Procédé de préparation de sels de l'a-L-glutamyl-chollne
L'invention a pour objet un procédé de préparation de l' -L-glutamyl-choline et de ses sels. On a décrit dans le brevet américain No 2776923 un procédé d'obtention de la L-glutamyl-choline et de son chlorhydrate par réaction de l'anhydride N-carbohenzoxy-
L-glutamique avec la choline ou le chlorhydrate de choline. On obtient ainsi un mélange des isomères a et y de la L-glutamyl-choline ou de son chlorhydrate
N-carbobenzoxylés. L'hydrogénolyse en présence de platine ou de palladium fournit le mélange des isomères a et y de la L-glutamyl-choline ou de son chlorhydrate.
On ne connaissait pas de procédé permettant l'obtention préférentielle de l'a-L-glutamyl-choline et de ses sels et la présente invention se propose de remédier à cette lacune.
Suivant le procédé de la présente invention, on fait réagir la monochlorhydrine du glycol sur l'acide
L-glutamique en présence d'acide chlorhydrique gazeux, traite le chlorhydrate du L-glutamate de di-(ss'- chloroéthyle) par une base appropriée, la soude par exemple, obtient le L-glutamate de di-(ss'-chloro- éthyle), fait réagir sur ce dernier le chlorure de trityle en présence d'un agent fixant les acides par exemple la triéthylamine, reprend le N-trityl-L-glutamate de di-(ss'-chloroéthyle) obtenu dans le méthanol en présence de méthylate de sodium pour obtenir le N-trityl-L-glutamate d' -(ss'-chloroéthyle) et y-méthyle, saponifie ce dernier, par exemple par la soude en solution dioxanique, pour obtenir le N-trityl-L-glutamate d'a-(ss'-chloroéthyle),
qu'on traite ce dernier en vase clos par l'iodure de sodium et la triméthylamine en acétone, puis détrityle l'iodure de N-trityl-L-glutamate d'a-choline résultant, par exemple par l'acide acétique aqueux à 50% pour obtenir l'iodure d'a-L-glutamyl- choline. On peut transformer celui-ci en nitrate par l'action du nitrate d'argent en solution aqueuse ou en tout autre sel par réaction avec un réactif approprié.
Comme indiqué dans le brevet américain
No 2776923 précité, la glutamyl-choline et ses sels sont des produits montrant une activité pharmacodynamique intéressante; on en a préconisé l'emploi dans le traitement de la poliomyélite, de l'hypertension et comme agent promoteur de croissance.
D'après Yoshito Nishizawa, Archives françaises de Pédiatrie, 15, 195-216 (1958), l'ct-L-glutamyl-cho- line présente une activité thérapeutique double de celle de la y-L-giutamyl-choline.
Les exemples suivants illustrent l'invention. Les formules développées des différents composés, intervenant dans le procédé suivant l'invention, figurent sur le schéma annexé.
Exemple a) Chlorhydrate du L-glutamate de di-(B'-chloro-
éthyle) (II).
On introduit 20 g d'acide L-glutamique (I) dans 200 cm3 de monochlorhydrine du glycol, chauffe au bain d'huile à 1050 C + 5 et fait passer dans le mélange de l'acide chlorhydrique gazeux en agitant jusqu'à saturation et dissolution complète, ce qui demande environ 30 minutes.
On abandonne encore 3 heures à la même tempé rature, distille au bain-marie sous pression réduite, environ 150 cm3 de monochlorhydrine et ajoute 250 cm3 d'éther. On glace, essore, lave à l'éther par empâtage et sèche à 500 C pour obtenir 39 g (93%) de chlorhydrate du L-glutamate de di-(0'-chloroéthyle) (11), F. = 115-1170 C, [a]2u0 DO = + 16 + 0, 5 (c = 2%, eau). Ce produit qui n'a pas encore été décrit se présente sous forme de feuillets incolores, solubles dans d'eau glacée et abandonne au réchauffement pendant une nuit à la température ambiante.
On évapore sous vide la majeure partie des solvants, ajoute 50 cm3 d'eau et termine la distillation au dioxane. On ajoute 11 cm3 d'acide chlorhydrique
N en présence de 40 cm3 de chloroforme, agite puis décante, extrait par deux fois 5 cm3 de chloroforme, réunit les solutions chloroformiques, les lave avec 10 cm3 d'eau, sèche sur sulfate de magnésium et évapore à sec sous vide. On obtient ainsi, avec un rendement quantitatif, le N-trityl-L-glutamate d'a-(f\'- chloroéthyle) (IV: R = H).
Cette substance qui se présente sous forme d'une huile n'a pas encore été décrite; elle peut être directement utilisée pour la réaction décrite sous f).
Le N-trityl-L-glutamate d'a-('-chloroéthyle) peut être caractérisé sous forme de son sel de diéthylamine, comme suit:
L'huile brute obtenue selon e) est reprise dans 10cm3 d'éther; on ajoute 1,1 cm3 de diéthylamine puis, en deux fois, 20 cm3 de cyclohexane, glace pendant deux heures, essore, lave au cyclohexane et essore 4,7 g de sel de diéthylamine du N-trityl-L-gluta- mate d'α-(ss'-chloroéthyle), F. vers 100 C, [α]D20 =
+ 460 + 1 (c = 2%, chloroforme). Ce produit qui est nouveau se présente sous forme de petites aiguilles incolores, solubles dans l'eau, l'alcool, l'acétone, le benzène et le chloroforme, peu solubles dans l'éther et le cyclohexane.
Analyse: C33H37O4N2Cl = 525,077
Calculé : C 68,62 % H 7,1 % N 5,33 % Cl 6,75 %
Trouvé : 68,8 7,1 5,1 6,2 f) Iodure du N-trityl-L-glutamate d'a-choline.
On introduit 16,5 g du sel de diéthylamine du
N-trityl-L-glutamate d'α-(ss'-chloroéthyle) dans 100 cm3 de chloroforme, ajoute 20 cmi d'eau puis, par fraction et en agitant, 30 cm3 d'acide chlorhydrique
N. On décante, extrait par 20 cm3 de chloroforme, réunit les extraits chloroformiques, les lave avec 30 cmS d'eau, sèche sur sulfate de magnésium et évapore à sec sous vide.
On introduit 6 g d'iodure de sodium fondu dans un tube à sceller, puis le N-trityl-L-glutamate d'a-(p'- chloroéthyle) obtenu au paragraphe précédent, en solution dans 20 cm3 d'acétone sèche. On ajoute 12 cm3 de triméthylamine anhydre, scelle le tube et chauffe pendant une nuit à 750 C. On glace, ouvre le tube, évapore à sec sous vide, reprend par 60 cm3 de chloroforme et filtre l'insoluble. La solution filtrée est
additionnée de 20 cm3 d'eau contenant 1 cm3 d'acide
acétique. On acidifie à pH 2 par une solution aqueuse
diluée d'acide iodhydrique, décante, extrait au chloroforme, lave avec 10 cm3 d'eau, sèche la solution chloroformique sur sulfate de magnésium et évapore à sec sous vide. On ajoute 120 cm3 d'éther anhydre,
agite, filtre et sèche sous vide.
On obtient ainsi 10,7 g
d'un produit qu'on pulvérise et traite à nouveau par l'éther comme précédemment pour obtenir 9,8 g
(54%) d'iodure du N-trityl-L-glutamate d'a-choline. l'eau et l'alcool, peu solubles dans l'acétone et le chloroforme, insolubles dans l'éther.
Analyse: C9H16O4NCl3 = 308,6
Calculé
C 35,02% H 5,22% O 20,73% N 4,54% C1 34,47%
Trouvé
C 35,3 % H 5,3 % 020,6 % N 4,5 % Cl 34,2 % b) L-glutamate de di-(ss'-chloroéthyle)
On introduit 31 g de chlorhydrate de glutamate de di-(ss'-chloroéthyle) obtenu selon a) dans 50 cm3 d'eau glacée, ajoute 250 cm3 de chloroforme, 2 gouttes de phénolphtaléine, puis, par fractions, 12,5 cm3 de lessive de soude.
On décante, extrait la solution aqueuse par 25 cm3 de chloroforme, réunit les solutions chloroformiques, lave avec 15 cm3 d'eau et sèche sur sulfate de magnésium. c) N-trityl-L-glutamate de di-(ss'-chloroéthyle)
(1V: R =-CH2-CHS-C1).
On ajoute à la solution chloroformique ci-dessus 30 g de chlorure de trityle et, par portions, 15 cm3 de triéthylamine puis abandonne une nuit à 300 C.
On lave avec 50 cm9 d'eau, un mélange de 50 cm3 d'eau et 45 cm3 d'acide chlorhydrique N et enfin avec 40 cm3 d'eau, sèche sur sulfate de magnésium et évapore à sec sous vide. d) N-trityl-L-glutamate d'a-(ss'-chloroéthyle) et y-mé
thyle (IV : R = - CH3).
On dissout le résidu obtenu ci-dessus dans 50 cm3 de méthanol, évapore à sec sous vide, reprend dans 200 cm3 de méthanol à 350 C, ajoute 2,5 cm3 d'une solution normale de méthylate de sodium dans le méthanol et abandonne pendant 20 minutes à 350 C.
On ajoute encore 1 cm3 de la solution de méthylate de sodium puis, après 40 minutes, de nouveau 1 cm3.
On abandonne 1 heure à 350 C, une heure à la température ambiante, glace, essore, rince au méthanol glacé et sèche à 400 C pour obtenir 30 g de produit qu'on reprend dans 50 cm3 de tétrachlorure de car bone. On glace, filtre l'insoluble, concentre à demivolume, ajoute 50 cm3 de méthanol et distille ce qui reste de tétrachlorure de carbone. On glace, essore, rince au méthanol glacé et sèche à 400 C pour obtenir 29,2 g (63%) de N-trityl-L-glutamate d'a-(ss'-chloro-
éthyle) et y-méthyle, F. = 83-860 C, [l2D0 = + 35,50
+ 0,5 (c = 2%, chloroforme).
Analyse: C27H28O4NCl = 465,95
Calculé : C 69,59% H6,05% N3,0% C7,61%
Trouvé : 69,8 6,0 3,1 7,8 e) N-trityl-L-glutamate d'a-(ss'-chloroéthyle)
(IV: R=-H)
On dissout 4,7 g de N-trityl-L-glutamate d'α-(ss'-
chloroéthyle) et y-méthyle (IV R = - CH0), obtenu
selon d), dans 40 cm3 de dioxane, ajoute 10 cm3 de
méthanol et 10,5 cm3 de soude N. On place sur bain g) Iodure d'a-L-glutamyl-choline (V: X = I)
On ajoute à 3 g d'iodure brut du N-trityl-L-glutamate d'a-choline obtenu selon f), 7,2 cm3 d'acide acétique aqueux à 50%, agite et chauffe à 350 C pendant quinze minutes.
On ajoute 18 cm3 d'acétone puis, par portions, 25 cm3 d'acétone. On essore, lave à l'acétone et sèche sous vide pour obtenir 1,35 g (77%) d'iodure d'α-L-glutamyl-choline, F. = 170180 C, [α]D20 = + 13,5 # 1 (c = 2 %, eau).
Ce produit, qui n'a pas encore été décrit, se présente sous forme de petites aiguilles incolores solubles dans l'eau, insolubles dans l'alcool, I'éther, l'acétone et le benzène.
Analyse: C10H21O4N2I = 360,21
Calculé : C 33,34% H 5, 88% N 7, 77% I 35, 24%
Trouvé : 33,3 5,8 7,7 36,0 h) Obtention du nitrate d'a-L-glutamyl-choline
(V:X = NO)
On introduit 1,08 g d'iodure d'a-L-glutamyl-choline obtenu selon g) dans une solution de 0, 510 g de nitrate d'argent dans 4 cm3 d'eau. On filtre, concentre à demi-volume, ajoute 4 cm3 d'alcool et 40 cm3 d'acétone, glace et essore. On recristallise dans 2 cm3 d'eau légèrement alcoolisée, par addition d'acétone pour obtenir 650 mg (75%) de nitrate d'α-L-glutamyl-cho- line, F.
(en tube capillaire) = environ 90 C, [α]D20 = -t 16,5 + 1 (c = 2%, eau).
Ce produit, qui est nouveau, se présente sous forme de petits feuillets incolores, solubles dans l'eau, peu solubles en alcool, insolubles en éther, acétone et benzène.