CH426699A - Procédé de préparation d'une composition contenant du lysozyme stable thermiquement - Google Patents
Procédé de préparation d'une composition contenant du lysozyme stable thermiquementInfo
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Description
Procédé de préparation d'une composition contenant du lysozyme stable thermiquement La présente invention a pour objet un procédé pour la préparation d'une composition contenant du lysozyme, stable thermiquement, caractérisé en ce qu'on soumet une matière naturelle contenant du lysozyme à une extraction au moyen d'un acide et qu'on mélange la solution aqueuse de sel d'acide de lysozyme ainsi obtenue avec un agent stabilisant constitué par au moins un diol, ou un polyol. Le lysozyme est un produit naturel sensible aux variations des conditions extérieures ; il est ins table et se dégrade en présence d'eau, d'autant plus vite que les solutions en sont plus diluées. Le lyso zyme est également instable à la chaleur, cette ins tabilité étant d'ailleurs différente selon l'état d'humi dité du lysozyme : à sec le lysozyme résiste jusqu'à 1200 C à la décomposition; tandis qu'en solution aqueuse, il reste stable jusqu'à 65 - 700 C, se dégrade lentement vers 80o C, puis se dégrade brutalement vers 1000 C. Or, on a fait la constatation que des solutions de lysozyme mélangées à l'un des agents précités sont plus stables que les solutions aqueuses simples. La solution aqueuse de lysozyme est de préférence obtenue par extraction à partir de blanc d'#uf et la stabilisation de cette solution s'effectue de pré férence en ajoutant une quantité de sucre portant sa concentration jusqu'à celle du sirop du Codex pharmaceutique, à savoir environ 65%. L'eau de ce sirop peut être évaporée par des procédés bon marché, pour donner une poudre sucrée d'excellente conservation. Dans les deux cas, la composition obtenue à savoir le lysozyme en sirop ou en poudre sucrée, est vraiment concentrée et parfaitement stable. Cette composition peut être associée à du sucre en vue d'obtenir un sucre dont la concentration en lysozyme est au maximum de 100 parties par million. A cet effet on peut pulvériser la solution sucrée de lysozyme en particules très divisées sous faible pression. Cette pulvérisation a lieu sur du sucre en mouvement lui-même de façon que les particules très fines de la pulvérisation permettent une répar tition homogène du lysozyme qui se fixe sur chaque grain de sucre sous forme d'une fine particule de sirop par adsorption, particule qui devient elle- même du sucre lysozymé par évaporation de l'eau dans la tour de séchage, sans que la chaleur ait pu détruire l'enzyme car l'évaporation de l'eau du sirop absorbe les calories qui auraient pu dégrader le lysozyme. Le moment de cette pulvérisation, pour tenir compte des risques de perte de solution, est choisi à la sortie des turbines, juste à l'entrée de la tour de séchage. La pulvérisation des solutions de lysozyme dans ces conditions n'augmente l'humidité du sucre que de 2'%, ce qui ne provoque aucune surcharge importante à l'appareillage de séchage. Dans certains cas, la présence de sucre commu nique à la composition un goût parfois peu compa- tible ou même incompatible avec l'emploi envisagé pour celle-ci, par exemple l'incorporation dans un dentifrice ou bien peut rendre difficile la réalisation d'émulsions, ou nuire à la solubilité de principes actifs, par exemple dans le cas de la préparation de pommades et/ou d'onguents et de solutions. Dans ce cas, on utilisera comme agent stabilisant au lieu du sucre, un diol ou un polyol tel que l'éthy- lène-glycol, le propylène-glycol, le glycérol, le pen- taérythritol, le sorbitol, le mannitol, l'inositol et le quercitol. Pour démontrer l'efficacité des agents envisagés sur la stabilisation des solutions de lysozyme, on a effectué une comparaison de stabilité à différentes températures et pendant différentes durées entre une solution aqueuse témoin contenant 100 Etg/ml de lysozyme et des solutions identiques contenant en outre 35 % (p/v) de chacun des agents étudiés. La technique d'essai est celle décrite par SMOLELIS & HART-SELL (J. Bact. 1949,<I>58,</I> 731) et consiste à évaluer la lyse d'une culture fraîche centrifugée et lavée de Micrococcus Lysodekticus à pH 6,2 et à température ambiante, après addition des diffé rentes solutions lysozymées. Les conditions de trai tement préalable de ces solutions en vue de l'appré- ciation de la stabilité du lysozyme sont les suivantes EMI0002.0049 <I>Température <SEP> <SEP> C <SEP> Durée</I> <tb> 45 <SEP> 8 <SEP> jours <tb> 60 <SEP> 3 <SEP> 'heures EMI0002.0050 <I>Température <SEP> <SEP> C <SEP> Durée</I> <tb> 80 <SEP> 2 <SEP> heures <tb> 100 <SEP> 1 <SEP> heure Le calcul permettant la comparaison entre .les dif férentes activités se fait d'après la formule EMI0002.0054 EMI0002.0055 dans <SEP> laquelle <SEP> Al. <SEP> = <SEP> activité <SEP> relative, <tb> Te <SEP> = <SEP> temps <SEP> en <SEP> secondes <SEP> nécessaire <tb> à <SEP> la <SEP> solution <SEP> étalon <SEP> pour <SEP> abais ser <SEP> d'environ <SEP> 400/1000 <SEP> la <SEP> i <tb> densité <SEP> optique <SEP> du <SEP> substrat. <tb> T@ <SEP> = <SEP> temps <SEP> mis <SEP> <I>par</I> <SEP> la <SEP> solution <tb> essayée <SEP> pour <SEP> obtenir <SEP> le <SEP> même <tb> résultat. II est bien évident qu'il y aura action protec trice quand Ar sera supérieure à 1 et que cette action sera d'autant plus efficace que Ar sera élevée. Les résultats obtenus pour un certain nombre des agents indiqués ont été les suivants EMI0002.0060 Valeur <SEP> de <SEP> Ar <tb> Produits <SEP> essayés <SEP> Températures <tb> 45o <SEP> 60,, <SEP> 800 <SEP> 1000 <tb> Ethylène <SEP> glycol <SEP> .<B>...................... <SEP> .....</B> <SEP> ...- <SEP> 1,88 <SEP> 1,41 <SEP> 1,76 <SEP> 4,3 <tb> Propylène <SEP> glycol <SEP> <B>.....................</B> <SEP> .<B>.......</B> <SEP> .<B>------</B> <SEP> 2,1 <SEP> 1,46 <SEP> 2,22 <SEP> 4,3 <tb> Glycérol <SEP> ..<B>.....</B> <SEP> __<B>-------------</B> <SEP> ..........................._ <SEP> 1,46 <SEP> 1,82 <SEP> 1,15 <SEP> 2,22 <tb> Sorbitol <SEP> <B>--------</B> <SEP> . <SEP> <B>-------------</B> <SEP> ._-. <SEP> ......... <SEP> -. <SEP> .......... <SEP> 1,37 <SEP> 1,11 <SEP> 1,54 <SEP> 2,67 <tb> Pentaérythritol<B>............</B> <SEP> .<B>........</B> <SEP> .<B>-------------</B> <SEP> -<B>------</B> <SEP> 1,41 <SEP> 0,37 <SEP> 0,48 <SEP> 0,66 <tb> Mannitol <SEP> <B>------</B> <SEP> ...-_<B>...... <SEP> ...... <SEP> ......</B> <SEP> .........<B>......</B> <SEP> 1,75 <SEP> 1,00 <SEP> 1,00 <SEP> 1,00 Il ressort clairement de ces résultats que l'addition de diols et de polyols, aux solutions de lysozyme a un effet stabilisateur spectaculaire sur celles-ci, et cela spécialement aux températures plus élevées, auxquelles, comme indiqué dans le préambule, ces solutions ont précisément une forte tendance à se dégrader. La proportion de ces agents stabilisateurs pour laquelle les résultats reportés ci-dessus ont été obte- nus est de 35%. Toutefois, cette, proportion peut être plus basse ou plus élevée, à la fois selon la nature de l'agent protecteur choisi et selon 1e, tem pérature et/ou la durée de conservation de la solu tion de lysozyme à protéger. Le nombre de variables intervenant dans cette évaluation de la concentration pour un cas particulier est tel qu'il n'est pas possi ble de donner une règle précise pour le choix de la proportion à utiliser. On peut cependant indiquer d'une manière très générale que l'on peut dans l'ensemble utiliser des proportions de 10 à 75 b/9 et de préférence de 20 à <RTI ID="0002.0097"> 40'% de l'agent protecteur choisi dans les classes définies plus haut. On obtient, en fait, une stabilisation à toutes les concentrations. Seul le degré de cette stabilisation peut varier en fonction de la concentration en agent stabilisateur. L'association du sucre avec le lysozyme, réalisée par l'intermédiaire d'une composition obtenue con formément à l'invention a démontré une surprenante efficacité contre la carie dentaire. On a constaté que l'association de 10 à 25 gamma de lysozyme par gramme de sucre ordinaire empêche l'apparition de la carie dentaire et l'ostéolyse alvéolaire (voir en particulier l'article du Dr R. DUBOIS-PREVOST dans Hygie , 18 juin 1961, pages 5 à 16). De très nombreuses préparations à usage sani taire ou thérapeutique, peuvent être préparées à par tir des compositions obtenues conformément à l'in vention, telles que dentifrices, pommades, solutés ou onguents, et contenant du lysozyme dont la stabilité est assurée grâce à la présence d'un diol ou d'un polyol, y compris le sucre, ces préparations bénéfi ciant alors en outre éventuellement des propriétés adoucissantes ete émollientes de l'agent stabilisateur compris dans la composition utilisée pour réaliser ces préparations.
Claims (1)
- REVENDICATION Procédé pour la préparation d'une composition contenant du lysozyme stable thermiquement, carac térisé en ce qu'on soumet une matière naturelle con tenant du lysozyme à une extraction au moyen d'un acide et qu'on mélange la solution aqueuse de sel d'acide de lysozyme ainsi obtenue avec un agent stabilisant constitué par au moins un diol ou un polyol. SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le stabilisateur est employé à raison de 10 à 75 % (p/v). 2.Procédé selon la revendication et la sous- revendication 1, caractérisé en ce que l'agent sta bilisateur est le sucre. 3. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que l'agent stabilisateur est l'éthylène-glycol, le propylène-glycol ou le glycérol, à une concentration comprise entre 20 et 40%. 4.Procédé selon la revendication et les sous revendications 1 et 2, caractérisé en ce que la solu tion de lysozyme stabilisée avec du sucre est des- sédhée.
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