CH680857A5 - New salts of N-5-methyl-5,6,7,8-tetra-hydro-folic acid - Google Patents
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Abstract
Description
5 5
10 10th
15 15
20 20th
25 25th
30 30th
35 35
40 40
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CH 680 857 A5 CH 680 857 A5
Beschreibung description
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Alkalimetall- oder Erdalkalime-tallsalzen von (6R) oder (6S) N(5)-Methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure. The present invention relates to a process for the preparation of alkali metal or alkaline earth metal salts of (6R) or (6S) N (5) -methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid.
N5-Methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure, hierin teilweise mit der Bezeichnung N5-Methyl-THF abgekürzt, ist die vorherrschende zirkulierende Form von reduzierten Folaten in Säugern. N5-methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid, sometimes abbreviated herein as N5-methyl-THF, is the predominant circulating form of reduced folates in mammals.
Es besteht ein zunehmendes Interesse für die Anwendung dieses natürlichen Metaboliten als wenigstens eine aktive Verbindung in einem therapeutischen Mittel, beispielsweise als Vitamin bei Folatman-gelzuständen. Therapeutische Mittel, enthaltend N5-Methyl-THF, können auch verwendet werden für die synergistische Beeinflussung einer Krebs bekämpfenden Verbindung und/oder für die Verminderung der Toxizität einer Krebs bekämpfenden Verbindung und/oder zum Schutz menschlicher und/oder tierischer Zellen. N5-Methyl-THF ist in einem solchen Mittel gewöhnlich in einer Menge von 1 mg bis 500 mg, insbesondere von 5 mg bis 150 mg, pro Dosiseinheit enthalten. Das Arzneimittel liegt vorzugsweise in Form eines parenteralen und/oder oralen pharmazeutischen Präparates vor. Es wird auf die am Schluss der Beschreibung erwähnten Referenzen Nr. 1 bis 5 verwiesen. There is increasing interest in the use of this natural metabolite as at least one active compound in a therapeutic agent, for example as a vitamin in folate deficiency states. Therapeutic agents containing N5-methyl-THF can also be used for synergistically influencing a cancer-fighting compound and / or for reducing the toxicity of a cancer-fighting compound and / or for protecting human and / or animal cells. Such an agent usually contains N5-methyl-THF in an amount of 1 mg to 500 mg, in particular 5 mg to 150 mg, per unit dose. The medicament is preferably in the form of a parenteral and / or oral pharmaceutical preparation. Reference is made to references 1 to 5 mentioned at the end of the description.
Die absolute Konfiguration der natürlichen Form von N5-Methyl-THF entspricht der folgenden Formel A The absolute configuration of the natural form of N5-methyl-THF corresponds to Formula A below
und wird als (6S,L) definiert, wobei sich «6S» auf die Konfiguration am C6 des Pterin-Ringsystems und «L» auf die Konfiguration des a-Kohlenstoffatoms der Glutamat-Seitenkette beziehen. and is defined as (6S, L), where “6S” refers to the configuration at C6 of the pterin ring system and “L” refers to the configuration of the a-carbon atom of the glutamate side chain.
Im Handel erhältliche Formen von N5-Methyl-THF, erhalten aus der chemischen Reduktion von Folsäure, sind ein (6RS)-Diastereoisomerengemisch mit der «L»-Konfiguration in der Glutamatseitenkette. Commercially available forms of N5-methyl-THF obtained from the chemical reduction of folic acid are a (6RS) -diastereoisomeric mixture with the «L» configuration in the glutamate side chain.
Über die Funktion des (6R)-Diastereoisomeren von N5-Methyl-THF ist man sich nicht einig. Es ist angenommen worden, dass das unnatürliche (6R)-Diastereoisomer von N5-Methyl-THF inert ist und als solches unverändert ausgeschieden wird; siehe beispielsweise die Referenz Nr. 13. Es ist jedoch auch postuliert worden, dass das unnatürliche (6R)-Diastereoisomer auf das Folattransportsystem durch die Zellmembran in Säugern, einschliesslich Menschen, interferieren könnte; siehe beispielsweise die Referenzen Nr. 6 bis 8. There is no agreement on the function of the (6R) diastereoisomer of N5-methyl-THF. The unnatural (6R) diastereoisomer of N5-methyl-THF has been assumed to be inert and, as such, is excreted unchanged; see, for example, reference No. 13. However, it has also been postulated that the unnatural (6R) diastereoisomer could interfere with the folate transport system across the cell membrane in mammals, including humans; see for example references 6 to 8.
Die individuellen (6S) und (6R) Diastereoisomeren von N5-Methyl-THF sind in Milligramm-Mengen von fragwürdiger chemischer Reinheit hergestellt worden, entweder durch komplexe enzymatische Reaktionen (siehe beispielsweise Referenz Nr. 6), oder indirekt durch Reduktion des entsprechenden N5, Nio-Methyien-THF Isomers, welches erhalten wurde durch chromatographische Trennung des (6RS)-Gemisches (siehe die Referenzen Nr. 7 und 9). The individual (6S) and (6R) diastereoisomers of N5-methyl-THF have been produced in milligram quantities of questionable chemical purity, either by complex enzymatic reactions (see, for example, reference No. 6), or indirectly by reducing the corresponding N5, Nio-methyl-THF isomer, which was obtained by chromatographic separation of the (6RS) mixture (see references Nos. 7 and 9).
5,6,7,8-Tetrahydrofolsäure wird hierin teilweise mit der Bezeichnung THF abgekürzt. 5,6,7,8-tetrahydrofolic acid is sometimes abbreviated as THF.
Kürzlich sind indirekte Verfahren zur Herstellung der individuellen Diastereoisomeren von Ns-Me-thyl-THF publiziert worden; siehe die Referenzen Nr. 10 und 11. Diese Verfahren basieren auf der fraktionierten Kristallisation von N5, N1°-Methenyl-THF.CIe.HCI der Formel Indirect processes for the preparation of the individual diastereoisomers of Ns-methyl-THF have recently been published; see references Nos. 10 and 11. These methods are based on the fractional crystallization of N5, N1 ° -methenyl-THF.CIe.HCI of the formula
(A) (A)
COOtf COOtf
ÇOOH ÇOOH
1 H 1 H
H--H "Cl .HCl CO 014 H - H "Cl. HCl CO 014
2 2nd
5 5
10 10th
15 15
20 20th
25 25th
30 30th
35 35
40 40
45 45
50 50
55 55
60 60
65 65
CH 680 857 A5 CH 680 857 A5
beziehungsweise von N5, Nio-Methenyl-THF.Cle der Formel or of N5, Nio-Methenyl-THF.Cle of the formula
GOOH GOOH
■N H ■ N H
h „ H "
VI H VI H
H--H • Cl coou gefolgt von der chemischen Umwandlung der getrennten, einzelnen (6R) und (6S) Diastereoisomeren in N5-Methyl-THF. Obwohl diese Verfahren in industriellem Massstab durchführbar sind, haben sie den Nachteil, dass sie mehrere chemische Schritte umfassen, was sie ökonomisch wenig attraktiv macht. H - H • Cl coou followed by chemical conversion of the separate, individual (6R) and (6S) diastereoisomers into N5-methyl-THF. Although these processes can be carried out on an industrial scale, they have the disadvantage that they involve several chemical steps, which makes them economically unattractive.
Die vorliegende Erfindung ist durch die Merkmale im unabhängigen Anspruch gekennzeichnet. Bevorzugte Ausführungsformen dieser Erfindung sind in den abhängigen Ansprüchen definiert. The present invention is characterized by the features in the independent claim. Preferred embodiments of this invention are defined in the dependent claims.
Im folgenden werden verschiedene mögliche Ausführungsformen beschrieben. Dabei werden Ausführungsformen, wie sie in den Ansprüchen definiert sind, normalerweise nicht mehr wiederholt. Various possible embodiments are described below. Embodiments as defined in the claims are normally no longer repeated.
Beim ersten Verfahren zur Herstellung der neuen Ammoniumsalze wird N5-Methyl-THF vorzugsweise in der Form des Calciumsalzes in Wasser vorgelegt. Die Stickstoff enthaltende Base, welche dann hinzugegeben wird, kann ein primäres oder sekundäres Alkyl- oder Arylamin sein. Das vorhandene Cal-ciumkation wird zweckmässig durch die Hinzugabe von Oxalsäure als Calciumoxalat gefällt, welches anschliessend abfiltriert wird. Das wässrige Filtrat enthält das gelöste Ammoniumsalz. Nach der Verdampfung des Wassers unter vermindertem Druck oder nach der Lyophilisation wird das Ammoniumsalz gewöhnlich als amorphes Glas erhalten. In the first process for the preparation of the new ammonium salts, N5-methyl-THF is preferably introduced in the form of the calcium salt in water. The nitrogen-containing base, which is then added, can be a primary or secondary alkyl or arylamine. The calcium cation present is expediently precipitated as calcium oxalate by the addition of oxalic acid, which is then filtered off. The aqueous filtrate contains the dissolved ammonium salt. After evaporation of the water under reduced pressure or after lyophilization, the ammonium salt is usually obtained as an amorphous glass.
Beim zweiten Verfahren zur Herstellung der neuen Ammoniumsalze wird N5-Methyl-THF, also in Form der Carbonsäure, zweckmässigerweise in Wasser oder in einem Gemisch aus Wasser und Ethanol und/oder Methanol vorgelegt. Bei diesem Verfahren entfallen die Schritte der Fällung des Alkalimetalloder Erdalkalimetallkations und deren Abtrennung, wie dies beim ersten Verfahren beschrieben worden ist. Die übrigen Schritte des zweiten Verfahrens entsprechen den entsprechenden Schritten im ersten Verfahren. In the second process for the preparation of the new ammonium salts, N5-methyl-THF, ie in the form of the carboxylic acid, is advantageously introduced in water or in a mixture of water and ethanol and / or methanol. This process eliminates the steps of precipitating and separating the alkali metal or alkaline earth metal cation, as described in the first process. The remaining steps of the second method correspond to the corresponding steps in the first method.
Die neuen Ammoniumsalze können auch noch mittels lonenaustausch auf einer entsprechenden Säule hergestellt werden, auf welcher beispielsweise ein Calciumkation gegen das gewünschte Ammoniumion ausgetauscht wird. The new ammonium salts can also be produced by ion exchange on a corresponding column, on which, for example, a calcium cation is exchanged for the desired ammonium ion.
Die neuen Ammoniumsalze, beispielsweise gemäss einem oben beschriebenen Verfahren hergestellt, werden nun einer fraktionierten Kristallisation unterworfen, bei der das (6RS)-Diastereoisomerenge-misch in die einzelnen, reinen (6R) und (6S) Diastereoisomeren aufgetrennt wird. Dazu wird vorzugsweise ein Gewichtsteil eines neuen Ammoniumsalzes mit 5 Gewichtsteilen, bezogen auf obigen Gewichtsteil an Ammoniumsalz, eines Gemisches aus 85 Vol.-% Ethanol und 15 Vol.-% Wasser vermischt. In Abhängigkeit des Ammoniumsalzes kann eine Erwärmung auf eine Temperatur von 40°C bis 60°C notwendig sein, um eine klare Lösung zu erhalten. The new ammonium salts, for example prepared according to a method described above, are now subjected to a fractional crystallization in which the (6RS) -diastereoisomer mixture is separated into the individual, pure (6R) and (6S) diastereoisomers. For this purpose, preferably one part by weight of a new ammonium salt is mixed with 5 parts by weight, based on the above part by weight of ammonium salt, of a mixture of 85% by volume of ethanol and 15% by volume of water. Depending on the ammonium salt, heating to a temperature of 40 ° C to 60 ° C may be necessary to obtain a clear solution.
Aus dieser klaren Lösung lässt man ein Diastereoisomer auskristallisieren und filtriert es anschliessend ab. Die Kristallisation kann bei Eiswassertemperatur oder im Kühlschrank oder bei einer Temperatur von 10°C bis 25°C erfolgen. Falls notwendig kann die klare Lösung mit Impfkristallen angeimpft und danach gegebenenfalls mit Ultraschall behandelt werden. Die dabei erhaltene Mutterlauge wird vorzugsweise mit Ethanol mit einem geringen Wassergehalt verdünnt. Aus dieser verdünnten Lösung lässt man das andere Diastereoisomer auskristallisieren und filtriert es anschliessend ebenfalls ab. Diese zweite Mutterlauge kann eingeengt und einer erneuten fraktionierten Kristallisation unterworfen werden. A diastereoisomer is allowed to crystallize out of this clear solution and then filtered off. Crystallization can take place at ice water temperature or in the refrigerator or at a temperature of 10 ° C to 25 ° C. If necessary, the clear solution can be seeded with seed crystals and then treated with ultrasound if necessary. The mother liquor obtained is preferably diluted with ethanol with a low water content. The other diastereoisomer is allowed to crystallize out of this dilute solution and is then also filtered off. This second mother liquor can be concentrated and subjected to another fractional crystallization.
Welches Diastereoisomer zuerst auskristallisiert, hängt unter anderem von der Natur des aufzutrennenden Ammoniumsalzes ab. Im Falle des NS-Methyl-THF-cyclohexylammoniumsalzes kristallisiert zuerst das (6R)-Salz aus. Das (6S)-Salz wird aus der Mutterlauge gemäss obigen Angaben auskristallisiert. Im Falle des N5-Methyl-THF-diisopropylammoniumsalzes kristallisiert zuerst das (6S)-Salz aus. Das (6R)-Salz wird dann aus der Mutterlauge auskristallisiert. Which diastereoisomer crystallizes first depends, among other things, on the nature of the ammonium salt to be separated. In the case of the NS-methyl-THF-cyclohexylammonium salt, the (6R) salt crystallizes out first. The (6S) salt is crystallized out of the mother liquor as described above. In the case of the N5-methyl-THF-diisopropylammonium salt, the (6S) salt crystallizes out first. The (6R) salt is then crystallized out of the mother liquor.
Die so aufgetrennten diastereoisomerenreinen Ammoniumsalze von N5-Methyl-THF werden in die Alkalimetall- oder Erdalkalimetallsalze, insbesondere in das Calciumsalz oder in das Magnesiumsalz, übergeführt. Dazu wird ein entsprechendes Ammoniumsalz vorzugsweise in einem Volumenteil Wasser gelöst. Dann wird eine wässrige Lösung des gewünschten Alkalimetall- oder Erdalkalimetallsalzes hinzugegeben, beispielsweise Calciumchlorid. In diesem Gemisch kann der pH-Wert auf einen Wert von 6,0 bis 7,0 eingestellt werden. Diese Lösung wird auf eine Temperatur von 0°C bis 10°C abgekühlt und vorzugsweise etwa eine Stunde gerührt. Danach werden 1,5 bis 2,5 Volumenteile, bezogen auf obigen Volumenteil Wasser, an beispielsweise Ethanol oder Aceton hinzugegeben, vorzugsweise unter Rühren während The diastereoisomerically pure ammonium salts of N5-methyl-THF thus separated are converted into the alkali metal or alkaline earth metal salts, in particular into the calcium salt or the magnesium salt. For this purpose, a corresponding ammonium salt is preferably dissolved in a volume of water. Then an aqueous solution of the desired alkali metal or alkaline earth metal salt is added, for example calcium chloride. The pH in this mixture can be adjusted to a value of 6.0 to 7.0. This solution is cooled to a temperature of 0 ° C to 10 ° C and preferably stirred for about an hour. Then 1.5 to 2.5 parts by volume, based on the above part by volume of water, of, for example, ethanol or acetone are added, preferably while stirring
3 3rd
5 5
10 10th
15 15
20 20th
25 25th
30 30th
35 35
40 40
45 45
50 50
55 55
CH 680 857 A5 CH 680 857 A5
30 bis 90 Minuten. Dabei fällt das entsprechende Alkalimetall- oder Erdalkalimetallsalz der N5-Methyl-THF aus und kann abfiltriert werden. 30 to 90 minutes. The corresponding alkali metal or alkaline earth metal salt of N5-methyl-THF precipitates and can be filtered off.
Die Analyse einer isomeren Zusammensetzung kann routinemässig an einer chiralen HPLC Säule durchgeführt werden; insbesondere gemäss den in Referenz Nr. 12 enthaltenen Angaben. Die nachfolgenden Beispiele dienen der Illustration der vorliegenden Erfindung. Analysis of an isomeric composition can be routinely performed on a chiral HPLC column; in particular according to the information contained in reference No. 12. The following examples serve to illustrate the present invention.
Beispiel 1 example 1
Herstellung von (6RSVN5-Methvl-THF-cvclohexvlammoniumsalz Preparation of (6RSVN5-Methvl-THF-cvclohexvlammonium salt
Zu einer Suspension von 100 g (6RS)-N5-Methyl-THF-calciumsalz in 800 ml Wasser, welche bei einer Temperatur von 40°C unter einer Stickstoffatmosphäre gerührt wurde, wurden 40 g Cyclohexylamin hinzugegeben. Die Temperatur wurde auf 60° C erhöht, und man erhielt eine klare Lösung. Anschliessend wurden 24 g Oxalsäuredihydrat in 200 ml Wasser hinzugegeben, und dieses Gemisch wurde bei einer Temperatur von 0°C während 30 Minuten gerührt. Nach der Entfernung des gebildeten Calciumoxalates mittels Zentrifugation wurde die überstehende Lösung bei einer Temperatur von 50°C unter reduziertem Druck eingeengt. Man erhielt rohes (6RS)-N5-Methyl-THF-cyclohexylammoniumsalz in der Form eines honigartigen resp. glasartigen Festkörpers. Die HPLC Analyse dieses Produktes zeigte einen einzigen Peak. 40 g of cyclohexylamine were added to a suspension of 100 g of (6RS) -N5-methyl-THF calcium salt in 800 ml of water, which was stirred at a temperature of 40 ° C. under a nitrogen atmosphere. The temperature was raised to 60 ° C and a clear solution was obtained. 24 g of oxalic acid dihydrate in 200 ml of water were then added, and this mixture was stirred at a temperature of 0 ° C. for 30 minutes. After the calcium oxalate formed had been removed by centrifugation, the supernatant solution was concentrated at a temperature of 50 ° C. under reduced pressure. Crude (6RS) -N5-methyl-THF-cyclohexylammonium salt was obtained in the form of a honey-like resp. vitreous solid. HPLC analysis of this product showed a single peak.
Beispiel 2 Example 2
Trennung des f6RSi-Diastereoisomerenaemisches von N5-Methvl-THF-cvclohexvlammoniumsalz Separation of the f6RSi diastereoisomeric mixture from N5-Methvl-THF-cvclohexvlammonium salt
A: (6R)-N5-Methvl-THF-cvclohexvlammoniumsalz A: (6R) -N5-Methvl-THF-cvclohexvlammonium salt
Das gemäss Beispiel 1 hergestellte rohe (6RS)-N5-Methyl-THF-cyclohexylammoniumsalz wurde in 550 ml eines Gemisches aus 85 Volumenteilen Ethanol und 15 Volumenteilen Wasser bei einer Temperatur von 60°C gelöst. Die entstandene klare Lösung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und mit kristallinem (6R)-N5-Methyl-THF-cyclohexyiammoniumsalz, erhalten aus einem früheren Ansatz, angeimpft. Nach dem Rühren bei Raumtemperatur über Nacht und bei einer Temperatur von 10°C während 4 Stunden wurde der erhaltene kristalline Festkörper mittels Filtration isoliert. Dieser Festkörper wurde einmal mit 85%-igem Ethanol gewaschen und unter reduziertem Druck bei einer Temperatur von 50°C während 2 Stunden getrocknet. Man erhielt 30,9 g an (6R)-N5-Methy!-THF-cyclohexylammoniumsalz. The crude (6RS) -N5-methyl-THF-cyclohexylammonium salt prepared according to Example 1 was dissolved in 550 ml of a mixture of 85 parts by volume of ethanol and 15 parts by volume of water at a temperature of 60 ° C. The resulting clear solution was cooled to room temperature and inoculated with crystalline (6R) -N5-methyl-THF-cyclohexyiammonium salt obtained from an earlier approach. After stirring at room temperature overnight and at a temperature of 10.degree. C. for 4 hours, the crystalline solid obtained was isolated by filtration. This solid was washed once with 85% ethanol and dried under reduced pressure at a temperature of 50 ° C for 2 hours. 30.9 g of (6R) -N5-methyl! -THF-cyclohexylammonium salt were obtained.
[<x] d =-7,3° (c=1 in 0,01 N NaOH) [<x] d = -7.3 ° (c = 1 in 0.01 N NaOH)
Die Analyse an einer RESOLVOSIL-Säule zeigte ein Diastereoisomerenverhältnis von (6R)/(6S) = 96,5 / 3,5 (siehe die Referenz Nr. 12). Analysis on a RESOLVOSIL column showed a diastereoisomeric ratio of (6R) / (6S) = 96.5 / 3.5 (see reference no. 12).
Die HPLC Analyse an einer «reverse phase»-Säule zeigte, dass dieses Produkt 100% rein war. IR (KBr/cm-1) : 3300, 2950,2860,1660,1610,1390. HPLC analysis on a reverse phase column showed that this product was 100% pure. IR (KBr / cm-1): 3300, 2950, 2860, 1660, 1610, 1390.
Elementaranalyse: Elemental analysis:
berechnet (%) calculated (%)
gefunden (%) found (%)
(Dihydrat) (Dihydrate)
C C.
55.42 55.42
55.72 55.72
H H
7.99 7.99
7.86 7.86
N N
18.46 18.46
18.32 18.32
B: (6S1-N5-Methvl-THF-cvclohexvlammoniumsalz B: (6S1-N5-Methvl-THF-cvclohexvlammonium salt
Die Mutterlauge aus der in Punkt A beschriebenen Filtration wurde mit 1200 ml absolutem Ethanol verdünnt. Die erhaltene Lösung wurde mit authentischem (6S)-N5-MethyI-THF-cyclohexylammoniumsalz angeimpft. Man liess das Gemisch während 24 Stunden bei Raumtemperatur stehen. Der erhaltene kristalline Festkörper wurde mittels Ritration isoliert. Dieser Festkörper wurde einmal mit 94%-igem Ethanol gewaschen und unter reduziertem Druck bei einer Temperatur von 50°C getrocknet. Man erhielt 23,7 g an (6S)-N5-Methyl-THF-cyclohexylammoniumsalz. The mother liquor from the filtration described in point A was diluted with 1200 ml of absolute ethanol. The solution obtained was inoculated with authentic (6S) -N5-methyl-THF-cyclohexylammonium salt. The mixture was allowed to stand at room temperature for 24 hours. The crystalline solid obtained was isolated by means of ritration. This solid was washed once with 94% ethanol and dried under reduced pressure at a temperature of 50 ° C. 23.7 g of (6S) -N5-methyl-THF-cyclohexylammonium salt were obtained.
[a] d = +30,6° (c=1 in 0,01 N NaOH) [a] d = + 30.6 ° (c = 1 in 0.01 N NaOH)
Die Analyse an einer RESOLVOSIL-Säule zeigte ein Diastereoisomeren-Verhältnis von (6R)/(6S) = 3/97 (siehe die Referenz Nr. 12). Analysis on a RESOLVOSIL column showed a diastereoisomer ratio of (6R) / (6S) = 3/97 (see reference no. 12).
Die HPLC Analyse an einer «reverse phase»-Säule zeigte, dass dieses Produkt 100% rein war. HPLC analysis on a reverse phase column showed that this product was 100% pure.
IR (KBr/cm-1) : 3300, 2940, 2860,1610,1390. IR (KBr / cm-1): 3300, 2940, 2860, 1610, 1390.
4 4th
5 5
10 10th
15 15
20 20th
25 25th
30 30th
35 35
40 40
45 45
50 50
55 55
60 60
65 65
CH 680 857 A5 CH 680 857 A5
Elementaranalyse: Elemental analysis:
berechnet (%) calculated (%)
gefunden (%) found (%)
(Dihydrat) (Dihydrate)
C C.
55.42 55.42
55.72 55.72
H H
7.99 7.99
7.86 7.86
N N
18.46 18.46
18.32 18.32
Beispiel 3 Example 3
Herstellung von (6SÌ-N5-Methvl-THF-calciumsalz Preparation of (6SÌ-N5-Methvl-THF calcium salt
15,0 g (6S)-N5-Methyl-cyclohexylammoniumsalz wurden in 120 ml Wasser gelöst und bei Raumtemperatur unter einer Stickstoffatmosphäre gerührt. Nach der Hinzugabe von 9,9 ml 2M Calciumchloridlösung wurde der pH-Wert mittels der Hinzugabe von 1N NaOH auf einen Wert von 6,8 eingestellt. Das erhaltene Gemisch wurde bei einer Temperatur von 0°C während 1 Stunde gerührt. Danach wurden 240 ml Ethanol während 40 Minuten hinzugegeben. Der erhaltene kristalline Festkörper wurde mittels Filtration isoliert. Dieser Festkörper wurde mit 85%-igem Ethanol gewaschen und unter reduziertem Druck bei einer Temperatur von 50°C getrocknet. Man erhielt 10,4 g an (6S)-N5-Methyl-THF-calciumsalz. 15.0 g (6S) -N5-methyl-cyclohexylammonium salt were dissolved in 120 ml water and stirred at room temperature under a nitrogen atmosphere. After adding 9.9 ml of 2M calcium chloride solution, the pH was adjusted to 6.8 by adding 1N NaOH. The resulting mixture was stirred at a temperature of 0 ° C for 1 hour. Then 240 ml of ethanol was added over 40 minutes. The crystalline solid obtained was isolated by filtration. This solid was washed with 85% ethanol and dried under reduced pressure at a temperature of 50 ° C. 10.4 g of (6S) -N5-methyl-THF calcium salt were obtained.
Die HPLC Analyse an einer «reverse phase»-Säule zeigte, dass dieses Produkt 100% rein war. HPLC analysis on a reverse phase column showed that this product was 100% pure.
[<x] d = +40° (c=1 /1% NH4OAc, pH 6,0) [<x] d = + 40 ° (c = 1/1% NH4OAc, pH 6.0)
UV (20 mg/l in 1% nh4oac, pH 6,0) : UV (20 mg / l in 1% nh4oac, pH 6.0):
?-max = 290 nm (e= 28600) ? -max = 290 nm (e = 28600)
àmin — 245 nm Amax/Amin = 3,7 àmin - 245 nm Amax / Amin = 3.7
Die Analyse an einer RESOLVOSIL-Säule zeigte ein Diastereoisomerenverhältnis von (6R)/(6S) = 3/97 (siehe die Referenz Nr. 12). Analysis on a RESOLVOSIL column showed a diastereoisomeric ratio of (6R) / (6S) = 3/97 (see reference no. 12).
Beispiel 4 Example 4
Herstelluno von (6R)-Ns-Methvl-THF-calciumsalz Production of (6R) -Ns-Methvl-THF calcium salt
Das Titelprodukt wurde ausgehend von (6R)-N5-Methyl-THF-cyclohexylammoniumsalz auf analogem Wege hergestellt, wie dies im Beispiel 3 beschrieben ist. The title product was prepared starting from (6R) -N5-methyl-THF-cyclohexylammonium salt in an analogous manner, as described in Example 3.
Die HPLC Analyse an einer «reverse phase»-Säule zeigte, dass das Produkt 100% rein war. HPLC analysis on a reverse phase column showed that the product was 100% pure.
Md = -4,7° (c=1 /1% nh4oac, pH 6,0) Md = -4.7 ° (c = 1/1% nh4oac, pH 6.0)
UV (20 mg/l in 1% NH40Ac, pH 6,0): UV (20 mg / l in 1% NH40Ac, pH 6.0):
Xjnax = 290 nm (e = 30200) Xjnax = 290 nm (e = 30200)
Xjnin = 245 nm Amax/Amin = 3,6 Xjnin = 245 nm Amax / Amin = 3.6
Die Analyse an einer RESOLVOSIL-Säule zeigte ein Diastereoisomerenverhältnis von (6R)/(6S) = 97/3 (siehe die Referenz Nr. 12). Analysis on a RESOLVOSIL column showed a diastereoisomeric ratio of (6R) / (6S) = 97/3 (see reference no. 12).
Beispiel 5 Example 5
Herstellung von (6RSi-Ns-Methvl-THF-diisopropylammoniumsalz Preparation of (6RSi-Ns-Methvl-THF-diisopropylammonium salt
Zu einer Suspension von 5,0 g (6RS)-N5-Methyl-THF-calciumsalz in 40 ml Wasser, welche bei einer Temperatur von 40°C unter einer Stickstoffatmosphäre gerührt wurde, wurden 2,03 g Diisopropylamin hinzugegeben. Die Temperatur wurde auf etwa 55°C angehoben, und man erhielt eine klare Lösung. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde eine Lösung von 1,2 g Oxalsäuredihydrat in 10 ml Wasser hinzugegeben, und dieses Gemisch wurde bei einer Temperatur von 0°C während 30 Minuten gerührt. Nach der Entfernung des gebildeten Calciumoxalates mittels Zentrifugation wurde die überstehende Lösung bei einer Temperatur von 70°C unter reduziertem Druck eingeengt. Man erhielt rohes (6RS)-N5-Methyl-THF-diisopropylammoniumsalz in der Form eines honigartigen resp. glasartigen Festkörpers. Die HPLC Analyse dieses Produktes zeigte einen einzigen Peak. 2.03 g of diisopropylamine were added to a suspension of 5.0 g of (6RS) -N5-methyl-THF calcium salt in 40 ml of water, which was stirred at a temperature of 40 ° C. under a nitrogen atmosphere. The temperature was raised to about 55 ° C and a clear solution was obtained. After cooling to room temperature, a solution of 1.2 g of oxalic acid dihydrate in 10 ml of water was added, and this mixture was stirred at a temperature of 0 ° C for 30 minutes. After the calcium oxalate formed had been removed by centrifugation, the supernatant solution was concentrated at a temperature of 70 ° C. under reduced pressure. Crude (6RS) -N5-methyl-THF-diisopropylammonium salt was obtained in the form of a honey-like resp. vitreous solid. HPLC analysis of this product showed a single peak.
5 5
5 5
10 10th
15 15
20 20th
25 25th
30 30th
35 35
40 40
45 45
50 50
55 55
CH 680 857 A5 CH 680 857 A5
Beispiel 6 Example 6
Trennung des (6RS1-Diastereoisomerenaemisches von N5-Methvl-THF-diisoDroDvlammoniumsalz: Isolierung von f6SVN5-Methvl-THF-diisoproovlammoniumsalz Separation of the (6RS1-diastereoisomeric mixture from N5-Methvl-THF-diisoDroDvlammonium salt: isolation of f6SVN5-Methvl-THF-diisoproovlammonium salt
Das gemäss Beispiel 5 hergestellte rohe (6RS)-N5-Methyl-THF-diisopropylammoniumsalz wurde in 27 ml eines Gemisches aus 85 Volumenteilen Ethanol und 15 Volumenteilen Wasser bei einer Temperatur von 60°C gelöst. Die entstandene klare Lösung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und bei dieser Temperatur während 48 Stunden gerührt. Der erhaltene Festkörper wurde mittels Zentrifugation isoliert. Dieser Festkörper wurde einmal mit 85%-igem Ethanol gewaschen und unter reduziertem Druck bei einer Temperatur von 50°C während 2 Stunden getrocknet. Man erhielt 1,07 g an (6S)-N5-MethyI-THF-diisopropylammoniumsalz. The crude (6RS) -N5-methyl-THF-diisopropylammonium salt prepared according to Example 5 was dissolved in 27 ml of a mixture of 85 parts by volume of ethanol and 15 parts by volume of water at a temperature of 60 ° C. The resulting clear solution was cooled to room temperature and stirred at this temperature for 48 hours. The solid obtained was isolated by centrifugation. This solid was washed once with 85% ethanol and dried under reduced pressure at a temperature of 50 ° C for 2 hours. 1.07 g of (6S) -N5-methyl-THF-diisopropylammonium salt were obtained.
Die Analyse an einer RESOLVOSIL-Säule zeigte ein Diastereoisomerenverhältnis von (6S)/(6R) = 90/10 (siehe die Referenz Nr. 12). Analysis on a RESOLVOSIL column showed a diastereoisomeric ratio of (6S) / (6R) = 90/10 (see reference no. 12).
Referenzen credentials
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Clinical science and molecular medicine (1973) 45, 625. Clinical science and molecular medicine (1973) 45, 625.
Claims (11)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH307691A CH680857A5 (en) | 1990-04-12 | 1990-04-12 | New salts of N-5-methyl-5,6,7,8-tetra-hydro-folic acid |
Applications Claiming Priority (2)
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| CH1255/90A CH680731A5 (en) | 1990-04-12 | 1990-04-12 | |
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Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CH680857A5 true CH680857A5 (en) | 1992-11-30 |
Family
ID=25687128
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| CH307691A CH680857A5 (en) | 1990-04-12 | 1990-04-12 | New salts of N-5-methyl-5,6,7,8-tetra-hydro-folic acid |
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| Country | Link |
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-
1990
- 1990-04-12 CH CH307691A patent/CH680857A5/en not_active IP Right Cessation
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