CH684782A5 - Antigen for inducing CD8+ cellular immune responses - Google Patents

Abstract

CD8<+> T-cell-mediated immune responses can be induced in vivo for determining the immune status with respect to viral antigens by the use of particular specific peptides which can be introduced into the skin. The peptides designed according to the invention replace viral antigens so that determinations of immune status can be carried out with CD8<+> T-cell-mediated immune responses just as safely, easily and reliably as with those derived from CD4<+> T cells.

Description

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CH 684 782 A5 CH 684 782 A5

Beschreibung description

Die Standard Methode zur Bestimmung von Immunlagen in vivo durch Zell vermittelte Immunantworten besteht darin, einem Individuum Antigene parenteral zuzuführen und nach Ablauf einer gewissen Zeitdauer nach der Zuführung die Auswirkung letzterer klinisch zu beurteilen. Werden bei dieser Methode Antigene in die Haut gebracht und werden zur Bestimmung der Immunlage Hautreaktionen beurteilt, spricht man von der Messung von Zellimmunantworten mittels Hautreaktionen vom verzögerten Typ (auch: delayed type hypersensitivity, DTH, nur englisch gebräuchlich, genannt). Sind Zellimmunantworten positiv, indem beispielsweise eine verzögerte Schwellung der Haut nach sub- oder intrakutaner Verabfolgung eines aus einem Protein bestehenden Antigenes (oder anderer) klinisch festgestellt wird, so liegt eine Immunität gegen das Antigen und die durch dieses ausgelöste Krankheit (z.B. Infektionskrankheit) vor. Sind Zellimmunantworten negativ, indem keine Schwellungen, Reizungen oder dergleichen feststellbar sind, so liegt keine nachweisbare Immunität vor. Als Antigene, die Zell vermittelte Immunantworten auslösen, wirken Bakterien, ihre Toxine, Viren, Blutkörperchen, tierische und pflanzliche Gifte, artfremdes Eiweiss u.a. The standard method for determining immune positions in vivo by cell-mediated immune responses is to deliver antigens parenterally to an individual and to evaluate the effect of the latter clinically after a certain period of time after the delivery. If antigens are brought into the skin with this method and skin reactions are assessed to determine the immune position, one speaks of measuring cell immune responses by means of skin reactions of the delayed type (also: delayed type hypersensitivity, DTH, only used in English). If cell immune responses are positive, for example, if a delayed swelling of the skin after sub- or intracutaneous administration of an antigen (or other) consisting of a protein is clinically determined, then there is immunity against the antigen and the disease caused by it (e.g. infectious disease). If cell immune responses are negative because no swellings, irritations or the like can be determined, there is no detectable immunity. Bacteria, their toxins, viruses, blood cells, animal and vegetable poisons, foreign proteins, etc. act as antigens that trigger cell-mediated immune responses.

Die Immunlagen, beispielsweise bezüglich Tuberkulose, Lepra und der Boekschen Krankheit können über Zell vermittelte Immunantworten als Hautreaktionen vom verzögerten Typ durch Verabfolge entsprechender bakterieller Antigene erfasst werden. In diesen Fällen widerspiegeln bei vorliegender Immunität die Hautreaktionen sogenannte CD4+ T Zell vermittelte Immunantworten. Diese kommen dadurch zustande, dass CD4+ T Zellen, die spezifische Rezeptoren tragen, entsprechende Antigene erkennen und mit ihnen reagieren, wobei diese entsprechenden Antigene vorab von Makrophagen und/ oder B-Zellen als Antigenpräsentierzellen aufgenommen oder phagozitiert und in den Antigenpräsentier-zellen enzymatisch gespalten und dann über Klasse II Transplantationsantigene auf deren Oberfläche exprimiert werden müssen. The immune situation, for example with regard to tuberculosis, leprosy and Boek's disease, can be determined via cell-mediated immune responses as skin reactions of the delayed type by administration of appropriate bacterial antigens. In these cases, if the immunity is present, the skin reactions reflect so-called CD4 + T cell-mediated immune responses. These come about because CD4 + T cells that carry specific receptors recognize and react with corresponding antigens, these corresponding antigens being previously taken up or phagocited by macrophages and / or B cells as antigen presentation cells and enzymatically cleaved in the antigen presentation cells and then transplantation antigens must be expressed on their surface via class II.

Diese Art der Immunlagenbestimmung mit CD4+ T Zell vermittelten Immunantworten* ist durch die sub- und intrakutane Injektion der Antigene einfach auszuführen, in ihren Ergebnissen weitgehend verlässlich und durch die Verwendung abgetöteter oder abgeschwächt wirksamer Antigene in ihrer Anwendung ungefährlich, allerdings ist sie weitgehend auf die Anwendung bakterieller Antigene der genannten Art oder Wirkungsweise beschränkt. This type of immune position determination with CD4 + T cell-mediated immune responses * is easy to carry out by sub- and intracutaneous injection of the antigens, the results are largely reliable, and the use of killed or weakened antigens is harmless in their application, but it is largely application-specific limited bacterial antigens of the type or mode of action mentioned.

Immunlagenbestimmungen gegen virale Antigene, beispielsweise gegen Hepatitis, HIV, Pocken, Röteln, Masern u.a. auslösende Viren, sind demnach mit CD4+ T Zell vermittelten Immunantworten gemessen als verzögerte Hautreaktionen nicht oder schlecht nachweisbar. Dies ist jedoch grundsätzlich mit CD8+ T Zell vermittelten Immunantworten möglich. Immunlagenbestimmungen durch verzögerte Hautreaktion vermittels CD8+ T Zellen haftet jedoch der grosse Nachteil an, dass sie nur mit infektösem Virus durchführbar wären, was als eine besonders grosse Gefährdung nicht immuner Personen angesehen wird. An der tatsächlichen oder potentiellen Gefährdungslage liegt es, dass für menschliche Patienten bisan kein Hauttest des verzögerten Typs auf Grundlage von CD8+ T Zell vermittelten Immunantworten entwickelt und zur Anwendung gebracht wurde. So sind zur Bestimmung von Immunlagen gegen virale Antigene Tests entwickelt worden, die in vitro durchzuführen und in ihren Ergebnissen sehr aufwendig erfassbar sind. Immune level determinations against viral antigens, e.g. against hepatitis, HIV, smallpox, rubella, measles, etc. triggering viruses, measured with CD4 + T cell-mediated immune responses, measured as delayed skin reactions, are not or only poorly detectable. In principle, however, this is possible with CD8 + T cell-mediated immune responses. Immune position determinations by delayed skin reaction by means of CD8 + T cells, however, have the great disadvantage that they could only be carried out with an infectious virus, which is regarded as a particularly great risk to non-immune persons. It is due to the actual or potential risk situation that no skin test of the delayed type based on CD8 + T cell-mediated immune responses has been developed and applied for human patients. For the determination of immune positions against viral antigens, tests have been developed which are to be carried out in vitro and the results of which are very complex to measure.

Die sogenannten zytotoxischen oder CD8+ T Zellen vermögen nur aus Polypeptiden (8-10 Aminosäuren) gebildete Antigene zu erkennen, vorausgesetzt, dass diese Antigene über Klasse I Transplantationsantigene Rezeptoren der CD8+ T Zellen präsentiert werden (im Gegensatz zu den CD4+ T Zellen, die nur Klasse II präsentierte Peptide erkennen). Damit Antigenpeptide auf Klasse I Transplantationsantigenen darstellbar werden, müssen diese Peptide im Prinzip von Zellen selbst synthetisiert werden, wobei diese Selbstsynthese auch die Bildung viraler Antigene und Peptide in infizierten Zellen einschliesst. Selbstsynthese und Darstellung der Antigene über Klasse I Transplantationsantigene sind Gründe dafür, dass im Regelfall virale Proteine oder ganze komplexe Antigene von CD8+ T Zellen nicht erkannt werden können, wenn solche Proteine und Antigene von aussen den Zellen zugegeben werden; bei Zugabe von aussen findet in der Regel nur Phagozytierung statt, wodurch verdaute Peptide nur auf Klasse II Transplantationsantigene präsentiert werden. Dazu kommt, dass die meisten Zellen der Haut normalerweise keine Klasse II Antigene besitzen. Dagegen sind Klasse I Transplatationsantigene in der Haut weiter verbreitet vorhanden. The so-called cytotoxic or CD8 + T cells can only recognize antigens formed from polypeptides (8-10 amino acids), provided that these antigens are presented via class I transplantation antigens receptors of the CD8 + T cells (in contrast to the CD4 + T cells, which are only class II recognize presented peptides). In order for antigen peptides to be classifiable on class I transplantation antigens, these peptides must in principle be synthesized by cells themselves, this self-synthesis also including the formation of viral antigens and peptides in infected cells. Self-synthesis and display of the antigens via class I transplantation antigens are reasons why, as a rule, viral proteins or entire complex antigens of CD8 + T cells cannot be recognized if such proteins and antigens are added to the cells from outside; when added from the outside, only phagocytosis usually takes place, as a result of which digested peptides are only presented on class II transplantation antigens. In addition, most cells in the skin normally do not have class II antigens. In contrast, class I transplantation antigens are more widespread in the skin.

Ohne aktive Infektion der Zelle ist aber eine intrazelluläre Synthese von Klasse I präsentierten Peptiden und die entsprechende Präsentation in vivo in der Regel schwer zu bewerkstelligen. Da die CD8+ T Zellen, die solche Antigene dann erkennen können, in der Infektions-Immunologie eine grosse schützende aber auch potentiell schädigende Rolle spielen, möchte man deren Aktivität zweckmässigerweise nachweisen können. Without active cell infection, however, intracellular synthesis of class I presented peptides and the corresponding presentation in vivo is generally difficult to accomplish. Since the CD8 + T cells, which can then recognize such antigens, play a major protective but also potentially damaging role in infection immunology, it is desirable to be able to demonstrate their activity expediently.

Hiervon ausgehend ist es Aufgabe der Erfindung, durch Entwicklung eines Agens Immunlagenbestimmungen vermittels CD8+ T Zell vermittelter Immunantworten so auszugestalten, dass die Gefährdungslage durch die Verwendung von Antigenen in Form infektöser Viren ebenso vermieden ist wie der intrazellulare Bildungsvorgang zur Selbstsynthetisierung von Peptiden, einschliesslich Peptiden infizierter Zellen, und die Aufgabe wird erfindungsgemäss durch Agentien, d.h. wirkende Mittel nach den Merkmalen des Anspruches 1 gelöst. Proceeding from this, it is an object of the invention to develop immune position determinations by means of CD8 + T cell-mediated immune responses in such a way that the risk situation by using antigens in the form of infectious viruses is avoided, as is the intracellular formation process for self-synthesis of peptides, including peptides of infected cells , and the task according to the invention by agents, ie acting means solved according to the features of claim 1.

Die gemäss der Erfindung durch Peptide ausgelösten Hautreaktionen des verzögerten Typs sind als The skin reactions of the delayed type triggered by peptides according to the invention are as

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CH 684 782 A5 CH 684 782 A5

CD8+ T Zell vermittelte Immunantworten echte Alternativen zu den für menschliche Patienten zu gefährlichen Lebendvirus-Einspritzungen, wobei die vermittels Peptiden ausgelösten Hautreaktionen des verzögerten Typs weitgehend gleiche Eigenschaften und Charakteristika aufweisen wie nach der CD4+ T Zell Methode erzeugten Hautreaktionen. Zufolge der obligatorischen Präsentation von Klasse I Transplantationsantigenen, die die Antigenpräsentation begrenzen, müssen entweder die HLA Varianten (Humane Lymphozyten Antigene) des Patienten und die dazu passenden, entsprechenden Peptide jedes interessierenden Virus, Bakteriums etc. bekannt sein oder es ist ein Peptid-Cocktail, d.h. eine vermischte Zusammenstellung verschiedener Peptide zu benutzen, um die CD8+ T abhängige (DTH) Hautreaktion des verzögerten Typs in einer bzw. allen Personen zu ermitteln. Mit Verwendung des erfindungsge-mässen Agens im Zusammenhang mit CD8+ T Zellen wird ein neuartiges, leicht und schnell bedienbares Instrument nicht nur zur Ermittlung der zellulären Immunabwehrlage bei akuten viralen und anderen Infektionen geschaffen, sondern insbesondere auch eine Bestimmung der T Zellen Reaktivität bei chronisch vorliegenden und fortbestehenden, durch Viren oder andere Infekte oder Antigene ausgelöste Krankheiten ermöglicht, wie beispielsweise bei chronisch aggressiver Hepatitis oder HIV oder bei chronisch immunpatologischen Krankheiten, bei denen CD8+ T Zellen ständig aktiviert sind. CD8 + T cell-mediated immune responses are real alternatives to the live virus injections which are dangerous for human patients, the skin reactions of the delayed type triggered by peptides having largely the same properties and characteristics as skin reactions generated by the CD4 + T cell method. Due to the mandatory presentation of class I transplantation antigens that limit the antigen presentation, either the patient's HLA variants (human lymphocyte antigens) and the corresponding peptides of each virus, bacterium, etc. of interest must be known, or it is a peptide cocktail, ie to use a mixed assortment of different peptides to determine the delayed-type CD8 + T dependent (DTH) skin reaction in one or all individuals. With the use of the agent according to the invention in connection with CD8 + T cells, a novel, easy and quick to use instrument is created not only for determining the cellular immune defense situation in the case of acute viral and other infections, but in particular also for determining the T cell reactivity in the case of chronic and persistent diseases caused by viruses or other infections or antigens, such as chronically aggressive hepatitis or HIV, or chronic immunopathological diseases in which CD8 + T cells are constantly activated.

Weitere vorteilhafte Weiterbildungen der Verwendung des erfindungsgemässen Agens ergibt sich aus den dem Patentanspruch 1 folgenden Ansprüchen. Further advantageous developments of the use of the agent according to the invention result from the claims following claim 1.

Folgend wird die Verwendung und das Agens nach der Erfindung beispielhaft näher dargestellt. Bestimmt wird die CD8+ T Zell vermittelte Immunitätslage durch Applikation viraler Peptide in die Haut zur Auslösung einer verzögerten Hautreaktion. Dargestellt wird die Immunitätslage eines Menschen, indem das Immunsystem einer Maus beeinflusst wird. Dies ist möglich, da das Immunsystem der Maus und des Menschen bezüglich der grundsätzlichen Eigenschaften (Struktur, Erkenntnismechanismen, Zellphysiologie, etc.) weitestgehend identisch sind. Deshalb sind Ergebnisse über T Zellerkenntnis, der Rolle von T Zellen in Schutz gegen Infektionen und die Befunde über Immunologisches Gedächtnis fast uneingeschränkt von der Maus auf den Menschen übertragbar. The use and the agent according to the invention are illustrated in more detail below by way of example. The CD8 + T cell-mediated immunity level is determined by applying viral peptides to the skin to trigger a delayed skin reaction. The immunity situation of a person is shown by influencing the immune system of a mouse. This is possible because the mouse and human immune systems are largely identical in terms of their basic properties (structure, cognitive mechanisms, cell physiology, etc.). Therefore, results on T cell knowledge, the role of T cells in protection against infection and the findings on immunological memory can be transferred almost without restriction from the mouse to humans.

Bezüglich CD8+ T Zell vermittelte Immunität gegen lypmphozytäres choreominigitis Virus (LCMV) oder vesikulären Stomatitis Virus (VSV) hat sich nach umfangreichen Untersuchungen ergeben, dass LCMV in der Maus einen spezifischen anti-viral schützenden Immunschutz auslöst. CD4+ T Zellen und Antikörper spielen beim frühen Immunschutz gegen LCMV keine bedeutende Rolle. Einige der von Klasse I Transplantationsantigen präsentierten und so von CD8+ T Zellen spezifisch erkennbaren LCMV-Peptide sind bestimmt worden; z.B. das Peptid NP 118-132 (LCMV-nucleopeptid Aminosäuren 118-132) das von Transplantationsantigenen H-2d (H-2Ld) aber nicht von H-2b präsentiert und entsprechend erkannt werden kann. Ebenso sind von vesikulären Stomatitis Virus (VSV) Indiana (VSV-IND) von CD8+ T erkennbare Peptide definiert worden, insbesondere das von Transplantationsantigen H-2Kb präsentierte und CD8+ T Zellen erkennbare Peptid VSV-IND Nucleopeptid Aminosäuren 49-62. With regard to CD8 + T cell-mediated immunity against lypmphocytic choreominigitis virus (LCMV) or vesicular stomatitis virus (VSV), extensive studies have shown that LCMV triggers a specific anti-viral protective immune protection in the mouse. CD4 + T cells and antibodies play no significant role in early immune protection against LCMV. Some of the LCMV peptides presented by class I transplantation antigen and thus specifically recognizable by CD8 + T cells have been determined; e.g. the peptide NP 118-132 (LCMV nucleopeptide amino acids 118-132) which is presented by transplantation antigens H-2d (H-2Ld) but not by H-2b and can be recognized accordingly. Vesicular stomatitis virus (VSV) Indiana (VSV-IND) of CD8 + T recognizable peptides have also been defined, in particular the peptide VSV-IND nucleopeptide amino acids 49-62 presented by transplantation antigen H-2Kb and recognizable by CD8 + T cells.

Beispielhalber wurden C57 BI/6 Mäuse vom Transplanatationsantigentyp H-2b mit VSV-IND immunisiert. Zu verschiedenen späteren Zeitpunkten wurden den Mäusen 30 ul spezifisches Peptid (VSV-IND NP 49-62) oder ein LCMV-Peptid (LCMV-NP 118-132) in verschiedenen Mengen subkutan in die Fusspfote injiziert. Die entstehende Fusspfotenschwellung ist, wie in den nachfolgenden Figuren und Tabellen zusammengefasst wird, abhängig von der Zeit, von der Menge injizierten Peptids, von der Art des Peptids und ob die Maus immun ist gegen das bestimmte Virus. For example, C57 BI / 6 transplantation antigen H-2b mice were immunized with VSV-IND. At various later times, 30 µl of specific peptide (VSV-IND NP 49-62) or an LCMV peptide (LCMV-NP 118-132) was injected into the mice in various amounts subcutaneously into the foot paw. The resulting foot paw swelling, as summarized in the figures and tables below, depends on the time, the amount of peptide injected, the type of peptide and whether the mouse is immune to the particular virus.

Fig. (A+B): Stellt dar, die Abhängigkeit der Fussschwellung von der Zeit (Zahlen 6, 8, 12, 20, 45 etc. gegen Tage nach der Infektion an) nach der Virusinfektion der Maus mit VSV-IND(A) oder mit LCM-V(B); das Maximum ist für VSV um den Tag 6, für LCMV um den Tag 13 nach Injektion zu messen; die Schwellung kann unter den gegebenen Bedingungen zu VSV bis zum Tag 20 für LCMV bis zum Tag 216 nach der Injektion klar gemessen werden. Das Maximum der Schwellung ist etwa 18-28 Stunden nach der subkutanen Applikation des Peptides erreicht. Fig. (A + B): represents the dependence of the foot swelling on the time (numbers 6, 8, 12, 20, 45 etc. versus days after infection) after the virus infection of the mouse with VSV-IND (A) or with LCM-V (B); the maximum is measured for VSV around day 6, for LCMV around day 13 after injection; the swelling can be clearly measured under the given conditions for VSV up to day 20 for LCMV up to day 216 after the injection. The maximum swelling is reached approximately 18-28 hours after subcutaneous application of the peptide.

Fig. 2: Zeigt, dass die gemessene Schwellung von CD8+ T Zellen abhängig ist; normale VSV-lmmu-ne (infiziert vor 6 Tagen) C57BL/6 (H-2b) (A) Mäuse entwickeln eine Fusspfotenschwellung gegen VSV-NP49-62. Wenn aber durch Behandlung die CD8+ T Zellen in diesen Mäusen eliminiert worden sind und die CD4+ T Zellen noch vorhanden sind, kann keine Schwellung gemessen werden. Wenn die CD4+ T Zellen eliminiert worden sind, die CD8+ T Zellen aber noch funktionieren, ist die Schwellung deutlich und gleich gross oder vergleichbar wie bei unbehandelten LCMV-immunen Mäusen. Fig. 2: Shows that the measured swelling is dependent on CD8 + T cells; normal VSV immune (infected 6 days ago) C57BL / 6 (H-2b) (A) mice develop foot paw swelling against VSV-NP49-62. However, if the CD8 + T cells in these mice have been eliminated by treatment and the CD4 + T cells are still present, no swelling can be measured. If the CD4 + T cells have been eliminated, but the CD8 + T cells still work, the swelling is clear and of the same size or comparable to that of untreated LCMV-immune mice.

Tabelle 1: Zeigt die Spezifität der Schwellungsreaktion. BALB/c Mäuse (H-2d) (immun gegen LCMV) entwickeln eine Schwellungsreaktion gegen das erkennbare Peptide LCMV-BP 118-132, nicht aber gegen ein von CD8+ T Zellen von H-2d Mäusen nicht erkennbares Peptid LCMV-Glyko-protein (GP) 32-41 (das von CD8+ T Zellen von H-2b Mäusen erkannt werden kann). C57BL/(H-2b) 6 Mäuse, die immun sind gegen LCMV entwickeln hingegen eine Fusspfotenschwellung gegen Peptid LCMV-GP 32-41 (mit Transplantationsantigen H-2b erkennbar), aber nicht gegen LCMV-NP 118-132 (da letzteres nur mit H-2d (Ld) erkennbar ist von CD8+ T Zellen). Wenn ein Gemisch der beiden Peptide verwendet wird, reagieren beide LCMV-immune H-2d und H-2b Mäuse gegen das Gemisch (siehe 3. Zeile, Tabelle 1). LCMV-Mäuse reagieren nicht gegen ein Peptid, das von einem irrelevanten Virus stammt, nämlich Peptid VSV-NP 49-62; BALB/c Mäuse (H-2d), die nicht immun sind gegen LCMV, d.h. nie mit LCMV infiziert worden sind, entwickeln keine messbare Schwellung. VSV-immune C57BL/6 (H-2b) Mäuse machen Table 1: Shows the specificity of the swelling reaction. BALB / c mice (H-2d) (immune to LCMV) develop a swelling reaction against the recognizable peptide LCMV-BP 118-132, but not against a peptide not recognizable by CD8 + T cells of H-2d mice LCMV-Glyko-protein ( GP) 32-41 (which can be recognized by CD8 + T cells from H-2b mice). C57BL / (H-2b) 6 mice that are immune to LCMV, on the other hand, develop foot puff swelling against peptide LCMV-GP 32-41 (recognizable with transplantation antigen H-2b), but not against LCMV-NP 118-132 (since the latter only with H-2d (Ld) is recognizable from CD8 + T cells). If a mixture of the two peptides is used, both LCMV-immune H-2d and H-2b mice react against the mixture (see 3rd line, Table 1). LCMV mice do not respond to a peptide derived from an irrelevant virus, namely peptide VSV-NP 49-62; BALB / c mice (H-2d) that are not immune to LCMV, i.e. who have never been infected with LCMV do not develop measurable swelling. Make VSV-immune C57BL / 6 (H-2b) mice

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eine Schwellung, wenn das Peptid VSV-NP 49-62 in die Fusspfote injiziert wird, nicht aber wenn das LCMV-NP 118-132 Peptid injiziert wird. swelling when the VSV-NP 49-62 peptide is injected into the paw but not when the LCMV-NP 118-132 peptide is injected.

Tabelle 2: Zeigt, dass leicht unterschiedliche Peptide der gleichen Region des viralen Proteins (z.B. LCMV-GP) unterschiedlich intensive Schwellungen auslösen können, so dass für solche auslösende Peptide optimale Formen gefunden werden können, die länger und bei niedrigeren Konzentrationen besser präsentiert und von den CD8+ T Zellen besser und länger erkannt werden. Vom LCMV-NP Peptid 33-41 genügten 100-1000 mal niedrigere Konzentrationen als vom Peptid LCMV-NP 32-41 für die Auslösung der spezifischen Fussschwellungsreaktion. Table 2: Shows that slightly different peptides of the same region of the viral protein (eg LCMV-GP) can trigger swellings of different intensities, so that optimal forms can be found for such triggering peptides, which are better presented and at lower concentrations and by those CD8 + T cells are recognized better and longer. Concentrations of the LCMV-NP peptide 33-41 were 100-1000 times lower than those of the peptide LCMV-NP 32-41 for triggering the specific foot swelling reaction.

4 4th

Ol Ol Ol Ol

Ol o Ol o

■b. Ol o ■ b. Ol o

w w

Ol Oil

CO CO

o ro o ro

Ol ro o Ol ro o

Tabelle 1 Table 1

Spezifität der durch Peptide und CD8+ T Zellen ausgelösten verzögerten Schwellungsreaktionen Specificity of the delayed swelling reactions triggered by peptides and CD8 + T cells

Peptide, die in die Fusspfote injiziert wurden (Dosis) Peptides injected into the foot paw (dose)

% Schwellung des Fusses (nach 20 Std.) % Swelling of the foot (after 20 hours)

BALB/c (H-2d) C57B1/6 (H-2b) BALB / c (H-2d) C57B1 / 6 (H-2b)

uninfiziert LCMV-infiziert uninfiziert LCMV-infiziert (-10 Tage) (-10 Tage) uninfected LCMV-infected uninfected LCMV-infected (-10 days) (-10 days)

C57BL/6 (H-2b) C57BL / 6 (H-2b)

uninfiziert VSV-infiziert (-6 Tage) uninfected VSV-infected (-6 days)

LCMV-NP 111-132 (30 fil 30 ng/ml) LCMV-NP 111-132 (30 fil 30 ng / ml)

< 5% <5%

85% 85%

<5% <5%

< 5% <5%

<5% <5%

< 5% <5%

LCMV-GP 32-41 (30 jil 3 mg/ml) LCMV-GP 32-41 (30 jil 3 mg / ml)

<5% <5%

< 5% <5%

< 5% <5%

65% 65%

<5% <5%

< 5% <5%

Gemisch 1:1 der beiden Paptide Mixture 1: 1 of the two paptides

<5% <5%

80% 80%

<5% <5%

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< 5% <5%

< 5% <5%

VSV-NP (30 |il 3 mg/ml) VSV-NP (30 | il 3 mg / ml)

<5% <5%

< 5% <5%

<5% <5%

< 5% <5%

< 5% <5%

95% 95%

Mäuse wurden mit den Viren infiziert (2x10® lebende VSV-Viruspartikel oder 2 x 102 lebende LCMV-Partikel intravenös, 6 oder 10 Tage bevor die peptide 30 nl in die Fusspfote injiziert wurden. Die Pfotenschwellung entspricht der Zunahme der Pfotendicke (Normalzustand 100%) 20 Std. nach der Injektion. Mice were infected with the viruses (2x10® living VSV virus particles or 2 x 102 living LCMV particles intravenously, 6 or 10 days before the peptide 30 nl were injected into the foot paw. The paw swelling corresponds to the increase in the paw thickness (normal condition 100%) 20 hours after the injection.

Tabelle 2 Table 2

Vergleich ähnlicher Peptide für die Auslösung der verzögerten Schwellungsreaktion Comparison of similar peptides for triggering the delayed swelling reaction

C57BL/6 (H-2b) 10 Tage LCMV Immun; % Schwellung des Fusses (nach 20 Std.) in Abhängigkeit der Peptid wird injiziert in die Fusspfote Dosis des injizierten Peptides C57BL / 6 (H-2b) 10 days LCMV immune; % Swelling of the foot (after 20 hours) depending on the peptide injected into the foot paw dose of the injected peptide

30 jxl/1.5 mg/ml 0.15 mg/ml 0.015 mg/ml 003 mg/ml 30 jxl / 1.5 mg / ml 0.15 mg / ml 0.015 mg / ml 003 mg / ml

LCMV-GP 32-41 110% 30% <5% <5% LCMV-GP 32-41 110% 30% <5% <5%

LCMV-GP 33-41 80% 100% 100% 60% LCMV-GP 33-41 80% 100% 100% 60%

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CH 684 782 A5 CH 684 782 A5

Claims (6)

PatentansprücheClaims 1. Antigen zur Auslösung von CD8+ T Zellimmunantworten, dadurch gekennzeichnet, dass das Antigen aus einem Agens aus T Zeilepitop-Peptiden besteht.1. Antigen for triggering CD8 + T cell immune responses, characterized in that the antigen consists of an agent from T cell epitope peptides. 2. Antigen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Agens zur Auslösung von Immunantworten in Form von Hautreaktionen des verzögerten Typs ausgebildet ist.2. Antigen according to claim 1, characterized in that the agent for triggering immune responses is in the form of skin reactions of the delayed type. 3. Antigen nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Agens perkutan applizierbar ausgebildet ist.3. Antigen according to claim 1 or 2, characterized in that the agent is designed to be administered percutaneously. 4. Antigen nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Agens aus definierten T Zeilepitop-Peptiden besteht.4. Antigen according to one of claims 1 to 3, characterized in that the agent consists of defined T cell epitope peptides. 5. Antigen nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Agens aus Oligopeptiden aus 5 bis 20, vorzugsweise 8 bis 10 Aminosäuren gebildet ist.5. Antigen according to one of claims 1 to 4, characterized in that the agent is formed from oligopeptides from 5 to 20, preferably 8 to 10, amino acids. 6. Antigen nach einem der Ansprüche 4 oder 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Agens aus einer Mischung aus einer Mehrzahl verschieden aufgebauter, als Viralantigene individuell gleichwirkender Peptide gebildet ist.6. Antigen according to one of claims 4 or 5, characterized in that the agent is formed from a mixture of a plurality of differently structured, individually acting as viral antigens peptides. 66