产生协同效应。例如,在***时,本发明产物可与常规化疗结合,在取得抑制或杀死肿瘤细胞的同时,又能减轻肿瘤化疗剂(如一些蒽环化合物或金属铂化合物等)带来的氧化损伤,从而具有双重优势。
又例如,在动脉硬化等其它情形中,本发明产物与其它抗氧化剂合用,如类胡萝卜素、特别是番茄红素和玉米黄素等,以发挥协同的抗氧化作用。同样,在骨质疏松、女性更年期综合症等方面,本发明产物可以与其它具有治疗或预防骨质疏松、女性更年期综合症的中药或西药联合使用,以取得协同增效的作用。
具体实施方式
下述实施例将有助于进一步理解本发明,但并不限制本发明的内容。
实施例1
槐角异黄酮提取物、黄酮醇提取物的制备
干燥的槐角细粉2Kg,用6000ml水,加热保持微沸,提取2小时,纱布过滤,药渣再以2×4000ml水微沸提取2次,每次1.5小时;合并提取液,滤纸过滤;滤液浓缩至干得到浓缩物,将浓缩物加到3000ml的20%%的乙醇水(V/V)中,搅拌溶解,放置后,析出白色固体,过滤,滤取固体,低温常压干燥后,得到提取物A-1;
滤液蒸去乙醇后,浓缩至适量,加入到已处理好的D101大孔树脂柱,用不同浓度的乙醇水梯度洗脱,流速为约10-15ml/min。先用去离子水约5升洗脱,再以浓度为10%的乙醇约4升洗脱,再以浓度为30%的乙醇洗脱,直至条带状色带I被完全洗脱出来,用去30%的乙醇约2升;再以浓度为50%%的乙醇约5升洗脱;再以浓度为70%的乙醇洗脱,直至条带状色带II被完全洗脱出来,用去70%的乙醇约2升。再以浓度为95%的乙醇洗脱再生树脂柱。
合并色带I的流分,减压回收乙醇,浓缩至干,得到提取物B-1;
合并色带II的流分,减压回收乙醇,浓缩至干,得到提取物C-1;
成分分析:硅胶GF254薄层板薄层层析;展开剂为氯仿/甲醇(4∶1),含少量醋酸;显色剂为2%三氯化铝乙醇溶液;365nm紫外光下观察荧光。含量测定采用上述的HPLC法。
结果:
提取物A-1含有:5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷,5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-葡萄糖苷,4′,5-二羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-新橙皮糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-葡萄糖苷;
异黄酮占提取物的重量百分比为82.35%。
提取物B-1含有:5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷,5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-葡萄糖苷,4′,5-二羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-新橙皮糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-葡萄糖苷,4′-甲氧基-5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷,4′,5,7-三羟基异黄酮;
异黄酮占提取物的重量百分比为58.23%。
提取物C-1含有:4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-槐糖苷,4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷,3′,4′,5,7-四羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷,4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)-O-β-D-葡萄糖基(1→2)-O-β-D-葡萄糖苷],4′,3,5-三羟基-黄酮醇-7-O-鼠李糖苷,4′,3,5,7-四羟基黄酮醇,3′,4′,3,5,7-五羟基黄酮醇;
黄酮醇占提取物的重量百分比为53.05%。
实施例2
槐角异黄酮提取物的制备
取10g实施例1所得到的提取物A-1,加100ml的95%乙醇,加热回流40min,趁热过滤,滤液回收乙醇后浓缩至干,残余物低温干燥后,得到提取物A-1a。
提取物A-1a经薄层层析成分分析,含有5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷,5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-葡萄糖苷,4′,5-二羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-新橙皮糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-葡萄糖苷;
HPLC法含量测定结果,异黄酮占提取物的重量百分比为93.77%。
实施例3
槐角异黄酮提取物的制备
取20g实施例1所得到的提取物B-1,加适量的水溶解后,加入到已处理好的D101大孔树脂柱,用不同浓度的乙醇水梯度洗脱,流速为约5-8ml/min。先以浓度为10%的乙醇约0.7升洗脱,再以浓度为60%的乙醇洗脱,直至条带状色带被完全洗脱出来,用去60%的乙醇约0.5升;再以浓度为95%的乙醇洗脱再生树脂柱。
合并主含异黄酮的色带流出液,减压回收乙醇,浓缩至干,得到提取物B-1a。
提取物B-1a经薄层层析成分分析,含有5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷,5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-葡萄糖苷,4′,5-二羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-新橙皮糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-葡萄糖苷,4′-甲氧基-5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷,4′,5,7-三羟基异黄酮;
HPLC法含量测定结果显示,提取物B-1a所含异黄酮占提取物重量百分比为77.46%。
实施例4
槐角异黄酮提取物的制备
取10g实施例1所得到的提取物B-1,加100ml的95%乙醇,加热回流60min,趁热过滤,滤液回收乙醇后浓缩至干,残余物低温干燥后,得到提取物B-1b。
提取物B-1b经薄层层析成分分析,含有5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷,5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-葡萄糖苷,4′,5-二羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-新橙皮糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-葡萄糖苷,4′-甲氧基-5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷,4′,5,7-三羟基异黄酮;
HPLC法含量测定结果,异黄酮占提取物的重量百分比为69.77%。
实施例5
槐角黄酮醇提取物的制备
取20g实施例1所得到的提取物C-1,加适量的水溶解后,加入到已处理好的D101大孔树脂柱,用不同浓度的乙醇水梯度洗脱,流速为约5-8ml/min。先以浓度约10%的乙醇约1升洗脱,再以浓度约75%的乙醇洗脱,直至条带状色带被完全洗脱出来,用去75%的乙醇约0.5升;再以浓度为95%的乙醇洗脱再生树脂柱。
合并主含异黄酮的色带流出液,减压回收乙醇,浓缩至干,得到提取物C-1a。
提取物C-1a经薄层层析成分分析,含有4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-槐糖苷,4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷,3′,4′,5,7-四羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷,4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)-O-β-D-葡萄糖基(1→2)-O-β-D-葡萄糖苷],4′,3,5-三羟基-黄酮醇-7-O-鼠李糖苷,4′,3,5,7-四羟基黄酮醇,3′,4′,3,5,7-五羟基黄酮醇;
HPLC法含量测定结果显示,提取物C-1a所含黄酮醇占提取物重量百分比为80.46%。
实施例6
槐角黄酮醇提取物的制备
取10g实施例1所得到的提取物C-1,加100ml的95%乙醇,加热回流30min,趁热过滤,滤液回收乙醇后浓缩至干,残余物低温干燥后,得到提取物C-1b。
提取物C-1b经薄层层析成分分析,含有4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-槐糖苷,4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷,3′,4′,5,7-四羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷,4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)-O-β-D-葡萄糖基(1→2)-O-0-D-葡萄糖苷],4′,3,5-三羟基-黄酮醇-7-O-鼠李糖苷,4′,3,5,7-四羟基黄酮醇,3′,4′,3,5,7-五羟基黄酮醇;
HPLC法含量测定结果,黄酮醇占提取物的重量百分比为66.13%。
实施例7
槐角异黄酮提取物、黄酮醇提取物的制备
干燥的槐角细粉1Kg,用3000ml浓度为60%的乙醇,加热回流提取1.5小时,纱布过滤,药渣再以2×150%0ml浓度为60%乙醇加热回流提取2次,每次1小时;合并提取液,滤纸过滤;滤液减压回收乙醇后浓缩至干,得到浓缩物;将浓缩物加到1000ml的30%的丙酮水(V/V)中,搅拌溶解,放置后,析出白色固体,过滤,滤取固体,低温常压干燥后,得到提取物A-2;
滤液回收丙酮后,浓缩至干,得到浓缩物。取浓缩物20%g,加适量甲醇溶解后,拌入聚酰胺粉后,减压抽干,磨细,加入到已处理好的聚酰胺柱上,用不同浓度的乙醇水梯度洗脱,流速为约8-10ml/min。先用去离子水约1000ml洗脱,再以浓度约10%的乙醇约800ml洗脱,再以浓度约40%的乙醇洗脱,直至条带状色带I被完全洗脱出来,用去40%的乙醇约1000ml;再以浓度约70%的乙醇洗脱,直至条带状色带II被完全洗脱出来,用去60%的乙醇约150%0ml。再以浓度为95%乙醇、5%氢氧化钠、去离子水洗脱聚酰胺柱,以再生聚酰胺柱。
合并色带I的流分,减压回收乙醇,浓缩至干,得到提取物B-2;
合并色带II的流分,减压回收乙醇,浓缩至干,得到提取物C-2;
成分分析:硅胶GF254薄层板薄层层析;展开剂为氯仿/甲醇(4∶1),含少量醋酸;显色剂为2%三氯化铝乙醇溶液;365nm紫外光下观察荧光。含量测定采用上述的HPLC法。
结果:
提取物A-2含有:5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷,5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-葡萄糖苷,4′,5-二羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-葡萄糖苷;
异黄酮占提取物的重量百分比为91.07%。
提取物B-2含有:5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷,5,7-二羟基-异黄酮-′-O-葡萄糖苷,4′,5-二羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-新橙皮糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-葡萄糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-鼠李糖苷-4′-O-槐糖苷,4′-甲氧基-5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷;
异黄酮占提取物的重量百分比为67.43%。
提取物C-2含有:4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-槐糖苷,4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷,3′,4′,5,7-四羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷,4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)-O-β-D-葡萄糖基(1→2)-O-β-D-葡萄糖苷],4′,5-二羟基-黄酮醇-3-O-葡萄糖苷-7-O-葡萄糖苷,4′,3,5-三羟基-黄酮醇-7-O-鼠李糖苷,4′,3,5,7-四羟基黄酮醇,3′,4′,3,5,7-五羟基黄酮醇;
黄酮醇占提取物的重量百分比为62.72%。
实施例8
槐角异黄酮提取物的制备
取0.5g实施例7所得到的提取物B-2,加150ml的乙酸乙酯,加热回流90min,放冷后过滤,滤液回收尽乙酸乙酯后浓缩至干,残余物低温干燥后,得到提取物B-2a。
提取物B-2a经薄层层析成分分析,含有5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷,5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-葡萄糖苷,4′,5-二羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-新橙皮糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-葡萄糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-鼠李糖苷-4′-O-槐糖苷,4′-甲氧基-5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷;
HPLC法含量测定结果,提取物B-2a中异黄酮占提取物的重量百分比为90.21%。
实施例9
槐角总黄酮提取物的制备
取实施例7的浓缩物40g,加适量甲醇溶解后,拌入大孔树脂,减压抽干溶剂,加入到已处理好的D101大孔树脂柱上,用不同浓度的乙醇水梯度洗脱,流速约5-8ml/min。先以浓度约10%的乙醇洗脱至流出液色很淡为止,用去10%乙醇约为1升,再以浓度约50%-75%的乙醇洗脱,直至流出液色很淡为止,再以浓度为95%的乙醇洗脱再生树脂柱。合并含黄酮的流出液,共计为1.5升,减压回收乙醇后浓缩至干,残余物低温干燥后,得到提取物D-1。
提取物D-1分别以氯仿、乙酸乙酯和正丁醇分段后,各段分别进行薄层层析成分分析,结果表明提取物D-1含有5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-新橙皮糖苷,5,7-二羟基-异黄酮-4′-O-葡萄糖苷,4′,5-二羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-新橙皮糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷-4′-O-葡萄糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-鼠李糖苷-4′-O-槐糖苷,5-羟基-异黄酮-7-O-鼠李糖苷-4′-O-新橙皮糖苷,4′-甲氧基-5-羟基-异黄酮-7-O-葡萄糖苷,4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-槐糖苷,4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷,3′,4′,5,7-四羟基-黄酮醇-3-O-芸香糖苷,4′,5,7-三羟基-黄酮醇-3-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)-O-0-D-葡萄糖基(1→2)-O-β-D-葡萄糖苷],4′,5-二羟基-黄酮醇-3-O-葡萄糖苷-7-O-葡萄糖苷,4′,3,5-三羟基-黄酮醇-7-O-鼠李糖苷,4′,5,7-三羟基异黄酮,4′,3,5,7-四羟基黄酮醇,3′,4′,3,5,7-五羟基黄酮醇;
HPLC法含量测定结果,提取物D-1中含有的总黄酮占提取物的重量百分比为59.51%。
取0.5g的提取物D-1,按实施例8方法,以丙酮作溶剂回流提取,最后得到提取物D-1a。经HPLC法含量测定,提取物D-1a中总黄酮含量为74.34%。
实施例10
制备药物制剂
1.含有槐角异黄酮提取物的明胶胶囊
将含异黄酮3g的槐角异黄酮提取物(提取物B-2)与8g微晶纤维素、0.3g硅胶、0.8g羧甲基纤维素钠和0.1g硬脂酸镁混合。形成的混合物装入100粒硬胶囊中。
2.含有槐角总黄酮提取物的包衣片剂
将含总黄酮4g的槐角总黄酮提取物(提取物A-2和提取物C-2按1∶1比例混合均匀)与5g微晶纤维素、3.3g二价磷酸钙、0.3g硅胶、1.2g羧甲基纤维素钠和0.2g硬脂酸镁进行混合,将此混合粉末压100片;形成的药片用含0.45g羟丙基甲基纤维素、0.09g聚乙二醇、0.2g二氧化肽和0.1g滑石粉进行包衣,得到包衣片。
实施例11
制备含槐角黄酮提取物的功能性食品
1.制备含槐角总黄酮提取物的食品
将足量的槐角总黄酮提取物(提取物D-1)加入到小麦粉中,制得每100g含总黄酮约5g的小麦粉混合物。采用该小麦粉混合物制备面包、蛋糕、曲奇饼干、薄脆饼干、面条、方便面等,从而获得含槐角活性成分的功能性食品。
2.制备含槐角异黄酮提取物的奶制品
将足量的槐角异黄酮提取物(提取物B-1b)加入到牛奶中,制得每100g牛奶中含异黄酮约2-5g的混合奶,然后由其制备各种奶制品,如酸奶、冰琪琳、奶酪等。
3.制备含槐角总黄酮提取物的饮料
将足量的槐角总黄酮提取物(提取物D-1)加入到蔬菜汁、果汁或碳酸饮料中,获得每100ml饮料中包含0.1-10g的总黄酮,从而得到含槐角活性成分的功能性食品。
实施例12
制备含槐角黄酮提取物的护肤品
化妆用的乳剂
将足量的含总黄酮5g的槐角总黄酮提取物(提取物D-1a),与1g硬脂酸、2g鲸蜡醇、1g的PEG-20失水山梨糖醇单硬脂酸酯、lg失水山梨糖醇单硬脂酸酯、10g矿物油、5g三辛酸酯、0.5g三乙醇胺、5g甘油、3g丙二醇、适量防腐剂、适量香料和余量纯水,混合,制成100g的防止皮肤老化、面部色斑或雀斑的乳剂。
实施例13
抗肿瘤活性试验
试验原理:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的紫色结晶物,用酶联免疫仪在490nm波长处测定其吸收值,可间接反映活细胞数量。该方法可以参见:鄂征主编的《组织培养和分子细胞学技术》,北京出版社;韩锐主编的《抗癌药物研究与试验技术》,北京医科大学和中国协和医科大学联合出版社。
仪器:超净工作台;酶联免疫检测仪;倒置生物显微镜;平板摇床;恒温CO2培养箱。
试剂:RPMI1640(GIBCO);胰蛋白酶(SIGMA);小牛血清(HYCLONE);MTT(SIGMA);DMSO(SIGMA)。
细胞株:人低分化的胃腺癌细胞(BGC),培养于RPMI1640培养基中,含10%小牛血清,37摄氏度,5%CO2。
受试药物:槐角异黄酮提取物(提取物A-1a);槐角黄酮醇提取物(提取物C-1a);槐角总黄酮提取物(提取物D-1a);槐角异黄酮提取物的酸水解产物(水解产物);5-氟尿嘧啶(5-FU,阳性对照药)。
方法:
1.取处于指数生长期状态良好的细胞一瓶,加入0.25%胰蛋白酶消化液,消化液使脱壁细胞脱落,制成细胞悬液;
2.细胞计数,并将细胞密度稀释至5×104个/ml。
3.取细胞悬液接种于96孔板上,180ul/孔,置恒温CO2培养箱中培养24小时。
4.将受试药物配制好。
5.换液,加入受试药物,20ul/孔,培养48小时。
6.将MTT加入96孔板中,20ul/孔,培养箱中反应4小时。
7.吸去上清液,加入DMSO,150ul/孔,平板摇床上振摇5min。
8.用酶联免疫检测仪在波长为490nm处测定每孔的吸光度,并计算细胞抑制率。
结果见表1。
表1 细胞抑制率(BGC)
受试药物 |
浓度(ug/ml) |
细胞抑制率% |
结果 |
均值 |
SD |
提取物A-1a提取物C-1a提取物D-1a水解产物5-氟尿嘧啶 |
110100110100110100110100110100 |
29.9141.9869.8830.5336.3261.4324.1539.3364.7237.1440.2567.3334.2669.3884.76 |
0.030.030.020.030.040.030.030.020.020.050.030.020.10.050.06 |
++++++ |
试验结果表明了本发明的槐角黄酮提取物,具有抗肿瘤的作用。
实施例14
防治骨质疏松症的作用
6月龄雌性Wistar大鼠,分为4组:模型组(手术切除双测卵巢),假手术组(行假手术),模型加槐角黄酮提取物(提取物A-1)的槐角黄酮组,模型加尼尔雌醇片的尼尔雌醇组(阳性对照组)。
1.股骨骨密度的影响
结果表明,模型组的骨密度明显降低,与假手术组相比有极显著差异(p<0.001);槐角黄酮组和尼尔雌醇组均比模型组骨密度明显增加,差异明显(p<0.05);槐角黄酮组和尼尔雌醇组之间差异不明显,但槐角黄酮组骨密度增加值普遍略高于尼尔雌醇组骨密度增加值。
2.血清骨钙素含量的变化
结果表明,模型组血清骨钙素含量高于假手术组,与假手术组相比有极显著差异(p<0.001);槐角黄酮组和尼尔雌醇组均比模型组血清骨钙素显著降低,差异显著(p<0.01);槐角黄酮组的血清骨钙素含量较尼尔雌醇组明显低,之间差异明显(p<0.05)。
3.生物力学试验
试验结果:
股骨三点折弯试验,槐角黄酮组的弹性形变数值、最大载负荷数值和最大形变数值比尼尔雌醇组和假手术组的数值略高,这些数值均明显高于模型组,并且差异明显(p<0.05);
断裂形变,槐角黄酮组、尼尔雌醇组和假手术组的断裂形变数值,均显著高于模型组,并且差异显著(p<0.01);槐角黄酮组的断裂形变数值明显高于尼尔雌醇组和假手术组,并且差异明显(p<0.05);
韧性,槐角黄酮组、尼尔雌醇组和假手术组的韧性均显著高于模型组,并且差异显著(p<0.01);槐角黄酮组的韧性明显高于尼尔雌醇组和假手术组,并且差异明显(p<0.05);
最大应力,槐角黄酮组、尼尔雌醇组和假手术组之间相当,它们与模型组相比有显著差异(p<0.05);
弹性应力,槐角黄酮组和假手术组之间相当,同模型组相比有显著差异(p<0.01),同尼尔雌醇组相比有明显差异(p<0.05)
腰椎抗压试验:槐角黄酮组、尼尔雌醇组和假手术组之间相当,同模型组相比有显著差异(p<0.01)。
上述防治骨质疏松症试验表明:本发明的槐角黄酮提取物对去卵巢大鼠骨质疏松有明显预防和治疗作用,能够显著改善去卵巢大鼠密质骨和松质骨的生物力学性能。
实施例15
子宫影响试验
未发育的雌性Wistar大鼠(3周龄),用本发明槐角黄酮提取物(提取物D-1a)经口腔灌胃给药一周,每日1次。结果,用药前后大鼠子宫的湿重和干重均没有明显变化,病理观察也未见子宫形态向发育成熟改变。
试验说明,本发明的槐角黄酮提取物对子宫无作用,其作用的靶器官不在子宫。这为槐角黄酮类化合物没有一般的***对子宫等副作用提供试验依据。
实施例16
对***增生治疗试验
大鼠***增生模型制备:摘除双测睾丸的SD雄性大白鼠,用精制麻油稀释丙酸***肌肉注射,连续给药一个月,使大鼠***增生。
试验方法:雄性SD大白鼠,分为4组:模型组(手术摘除双侧睾丸),假手术组(行假手术),模型加槐角黄酮提取物(提取物D-1a)的槐角黄酮组,模型加***的***组(阳性对照组)。模型组、槐角黄酮组和***组,每日注射丙酸***,同时槐角黄酮组和***组分别灌胃给本发明提取物和***。
试验结果:
1.模型组与假手术组相比,***的体积和重量均明显增加,差异极显著(p<0.001);***组与模型组相比,***的体积和重量均明显小,差异极显著(p<0.001)。这说明大鼠***增生模型制造合理,阳性对照药选自也正确。
2.槐角黄酮组大鼠***的体积和重量明显较模型组减轻,且随剂量的增加减轻越多,显示出一定的剂量关系;槐角黄酮组与***组相比,效果接近,差异不明显。
上述试验结果表明,本发明的产物对***增生具有一定的预防和治疗作用。
实施例17
槐角黄酮提取物降血脂试验
高血脂大鼠模型制造方法:大鼠给饲高脂膳食(2%胆固醇),连续灌服20%天,使血脂水平升高。
将正常血脂水平的SD大鼠,分为4组:模型组(灌服高脂膳食),模型加槐角黄酮提取物(提取物D-1a)的槐角黄酮组,模型加脂必妥的脂必妥组(阳性对照组),空白对照组(正常饮食饲料)。大鼠眼眶取血测大鼠血清胆固醇、血清甘油三酯、血清高密度脂蛋白和血清低密度脂蛋白的数值。
试验结果:
1.模型组的血清胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平明显高于空白对照组(p<0.01),血清高密度脂蛋白值明显低于空白对照组(p<0.01)。上述结果表明大鼠高脂血症模型制造成功。
2.与模型组相比,槐角黄酮组和阳性对照组的血清胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平显著降低(p<0.01),血清高密度脂蛋白水平显著升高(p<0.01);槐角黄酮组与阳性对照组相比,降脂效果接近,但槐角黄酮组稍次于阳性对照组,二者差别无统计学意义。
上述试验表明,本发明产物对高脂血症具有肯定的降血脂作用,从而可以预防或治疗高血脂症。
实施例18
槐角黄酮提取物抗氧化作用研究
试验试剂:NO、SOD、LPO和NOS测试盒以及蛋白定量(双缩脲法)测试盒;D-半乳糖等。
3-4月龄的健康昆明种雌性小鼠,分为4组:模型组(皮下注射D-半乳糖),模型加槐角黄酮提取物(提取物D-1a)的槐角黄酮组,模型加维生素E的维E组(阳性对照组),对照组。对照组给生理盐水。连续用药30天后,取脑称重量,用生理盐水制成脑匀浆,取上清夜测定各项指标。
结果见表2。
表2抗氧化试验
组别 |
SOD(NU/ml) |
LPO(umol/L) |
NO(umol/L) |
NOS(U/ml) |
对照组模型组槐角黄酮组阳性对照组 |
2.15±0.230.98±0.243.15±0.402.64±0.51 |
23.15±4.0131.14±4.2320%.28±3.9821.05±4.27 |
0.64±0.030.45±0.050.75±0.090.69±0.07 |
0.95±0.030.65±0.041.02±0.050.93±0.03 |
上述试验表明:
1.模型组的SOD活性、NO量和NOS活性显著低于对照组(p<0.01),而LPO量显著高于对照组(p<0.01)。这说明D-半乳糖制造小鼠衰老模型成功。
2.槐角黄酮组、阳性对照组的SOD活性、NO量和NOS活性显著高于模型组(p<0.01),而LPO量显著低于模型组(p<0.01),试验表明本发明的槐角黄酮提取物具有抗氧化作用。
3.槐角黄酮组的SOD活性、NO量和NOS活性明显高于维E阳性对照组(p<0.05),而LPO量明显低于维E阳性对照组(p<0.05),试验表明了本发明的槐角黄酮提取物抗氧化作用明显强与维生素E。
上述抗氧化试验结果表明,本发明的槐角黄酮提取物具有很好的抗氧化作用,可以治疗与氧化有关的疾病,例如本发明的产物可以延缓衰老、预防和治疗老年痴呆症、防治皮肤衰老、面包色斑或雀斑等,并且作用明显强于目前市场上常用的抗氧化剂维生素E。
临床实施例1
槐角黄酮提取物治疗女性绝经后更年期综合症效果
选择年龄45-65岁、绝经1年以上、有不同程度的潮热出汗、头晕失眠、烦躁易怒、心悸头痛、抑郁、乏力、***干涩或***困难、腰背或关节酸痛、皮肤感觉异常等症状者30例。每日服用含本发明产物(提取物D-1a)的胶囊,并停止服用其它***类或与治疗上述症状有关的药物或保健品;10天为1疗程。服用3-4疗程后,有22例上述症状得到明显改善,其中18例临床症状基本消失;有3例临床症状有所缓解;其余5例效果不明显。所有的30例服用者,服用本发明产物,未观察到任何的临床毒、副作用。
试验表明了,本发明的槐角黄酮提取物,有非常理想的预防、改善或治疗妇女绝经后更年期综合症的作用,不仅效果好,更重要的优点,是本发明的槐角黄酮提取物没有一般***的毒副作用,长期服用,也不会有增加乳腺、子宫内膜等方面疾病发病率的危险。
本领域普通技术人员显然能够认识到,在上述实施方案中,允许作出常规的改变,因此,本发明不仅包括申请文件中提到的技术特征,还包括所有不超出本发明宗旨和保护范围的变化或改变。