BRPI1104336B1

BRPI1104336B1 - composição de suplemento nutricional para avestruz, método de preparação de uma composição de suplemento nutricional para avestruz e método para a manutenção de um grupo de avestruzes

Info

Publication number: BRPI1104336B1
Application number: BRPI1104336A
Authority: BR
Inventors: Joy Reid Sharon
Original assignee: Univ Cape Town
Priority date: 2011-11-08
Filing date: 2011-11-08
Publication date: 2018-11-21
Also published as: BRPI1104336A2

Abstract

composição de suplemeno nutricional para avestruz, método de preparação de uma. composição de suplemento nutricional para avestruz e método para a manutenção de um grupo de avestruzes. a invenção fornece uma composição de suplemento nutricional para avestruz que inclui pela menos uma cepa bacteriana selecionada entre lactobacillus oris, lactobadfllus brevis, lactobacillus johnsonii, bifidobacterium pseudolongun subsp. globosum e enterococcus faecalis. o lactobacilius oris é normalmente de uma cepa que foi designada lo59, o lactobacílius brevis é normalmente de uma cepa que foi designada lb512, o lactobacillus johnsonii é normalmente de uma cepa que foi designada lj136, o bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum é normalmente de uma cepa que foi designada bg136, e o enterococcus faecalis é normalmente de uma cepa que foi designada p1.2. as bactérias podem ser obtidas a partir do trato gastrointestinal ou a partir de amostras de fezes de avestruzes saudáveis.

Description

(54) Título: COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ, MÉTODO DE PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ E MÉTODO PARA A MANUTENÇÃO DE UM GRUPO DE AVESTRUZES (73) Titular: UNIVERSITY OF CAPE TOWN. Endereço: LOVERS WALK RONDEBOSCH.CAPE TOWN, 7700 AFRICA DO SUL, ÁFRICA DO SUL(ZA) (72) Inventor: SHARON JOY REID.

Prazo de Validade: 20 (vinte) anos contados a partir de 08/11/2011, observadas as condições legais

Expedida em: 21/11/2018

Assinado digitalmente por:

Alexandre Gomes Ciancio

Diretor Substituto de Patentes, Programas de Computador e Topografias de Circuitos Integrados

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COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA

AVESTRUZ, MÉTODO DE PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO DE

SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ E MÉTODO PARA A

MANUTENÇÃO DE UM GRUPO DE AVESTRUZES

Campo Da Invenção [0001] A presente invenção refere se a um suplemento nutricional para avestruzes.

Antecedentes Da Invenção [0002] A criação de avestruz é uma indústria que cresce rapidamente em todo o mundo. Um dos grandes problemas enfrentados pela indústria é a mortalidade dos filhotes de avestruz, que pode ser superior a 50% nos primeiros três meses. Uma causa de morte predominante é infecções patogênicas do trato gastrointestinal. O tratamento com antibióticos, muitas vezes resulta no desenvolvimento de patógenos resistentes e impede a invasão da microflora intestinal protetora ocorrência natural nas aves jovens, e há também preocupações quanto aos resíduos de antibióticos na carne de avestruz destinada ao consumo humano. Existe, portanto, a necessidade de um produto alternativo para substituir os antibióticos convencionais atualmente disponíveis.

[0003] Foi demonstrado a partir de trabalhos com aves que a nutrição neonatal aumenta o desenvolvimento normal do trato intestinal e estimula o desenvolvimento imunológico. A nutrição pode, portanto, desempenhar um papel fundamental na criação de filhotes de avestruz, mas os conhecimentos sobre as exigências nutricionais dos avestruzes ainda não estão bem definidos.

[0004] Os probióticos são suplementos nutricionais microbianos vivos que, quando administrados em quantidades suficientes, conferem um benefício para saúde do animal

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2/14 hospedeiro, em geral, melhorando seu equilíbrio intestinal.

Parece que microbiota intestinal frequentemente está envolvida com a resistência a doenças em animais de criação.

As condições de estresse sofridas pelo animal jovem nas práticas agrícolas na composição modernas provocam alterações e atividade da microbiota intestinal.

suplementação com probióticos pode em alguns casos, ajudar a restaurar equilíbrio e fornecer o tipo de microbiota encontrada em ambientes mais naturais, os probióticos bacterianos têm se mos trado eficazes em suínos, bovinos e bezerros pré-ruminantes.

[0006]

A razão pelo qual os probióticos melhoram com sucesso a saúde de alguns animais de criação é multifatorial.

Acredita-se que o principal efetor deste efeito benéfico seja devido à exclusão competitiva, em que colonização do intestino pela microbiota comensal impede adesão e o sucesso de estabelecimento das cepas patogênicas.

maioria dos probióticos é membro do grupo de bactérias produtoras de ácido lático (LAB), incluindo as espécies

Lactobacillus,

Bifidobacterium e Enterococcus. Estas bactérias produzem uma variedade de substâncias, incluindo ácidos orgânicos, peróxido de hidrogênio ou bacteriocinas que são substancias inibitórias para bactérias tanto gram-positivas como gram-negativas. Foi demonstrado recentemente que algumas espécies de LABs são essenciais para o desenvolvimento normal do epitélio intestinal e do sistema imunológico, modulando os sistemas de defesa inato do intestino.

	[0007] Entretanto,	nem	todas as	cepas de L	ABs são
aditivos	nutricionais eficazes, e	os	probióticos parecem	não ser
eficazes	em todos os animais.	A	pesquisa	demonstrou	que a

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3/14 eficácia das bactérias probióticas, e os benefícios para a saúde que estas bactérias geram, é específica do hospedeiro. Por exemplo, há resultados contraditórios sobre se o desempenho do crescimento de aves domésticas, especificamente frangos, é melhorada pelo uso de probióticos (Arslan C., Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences, 2004, Vol. 28, págs. 887-891; Gri L.R. et al., Arch. Geflugelk, 2008, Vol. 72(3), págs. 136139; Iji P.A., Australian Journal of Experimental Agriculture, 2008, Vol. 48, págs. 1280-1283). A pesquisa realizada sobre a nutrição de avestruzes, especialmente sobre a suplementação nutricional, é limitada, mas parece que as dietas desenvolvidas para aves domésticas não têm sido aplicadas com sucesso para os avestruzes, possivelmente pelo fato dos avestruzes possuírem dietas diferentes quando a natureza (por exemplo, consumo de fibras diferentes), e sistemas digestivos diferentes e diferente utilização dos nutrientes. Portanto, é provável que os probióticos que são eficazes para as aves domésticas não são, necessariamente, eficazes para os avestruzes.

Objeto Da Invenção [0008] Um objeto da presente invenção é fornecer um suplemento nutricional que alivie, pelo menos parcialmente, os problemas mencionados acima.

Descrição Resumida da Invenção [0009] De acordo com um primeiro exemplo de realização da invenção, é fornecida uma composição de suplemento nutricional para avestruz que compreende pelo menos uma bactéria selecionada entre Lactobacillus oris, Lactobacillus brevis, Lactobacillus johnsonii, Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum e Enterococcus faecalis.

[0010] A bactéria Lactobacillus oris pode ser a

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4/14 cepa designada como Lo59, o Lactobacillus brevis pode ser a cepa designada Lb512, o Lactobacillus j ohnsonii pode ser a cepa designada Lj136, O Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum pode ser a cepa designada Bg136 e/ou o Enterococcus faecalis pode ser a cepa designada P1.2.

[0011] A composição pode incluir pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro ou todas as cinco bactérias dentre Lactobacillus oris, Lactobacillus brevis, Lactobacillus johnsonii, Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum e Enterococcus faecalis.

[0012]	A composição	pode incluir cerca	de	10⁹ ufc
das bactérias acima.
[0013]	A composição	pode também incluir	outros
aditivos e pode ser	liofilizada ou microencapsulada	em	esferas

de alginato. A composição pode ser misturada em uma ração para avestruz.

[0014]	A composição	pode	s er para melhorar	a
condição física de	avestruzes e/ou	para	reduzir a mortalidade
dos avestruzes.
[0015]	De acordo com	uma	segunda realização	da

invenção, é fornecido um método de preparação de uma composição de suplemento nutricional para avestruz, conforme descrito anteriormente, compreendendo o dito método as etapas de:

suspensão de células bacterianas da bactéria da composição em 5% de leite desnatado; e liofilização das células bacterianas ou microencapsulamento das células para formar esferas de alginato.

[0016] De acordo com uma terceira realização da invenção, é fornecido um método para a manutenção de um grupo de avestruzes, compreendendo o dito método a etapa de administrar

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5/14 uma composição, tal como a descrita acima, para os avestruzes no grupo.

Breve Descrição Da Figura [0017] A Figura 1 é um gráfico que indica o ganho de peso dos filhotes de avestruz durante os ensaios de alimentação usando o suplemento nutricional da presente invenção.

Descrição Detalhada Da Invenção [0018] É fornecido um suplemento nutricional para avestruzes, que inclui pelo menos uma bactéria selecionada a partir de, Lactobacillus oris, Lactobacillus brevis, Lactobacillus johnsonii, Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum e Enterococcus faecalis, para formar uma composição probiótica. O Lactobacillus oris é normalmente de uma cepa que foi designada Lo59, o Lactobacillus brevis é normalmente de uma cepa que foi designada Lb512, o Lactobacillus johnsonii é normalmente de uma cepa que foi designada Lj136, o Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum é normalmente de uma cepa que foi designada Bg136, e o Enterococcus faecalis é normalmente de uma cepa que foi designada P1.2. As bactérias podem ser obtidas a partir do trato gastrointestinal ou a partir de amostras de fezes de avestruzes saudáveis, que representam a microbiota autóctone do avestruz.

[0019] As amostras dessas cepas bacterianas foram depositadas com base nos termos do Tratado de Budapeste sobre o Reconhecimento Internacional do Depósito dos Micro-organismos para fins de Processos de Patentes na Coordenação Belga de Coleções de Micro-organismos (BCCM/LMG), Gent, 19 de Agosto 2011 e foram alocadas sob os números de acesso apresentados na Tabela 1.

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6/14 [0020] A composição da invenção pode incluir qualquer uma, duas, três, quatro ou todas as cinco bactérias dentre Lactobacillus orís, Lactobacillus brevis, Lactobacillus johnsonii, Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum e Enterococcus faecalis, em proporções iguais ou diferentes de cada cepa.

[0021] A composição também pode incluir outros aditivos, tais como leite desnatado, alginato, antibióticos, cianocobalamina, B-biotina, ácido D-pantotênico, ácido fólico, L-ascorbil-2-polifosfato, mio-inositol, niacina, ácido p-aminobenzóico, cloridrato de piridoxina, riboflavina, cloridrato de tiamina ou cloreto de colina. A composição pode ser formulada como um pó, líquido, pastilha, comprimido ou esferas (grânulos), ou sob qualquer outra formulação adequada para administração a um avestruz, ou como uma mistura para a adição na ração do avestruz. A pastilha, comprimido ou grânulo pode conter aproximadamente 10⁹ ufc das bactérias acima.

[0022] A composição pode resultar na melhoria da condição física dos avestruzes, tais como ganho de peso, melhoria da saúde dos avestruzes, por exemplo, menos infecções intestinais, e/ou redução da mortalidade dos avestruzes, especialmente filhotes de avestruz.

[0023] A presente invenção será agora descrita em maiores detalhes pelo seguinte exemplo não limitante.

Exemplo [0024] Propõe-se que as bactérias probióticas exerçam seus efeitos benéficos de uma ou mais formas. Em primeiro lugar, para que elas chegassem ao intestino grosso do avestruz em um estado metabolicamente ativo, viável, as bactérias têm de ser capazes de sobreviver pela passagem através

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7/14 do estômago extremamente ácido (pH ca. 2.0) e do intestino delgado, onde concentração de bile pode atingir altas concentrações.

As bactérias probióticas devem, portanto, ter uma boa tolerância ao ácido e bile nas concentrações encontradas. Em segundo lugar, elas devem ser capazes de colonizar o animal hospedeiro de maneira eficaz, a fim de perdurarem e produzirem um efeito benéfico, e isso significa que elas devem ser capazes de se aderirem a qualquer célula do epitélio intestinal ou mucosa que reveste o intestino. As bactérias podem também auxiliar a digestão do animal hospedeiro, produzindo enzimas que ajudam a digerir o material no intestino.

No caso do avestruz, dieta é composta principalmente de fibras vegetais indigestas, as enzimas benéficas são, portanto, celulases, xilanases pectinases, todas as quais liberam cadeias curtas de polissacarídeos na luz intestinal, que podem ser absorvidas pelas células epiteliais diretamente ou então ainda digeridas pelas enzimas das próprias aves. Por último, algumas bactérias produzem compostos que são prejudiciais para os potenciais agentes patogênicos, tais como o ácido lático, butirato e outros compostos antimicrobianos que inibem o crescimento de patógenos e permitem que os probióticos possam vencer a competição contra os patógenos.

Isolamento E Seleção De Cepas Probióticas [0025]

Foi realizado um levantamento da microbiota cultivável do intestino posterior de avestruzes adultos saudáveis e filhotes de avestruz de diferentes idades criados com diferentes suplementos nutricionais.

Foram isoladas diferentes cepas de bactérias

Lactobacillus,

Bifidobacterium e

Enterococcus com potencial probiótico a partir do trato gastrointestinal ou a partir de amostras de fezes dos

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8/14 avestruzes.

[0026] As cepas foram caracterizadas com relação à suas capacidades de degradação de fibra, capacidade de suportar as duras condições do intestino e de colonizar o intestino, bem como a sua segurança microbiana (todos os resultados não são mostrados). Foram selecionadas cinco cepas para testes adicionais como possíveis probióticos candidatos (Tabela 1).

Tabela 1

Cepas Isoladas Selecionadas Para Testes Como Probiótico Para Avestruz

Nome da espécie	Designação de Cepa	Origem	N° de Acesso BCCM/LMG
Lactobacillus oris	Lo59	Adulto de viveiro	LMG-P-26662
Lactobacillus brevis	Lb512	Adulto de viveiro	LMG-P-26663
Lactobacillus johnsoniae	Lj136	Adulto de viveiro	LMG-P-26664
Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum	Bg136	Adulto de viveiro	LMG-P-26666
Enterococcus faecalis	P1.2	Adulto selvagem	LMG-P-26665

[0027] Essas cepas são todas anaeróbias e pode crescer bem no intestino de avestruzes, onde as condições são altamente anaeróbias. No entanto, verificou-se que elas são razoavelmente aerotolerantes e podem sobreviver no ar por várias horas. Isso significa que elas permanecem viáveis enquanto estão sendo cultivadas e preparadas para a administração para os avestruzes, e ainda estariam metabolicamente ativas no intestino do avestruz.

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9/14 [0028] A Tabela 2 resume as características das cinco cepas selecionadas. Todas as cepas foram capazes de aderir a levedura e autoagregar - indicativo de boa capacidade de adesão da célula. Além disso, três das cepas exibiram excelente adesão à mucosa. Todas as cepas apresentaram boa tolerância às condições ácidas e sais biliares. Três das cepas foram encontrados por inibirem o crescimento de cepas indicadoras, incluindo clostrídios, que podem contribuir para a enterite em filhotes de avestruz. Todas as cinco cepas selecionadas também produzem pelo menos duas enzimas extracelulares, que pode ajudar na nutrição, degradando compostos indigeríveis e liberando produtos que são digeríveis pelo hospedeiro.

Tabela 2

Características Probióticas Para A Seleção De Cepas

Cepa	Características probióticas
Aglutinação de levedua ra	Ligaçã o à mucosa b s	Ação antimicro- , ^cbiana	Tolerância ao , . d ácido	Tolerân- cia à e bile	Produção da f enzima
Lo5 9	+	68	S. typh, E. faec, C. bot	R	R	cel, pect, fit, prot
Lb512	++	75	S. typh, S.aur, C. bot	R	R	cel, xil
Lj136	+++	41	nt	R	R	amil, cel, prot
Bg13 6	++	Nt	nenhuma	S	R	amil, prot
P1.2	++	18	E. coli, S. typh, C. perf,	R	R	amil, cel, pect, fit, prot

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C. bot

a: + símbolos indicam o aumento da aglutinação, conforme definido pelo tamanho dos agregados celulares determinados por microscopia.

b: % ligação em relação ao L. rhamnosus GG c: Inibição do crescimento de cepas indicadoras Escherichia coli ATCC 25922 (E. coli), Salmonella typhimurium (S. typh), Staphylococcus aureus (S. aur), Enterococcus faecium van^S (E. faec), Clostridium perfringens (C. perf) or Clostridium botulinum (C. bot).

d: S indica a sensibilidade; R indica resistência, ou a capacidade de crescer a um pH de 3.

e: S indica a sensibilidade; R indica resistência, ou a capacidade de crescer em presença de 1 % bile de boi.

f: Produção de amylase (amil) , cellulose (cel) , pectinase (pect), fitase (fit), protease (prot) ou xilanase (xil). Preparação De Cepas Para Matéria-prima

Coleta e cultivo de amostras fecais [0029] Cinco amostras de fezes recém-coletadas foram obtidas de cada grupo em recipientes plásticos estéreis. Uma pequena porção de cada amostra foi armazenada imediatamente em hastes com pontas de algodão de transporte anaeróbico (Oxoid), e a massa da amostra fecal foi imediatamente congelada e armazenada a -70 °C.

[0030] As amostras fecais foram processadas imediatamente sob condições anaeróbias estritas. As amostras foram diluídas em diluente anaeróbico, e semeadas nos seguintes meios de cultura:

1) BHI - para obter o total de bactérias cultiváveis por grama de amostra;

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2) meio MRS com cisteína para selecionar espécies de

Lactobacillus e Bifidobacterium;

3) Ágar triptose sulfito cicloserina (TSC,

Oxoid) foi usado para Clostridium perfringens;

) Ágar

Salmonella-Shigella (SS) foi utilizado para

Salmonella spp.;

5)

Ágar

McConkey (Merck) foi utilizado para

Enterobacteriaceae.

[0031]

Uma única, pura e isolada colônia a partir de cada uma das cinco cepas selecionadas foi inoculada separadamente em 5 ml de

MRS-Cys e incubadas anaerobicamente durante a noite. A cultura foi corada pela técnica de coloração de Gram para verificar a pureza e 1 ml da cultura foi usada para inocular em 500 ml de caldo MRS-Cys, que foi incubado durante a noite. As células foram então coletadas por centrifugação a 3840g durante 10 minutos a 4 °C (Beckman Coulter J2-21 M/E) antes de ser anaerobicamente ressuspensas em 50 ml de leite desnatado 5%. As células foram então microencapsuladas ou liofilizadas.

Microencapsulação [0032] As cinco cepas diferentes (50 ml de cada) foram misturadas após a ressuspensão, e então adicionadas a 250 ml de solução de alginato 3, 6% (Merck) . A mistura foi transferida para um funil estéril de 500 ml e gotejada lentamente em 1 l de solução de cloreto de cálcio (CaCl₂) 0,1 M, para formar esferas. As esferas de alginato foram endurecidas por 45 a 60 minutos na solução de CaCl₂ antes de serem lavadas em solução salina 0,85% e água destilada estéril, respectivamente. As esferas foram secas a 30 °C durante a noite, e classificados em condições estéreis para garantir que apenas esferas de

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12/14 aproximadamente 4 mm de dimensão fossem incluídas antes de serem embaladas em lotes de aproximadamente 500 esferas em tubos sterilin de 20 ml.

[0033] Toda semana, três esferas de cada seleção isolada selecionada eram individualmente dissolvidas em 1 ml de tampão citrato de sódio 0,1 M usando um homogeneizador do tipo bead beater (LINEA TA 200S) por 10 segundos. Uma vez dissolvido, diluições seriadas foram semeadas em placas MRS-Cys para a avaliação da viabilidade.

[0034] Para garantir que os produtos finais fossem livres de possíveis contaminantes laboratoriais, as esferas em suspensão foram semeadas em ágar MacConkey agar, Bile Esculina e BHI para detectar a presença de E. coli, Enterococcus spp. e Clostridium spp., respectivamente. Colônias aleatórias foram submetidas a coloração de Gram para detectar a morfologia celular típica de cada cepa. As esferas eram armazenadas em um dessecador. Lotes frescos de esferas foram utilizados todas as semanas e transportados em sacos térmicos para o local do ensaio nutricional.

Liofilização [0035] A suspensão leite desnatado foi transferida para um balão de secagem e coberta com etanol por 45 a 60 minutos antes de serem liofilizadas (Balzers -Pirani calibre TIG 030) a 10 mbar de pressão por 48 horas. As amostras liofilizadas foram transferidas para tubos sterilin de 20 ml e armazenadas em um dessecador em temperatura ambiente. 0,1 g de pó liofilizado de cada cepa foi ressuspenso em 1 ml de solução de Ringer e diluições apropriadas foram semeadas em placas MRS-Cys para as avaliações de viabilidade.

Preparação de suplemento nutricional probiótico

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13/14 [0036] As bactérias probióticas foram incorporadas na ração inicial de filhotes de avestruz tanto na forma de esferas encapsulada como na forma liofilizada, de modo que a concentração final de bactérias foi de 10⁷ gm^-1 de ração.

Ensaio Nutricional [0037] Diferentes combinações de cepas e cepas individuais foram testadas em estudos nutricionais preliminares. Os ensaios foram monitorados pelo estabelecimento a níveis basais de grupos de bactérias selecionadas no material fecal de filhotes de avestruz, antes e durante a suplementação com probióticos, a fim de determinar os probióticos candidatos mais eficazes. Uma composição probiótica continha todas as 5 cepas listadas nas Tabelas 1 e 2 acima.

[0038] Os ensaios foram realizados no Centro Agrícola de Elsenburg, Stellenbosch (África do Sul). Cento e oitenta pintos de avestruz de um dia de idade foram distribuídos aleatoriamente em 12 grupos com distribuições de massa semelhantes, e foram alojados em baias separadas. Três repetição por grupo foram atribuídas para cada tratamento, e os quatro tratamentos diferentes eram com ou sem suplementação alimentar, e com ou sem o promotor de crescimento, Tilosina. Os pintos tiveram acesso a alimentação inicial e água ad libitum. O suplemento nutricional foi administrado imediatamente após a alocação das aves nos respectivos grupos (~ 10⁹ ufc de bactérias probióticas (uma cápsula de alginato)) e novamente depois de uma semana. A partir da 2^a semana, a composição probiótica foi fornecida a um nível de 10⁷ microorganismos por grama de ração seca, ou 300 mg de esferas de alginato (~ 6x10⁹ ufc) por dia. O tratamento continuou por 9 semanas, e as aves eram pesadas semanalmente.

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Resultados [0039] O ganho de peso pelas aves alimentadas com probiótico aumentou consideravelmente (Figura 1) . Isso mostra que as bactérias probióticas isoladas com boas características a partir de filhotes de avestruz e, especialmente, aquelas listadas na Tabela 1 acima, podem ser usadas como um suplemento nutricional que irá melhorar o ganho de peso e a saúde dos filhotes.

[0040] Não foram observados efeitos prejudiciais nos filhotes de avestruz.

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Claims

REIVINDICAÇÕES

1. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ, caracterizada pelo fato de compreender pelo menos Lactobacillus oris.
2. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA

AVESTRUZ, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender ainda pelo menos um dentre Lactobacillus brevis, Lactobacillus johnsonii, Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum e Enterococcus faecalis.
3. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ, de acordo com qualquer das reivindicações 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o Lactobacillus oris é a cepa designada como Lo59 (LMG-P-26662).
4. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ, de acordo com qualquer das reivindicações 2 ou 3, caracterizada pelo fato de que o Lactobacillus brevis é a cepa designada como Lb512 (LMG-P-26663).
5. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a

4, caracterizada pelo fato de que o Lactobacillus johnsonii é a cepa designada como Lj136 (LMG-P-26664).
6. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a

5, caracterizada pelo fato de que o Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum é a cepa designada como Bg136 (LMG-P-26666) .
7. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a

6, caracterizada pelo fato de que o Enterococcus faecalis é a cepa designada como P1.2 (LMG-P-26665).

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8. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, caracterizada pelo fato de que a dita composição inclui Lactobacillus oris e pelo menos duas bactérias selecionadas a partir de Lactobacillus brevis, Lactobacillus johnsonii, Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum e Enterococcus faecalis.
9. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA

AVESTRUZ, de acordo com uma qualquer das reivindicações de

1 a 8, caracterizada pelo fato de que a dita composição inclui Lactobacillus oris e pelo menos três bactérias selecionadas a partir de Lactobacillus brevis, Lactobacillus johnsonii, Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum e Enterococcus faecalis.
10. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA

AVESTRUZ, de acordo com uma qualquer das reivindicações de 1 a 9, caracterizada pelo fato de que a dita composição inclui as bactérias Lactobacillus oris, Lactobacillus brevis, Lactobacillus johnsonii, Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum e Enterococcus faecalis.
11. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ, de acordo com uma qualquer das reivindicações de

1 a 10, caracterizada pelo fato de incluir aproximadamente

10⁹ ufc de bactérias.
12. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ, de acordo com uma qualquer das reivindicações de 1 a 11, caracterizada pelo fato de compreender ainda ração de avestruz.
13. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA

AVESTRUZ, de acordo com uma qualquer das reivindicações de

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1 a 12, caracterizada pelo fato de que a dita composição é para melhorar a condição física dos avestruzes.
14. COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ, de acordo com uma qualquer das reivindicações de 1 a 12, caracterizada pelo fato de que a dita composição é para reduzir a mortalidade dos avestruzes.
15. MÉTODO DE PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO DE SUPLEMENTO NUTRICIONAL PARA AVESTRUZ, de acordo com uma qualquer das reivindicações de 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o dito método compreende as etapas de:

suspensão de células bacterianas da bactéria da composição em 5% de leite desnatado;

liofilização das células bacterianas ou microencapsulamento das células para formar esferas de alginato.
16. MÉTODO PARA A MANUTENÇÃO DE UM GRUPO DE AVESTRUZES, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de administração de uma composição de acordo com uma qualquer das reivindicações de 1 a 14 para os avestruzes no grupo.

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Tempo (semanas)