CN100339383C - 骨靶向药物、合成方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及的是一种骨靶向药物、合成方法及用途。该药物结构式如下，其中：R²-O-为雷洛昔芬残基；Y为氧或者亚氨基；R¹为氢、一价金属盐或含有1-4个碳的烷基；n为0-3的整数。该双膦酸类化合物既具有抑制骨吸收作用又有着独特的趋骨性和良好的螯合作用，而成为治疗这种疾病的有效药物。

Description

骨靶向药物、合成方法及用途

技术领域

本发明涉及是一种骨靶向药物、合成方法及用途。进一步说是以预防和治疗骨质疏松、高钙血症、Paget’s病等骨与钙代谢疾病为目的而开发的以双膦酸作为骨靶向试剂的化合物。

背景技术

随着社会的发展，人口老龄化的速度在加快，作为老年常见病之一的骨质疏松及伴随相关疾病逐渐成为一个日益突出的社会公共健康问题。骨质疏松是以骨量减少，骨组织的显微结构退化引起代谢紊乱，使骨的脆性增加而易骨折为特征的全身性骨骼代谢疾病。这种病以中老年人，尤其是绝经后妇女最为常见，并且随着年龄的增长而增加。在我国，60岁以上的妇女90％患有骨质疏松症。

目前临床用于治疗骨质疏松症的药物根据作用机制分为抑制骨吸收和促进骨形成两大类。抑制骨吸收的药物主要包括：***替代治疗(HRT)、选择性***受体调节剂(SERM)、双膦酸盐(Bisphosphonates)、降钙素等；促进骨形成的药物主要包括：氟化物、甲状旁腺类似物(PTHs)和它汀类(Statin)药物等。近年来骨质疏松防治药物的研究发展迅猛，研究开发主要集中于以选择性***受体调节剂及双膦酸类药物为主的抗吸附药物。但是这些药物，从其活性、选择性和副作用来看，还存在着不少缺点。

以双膦酸药物为骨靶向试剂转运其它药物治疗骨质疏松已有许多文献报道，如：Bauss F，et al.Cal.Tissue Int.1996，59(3)：168；Fujisaki J，et al.J.Drug Target 1998，5：129；PagePCB，et al.Tetrahedron，2001，57：1837；A Steinmeyer，et al.Steroids 2001，66：257；Y Wang，et al.Bioorg.Med.Chem.Lett.2003，13：3067；Gil L，et al.Bioorg.Med.Chem.1999，7：901；US5428181(1995)US 20020136731(2002)US5183815 EP0555845。这些文献均未包括或覆盖本发明所涉及的新型结构及合成方法和用途。

发明内容

本发明的目的是提供一种骨靶向药物。具体地说，为了研制治疗效果和选择性更好，副作用小的化合物，本发明者合成了以双膦酸作为靶向载体的新型骨靶向药物。

本发明的目的还提供一种上述骨靶向药物的合成方法。

本发明的另一目的是提供一种上述骨靶向药物的用途。

本发明的以双膦酸作为靶向载体的新型骨靶向药物，结构式如下：

                                  R-L-B

R代表含有羟基的不同的选择性***受体调节剂，例如，雷洛昔芬等。

L代表共价键

B代表含有羟基、氨基或其他官能团的双膦酸类化合物，其结构式如下：

                       X＝H，OH，Cl或Br；

                       Y¹＝OH，NH₂或COOR等；

                       R¹＝H，Na或C₁-C₄烷基；

                       n＝0-3

具体地说本发明的骨靶向药物结构式如下：

其中：R²-O-为雷洛昔芬残基；Y为氧或者亚氨基；R¹为氢、一价金属盐或含有1-4个碳的烷基；n为0-3的整数。该双膦酸类化合物既具有抑制骨吸收作用又有着独特的趋骨性和良好的螯合作用，而成为治疗这种疾病的有效药物。

本发明利用双膦酸类化合物和具有较好抗骨质疏松作用的选择性***受体调节剂雷洛昔芬通过亚甲基羰基连接，设计了双膦酸-雷洛昔芬拼和物，希望得到***样副作用小的骨靶向性的治疗骨质疏松理想化合物，结构式如下：

在这里：R²-O-为雷洛昔芬残基；Y为氧或者亚氨基；R¹为氢、一价金属盐或含有1-4个碳的烷基；n为0-3的整数。

作为骨靶向的载体的双膦酸结构式如下：

                         Y＝NH₂；R＝Et；n＝0；1

                         Y＝NH₂；R＝Et；n＝3；2

                         Y＝OH；R＝Et；n＝3；3

其合成方法参考文献Synth.Commun.1996，26(10)，PP2037-2043；Phosphorus，Sulfur andSilicon.1998，132，PP219-229；专利US5183815。

由于雷洛昔芬有两个活泼的酚羟基，所以需要对其进行单保护。以苄基保护雷洛昔芬的羟基参考文献Bioorg.Med.Chem.Lett.1997，7(7)，PP887-892，分别得到两个单保护的化合物(4、5)。

利用单保护的雷洛昔芬与双膦酸化合物拼合得到目标化合物，合成路线有二个如下途径：

首先利用原料(4)或者(5)与溴乙酸酯或者氯乙酸酯在合适的溶剂以及合适的碱作用下可以制得原料的氧烷基化产物化合物(6)或者(13)。溶剂包括丙酮，四氢呋喃，二氧六环，N，N-二甲基甲酰胺等；碱包括一价金属的碳酸盐，如碳酸钾；或者一价金属的氢化物，如钠氢，钾氢等；也可以加入少量的一价金属的碘化物催化反应，如碘化钾或者碘化钠；反应原料(4)或者(5)与溴乙酸酯或者氯乙酸酯，碱的摩尔比为1∶1～10∶1～10；反应可以在0-80℃进行1-24小时。

化合物(7)或者(14)可以由化合物(6)或者(13)碱水解得到。碱包括一价金属的氢氧化物，最好是氢氧化锂，碱水溶液浓度可以为1～3N；原料与碱的摩尔比为1∶3～10；有机溶剂可以是四氢呋喃或者二氧六环等；温度在30-60℃，最好是50℃；反应6-24小时。

化合物(8)或者(15)由酸(7)或者(14)在酰化剂作用下转化制得。酰化试剂可以为二氯亚砜或者草酰氯/N，N-二甲基甲酰胺，最好为草酰氯/N，N-二甲基甲酰胺；原料与酰化试剂的摩尔比为1∶3～10；有机溶剂可以是二氯甲烷，1，2-二氯乙烷等；温度在0-60℃之间，反应3-6小时。

在有机溶剂中，上述得到的酰氯(8)或者(15)与氨基或羟基取代的双膦酸化合物反应可以制备化合物(9)或者(16)。反应可以加入缚酸剂或者不加；缚酸剂可以是各种有机碱，例如三乙胺、吡啶等，最好是吡啶；酰氯与双膦酸和碱的投料摩尔比为1∶1～1.2∶0～1.2。有机溶剂可以是二氯甲烷或者氯仿等；温度在20-40℃，最好是25℃，反应6-24小时。

化合物(9)或者(16)也可以通过另一种方法制备。首先利用氨基或者羟基取代的双膦酸化合物与氯乙酰氯反应制备化合物(12)。反应可以加入缚酸剂，缚酸剂可以是各种有机碱例如三乙胺、吡啶等，也可以为无机碱，例如一价金属的碳酸氢盐、碳酸盐等；原料与氯乙酰氯，缚酸剂的投料摩尔比为1∶1.1～1.5∶0～1.5；有机溶剂可以为二氯甲烷，氯仿，苯或者上述溶剂与水的两相体系等；反应温度在0-40℃，最好15℃；反应时间约为2-6小时。然后，化合物(4)或者(5)与化合物(12)在碱的作用下反应得到化合物(9)或者(16)，反应也可以加入少量的催化剂。化合物(4)或者(5)与化合物(12)，碱以及催化剂的摩尔比为1∶1～1.3∶1～1.3∶0～0.1；碱包括一价金属的碳酸盐，如碳酸钾或钠等；或者一价金属的氢化物，如钠氢，钾氢等；催化剂可以为一价金属的碘化物，如碘化钾或者碘化钠等；有机溶剂可以为四氢呋喃，丙酮，二氧六环以及N，N-二甲基甲酰胺等；反应可以在0-80℃进行1-24小时。

苄基保护的化合物(9)或者(16)钯碳催化下脱掉保护基得到化合物(10)或者(17)。钯碳可以为5％或者10％的；化合物(9)或者(16)与钯碳的投料比为1mmol/60mg～1mmol/160mg；溶液可以为四氢呋喃，乙酸乙酯或者醇例如，甲醇或者乙醇等；温度在20-50℃，反应时间在24-48小时。

化合物(10)或者(17)脱酯化水解转化为化合物(11)或者(18)。使用脱酯化试剂可以为卤硅烷，例如三甲基溴硅烷，三甲基碘硅烷或者三甲基氯硅烷，最好是三甲基碘硅烷；化合物(10)或者(17)与卤硅烷的摩尔比为1∶3～10，最好为1∶8；有机溶剂可以为干燥的氯代烃，如二氯甲烷或者氯仿等；反应温度为0-25℃，最好用惰性气体保护，例如氮气或者氩气等，反应24-72小时。

通过小鼠双侧卵巢切除引起的骨质疏松动物模型，以阿伦膦酸(Alendronate)为阳性对照品，评价新化合物的抗骨质疏松作用。假手术组(Sham)仅给予蒸馏水；卵巢切除手术组(OVX)，一组仅给予蒸馏水，另一组按体重腹腔注射(ip)各化合物，每天给药一次，每周5次，连续4周后，处死动物，取子宫并称其湿重、取胫骨，剔除骨周围组织，置于70％乙醇保存，用pQCT骨密度仪测定骨密度含量。结果显示：设计的新化合物(10A)、(11A)、(17A)、(18A)可以抑制卵巢切除引起的骨流失，有较好的抗骨质疏松作用，并且酸(11A)、(18A)相比相应的酯(10A)、(17A)有更好的作用。

附图说明

图1是小鼠卵巢切除模型给予本发明化合物对胫骨骨密度的影响。

进一步说明见实施例5。

具体实施方式

通过下述实施例将有助于理解本发明，但并不限制本发明的内容。

                                实施例1

雷洛昔芬和双膦酸拼和物(9A)合成路线1

步骤1：化合物(6)的制备

方法A：

124mg(0.2mmol)化合物(4)溶于30ml丙酮，依次加入110mg碳酸钾，少量碘化钾及345mg氯乙酸乙酯，60～70℃搅拌3小时，浓缩，用乙酸乙酯萃取三次，水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，硅胶柱层析(氯仿/甲醇40∶1)，得65mg黄色粉状结晶，收率52％。

方法B：

将112.6mg(0.2mmol)化合物(4)溶于4mL无水THF中，加入NaH 15mg(0.35mmol)，搅拌，然后加入溴乙酸乙酯0.026mL(0.23mmol)，反应1小时。浓缩，倒入饱和的氯化胺溶液中，适量乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇25∶1)得到43mg淡黄色泡沫状固体，收率33％。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ1.45(2H，m)，1.50(9H，s)，1.59(4H，m)，2.48(4H，br)，2.74(2H，t，J＝6.0)，4.09(2H，t，J＝6.0)，4.58(2H，s)，5.00(2H，s)，6.77(2H，d，J＝9.1)，6.83(2H，q，J＝2.1，J＝6.9)，6.99(1H，dd，J＝2.4，J＝8.9)，7.29(1H，d，J＝2.2)，7.32-7.38(7H，m)，7.54(1H，d，J＝8.8)，7.76(2H，q，J＝1.9，J＝7.0)。

步骤2：化合物(7)的制备

将70mg(6)(0.108mmol)溶于15mLTHF中，加入3mL 1N LiOH溶液，40℃反应过夜。浓缩，用30mL氯仿萃取，盐酸调节PH＝3～5，分出有机相，无水硫酸钠干燥。蒸除氯仿得到黄色泡沫状固体66mg，收率95％。M.p.78℃.

¹HNMR(600MHz，DMSO-d₆)1.42(2H，br)，1.61(4H，br)，2.90(4H，br)，3.08(2H，br)，4.26(2H，br)，4.73(2H，s)，5.02(2H，s)，6.94(2H，d，J＝8.8)，6.95(2H，d，J＝9.1)，6.98(1H，dd，J＝2.3，J＝8.8)，7.26-7.30(4H，m)，7.32-7.37(4H，m)，7.60(1H，d，J＝2.3)，7.68(2H，d，J＝8.8)。

步骤3：化合物(9A)的制备

I.酰氯(8)的制备

将31mg化合物(7)(0.05mmol)溶于2mLCH₂Cl₂，加入1滴DMF，0℃下加入草酰氯0.007mL，室温搅拌20分钟，抽除溶剂得到橙色固体。

II.拼和物(9A)的制备

将上述得到的固体溶于5mL干燥CH₂Cl₂，滴加20.6mg氨基次甲基双膦酸四乙酯(1)(0.068mmol)，和0.3mL吡啶。室温下搅拌3小时，少量水洗，无水硫酸钠干燥。硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇50∶1～20∶1)得到45.9mg淡黄色固体，收率89％。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ1.28(12H，m)，1.44(2H，br)，1.61(4H，m)，2.53(4H，br)，2.79(2H，t，J＝5.6)，4.18(10H，m)，4.65(2H，s)，4.99(2H，s)，5.06(1H，td，J＝10.2，J＝21.5)，6.77(2H，d，J＝9.0)，6.84(2H，q，J＝2.0，J＝6.9)，7.00(1H，dd，J＝2.3，J＝9.0)，7.08(1H，d，J＝2.0)，7.31-7.39(7H，m)，7.57(1H，d，J＝9.0)，7.74(2H，q，J＝1.8，J＝7.0)。

MS(ESI)：m/e 905.3(M⁺-1)907.4(M⁺+1)。

雷洛昔芬和双膦酸拼和物(9A)合成路线2

I.化合物(12A)的制备

0℃将0.303g(1mmol)氨基双膦酸酯，1mL水和0.092g碳酸氢钠混合，搅拌下，滴加0.08mL(1mmol)氯乙酰氯的2mL苯溶液，混合物室温搅拌3小时，分去水层，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩。硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇40∶1～35∶1)得到266mg液体，收率70％。

¹HNMR(600MHz，CDCl₃)δ1.33(12H，m)，4.02(2H，s)，4.19(8H，m)，4.89(1H，td，J＝21)。

II.化合物(9A)的制备

0℃将67.56mg(0.12mmol)苄基单保护的雷洛昔酚溶于10mL无水N，N-二甲基甲酰胺，分批加入4.8g60％的钠氢，搅拌30分钟，向其中滴加含有37.95g(0.1mmol)的四氢呋喃溶液，室温反应过夜。反应混合物投入100mL冷的氯化胺饱和溶液中，二氯甲烷(30mL)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩。硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇20∶1)得到10mg淡黄色固体，收率11％。

步骤4：脱苄基制备化合物(10A)

将450mg(0.50mmol)苄基保护的化合物(9A)溶于15mL甲醇，加入10％Pd-C 160mg，氢化反应48小时，TLC检测原料点消失。硅胶柱层析(氯仿/甲醇30∶1～10∶1)得到282mg淡黄色固体，收率70％。

¹HNMR(600MHz，CDCl₃)δ1.25-1.35(12H，m)，1.50(2H，br)，1.71(4H，br)，2.67(4H，m)，2.87(2H，br)，4.14-4.61(10H，m)，4.61(2H，s)，5.06(1H，td，J＝10.2，J＝21.5)，6.64(4H，t，J＝9.1)，6.99(1H，dd，J＝2.4，J＝8.8)，7.09(2H，d，J＝9.0)，7.28(1H，d，J＝2.4)，7.63(2H，d，J＝8.8)，7.71(1H，d，J＝8.8)。

MS(ESI)：m/e 815.3(M⁺-1)817.4(M⁺+1)。

步骤5：化合物(11A)的制备

将51mg(10A)(0.062mmol)溶于4mL干燥CHCl₃，冰浴冷却，加入0.1mL(0.76mmol)三甲基溴硅烷，20℃反应48小时。抽干，加入3mL甲醇，搅拌，得到黄色悬浊液，过滤，甲醇洗涤，烘干得到米黄色固体33mg。收率75％。M.p.249℃。

¹HNMR(400MHz，D₂O)δ1.07(2H，br)，1.18(4H，br)，2.03(4H，br)，2.27(2H，br)，3.58(2H，br)，3.97(1H，t，J＝18.7)，4.48(2H，s)，6.10(2H，d，J＝8.4)，6.25(2H，d，J＝8.0)，6.75(2H，d，J＝8.4)，6.86(1H，dd，J＝2.2，J＝8.8)，7.07(1H，d，J＝8.8)，7.21(2H，d，J＝8.0)，7.34(1H，d，J＝2.2)。³¹P NMR δ_ppm-11.29。

Anal.Calcd.for C₃₁H₃₄N₂O₁₁P₂S.1.5H₂O：C，50.84；H，5.06；N，3.83 Found：C，50.81；H5.02；N，3.68

           实施例2  化合物(11B)的制备。(制备方法与实施例1相同)

步骤1：化合物(9B)的制备

使用4-氨基丁基-1，1-双膦酸四乙酯作原料，得淡黄色固体，收率80％。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ1.3(12H，br)，1.5(6H，m)，1.7(2H，qt，J＝7)，1.9(2H，tq，J＝9.6)，2.4(1H，tt，J＝24.3)2.53(4H，br)，2.62(2H，t)，2.79(2H，t，J＝5.6)，4.18(10H，m)，4.65(2H，s)，4.99(2H，s)，6.77(2H，d，J＝9.0)，6.9(2H，q，J＝2.0，J＝6.9)，7.00(1H，dd，J＝2.3，J＝9.0)，7.08(1H，d，J＝2.0)，7.36(7H，m)，7.6(1H，d，J＝9.0)，7.74(2H，q，J＝1.8，J＝7.0)。

步骤2：化合物(10B)的制备

收率75％。

¹HNMR(600MHz，CDCl₃)δ1.35(12H，m)，1.50(6H，br)，1.71(2H，m)，1.9(2H，m)，2.38(1H，m，J＝23.6)，2.6(2H，t)，2.64(4H，m)，2.83(2H，br)，4.2-4.61(10H，m)，4.61(2H，s)，6.6(4H，t，J＝9.1)，7.0(1H，dd，J＝2.4，J＝8.8)，7.1(2H，d，J＝9.0)，7.28(1H，d，J＝2.4)，7.65(2H，d，J＝8.8)，7.7(1H，d，J＝8.8)。

步骤3：化合物(11B)的制备

得到土黄色固体，收率72％。

¹HNMR(400MHz，D₂O)δ1.2(6H，br)，1.61(2H，m)，1.88(2H，m)，2.53(4H，br)，2.58(2H，br)，2.61(2H，t)，2.7(2H，br)，3.67(1H，t，J＝18.7)，4.48(2H，s)，6.10(2H，d，J＝8.4)，6.25(2H，d，J＝8.0)，6.75(2H，d，J＝8.4)，6.9(1H，d，J＝8.8)，7.1(1H，d，J＝8.8)，7.21(2H，d，J＝8.0)，7.4(1H，d，J＝2.2)。

           实施例3  化合物(11C)的制备。(制备方法与实施例1相同)

步骤1：化合物(9C)的制备

使用4-羟基丁基-1，1-双膦酸四乙酯作原料，得淡黄色固体，收率65％。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ1.23(12H，br)，1.5(6H，m)，1.8(2H，qt，J＝2)，2.1(2H，tq，J＝9)，2.4(1H，tt，J＝23.8)2.53(4H，br)，2.79(2H，t，J＝5.6)，3.62(2H，t)，4.18(10H，m)，4.65(2H，s)，4.99(2H，s)，6.77(2H，d，J＝9.0)，6.9(2H，q，J＝2.0，J＝6.9)，7.00(1H，dd，J＝2.3，J＝9.0)，7.08(1H，d，J＝2.0)，7.36(7H，m)，7.6(1H，d，J＝9.0)，7.74(2H，q，J＝1.8，J＝7.0)。

步骤2：化合物(10C)的制备

得到淡黄色固体，收率78％。

¹HNMR(600MHz，CDCl₃)δ1.35(12H，m)，1.50(6H，br)，1.8(2H，m)，2.1(2H，m)，2.38(1H，m，J＝23.9)，2.64(4H，m)，2.83(2H，br)，3.7(2H，t)，4.2-4.61(10H，m)，4.61(2H，s)，6.6(4H，t，J＝9.1)，7.0(1H，d，J＝8.8)，7.1(2H，d，J＝9.0)，7.28(1H，d，J＝2.4)，7.65(2H，d，J＝8.8)，7.7(1H，d，J＝8.8)。

步骤3：化合物(11C)的制备

得到土黄色固体，收率62％。

¹HNMR(400MHz，D₂O)δ1.2(6H，br)，1.8(2H，m)，2.1(2H，m)，2.53(4H，br)，2.58(2H，br)，2.7(2H，br)，3.67(1H，t，J＝20.7)，3.71(2H，t)，4.48(2H，s)，6.10(2H，d，J＝8.4)，6.25(2H，d，J＝8.0)，6.75(2H，d，J＝8.4)，6.9(1H，d，J＝8.8)，7.1(1H，d，J＝8.8)，7.21(2H，d，J＝8.0)，7.4(1H，d，J＝2.2)。

           实施例4  化合物(17A)的制备。(制备方法与实施例1相同)

步骤1：化合物(13)的制备

加入112.6mg(0.2mmol)原料(5)，得到71mg淡黄色泡沫状固体，收率54.6％。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ1.27(3H，t，J＝7.1)，1.50(6H，br)，2.54(4H，t)，2.79(2H，t，J＝6.0)，4.12(2H，t，J＝6.0)，4.25(2H，q，J＝7.1)，4.55(2H，s)，5.14(2H，s)，6.67(4H，dd，J＝2，J＝3)，7.04(1H，d，J＝2.4)，7.32-7.54(9H，m)，7.75(2H，d，J＝2.2)。

步骤2：化合物(14)的制备

将126mg(0.194mmol)原料(13)水解得到109mg黄色泡沫状固体，收率90.8％。M.p.78℃。

步骤3：化合物(16A)的制备

将0.1mmol原料(14)转化为酰氯，然后与氨基双膦酸反应，得到40mg产品，收率44.2％。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ1.45-1.25(18H，br)，1.61(4H，m)，2.53(4H，br)，2.80(2H，t)，4.10-4.23(10H，m)，4.51(2H，s)，5.00(1H，td，J＝10.2，J＝21)，5.08(2H，s)，6.80(4H，m)，6.97-7.04(2H，m)，7.33-7.48(8H，m)，7.78(2H，d，J＝2.0)。

MS(ESI)：m/e 907.3(M⁺+1)。

步骤4：化合物(17A)的制备

40mg原料经Pd/C催化加氢脱掉苄基保护基的产物33mg，收率91.7％。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ1.25-1.45(18H，br)，2.71(4H，t)，2.94(2H，br)，4.11-4.25(10H，m)，4.49(2H，s)，5.03(1H，td，J＝10.2，J＝21)，6.72(4H，m)，6.88(1H，d，J＝2.35)，7.06(1H，d，J＝9.9)，7.31(2H，d，J＝1.9)，7.40(1H，d，J＝8.9)，7.72(2H，d，J＝8.9)。

MS(ESI)：m/e 817.2(M⁺+1)。

步骤5：化合物(18A)的制备

32mg原料用三甲基溴硅烷水解得到27.6mg淡黄色固体，收率90％，熔点>285℃

¹HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.23(6H，br)，2.71(4H，br)，2.94(2H，br)，3.97(1H，t，J＝18.7)，4.14(2H，br)，4.48(2H，s)，6.87(3H，m)，6.97(2H，d，J＝8.9)，7.21-7.28(3H，m)，7.32(1H，d，J＝8.9)，7.70(2H，d，J＝8.9)，。

MS(ESI)：m/e 726.94(M⁺+23)。

                  实施例5  化合物抗骨质疏松药效学实验

通过小鼠双侧卵巢切除引起的骨质疏松动物模型，以Alendronate为阳性对照品，评价新化合物的抗骨质疏松作用。

方法：

【1】昆明种小鼠，雌性，9周龄(体重约33克左右)，由上海实验动物饲养中心提供。

【2】经适应性饲养后，以戊巴比妥钠为麻醉剂，ip 60mg/kg，经背部作双侧卵巢切除术(OVX)，假手术(Sham)组仅清除卵巢周围脂肪。

【3】术后恢复饲养2-3天，随机分组，每组5鼠，按体重腹腔注射(ip)被试化合物，给药浓度与阳性药一致，Sham和OVX仅给予蒸馏水；动物每周称一次体重以调整给药剂量；每天给药一次，每周5次，连续4周后，处死动物，取子宫并称其湿重、取胫骨，剔除骨周围组织，置于70％乙醇保存，用pQCT骨密度仪测定骨密度含量。

实验结果：

                   OVX小鼠模型给药4周对胫骨骨密度变化

Sham：代表假手术组；OVX：代表卵巢手术组；OVX+18A：代表卵巢切除手术后注射新化合物(18A)组；OVX+17A：代表卵巢切除手术后注射新化合物(17A)组；OVX+10A：代表卵巢切除手术后注射新化合物(10A)组；OVX+11A：代表卵巢切除手术后注射新化合物(11A)组。

实验发现：当卵巢切除后小鼠的骨密度显著下降；当注射了新化合物后，小鼠的骨密度相比假手术组都有不同程度的增加。药理实验数据说明本发明所设计的化合物在一定程度上均能抑制小鼠卵巢切除后所引起得骨密度下降。特别是化合物11A和化合物18A能提高骨密度分别达到42.151％、35.071％，具有较好的抗骨质疏松作用。

结论：

实验结果表明专利报道的化合物11A和18A有较好的防治骨流失作用，可以用来治疗骨质疏松症。

Claims (7)

1、一种骨靶向药物，其结构式如下：

其中：Y为氧或者-NH-；R为氢、一价金属盐或含有1-4个碳的烷基；n为0-3的整数。

2、如权利要求1所述的骨靶向药物的合成方法，其特征是通过下述步骤分别合成：

1)在有机溶剂中，化合物(4)或者(5)与溴乙酸酯或者氯乙酸酯在碱作用下和一价金属的碘化物催化剂存在下反应得氧烷基化产物化合物(6)或者(13)，所述的碱是一价金属的碳酸盐或者氢化物，也可以加入少量的一价金属的碘化物催化反应；反应原料(4)或者(5)与溴乙酸酯或者氯乙酸酯，碱的摩尔比为1∶1～10∶1～10；反应在0～80℃进行1～24小时；

2)在有机溶剂中，温度在30-60℃下，化合物(6)或者(13)与碱水解6-24小时得到化合物(7)或者(14)，所述的碱是一价金属的氢氧化物，碱水溶液浓度为1～3N；化合物(6)或者(13)与碱的摩尔比为1∶3～10；

3)在有机溶剂中，温度在0-60℃下，酸(7)或者(14)与酰化剂反应3-6小时制得化合物(8)或者(15)，酰化试剂是二氯亚砜、或者草酰氯/N，N-二甲基甲酰胺，原料与酰化试剂的摩尔比为1∶3～10；

4)在有机溶剂中，可任选地加入缚酸剂，化合物酰氯(8)或者(15)与氨基或者羟基取代的双膦酸化合物反应6-24小时获得化合物(9)或者(16)，缚酸剂是有机碱，酰氯、双膦酸和碱的投料摩尔比为1∶1～1.2∶0～1.2；反应温度20-40℃；

5)在有机溶剂中，可任选地加入缚酸剂，氨基或者羟基取代的双膦酸化合物与氯乙酰氯反应制备化合物(12)，缚酸剂是有机碱或无机碱，原料、氯乙酰氯和缚酸剂的投料摩尔比为1∶1.1～1.5∶0～1.5；反应温度在0-40℃，反应时间为2-6小时；

6)在有机溶剂中，可任选地加入催化剂，化合物(4)或者(5)与化合物(12)和碱在0-80℃反应1-24小时得到化合物(9)或者(16)，化合物(4)或者(5)与化合物(12)、碱以及催化剂的摩尔比为1∶1～1.3∶1～1.3∶0～0.1；碱是一价金属的碳酸盐或者氢化物，催化剂是一价金属的碘化物；

7)苄基保护的化合物(9)或者(16)钯碳催化下反应24-48小时脱掉保护基得到化合物(10)或者(17)，化合物(9)或者(16)与钯碳的投料比为1mmol/60mg～1mmol/160mg反应温度为20-50℃；

8)在有机溶剂中，可任选地通入惰性气体保护，化合物(10)或者(17)与脱酯化试剂在0-25℃反应24-72小时脱酯化水解转化为化合物(11)或者(18)，脱酯化试剂是卤硅烷，化合物(10)或者(17)与卤硅烷的摩尔比为1∶3～10；

上述化合物结构式如下：

其中，上述氨基或者羟基取代的双膦酸化合物结构式为

，R、Y和n如权利要求1所述。

3、根据权利要求2所述的骨靶向药物的合成方法，其特征在于，步骤1)中所述的一价金属碘化物为碘化钾或碘化钠。

4、根据权利要求2所述的骨靶向药物的合成方法，其特征在于，步骤4)、5)中所述的有机碱为三乙胺或吡啶，步骤5)中的无机碱为一价金属的碳酸氢盐或碳酸盐。

5、根据权利要求2所述的骨靶向药物的合成方法，其特征在于，步骤8)中所述的卤硅烷为三甲基溴硅烷，三甲基碘硅烷或者三甲基氯硅烷。

6、根据权利要求2所述的骨靶向药物的合成方法，其特征在于，步骤5)所述的有机溶剂是二氯甲烷、氯仿或苯或者上述溶剂与水的两相体系。

7、如权利要求1所述的骨靶向药物在制备抗骨质疏松的药物中的应用。

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