CH615685A5 - Process for the preparation of 1-N-(alpha-hydroxy-omega-aminoalkanoyl)-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanam ycin B - Google Patents

Description

Die Erfindung setzt sich zum Ziel, neue und wirksame Derivate von 3',4'-Dideoxykanamycin B aufzufinden, welche nicht nur wirksam sind gegenüber Gram-negativen und Grampositiven Bakterien mit der üblichen Kanamycinsensitivität, sondern auch gegenüber kanamycinresistenten Bakterien. The invention aims to find new and effective derivatives of 3 ', 4'-dideoxykanamycin B which are not only effective against Gram-negative and Gram-positive bacteria with the usual kanamycin sensitivity, but also against kanamycin-resistant bacteria.

10 10th

Dabei wurde gefunden, dass selektive Acylierung der 1-Ami-nogruppe von ó'-N-Methyl-S'^'-dideoxykanamycin B mit einer a-Hydroxy-co-aminosäure, vorzugsweise mit Isoserin, 4-Amino-2-hydroxybuttersäure oder 5-Amino-2-hydroxyvale-riansäure, sowohl in racemischer Form als auch in Form der L-Isomeren oder der D-Isomeren zu neuen nützlichen Kanamycin B Derivaten führt, welche hochgradig antibakteriell wirksam sind gegen Gram-negative und Gram-positive Kanamycin-empfindliche und Kanamycin-resistente Bakterien. Dabei sollte sich die Wirksamkeit bei den penicillinresistenten Bakterien insbesondere auch auf solche erstrecken, welche die oben genannten inaktivierenden Enzyme produzieren. Weiterhin sollte das neue Verfahren leicht durchzuführen sein und mit guter Ausbeute zu den erwünschten Produkten führen. It was found that selective acylation of the 1-amino group of ó'-N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B with an a-hydroxy-co-amino acid, preferably with isoserine, 4-amino-2-hydroxybutyric acid or 5-Amino-2-hydroxyvalaleic acid, both in racemic form and in the form of the L isomers or the D isomers, leads to new useful kanamycin B derivatives which are highly antibacterially active against gram-negative and gram-positive kanamycin sensitive and kanamycin-resistant bacteria. The effectiveness of the penicillin-resistant bacteria should in particular also extend to those which produce the above-mentioned inactivating enzymes. Furthermore, the new process should be easy to carry out and lead to the desired products with good yield.

Die neuen Verbindungen weisen die Formel I The new compounds have the formula I.

CO . CHOH CO. CHOH

NH- NH-

auf, worin n 1,2 oder 3 ist. Weiterhin auch pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze davon. Dabei kann der a-Hydroxy-co-aminoalkanoylrest, d. h. vorzugsweise die Isoseryl-gruppe, 4-Amino-2-hydrocybutyrylgruppe oder 5-Amino-2-hydroxyvalerylgruppe im Molekül der neuen Verbindungen der obigen Formel I sowohl in der DL-Form (der racemischen Form), der L-Form oder der D-Form vorkommen. where n is 1, 2 or 3. Furthermore, pharmaceutically acceptable acid addition salts thereof. The a-hydroxy-co-aminoalkanoyl residue, i.e. H. preferably the isoseryl group, 4-amino-2-hydrocybutyryl group or 5-amino-2-hydroxyvaleryl group in the molecule of the new compounds of the above formula I both in the DL form (the racemic form), the L form or the D- Shape.

Die am meisten bevorzugten Verbindungen dieser Art sind: The most preferred compounds of this type are:

1. l-N-(DL-Isoseryl)-6'-N-methyl-3/,4'-dideoxykanamycin B; 1. 1-N- (DL-isoseryl) -6'-N-methyl-3 /, 4'-dideoxykanamycin B;

2. l-N-(L-Isoseryl)-6'-N-methyl-3',4'-dideoxy]canamycin B; 2. l-N- (L-isoseryl) -6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxy] canamycin B;

3. l-N-(L-4-Amino-2-hydroxybutyryl)-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycin B und 3. l-N- (L-4-amino-2-hydroxybutyryl) -6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B and

4. l-N-(L-5-Amino-2-hydroxyvaleryl)-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycin B, 4. l-N- (L-5-amino-2-hydroxyvaleryl) -6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B,

bzw. die pharmazeutisch verträglichen ungiftigen Säureadditionssalze davon. or the pharmaceutically acceptable, non-toxic acid addition salts thereof.

Beispiele erfindungsgemässer pharmazeutisch verträglicher Säureadditionssalze der neuen Verbindungen der Formel I sind die Hydrochloride, Hydrobromide, Sulfate, Phosphate, Nitrate, Carbonate, Acetate, Maleate, Fumarate, Succinate, Tartrate, Oxalate, Citrate, Methansulfonate, Äthansulfonate, Ascorbate und dergleichen, wobei es sich um ein Mono-, Di-, Tri-, Tetra- oder Pentasalz handeln kann, entstanden durch Einwirkung von einem Molekül der neuen Verbindung der Formel I auf 1 bis 5 Moleküle ungiftiger pharmazeutisch verträglicher Säuren. Solche pharmazeutisch verträgliche ungiftige Säuren sind z. B. Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Kohlensäure, Essigsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Bernsteinsäure, Weinsäure, Oxalsäure, Methansulfonsäure, Äthansulfonsäure, Ascorbinsäure und dergleichen. Examples of pharmaceutically acceptable acid addition salts according to the invention of the new compounds of formula I are the hydrochlorides, hydrobromides, sulfates, phosphates, nitrates, carbonates, acetates, maleates, fumarates, succinates, tartrates, oxalates, citrates, methanesulfonates, ethanesulfonates, ascorbates and the like, where can be a mono-, di-, tri-, tetra- or pentasalt, resulted from the action of one molecule of the new compound of formula I on 1 to 5 molecules of non-toxic pharmaceutically acceptable acids. Such pharmaceutically acceptable non-toxic acids are e.g. As hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, nitric acid, carbonic acid, acetic acid, maleic acid, fumaric acid, succinic acid, tartaric acid, oxalic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, ascorbic acid and the like.

40 40

45 45

50 50

Die neuen erfindungsgemäss herstellbaren Verbindungen zeigen die folgenden physikalischen, chemischen und biologischen Eigenschaftem: The new compounds which can be produced according to the invention have the following physical, chemical and biological properties:

l-N-(DL-Isoseryl)-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycin B ist eine Substanz in Form eines farblosen kristallinen Pulvers mit einer Zersetzungstemperatur von 165 bis 169°C (d)j=,4 = + 96° (c 1,175, Wasser). Seine Elementaranalyse stimmt überein mit theoretischen Werten für C22H44N6O10 (C, 47,81%, H, 8,03%, N, 15,21 %). Die Substanz gibt bei der Dünnschichtchromatographie einen einzelnen Fleck von Rf 0,51 auf Silicagel (erhältlich unter dem Handelsnamen «ART 5721», einem Produkt von Merck Co, Deutschland), wenn das Chromato-gramm entwickelt wird mit n-Butanol-Äthanol-Chloroform-28% wässrigem Ammoniak (4:5:2:8 Volumenteile). IN- (DL-isoseryl) -6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B is a substance in the form of a colorless crystalline powder with a decomposition temperature of 165 to 169 ° C (d) j =, 4 = + 96 ° (c 1.175, water). His elemental analysis agrees with theoretical values for C22H44N6O10 (C, 47.81%, H, 8.03%, N, 15.21%). In thin layer chromatography, the substance gives a single spot of Rf 0.51 on silica gel (available under the trade name "ART 5721", a product from Merck Co, Germany) if the chromatogram is developed with n-butanol-ethanol-chloroform -28% aqueous ammonia (4: 5: 2: 8 parts by volume).

l-N-(L-Isoseryl)-6'-N-methyl-3/,4'-dideoxykanamycin B ist eine Substanz in Form eines farblosen kristallinen Pulvers mit einer Zersetzungstemperatur von 162 bis 166°C [a]g* = -I- 80° 55 (c, 1,02, Wasser). Seine Elementaranalyse stimmt überein mit den theoretischen Werten von C22H44N6O10 (C = 47,81 %, H = 8,03%, N = 15,21%). Die Substanz ergibt bei der auf vorgenannte Weise durchgeführten Dünnschichtchromatographie einen einzelnen Fleck (positiv auf die Ninhydrinreaktion) mit 60 einem Rf Wert von 0,51. IN- (L-isoseryl) -6'-N-methyl-3 /, 4'-dideoxykanamycin B is a substance in the form of a colorless crystalline powder with a decomposition temperature of 162 to 166 ° C [a] g * = -I- 80 ° 55 (c, 1.02, water). His elemental analysis agrees with the theoretical values of C22H44N6O10 (C = 47.81%, H = 8.03%, N = 15.21%). In the thin-layer chromatography carried out in the aforementioned manner, the substance gives a single spot (positive for the ninhydrin reaction) with an Rf value of 0.51.

l-N-(L-4-Amino-2-hydroxybutyryl)-6'-N-methyl-3',4'-di-deoxykanamycin B ist eine Substanz in Form eines farblosen kristallinen Pulvers mit einer Zersetzungstemperatur von 158 bis 16l°C[ag5 = +71° (c, 0,8, Wasser). IhreElementarana-65 lyse stimmt überein mit den theoretischen Werten für C23H46N6O10 (C = 48,75%, H = 8,18%, N = 14,83%). Diese Substanz ergibt bei der in obengenannter Weise durchgeführten Dünnschichtchromatographie einen einzelnen Fleck IN- (L-4-amino-2-hydroxybutyryl) -6'-N-methyl-3 ', 4'-di-deoxykanamycin B is a substance in the form of a colorless crystalline powder with a decomposition temperature of 158 to 16 ° C [ ag5 = + 71 ° (c, 0.8, water). Your Elementarana-65 lysis agrees with the theoretical values for C23H46N6O10 (C = 48.75%, H = 8.18%, N = 14.83%). This substance gives a single spot in the thin layer chromatography performed in the above-mentioned manner

7 7

(positiv auf die Ninhydrinreaktion) mit einem Rf Wert von 0,38. (positive for the ninhydrin reaction) with an Rf value of 0.38.

l-N-(L-5-Amino-2-hydroxyvaleryI)-6/-N-methyl-3/,4/-dide-oxykanamycin B ist eine Substanz in Form eines farblosen kristallinen Pulvers mit einer Zersetzungstemperatur von 152 s bis 155°C. [aß4 = +79° (c 0,71, Wasser). Ihre Elementaranalyse stimmt überein mit den theoretischen Werten für C24H48N6O10 (C = 49,64%, H = 8,33%, N = 14,47%). Bei der Dünnschichtchromatographie auf Silicagel in der oben beschriebenen Weise ergibt sich ein einzelner Fleck (positiv 10 auf die Ninhydrinreaktion) mit einem Rf Wert von 0,39. IN (L-5-amino-2-hydroxyvaleryI) -6 / -N-methyl-3 /, 4 / -dide-oxykanamycin B is a substance in the form of a colorless crystalline powder with a decomposition temperature of 152 s to 155 ° C . [aß4 = + 79 ° (c 0.71, water). Your elementary analysis agrees with the theoretical values for C24H48N6O10 (C = 49.64%, H = 8.33%, N = 14.47%). Thin-layer chromatography on silica gel in the manner described above gives a single spot (positive 10 for the ninhydrin reaction) with an Rf value of 0.39.

Die erfindungsgemäss herstellbaren Verbindungen gemäss der Formel I sind dadurch charakterisiert, dass sie den enzy-matischen inaktivierenden Reaktionen der oben genannten Enzyme, welche Kanamycin A und Kanamycin B inaktivieren, 15 nicht unterliegen. Insbesondere werden die neuen Verbindungen nicht inaktiviert durch die 6 ' -Acetyltransferase, weil die 6 ' -Aminogruppe der neuen Verbindungen methyliert wurde, The compounds according to formula I which can be prepared according to the invention are characterized in that they are not subject to the enzymatic inactivating reactions of the above-mentioned enzymes which inactivate kanamycin A and kanamycin B. In particular, the new compounds are not inactivated by the 6 'acetyltransferase because the 6' amino group of the new compounds has been methylated,

noch werden sie inaktiviert durch die 2"-Nukleotidyltransfe-rase und die 3'-Phosphortransferase, weil die 1-Aminogruppe 20 der neuen Verbindung acyliert wurde mit der a-Hydroxy-o-aminoacylgruppe. Auch können sie nicht inaktiviert werden durch andere Arten von S'-Phosphortransferase, weil die 3'-und 4'-Hydroxylgruppen, die in Kanamycin B vorhanden sind, in den neuen Verbindungen gemäss der Erfindung nicht vor- 2s kommen. Demzufolge sind die neuen Verbindungen ausge- nor are they inactivated by the 2 "nucleotidyltransferase and the 3'-phosphorus transferase because the 1-amino group 20 of the new compound has been acylated with the a-hydroxy-o-aminoacyl group. Nor can they be inactivated by other types of S'-phosphorus transferase because the 3'-and 4'-hydroxyl groups present in kanamycin B do not occur in the new compounds according to the invention.

615 685 615 685

sprachen vorteilhaft insofern, als sie hochgradige antibakterielle Wirksamkeit aufweisen, nicht nur gegenüber den verschiedenen Arten von Gram-negativen und Gram-positiven Bakterien, welche an sich auf die Kanamycine ansprechen, sondern auch auf die Kanamycin-resistenten Stämme dieser Bakterien, insbesondere auf Kanamycin-resistente Stämme von Escherichia coli und Pseudomonas aeruginosa. spoke advantageously in that they have high level of antibacterial activity, not only against the various types of Gram-negative and Gram-positive bacteria which respond to the kanamycins per se, but also to the kanamycin-resistant strains of these bacteria, in particular on kanamycin resistant strains of Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa.

Die minimalen inhibitorischen Konzentrationen ((ig/ml) von l-N-(DL-Isoseryl)-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycinB abgekürzt DL-IS-MDKB); l-N-(L-Isoseryl)-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycin B (abgekürztL-IS-MDKB); l-N-(L-4-Amino-3-hydroxybutyryl-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycin B (abgekürzt AHB-MDKB) und 1-N-(L-5-Amino-2-hydroxyvaleryl)-6'-N-methyl-3/,4/-dideoxyka-namycin B (abgekürzt AHV-MDBK) gegenüber verschiedenen Organismen wurden bestimmt nach der Verdünnungsreihenmethode unter Verwendung von Agar-Nährmedien bei 37°C, wobei die Ablesungen nach 18 Stunden Inkubationszeit durchgeführt wurden. Zu Vergleichszwecken wurden die minimalen inhibitorischen Konzentrationen (|x/ml) von l-N-(L-4-Amino-2-hydroxybutyryl)-kanamycin A (abgekürzt AHB-KMA) und l-N-(L-4-Amino-2-hydroxybutyryI)-kanamycin B (abgekürzt AHB-KMB), aus dem US-Patent 3 781 268 bekannte Verbindungen, in gleicher Weise bestimmt. The minimum inhibitory concentrations ((ig / ml) of l-N- (DL-isoseryl) -6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycinB abbreviated DL-IS-MDKB); l-N- (L-isoseryl) -6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B (abbreviated L-IS-MDKB); IN- (L-4-amino-3-hydroxybutyryl-6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B (abbreviated AHB-MDKB) and 1-N- (L-5-amino-2-hydroxyvaleryl) -6'-N-methyl-3 /, 4 / -dideoxyka-namycin B (abbreviated AHV-MDBK) against various organisms were determined by the dilution series method using agar culture media at 37 ° C., the readings being given after an incubation period of 18 hours For comparison purposes, the minimum inhibitory concentrations (| x / ml) of 1N- (L-4-amino-2-hydroxybutyryl) -kanamycin A (abbreviated AHB-KMA) and 1N- (L-4-amino-2 -hydroxybutyryI) -kanamycin B (abbreviated AHB-KMB), compounds known from US Pat. No. 3,781,268, were determined in the same way.

Die antibakteriellen Spektren, die sich hierbei ergaben, sind in der nachfolgenden Tabelle 1 enthalten. The antibacterial spectra that resulted were shown in Table 1 below.

Tabelle 1 Table 1

Minimale inhibitorische Konzentration (fig/ml) Minimum inhibitory concentration (fig / ml)

Test-Organismen Test organisms

DL-IS- DL-IS-

L-IS- L-IS-

AHB- AHB-

AHV- AHV-

AHB- AHB-

MDKB MDKB

MDKB MDKB

MDKB MDKB

MDKB MDKB

KMA KMA

Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

Staphylococcus aureus FDA 209P Staphylococcus aureus FDA 209P

0.78 0.78

<0.20 <0.20

0.78 0.78

0.39 0.39

0.39 0.39

Staphylococcus aureus Terajima Staphylococcus aureus Terajima

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

Sarcina lutea PCI 1001 Sarcina lutea PCI 1001

6.25 6.25

3.13 3.13

3.13 3.13

12.5 12.5

3.13 3.13

Bacillus anthracis Bacillus anthracis

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

Bacillus subtilis PCI 219 Bacillus subtilis PCI 219

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

Bacillus subtilis NRRL B-558 Bacillus subtilis NRRL B-558

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

<0.20 <0.20

Bacillus cereus ATCC10702 Bacillus cereus ATCC10702

3.13 3.13

1.56 1.56

3.13 3.13

1.56 1.56

0.78 0.78

Corynebacterium bovis 1810 Corynebacterium bovis 1810

3.13 3.13

0.78 0.78

3.13 3.13

6.25 6.25

0.78 0.78

Mycobacterium smegmatis ATCC 607 Mycobacterium smegmatis ATCC 607

0.39 0.39

0.39 0.39

0.20 0.20

0.78 0.78

<0.20 <0.20

Shigella dysenteriae JS 11910 Shigella dysenteriae JS 11910

6.25 6.25

3.13 3.13

3.13 3.13

3.13 3.13

3.13 3.13

Shigella flexneri 4b JS 11811 Shigella flexneri 4b JS 11811

3.13 3.13

1.56 1.56

3.13 3.13

3.13 3.13

3.13 3.13

Shigella sonnei JS 11746 Shigella sonnei JS 11746

3.13 3.13

3.13 3.13

6.25 6.25

3.13 3.13

1.56 1.56

Salmonella typhosa T-63 Salmonella typhosa T-63

1.56 1.56

0.39 0.39

3.13 3.13

0.78 0.78

0.39 0.39

Salmonella enteritidis 1891 Salmonella enteritidis 1891

3.13 3.13

0.78 0.78

1.56 1.56

0.78 0.78

0.78 0.78

Proteus vulgaris OX19 Proteus vulgaris OX19

1.56 1.56

0.78 0.78

1.56 1.56

0.78 0.78

0.78 0.78

Klebsiella pneumoniae PCI 602 Klebsiella pneumoniae PCI 602

1.56 1.56

0.78 0.78

0.78 0.78

0.78 0.78

0.39 0.39

Klebsiella pneumoniae 22 No. 3038 Klebsiella pneumoniae 22 No. 3038

3.13 3.13

1.56 1.56

3.13 3.13

3.13 3.13

1.56 1.56

Escherichia coli NIH J Escherichia coli NIH J

1.56' 1.56 '

1.56 1.56

1.56 1.56

0.78 0.78

0.78 0.78

Escherichia coli K-12 Escherichia coli K-12

1.56 1.56

0.78 0.78

0.78 0.78

0.78 0.78

0.78 0.78

Escherichia coli K-12 R5 Escherichia coli K-12 R5

3.13 3.13

1.56 1.56

1.56 1.56

1.56 1.56

0.39 0.39

Escherichia coli K-12 ML 1629 Escherichia coli K-12 ML 1629

1.56 1.56

1.56 1.56

1.56 1.56

0.78 0.78

0.78 0.78

Escherichia coli K-12 ML 1630 Escherichia coli K-12 ML 1630

3.13 3.13

1.56 1.56

0.78 0.78

1.56 1.56

0.78 0.78

Escherichia coli K-12 ML 1410 Escherichia coli K-12 ML 1410

3.13 3.13

1.56 1.56

1.56 1.56

1.56 1.56

0.78 0.78

Escherichia coli K-12 ML 1410 R81 ■ Escherichia coli K-12 ML 1410 R81 ■

3.13 3.13

1.56 1.56

1.56 1.56

1.56 1.56

1.56 1.56

Escherichia coli LA290 R55 Escherichia coli LA290 R55

3.13 3.13

1.56 1.56

0.78 0.78

0.78 0.78

0.78 0.78

Escherichia coli LA290 R56 Escherichia coli LA290 R56

0.78 0.78

0.78 0.78

0.78 0.78

0.39 0.39

0.39 0.39

Escherichia coli LA290 R64 Escherichia coli LA290 R64

0.78 0.78

0.39 0.39

0.78 0.78

0.39 0.39

0.39 0.39

Escherichia coli W677 Escherichia coli W677

1.56 1.56

0.78 0.78

0.78 0.78

0.78 0.78

<0.20 <0.20

Escherichia coli JR66/W677 Escherichia coli JR66 / W677

3.13 3.13

1.56 1.56

3.13 3.13

1.56 1.56

1.56 1.56

Pseudomonas aeruginosa A3 Pseudomonas aeruginosa A3

3.13 3.13

3.13 3.13

3.13 3.13

3.13 3.13

3.13 3.13

Pseudomonas aeruginosa No. 12 Pseudomonas aeruginosa No. 12

6.25 6.25

25 25th

3.13 3.13

25 25th

3.13 3.13

Pseudomonas aeruginosa TI-13 Pseudomonas aeruginosa TI-13

12.5 12.5

6.25 6.25

6.25 6.25

6.25 6.25

3.13 3.13

Pseudomonas aeruginosa GN315 Pseudomonas aeruginosa GN315

12.5 12.5

25 25th

6.25 6.25

12.5 12.5

100 100

Pseudomonas aeruginosa 99 Pseudomonas aeruginosa 99

25 25th

25 25th

25 25th

25 25th

6.25 6.25

615 685 8 615 685 8

Die erfindungsgemäss hergestellten neuen Verbindungen zeigen niedrige Giftwirkung gegenüber Tieren und gegenüber den Menschen. Bei intravenöser Injektion in Mäuse liegen die LDso-Werte oberhalb von 100 mg/kg Körpergewicht. Weiterhin zeigen die neuen Verbindungen hochgradige antibakterielle s Wirkung gegenüber verschiedenen Gram-negativen und Gram-positiven Bakterien, welche auf Kanamycin ansprechen, wie auch gegenüber verschiedenen kanamycinresistenten Stämmen, wie sie vorstehend aufgeführt wurden, so dass mit den neuen Verbindungen wertvolle therapeutische Behand- io lungsmittel zur Bekämpfung von verschiedenen Gram-negativen und Gram-positiven Bakterien vorliegen. The new compounds produced according to the invention show low toxicity to animals and to humans. When intravenously injected into mice, the LD 50 values are above 100 mg / kg body weight. Furthermore, the new compounds show a high level of antibacterial activity against various gram-negative and gram-positive bacteria which respond to kanamycin, as well as against various kanamycin-resistant strains, as mentioned above, so that the novel compounds provide valuable therapeutic treatment agents to combat various gram-negative and gram-positive bacteria.

Die neuen Verbindungen können oral, intraperitoneal, intravenös, subkutan oder intramuskulär verabfolgt werden, The new compounds can be administered orally, intraperitoneally, intravenously, subcutaneously or intramuscularly,

unter Verwendung der hierbei für Kanamycine üblichen Tech- is niken. Zum Beispiel können die Verbindungen oral verabfolgt werden in jeder bekannten pharmazeutischen Form für solche Zwecke, wie z. B. als Pulver, Kapseln, Tabletten, Sirupe und using the techniques customary for Kanamycins. For example, the compounds can be administered orally in any known pharmaceutical form for such purposes as e.g. B. as powder, capsules, tablets, syrups and

3 3rd

durch selektive Acylierung der 1-Aminogruppe darin mit einer Mono- und Diamino-geschützten Derivaten der Verbindung II a-Hydroxy-w-aminosäure der Formel III ' ist verhältnismässig einfacher zufolge der Tatsache, dass die 6'- by selective acylation of the 1-amino group therein with a mono- and diamino-protected derivative of the compound II a-hydroxy-w-amino acid of the formula III 'is relatively simpler due to the fact that the 6'-

Methylamino- und die 2/-Aminogruppen reaktionsfähiger sind 40 als die anderen Aminogruppen der Verbindung II und demzufolge vorzugsweise durch die Aminoschutzgruppe blockiert werden können, wogegen die anderen Aminogruppen unblok-kiert bleiben. Da die Reaktionswilligkeit der 2'-Aminogruppe etwas geringer ist als diejenige der 6'-Aminogruppe, jedoch 45 grösser ist als diejenige der 1-, 3- und 3 "-Aminogruppen, kann gewünschtenfalls die 2'-Aminogruppe gleichfalls blockiert werden. Methylamino and the 2 / amino groups are more reactive 40 than the other amino groups of compound II and consequently can preferably be blocked by the amino protecting group, whereas the other amino groups remain unblocked. Since the reactivity of the 2'-amino group is somewhat less than that of the 6'-amino group, but is 45 greater than that of the 1-, 3- and 3 "-amino groups, the 2'-amino group can also be blocked if desired.

Wenn die aminogeschützten Derivate, hergestellt aus der Verbindung II, worin die ó'-Methylaminogruppe und gegebe-50 nenfalls die 2'-Aminogruppe blockiert sind, umgesetzt werden mit der a-Hydroxy-co-aminosäure (III), worin die co-Aminogruppe vorzugsweise ebenfalls blockiert ist durch die Aminoschutzgruppe, so entsteht ein Reaktionsprodukt, welches zur Hauptsache besteht aus dem erwünschten 1-N-monoacylierten 55 Derivat, zusammen mit geringeren Anteilen der mono- und poly-N-acylierten Derivate, in welchen eine oder mehrere der Aminogruppen neben der 1-Aminogruppe und gegebenenfalls der 2'-Aminogruppe acyliert sind mit der a-Hydroxy-to-ami-nosäure III. Demgemäss wird bei der obgenannten Reaktion 60 das Acylierungsprodukt in Form eines Gemisches verschiedener N-acylierter Derivate erhalten unter Einschluss des erwünschten 1-N-monoacylierten Derivates. Es ist möglich, das erwünschte 1-N-monoacylierte Derivat aus dem Gemisch der N-acylierten Derivate zu erhalten, indem man das 65 Gemisch einer chromatographischen Trennung unterwirft. Indessen können die gemischten N-acylierten Derivate auch direkt einer Abspaltung der Aminoschutzgruppen daraus unterworfen werden. Dabei entsteht ein Gemisch des dergleichen. Geeignete Dosen der Verbindung zur Behandlung bakterieller Infektionen liegen im Bereich von 0,25 bis 2 g pro Person und Tag bei oraler Verabreichung. Vorzugsweise wird diese Dosis aufgeteilt in drei bis vier gleiche, täglich zu verabfolgende Teile. Bei intramuskulärer Injektion empfiehlt sich eine Dosierung von 5 bis 500 mg pro Dosis mit zwei bis vier Verabfolgungen pro Tag. Weiterhin können die neuen Verbindungen eingearbeitet werden in eine Salbe für externe Anwendung in einer Konzentration von 0,5 bis 5 Gew.%, z. B. im Gemisch mit einer bekannten Salbengrundlage wie Polyäthy-lenglykol. If the amino-protected derivatives, prepared from the compound II, in which the ó'-methylamino group and optionally the 2'-amino group are blocked, are reacted with the a-hydroxy-co-amino acid (III), in which the co-amino group preferably also blocked by the amino protecting group, a reaction product is formed which mainly consists of the desired 1-N-monoacylated derivative, together with lower proportions of the mono- and poly-N-acylated derivatives, in which one or more of the amino groups in addition to the 1-amino group and optionally the 2'-amino group are acylated with the a-hydroxy-to-amino acid III. Accordingly, in the above reaction 60, the acylation product is obtained in the form of a mixture of various N-acylated derivatives including the desired 1-N-monoacylated derivative. It is possible to obtain the desired 1-N-monoacylated derivative from the mixture of the N-acylated derivatives by subjecting the mixture to chromatographic separation. In the meantime, the mixed N-acylated derivatives can also be subjected directly to cleavage of the amino protective groups therefrom. This creates a mixture of the like. Suitable doses of the compound for the treatment of bacterial infections are in the range of 0.25 to 2 g per person per day when administered orally. This dose is preferably divided into three to four equal parts to be administered daily. With intramuscular injection, a dosage of 5 to 500 mg per dose with two to four administrations per day is recommended. Furthermore, the new compounds can be incorporated into an ointment for external use in a concentration of 0.5 to 5% by weight, e.g. B. in admixture with a known ointment base such as polyethylene glycol.

Ferner lassen sich die neuen Verbindungen verwenden zur Sterilisierung chirurgischer Instrumente, wenn die Sterilisierung begleitet wird von einer geeigneten mechanischen Reinigung. Furthermore, the new compounds can be used for the sterilization of surgical instruments if the sterilization is accompanied by a suitable mechanical cleaning.

Im Prinzip können die neuen Verbindungen der Formel I hergestellt werden aus der bekannten Verbindung 6'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B der Formel II In principle, the new compounds of the formula I can be prepared from the known compound 6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B of the formula II

H2N-(CH2)n-CH(OH)-COOH (III) H2N- (CH2) n-CH (OH) -COOH (III)

worin n 1, 2 oder 3 ist. Diese Acylierung kann nach an sich bekannter Art durchgeführt werden, beispielsweise wie bei der Acylierung einer Aminogruppe im Verlaufe der Synthese von Peptiden. Das 6'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B der Formel II enthält vier freie primäre Aminogruppen in 1-, 3-, 2'- und 3"-Stellung und eine sekundäre Methylaminogruppe in ó'-Stellung. Zur Herstellung von Verbindungen der Formel I ist es erforderlich, dass die 1-Aminogruppe des 6'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B selektiv acyliert wird mit der a-Hydroxy-to-aminosäure der Formel III ohne Acylierung der anderen drei Aminogruppen und der ó'-Methylaminogruppe. Die neuen Verbindungen der Formel I werden in bester Ausbeute erhalten, wenn das a-Hydroxy-o-aminosäure-Reagenz der Formel III umgesetzt wird mit einem aminogeschützten Derivat der Verbindung II, worin die ó'-Methylaminogruppe und die freien Aminogruppen (d. h. diejenigen in 3-, 2'- und 3"-StelIung) blockiert sind durch eine an sich bekannte Aminoschutzgruppe, wobei lediglich die 1-Aminogruppe frei ist. Die Herstellung des aminogeschützten Derivats ist schwierig, jedoch möglich und es ist hierfür eine Anzahl von Verfahrensschritten notwendig. Anstelle hiervon ist es vorteilhaft, ein derartiges aminogeschütztes Derivat der Verbindung II herzustellen, worin lediglich die ó'-Methylaminogruppe und gegebenenfalls die 2'-Aminogruppe blockiert sind durch Aminoschutzgruppen, wogegen die anderen Aminogruppen im freien Zustand verbleiben. Die Herstellung der letzteren Art von where n is 1, 2 or 3. This acylation can be carried out in a manner known per se, for example as in the acylation of an amino group in the course of the synthesis of peptides. The 6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B of the formula II contains four free primary amino groups in the 1-, 3-, 2'- and 3 "-position and a secondary methylamino group in the ó'-position Preparation of compounds of formula I, it is necessary that the 1-amino group of 6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B is selectively acylated with the a-hydroxy-to-amino acid of formula III without acylation of the others three amino groups and the ó'-methylamino group The new compounds of the formula I are obtained in the best yield when the a-hydroxy-o-amino acid reagent of the formula III is reacted with an amino-protected derivative of the compound II, in which the ó'- Methylamino group and the free amino groups (ie those in the 3-, 2'- and 3 "position) are blocked by an amino protective group known per se, only the 1-amino group being free. The preparation of the amino-protected derivative is difficult, but possible, and a number of process steps are necessary for this. Instead of this, it is advantageous to prepare such an amino-protected derivative of the compound II, in which only the ó'-methylamino group and optionally the 2'-amino group are blocked by amino protective groups, whereas the other amino groups remain in the free state. The manufacture of the latter type of

9 9

615 685 615 685

erwünschten 1-N-monoacylierten Produktes der Formel I mit den anderen mono- und poly-N-acylierten unerwünschten Nebenprodukten, entstanden aus der selektiv-aminogeschütz-ten Ausgangsverbindung. Das erwünschte Produkt I kann von den unerwünschten Nebenprodukten abgetrennt werden, indem das Gemisch einer chromatographischen Trennung unterworfen wird. Das erfindungsgemässe Verfahren zur Herstellung von l-N-(a-Hydroxy-a)-aminoalkanoyl)-6/-N-methyl-S'^'-dideoxykanamycin B Verbindungen der Formel I ist gekennzeichnet durch die selektive Acylierung der 1-Amino-s gruppe eines aminogeschützten Derivates von 6'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B der Formel IV Desired 1-N-monoacylated product of the formula I with the other mono- and poly-N-acylated undesired by-products originated from the selectively-amino-protected starting compound. The desired product I can be separated from the undesired by-products by subjecting the mixture to a chromatographic separation. The process according to the invention for the preparation of IN- (a-hydroxy-a) -aminoalkanoyl) -6 / -N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B compounds of the formula I is characterized by the selective acylation of the 1-amino-s group an amino-protected derivative of 6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B of the formula IV

** ch2oh 0 ** ch2oh 0

* ^CH, * ^ CH,

worin Ri eine einwertige Aminoschutzgruppe und R2 Wasser- 25 0der einem funktionellen Derivat davon als Acylierungsmittel. wherein Ri is a monovalent amino protecting group and R2 water or a functional derivative thereof as an acylating agent.

stoff oder eine einwertige Aminoschutzgruppe darstellt, mit einer a-Hydroxy-co-aminosäure der Formel V R3 represents substance or a monovalent amino protecting group, with an a-hydroxy-co-amino acid of the formula V R3

N-(CH2)ii-CH(OH)-COOH (V) N- (CH2) ii-CH (OH) -COOH (V)

R^ R ^

30 30th

In der letzteren Formel ist R3 eine einwertige Aminoschutzgruppe und R4 ist Wasserstoff bzw. R3 und R4 bilden zusammen eine zweiwertige Aminoschutzgruppe und n ist 1,2 oder 3. Bei dieser Umsetzung entsteht eine 1-N-acylierte Verbindung der Formel VI In the latter formula, R3 is a monovalent amino protective group and R4 is hydrogen or R3 and R4 together form a divalent amino protective group and n is 1, 2 or 3. This reaction produces a 1-N-acylated compound of the formula VI

worin Ri, R2, R3, R4 und n die vorgenannten Bedeutungen aufweisen. Aus der letzteren 1-N-acylierten Verbindung werden die Aminoschutzgruppen abgespalten, wobei die erwünschte Verbindung der Formel I entsteht. Gegebenenfalls kann an diesen Verfahrensschritt ein zusätzlicher Schritt zur Isolierung der erwünschten Verbindung der Formel I aus dem Gemisch mit den unerwünschten N-acylierten Nebenprodukten angeschlossen werden. wherein R 1, R 2, R 3, R 4 and n have the meanings given above. The amino protecting groups are split off from the latter 1-N-acylated compound, the desired compound of the formula I being formed. Optionally, an additional step for isolating the desired compound of formula I from the mixture with the undesired N-acylated by-products can be connected to this process step.

Zur Herstellung der Verbindung der Formel IV mit der blockierten ó'-Methylaminogruppe und der gegebenenfalls gleichfalls blockierten 2'-Aminogruppe, welche als Ausgangsmaterial im erfindungsgemässen Verfahren dient, kann die Verbindung der Formel II behandelt werden mit einem Reagens, wie es üblich ist bei der Peptidsynthese zur Einführung ss bekannter Aminoschutzgruppen in die verwendete Aminosäure. Demgemäss kann die erfindungsgemäss verwendete Aminoschutzgruppe eine solche sein, wie sie üblicherweise bei der Synthese von Peptiden Anwendung findet, sofern sie nur aus den erhaltenen acylierten Derivaten VI leicht abspaltbar 60 ist. Wenn das acylierte Derivat mit den blockierten Aminogruppen in an sich bekannter Weise zur Abspaltung der Aminoschutzgruppe behandelt wird, so müssen die Aminoschutzgruppen leicht entfernbar sein, ohne dass eine merkliche Einwirkung aud die Amidbindung eintritt, welche entstanden ist 65 zwischen dem a-Hydroxy-co-aminoalkanoylrest und der 1-Aminogruppe in besagtem acyliertem Derivat VI. To prepare the compound of formula IV with the blocked ó'-methylamino group and the optionally also blocked 2'-amino group, which serves as the starting material in the process according to the invention, the compound of formula II can be treated with a reagent, as is customary in the Peptide synthesis for the introduction of known amino protective groups into the amino acid used. Accordingly, the amino protecting group used according to the invention can be one which is usually used in the synthesis of peptides, provided that it can only be easily split off 60 from the acylated derivatives VI obtained. If the acylated derivative with the blocked amino groups is treated in a manner known per se to remove the amino protective group, the amino protective groups must be easily removable without any noticeable effect on the amide bond which has formed 65 between the a-hydroxy-co- aminoalkanoylrest and the 1-amino group in said acylated derivative VI.

Geeignete Beispiele für einwertige Aminoschutzgruppen Ri, R2, R3 und R4 sind z. B. Alkyloxycarbonylreste mit 2 bis 6 Suitable examples of monovalent amino protecting groups Ri, R2, R3 and R4 are e.g. B. alkyloxycarbonyl radicals with 2 to 6

615 685 615 685

10 10th

Kohlenstoffatomen, wie Äthoxycarbonyl, t-Butoxycarbonyl und t-Amyloxycarbonyl, Cycloalkyloxycarbonylreste mit 4 bis 7 Kohlenstoffatomen wie Cyclopentyloxycarbonyl und Cyclo-hexyloxycarbonyl, Aralkyloxycarbonylreste wie Benzyloxycar-bonyl und p-Nitrobenzyloxycarbonyl, Aryloxycarbonylreste wie Phenoxycarbonyl und Furfuryloxycarbonyl sowie ein Acyl-rest nach Art des o-Nitrophenoxyacetyls und dergleichen. Falls die Gruppen R3 und R4 zusammen eine an sich bekannte zweiwertige Aminoschutzgruppe bilden, so kann diese zweiwertige Aminoschutzgruppe z. B. sein Phthaloyl oder Salicyli-den oder allgemein eine Alkyliden- oder Arylidengruppe der Formel =CHRs, worin Rs ein Alkylrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist wie z. B. Methyl, Äthyl, Propyl, Isipropyl, Carbon atoms, such as ethoxycarbonyl, t-butoxycarbonyl and t-amyloxycarbonyl, Cycloalkyloxycarbonylreste having 4 to 7 carbon atoms such as cyclopentyloxycarbonyl and cyclo hexyloxycarbonyl, aralkyloxycarbonyl groups such as Benzyloxycar-carbonyl, and p-nitrobenzyloxycarbonyl, aryloxycarbonyl groups such as phenoxycarbonyl and furfuryloxycarbonyl and an acyl rest on the type of o -Nitrophenoxyacetyls and the like. If the groups R3 and R4 together form a known bivalent amino protecting group, this bivalent amino protecting group can e.g. B. be phthaloyl or salicylide or generally an alkylidene or arylidene group of the formula = CHRs, wherein Rs is an alkyl radical having 1 to 6 carbon atoms such as. B. methyl, ethyl, propyl, isipropyl,

Butyl oder Pentyl oder ein Arylrest wie Phenyl, Tolyl, p-Methoxyphenyl oder o-Hydroxyphenyl. Butyl or pentyl or an aryl radical such as phenyl, tolyl, p-methoxyphenyl or o-hydroxyphenyl.

Derartige an sich bekannte einwertige Aminoschutzgruppen wie Alkyloxycarbonyl, Aralkyloxycarbonyl oder Aryloxycar-bonyl können dargestellt werden durch eine Formel -CO-OR6, worin Rô Alkyl mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen ist, wie Äthyl, Methyl, t-Butyl und t-Amyl, oder Cycloalkyl mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen wie Cyclopentyl oder Cyclohexyl. Ferner Aralkyl wie Phenylalkyl, wobei der Alkylrest 1 bis 4 Kohlenstoffatome enthält, z. B. Benzyl oder p-Nitrobenzyl; weiter Aryl wie Phenyl oder schliesslich ein heterocyclischer Rest wie Furfuryl. Such monovalent amino protecting groups known per se, such as alkyloxycarbonyl, aralkyloxycarbonyl or aryloxycarbonyl, can be represented by a formula -CO-OR6, in which Rô is alkyl having 1 to 5 carbon atoms, such as ethyl, methyl, t-butyl and t-amyl, or cycloalkyl with 3 to 6 carbon atoms such as cyclopentyl or cyclohexyl. Furthermore aralkyl such as phenylalkyl, where the alkyl radical contains 1 to 4 carbon atoms, e.g. B. benzyl or p-nitrobenzyl; further aryl such as phenyl or finally a heterocyclic radical such as furfuryl.

Zur Herstellung des aminogeschützten 6'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B-Derivates IV dieser Art, worin die 6'-Aminogruppe und die 2/-Aminogruppe blockiert sind durch eine einwertige Aminoschutzgruppe der Formel -CO-ORfi, kann die ó'-N-MethyW^'-dideoxykanamyxin B (II) umgesetzt werden mit 2- bis 3-fach molaren Anteilen an einem Chlorformiat der Formel For the preparation of the amino-protected 6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B derivative IV of this type, in which the 6'-amino group and the 2 / amino group are blocked by a monovalent amino protecting group of the formula -CO-ORfi, the ó'-N-MethyW ^ '- dideoxykanamyxin B (II) can be reacted with 2 to 3 times molar proportions of a chloroformate of the formula

Cl-CO-ORe (VII) Cl-CO-ORe (VII)

oder einem p-Nitrophenylcarbonat der Formel or a p-nitrophenyl carbonate of the formula

P-NO2-C6H5-O-CO-OR6 (VII') P-NO2-C6H5-O-CO-OR6 (VII ')

oder einem N-Hydroxysuccinimidester der Formel or an N-hydroxysuccinimide ester of the formula

N-O-CO-ORe (Vn") N-O-CO-ORe (Vn ")

oder einem Azidof ormiat der Formel or an azido formate of the formula

N3-CO-OR6 (VII"') N3-CO-OR6 (VII "')

oder einem S-4,6-Dimethylpyrimid-2-ylthiocarbonat der Formel or an S-4,6-dimethylpyrimid-2-ylthiocarbonate of the formula

S-CO-OR S-CO-OR

worin Rö die vorgenannte Bedeutung aufweist und die Umsetzung stattfindet in einem geeigneten Lösungsmittel wie Wasser, Äthanol, Aceton, Dimethoxyäthan oder einem Gemisch davon, bei neutraler oder basischer Reaktion in an sich für die Peptidsynthese bekannter Art und Weise. Die derart erhaltenen Reaktionsprodukte bestehen aus einem Gemisch verschiedener aminogeschützter Derivate der Verbindung II, wobei der Hauptanteil ein aminogeschütztes Derivat ist, worin die ó'-Methylaminogruppe und die 2'-Aminogruppe vollständig blockiert sind durch die Schutzgruppe -CO-ORô und ein geringer Anteil an aminogeschützten Derivaten enthalten ist, in welchen nur die ó'-Methylaminogruppe blockiert ist. Neben geringen Anteilen an unerwünschten aminogeschützten Derivaten, worin die 1-Aminogruppe blockiert ist, zusammen mit den übrigen blockierten Aminogruppen. Wenn die Verbindung II umgesetzt wird mit den Acylierungsreagenzien VII, VII', VII" oder VII"', in im wesentlichen äquimolaren Anteilen, so steigert sich der Anteil am aminogeschützten Derivat, worin lediglich die ó'-Methylaminogruppe blockiert ist. wherein Rö has the abovementioned meaning and the reaction takes place in a suitable solvent such as water, ethanol, acetone, dimethoxyethane or a mixture thereof, in a neutral or basic reaction in a manner known per se for peptide synthesis. The reaction products obtained in this way consist of a mixture of various amino-protected derivatives of the compound II, the main part being an amino-protected derivative, in which the ó'-methylamino group and the 2'-amino group are completely blocked by the protective group -CO-ORô and a small proportion of Amino-protected derivatives are contained in which only the ó'-methylamino group is blocked. In addition to small amounts of undesired amino-protected derivatives, in which the 1-amino group is blocked, together with the other blocked amino groups. If the compound II is reacted with the acylation reagents VII, VII ', VII "or VII"', in essentially equimolar proportions, the proportion of the amino-protected derivative increases, in which only the ó'-methylamino group is blocked.

Die am meisten bevorzugten Aminoschutzgruppen sind die t-Butoxycarbonylgruppe und Benzyloxycarbonylgruppe, da sie befähigt sind zur Umsetzung vorzugsweise mit der ó'-Methylaminogruppe und gegebenenfalls mit der 2'-Aminogruppe der 6'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B-Verbindung II und in der Folge leicht abspaltbar sind aus den acylierten Derivaten VI, wie sie beim erfindungsgemässen Acylierungsschritt entstehen. The most preferred amino protecting groups are the t-butoxycarbonyl group and benzyloxycarbonyl group since they are capable of reacting preferably with the ó'-methylamino group and optionally with the 2'-amino group of the 6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B Compound II and subsequently easily cleavable from the acylated derivatives VI, as they arise in the acylation step according to the invention.

Zum Beispiel kann 2'-N-6'-di-t-Butoxycarbonyl-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycin B ein vorzugsweise verwendetes Ausgangsmaterial in guter Ausbeute erhalten werden durch Umsetzung von ó'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B in Lösung mit einem Gemisch von Pyridin, Wasser und Triäthyl-amin mit dem 2- bis 3-fach molaren Anteil an t-Butoxycarbo-nylazid, welches tropfenweise unter Schütteln hinzugefügt wird, Rühren des erhaltenen Gemisches bei Zimmertemperatur über Nacht, Einengen des Reaktionsgemisches zur Trockne im Vakuum und hernach Reinigen der festen Rückstände vermittels Säulenchromatographie oder alternativ durch Umsetzung von ó'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B in Form seiner wässrigen Lösung mit der 2- bis 3-fach molaren Menge an t-Butyl-S-4,6-dimethylpyrimid-2-yl-thiocarbonat, welches dazu unter Schütteln hinzugefügt wird, Rühren des erhaltenen Gemisches bei Zimmertemperatur über Nacht, Einengen des Reaktionsgemisches zur Trockne im Vakuum und Reinigen des erhaltenen Rückstandes durch Säulenchromatographie. Die Reinigung des dabei erhaltenen festen Rückstandes vermittels Säulenchromatographie kann durchgeführt werden unter Verwendung eines Kationaustauschharzes mit Carboxylfunktionen, z. B. einem Copolymeren aus Methacryl-säure mit Divinylbenzol, wie es beispielsweise bekannt ist als « Amberlite CG 50» (Ammoniumform, handelsüblich erhältlich von Röhm und Haas, USA). Der in vorgenannter Weise erhaltene feste Rückstand besteht im wesentlichen aus den erwünschten 2'-N,6'-N-di-t-Butoxycarbonyl-6'-N-methyl-3',4/-dideoxykanamycin B und ó'-N-mono-t-Butoxycarbonyl-ó'-N-methyl-3',4'dideoxykanamycin B und kann direkt als Ausgangsprodukt für den erfindungsgemässen Acylierungsschritt verwendet werden. For example, 2'-N-6'-di-t-butoxycarbonyl-6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B, a preferably used starting material can be obtained in good yield by reacting ó'-N-methyl -3 ', 4'-dideoxykanamycin B in solution with a mixture of pyridine, water and triethylamine with the 2 to 3 times molar fraction of t-butoxycarbo-nylazide, which is added dropwise with shaking, stirring the mixture obtained at room temperature overnight, concentrating the reaction mixture to dryness in vacuo and then cleaning the solid residues by means of column chromatography or alternatively by reacting ó'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B in the form of its aqueous solution with the 2- to 3-fold molar amount of t-butyl-S-4,6-dimethylpyrimid-2-yl-thiocarbonate, which is added with shaking, stirring the mixture obtained at room temperature overnight, concentrating the reaction mixture to dryness in vacuo and cleaning the received residue you by column chromatography. Purification of the solid residue obtained by means of column chromatography can be carried out using a cation exchange resin with carboxyl functions, e.g. B. a copolymer of methacrylic acid with divinylbenzene, as is known for example as "Amberlite CG 50" (ammonium form, commercially available from Röhm and Haas, USA). The solid residue obtained in the above manner consists essentially of the desired 2'-N, 6'-N-di-t-butoxycarbonyl-6'-N-methyl-3 ', 4 / -dideoxykanamycin B and ó'-N- mono-t-butoxycarbonyl-ó'-N-methyl-3 ', 4'dideoxykanamycin B and can be used directly as a starting product for the acylation step according to the invention.

In der a-Hydroxy-co-aminosäure V, welche als Acylierungs-reagens verwendet wird, kann die Aminoschutzgruppe R3 gleichfalls eine solche sein, wie sie üblicherweise bei der Peptidsynthese Anwendung findet. Vorzugsweise wird im Acylie-rungsreagens der Formel V die gleiche Aminoschutzgruppe verwendet, wie im als Ausgangsstoff gebrauchten, aminogeschützten 6'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B-Derivat IV. Die Herstellung des a-Hydroxy-co-aminosäurereagens V mit der blockierten Aminogruppe kann in gleicher Weise durchgeführt werden wie die Herstellung des aminogeschützten 6'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B-Derivates IV. Falls die Gruppen R3 und R4 zusammen eine zweiwertige Aminoschutz- In the a-hydroxy-co-amino acid V, which is used as the acylation reagent, the amino protective group R3 can likewise be one which is usually used in peptide synthesis. The same amino protecting group is preferably used in the acylation reagent of the formula V as in the amino-protected 6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B derivative IV used as the starting material. The preparation of the a-hydroxy-co-amino acid reagent V with the blocked amino group can be carried out in the same way as the preparation of the amino-protected 6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B derivative IV. If the groups R3 and R4 together form a divalent amino protective

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

11 11

615 685 615 685

grappe bilden, so kann es sich hierbei vorzugsweise um Phtha-loyl oder Salicyliden handeln oder allgemein gesprochen um einen Alkyliden- oder Arylidenrest der Formel = CHRs, worin Rs Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist, wie Methyl, Äthyl, Propyl, Isopropyl, Butyl oder Pentyl. In Frage kommt auch Aryl, wie Phenyl, Tolyl, p-Methoxyphenyl oder Hydroxyphe-nyl. Die Herstellung des a-Hydroxy-to-aminosäurereagens V, worin die co-Aminogruppe blockiert ist durch eine zweiwertige Aminoschutzgruppe der Formel = CHRs kann durchgeführt werden durch Alkylidenierung oder Arylidenierung der co-Aminogruppe, indem man das a-Hydroxy-co-aminosäurerea-gens V umsetzt mit einer im wesentlichen äquimolaren Menge eines Aldehyds der Formel VIII form grappe, it can preferably be phthaloyl or salicylidene or, generally speaking, an alkylidene or arylidene radical of the formula = CHRs, where Rs is alkyl having 1 to 6 carbon atoms, such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl or pentyl. Aryl, such as phenyl, tolyl, p-methoxyphenyl or hydroxyphenyl, is also suitable. The preparation of the a-hydroxy-to-amino acid reagent V, in which the co-amino group is blocked by a divalent amino protecting group of the formula = CHRs, can be carried out by alkylidenation or arylidination of the co-amino group by using the a-hydroxy-co-amino acid group. gene V reacts with an essentially equimolar amount of an aldehyde of the formula VIII

OHC-Rs (VIII) OHC-Rs (VIII)

in an sich bekannter Weise zur Herstellung von Schiff-Basen. R5 hat die oben angegebene Bedeutimg. Geeignete Aldehyde für diesen Zweck sind z. B. Acetaldehyd, Anisaldehyd, Tolual-dehyd, p-Nitrobenzaldehyd und Salicylaldehyd. in a manner known per se for the production of ship bases. R5 has the meaning given above. Suitable aldehydes for this purpose are e.g. B. acetaldehyde, anisaldehyde, tolual dehyde, p-nitrobenzaldehyde and salicylaldehyde.

Die a-Hydroxy-oa-aminosäure-Verbindung V, wie sie im vorliegenden Verfahren verwendet wird, kann entweder in Form des racemischen Gemisches oder in optisch aktiver Form vorliegen, wie dem L-Isomeren und dem D-Isomeren. Indessen ist vorzuziehen, dass die a-Hydroxy-y-aminobuttersäure, eine Verbindung der Formel III, worin n = 2 ist, und die a-Hydroxy-ö-aminovaleriansäure, eine Verbindung der Formel III, worin n = 3 ist, Verwendung findet in Form des optisch aktiven L-Isomeren, da das hierbei entstandene Produkt höhere antibakterielle Wirksamkeit aufweist als das aus dem D-Isomeren abgeleitete Endprodukt. The a-hydroxy-oa-amino acid compound V, as used in the present process, can either be in the form of the racemic mixture or in optically active form, such as the L-isomer and the D-isomer. Meanwhile, it is preferable that the a-hydroxy-y-aminobutyric acid, a compound of the formula III, wherein n = 2, and the a-hydroxy-ö-aminovaleric acid, a compound of the formula III, where n = 3 are used in the form of the optically active L-isomer, since the resulting product has a higher antibacterial activity than the end product derived from the D-isomer.

Im erfindungsgemässen Acylierungsschritt kann das Amino-geschützte ó'-N-Methyl-S'^'-dideoxykanamycin B-Derivat IV mit dem a-Hydroxy-co-aminosäurereagens V in an sich bekannter, zur Herstellung von Amiden, üblicher Weise umgesetzt werden. Demgemäss kann die Ausgangsverbindung IV umgesetzt werden mit dem Acylierungsreagens V in Lösung von wasserfreiem Dimethylformamid, Aceton oder Tetrahy-drofuran unter Eiskühlung und in Gegenwart eines Entwässerungsmittels, wie Dicyclohexylcarbodiimid. Selbstverständlich kann das a-Hydroxy-co-aminosäurereagens V gleichfalls angewendet werden in Form eines funktionellen Derivats, wie dem Säurechlorid, dem Mischanhydrid, einem aktiven Ester oder einem Azidderivat davon. Zum Beispiel kann das a-Hydroxy-co-aminosäurereagens V zuerst umgesetzt werden mit n-Hydrosuccinimid in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid als Entwässerungsmitte], wobei zunächst der aktive Ester der Formel V' entsteht In the acylation step according to the invention, the amino-protected ó'-N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B derivative IV can be reacted with the a-hydroxy-co-amino acid reagent V in a conventional manner known per se for the preparation of amides. Accordingly, the starting compound IV can be reacted with the acylating reagent V in solution of anhydrous dimethylformamide, acetone or tetrahydrofuran with ice cooling and in the presence of a dewatering agent such as dicyclohexylcarbodiimide. Of course, the a-hydroxy-co-amino acid reagent V can also be used in the form of a functional derivative such as the acid chloride, the mixed anhydride, an active ester or an azide derivative thereof. For example, the a-hydroxy-co-amino acid reagent V can first be reacted with n-hydrosuccinimide in the presence of dicyclohexylcarbodiimide as a dewatering agent], the active ester of the formula V 'initially being formed

^r3 ^ r3

N-00C-CH(0H)-(CH2) NT N-00C-CH (0H) - (CH2) NT

x,0 X <*•> x, 0 X <* •>

Diese Verbindung wird hernach umgesetzt mit dem Ausgangsprodukt IV zur N-Acylierung der letzteren Verbindung. Dabei ist vorzuziehen, dass die Ausgangsverbindung IV umgesetzt wird mit einem 0,5- bis 3-fachen molaren Anteil und vorzugsweise mit dem 0,5- bis 172-fachen molaren Anteil des aktiven Esters der a-Hydroxy-aminosäure-Verbindung V' in einem Reaktionsmedium, welches aus Wasser und einem organischen Lösungsmittel wie Dimethoxyäthan besteht. This compound is then reacted with the starting product IV for the N-acylation of the latter compound. It is preferable that the starting compound IV is reacted with a 0.5- to 3-fold molar fraction and preferably with a 0.5- to 172-fold molar fraction of the active ester of the a-hydroxyamino acid compound V 'in a reaction medium consisting of water and an organic solvent such as dimethoxyethane.

Beim erfindungsgemässen Acylierungsschritt entsteht in der Regel ein Gemisch von gemischten N-acylierten Derivaten der Ausgangsverbindung IV. Dieses Gemisch enthält in der Regel ein Gemenge des erwünschten 1-N-mono-acylierten Derivates und anderer unerwünschter mono-N-acylierter Derivate sowie unerwünschter poly-N-acylierter Derivate. Das so erhaltene Gemisch kann direkt behandelt werden zur Entfernung aller Aminoschutzgruppen daraus, d. h. zur Umwandlung der verbliebenen Aminoschutzgruppen in Wasserstoffatome. Die Abspaltung der Aminoschutzgruppen aus den vorerwähnten gemischten N-acylierten Derivaten, wie sie beim Acylierungsschritt entstanden sind, kann auf die nachfolgenden verschiedenen, an sich bekannten Arten, erfolgen. Falls die Aminoschutzgruppe ein Alkyloxycarbonylrest wie t-Butoxycarbonyl, Cycloalkyloxycarbonyl, Aryloxycarbonyl, Alkyliden oder Aryliden ist, so kann die Abspaltung von Aminoschutzgruppen dieser Art erfolgen, indem man die gemischten N-acylierten Derivate einer milden Hydrolyse unterwirft, wie z. B. mit wässriger Trifluoressigsäure, wässriger Essigsäure oder verdünnter Salzsäure. Falls die Aminoschutzgruppe Aralkyloxy-carbonyl ist, wie z. B. Benzyloxycarbonyl, so kann die Abspaltung dieser Art Aminoschutzgruppen durchgeführt werden, indem man die gemischten N-acylierten Derivate einer Hydrierung in Gegenwart von Palladium-Kohle oder Platinschwarz als Katalysator unterwirft, oder indem man eine Behandlung mit Bromwasserstoff in Essigsäure bei niedriger Temperatur durchführt. Die o-Nitrophenoxyacetylamino-Schutzgruppe kann entfernt werden durch Reduktion. Falls die Aminoschutzgruppe Phthaloyl ist, so kann die Phthaloylgruppe abgespalten werden durch Behandlung der gemischten N-acylierten Derivate mit Hydrazinhydrat in Äthanol. Falls die N-acylierten Derivate verschiedene Arten von Aminoschutzgruppen enthalten, so können die N-acylierten Derivate gleichzeitig oder nacheinander verschiedenen Behandlungen zur Abspaltung der verschiedenen Aminoschutzgruppen daraus unterworfen werden. In the acylation step according to the invention, a mixture of mixed N-acylated derivatives of the starting compound IV is generally formed. This mixture generally contains a mixture of the desired 1-N-mono-acylated derivative and other undesired mono-N-acylated derivatives and undesired poly- N-acylated derivatives. The mixture thus obtained can be treated directly to remove all amino protecting groups therefrom, i.e. H. to convert the remaining amino protecting groups into hydrogen atoms. The amino protective groups can be split off from the aforementioned mixed N-acylated derivatives, such as those formed in the acylation step, in the following various ways known per se. If the amino protecting group is an alkyloxycarbonyl radical such as t-butoxycarbonyl, cycloalkyloxycarbonyl, aryloxycarbonyl, alkylidene or arylidene, amino protecting groups of this type can be split off by subjecting the mixed N-acylated derivatives to mild hydrolysis, e.g. B. with aqueous trifluoroacetic acid, aqueous acetic acid or dilute hydrochloric acid. If the amino protecting group is aralkyloxy-carbonyl, such as. B. benzyloxycarbonyl, the cleavage of this type of amino protecting groups can be carried out by subjecting the mixed N-acylated derivatives to hydrogenation in the presence of palladium-carbon or platinum black as a catalyst, or by carrying out a treatment with hydrogen bromide in acetic acid at low temperature. The o-nitrophenoxyacetylamino protecting group can be removed by reduction. If the amino protecting group is phthaloyl, the phthaloyl group can be split off by treating the mixed N-acylated derivatives with hydrazine hydrate in ethanol. If the N-acylated derivatives contain different types of amino protective groups, the N-acylated derivatives can be subjected to different treatments simultaneously or in succession to split off the different amino protective groups.

Die Abspaltung der verbliebenen Aminoschutzgruppen ergibt ein Gemisch aus den verschiedenen N-acylierten Produkten, entstanden aus ó'-N-Methyl-S'^'-dideoxykanamycin B. Dieses Gemisch besteht aus dem erwünschten Endprodukt l-N-(a-Hydroxy-co-aminoalkanoyl)-6/-N-methyl-3/,4'-dide-oxykanamycin B der Formel I, seinen Stellungsisomeren und den poly-N-acylierten Produkten, zusammen mit einem Anteil nicht umgesetzten ó'-N-Methyl-S'^'-dideoxykanamycin B. Die Abtrennung des erwünschten Endproduktes der Formel I lässt sich wirkungsvoll durchführen, indem man das Gemisch der Säulenchromatographie unterwirft, z. B. am Silicagel oder einem Kationenaustauschharz mit Carboxylfunktionen, wie z. B. «Amberlite IRC 50» oder «Amberlite CG 50» (Produkte von Röhm & Haas USA), einem schwachen Kationenaustauscher, wie z. B. «CM-Cephadex C-25» (ein Produkt der Pharmacia Schweden) oder Carboxymethylcellulose. Dabei wird das Eluat aus dem chromatographischen Verfahren in einzelnen Fraktionen gesammelt, deren antibakterielle Aktivität bestimmt wird unter Verwendung empfindlicher und resistenter Bakterien als Testmikroorganismen. Durch die Bestimmung der antibakteriellen Aktivität jeder Fraktion ist es verhältnismässig einfach, die aktiven Fraktionen zu erhalten, The cleavage of the remaining amino protecting groups results in a mixture of the various N-acylated products, formed from ó'-N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B. This mixture consists of the desired end product IN (a-hydroxy-co-aminoalkanoyl ) -6 / -N-methyl-3 /, 4'-dide-oxykanamycin B of formula I, its positional isomers and the poly-N-acylated products, together with a portion of unreacted ó'-N-methyl-S '^ '-Dideoxykanamycin B. The separation of the desired end product of formula I can be carried out effectively by subjecting the mixture to column chromatography, e.g. B. on silica gel or a cation exchange resin with carboxyl functions, such as. B. "Amberlite IRC 50" or "Amberlite CG 50" (products from Röhm & Haas USA), a weak cation exchanger, such as. B. "CM-Cephadex C-25" (a product of Pharmacia Sweden) or carboxymethyl cellulose. The eluate from the chromatographic process is collected in individual fractions, the antibacterial activity of which is determined using sensitive and resistant bacteria as test microorganisms. By determining the antibacterial activity of each fraction, it is relatively easy to get the active fractions

worin die erwünschte Verbindung der Formel I ist. Ein Anteil dieser aktiven Fraktionen wurde der Dünnschichtchromatographie an Silicagel unterworfen, wobei als Lösungsmittelsystem z. B. ein Gemisch aus Butanol-Äthanol-Chloroform-17% wässrigem Ammoniak verwendet wurde. Auf diese Weise war es möglich, diejenigen Fraktionen zu bestimmen, welche einen einzigen Fleck mit dem spezifischen Rf-Wert des erwünschten l-N-(a-Hydroxy-to-aminoalkanoyl)-6/-N-methyl-3/,4/-dide-oxykanamycin B der Formel I ergaben und damit das erwünschte Produkt zu isolieren. Diese Fraktionen können vereinigt werden und nachfolgend zur Trockne konzentriert unter vermindertem Druck, wobei die erwünschte Verbindung I erhalten wird. wherein is the desired compound of formula I. A portion of these active fractions was subjected to thin layer chromatography on silica gel, with z. B. a mixture of butanol-ethanol-chloroform-17% aqueous ammonia was used. In this way it was possible to determine those fractions which had a single spot with the specific Rf value of the desired lN- (a-hydroxy-to-aminoalkanoyl) -6 / -N-methyl-3 /, 4 / -dide -oxykanamycin B of formula I and thus isolate the desired product. These fractions can be combined and then concentrated to dryness under reduced pressure to give the desired Compound I.

s s

10 10th

IS IS

20 20th

25 25th

3» 3 »

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

615 685 615 685

12 12

Beispiel 1 example 1

Herstellung von l-N-(L-4-Amino-2-hydroxybutyryl)-6M^-methyl-3^4'-dideoxykanamycin B (eine Verbindung der Formel I, worin n = 2 ist) Preparation of l-N- (L-4-Amino-2-hydroxybutyryl) -6M ^ -methyl-3 ^ 4'-dideoxykanamycin B (a compound of formula I, wherein n = 2)

(a) Zu einer Lösung von 930 mg = 2 mMol ö'-N-Methyl-S'^'-dideoxykanamycin B in 5 ml Wasser wurde eine Lösung von 960 mg (4 mMol) t-Butyl-S-4,6-dimethylpyrimid-2-ylthio-carbonat in 5 ml Dioxan hinzugefügt. Das Gemisch wurde über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt, um die t-Butoxy-carbonylierung durchzuführen. Nachher wurde das Reaktionsgemisch zur Trockne unter vermindertem Druck eingeengt und ergab einen festen Rückstand. Dieser Rückstand wurde aufgenommen in 40 ml Wasser und der unlösliche Anteil abfiltriert. Das Filtrat wurde durch eine Säule (20 X 290 mm) von 100 ml Kationenaustauschharz «Amberlite CG 50» (NHt-Form) durchlaufen gelassen zwecks Adsorption des t-Butoxycarbony-lierungsproduktes am Harz. Die Harzsäule wurde gewaschen mit 500 ml Wasser und hernach eluiert mit 0,1-n wässrigem Ammoniak. Diejenigen Fraktionen des Eluates, welche positive Ninhydrinreaktion bzw. Rydon-Smith-Reaktion ergaben und die gleichfalls einen Hauptfleck mit dem Rf-Wert 0,60 bei der Dünnschichtchromatographie an Silicagel unter Verwendung von Butanol-Äthanol-Chloroform-17%igem Ammoniak (4:5:2:3 Volumteile) zeigten, wurden miteinander vereinigt und zur Trockne unter vermindertem Druck eingeengt. Dabei wurden 538 mg eines farblosen, zur Hauptsache aus 2'-N-6'-N-di-t-Butoxycarbonyl-ö'-N-methyl-S'^'-dideoxykanamycin B bestehenden Pulvers erhalten. Ausbeute 41%. (a) To a solution of 930 mg = 2 mmol of ö'-N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B in 5 ml of water was added a solution of 960 mg (4 mmol) of t-butyl-S-4,6- Dimethylpyrimid-2-ylthio-carbonate in 5 ml of dioxane added. The mixture was stirred at room temperature overnight to carry out the t-butoxy carbonylation. The reaction mixture was then concentrated to dryness under reduced pressure to give a solid residue. This residue was taken up in 40 ml of water and the insoluble fraction was filtered off. The filtrate was passed through a column (20 × 290 mm) of 100 ml of cation exchange resin “Amberlite CG 50” (NHt form) in order to adsorb the t-butoxycarbonylation product on the resin. The resin column was washed with 500 ml of water and then eluted with 0.1N aqueous ammonia. Those fractions of the eluate which gave positive ninhydrin reaction or Rydon-Smith reaction and which likewise have a main spot with an Rf value of 0.60 in thin-layer chromatography on silica gel using butanol-ethanol-chloroform-17% ammonia (4: 5: 2: 3 parts by volume), were combined and evaporated to dryness under reduced pressure. 538 mg of a colorless powder consisting mainly of 2'-N-6'-N-di-t-butoxycarbonyl-ö'-N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B were obtained. Yield 41%.

b) 100 mg dieses farblosen Pulvers, entsprechend 0,15 mMol, wurden aufgelöst in einem Gemisch von 1 ml Wasser und 1 ml Dimethoxyäthan und die erhaltene Lösung hinzugefügt zu einer Lösung von 54 mg, entsprechend 0,17 mMol, N-Hydroxysuccinimidester der L-4-t-Butoxycarbonylamido-2-hydroxybuttersäure in 2 ml Dimethoxymethan. Das Gemisch wurde 22 Stunden lang bei Zimmertemperatur gerührt zwecks Durchführung der Acylierung des aminogeschützten 6'-N-Methyl-S'^'-dideoxykanamycin B. Anschliessend wurde das Reaktionsgemisch zur Trockne unter vermindertem Druck eingedampft und ergab einen festen Rückstand, welcher aus den gemischten N-acylierten Derivaten des N-geschützten 6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycin B bestand. b) 100 mg of this colorless powder, corresponding to 0.15 mmol, were dissolved in a mixture of 1 ml water and 1 ml dimethoxyethane and the solution obtained was added to a solution of 54 mg, corresponding to 0.17 mmol, N-hydroxysuccinimide ester of L -4-t-butoxycarbonylamido-2-hydroxybutyric acid in 2 ml of dimethoxymethane. The mixture was stirred at room temperature for 22 hours to perform acylation of the amino-protected 6'-N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B. Then the reaction mixture was evaporated to dryness under reduced pressure to give a solid residue, which from the mixed N-acylated derivatives of the N-protected 6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B existed.

(c) Der feste Rückstand aus dem Verfahrensschritt (b) (c) The solid residue from process step (b)

wurde aufgelöst in 2,4 ml wässriger Trifluoressigsäure und die Lösung eine Stunde lang bei Zimmertemperatur stehen gelassen, zwecks Abspaltung der t-Butoxycarbonylgruppe. Das Reaktionsgemisch wurde hernach zur Trockne unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand aufgenommen in 4 ml Wasser. Die Lösung wurde durch Zugabe von konzentriertem wässrigem Ammoniak auf pH 8 eingestellt und anschliessend durchlaufen gelassen durch eine Säule (8 X 400 mm) aus 20 ml Kationaustauschharz «Amberlite CG 50» (NHt-Form) zur Adsorption des gemischten N-acylierten ó'-N-methyl-S'^'-dideoxykanamycin B am Harz. Nachher wurde die Harzsäule nacheinander gewaschen mit 100 ml Wasser, mit 100 ml 0,3-n wässrigem Ammoniak und mit 0,5-n wässrigem Ammoniak. Schliesslich wurde die Harzsäule eluiert mit 0,75-n wässrigem Ammoniak. Das Eluat wurde gesammelt in 2 ml-Fraktionen, wobei jede Fraktion getestet wurde mit einem üblichen Plattentest auf ihre antibakterielle Wirksamkeit gegenüber kanamycinempfindlichem Bacillus subtilis PCI 219 und kanamycinresistentem Escherichia coli JR66/W677. Diejenigen Fraktionen, welche hohe antibakterielle Wirksamkeit gegenüber beiden der vorgenannten Stämme aufweisen, wurden miteinander auf ein Volumen von 26 ml vereinigt und hernach zur Trockne eingeengt. Erhalten wurden dabei 39 mg eines farblosen Pulvers, welches zur Hauptsache aus dem erwünschten l-N-(L-4-Amino-2-hydroxybutyryl)-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycin B bestand. Zur weiteren Reinigung wurde dieses farblose Pulver aufgelöst in 0,5 ml Methanol-Chloroform-17%igem wässrigem Ammoniak (4:1:2 Volumteile) und die erhaltene Lösung der Säulenchromatographie an 3 g Silicagel unter Verwendung des gleichen Lösungs-mittelgemisches als Eluierlösung unterworfen. Das Eluat wurde gesammelt in 1 ml-Fraktionen und die Fraktionen Nr. 46 bis 78 enthielten dabei das l-N-(L-4-Amino-2-hydroxybu-tyryty-ö'-N-methyl-S'^'dideoxykanamycin B. Diese Substanz ergab einen einzelnen Flecken mit dem Rf-Wert 0,38 bei der Dünnschichtchromatographie an Silicagel («ART» 5721) was dissolved in 2.4 ml of aqueous trifluoroacetic acid and the solution was left to stand at room temperature for one hour to remove the t-butoxycarbonyl group. The reaction mixture was then evaporated to dryness under reduced pressure and the residue taken up in 4 ml of water. The solution was adjusted to pH 8 by adding concentrated aqueous ammonia and then passed through a column (8 × 400 mm) made of 20 ml cation exchange resin “Amberlite CG 50” (NHt form) for adsorption of the mixed N-acylated ó'- N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B on resin. The resin column was then washed successively with 100 ml of water, with 100 ml of 0.3N aqueous ammonia and with 0.5N aqueous ammonia. Finally the resin column was eluted with 0.75N aqueous ammonia. The eluate was collected in 2 ml fractions, each fraction being tested for antibacterial activity against kanamycin sensitive Bacillus subtilis PCI 219 and kanamycin resistant Escherichia coli JR66 / W677 using a standard plate test. Those fractions which have a high antibacterial activity against both of the aforementioned strains were combined with one another to a volume of 26 ml and then evaporated to dryness. 39 mg of a colorless powder were obtained, which mainly consisted of the desired l-N- (L-4-amino-2-hydroxybutyryl) -6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B. For further purification, this colorless powder was dissolved in 0.5 ml of methanol-chloroform-17% aqueous ammonia (4: 1: 2 parts by volume) and the solution obtained was subjected to column chromatography on 3 g of silica gel using the same solvent mixture as the eluting solution . The eluate was collected in 1 ml fractions and fractions no. 46 to 78 contained the IN- (L-4-amino-2-hydroxybu-tyryty-ö'-N-methyl-S '^' dideoxykanamycin B. This Substance resulted in a single spot with an Rf value of 0.38 on thin layer chromatography on silica gel («ART» 5721)

unter Verwendung von Butanol-Äthanol-Chloroform-28%igem wässrigem Ammoniak (4:5:2:8 Volumteile) als Elu-iermittel. Diese Fraktionen wurden miteinander vereinigt und zur Trockne eingeengt. Erhalten wurden dabei 15 mg reines 1-N-(L-4-Amino-2-hydroxybutyryl)-6'-N-methyl-3',4'-dideoxy-kanamycin B als farbloses Pulver. Zersetzungstemperatur 158 bis 161°C. using butanol-ethanol-chloroform-28% aqueous ammonia (4: 5: 2: 8 parts by volume) as the eluent. These fractions were combined and evaporated to dryness. 15 mg of pure 1-N- (L-4-amino-2-hydroxybutyryl) -6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxy-kanamycin B were obtained as a colorless powder. Decomposition temperature 158 to 161 ° C.

Beispiel 2 Example 2

Herstellung von l-N-(DL-Isoseryl)-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycin B (eine Verbindung der Formel I, worin n = 1 ist) Preparation of l-N- (DL-isoseryl) -6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B (a compound of formula I, wherein n = 1)

(a) 403 mg des farblosen Pulvers, zur Hauptsache bestehend aus 2'-N-6'-di-t-Butoxycarbonyl-6'-N-methyl-3',4'-dideoxyka-namycin B (0,6 mMol), erhalten gemäss Beispiel 1 (a), wurden aufgelöst in einem Gemisch von 4 ml Wasser und 4 ml Dimethoxyäthan. Die so erhaltene Lösung wurde vermischt mit einer Lösung von 221 mg (0,66 mMol) des N-Hydroxysuc-cinimidesters von N-t-Butoxycarbonyl-DL-isoserin in 8 ml Dimethoxyäthan. Das Gemisch wurde 23V2 Stunden lang bei Zimmertemperatur gerührt zwecks Ausführung der Acylierung. Dann wurde das Reaktionsgemenge unter vermindertem Druck zur Trockne eingeengt, wobei eine feste Substanz zurückblieb, die zur Hauptsache aus den gemischten N-acylierten Derivaten von 2'-N-6'-N-di-t-Butoxycarbonyl-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycin B bestand. (a) 403 mg of the colorless powder, mainly consisting of 2'-N-6'-di-t-butoxycarbonyl-6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxyka-namycin B (0.6 mmol) , obtained according to Example 1 (a), were dissolved in a mixture of 4 ml of water and 4 ml of dimethoxyethane. The solution thus obtained was mixed with a solution of 221 mg (0.66 mmol) of the N-hydroxysuc-cinimide ester of N-t-butoxycarbonyl-DL-isoserine in 8 ml of dimethoxyethane. The mixture was stirred at room temperature for 23½ hours to carry out the acylation. Then the reaction mixture was evaporated to dryness under reduced pressure, leaving a solid substance mainly consisting of the mixed N-acylated derivatives of 2'-N-6'-N-di-t-butoxycarbonyl-6'-N-methyl -3 ', 4'-dideoxykanamycin B existed.

(b) Der so erhaltene feste Rückstand wurde aufgelöst in 7,5 ml wässriger Trifluoressigsäure und die Lösung eine Stunde lang bei Zimmertemperatur zur Abspaltung der t-Butoxycarbonylgruppe stehen gelassen. Dann wurde das Reaktionsgemenge unter vermindertem Druck zur Trockne eingeengt und der Rückstand aufgelöst in 16 ml Wasser. Die so erhaltene wässrige Lösung wurde mit konzentriertem Ammoniak auf den pH-Wert 8 gebracht und hierauf aufgebracht auf eine Säule von 43 ml Kationaustauschharz (10X560 mm) «Amberlite CG 50» (NH4-Form) zur Adsorption des gemischten N-acylierten Produktes. Nim wurde die Harzsäule gewaschen mit 200 ml Wasser und dann mit 400 ml 0,3-n wässrigem Ammoniak und schliesslich eluiert mit 0,5-n wässrigem Ammoniak. Das Eluat wurde gesammelt in 4 ml-Fraktionen, wobei jede Fraktion nach einer üblichen Plattenmethode getestet wurde auf ihre antibakterielle Aktivität gegenüber Bacillus subtilis PCI 219 und Escherichia coli JR66/ W677. Diejenigen Fraktionen, welche hohe antibakterielle Aktivität gegenüber diesen beiden Stämmen zeigten, wurden miteinander vereinigt auf ein Volumen von 100 ml und hernach zur Trockne eingedampft. Dabei blieben 135 mg eines farblosen Pulvers zurück, welches hauptsächlich aus dem erwünschten Produkt l-N-(DL-Isoseryl)-6'-N-methyl-3',4/-dideoxykanamycin B bestand. Zur weiteren Reinigung wurde dieses farblose Pulver aufgelöst in 2,6 ml Methanol-Chloro-form-17%igem wässrigem Ammoniak (4:1:2 Volumteile) und die erhaltene Lösung der Säulenchromatographie an 8 g Silicagel unterworfen unter Verwendung des gleichen Lösungsmittelgemisches als Buiermittel. Das Éluat wurde gesammelt in (b) The solid residue thus obtained was dissolved in 7.5 ml of aqueous trifluoroacetic acid and the solution was left for one hour at room temperature to split off the t-butoxycarbonyl group. Then the reaction mixture was evaporated to dryness under reduced pressure and the residue dissolved in 16 ml of water. The aqueous solution thus obtained was brought to pH 8 with concentrated ammonia and then applied to a column of 43 ml of cation exchange resin (10 × 560 mm) “Amberlite CG 50” (NH4 form) for adsorption of the mixed N-acylated product. The resin column was then washed with 200 ml of water and then with 400 ml of 0.3N aqueous ammonia and finally eluted with 0.5N aqueous ammonia. The eluate was collected in 4 ml fractions, each fraction being tested for its antibacterial activity against Bacillus subtilis PCI 219 and Escherichia coli JR66 / W677 using a conventional plate method. Those fractions that showed high antibacterial activity against these two strains were pooled together to a volume of 100 ml and then evaporated to dryness. This left 135 mg of a colorless powder, which mainly consisted of the desired product l-N- (DL-isoseryl) -6'-N-methyl-3 ', 4 / -dideoxykanamycin B. For further purification, this colorless powder was dissolved in 2.6 ml of methanol-chloroform-17% aqueous ammonia (4: 1: 2 parts by volume) and the solution obtained was subjected to column chromatography on 8 g of silica gel using the same solvent mixture as builder . The Éluat was collected in

2 ml-Fraktionen, wobei die Fraktionen Nr. 20 bis 27 offensichtlich das gewünschte Produkt allein enthielten. Dieses Produkt ergab einen einzelnen Fleck mit dem Rf-Wert 0,51 bei der Dünnschichtchromatographie an Silicagel («ART» 2 ml fractions, fractions 20 to 27 apparently containing the desired product alone. This product resulted in a single spot with an Rf value of 0.51 on thin layer chromatography on silica gel («ART»

s s

10 10th

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20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

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SS SS

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65 65

13 13

615 685 615 685

5721) unter Verwendung von Butanol-Äthanol-Chloroform-28 %igem Ammoniak (4:5:2:8 Volumteile) als Eluiermittel. 5721) using butanol-ethanol-chloroform-28% ammonia (4: 5: 2: 8 parts by volume) as the eluent.

Diese Fraktionen wurden vereinigt und zur Trockne eingeengt. Sie ergaben 38 mg reines l-N-(DL-Isoseryl)-6'-N-methyl-S'^'-dideoxykanamycin B als farbloses Pulver. Zersetzungs- s temperarur 165 bis 169°C. These fractions were pooled and evaporated to dryness. They gave 38 mg of pure 1-N- (DL-isoseryl) -6'-N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B as a colorless powder. Decomposition temperature 165 to 169 ° C.

Beispiel 3 Example 3

Herstellung von l-N-(L-Isoseryl)-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycin B (eine Verbindung der Formel I, w worin n = 1 ist) Preparation of l-N- (L-isoseryl) -6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B (a compound of formula I, where n = 1)

(a) 465 mg = 3,2 mMol t-Butoxycarbonylazid wurden hinzugefügt zu einer Lösung von 500 mg = 1,1 mMol 6'-N-Methyl-3 ',4'-dideoxykanamycin B in einem Gemisch von (a) 465 mg = 3.2 mmol t-butoxycarbonyl azide was added to a solution of 500 mg = 1.1 mmol 6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B in a mixture of

21 ml Pyridin, 21 ml Triäthylamin und 12,6 ml Wasser. Das is Gemisch wurde über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt zwecks Durchführung der t-Butoxycarbonylierung. Dann wurde das Reaktionsgemisch zur Trockne unter vermindertem Druck eingeengt und ergab 727 mg eines farblosen Pulvers, welches zur Hauptsache eine Mischung von 2/-N-6/-N-di-t- m Butoxycarbonyl- 6 ' -N-methyl-3 ' ,4 ' -dideoxykanamycin B und 6 ' -N-t-Butoxycarbonyl-6 ' -N-methyl- 3 ' ,4 ' -dideoxykanamycin B darstellte. 21 ml pyridine, 21 ml triethylamine and 12.6 ml water. The mixture was stirred at room temperature overnight to carry out t-butoxycarbonylation. Then the reaction mixture was concentrated to dryness under reduced pressure to give 727 mg of a colorless powder, which was mainly a mixture of 2 / -N-6 / -N-di-t-m butoxycarbonyl-6 '-N-methyl-3' , 4 '-dideoxykanamycin B and 6' -Nt-butoxycarbonyl-6 '-N-methyl-3', 4 '-dideoxykanamycin B.

(b) 510 mg des so erhaltenen farblosen Pulvers, bestehend zur Hauptsache aus den aminogeschützten Derivaten von 6'- 25 N-MethyW^'-dideoxykanamycin B wurden ohne weitere Reinigung aufgelöst in einem Gemisch von 5 ml Wasser und 5 ml Dimethoxyäthan. Zur erhaltenen Lösung wurden 254 mg = 0,84 mMol des N-Hydroxysuccinimidesters von N-t-Butoxy-carbonyl-L-isoserin in 10 ml Dimethoxyäthan hinzugegeben. 30 Dieses Gemisch wurde 19 Stunden lang bei Zimmertemperatur gerührt zur Durchführung der Acylierung. Das Reaktionsgemenge wurde hernach unter vermindertem Druck zur Trockne eingeengt und ergab 794 mg eines festen Rückstandes, bestehend aus den gemischten N-acylierten Derivaten von 35 2'-N-6'-N-di-t-Butoxycarbonyl- und 6'-N-t-Butoxycarbonyl-6'-N-methyl-3 ',4'-dideoxykanamycin B. (b) 510 mg of the colorless powder thus obtained, consisting mainly of the amino-protected derivatives of 6'- 25 N-methyW ^ '- dideoxykanamycin B, were dissolved in a mixture of 5 ml of water and 5 ml of dimethoxyethane without further purification. 254 mg = 0.84 mmol of the N-hydroxysuccinimide ester of N-t-butoxycarbonyl-L-isoserine in 10 ml of dimethoxyethane were added to the solution obtained. 30 This mixture was stirred at room temperature for 19 hours to carry out the acylation. The reaction mixture was then evaporated to dryness under reduced pressure to give 794 mg of a solid residue consisting of the mixed N-acylated derivatives of 35 2'-N-6'-N-di-t-butoxycarbonyl- and 6'-Nt- Butoxycarbonyl-6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B.

(c) Der erhaltene feste Rückstand wurde behandelt mit wässriger Trifluoressigsäure zur Abspaltung der t-Butoxycar-bonylgruppe und hernach einer Reinigung unterworfen vermit- 40 tels Säulenchromatographie mit «Amberlite CG 50» und anschliessend einer Reinigung vermittels Säulenchromatographie an Silicagel in gleicher Weise wie in Beispiel 2 (b). Mit einer Ausbeute von 34 g wurde reines 1 -N-(L-Isoseryl)-6'-N-methyl-SVt'-dideoxykanamycin B als farbloses Pulver erhalten. 45 (c) The solid residue obtained was treated with aqueous trifluoroacetic acid to split off the t-butoxycarbonyl group and then subjected to purification by means of column chromatography using “Amberlite CG 50” and then purification by means of column chromatography on silica gel in the same manner as in Example 2 B). Pure 1 -N- (L-isoseryl) -6'-N-methyl-SVt'-dideoxykanamycin B was obtained as a colorless powder with a yield of 34 g. 45

Zersetungstemperatur 162 bis 166°C. Decomposition temperature 162 to 166 ° C.

Beispiel 4 Example 4

Herstellung von l-N-(L-5-Amino-2-hydroxyvaleryl)- Preparation of l-N- (L-5-Amino-2-hydroxyvaleryl) -

ó'-N-methyl-S'^'-dideoxykanamycin B (eine Verbindung der Formel I, worin n = 3 ist. ó'-N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B (a compound of formula I, wherein n = 3.

(a) 500 mg des farblosen Pulvers, bestehend zur Hauptsache aus einem Gemisch von 2/-N-6'-N-di-t-Butoxycarbonyl-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycinB und 6'-N-t-Butoxycarbonyl-ó'-N-methyW^'-dideoxykanamycin B, hergestellt gemäss Beispiel 3 (a), wurde ohne weitere Reinigung aufgelöst in einem Gemenge von 5 ml Wasser und 5 ml Dimethoxyäthan. Zur erhaltenen Lösung wurde eine Lösung von 278 mg = 0,84 mMol des N-Hydroxysuccinimidesters von L-5-t-Butoxycarbo-nylamido-2-hydroxyvaleriansäure in 10 ml Dimethoxyäthan hinzugefügt. Das Gemenge wurde 18 Stunden lang bei Zimmertemperatur gerührt zur Ausführung der Acylierung. Dann wurde das Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck zur Trockne eingeengt und ergab 834 mg festen Rückstand, bestehend aus den gemischten N-acylierten Derivaten des 2/-N-6/-N-di-t-Butoxycarbonyl- und ó'-N-t-Butoxycarbonyl-ó'-N-methyl-S'^'-dideoxykanamycin B. (a) 500 mg of the colorless powder consisting mainly of a mixture of 2 / -N-6'-N-di-t-butoxycarbonyl-6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B and 6'- Nt-butoxycarbonyl-ó'-N-methyW ^ '- dideoxykanamycin B, prepared according to Example 3 (a), was dissolved in a mixture of 5 ml of water and 5 ml of dimethoxyethane without further purification. A solution of 278 mg = 0.84 mmol of the N-hydroxysuccinimide ester of L-5-t-butoxycarbonylamido-2-hydroxyvaleric acid in 10 ml of dimethoxyethane was added to the solution obtained. The batch was stirred at room temperature for 18 hours to carry out the acylation. The reaction mixture was then evaporated to dryness under reduced pressure to give 834 mg of solid residue consisting of the mixed N-acylated derivatives of 2 / -N-6 / -N-di-t-butoxycarbonyl- and ó'-Nt-butoxycarbonyl- ó'-N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B.

(b) Der erhaltene feste Rückstand wurde aufgelöst in 8 ml wässriger Trifluoressigsäure und die Lösung eine Stunde lang bei Zimmertemperatur stehen gelassen zwecks Abspaltung der t-Butoxycarbonylgruppe. Das erhaltene Reaktionsgemenge wurde zur Trockne unter vermindertem Druck eingeengt und der so erhaltene Rückstand aufgenommen in 16 ml Wasser. Die erhaltene wässrige Lösung wurde auf den pH-Wert 8,4 durch Zugabe von konzentriertem Ammoniak gebracht und hernach adsorbiert an einer Säule (10 X 560 mm) aus 40 ml «Amberlite CG 50» (NHt-Form). Nachdem die Säule gewaschen worden war, nacheinander mit 2 ml Wasser, 250 ml 0,3-n wässrigem Ammoniak und mit 240 ml 0,5-n wässrigem Ammoniak, wurde eluiert mit 0,75-n wässrigem Ammoniak. Das Eluat wurde gesammelt in 4 ml-Fraktionen und diejenigen Fraktionen, welche hohe antibakterielle Aktivität gegenüber Bacilus subtilis PCI 219 und Escherichia coli JR66/W677 zeigten, wurden miteinander auf ein Volumen von 60 ml vereinigt. Anschliessend wurde zur Trockne konzentriert und hernach chromatographiert auf einer Silicagelsäule in gleicher Weise wie in Beispiel 1 (c). Mit einer Ausbeute von 29 mg wurde reines l-N-(L-5-Amino-2-hydroxyvaleryl)-6/-N-methyl-S'^'-dideoxykanamycin B als farbloses Pulver erhalten. Zersetzungstemperatur 152 bis 155°C. (b) The solid residue obtained was dissolved in 8 ml of aqueous trifluoroacetic acid and the solution was left to stand at room temperature for one hour to split off the t-butoxycarbonyl group. The reaction mixture obtained was evaporated to dryness under reduced pressure and the residue thus obtained was taken up in 16 ml of water. The aqueous solution obtained was brought to pH 8.4 by adding concentrated ammonia and then adsorbed on a column (10 × 560 mm) made from 40 ml “Amberlite CG 50” (NHt form). After the column was washed, successively with 2 ml of water, 250 ml of 0.3 N aqueous ammonia and with 240 ml of 0.5 N aqueous ammonia, elution was carried out with 0.75 N aqueous ammonia. The eluate was collected in 4 ml fractions and those fractions which showed high antibacterial activity against Bacilus subtilis PCI 219 and Escherichia coli JR66 / W677 were combined to a volume of 60 ml. The mixture was then concentrated to dryness and then chromatographed on a silica gel column in the same way as in Example 1 (c). In a yield of 29 mg, pure 1-N- (L-5-amino-2-hydroxyvaleryl) -6 / -N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B was obtained as a colorless powder. Decomposition temperature 152 to 155 ° C.

B B

Claims (6)

615 685 PATENTANSPRÜCHE615 685 PATENT CLAIMS .1 .1 X30* X30 * choh' . choh '. (CHa)X^ (CHa) X ^ die Amino-Schutzgrappen abgespalten werden. Rj, N-(L-5-Amino-2-hydroxyvaleryl)-6'-N-methyl-3/,4/-dideoxy- the amino protective groups are split off. Rj, N- (L-5-amino-2-hydroxyvaleryl) -6'-N-methyl-3 /, 4 / -dideoxy- 1. Verfahren zur Herstellung eines l-N-(a-Hydroxy-co- aminoalkanoyl)-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycins B der Formel 1. Process for the preparation of a 1-N- (a-hydroxy-co-aminoalkanoyl) -6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B of the formula . .. 6" . .. 6 " ot2°h^0 ot2 ° h ^ 0 CO CHOH CO CHOH CÇ«2>n CÇ «2> n NH_ NH_ worin n 1,2 oder 3 ist, oder eines pharmazeutisch vertrag- dass die 1-Aminogruppe eines aminogeschützten Derivats von liehen Säureadditionssalzes davon, dadurch gekennzeichnet, ó'-N-Methyl-S'^'-dideoxykanamycins B der Formel in which n is 1, 2 or 3, or a pharmaceutically contracted one, the 1-amino group of an amino-protected derivative of acid addition salt thereof, characterized in that ó'-N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B of the formula 6" 6 " CH^OH CH ^ OH 2. Verfahren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeich- kanamycin B oder eines pharmazeutisch verträglichen Säurenet, dass zur selektiven Acylierung ausgegangen wird von 2'-N-6/-N-di-t-Butoxycarbonyl-6/-N-methyl-3/,4/-dideoxykana-mycinB oder von 6'-N-t-Butoxycarbonyl-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycin B oder einem Gemisch davon. 2. The method according to claim 1, characterized gekennzeich- kanamycin B or a pharmaceutically acceptable acid network that is used for selective acylation from 2'-N-6 / -N-di-t-butoxycarbonyl-6 / -N-methyl-3 / , 4 / -dideoxykana-mycinB or of 6'-Nt-butoxycarbonyl-6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B or a mixture thereof. 3. Verfahren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass zur Acylierung als funktionelles Derivat der a-Hydroxy-aj-aminosäure der Formel V, deren Säurechlorid, 3. The method according to claim 1, characterized in that for acylation as a functional derivative of the a-hydroxy-aj-amino acid of the formula V, the acid chloride thereof, Mischanhydrid, aktiver Ester oder Azid verwendet wird, vorzugsweise der aktive N-Hydroxysuccinimidester. Mixed anhydride, active ester or azide is used, preferably the active N-hydroxysuccinimide ester. 3 3rd 615 685 615 685 6" 6 " H" CHgOH 0 H "CHgOH 0 h2n h2n (VI) (VI) additionssalzes davon. addition salt thereof. 25 25th HN- HN- 4. Verfahren nach Patentanspruch 1 zur Herstellung von 1-N^DL-Isoseryty-ó'-N-methyW^'-dideoxykanamycin B oder eines pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalzes davon. 4. The method according to claim 1 for the preparation of 1-N ^ DL-isoseryty-ó'-N-methyW ^ '- dideoxykanamycin B or a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof. 5 5 615 685 615 685 E) Die gemäss der vorliegenden Erfindung herstellbaren Verbindungen sind beschrieben in The Journal of Antibiotics, die Formel 28, 340 (1975). E) The compounds which can be prepared according to the present invention are described in The Journal of Antibiotics, Formula 28, 340 (1975). 0 0 Die erfindungsgemäss herstellbaren Verbindungen haben The compounds that can be produced according to the invention have CHOH HH„ CHOH HH " In dieser Formel ist n 1, 2 oder 3. Die Erfindung betrifft auch die Herstellung pharmazeutisch verträglicher Säureadditionssalze dieser Verbindungen. Bei den so hergestellten Verbindungen handelt es sich um wertvolle antibakterielle Agenzien, die zur Behandlung infektiöser bakterieller Erkrankungen bei Tieren benutzt werden können. In this formula, n is 1, 2 or 3. The invention also relates to the preparation of pharmaceutically acceptable acid addition salts of these compounds. The compounds produced in this way are valuable antibacterial agents which can be used for the treatment of infectious bacterial diseases in animals. Die Kanamycine A und B sind bekannte Aminoglykosid-Antibiotika und haben weitverbreitete Anwendung gefunden als chemotherapeutische Agenzien. Indessen haben sich in den letzten Jahren manche kanamycinresistente Bakterienstämme entwickelt. So wurde zum Beispiel gefunden, dass einige den R-Faktor aufweisende Stämme Gram-negativer Bakterien, wie Escherichia coli und Pseudomonas aeruginosa, aus Patienten isoliert werden konnten, welche sich als resistent erwiesen gegenüber der antibakteriellen Wirkung der Kanamycine. Die Wirkungsweise der kanamycinresistenten Bakterien gegenüber den bekannten aminoglykosidischen Antibiotika wurde studiert von H. Umezawa und Mitarbeitern, Advances in Carbo-hydrate Chemistry and Biochemistry, Vol. 30, Seiten 183-225, Kanamycins A and B are well known aminoglycoside antibiotics and have found widespread use as chemotherapeutic agents. Meanwhile, some kanamycin-resistant strains of bacteria have developed in recent years. For example, it was found that some strains of Gram-negative bacteria exhibiting the R factor, such as Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa, could be isolated from patients who proved to be resistant to the antibacterial activity of the kanamycins. The mode of action of the kanamycin-resistant bacteria against the known aminoglycosidic antibiotics has been studied by H. Umezawa and co-workers, Advances in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry, Vol. 30, pages 183-225, ss ss «0 «0 1974, Academic Press. Dabei wurde entdeckt, dass gewisse kanamycinresistente Bakterien Enzyme produzieren, welche die 3'-Hydroxylgruppe der Kanamycine phosphorylieren und die Kanamycine über diese Phosphortransferase inaktivieren. Weiter produzieren gewisse kanamycinresistente Bakterien ein Enzym, welches die 2 "-Hydroxylgrupp e der Kanamycine nukleotiert und hierdurch die Kanamycine inaktiviert über eine Nukleotid-Transferase. Schliesslich zeigte sich, dass gewisse andere kanamycinresistente Bakterien Enzyme produzieren, welche die ó'-Aminogruppe der Kanamycine acetylie-ren und auf diese Weise die Kanamycine über solche Acetyl-transferasen inaktivieren. Auf diese Weise wurde die Molekülstruktur der aminoglykosidischen Antibiotika in Beziehung zu ihrer antibakteriellen Wirksamkeit aufgeklärt, ebenso wie der biochemische Mechanismus der Widerstandsfähigkeit von kanamycinresistenten Bakterien gegenüber den aminoglykosidischen Antibiotika. 1974, Academic Press. It was discovered that certain kanamycin-resistant bacteria produce enzymes that phosphorylate the 3'-hydroxyl group of the kanamycins and inactivate the kanamycins via this phosphorus transferase. Furthermore, certain kanamycin-resistant bacteria produce an enzyme which nucleotides the 2 "hydroxyl groups of the kanamycins and thereby inactivates the kanamycins via a nucleotide transferase. Finally, it was shown that certain other kanamycin-resistant bacteria produce enzymes which acetylie the ó'-amino group of the kanamycins and thus inactivate the kanamycins via such acetyl transferases, thereby elucidating the molecular structure of the aminoglycosidic antibiotics in relation to their antibacterial activity, as well as the biochemical mechanism of the resistance of kanamycin-resistant bacteria to the aminoglycosidic antibiotics. Verschiedene halbsynthetische Derivate von Kanamycinen, welche gegenüber kanamycinresistenten Bakterien wirksam Various semi-synthetic derivatives of kanamycins, which are effective against kanamycin-resistant bacteria 615 685 615 685 5. Verfahren nach Patentanspruch 1 zur Herstellung von 1-(N-(L-Isoseryl)-6'-N-methyl-3',4'-dideoxykanamycin B oder eines pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalzes davon. 5. The method according to claim 1 for the preparation of 1- (N- (L-isoseryl) -6'-N-methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B or a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof. 6. Verfahren nach Patentanspruch 1 zur Herstellung von 1-N-(L-4-Amino-2-hydroxybutyryl)-6/-N-methyl-3/,4'-dideoxy-kanamycin B oder eines pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalzes davon. 6. The method according to claim 1 for the preparation of 1-N- (L-4-amino-2-hydroxybutyryl) -6 / -N-methyl-3 /, 4'-dideoxy-kanamycin B or a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof. 7. Verfahren nach Patentanspruch 1 zur Herstellung von 1- 7. The method according to claim 1 for the production of 1- 30 30th 40 40 45 45 Es hat sich gezeigt, dass eine Anzahl von Verbindungen des Typs l-N-(a-Hydroxy-(ü-aminoalkanoyl)-6/-N-methyl-3/,4'-dideoxykanamycin B ausgezeichnete antibakterielle Wirksamkeit aufweist gegenüber den meisten auf Kanamycin ansprechenden bzw. dagegen resistenten Organismen. Insbesondere besitzen diese erwünschte Eigenschaft die Verbindungen 1-N-(DL-IsoserylJ-ö'-N-methyl-S'^-dideoxykanamycin B, 1-N-(L-Isoseryty-ó'-N-methyl-S'^'-dideoxykanamycin B, l-N-(L-4-Amino-2-hydroxybutyryl)-6'-N-methyl-3/,4/-dideoxykanamy-cin B und l-N-(L-5-Amino-2-hydroxyvaleryl)-6'-N-methyl-S'^'-dideoxykanamycin B bzw. die Säureadditionssalze dieser Verbindungen. A number of compounds of the 1N- (a-hydroxy- (u-aminoalkanoyl) -6 / -N-methyl-3 /, 4'-dideoxykanamycin B type have been shown to have excellent antibacterial activity over most of those responsive to kanamycin or organisms which are resistant to it. In particular, the compounds 1-N- (DL-isoserylJ-ö'-N-methyl-S '^ - dideoxykanamycin B, 1-N- (L-isoseryty-ó'-N- methyl-S '^' - dideoxykanamycin B, 1N- (L-4-amino-2-hydroxybutyryl) -6'-N-methyl-3 /, 4 / -dideoxykanamycin-cin B and 1N- (L-5-amino -2-hydroxyvaleryl) -6'-N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B or the acid addition salts of these compounds. Dementsprechend betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Herstellung neuer semisynthetischer in 1-Stel-lung substituierter Derivate von ó'-N-methyl-S'^'-dideoxykanamycin B der Formel I durch selektive Acylierung der 1-Aminofunktion mit einem entsprechenden a-Hydroxy-co-aminoalkanoylderivat. Accordingly, the present invention relates to a process for the preparation of new semisynthetic derivatives of ó'-N-methyl-S '^' - dideoxykanamycin B of the formula I which are substituted in the 1-position by selective acylation of the 1-amino function with a corresponding a-hydroxy -co-aminoalkanoyl derivative. Zum Stand der Technik A) Kanamycin B ist eine bekannte antibiotische Verbindung, beschrieben im Merck Index 8. Auflage, Seiten 597-598. Sie hat die Formel nh2 PRIOR ART A) Kanamycin B is a known antibiotic compound, described in the Merck Index 8th edition, pages 597-598. It has the formula nh2 HO —Tfr h2n: HO —Tfr h2n: 615 685 4 615 685 4 B) 6'-N-Methyl-3',4'-dideoxykanamycin B ist eine bekannte Verbindung, beschrieben im britischen Patent Nr. 1 384 221. Sie hat die Formel B) 6'-N-Methyl-3 ', 4'-dideoxykanamycin B is a known compound described in British Patent No. 1,384,221. It has the formula C) 3',4'-Dideoxykanamycin B ist beschrieben im US Patent Nr. 3 753 973 und hat die Formel C) 3 ', 4'-Dideoxykanamycin B is described in US Patent No. 3,753,973 and has the formula , D)- i-ML^-Ämmo^-hydroxybutyryO-kanamycin A und 1- N-(L-4-Amino-2-hydroxybutyryl)-kanamycin B sind beschrieben im US Patent Nr. 3 781 268 und haben die Formel , D) - i-ML ^ -Ammo ^ -hydroxybutyryO-kanamycin A and 1- N- (L-4-amino-2-hydroxybutyryl) -kanamycin B are described in US Patent No. 3,781,268 and have the formula 5» 6,2 XCH3 5 »6.2 XCH3 worin Ri eine einwertige Amino-Schutzgruppe und R2 Was- ss selektiv aeyliert wird mit einer a-Hydroxy-co-aminosäure der serstoff oder eine einwertige Amino-Schutzgruppe darstellt, Formel where Ri is a monovalent amino protecting group and R2 is selectively aylated with an a-hydroxy-co-amino acid or a monovalent amino protecting group, formula R3 R3 ^N-(CH2)n-CH(OH)-COOH (V) ^ N- (CH2) n-CH (OH) -COOH (V) RV RV oder einem funktionellen Derivat davon, worin R3 eine bedeuten, worauf aus dem so erhaltenen 1-N-acylierten Pro- or a functional derivative thereof, in which R3 is one, whereupon the 1-N-acylated pro Amino-Schutzgruppe und R4 Wasserstoff ist, oder worin R3 diikt: der Formel und R4 zusammen eine zweiwertige Amino-Schutzgruppe Amino protecting group and R4 is hydrogen, or wherein R3 dictates: of the formula and R4 together is a divalent amino protecting group 6 6 sind, wurden synthetisiert aus verwandten Kanamycinen. So wurden z. B. hergestellt das 3',4'-Dideoxykanamycin B (US Patent Nr. 3 753 973), das ö'-N-Methyl-S'^'-dideoxykanamy-cin B (britisches Patent Nr. 1 384 221), das l-N-(L-4-Amino-2-hydroxybutyryl)-kanamycin A und -kanamycin B (US Patent Nr. 3 781268) und ein l-N-(a-Hydroxy-m-aminoalkanoyl)-3',4'-dideoxykanamycin B (DT-OS Nr. 2 350 169). Diese halbsynthetischen Kanamycinderivate haben sich als wirksam erwiesen gegenüber einer grossen Zahl von kanamycinresistenten Bakterien. are synthesized from related kanamycins. So z. For example, 3 ', 4'-dideoxykanamycin B (U.S. Patent No. 3,753,973), o'-N-Methyl-S' ^ '- dideoxykanamycin-cin B (British Patent No. 1,384,221), manufactured IN (L-4-amino-2-hydroxybutyryl) kanamycin A and kanamycin B (U.S. Patent No. 3,782,268) and an IN (a-hydroxy-m-aminoalkanoyl) -3 ', 4'-dideoxykanamycin B (DT-OS No. 2,350,169). These semi-synthetic kanamycin derivatives have been shown to be effective against a large number of kanamycin resistant bacteria.