BRPI1005384B1 - METHOD OF OBTAINING PURIFIED REBAUDIOSIDE D - Google Patents

Abstract

REBAUDIOSÍDEO DE ALTA PUREZA E APLICAÇÕES. A presente invenção oferece métodos para a purificação de Rebaudiosídeo D a partir de extrato da planta Stevia rebaudiana Bertoni junto com Rebaudiosídeo A. Os métodos são úteis para produzir Rebaudiosídeo D de alta pureza e Rebaudiosídeo A. A invenção oferece ainda produtos contendo o Rebaudiosídeo D purificado.HIGH PURITY REBAUDIOSIDE AND APPLICATIONS. The present invention provides methods for purifying Rebaudioside D from an extract of the Stevia rebaudiana Bertoni plant along with Rebaudioside A. The methods are useful for producing high purity Rebaudioside D and Rebaudioside A. The invention further provides products containing purified Rebaudioside D .

Description

Campo da InvençãoField of Invention

[001] A invenção refere-se a um processo para o isolamento e a purificação de glicosídeos doces individuais a partir de extrato da planta Stevia rebaudiana Bertoni, e mais particularmente ao isolamento e purificação do Rebaudiosídeo D a partir de extrato da planta Stevia rebaudiana Bertoni e ainda a produtos adoçados com adoçante de alta intensidade.[001] The invention relates to a process for the isolation and purification of individual sweet glycosides from an extract of the Stevia rebaudiana Bertoni plant, and more particularly to the isolation and purification of Rebaudioside D from an extract of the Stevia rebaudiana Bertoni plant and even products sweetened with a high-intensity sweetener.

Descrição da Técnica CorrelataDescription of the Related Technique

[002] Adoçaantes são ingredientes críticos no abastecimento de alimentos. A demanda por bebidas e produtos alimentícios de baixa caloria resulta no crescente consumo de adoçantes; por conseguinte é necessário reduzir as calorias oferecidas pelos adoçantes. Este objetivo pode ser atingido pelo uso de adoçantes de alta intensidade.[002] Sweeteners are critical ingredients in the food supply. The demand for low-calorie beverages and food products results in the increasing consumption of sweeteners; therefore it is necessary to reduce the calories offered by sweeteners. This objective can be achieved by the use of high-intensity sweeteners.

[003] Os adoçantes de alta intensidade possuem um nível de doçura muitas vezes mais alto que o da sacarose. Eles são essencialmente não calóricos e são amplamente usados na produção de alimentos diet e de caloria reduzida. Embora o adoçante calórico natural tal como sacarose, frutose e glicose proporcionem o sabor mais desejável aos consumidores, eles são calóricos. Os adoçantes de alta intensidade ãno afetam o nível de glicose no sangue e oferecem pouco ou nenhum valor nutritivo.[003] High-intensity sweeteners have a sweetness level many times higher than that of sucrose. They are essentially non-caloric and are widely used in the production of diet and reduced-calorie foods. Although natural caloric sweeteners such as sucrose, fructose and glucose provide the most desirable taste to consumers, they are caloric. High-intensity sweeteners do not affect the blood glucose level and offer little or no nutritional value.

[004] Entretanto, os adoçantes de alta intensidade que geralmente são usados como substitutos da sacarose possuem característicos de sabor diferentes daquelas do açúcar, tais como sabor doce com perfil temporal, resposta máxima, perfil de sabor, sensação na boca, e/ou comportamento de adaptação diferentes das do açúcar. Por exemplo, o sabor doce de alguns adoçantes de alta intensidade é mais lento no início e de duração mais longa do que aquele do açúcar e, portanto, varia o equilíbrio de sabor de uma composição alimentícia. Por causa destas diferenças, o uso de um adoçante de alta potência para substituir um adoçante em massa como o açúcar em um alimento ou bebida causa um perfil temporal e/ou de sabor desequilibrados. Se o perfil de sabor dos adoçantes de alta potência puder ser modificado para conferir características de sabor desejadas, ele pode proporcionar bebidas e produtos alimentícios de baixa caloria com características de sabor mais desejáveis para os consumidores.[004] However, high-intensity sweeteners that are commonly used as sucrose substitutes have flavor characteristics different from those of sugar, such as sweet taste with time profile, maximal response, flavor profile, mouthfeel, and/or behavior of adaptation different from those of sugar. For example, the sweet taste of some high-intensity sweeteners is slower in onset and longer lasting than that of sugar and therefore varies the flavor balance of a food composition. Because of these differences, using a high potency sweetener to replace a bulk sweetener such as sugar in a food or beverage causes an imbalanced temporal and/or flavor profile. If the flavor profile of high-potency sweeteners can be modified to impart desired flavor characteristics, it can provide low-calorie beverages and food products with more desirable flavor characteristics for consumers.

[005] Por outro lado, adoçantes de alta potência podem apresentar algumas vantagens em termos de custo e funcionais em comparação com o açúcar. A competição entre adoçantes de alta potência à base de açúcar e os adoçantes de alta potência sem açúcar é acirrada na indústria de bebidas leves, nos países em que seu uso e produção são permitidos e também nos países nos quais o preço do açúcar é exorbitante.[005] On the other hand, high-potency sweeteners may have some cost and functional advantages compared to sugar. Competition between sugar-based high-potency sweeteners and sugar-free high-potency sweeteners is fierce in the soft drink industry, in countries where its use and production are permitted, and also in countries where the price of sugar is exorbitant.

[006] Hoje em dia, adoçantes de alta intensidade são usados no mundo todo. Eles podem ser de origem sintética e natural.[006] Today, high-intensity sweeteners are used worldwide. They can be both synthetic and natural in origin.

[007] Exemplos não limitativos de adoçantes sintéticos incluem sucralose, acesulfame de potássio, aspartame, alitame, sacarina, derivados sintéticos de neo-hesperidina di-hidrochalcona, ciclamato, neotame, dulcin, suosan, 1-metil éster de N-[N-[3-(3-hidroxi-4-metoxifenil)propil]-L- a- aspartil]-L-fenilalanina, 1-metil éster de N-[N-[3- (3-hidroxi-4-metoxifenil)-3-metilbutil]-L- a- aspartil]-L- fenilalanina, 1-metil éster de N-[N-[3- (3-metoxi-4-hidroxifenil)propil]-L- a-aspartil]-L- fenilalanina, sais dos mesmos, entre outros, e combinações dos mesmos.[007] Non-limiting examples of synthetic sweeteners include sucralose, acesulfame potassium, aspartame, alitame, saccharin, synthetic derivatives of neohesperidin dihydrochalcone, cyclamate, neotame, dulcin, suosan, N-[N-1-methyl ester [3-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)propyl]-L-α-aspartyl]-L-phenylalanine, N-[N-[3-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)-3 1-methyl ester -methylbutyl]-L-α-aspartyl]-L-phenylalanine, N-[N-[3-(3-methoxy-4-hydroxyphenyl)propyl]-L-α-aspartyl]-L-phenylalanine 1-methyl ester , salts thereof, among others, and combinations thereof.

[008] Exemplos não limitativos de adoçantes naturais de alta intensidade incluem Steviosídeo, Rebaudiosídeo A, Rebaudiosídeo B, Rebaudiosídeo C, Rebaudiosídeo E, Rebaudiosídeo F, Steviolbiosídeo, Dulcosídeo A, Rubusosídeo, mogrosídeos, brazzein, neo-hesperidina di-hidrochalcona (NHDC), ácido glicizzícico e seus sais, taumatina, perilartina, pernandulcin, mucuroziosídeos, baiyunosídeos, flomisosídeo-I, ácido dimetil-hexa-hidrofluoreno- dicarboxílico, abrusosídeos, periandrin, carnosiflosídeos, ciclocariosídeo, pterocariosídeos, polipodosídeo A, brazilina, hernandulcin, filodulcin, glicifilina, florizina, trilobatina, di- hidroflavonol, di-hidroquercetin-3-acetato, neoastilibina, trans-cinamaldeído, monatina e seus sais, selligueain A, hematoxilina, monelina, osladina, pterocariosídeo A, pterocariosídeo B, mabinlina, pentadina, miraculina, curculina, neoculina, ácido clorogênico, cinarina, siamenosídeo e outros.[008] Non-limiting examples of high-intensity natural sweeteners include Stevioside, Rebaudioside A, Rebaudioside B, Rebaudioside C, Rebaudioside E, Rebaudioside F, Steviolbioside, Dulcoside A, Rubusoside, mogrosides, brazzein, neohesperidin dihydrochalcone (NHDC) , glycizzilic acid and its salts, thaumatin, perilartin, perandulcin, mucuroziosides, baiyunosides, flomisoside-I, dimethylhexahydrofluorenedicarboxylic acid, abrusosides, periandrin, carnosiflosides, cyclocaryoside, pterocaryosides, polypodoside A, brazilin, hernandulcin, filodulcin, glyciphylline , phlorizin, trilobatin, dihydroflavonol, dihydroquercetin-3-acetate, neoastilibin, trans-cinnamaldehyde, monatin and its salts, selligueain A, hematoxylin, monelin, osladin, pterocaryoside A, pterocaryoside B, mabinlin, pentadine, miraculin, curculin , neoculin, chlorogenic acid, cynarin, siamenoside and others.

[009] Os adoçantes de alta intensidade podem ser derivados da modificação deadoçantes de alta intensidade naturais, por exemplo, por fermentação, tratamento enzimático, ou derivatização.[009] High-intensity sweeteners may be derived from the modification of natural high-intensity sweeteners, for example, by fermentation, enzymatic treatment, or derivatization.

[0010] Atualmente cerca de onze adoçantes de alta intensidade são usados em todo o mundo. Estes são acesulfame-K, alitame, aspartame, ciclamato, glicirrizina, NHDC, sacarina, Steviosídeo, sucralose, taumatina, neotame, e Rebaudiosídeo A.[0010] Currently about eleven high-intensity sweeteners are used worldwide. These are Acesulfame-K, Alitame, Aspartame, Cyclamate, Glycyrrhizin, NHDC, Saccharin, Stevioside, Sucralose, Thaumatin, Neotame, and Rebaudioside A.

[0011] Os adoçantes de alta intensidade podem ser agrupados em três gerações. A primeira geração representada por ciclamato, glicirrizina e sacarina tem uma longa história de uso em alimentos. A segunda geração inclui acesulfame-K, aspartame, NHDC e taumatina. Alitame, neotame, sucralose, Steviosídeo, e Rebaudiosídeo A pertencem à terceira geração.[0011] High-intensity sweeteners can be grouped into three generations. The first generation represented by cyclamate, glycyrrhizin and saccharin has a long history of use in food. The second generation includes acesulfame-K, aspartame, NHDC and thaumatin. Alitame, Neotame, Sucralose, Stevioside, and Rebaudioside A belong to the third generation.

[0012] O poder adoçante padrão associado a cada adoçante de alta intensidade está dado na TABELA 1. No entanto, quando eles são usados em misturas, o poder adoçante pode mudar significativamente. TABELA 1 [0012] The standard sweetening power associated with each high-intensity sweetener is given in TABLE 1. However, when they are used in blends, the sweetening power can change significantly. TABLE 1

[0013] Por outro lado, alimentos e bebidas ‘naturais’ e ‘orgânicos’ tornaram-se a “área mais aquecida” na indústria alimentícia. A acombinação de desejo dos consumidores, avanços na tecnologia de alimentos, novos estudos associando dieta a doenças e prevenção de doenças criou uma oportunidade sem precedentes para abordar a saúde pública através da dieta e do estilo de vida.[0013] On the other hand, 'natural' and 'organic' foods and beverages have become the “hottest area” in the food industry. The combination of consumer desire, advances in food technology, new studies linking diet to disease, and disease prevention has created an unprecedented opportunity to address public health through diet and lifestyle.

[0014] Um número crescente de consumidores percebe a possibilidade de controlar a saúde melhorando sua saúde atual e/ou prevenindo-se contra doenças futuras. Isto gera uma demanda por produtos com características melhoradas e os benefícios para a saúde associados, especificamente uma tendência de mercado de alimentos e consumidores coltada para um estilo de vida com “soluções para a boa saúde”. O termo “natural” é bastante emocional no mundo de adoçantes e foi identificado como um crédito essencial, junto com “grãos integrais”, “saúde do seu coração” e “baixo teor de sódio”. O termo ‘natural’ está estreitamente associado a ‘mais saudável’.[0014] A growing number of consumers realize the possibility of controlling their health by improving their current health and/or preventing future illnesses. This generates a demand for products with enhanced features and the associated health benefits, specifically a trend in the food market and consumers collated towards a lifestyle with “solutions for good health”. The term “natural” is quite emotional in the world of sweeteners and has been identified as an essential credit, along with “whole grains”, “health of your heart” and “low sodium”. The term 'natural' is closely associated with 'healthier'.

[0015] Neste contexto, adoçantes naturais de alta intensidade podem ter um maior potencial comercial.[0015] In this context, high-intensity natural sweeteners may have greater commercial potential.

[0016] Açúcares calóricos naturais, tais como sacarose, frutose e glicose são utilizados pesadamente na indústria de bebidas, alimentos, higiene/cosméticos dentais e orais devido ao seu sabor agradável. Em particular, a sacarose confere um sabor desejável para os consumidores. Embora a sacarose proporcione características de doçura superiores, ela é calórica. Embora calorias sejam necessárias para o funcionamento adequado do corpo, ainda é necessário no mercado a oferta de adoçantes alternativos não calóricos ou pouco calóricos com gosto semelhante ao do açúcar para consumidores com vida sedentária ou para aqueles conscientes do abuso de calorias. Novas formulações de bebidas, alimentos e molhos com teor zero ou baixo teor de açúcar são desejáveis. No entanto, em geral, os adoçantes não calóricos ou pouco calóricos possuem gostos associados indesejáveis para os consumidores tais como início de doçura demorado; gosto residual adocicado; gosto amargo; gosto metálico; gosto adstringente; gosto refrescante; gosto licoroso; e/ou similares. Se o perfil de gosto dos adoçantes naturais e sintéticos de alta potência puder ser modificado para conferir característicos de gosto desejadas específicas de modo a ficarem mais parecidos com açúcar, o tipo e a variedades de composições que poderão ser preparados com aquele adoçante seria significativamente expandido. Por conseguinte, seria desejável modificar seletivamente as características de gosto dos adoçantes naturais e sintéticos de alta potência. Também é muito importante que produtos para diabéticos (sem açúcar) ou produtos com caloria reduzida tenham o mínimo possível de diferenças em relação aos itens convencionais.[0016] Natural high-calorie sugars such as sucrose, fructose and glucose are heavily used in the beverage, food, dental and oral hygiene/cosmetics industry due to their pleasant taste. In particular, sucrose imparts a desirable taste to consumers. Although sucrose provides superior sweetness characteristics, it is caloric. Although calories are necessary for the proper functioning of the body, there is still a need in the market to offer alternative non-caloric or low-calorie sweeteners that taste similar to sugar for consumers with a sedentary lifestyle or for those conscious of calorie abuse. New formulations of drinks, foods and sauces with zero or low sugar content are desirable. However, in general, no-calorie or low-calorie sweeteners have undesirable associated tastes for consumers such as delayed onset of sweetness; sweet aftertaste; bitter taste; metallic taste; astringent taste; refreshing taste; liqueur taste; and/or similar. If the taste profile of high potency natural and synthetic sweeteners can be modified to impart specific desired taste characteristics so that they are more like sugar, the type and variety of compositions that can be prepared with that sweetener would be significantly expanded. Therefore, it would be desirable to selectively modify the taste characteristics of high potency natural and synthetic sweeteners. It is also very important that products for diabetics (sugar free) or reduced calorie products have as few differences as possible from conventional items.

[0017] O desenvolvimento de novas formulações, por exemplo, empregando adoçantes, flavorizantes, realçadores de sabor, agentes de encorpamento entre outros, apresenta desafios em como lidar com o amargor associado e/ou outros sabores secundários e textura. Além disso, tais desafios se apresentam tipicamente nas formulações desenvolvidas para exibir características e/ou perfis de gosto melhorados mantendo as mesmas características de textura. Também, existe uma necessidade de novas formulações que atendam satisfatoriamente a combinação de objetivos que incluem objetivos nutricionais, de sabor, de vida de prateleira, e outros objetivos.[0017] The development of new formulations, for example, using sweeteners, flavors, flavor enhancers, bodying agents, among others, presents challenges in how to deal with the associated bitterness and/or other secondary flavors and texture. Furthermore, such challenges typically present themselves in formulations developed to exhibit improved characteristics and/or taste profiles while maintaining the same texture characteristics. Also, there is a need for new formulations that satisfactorily meet a combination of goals that include nutritional, taste, shelf life, and other goals.

[0018] Constitui um objetivo da invenção oferecer um produto tendo características de sabor e características físicas excelentes. O produto compreende pelo menos um adoçante natural não nutritivo em uma quantidade suficiente para proporcionar adoçamento perceptível. A composição oferece um perfil de doçura mais semelhante ao açúcar devido ao uso do novo adoçante natural de alta intensidade tal como Rebaudiosídeo D.[0018] It is an object of the invention to offer a product having excellent taste characteristics and physical characteristics. The product comprises at least one non-nutritive natural sweetener in an amount sufficient to provide perceptible sweetness. The composition offers a more sugar-like sweetness profile due to the use of a new high-intensity natural sweetener such as Rebaudioside D.

[0019] Stevia rebaudiana Bertoni é um arbusto perene da família Asteraceae (Compositae) nativa de certas regiões da América do Sul. As folhas da planta contêm de 10 a 20% de glicosídeos de diterpeno, que são em torno de 150 a 450 vezes mais doces que o açúcar. As folhas são tradicionalmente usadas há centenas de anos no Paraguai e no Brasil para adoçar chás e produtos medicinais locais.[0019] Stevia rebaudiana Bertoni is a perennial shrub of the Asteraceae family (Compositae) native to certain regions of South America. The leaves of the plant contain 10 to 20% of diterpene glycosides, which are around 150 to 450 times more sweeter than sugar. The leaves have been traditionally used for hundreds of years in Paraguay and Brazil to sweeten teas and local medicinal products.

[0020] Atualmente existem mais de 230 espécies de Stevia com propriedades adoçantes significativas. A planta vem sendo cultivada com sucesso em uma ampla gama de condições desde seus subtrópicos nativos até latitudes setentrionais frias.[0020] There are currently more than 230 species of Stevia with significant sweetening properties. The plant has been successfully cultivated in a wide range of conditions from its native subtropics to cool northern latitudes.

[0021] Glicosídeos de esteviol possuem zero calorias e podem ser usados em qualquer produto no qual se usa açúcar. Eles são ideais para dietas de diabéticos e de baixa caloria. Além disso, os glicosídeos de esteviol doces possuem propriedades funcionais e sensoriais superiores àquelas de muitos adoçantes de alta potência.[0021] Steviol glycosides have zero calories and can be used in any product that uses sugar. They are ideal for diabetic and low-calorie diets. Furthermore, sweet steviol glycosides possess functional and sensory properties superior to those of many high potency sweeteners.

[0022] O extrato da planta Stevia rebaudiana contém uma mistura de diferentes glicosídeos de diterpeno doces, que possuem uma base única - esteviol e diferem pela presença de resíduos carboidrato nas posições C13 e C19. Estes glicosídeos se acumulam nas folhas de Stevia e compõem aproximadamente 10% - 20% do peso seco total. Tipicamente, em termos de peso seco, os quatro principais glicosídeos encontrados nas folhas de Stevia são Dulcosídeo A (0,3%), Rebaudiosídeo C (0,6%), Rebaudiosídeo A (3,8%) e Steviosídeo (9,1%). Outros glicosídeos identificados no extrato de Stevia incluem Rebaudiosídeo B, C, D, E, e F, Steviolbiosídeo e Rubusosídeo (FIG. 1). Entre os glicosídeos de esteviol somente o Steviosídeo e o Rebaudiosídeo A encontram-se disponíveis em escala comercial.[0022] Stevia rebaudiana plant extract contains a mixture of different sweet diterpene glycosides, which have a single base - steviol and differ by the presence of carbohydrate residues at positions C13 and C19. These glycosides accumulate in Stevia leaves and make up approximately 10% - 20% of the total dry weight. Typically, in terms of dry weight, the four main glycosides found in Stevia leaves are Dulcoside A (0.3%), Rebaudioside C (0.6%), Rebaudioside A (3.8%) and Stevioside (9.1 %). Other glycosides identified in Stevia extract include Rebaudioside B, C, D, E, and F, Steviolbioside, and Rubusoside (FIG. 1). Among the steviol glycosides, only Stevioside and Rebaudioside A are commercially available.

[0023] As estruturas químicas dos glicosídeos de diterpeno de Stevia rebaudiana Bertoni estão apresentadas na FIG. 2.[0023] The chemical structures of diterpene glycosides from Stevia rebaudiana Bertoni are shown in FIG. two.

[0024] As propriedades físicas e sensoriais só são bem estudadas para o Stevioside e o Rebaudiosídeo A. A potência adoçante do Steviosídeo é cerca de 210 vezes maior que a da sacarose, a do Rebaudiosídeo A varia entre 200 e 400 vezes, e a do Rebaudiosídeo C e Dulcosídeo A é de cerca de 30 vezes. O Rebaudiosídeo A é considerado aquele que possui atributos sensoriais mais favorável dentre os quatro principais glicosídeos de esteviol (TABELA 2).[0024] The physical and sensory properties are only well studied for Stevioside and Rebaudioside A. The sweetening power of Stevioside is about 210 times greater than that of sucrose, that of Rebaudioside A varies between 200 and 400 times, and that of Rebaudioside C and Dulcoside A is about 30 times. Rebaudioside A is considered to have the most favorable sensory attributes among the four main steviol glycosides (TABLE 2).

[0025] Os glicosídeos das folhas podem ser extraídos usando extração com água ou solvente orgânico. Extração com fluido supercrítico e destilação a vapor também foram descritas. Métodos para a recuperação de glicosídeos de diterpeno doces de Stevia rebaudiana usando a tecnologia de membranas, e água ou solventes orgânicos, tais como metanol e etanol também estão descritos. TABELA 2 [0025] The glycosides from the leaves can be extracted using water or organic solvent extraction. Supercritical fluid extraction and steam distillation have also been described. Methods for the recovery of sweet diterpene glycosides from Stevia rebaudiana using membrane technology, and water or organic solvents such as methanol and ethanol are also described. TABLE 2

[0026] Existem diversas publicações sobre a purificação de alguns glicosídeos de esteviol individuais.[0026] There are several publications on the purification of some individual steviol glycosides.

[0027] Geralmente a produção de extrato inclui extração do material vegetal com água ou com uma mistura de água-solvente orgânico, precipitação das substâncias de alto peso molecular, desionização, e descoloração, purificação sobre adsorventes poliméricos macroporosos específicos, concentração e secagem.[0027] Generally, extract production includes extraction of plant material with water or with a water-organic solvent mixture, precipitation of high molecular weight substances, deionization, and decolorization, purification on specific macroporous polymeric adsorbents, concentration and drying.

[0028] A Patente US N ° 3.723.410 apresenta a extração de Steviosídeos de Stevia rebaudiana Bertoni. O método inclui remover a gordura das folhas de Stevia por tratamento com clorofórmio por mais de 150 horas a temperaturas de ebulição e três tratamentos com dioxano na presença de carbonato de cálcio por duas horas a temperaturas de ebulição. Depois da filtração, os filtrados de dioxano foram combinados e concentrados até atingir o estado de xarope à pressão reduzida a 50°C. Um volume igual de metanol foi então acrescentado ao xarope e a solução resultante foi deixada descansar por uma noite para permitir a cristalização. Os cristais foram recolhidos por filtração e lavados abundantemente com metanol gelado. A solução residual foi concentrada, um volume igual de metanol foi acrescentado, e a mistura foi deixada descansar por uma noite para cristalizar. Os cristais foram removidos por filtração e secados a vácuo a 100 °C. O rendimento de Steviosídeo foi de 6,5% provenientedas folhas secadas ao ar. O método é muito complicado com o uso de solventes orgânicos tóxicos. Não há informações sobre a pureza do Steviosídeo, no entanto nas condições descritas Rebaudiosídeos vão precipitar junto com o Steviosídeo. O processo é de difícil aplicação em escala comercial.[0028] US Patent No. 3,723,410 discloses the extraction of Steviosides from Stevia rebaudiana Bertoni. The method includes defatting Stevia leaves by treatment with chloroform for over 150 hours at boiling temperatures and three treatments with dioxane in the presence of calcium carbonate for two hours at boiling temperatures. After filtration, the dioxane filtrates were combined and concentrated to a syrup under reduced pressure at 50°C. An equal volume of methanol was then added to the syrup and the resulting solution was allowed to stand overnight to allow crystallization. The crystals were collected by filtration and washed thoroughly with ice-cold methanol. The residual solution was concentrated, an equal volume of methanol was added, and the mixture was allowed to stand overnight to crystallize. The crystals were filtered off and dried under vacuum at 100°C. Stevioside yield was 6.5% from air-dried leaves. The method is very complicated with the use of toxic organic solvents. There is no information about the purity of the Stevioside, however under the described conditions Rebaudiosides will precipitate together with the Stevioside. The process is difficult to apply on a commercial scale.

[0029] Um método para a produção de extrato de Stevia com isolamento adicional de Rebaudiosídeo A foi desenvolvido na Patente US N° 4.082.858. As folhas de Stevia secadas ao ar foram extraídas com água quente, e o extrato foi secado a vácuo. A mistura resultante foi extraída com metanol e o metanol foi removido dos extratos combinados por destilação à pressão reduzida. O xarope obtido foi submetido à separação cromatográfica sobre uma coluna de sílica gel usando uma mistura de n- propanol, água e etil acetato como a fase móvel. O método é útil apenas em escala laboratorial e apresenta várias desvantagens em escala comercial.[0029] A method for producing Stevia extract with additional isolation of Rebaudioside A was developed in US Patent No. 4,082,858. The air-dried stevia leaves were extracted with hot water, and the extract was vacuum dried. The resulting mixture was extracted with methanol and methanol was removed from the combined extracts by distillation under reduced pressure. The syrup obtained was subjected to chromatographic separation on a silica gel column using a mixture of n-propanol, water and ethyl acetate as the mobile phase. The method is only useful on a laboratory scale and has several disadvantages on a commercial scale.

[0030] A Patente US N° 4.171.430 descreve a purificação de Stevioside a partir de extrato de Stevia. O método inclui extrair folhas de Stevia com água, concentrar a solução e extrair com metanol. Steviosídeo cristalizou a partir da solução de metanol e foi purificado em gel tipo estireno com tetra-hidrofurano como a fase móvel. O método é útil apenas em escala laboratorial. O processo é de difícil aplicação em escala comercial.[0030] US Patent No. 4,171,430 describes the purification of Stevioside from Stevia extract. The method includes extracting Stevia leaves with water, concentrating the solution and extracting with methanol. Stevioside crystallized from the methanol solution and was purified on a styrene gel with tetrahydrofuran as the mobile phase. The method is only useful on a laboratory scale. The process is difficult to apply on a commercial scale.

[0031] A Patente US N° 4.361.697 apresenta a extração, separação e recuperação de glicosídeos de diterpeno a partir de Stevia rebaudiana. O processo inclui as etapas de extração sequencial de material vegetal primeiro com um solvente de polaridade intermediária (tal como clorofórmio), e em seguida com um segundo solvente de alta polaridade (tal como metanol). O extrato resultante foi submetido a uma separação por cromatografia líquida. Os glicosídeos de esteviol ficaram na fração de metanol. Os principais inconvenientes foram o uso de vários solventes tóxicos para extrair e processar os glicosídeos doces. A purificação final dos glicosídeos foi obtida por cromatografia em coluna usando sorventes como sílica gel como a fase estacionária e eluição da coluna com dois solventes passando em sequência pela coluna. O processo é prejudicial ao meio ambiente e de difícil execução em grande escala.[0031] US Patent No. 4,361,697 presents the extraction, separation and recovery of diterpene glycosides from Stevia rebaudiana. The process includes the steps of sequentially extracting plant material first with an intermediate polarity solvent (such as chloroform), and then with a second high polarity solvent (such as methanol). The resulting extract was subjected to liquid chromatography separation. Steviol glycosides remained in the methanol fraction. The main drawbacks were the use of various toxic solvents to extract and process the sweet glycosides. Final purification of the glycosides was achieved by column chromatography using sorbents such as silica gel as the stationary phase and column elution with two solvents passing sequentially through the column. The process is harmful to the environment and difficult to carry out on a large scale.

[0032] Um método aperfeiçoado para a recuperação de glicosídeos de esteviol a partir da planta Stevia rebaudiana Bertoni, que não requer o uso de equipamento de separação especial tal como colunas de troca iônica e/ou colunas cromatográficas foi descrito na Patente US N° 4.599.403. A extração é realizada com água. O extrato aquoso resultante é tratado com ácido cítrico para remover impurezas metálicas e outras impurezas assim como para baixar o pH para cerca de 3,0. A mistura é filtrada através de Celite e o pH do filtrado é ajustado em 10,5 por óxido de cálcio. O precipitado formado é removido por filtração. O filtrado é concentrado e extraído com n-butanol. Cristais de Steviosídeo purificado são então recuperados por resfriamento da camada de água obtida da etapa de extração com solvente. As principais desvantagens do método são as perdas de glicosídeos durante a extração com n-butanol e também o baixo rendimento de cristais de Steviosídeo provenientes da solução aquosa. O teor de sal no produto final pode ser alto. Não existem dados sobre a pureza final do Steviosídeo. O processo é de difícil aplicação em escala comercial.[0032] An improved method for the recovery of steviol glycosides from the Stevia rebaudiana Bertoni plant, which does not require the use of special separation equipment such as ion exchange columns and/or chromatographic columns has been described in US Patent No. 4,599 .403. Extraction is carried out with water. The resulting aqueous extract is treated with citric acid to remove metallic and other impurities as well as to lower the pH to about 3.0. The mixture is filtered through Celite and the filtrate is adjusted to pH 10.5 by calcium oxide. The formed precipitate is removed by filtration. The filtrate is concentrated and extracted with n-butanol. Purified Stevioside crystals are then recovered by cooling the water layer obtained from the solvent extraction step. The main disadvantages of the method are the loss of glycosides during extraction with n-butanol and also the low yield of stevioside crystals from the aqueous solution. The salt content in the final product can be high. There are no data on the final purity of Stevioside. The process is difficult to apply on a commercial scale.

[0033] A Patente US N° 4.892.938 e o documento JP N ° 01-131191 descrevem um processo de purificação no qual o extrato da planta foi obtido por meio de tratamento em água a uma temperatura que vai da temperatura ambiente a cerca de 65°C com agitação e subsequente filtração e centrifugação. Este extrato foi tratado com hidróxido de cálcio e o precipitado foi removido por filtração ou centrifugação. Este filtrado foi tratado com uma resina trocadora de íons ácidos forte e subsequentemente com uma resina trocadora de íons básicos forte. Os glicosídeos doces ficaram na água e foram recuperados por evaporação da água. A desvantagem é que o produto final tem uma pureza bem baixa. O teor de glicosídeos doces no produto final foi de apenas cerca de 70%.[0033] US Patent No. 4,892,938 and JP document No. 01-131191 describe a purification process in which the plant extract was obtained by treatment in water at a temperature ranging from room temperature to about 65°C with agitation and subsequent filtration and centrifugation. This extract was treated with calcium hydroxide and the precipitate was removed by filtration or centrifugation. This filtrate was treated with a strong acidic ion exchanger resin and subsequently with a strong basic ion exchanger resin. The sweet glycosides remained in the water and were recovered by evaporating the water. The downside is that the final product has a very low purity. The sweet glycoside content in the final product was only around 70%.

[0034] A Patente US N° 5.112.610 descreve um processo de preparação de adoçante natural à base de Stevia rebaudiana. O método inclui extração do material da planta de Stevia rebaudiana com um solvente orgânico e submissão da solução à extração com gás supercrítico (CO2) para obter um resíduo, que era livre de constituintes indesejados e de constituintes que prejudicavam o sabor. De um modo geral, o método refere-se à remoção de ceras da cutícula, clorofila, outros pigmentos e especialmente componentes que prejudicam o sabor das folhas ou extrato de Stevia. No entanto o tratamento direto das folhas requer uma grande quantidade de material de partida de modo que o uso de folhas não é econômico mesmo quando se aumenta a densidade de massa das folhas desidratadas ou cominuídas por prensagem das mesmas para formar pelotas antes da extração. O tratamento do extrato em pó, que é obtido das folhas por um método convencional, permite a remoção de componentes que prejudicam o sabor em um grau muito pequeno, e sem o emprego de substâncias de arraste (álcoois de baixo peso molecular, hidrocarboneto adequado ou mistura dos solventes) não atinge resultados totalmente satisfatórios. Além disso, não existem dados quantificados sobre a pureza efetiva do extrato. O processo é de difícil aplicação em escala comercial.[0034] US Patent No. 5,112,610 describes a process for preparing a natural sweetener based on Stevia rebaudiana. The method includes extracting the material from the Stevia rebaudiana plant with an organic solvent and subjecting the solution to supercritical gas (CO2) extraction to obtain a residue, which was free of undesired and taste-impairing constituents. Generally speaking, the method refers to the removal of cuticle waxes, chlorophyll, other pigments and especially flavor-impairing components from the stevia leaves or extract. However, direct treatment of leaves requires a large amount of starting material so that the use of leaves is not economical even when increasing the bulk density of dehydrated or comminuted leaves by pressing them to form pellets before extraction. The treatment of the powdered extract, which is obtained from the leaves by a conventional method, allows the removal of components that impair the flavor in a very small degree, and without the use of carrier substances (low molecular weight alcohols, adequate hydrocarbon or mixture of solvents) does not reach completely satisfactory results. Furthermore, there are no quantified data on the effective purity of the extract. The process is difficult to apply on a commercial scale.

[0035] A Patente US N° 5.962.678 descreve um processo multietapas de extração e purificação de Rebaudiosídeo A da planta Stevia rebaudiana. O extrato da planta é obtido por meio de tratamento em água a uma temperatura variando da temperatura ambiente a cerca de 65 ° C com agitação e subsequente filtração e centrifugação. Este extrato foi tratado com hidróxido de cálcio e o precipitado foi removido por filtração ou centrifugação. Este filtrado foi tratado com uma resina trocadora de íons ácidos forte e subsequentemente com uma resina trocadora de íons básicos fraca. Os glicosídeos doces ficaram na água e foram recuperados por evaporação da água. O teor de glicosídeos de esteviol no extrato neste estágio era de apenas 70%. Para purificação adicional o produto foi passado por uma coluna com Amberlite XAD-7, que era capaz de adsover glicosídeos de esteviol. Depois de lavagem com água, os glicosídeos foram dessorvidos com metanol. A pureza do extrato ficou em torno de 95% com uma quantidade significativa do chamado óleo amarelo. Para isolar Steviosídeo e Rebaudiosídeo A individuais o sólido seco foi refluxado em uma solução anidra de metanol e em seguida resfriado para precipitar o Steviosídeo com 91,6% de puriza. No entanto, o rendimento de Steviosídeo foi de apenas 15% do extrato de Stevia contendo 60% de Steviosídeo. O Steviosídeo pode ser ainda purificado por refluxo do mesmo em uma solução de metanol-água. A pureza do produto foi de cerca de 99%.[0035] US Patent No. 5,962,678 describes a multi-step extraction and purification process for Rebaudioside A from the Stevia rebaudiana plant. The plant extract is obtained by treatment in water at a temperature ranging from room temperature to about 65°C with agitation and subsequent filtration and centrifugation. This extract was treated with calcium hydroxide and the precipitate was removed by filtration or centrifugation. This filtrate was treated with a strong acidic ion exchanger resin and subsequently with a weak basic ion exchanger resin. The sweet glycosides remained in the water and were recovered by evaporating the water. The steviol glycoside content in the extract at this stage was only 70%. For further purification the product was passed over a column with Amberlite XAD-7, which was capable of adsovering steviol glycosides. After washing with water, the glycosides were desorbed with methanol. The purity of the extract was around 95% with a significant amount of so-called yellow oil. To isolate individual Stevioside and Rebaudioside A the dried solid was refluxed in an anhydrous methanol solution and then cooled to precipitate the Stevioside with 91.6% purify. However, the Stevioside yield was only 15% of the Stevia extract containing 60% Stevioside. Stevioside can be further purified by refluxing it in a methanol-water solution. The purity of the product was about 99%.

[0036] Um produto mais purificado pode ser produzido pelo uso combinado de microfiltração, ultrafiltração, e nanofiltração como descrito na Patente US N° 5.972.120. A extração foi efetuada ininterruptamente em colunas de fluxo contínuo. O tamanho de partícula médio ótimo das folhas tinha que ser de cerca de 20 mm. Com partículas menores, a taxa de filtração diminuía substancialmente uma que vez a coluna ficava entupida. Água inicial foi adicionada em uma quantidade de 0,05 parte por uma parte de folhas desidratadas (em peso). A temperatura da coluna foi regulada em no máximo 4°C, e a extração foi efetuada com água a um pH na faixa de 2,0-4,0 (ajustado com ácido fosfórico). A baixas temperaturas e pH, ocorreu uma extração mais seletiva e foi obtida uma solução quase incolor. O extrato foi então filtrado por membranas de cerâmica tubulares e, em seguida, por membrans de ultrafiltração. O filtrado produzido foi separado das impurezas de baixo peso molecular nas nanomembranas a temperaturas elevadas.[0036] A more purified product can be produced by the combined use of microfiltration, ultrafiltration, and nanofiltration as described in US Patent No. 5,972,120. The extraction was carried out uninterruptedly in continuous flow columns. The optimal average particle size of the sheets had to be around 20 mm. With smaller particles, the filtration rate decreased substantially once the column became clogged. Starter water was added in an amount of 0.05 part per one part of dried leaves (by weight). The column temperature was regulated to a maximum of 4°C, and the extraction was carried out with water at a pH in the range of 2.0-4.0 (adjusted with phosphoric acid). At low temperatures and pH, more selective extraction occurred and an almost colorless solution was obtained. The extract was then filtered through tubular ceramic membranes and then through ultrafiltration membranes. The filtrate produced was separated from low molecular weight impurities on the nanomembranes at elevated temperatures.

[0037] Um método de preparação de extrato de Stevia está descrito nas Patentes US N°s 6.031.157 e 6.080.561. As folhas desidratadas foram extraídas com 10 a 20 partes de água várias vezes. Os extratos resultantes foram combinados e passados lentamente por uma coluna cheia de resina trocadora de cátions e em seguida por uma coluna cheia de resina trocadora de ânions. A solução tratada foi então passada por uma coluna guarnecida com uma resina (Amberlite XAD-2) para adsorver os componentes adoçantes, e em seguida lavada com água. Depois que a água foi drenada da coluna, ela foi eluída com três volumes de metanol para isolar os componentes adoçantes. O efluente foi concentrado e ainda secado à pressão reduzida para obter um pó amarelo pálido. O principal inconveniente do método é a pouca quantidade de extrato. Tratamento com apenas trocadores de íons e adsorventes específicos não pode resultar em extrato de Stevia de alta qualidade de cor branca e alto teor de glicosídeos de esteviol.[0037] A method of preparing Stevia extract is described in US Patent Nos. 6,031,157 and 6,080,561. Dehydrated leaves were extracted with 10 to 20 parts of water several times. The resulting extracts were combined and passed slowly through a column filled with cation exchange resin and then through a column filled with anion exchange resin. The treated solution was then passed through a column packed with a resin (Amberlite XAD-2) to adsorb the sweetening components, and then washed with water. After the water drained from the column, it was eluted with three volumes of methanol to isolate the sweetening components. The effluent was concentrated and further dried under reduced pressure to obtain a pale yellow powder. The main inconvenience of the method is the small amount of extract. Treatment with only ion exchangers and specific adsorbents cannot result in high quality stevia extract with a white color and a high content of steviol glycosides.

[0038] O Pedido de Patente US Publicado N° 2006/0142555 apresenta um processo para a produção de Steviosídeos a partir da planta Stevia rebaudiana. O método inclui extração de pó da planta por injeção direta de vapor no extrator seguida de filtração para obter um extrato aquoso e tratamento com hidróxido de cálcio para remover as impurezas na forma de precipitado. O filtrado foi tratado com uma resina trocadora de cátions forte e em seguida com uma resina trocadora de ânions básicos fraca. O eluato aquoso contendo Steviosídeos foi concentrado para obter Steviosídeos purificados com um teor de Steviosídeos de 45,47-65,5% no produto final. O método apresentado é adequado para a produção de extrato de Stevia com teor variado de Steviosídeo mas não de glicosídeos de esteviol altamente purificados.[0038] Published US Patent Application No. 2006/0142555 presents a process for the production of Steviosides from the Stevia rebaudiana plant. The method includes extraction of plant powder by direct injection of steam into the extractor followed by filtration to obtain an aqueous extract and treatment with calcium hydroxide to remove impurities in precipitated form. The filtrate was treated with a strong cation exchange resin and then with a weak basic anion exchange resin. The aqueous eluate containing Steviosides was concentrated to obtain purified Steviosides with a Steviosides content of 45.47-65.5% in the final product. The presented method is suitable for producing stevia extract with varying stevioside content but not highly purified steviol glycosides.

[0039] A Publicação do Pedido de Patente US N° 2006/0083838 reporta um método de isolamento e purificação de Rebaudiosídeo A a partir do material de partida Stevia rebaudiana comercialmente disponível. O métod compreende: (1) um estágio de formulação de EtOH para formular um solvente de EtOH selecionado, (2) um primeiro estágio de refluxo usando o material de partida Stevia e opcionalmente estágios de refluxo adicionais usando retentado isolado de uma mistura refluxada ou de uma mistura de lavagem agitada, (3) opcionalmente, um ou mais estágios de lavagem agitada, e (4) um estágio de purga de etanol e secagem. Nas modalidades que utilizaram o material de partida Stevia de qualidade inferior, um segundo estágio de refluxo foi tipicamente acrescentado antes do estágio de lavagem agitada para maximizar a pureza do produto final Rebaudiosídeo A. No método reportado, um estágio de formulação de EtOH foi conduzido para formular um solvente de refluxo desejado para uso nas etapas de refluxo. Tipicamente, o solvente de refluxo foi uma mistura de etanol e água com cerca de 5% a 15% em volume de água. O processo inclui ainda uma ou mais etapas de refluxo de energia intensificada que foram tipicamente conduzidas a uma temperatura de cerca de 89oC a 90oC por cerca de 1 hora. O método produziu declaradamente Rebaudiosídeo A solúvel em água 100% puro.[0039] US Patent Application Publication No. 2006/0083838 reports a method of isolating and purifying Rebaudioside A from the commercially available starting material Stevia rebaudiana. The method comprises: (1) an EtOH formulation stage to formulate a selected EtOH solvent, (2) a first reflux stage using Stevia starting material, and optionally additional reflux stages using retentate isolated from a refluxed mixture or an agitated washing mixture, (3) optionally, one or more agitated washing stages, and (4) an ethanol purge and drying stage. In embodiments using the lower quality Stevia starting material, a second reflux stage was typically added before the agitated wash stage to maximize the purity of the final Rebaudioside A product. In the reported method, an EtOH formulation stage was conducted to formulate a desired reflux solvent for use in the reflux steps. Typically, the reflux solvent was a mixture of ethanol and water with about 5% to 15% by volume of water. The process further includes one or more power-enhanced reflux steps which were typically conducted at a temperature of about 89°C to 90°C for about 1 hour. The method reportedly produced 100% pure water-soluble Rebaudioside A.

[0040] O Pedido de Patente US N° 2006/0134292 reporta um processo para recuperar glicosídeos doces a partir do material vegetal Stevia rebaudiana. As folhas desidratadas e transformadas em pó foram tratadas com água na presença de uma pectinase, celulase, e alfa-amilase. Já foi reportado que o uso de tais enzimas aumenta consideravelmente a taxa de extração e facilita os estágios de purificação seguintes. O extrato resultante foi purificado usando tratamento com hidróxido de cálcio e ultrafiltração. O permeado foi passado por uma coluna guarnecida com bentonita e concentrado a vácuo até o estado de xarope. O tratamento com etanol permitiu separar o Rebaudiosídeo A praticamente puro da mistura. O Rebaudiosídeo A com alta pureza foi obtido depois de lavagem dos cristais com 88-95% de etanol.[0040] US Patent Application No. 2006/0134292 reports a process for recovering sweet glycosides from plant material Stevia rebaudiana. The dehydrated and powdered leaves were treated with water in the presence of a pectinase, cellulase, and alpha-amylase. It has already been reported that the use of such enzymes considerably increases the extraction rate and facilitates the subsequent purification stages. The resulting extract was purified using calcium hydroxide treatment and ultrafiltration. The permeate was passed through a column packed with bentonite and vacuum concentrated to a syrup. Treatment with ethanol allowed to separate practically pure Rebaudioside A from the mixture. High purity Rebaudioside A was obtained after washing the crystals with 88-95% ethanol.

[0041] O Pedido de Patente US N° 2007/0082103 reporta um processo para a preparação de extrato de Stevia e Steviosídeo e Rebaudiosídeo A altamente purificados. As folhas desidratadas e transformadas em pó foram submetidas à extração com água e o extrato resultante foi purificado usando tratamento com uma base tal como hidróxido de cálcio e em seguida cloreto de ferro. O filtrado foi desionizado usando resinas trocadoras de íons, concentrado a vácuo e secado por aspersão. Rebaudiosídeo A e Steviosídeo altamente purificados foram obtidos por dissolução do extrato em metanol para precipitar Steviosídeo. A solução remanescente depois de isolamento do Steviosídeo foi secada e Rebaudiosídeo A foi isolado por tratamento com etanol. A purificação final do Rebaudiosídeo A foi desenvolvida por tratamento com uma solução de etanol-água. A pureza foi de pelo menos 98%.[0041] US Patent Application No. 2007/0082103 reports a process for the preparation of Stevia extract and highly purified Stevioside and Rebaudioside A. The dried and powdered leaves were subjected to water extraction and the resulting extract purified using treatment with a base such as calcium hydroxide and then iron chloride. The filtrate was deionized using ion exchange resins, vacuum concentrated and spray dried. Highly purified Rebaudioside A and Stevioside were obtained by dissolving the extract in methanol to precipitate Stevioside. The solution remaining after Stevioside isolation was dried and Rebaudioside A was isolated by ethanol treatment. The final purification of Rebaudioside A was carried out by treatment with an ethanol-water solution. The purity was at least 98%.

[0042] O Pedido de Patente US Publicado N ° 20070292582 descreve a purificação de Rebaudiosídeo A. O método compreende as etapas de combinar Rebaudiosídeo A bruto e um solvente orgânico aquoso para formar uma solução de Rebaudiosídeo A, a solução orgânica aquosa compreendendo água em uma quantidade de cerca de 10% a cerca de 25% em peso, e cristalização a partir da solução de Rebaudiosídeo A bruto, em uma única etapa, de Rebaudiosídeo A substancialmente puro com pureza superior a 95%. No caso da mistura de etanol-metanol-água, o rendimento de Rebaudiosídeo A com pureza superior a 97% foi de 32,5% a partir do material de partida contendo 77,4% de Rebaudiosídeo A. O rendimento a partir do material de partida contendo 80,37% de Rebaudiosídeo A ficou na faixa de 54,6-72,0%. Outros cossolventes usados junto com etanol tais como etil acetato, 1- butanol, 2-butanol, ter-butanol, sec-butanol, acetonitrila, isopropanol, e 1-propanol não foram adequados para a produção de Rebaudiosídeo A com pureza superior a 97%. No caso do uso de etanol com quantidades variadas de água como o solvente de cristalização o rendimento de Rebaudiosídeo A ficou na faixa de 39,6%-76,4% a partir do material de partida contendo 80,37% Rebaudiosídeo A. O processo usou a mistura de dois solventes orgânicos, cuja recuperação e purificação em grande escala foi muito complicada. Além disso, em escala comercial, quando a centrifugação leva um tempo relativamente longo, pode ocorrer coprecipitação de Stevioside, Rebaudiosídeo C, e Rebaudiosídeo D.[0042] Published US Patent Application No. 20070292582 describes the purification of Rebaudioside A. The method comprises the steps of combining crude Rebaudioside A and an aqueous organic solvent to form a solution of Rebaudioside A, the aqueous organic solution comprising water in a amount of about 10% to about 25% by weight, and crystallization from solution of crude Rebaudioside A, in a single step, of substantially pure Rebaudioside A with purity greater than 95%. In the case of the ethanol-methanol-water mixture, the yield of Rebaudioside A with purity greater than 97% was 32.5% from the starting material containing 77.4% of Rebaudioside A. The yield from the material from batch containing 80.37% Rebaudioside A was in the range of 54.6-72.0%. Other cosolvents used in conjunction with ethanol such as ethyl acetate, 1-butanol, 2-butanol, tert-butanol, sec-butanol, acetonitrile, isopropanol, and 1-propanol were not suitable for the production of Rebaudioside A with purity greater than 97% . In the case of using ethanol with varying amounts of water as the crystallization solvent the yield of Rebaudioside A was in the range of 39.6%-76.4% from the starting material containing 80.37% Rebaudioside A. The process used a mixture of two organic solvents, whose recovery and purification on a large scale was very complicated. Furthermore, on a commercial scale, when centrifugation takes a relatively long time, coprecipitation of Stevioside, Rebaudioside C, and Rebaudioside D may occur.

[0043] O Pedido de Patente US N° 2008/0300402 e a Patente Chinesa N° 101200480 reportam um método para produzir Rebaudiosídeo A purificado compreendendo as seguintes etapas: separação de Rebaudiosídeo A em uma coluna cromatografica guarnecida com sílica gel usando uma mistura de etil acetato, etanol e água como a fase móvel. As frações de Rebaudiosídeo A foram combinadas e secadas. O sólido foi tratado com etanol contendo de 2 a 10% de água e Rebaudiosídeo A foi cristalizado por resfriamento da mistura a - 20°C. A pureza do Rebaudiosídeo A pode chegar a mais de 99%. Para a purificação do Rebaudiosídeo A, o filtrado depois da separação do Steviosídeo foi concentrado e resfriado para 0oC por uma noite por cerca de 16 horas. O precipitado de Rebaudiosídeo A resultante foi filtrado, lavado com um pequeno volume de metanol frio, e secado para obter Rebaudiosídeo A com 79,0% de pureza e 3,3% de rendimento a partir do extrato inicial. Este Rebaudiosídeo A bruto foi ainda purificado por refluxo em metanol anidro ou em uma mistura de metanol-água. A partir do material de partida contendo 90,2% de Rebaudiosídeo A o rendimento do produto ficou em torno de 67% com 98,6% de pureza. No entanto, o método para melhorar a pureza do Rebaudiosídeo A de 79% para 90,2% não se encontra disponível. O principal inconveniente do processo é baixo rendimento dos produtos finais, que faz deste um processo não adequado para a produção comercial de Steviosídeo e Rebaudiosídeo A altamente purificados.[0043] US Patent Application No. 2008/0300402 and Chinese Patent No. 101200480 report a method for producing purified Rebaudioside A comprising the following steps: separation of Rebaudioside A on a chromatographic column packed with silica gel using a mixture of ethyl acetate, ethanol and water as the mobile phase. The Rebaudioside A fractions were combined and dried. The solid was treated with ethanol containing from 2 to 10% water and Rebaudioside A was crystallized by cooling the mixture to -20°C. The purity of Rebaudioside A can reach more than 99%. For the purification of Rebaudioside A, the filtrate after Stevioside separation was concentrated and cooled to 0°C overnight for about 16 hours. The resulting Rebaudioside A precipitate was filtered, washed with a small volume of cold methanol, and dried to obtain Rebaudioside A in 79.0% purity and 3.3% yield from the initial extract. This crude Rebaudioside A was further purified by refluxing in anhydrous methanol or a methanol-water mixture. From the starting material containing 90.2% Rebaudioside A the product yield was around 67% with 98.6% purity. However, the method to improve the purity of Rebaudioside A from 79% to 90.2% is not available. The main drawback of the process is the low yield of the final products, which makes this process unsuitable for the commercial production of highly purified Stevioside and Rebaudioside A.

[0044] Várias patentes japonesas também abordam a preparação de extrato a partir de Stevia rebaudiana Bertoni.[0044] Several Japanese patents also address the preparation of extract from Stevia rebaudiana Bertoni.

[0045] O documento JP N° 52-100500 descreve a purificação e concentração de extrato de Steviosídeo aquoso por tratamento do extrato com uma resina trocadora de íons específica de alta capacidade descolorante, seguido por tratamento com um adsorvente específico tipo Amberlite XAD. Tratamento apenas com trocadores de íons e adosrção/dessorção não consegue resultar em extrato de alta qualidade.[0045] Document JP N° 52-100500 describes the purification and concentration of aqueous Stevioside extract by treating the extract with a specific ion exchange resin of high bleaching capacity, followed by treatment with a specific adsorbent type Amberlite XAD. Treatment with ion exchangers and adsorption/desorption alone cannot result in high quality extract.

[0046] O documento JP N° 52-136200 apresenta a preparação deuma solução de Steviosídeo por extração com água quente ou álcool hidratado seguida de separação em membrana. Os pesos moleculares dos glicosídeos doces e da esterebinas são muito próximos e sistemas de membrana não podem resultar em resolução satisfatória desses compostos, o que vai afetar a pureza do extrato. O teor de sais no produto final será alto.[0046] Document JP N° 52-136200 presents the preparation of a Stevioside solution by extraction with hot water or hydrated alcohol followed by membrane separation. The molecular weights of sweet glycosides and sterebins are very close and membrane systems cannot result in satisfactory resolution of these compounds, which will affect the purity of the extract. The salt content in the final product will be high.

[0047] O documento JP N° 52-005800 apresenta um método de preparação de Steviosídeo purificado a partir de folhas de Stevia rebaudiana por extração e tratamento com uma resina trocadora de cátions. Tal tratamento vai resultar em um pó amarelo com teor de glicosídeos doces aparentemente baixo.[0047] Document JP N° 52-005800 presents a method of preparing purified Stevioside from leaves of Stevia rebaudiana by extraction and treatment with a cation exchange resin. Such treatment will result in a yellow powder with apparently low sweet glycoside content.

[0048] A Patente Japonesa JP54030199 apresenta um processo para a preparação do agente adoçante Stevia livre do cheiro e sabor amargo característicos, por extração de folhas de Stevia rebaudiana Bertoni com água, tratamento do extrato com uma resina adsorvente sintética não polar seguido de dessorção, e tratamento adicional com uma resina trocadora de íons. O processo é muito parecido com a tecnologia chinesa tradicional, que permite produzir extrato de Stevia com um teor de glicosídeos de esteviol de no máximo 85-86%.[0048] The Japanese Patent JP54030199 presents a process for the preparation of the sweetening agent Stevia free of the characteristic smell and bitter taste, by extracting leaves of Stevia rebaudiana Bertoni with water, treating the extract with a non-polar synthetic adsorbent resin followed by desorption, and further treatment with an ion exchange resin. The process is very similar to traditional Chinese technology, which allows you to produce stevia extract with a maximum 85-86% steviol glycoside content.

[0049] O documento JP N° 54-132599 apresenta a separação e purificação de Steviosídeo por extração de folhas de Stevia com água quente, tratamento do extrato com um adsorvente sintético não polar, lavagem da resina com uma solução aquosa de cal extinta, e eluição do Steviosídeo da resina com um solvente orgânico hidrófilo ou um solvente orgânico hidrófilo hidratado. Tratamento apenas com adsorvente sintético não polar não é capaz de resultar em extrato de alta qualidade; não foram feitas medidas referentes aos sais residuais ou à cor do produto.[0049] Document JP No. 54-132599 presents the separation and purification of Stevioside by extracting Stevia leaves with hot water, treating the extract with a non-polar synthetic adsorbent, washing the resin with an aqueous solution of slaked lime, and eluting the Stevioside from the resin with a hydrophilic organic solvent or a hydrated hydrophilic organic solvent. Treatment with non-polar synthetic adsorbent alone is not able to result in high quality extract; no measurements were made regarding residual salts or the color of the product.

[0050] O documento JP N° 55-159770 refere-se à extração e purificação de Steviosídeo por extração de folhas de Stevia com água ou álcool hidratado. O extrato foi concentrado até um teor de sólidos de 10 a 50%, acrescido de 0,1-5,0% de cloreto de cálcio para coagular e precipitar as impurezas coloidais existentes no extrato. Não foi possível remover da solução concentrada usando CaCl2 a maioria das impurezas. Não há estágios de dessalinização e descoloração.[0050] Document JP N° 55-159770 refers to the extraction and purification of Stevioside by extracting Stevia leaves with water or hydrated alcohol. The extract was concentrated to a solids content of 10 to 50%, plus 0.1-5.0% of calcium chloride to coagulate and precipitate colloidal impurities in the extract. It was not possible to remove most of the impurities from the concentrated solution using CaCl2. There are no desalting and bleaching stages.

[0051] O documento JP N° 55-162953 refere-se à preparação de Steviosídeo por extração de folhas de Stevia com 10-15 volumes de água a 60-80oC. O extrato foi tratado com cal extinta com aeração, e o pH da suspensão foi ajustado em cerca de 8,0 por adição de ácido sulfúrico ou cítrico. O sal ligeiramente solúvel resultante foi removido por filtração e o filtrado foi então contatado com uma resina de poliamida para remover as impurezas. O filtrado foi ainda extraída com n-butanol e a fase orgânica foi destilada a vácuo para recuperar o Steviosídeo como cristais brancos. O teor de sais em tal produto será alto. O processo de purificação usando extração com n-butanol é de difícil aplicação em escala comercial.[0051] Document JP N° 55-162953 refers to the preparation of Stevioside by extracting Stevia leaves with 10-15 volumes of water at 60-80oC. The extract was treated with aerated slaked lime, and the pH of the suspension was adjusted to about 8.0 by addition of sulfuric or citric acid. The resulting slightly soluble salt was filtered off and the filtrate was then contacted with a polyamide resin to remove impurities. The filtrate was further extracted with n-butanol and the organic phase was vacuum distilled to recover the Stevioside as white crystals. The content of salts in such a product will be high. The purification process using n-butanol extraction is difficult to apply on a commercial scale.

[0052] O documento JP N° 55-081567 descreve a extração e purificação de Steviosídeo. O extrato de folhas de Stevia preparado por extração om álcool ou álcool hidratado foi concentrado, e um ou mais tipos de sais solúveis em água em Ca, Fe, e Al e um solvente orgânico solúvel em água, por exemplo etanol ou acetona, foram adicionados ao concentrado para precipitar e remover as impurezas coloidais. O líquido resultante com pH 3-7 foi passado por uma resina trocadora de cátions forte e uma resina trocadora de ânions fraca. A solução obtida foi passada pelo adsorvente específico. As frações de Steviosídeo foram combinadas. O processo é semelhante à tecnologia chinesa tradicional, que pode resultar em pó amarelo com um teor de apenas 85-86% de glicosídeos de esteviol.[0052] Document JP N° 55-081567 describes the extraction and purification of Stevioside. Stevia leaf extract prepared by extraction with alcohol or hydrated alcohol was concentrated, and one or more types of water-soluble salts in Ca, Fe, and Al and a water-soluble organic solvent, for example ethanol or acetone, were added. to the concentrate to precipitate and remove colloidal impurities. The resulting liquid with pH 3-7 was passed through a strong cation exchanger resin and a weak anion exchanger resin. The obtained solution was passed through the specific adsorbent. Stevioside fractions were pooled. The process is similar to traditional Chinese technology, which can result in a yellow powder with only 85-86% steviol glycosides content.

[0053] O documento JP N° 55-120770 refere-se à purificação de uma solução de Steviosídeo. As folhas e talos de Stevia rebaudiana foram extraídos com água ou uma solução alcoólica, à qual um sal de estanho solúvel em água, por exemplo, cloreto estanoso, sulfato estanoso, sulfato estânico etc., foi adicionado e dissolvido. Uma substância alcalina, por exemplo, hidróxido de sódio ou cal foi adicionada à solução resultante para o valor do pH em torno de 5-10. O precipitado formado foi separado. Este processo não é capaz de resultar em extrato livre de sais e de outras impurezas de baixo peso molecular.[0053] JP No. 55-120770 relates to the purification of a Stevioside solution. The leaves and stems of Stevia rebaudiana were extracted with water or an alcoholic solution, to which a water-soluble tin salt, e.g., stannous chloride, stannous sulfate, stannic sulfate, etc., was added and dissolved. An alkaline substance, for example sodium hydroxide or lime, was added to the resulting solution to the pH value around 5-10. The formed precipitate was separated. This process is not able to result in an extract free of salts and other low molecular weight impurities.

[0054] O documento JP N° 55-138372 descreve a purificação de uma solução de Steviosídeo. Steviosídeo foi extraído das folhas e talos de Stevia rebaudiana com água, água quente, ou um álcool hidratado, e o extrato ou seu concentrado foi misturado com cal extinta ou leite de cal. A mistura foi então filtrada e misturada com uma quantidade equimolar de um composto de ferro solúvel em água, por exemplo sulfato ferroso, e agitada para precipitar os íons de ferro como um hidróxido moderadamente solúvel, que foi removido com as substâncias colorantes adsorvidas sobre o mesmo. O processo não é capaz de resultar em extrato livre de sais e de outras impurezas de baixo peso molecular.[0054] JP No. 55-138372 describes the purification of a Stevioside solution. Stevioside was extracted from the leaves and stems of Stevia rebaudiana with water, hot water, or a hydrated alcohol, and the extract or its concentrate was mixed with slaked lime or milk of lime. The mixture was then filtered and mixed with an equimolar amount of a water-soluble iron compound, for example ferrous sulphate, and stirred to precipitate the iron ions as a sparingly soluble hydroxide, which was removed with the coloring substances adsorbed thereon. . The process is not able to result in an extract free of salts and other low molecular weight impurities.

[0055] O documento JP N° 55-039731 refere-se à extração de Steviosídeo. 1kg de folhas desidratadas de Stevia rebaudiana foi extraído com 3-10 volumes de água ou álcool hidratado. O extrato foi concentrado até atingir um teor de sólidos de 10-50% e 0,1-5% de um cloreto metálico, por exemplo cloreto de cálcio, alumínio ou ferro, foram adicionados. O precipitado de impurezas foi removido por filtração. Os procedimentos de filtração subsequentes com resinas trocadoras de íons, adsorvente, e membranas de ultrafiltração podem ser adicionalmente realizados. A maioria das impurezas não podem ser removidas da solução concentrada usando sais. O teor de impurezas de baixo peso molecular pode ser alto.[0055] Document JP N° 55-039731 refers to the extraction of Stevioside. 1kg of dehydrated leaves of Stevia rebaudiana was extracted with 3-10 volumes of water or hydrated alcohol. The extract was concentrated to a solids content of 10-50% and 0.1-5% of a metallic chloride, for example calcium, aluminum or iron chloride was added. The precipitated impurities were removed by filtration. Subsequent filtration procedures with ion exchange resins, adsorbent, and ultrafiltration membranes can be additionally performed. Most impurities cannot be removed from the concentrated solution using salts. The content of low molecular weight impurities can be high.

[0056] O documento JP N° 56-160962 apresenta a purificação de uma solução contendo Steviosídeo por extração de folhas de Stevia com água, concentração do extrato obtido até atingir um teor de sólidos de 25-50%, misturação do concentrado com um álcool alifático de baixo peso molecular, e remoção das impurezas precipitadas da mistura. A quantidade de álcool foi pelo menos 5 vezes o volume do extrato aquoso, ou 3-6 vezes o volume do concentrado. O tratamento não é adequado para remover impurezas de baixo peso molecular. Não há estágios de descoloração. O processo é de difícil aplicação em escala comercial.[0056] Document JP N° 56-160962 presents the purification of a solution containing Stevioside by extracting Stevia leaves with water, concentrating the obtained extract until reaching a solids content of 25-50%, mixing the concentrate with an alcohol low molecular weight aliphatic, and removal of precipitated impurities from the mixture. The amount of alcohol was at least 5 times the volume of the aqueous extract, or 3-6 times the volume of the concentrate. The treatment is not suitable for removing low molecular weight impurities. There are no discoloration stages. The process is difficult to apply on a commercial scale.

[0057] O documento JP N° 56-109568 apresenta a purificação de substâncias adoçantes de Stevia por extração de folhas de Stevia com água ou com um solvente orgânico hidrófilo. O extrato foi tratado com um solvente orgânico selecionado do grupo que consiste em 4-8C éter, 4-7C éster, e composto de 14C cloro orgânico, e o componente solúvel no solvente foi separado. Éter dietílico, éter di- isopropílico, etil acetato, metil cloreto, tetracloreto de carbono etc. podem ser citados como o solvente de purificação. O gosto amargo pode ser removido efetivamente com descoloração smimultânea. No entanto, solventes nocivos usados podem ficar no produto final. O processo é de difícil aplicação em escala comercial.[0057] Document JP N° 56-109568 discloses the purification of sweetening substances from Stevia by extracting Stevia leaves with water or with a hydrophilic organic solvent. The extract was treated with an organic solvent selected from the group consisting of 4-8C ether, 4-7C ester, and 14C organic chlorine compound, and the component soluble in the solvent was separated. Diethyl ether, diisopropyl ether, ethyl acetate, methyl chloride, carbon tetrachloride etc. can be cited as the purification solvent. Bitter taste can be effectively removed with simultaneous discoloration. However, harmful solvents used can remain in the final product. The process is difficult to apply on a commercial scale.

[0058] O documento JP N° 56-099768 refere-se à preparação de glicosídeos de esteviol. Uma solução contendo glicosídeos de esteviol, por exemplo um extrato aquoso de Stevia rebaudiana Bertoni, foi tratada com aluminato de silicato de magnésio para adorver impurezas, por exemplo pigmentos ou proteínas. No entanto, o teor de sais no produto final pode ser alto. Não há estágios de descoloração e purificação adicional. O teor de glicosídeos de esteviol no produto final pode ser baixo.[0058] JP No. 56-099768 relates to the preparation of steviol glycosides. A solution containing steviol glycosides, for example an aqueous extract of Stevia rebaudiana Bertoni, has been treated with magnesium silicate aluminate to adorn impurities, for example pigments or proteins. However, the salt content in the final product can be high. There are no stages of discoloration and further purification. The content of steviol glycosides in the final product may be low.

[0059] O documento JP N° 57-002656 refere-se à descoloração e purificação de extrato de Stevia. Extrato de Stevia foi tratado com uma solução aquosa de um composto de bário que é facilmente solúvel em água e em seguida neutralizado com ácido sulfúrico. Hidróxido de bário foi atingir até o pH atingir um valor de 7-9 e a suspensão foi novamente tratada com ácido sulfúrico até o pH atingir um valor de 3-4. O precipitado foi separado. Os principais inconvenientes são que o teor de sais no produto final pode ser alto, não há estágios de descoloração e purificação adicional, e, como resultado, o teor de glicosídeos de esteviol no produto final pode ser baixo.[0059] JP document No. 57-002656 refers to the discoloration and purification of Stevia extract. Stevia extract was treated with an aqueous solution of a barium compound which is easily soluble in water and then neutralized with sulfuric acid. Barium hydroxide was added until the pH reached a value of 7-9 and the suspension was again treated with sulfuric acid until the pH reached a value of 3-4. The precipitate was separated. The main drawbacks are that the salt content in the final product can be high, there are no additional decolorization and purification stages, and as a result, the steviol glycoside content in the final product can be low.

[0060] O documento JP N° 57-005663 refere-se à purificação de Steviosídeo por meio de extração. Uma solução de folhas de Stevia extraídas com água ou álcool contendo água foi concentrada até atingir um teor de sólidos de 10-50%. Um sal ou uma base de cálcio, ferro, ou alumínio foi adicionada e o precipitado foi removido por filtração. O pH do filtrado foi ajustado entre 5-7, e o precipitado formado foi removido. O filtrado é tratado com uma resina trocadora de cátions e com uma resina trocadora de ânions e evaporado até a secura. O principal inconveniente do método é a baixa qualidade do extrato. Tratamento apenas com álcalis e trocadores de íons não é suficiente para produzir extrato de Stevia de cor branca e alto teor de glicosídeos de esteviol.[0060] Document JP No. 57-005663 refers to the purification of Stevioside by means of extraction. A solution of stevia leaves extracted with water or alcohol containing water was concentrated to a solids content of 10-50%. A calcium, iron, or aluminum salt or base was added and the precipitate filtered off. The pH of the filtrate was adjusted between 5-7, and the formed precipitate was removed. The filtrate is treated with a cation exchange resin and anion exchange resin and evaporated to dryness. The main drawback of the method is the low quality of the extract. Treatment with alkalis and ion exchangers alone is not sufficient to produce white-colored Stevia extract with a high content of steviol glycosides.

[0061] O documento JP N° 57-046998 refere-se à preparação de Steviosídeo. Folhas brutas de Stevia rebaudiana foram extraídas com 10-20 volumes de água e o filtrado foi tratado com hidróxido de cálcio em uma quantidade de 10-30% em peso das folhas brutas. O pH da suspensão foi então ajustado em 4-6 com ácido sulfúrico ou ácido cítrico. Depois da filtração o extrato foi passado por uma coluna de poliamida para absorver os glicosídeos e remover as impurezas. O extrato purificado foi então concentrado à pressão reduzida, o pH foi ajustado em 8-9 com amônia aquosa e extraído com n-butanol para dar Steviosídeo bruto, que foi então recristalizado a partir de metanol. No entanto, o teor de sais residuais pode ser alto; não há estágios de descoloração; a extração com n-butanol e recristalização a partir de metanol não é comercialmente viável.[0061] JP No. 57-046998 refers to the preparation of Stevioside. Crude leaves of Stevia rebaudiana were extracted with 10-20 volumes of water and the filtrate was treated with calcium hydroxide in an amount of 10-30% by weight of the crude leaves. The pH of the suspension was then adjusted to 4-6 with sulfuric or citric acid. After filtration, the extract was passed through a polyamide column to absorb glycosides and remove impurities. The purified extract was then concentrated under reduced pressure, the pH was adjusted to 8-9 with aqueous ammonia and extracted with n-butanol to give crude Stevioside, which was then recrystallized from methanol. However, the residual salt content can be high; there are no discoloration stages; extraction with n-butanol and recrystallization from methanol is not commercially viable.

[0062] O documento JP N° 57-075992 refere-se à purificação de Steviosídeo. O extrato aquoso de Stevia rebaudiana Bertoni foi misturado com um floculante (por exemplo cloreto de alumínio ou polialumínio) para flocular e remover as impurezas coloidais, e então tratado com uma resina não polar (por exemplo Duolite ES-861) para adsorver a substância adoçante. As substâncias adsorvidas foram eluídas com um solvente orgânico (por exemplo metanol, acetona etc.), e a solução foi descolorida e purificada com carvão ativo e argila ativa. O carvão ativo pode absorver firmemente o Steviosídeo da soluçãao aquosa e os efeitos de descoloração e purificação do carvão ativo podem ser promovidos pelo uso combinado com argila ativa. No entanto, são usados solventes nocivos, que podem estar presentes no produto final. O processo é de difícil aplicação em escala comercial.[0062] JP No. 57-075992 relates to the purification of Stevioside. The aqueous extract of Stevia rebaudiana Bertoni was mixed with a flocculant (e.g. aluminum or polyaluminium chloride) to flocculate and remove colloidal impurities, and then treated with a non-polar resin (e.g. Duolite ES-861) to adsorb the sweetening substance . The adsorbed substances were eluted with an organic solvent (eg methanol, acetone, etc.), and the solution was decolorized and purified with active charcoal and active clay. Active charcoal can firmly absorb Stevioside from aqueous solution, and the decolorizing and purifying effects of activated charcoal can be promoted by combined use with active clay. However, harmful solvents are used, which may be present in the final product. The process is difficult to apply on a commercial scale.

[0063] O documento JP N° 57-086264 refere-se ao isolamento do principal componente adoçante da Stevia. Talos e folhas secos de Stevia foram extraídos com água fria, água quente, álcool hidratado etc. O extrato foi coagulado ou precipitado com um adsorvente, e o precipitado foi removido por filtração ou centrifugação para obter um líquido claro contendo os componentes adoçantes. Os componentes foram adsorvidos em um adsorvente de polímero sintético, purificados até 80-90% de pureza, concentrados, secados, e dissolvidos em 3-8 volumes de metanol quente ou de etanol quente. Steviosídeo e Rebaudiosídeo A foram cristalizados simultaneamente da solução. Depois da remoção completa do solvente, os cristais mistos foram aquecidos com 3-6 volumes de álcool e separados em uma parte de solução e uma parte sólida por filtração a quente. O Steviosídeo pode ser obtido a partir da solução e o Rebaudiosídeo A pode ser preparado por lavagem e secagem da parte sólida. O método pode resultar em Steviosídeo e Rebaudiosídeo A purificados; no entanto a qualidade do extrato pode ser baixa devido à ausência de estágios de desionização e descoloração. O teor de impurezas de baixo peso molecular pode ser alto.[0063] Document JP N° 57-086264 refers to the isolation of the main sweetening component of Stevia. Dried Stevia stalks and leaves were extracted with cold water, hot water, hydrated alcohol, etc. The extract was coagulated or precipitated with an adsorbent, and the precipitate was removed by filtration or centrifugation to obtain a clear liquid containing the sweetening components. The components were adsorbed onto a synthetic polymer adsorbent, purified to 80-90% purity, concentrated, dried, and dissolved in 3-8 volumes of hot methanol or hot ethanol. Stevioside and Rebaudioside A were simultaneously crystallized from solution. After complete removal of the solvent, the mixed crystals were heated with 3-6 volumes of alcohol and separated into one part solution and one part solid by hot filtration. Stevioside can be obtained from solution and Rebaudioside A can be prepared by washing and drying the solid part. The method can result in purified Stevioside and Rebaudioside A; however, extract quality may be low due to the absence of deionization and discoloration stages. The content of low molecular weight impurities can be high.

[0064] Os documentos JP N° 58-212759 e N ° 58-2127 60 descrevem a purificação de substância adoçante de Stevia. As folhas de Stevia rebaudiana Bertoni foram extraídas com água ou um álcool a um pH 4. O extrato foi tratado com hidróxido de cálcio e o precipitado formado foi removido por filtração. Um solvente orgânico solúvel em água tal como metanol foi adicionado ao filtrado, e o precipitado foi removido. A quantidade de solvente orgânico solúvel em água variou de 5% a 50% com base no filtrado. O filtrado obtido foi purificado por resinas trocadoras de íons ou resinas de adsorção. O principal inconveniente é que solvente nocivo é usado, o qual pode estar no produto final. O processo é de difícil aplicação em escala comercial.[0064] JP documents No. 58-212759 and No. 58-2127 60 describe the purification of sweetening substance from Stevia. Stevia rebaudiana Bertoni leaves were extracted with water or an alcohol at pH 4. The extract was treated with calcium hydroxide and the formed precipitate was removed by filtration. A water-soluble organic solvent such as methanol was added to the filtrate, and the precipitate was removed. The amount of water-soluble organic solvent ranged from 5% to 50% based on the filtrate. The filtrate obtained was purified by ion exchange resins or adsorption resins. The main drawback is that harmful solvent is used, which may be in the final product. The process is difficult to apply on a commercial scale.

[0065] O documento JP N° 58-028246 descreve a preparação de Steviosídeo. A folha bruta de Stevia foi extraída com água, água quente ou uma mistura de água-álcool, e se necessário o extrato era então concentrado. Uma mistura de hidróxido de cálcio com cloreto de cálcio em uma quantidade de 0,5-2,0 vezes o valor do teor de sólidos no extrato foi adicionada ao extrato ou ao extrato concentrado, de preferência enquanto dióxido de carbono gasoso era soprado. As impurezas foram precipitadas na forma de um material coloidal, que foi separado por filtração. No entanto, a qualidade do extrato pode ser baixa devido ao alto teor de sais e compostos de baixo peso molecular.[0065] JP No. 58-028246 describes the preparation of Stevioside. The raw stevia leaf was extracted with water, hot water or a water-alcohol mixture, and if necessary the extract was then concentrated. A mixture of calcium hydroxide and calcium chloride in an amount of 0.5-2.0 times the value of the solids content in the extract was added to the extract or concentrated extract, preferably while blowing carbon dioxide gas. Impurities were precipitated as a colloidal material, which was filtered off. However, the quality of the extract can be low due to the high content of salts and low molecular weight compounds.

[0066] O documento JP N° 58-028247 refere-se a um método de purificação de uma solução de Steviosídeo. As folhas brutas de Stevia foram extraídas com água, água quente ou uma mistura de água-álcool, e o extrato foi concentrado. Hidróxido de cálcio e um floculante polimérico alto solúvel em água, por exemplo polímero alto de poliacrilamida, em uma quantidade 1-2,5 vezes o valor do teor de sólidos no extrato foram adicionados ao extrato ou ao extrato concentrado para precipitar as impurezas, que foram então removidas por filtração. Uma solução de Steviosídeo transparente e quase incolor foi obtida. No entanto, a qualidade do extrato pode ser baixa devido ao alto teor de sais e compostos de baixo peso molecular.[0066] JP No. 58-028247 relates to a method of purifying a Stevioside solution. Raw stevia leaves were extracted with water, hot water or a water-alcohol mixture, and the extract was concentrated. Calcium hydroxide and a water-soluble high polymeric flocculant, for example high polymer polyacrylamide, in an amount 1-2.5 times the value of the solids content in the extract were added to the extract or concentrated extract to precipitate impurities, which were then removed by filtration. A clear and almost colorless Stevioside solution was obtained. However, the quality of the extract can be low due to the high content of salts and low molecular weight compounds.

[0067] O documento JP N° 59-045848 refere-se à preparação do adoçante Stevia com alto teor de Rebaudiosídeo A. Folhas desidratadas de uma variedade de Stevia contendo 1,57 vezes mais Rebaudiosídeo A do que Steviosídeo foram extraídas com água ou com um solvente contendo água. A solução extraída preparada foi tratada com uma resina trocadora de cátions e com uma resina trocadora de ânions. A solução foi adsorvida em uma resina de absorção, eluída com um solvente hidrófilo, e a solução foi concentrada para dar um adoçante natural. O processo é semelhante à tecnologia chinesa tradicional, que pode resultar no pó amarelo com um teor de glicosídeos de esteviol de até 85-86% apenas.[0067] Document JP No. 59-045848 refers to the preparation of Stevia sweetener with a high content of Rebaudioside A. Dehydrated leaves of a variety of Stevia containing 1.57 times more Rebaudioside A than Stevioside were extracted with water or with a solvent containing water. The prepared extracted solution was treated with a cation exchange resin and with an anion exchange resin. The solution was adsorbed onto an absorption resin, eluted with a hydrophilic solvent, and the solution was concentrated to give a natural sweetener. The process is similar to traditional Chinese technology, which can result in yellow powder with a steviol glycoside content of only 85-86%.

[0068] O documento JP N° 62-166861 refere-se à extração e purificação do componente adoçante de folhas desidratadas de Stevia. Folhas desidratadas de Stevia rebaudiana Bertoni foram extraídas com 714 volumes de água a 50-70°C por 3-6 horas com agitação para obter um extrato líquido castanho com um teor de sólidos totais de 2-3% e contendo 0,70,8% de Steviosídeo. O extrato foi concentrado 7-8 vezes a cerca de 60°C e à pressão reduzida. O líquido concentrado com tratado com 0,5-2% de CaCl2 para separar as impurezas enquanto o floculante precipitava. A solução foi tratada com um óxido de Al, Mg em uma quantidade correspondente a 15-20% do teor de sólidos a 40-55°C com agitação vigorosa. Em seguida o precipitado foi removido por filtração. O Steviosídeo pode ser ainda purificado sobre adsorventes específicos. No entanto, o processo é de difícil comercialização; a quantidade de sais usada para a purificação do extrato é alta e não há estágios de desionização e descoloração. O teor de compostos de baixo peso molecular pode ser alto.[0068] Document JP N° 62-166861 refers to the extraction and purification of the sweetening component of dehydrated Stevia leaves. Dehydrated leaves of Stevia rebaudiana Bertoni were extracted with 714 volumes of water at 50-70°C for 3-6 hours with agitation to obtain a brown liquid extract with a total solids content of 2-3% and containing 0.70.8 % Stevioside. The extract was concentrated 7-8 times at about 60°C and reduced pressure. The concentrated liquid was treated with 0.5-2% CaCl2 to separate impurities while the flocculant precipitated. The solution was treated with an Al,Mg oxide in an amount corresponding to 15-20% solids content at 40-55°C with vigorous stirring. Then the precipitate was removed by filtration. Stevioside can be further purified on specific adsorbents. However, the process is difficult to commercialize; the amount of salts used for extract purification is high and there are no deionization and discoloration stages. The content of low molecular weight compounds can be high.

[0069] O documento JP N° 06-007108 refere-se a um método de extração e separação de substâncias doces de Stevia rebaudiana Bertoni. Folhas de Stevia rebaudiana Bertoni foram extraídas com um álcool miscível em água tal como metanol. A solução extraída foi misturada com água e passada por membranas de ultrafiltração com uma capacidade de corte de 20 -150 kDa e em seguida por membranas de ultrafiltração com uma capacidade de corte de 1-10 kDa. No entanto, são usados solventes nocivos, que podem estar presentes no produto final. O processo é de difícil aplicação em escala comercial.[0069] Document JP N° 06-007108 refers to a method of extracting and separating sweet substances from Stevia rebaudiana Bertoni. Stevia rebaudiana Bertoni leaves were extracted with a water miscible alcohol such as methanol. The extracted solution was mixed with water and passed through ultrafiltration membranes with a cutoff capacity of 20 -150 kDa and then through ultrafiltration membranes with a cutoff capacity of 1-10 kDa. However, harmful solvents are used, which may be present in the final product. The process is difficult to apply on a commercial scale.

[0070] O documento JP N° 52083731 refere-se ao isolamento e purificação de Rebaudiosídeo A e Rebaudiosídeo B por cromatografia em coluna de sílica gel. Purificação adicional é desenvolvida por cristalização a partir de solventes orgânicos tais como metanol ou etanol.[0070] JP document No. 52083731 refers to the isolation and purification of Rebaudioside A and Rebaudioside B by silica gel column chromatography. Further purification is accomplished by crystallization from organic solvents such as methanol or ethanol.

[0071] O documento JP N° 55-092400 refere-se à preparação de Steviosídeo. Uma solução aquosa contendo Steviosídeo foi extraída com 1H, 1H, 5H- octafluoro-1-pentanol. Depois da separação o solvente foi removido por destilação, e o resíduo foi secado. O precipitado foi recristalizado a partir de metanol. A pureza do Steviosídeo foi superior a 95%.[0071] JP document No. 55-092400 refers to the preparation of Stevioside. An aqueous solution containing Stevioside was extracted with 1H, 1H, 5H-octafluoro-1-pentanol. After separation, the solvent was distilled off, and the residue was dried. The precipitate was recrystallized from methanol. Stevioside purity was greater than 95%.

[0072] O documento JP N° 56-121453, o documento JP N° 56-121454, e o documento JP N° 56-121455 creferem-se à separação de Steviosídeo e Rebaudiosídeo A. Uma mistura de Steviosídeo e Rebaudiosídeo A extraídos das folhas de Stevia rebaudiana Bertoni foi misturada com uma solução aquosa a 75% de metanol e mantida à temperatura ambiente por cerca de 3 horas. Os cristais resultantes com um teor de 65% de Steviosídeo de 25,2% de Rebaudiosídeo A foram separados por filtração e secados. No caso de aplicação de uma solução aquosa a 90% de etanol a mistura final contém 57,4% de Steviosídeo e 31,9% de Rebaudiosídeo A. Recristalização adicional a partir da solução aquosa a 90% de etanol resultou em um produto com um teor mais alto de Rebaudiosídeo A. A pureza do produto foi de cerca de 80%. O Steviosídeo pode ser ainda purificado até 86,1% por lavagem adicional com água. Foram obtidos cristais do tipo β de Steviosídeo e cristais do tipo α de Rebaudiosídeo A.[0072] JP document N° 56-121453, JP document N° 56-121454, and JP document N° 56-121455 refer to the separation of Stevioside and Rebaudioside A. A mixture of Stevioside and Rebaudioside A extracted from Stevia rebaudiana Bertoni leaves were mixed with a 75% methanol aqueous solution and kept at room temperature for about 3 hours. The resulting crystals with a content of 65% Stevioside and 25.2% Rebaudioside A were filtered off and dried. In the case of application of a 90% ethanol aqueous solution the final mixture contains 57.4% Stevioside and 31.9% Rebaudioside A. Further recrystallization from the 90% ethanol aqueous solution resulted in a product with a highest content of Rebaudioside A. Product purity was about 80%. Stevioside can be further purified to 86.1% by further washing with water. Stevioside β-type crystals and Rebaudioside A α-type crystals were obtained.

[0073] O documento JP N° 57-046998 refere-se à preparação de Steviosídeo. Folhas brutas de Stevia rebaudiana foram extraídas com 10-20 volumes de água e o filtrado foi tratado com hidróxido de cálcio em uma quantidade de 10-30% em peso das folhas brutas. O pH da suspensão foi então ajustado em 4-6 com ácido sulfúrico ou com ácido cítrico. Depois da filtração o extrato foi passado por uma coluna de poliamida para adsorver os glicosídeos e remover as impurezas. O extrato purificado foi então concentrado à pressão reduzida, o pH foi ajustado em 8-9 com amônia aquosa e extraído com n-butanol para dar Steviosídeo bruto, que foi então recristalizado a partir de metanol.[0073] JP No. 57-046998 refers to the preparation of Stevioside. Crude leaves of Stevia rebaudiana were extracted with 10-20 volumes of water and the filtrate was treated with calcium hydroxide in an amount of 10-30% by weight of the crude leaves. The pH of the suspension was then adjusted to 4-6 with sulfuric or citric acid. After filtration, the extract was passed through a polyamide column to adsorb glycosides and remove impurities. The purified extract was then concentrated under reduced pressure, the pH was adjusted to 8-9 with aqueous ammonia and extracted with n-butanol to give crude Stevioside, which was then recrystallized from methanol.

[0074] O documento JP N° 57-086264 refere-se ao isolamento do principal componente adoçante de Stevia. Talos e folhas desidratados de Stevia foram extraídos com água fria, água quente, álcool hidratado etc. O extrato foi coagulado ou precipitado com um adsorvente, e o precipitado foi removido por filtração ou centrifugação para obter um líquido claro contendo os componentes adoçantes. Os componentes foram adsorvidos sobre um adsorvente de polímero sintético, purificados até 80-90% de pureza, concentrados, secados, e dissolvidos em 3-8 volumes de metanol quente ou de etanol quente. Steviosídeo e Rebaudiosídeo A foram cristalizados simultaneamente da solução. Depois de remoção completa do solvente, os cristais mistos foram aquecidos com 3-6 volumes de álcool e os sólidos foram separados da solução por filtração a quente. O Steviosídeo pode ser obtido a partir da solução e o Rebaudiosídeo A pode ser preparado por lavagem e secagem da parte sólida.[0074] JP document No. 57-086264 refers to the isolation of the main sweetening component of Stevia. Dehydrated Stevia stalks and leaves were extracted with cold water, hot water, hydrated alcohol, etc. The extract was coagulated or precipitated with an adsorbent, and the precipitate was removed by filtration or centrifugation to obtain a clear liquid containing the sweetening components. The components were adsorbed onto a synthetic polymer adsorbent, purified to 80-90% purity, concentrated, dried, and dissolved in 3-8 volumes of hot methanol or hot ethanol. Stevioside and Rebaudioside A were simultaneously crystallized from solution. After complete removal of the solvent, the mixed crystals were heated with 3-6 volumes of alcohol and the solids were separated from the solution by hot filtration. Stevioside can be obtained from solution and Rebaudioside A can be prepared by washing and drying the solid part.

[0075] O documento JP N° 06-192283 e o documento JP N° 08-000214 apresentam a purificação de Rebaudiosídeo A por filtração em gel em um Toyo Perl HW-40. Rebaudiosídeo C e Dulcosídeo foram obtidos por HPLC. O método só é útil em escala laboratorial.[0075] JP document N° 06-192283 and JP document N° 08-000214 show the purification of Rebaudioside A by gel filtration in a Toyo Perl HW-40. Rebaudioside C and Dulcoside were obtained by HPLC. The method is only useful on a laboratory scale.

[0076] O documento JP 63173531 descreve um método de extração de glicosídeos doces da planta Stevia rebaudiana. A primeira etapa do processo é extrair uma solução líquida de glicosídeos doces da planta Stevia rebaudiana. Em segundo lugar, a solução líquida de glicosídeos doces é passada por uma resina porosa não polar e eluída com um solvente orgânico solúvel em água, de preferência metanol. Em terceiro lugar, a solução eluída é concentrada e secada para dar um material pulverulento. Este procedimento isola uma mistura de glicosídeos doces, mas não isola um único glicosídeo doce puro tal como Rebaudiosídeo A.[0076] Document JP 63173531 describes a method of extracting sweet glycosides from the plant Stevia rebaudiana. The first step in the process is to extract a liquid solution of sweet glycosides from the Stevia rebaudiana plant. Second, the sweet glycoside liquid solution is passed through a non-polar porous resin and eluted with a water-soluble organic solvent, preferably methanol. Third, the eluted solution is concentrated and dried to give a powdery material. This procedure isolates a mixture of sweet glycosides, but does not isolate a single pure sweet glycoside such as Rebaudioside A.

[0077] O documento JP N° 07-143860 descreve a purificação de Rebaudiosídeo A por meio de cristalização e recristalização a partir de solução aquosa a 10-20% de metanol. A pureza de Rebaudiosídeo A foi de cerca de 90%.[0077] JP Document No. 07-143860 describes the purification of Rebaudioside A by means of crystallization and recrystallization from 10-20% aqueous methanol solution. The purity of Rebaudioside A was about 90%.

[0078] O documento JP N° 07-177862 descreve a purificação de Rebaudiosídeo A e Steviosídeo. Extrato de Stevia purificado foi tratado com baixas concentrações de álcool para obter cristais com um teor de cerca de 75% de Steviosídeo e Rebaudiosídeo A. Os cristais foram ainda recristalizados a partir de água para dar o adoçante ligeiramente solúvel em água com uma proporção de Steviosídeo e Rebaudiosídeo A de cerca de 1:2, p/p.[0078] JP Document No. 07-177862 describes the purification of Rebaudioside A and Stevioside. Purified Stevia extract was treated with low concentrations of alcohol to obtain crystals with a content of about 75% Stevioside and Rebaudioside A. The crystals were further recrystallized from water to give the slightly water-soluble sweetener with a proportion of Stevioside and Rebaudioside A of about 1:2, w/w.

[0079] O documento JP N° 2002.262.822 apresenta um adoçante extraído de folhas desidratadas da planta Stevia e seu método de extração. Este processo utiliza água ou um solvente aquoso para extrair glicosídeos de Stevia das folhas desidratadas. No produto obtido, o teor de Rebaudiosídeo A é 2,56 vezes maior que a quantidade de Steviosídeo.[0079] Document JP N° 2002,262,822 presents a sweetener extracted from dehydrated leaves of the Stevia plant and its extraction method. This process uses water or an aqueous solvent to extract stevia glycosides from dried leaves. In the product obtained, the content of Rebaudioside A is 2.56 times greater than the amount of Stevioside.

[0080] Isolamento de Steviolbiosídeo, Rebaudiosídeo A, Rebaidiosídeo B foi realizado por Kohda et al., 1976. Folhas desidratadas foram extraídas com metanol quente e o filtrado foi concentrado até a secura. O resíduo foi extraído com n-butanol e, depois de secagem o resíduo foi recristalizado a partir de metanol. O licor-mãe foi submetido à separação cromatográfica sobre sílica gel usando uma mistura de clorofórmio-metanol-água como a fase móvel. Purificação adicional foi desenvolvida por cromatografia em camada fina. O método só pode ser aplicado em escala laboratorial para a produção de pequenas quantidades dos glicosídeos doces mencionados acima.[0080] Isolation of Steviolbioside, Rebaudioside A, Rebaidioside B was performed by Kohda et al., 1976. Dehydrated leaves were extracted with hot methanol and the filtrate was concentrated to dryness. The residue was extracted with n-butanol and, after drying, the residue was recrystallized from methanol. The mother liquor was subjected to chromatographic separation over silica gel using a chloroform-methanol-water mixture as the mobile phase. Further purification was carried out by thin layer chromatography. The method can only be applied on a laboratory scale for the production of small amounts of the sweet glycosides mentioned above.

[0081] Dulcosídeo A e B foram isolados e identificados usando cristalização a partir de uma mistura de metanol-etanol e ainda purificados por cromatografia sobre sílica gel (Kobayashi et al., 1977).[0081] Dulcoside A and B were isolated and identified using crystallization from a methanol-ethanol mixture and further purified by silica gel chromatography (Kobayashi et al., 1977).

[0082] A combinação de ultrafiltração, diafiltração, osmose invertida e tratamento de troca iônica foi usada para a purificação de extrato de Stevia (Fuh & Chiang, 1990). A capacidade de corte das membranas de ultrafiltração foi de 25.000 e 100.000 Daltons. As misturas de resinas trocadoras de cátions e de ânions forte e fraca foram usadas como trocadores de íons. A recuperação de glicosídeos de esteviol totais foi de cerca de 90%; no entanto a pureza do produto final foi de apenas 46%.[0082] A combination of ultrafiltration, diafiltration, reverse osmosis and ion exchange treatment was used for purification of stevia extract (Fuh & Chiang, 1990). The cutting capacity of the ultrafiltration membranes was 25,000 and 100,000 Daltons. Mixtures of strong and weak cation and anion exchange resins were used as ion exchangers. Recovery of total steviol glycosides was about 90%; however the purity of the final product was only 46%.

[0083] Um método para a purificação de glicosídeos de esteviol pela tecnologia de membranas foi descrito por Liu et al. (1991) e Zhang et al. (2000). Folhas desidratadas foram colocados em uma coluna de vidro tradicional e a extração foi realizada com água de osmose invertida. O extrato foi pré-tratado com uma membrana de cerâmica tubular e em seguida com uma membrana de ultrafiltração no modo de diafiltração. As impurezas de peso molecular mais baixo foram removidas do permeado por lavagem por uma membrana de nanofiltração no modo de diafiltração a temperaturas elevadas. A adição de cal e/ou outro agente floculante à carga de ultrafiltração melhorou significativamente o fluxo. O processo pode oferecer um concentrado de adoçante de pureza relativamente alta. No entanto, não existem dados sobre a pureza do extrato e a recuperação de glicosídeos de esteviol. Os baixos valores de pH usados para a extração exigiram reatores especiais resistentes a ácidos. As baixas temperaturas durante a extração aumentaram o custo operacional da produção. Estes dois fatores (temperaturas baixas e pH baixo) resultaram em uma grande quantidade de extrato inicial diluído. Diluição do extrato também ocorreu durante a microfiltração e a ultrafiltração. Para a purificação final é necessário um tratamento com troca iônica. Estes fatores aumentam substancialmente o custo de produção e diminuem o rendimento do produto final em unidade de tempo. O investimento inicial também é alto.[0083] A method for the purification of steviol glycosides by membrane technology has been described by Liu et al. (1991) and Zhang et al. (2000). Dehydrated leaves were placed in a traditional glass column and extraction was performed with reverse osmosis water. The extract was pretreated with a tubular ceramic membrane and then with an ultrafiltration membrane in diafiltration mode. Lower molecular weight impurities were removed from the permeate by washing through a nanofiltration membrane in diafiltration mode at elevated temperatures. The addition of lime and/or another flocculating agent to the ultrafiltration batch significantly improved the flow. The process can deliver a sweetener concentrate of relatively high purity. However, there are no data on extract purity and recovery of steviol glycosides. The low pH values used for the extraction required special acid-resistant reactors. Low temperatures during extraction increased the operating cost of production. These two factors (low temperatures and low pH) resulted in a large amount of diluted initial extract. Extract dilution also occurred during microfiltration and ultrafiltration. For the final purification, an ion exchange treatment is necessary. These factors substantially increase the cost of production and decrease the yield of the final product in unit time. The initial investment is also high.

[0084] Uma série de resinas polares à base de poliestireno com grupos carbonila foram usadas para a adsorção dos glicosídeos de esteviol e separação parcial de Steviosídeo e Rebaudiosídeo A (Chen et al., 1998; 1999). A proporção de de Rebaudiosídeo A para Steviosídeo pode aumentar de 0,72 para 2,24.[0084] A series of polar resins based on polystyrene with carbonyl groups were used for the adsorption of steviol glycosides and partial separation of Stevioside and Rebaudioside A (Chen et al., 1998; 1999). The ratio of Rebaudioside A to Stevioside can increase from 0.72 to 2.24.

[0085] A capacidade adsorptiva e a seletividade de um novo adsorvente com grupo piridila para glicosídeos de esteviol foram estudadas (Chen et al., 1999). O efeito da polaridade e da estrutura física do sorvente na seletividade foi investigado detalhadamente. Dois métodos de separação foram aplicados no enriquecimento de Rebaudiosídeo A. Estes foram eluição seletiva usando uma solução de metanol ou etanol como solvente, e separação cromatográfica dinâmica usando uma resina piridílica com alta seletividade. Os resultados mostram que o método de separação cromatográfica pode enriquecer efetivamente o Rebaudiosídeo A do extrato de Stevia com alto teor de Steviosídeo. A proporção de Rebaudiosídeo para Steviosídeo pode aumentar de 0,75 para 3,94. Purificação adicional do Rebaudiosídeo A foi possível por cristalização a partir de metanol.[0085] The adsorptive capacity and selectivity of a new adsorbent with pyridyl group for steviol glycosides were studied (Chen et al., 1999). The effect of polarity and physical structure of the sorbent on selectivity was investigated in detail. Two separation methods were applied in the enrichment of Rebaudioside A. These were selective elution using a methanol or ethanol solution as solvent, and dynamic chromatographic separation using a pyridyl resin with high selectivity. The results show that the chromatographic separation method can effectively enrich Rebaudioside A from Stevia extract with high Stevioside content. The ratio of Rebaudioside to Stevioside can increase from 0.75 to 3.94. Further purification of Rebaudioside A was possible by crystallization from methanol.

[0086] Um método para a clarificação de extrato de Stevia usando zeólitos modificados foi descrito por Moraes et al. (2001) e Montovaneli et al. (2004). Zeólitos sintéticos ou naturais foram modificados por tratamento com íons de cálcio ou bário e extrato de Stevia sem qualquer pré-tratamento foi colocado em contato com o zeólito modificado. Isto resultou em 70-80% de clarificação em condições intermitentes e apenas 55-60% em condições contínuas. O processo de clarificação deveria adsorver os pigmentos que deixam o extrato acastanhado, e não os glicosídeos, que são responsáveis pelo sabor doce. No entanto, não existem dados sobre o teor de glicosídeos de esteviol no produto final. Obviamente apenas este tipo de tratamento não pode resultar em extrato altamente purificado, especialmente por causa dos polissacarídeos, metais pesados e esterebinas, que ficam no extrato clarificado. Além disso, não existem dados sobre a meia-vida e a capacidade de absorção do carreador que é muito importante quando o processo é realizado em condições contínuas.[0086] A method for the clarification of stevia extract using modified zeolites was described by Moraes et al. (2001) and Montovaneli et al. (2004). Synthetic or natural zeolites were modified by treatment with calcium or barium ions and Stevia extract without any pre-treatment was placed in contact with the modified zeolite. This resulted in 70-80% clarification under intermittent conditions and only 55-60% under continuous conditions. The clarification process should adsorb the pigments that make the extract brownish, and not the glycosides, which are responsible for the sweet taste. However, there are no data on the content of steviol glycosides in the final product. Obviously this type of treatment alone cannot result in a highly purified extract, especially because of the polysaccharides, heavy metals and sterebins, which remain in the clarified extract. In addition, there are no data on the carrier's half-life and absorption capacity, which is very important when the process is carried out under continuous conditions.

[0087] Adsorventes poliméricos com grupos -N+(CH3)3 foram criados e aplicados à purificação de glicosídeos de esteviol e ao enriquecimento de Rebaudiosídeo A (Shi et al., 2002). Em uma série de cinco colunas o teor de Rebaudiosídeo A aumentou do produto da primeira coluna ao produto da quinta coluna. Ao mesmo tempo o adsorvente apresentou capacidade de descoloração.[0087] Polymeric adsorbents with -N+(CH3)3 groups were created and applied to the purification of steviol glycosides and enrichment of Rebaudioside A (Shi et al., 2002). In a series of five columns the Rebaudioside A content increased from the product of the first column to the product of the fifth column. At the same time, the adsorbent showed discoloration capacity.

[0088] Rebaudiosídeo F foi isolado por cromatografia líquida sobre sílica gel funcionalizada com 3-aminopropil de acordo com o método descrito por Starratt et al., 2002. As frações que eram ricas em Rebaudiosídeo C e Rebaudiosídeo F foram combinadas e separadas por HPLC em uma coluna de carboidratos Waters com gradiente linear de acetonitrila e água.[0088] Rebaudioside F was isolated by liquid chromatography on silica gel functionalized with 3-aminopropyl according to the method described by Starratt et al., 2002. The fractions that were rich in Rebaudioside C and Rebaudioside F were combined and separated by HPLC on a Waters carbohydrate column with a linear gradient of acetonitrile and water.

[0089] A preparação de extrato de Stevia por extração com fluido supercrítico foi descrita por Yoda et al. 2003. Esta é um processo de duas etapas: (i) extração com CO2 a 2x107 Pa (200 bar) e 30oC, e (ii) extração com CO2 + água. Aproximadamente 72% dos compostos solúveis em CO2 foram recuperados e o composto principal foi austroinulina. O sistema Stevia + CO2 + água foi capaz de remover aproximadamente 50% do Steviosídeo original e cerca de 72% de Rebaudiosídeo A. As principais desvantagens do método são a necessidade de pressão alta e baixa taxa de extração dos compostos doces. Além disso, não há informações sobre o teor dos compostos secundários e do teor de glicosídeos de esteviol totais no extrato final. O processo é de difícil aplicação em escala comercial.[0089] The preparation of stevia extract by supercritical fluid extraction was described by Yoda et al. 2003. This is a two-step process: (i) extraction with CO2 at 2x107 Pa (200 bar) and 30oC, and (ii) extraction with CO2 + water. Approximately 72% of the CO2 soluble compounds were recovered and the main compound was austroinulin. The Stevia + CO2 + water system was able to remove approximately 50% of the original Stevioside and about 72% of Rebaudioside A. The main disadvantages of the method are the need for high pressure and low extraction rate of the sweet compounds. Furthermore, there is no information about the content of secondary compounds and the content of total steviol glycosides in the final extract. The process is difficult to apply on a commercial scale.

[0090] Extração com fluido pressurizado usando água ou metanol foi empregada para a extração de Steviosídeo de Stevia rebaudiana Bertoni (Pol et al., 2 007) . Uma temperatura de 110°C foi determinada como sendo ótima para a extração de Steviosídeo de folhas de Stevia rebaudiana usando água ou metanol. Uma temperatura mais alta resultou em significativa degradação do Steviosídeo no meio de ambos os solventes ou em um declínio no rendimento de extração em água. Ambos os solventes apresentaram extração de Steviosídeo com reprodutibilidade muito semelhante e os parâmetros de extração propostos são os mesmos para ambos os métodos. Água representa uma alternativa mais consciente em termos ambientais e mais barata que o metanol.[0090] Pressurized fluid extraction using water or methanol was employed for the extraction of Stevioside from Stevia rebaudiana Bertoni (Pol et al., 2007). A temperature of 110°C has been determined to be optimal for Stevioside extraction from Stevia rebaudiana leaves using water or methanol. A higher temperature resulted in significant degradation of the Stevioside in the medium of both solvents or a decline in the extraction yield in water. Both solvents showed Stevioside extraction with very similar reproducibility and the proposed extraction parameters are the same for both methods. Water represents a more environmentally conscious and cheaper alternative to methanol.

[0091] Um método de preparação e purificação de extrato de Stevia foi descrito por Kovylyaeva et al., 2007. O método inclui extração de folhas secas com 14 volumes de água destilada por 1 hora à temperatura de ebulição, filtração e concentração do filtrado até atingir o estado de xarope. O xarope foi diluído, AlCl3.6H2O foi adicionado e agitado até dissolver. A mistura foi agitada e tratada com uma solução aquosa de NaOH. O precipitado foi filtrado e o filtrado foi passado por uma coluna guarnecida com Al2O3. A coluna foi eluída com água destilada para obter uma solução castanho claro. Purificação adicional do Steviosídeo, Rebaudiosídeo A, e Rebaudiosídeo C foi feita por extração com n-butanol e cromatografia em coluna sobre Al2O3 e sílica gel. O método não é capaz de resultar em extrato de Stevia de alta pureza. Grandes quantidades de sais são usadas para o pré-tratamento. Purification process é de difícil aplicação em escala comercial.[0091] A method of preparation and purification of stevia extract was described by Kovylyaeva et al., 2007. The method includes extraction of dried leaves with 14 volumes of distilled water for 1 hour at boiling temperature, filtration and concentration of the filtrate to reach the state of syrup. The syrup was diluted, AlCl3.6H2O was added and stirred until dissolved. The mixture was stirred and treated with aqueous NaOH solution. The precipitate was filtered and the filtrate passed through a column packed with Al2O3. The column was eluted with distilled water to obtain a light brown solution. Further purification of Stevioside, Rebaudioside A, and Rebaudioside C was done by extraction with n-butanol and column chromatography over Al2O3 and silica gel. The method is not able to result in high purity Stevia extract. Large amounts of salts are used for pretreatment. Purification process is difficult to apply on a commercial scale.

[0092] Um eficiente processo de extração assistida com micro-ondas para extração de Steviosídeo e Rebaudiosídeo A foi descrito por Bandna et al. (2009). Folhas desidratadas e transformadas em pó de S. rebaudiana foram extraídas por técnicas convencionais de extração assistida com ultrassom e micro-ondas usando metanol, etanol e água como os únicos solventes assim como em misturas binárias. Extração a frio convencional foi efetuada a 25°C por 12 horas enquanto que a extração com ultrassom foi efetuada a uma temperatura de 35 ± 5°C por 30 minutos. A extração assistida com micro-ondas foi efetuada a uma potência de 80 W por 1 minuto a 50°C. Como resultado, a extração assistida com micro-ondas rendeu 8,64% e 2,34% de Steviosídeo e Rebaudiosídeo A, respectivamente, ao passo que as técnica convencional e aquela com ultrassom renderam 6,54 e 1,20%, e 4,20 e 1,98% de Steviosídeo e Rebaudiosídeo-A, respectivamente.[0092] An efficient microwave-assisted extraction process for extracting Stevioside and Rebaudioside A was described by Bandna et al. (2009). Dehydrated and powdered leaves of S. rebaudiana were extracted by conventional ultrasound and microwave assisted extraction techniques using methanol, ethanol and water as the only solvents as well as in binary mixtures. Conventional cold extraction was performed at 25°C for 12 hours while ultrasonic extraction was performed at a temperature of 35 ± 5°C for 30 minutes. Microwave-assisted extraction was performed at a power of 80 W for 1 minute at 50°C. As a result, the microwave-assisted extraction yielded 8.64% and 2.34% of Stevioside and Rebaudioside A, respectively, while the conventional technique and the one with ultrasound yielded 6.54 and 1.20%, and 4 .20 and 1.98% of Stevioside and Rebaudioside-A, respectively.

[0093] O isolamento eficiente de glicosídeos de esteviol também foi obtido usando extração com água quente pressurizada (Teo et al., 2009).[0093] Efficient isolation of steviol glycosides has also been achieved using pressurized hot water extraction (Teo et al., 2009).

[0094] Todos os métodos existentes tratam do isolamento e purificação de um ou outro glicosídeo de esteviol do extrato inicial e não mostram uma maneira de tratamento adicional da solução residual ou de purificação de compostos secundários. Por conseguinte, faz-se ainda necessário um método eficiente e econômico para retratamento completo do extrato produzido a partir da planta Stevia rebaudiana Bertoni.[0094] All existing methods deal with the isolation and purification of one or another steviol glycoside from the initial extract and do not show a way of further treatment of the residual solution or purification of secondary compounds. Therefore, an efficient and economical method for complete retreatment of the extract produced from the Stevia rebaudiana Bertoni plant is still necessary.

[0095] No entanto, não existem dados publicados sobre o isolamento e purificação comerciais de Rebaudiosídeo D que tenha propriedades sensoriais excelentes.[0095] However, there are no published data on the commercial isolation and purification of Rebaudioside D that has excellent sensory properties.

[0096] O teor de Rebaudiosídeo D no extrato é muito baixo e por isso sua purificação é muito difícil.[0096] The content of Rebaudioside D in the extract is very low and therefore its purification is very difficult.

[0097] Por conseguinte, faz-se ainda necessário um método eficiente e econômico para a preparação de Rebaudiosídeo D de alta pureza, que possa ser usado como adoçante em alimentos, bebidas, produtos farmacêuticos, cosméticos e outras indústrias.[0097] Therefore, there is still a need for an efficient and economical method for the preparation of high purity Rebaudioside D, which can be used as a sweetener in food, beverage, pharmaceutical, cosmetic and other industries.

Sumário da InvençãoSummary of the Invention

[0098] A invenção refere-se a um processo para isolamento e purificação de glicosídeos doces individuais da planta Stevia rebaudiana Bertoni, e mais particularmente para isolamento e purificação de Rebaudiosídeo D e sua aplicação como adoçante.[0098] The invention relates to a process for isolating and purifying individual sweet glycosides from the Stevia rebaudiana Bertoni plant, and more particularly for isolating and purifying Rebaudioside D and its application as a sweetener.

[0099] O principal problema técnico a ser resolvido e o principal objetivo da invenção são oferecer um método altamente eficiente para isolar e purificar diferentes glicosídeos de esteviol, particularmente Rebaudiosídeo D a partir de extrato de Stevia.[0099] The main technical problem to be solved and the main objective of the invention are to offer a highly efficient method to isolate and purify different steviol glycosides, particularly Rebaudioside D from Stevia extract.

[00100] A presente invenção oferece um processo para o retratamento de extrato da planta Stevia rebaudiana Bertoni com isolamento e purificação de glicosídeos doces individuais altamente purificados, particularmente Rebaudiosídeo D.[00100] The present invention offers a process for the retreatment of plant extract Stevia rebaudiana Bertoni with isolation and purification of highly purified individual sweet glycosides, particularly Rebaudioside D.

[00101] O Rebaudiosídeo D purificado altamente isolado ou em combinação com outros adoçantes e/ou outros componentes é útil como adoçante não calórico em composições comestíveis e mastigáveis tais como bebidas, confeitos, pães, biscoitos, gomas de mascar, e similares.[00101] The highly purified Rebaudioside D alone or in combination with other sweeteners and/or other components is useful as a non-caloric sweetener in edible and chewable compositions such as beverages, confections, breads, cookies, chewing gum, and the like.

[00102] De acordo com a presente invenção o isolamento e a purificação de Rebaudiosídeo D foram desenvolvidos a partir de extrato de Stevia. Em uma modalidade, o método para isolamento e purificação de Rebaudiosídeo D compreende tratar extrato de Stevia com uma primeira solução de álcool ou álcool- água para formar uma primeira mistura, obter um primeiro precipitado contendo Rebaudiosídeo A e Rebaudiosídeo D a partir da primeira mistura, tratar o primeiro precipitado com uma segunda solução de álcool ou álcool-água para formar uma segunda mistura, obter a partir da segunda mistura um segundo precipitado contendo Rebaudiosídeo A altamente purificado e um filtrado com alto teor de Rebaudiosídeo D, onde o segundo precipitado é secado para produzir Rebaudiosídeo A de alta pureza, e onde o filtrado é concentrado para produzir Rebaudiosídeo D de alta pureza. Opcionalmente, o método compreende ainda tratar o Rebaudiosídeo D purificado com uma terceira solução de álcool ou álcool-água para refinar o Rebaudiosídeo D de alta pureza.[00102] According to the present invention the isolation and purification of Rebaudioside D were developed from Stevia extract. In one embodiment, the method for isolating and purifying Rebaudioside D comprises treating Stevia extract with a first alcohol or alcohol-water solution to form a first mixture, obtaining a first precipitate containing Rebaudioside A and Rebaudioside D from the first mixture, treating the first precipitate with a second alcohol or alcohol-water solution to form a second mixture, obtaining from the second mixture a second precipitate containing highly purified Rebaudioside A and a filtrate with a high content of Rebaudioside D, where the second precipitate is dried to produce high purity Rebaudioside A, and where the filtrate is concentrated to produce high purity Rebaudioside D. Optionally, the method further comprises treating purified Rebaudioside D with a third alcohol or alcohol-water solution to refine high purity Rebaudioside D.

[00103] Constitui um objetivo da invenção oferecer um produto com gosto e características físicas excelentes. O produto compreende pelo menos um adoçante natural não nutritivo em uma quantidade suficiente para proporcionar adoçamento perceptível. A composição proporciona um perfil de sabor mais parecido com açúcar devido ao uso de Rebaudiosídeo D como um adoçante natural não nutritivo em uma quantidade suficiente para proporcionar adoçamento perceptível.[00103] It is an objective of the invention to offer a product with excellent taste and physical characteristics. The product comprises at least one non-nutritive natural sweetener in an amount sufficient to provide perceptible sweetness. The composition provides a more sugar-like flavor profile due to the use of Rebaudioside D as a natural non-nutritive sweetener in an amount sufficient to provide noticeable sweetness.

[00104] Deve ficar entendido que tanto a descrição geral precedente como a descrição detalhada a seguir são exemplificativas e explicativas e destinam-se a oferecer uma melhor explicação da invenção reivindicada.[00104] It should be understood that both the foregoing general description and the following detailed description are exemplary and explanatory and are intended to offer a better explanation of the claimed invention.

Breve Descrição dos DesenhosBrief Description of the Drawings

[00105] Os desenhos em anexo foram incluídos para oferecer melhor compreensão da invenção. Os desenhos ilustram modalidades da invenção e junto com a descrição servem para explicar os princípios das modalidades da invenção.[00105] The attached drawings have been included to offer a better understanding of the invention. The drawings illustrate embodiments of the invention and together with the description serve to explain the principles of the embodiments of the invention.

[00106] A FIG. 1 mostra a estrutura química de esteviol e dos glicosídeos de esteviol presentes nas folhas de Stevia rebaudiana Bertoni.[00106] FIG. 1 shows the chemical structure of steviol and steviol glycosides present in the leaves of Stevia rebaudiana Bertoni.

[00107] A FIG. 2 mostra as estruturas químicas de glicosídeos de esteviol presentes em Stevia rebaudiana Bertoni.[00107] FIG. 2 shows the chemical structures of steviol glycosides present in Stevia rebaudiana Bertoni.

[00108] A FIG. 3 mostra um esquema de purificação de uma etapa de Rebaudiosídeo A usando sistemas de etanol-água de acordo com uma modalidade da presente invenção.[00108] FIG. 3 shows a one-step purification scheme of Rebaudioside A using ethanol-water systems according to one embodiment of the present invention.

[00109] A FIG. 4 mostra os gráficos de HPLC de Rebaudiosídeo D nas várias etapas de purificação.[00109] FIG. 4 shows the HPLC graphs of Rebaudioside D at various purification steps.

[00110] A FIG. 5 mostra um esquema de purificação de Rebaudiosídeo D de acordo com uma modalidade da presente invenção.[00110] FIG. 5 shows a purification scheme of Rebaudioside D according to an embodiment of the present invention.

[00111] A FIG. 6 mostra o espectro de FTIR de Rebaudiosídeo D.[00111] FIG. 6 shows the FTIR spectrum of Rebaudioside D.

Descrição Detalhada da InvençãoDetailed Description of the Invention

[00112] A presente invenção oferece um processo para isolamento e purificação de glicosídeos doces individuais a partir de extrato da planta Stevia rebaudiana Bertoni, e mais particularmente para isolamento e purificação de Rebaudiosídeo D a partir de extrato da planta Stevia rebaudiana Bertoni e sua aplicação em vários produtos.[00112] The present invention offers a process for isolating and purifying individual sweet glycosides from an extract of the Stevia rebaudiana Bertoni plant, and more particularly for isolating and purifying Rebaudioside D from an extract of the Stevia rebaudiana Bertoni plant and its application in several products.

[00113] As vantagens da presente invenção ficarão mais evidentes a partir da descrição detalhada dada mais adiante. No entanto, deve ficar entendido que a descrição detalhada e os exemplos específicos, embora indiquem modalidades preferidas da invenção, são dados a título meramente ilustrativo, uma vez que várias alterações e modificações dentro do espírito e escopo da invenção ficarão mais aparentes para os especialistas na técnica a partir desta descrição detalhada.[00113] The advantages of the present invention will become more evident from the detailed description given below. However, it should be understood that the detailed description and specific examples, while indicating preferred embodiments of the invention, are given by way of illustration only, as various changes and modifications within the spirit and scope of the invention will become more apparent to those skilled in the art. technique from this detailed description.

[00114] Entre os glicosídeos doces existentes na Stevia apenas o Steviosídeo e o Rebaudiosídeo A encontram-se disponíveis a custo moderado a uma pureza <80% e a custo alto a uma pureza >80%. A pureza mais alta do produto comercial normalmente é superior a 97%. No mercado não há quantidades comerciais de Rebaudiosídeo B, Rebaudiosídeo D, e Rebaudiosídeo C. Padrões analíticos de Rebaudiosídeos E e F em pequenas quantidades ainda não se encontram disponíveis.[00114] Among the sweet glycosides existing in Stevia, only Stevioside and Rebaudioside A are available at a moderate cost at a purity <80% and at a high cost at a purity >80%. The highest commercial product purity is typically greater than 97%. There are no commercial amounts of Rebaudioside B, Rebaudioside D, and Rebaudioside C on the market. Analytical standards of Rebaudiosides E and F in small amounts are not yet available.

[00115] Rebaudiosídeo D é um glicosídeo diterpenoide adoçante de alta potência que tem a estrutura química apresentada na FIG. 2.[00115] Rebaudioside D is a high potency sweetening diterpenoid glycoside having the chemical structure shown in FIG. two.

[00116] O Rebaudiosídeo D é isolado e extraído, junto com outros glicosídeos de esteviol, a partir da planta Stevia rebaudiana Bertoni ("Stevia"), que atualmente é comercialmente cultivada no Japão, Taiwan, Malásia, Coreia do Sul, China, Israel, Índia, Brasil, Austrália, e Paraguai. Ele é um adoçante não calórico ideal com propriedades funcionais e sensoriais superiores àquelas de muitos adoçantes de alta potência. As formas processadas da Stevia podem ser de 30 a 400 vezes mais potentes que o açúcar. Entre os glicosídeos diterpenoides doces da Stevia, o Rebaudiosídeo D é o menos amargo, e com o sabor residual menos persistente.[00116] Rebaudioside D is isolated and extracted, along with other steviol glycosides, from the plant Stevia rebaudiana Bertoni ("Stevia"), which is currently commercially cultivated in Japan, Taiwan, Malaysia, South Korea, China, Israel , India, Brazil, Australia, and Paraguay. It is an ideal no-calorie sweetener with functional and sensory properties superior to those of many high potency sweeteners. Processed forms of Stevia can be 30 to 400 times more potent than sugar. Among Stevia's sweet diterpenoid glycosides, Rebaudioside D is the least bitter, with the least persistent aftertaste.

[00117] No momento não existe qualquer tecnologia comercial publicada referente ao isolamento e à purificação de Rebaudiosídeo D, e certamente faz-se necessário um método eficiente e econômico para isolamento e purificação completos de glicosídeos doces individuais a partir de extrato de Stevia.[00117] At present there is no published commercial technology regarding the isolation and purification of Rebaudioside D, and an efficient and cost-effective method for complete isolation and purification of individual sweet glycosides from stevia extract is certainly needed.

[00118] A presente invenção oferece um método para a produção de Rebaudiosídeo D altamente purificado a partir de extrato de Stevia e seu uso subsequente.[00118] The present invention offers a method for the production of highly purified Rebaudioside D from Stevia extract and its subsequent use.

[00119] Doravante, o termo “altamente purificado” refere-se a uma composição de Rebaudiosídeo D que inclui pelo menos cerca de 91% a 100% do Rebaudiosídeo D em termos de peso seco.[00119] Hereinafter, the term "highly purified" refers to a Rebaudioside D composition that includes at least about 91% to 100% of the Rebaudioside D in terms of dry weight.

[00120] Modalidades exemplificativas desta invenção estão descritas em detalhes mais adiante e ilustradas nas FIGS. 3-6.[00120] Exemplary embodiments of this invention are described in detail below and illustrated in FIGS. 3-6.

[00121] Entretanto, na descrição detalhada, apenas algumas modalidades exemplificativas da presente invenção estão mostradas e descritas, a título ilustrativo. Como os especialistas na técnica vão perceber, a invenção pode ser praticada de muitas formas diferentes e esta não deve ser interpretada como limitada às modalidades apresentadas neste relatório.[00121] However, in the detailed description, only some exemplary embodiments of the present invention are shown and described, by way of illustration. As those skilled in the art will appreciate, the invention can be practiced in many different ways and this should not be construed as limited to the embodiments presented in this report.

[00122] Glicosídeos diterpenoides, incluindo substâncias de sabor adocicado, são encontrados nos caules, sementes e folhas da planta S. rebaudiana Bertoni, estando presentes na concentração mais alta nas folhas. As folhas, portanto, constituem o material de partida preferido para a recuperação de glicosídeos doces.[00122] Diterpenoid glycosides, including substances with a sweet taste, are found in the stems, seeds and leaves of the S. rebaudiana Bertoni plant, being present in the highest concentration in the leaves. Leaves therefore constitute the preferred starting material for the recovery of sweet glycosides.

[00123] A purificação de Rebaudiosídeo D é desenvolvida partindo de extrato de Stevia comercial. O teor de Rebaudiosídeo D no extrato pode variar dependente da variedade da planta Stevia ou do esquema tecnológico de preparação do extrato.[00123] The purification of Rebaudioside D is developed starting from commercial Stevia extract. The Rebaudioside D content in the extract may vary depending on the variety of the Stevia plant or the technological scheme for preparing the extract.

[00124] Extrato de Stevia contendo Steviosídeo - 25,40%, Rebaudiosídeo A - 59,14%, Rebaudiosídeo C - 9,71%, Rebaudiosídeo D - 2,03%, Rebaudiosídeo B - 0,56%, Rebaudiosídeo E - 0,68%, Rebaudiosídeo F - 1,02%, Steviolbiosídeo - 0,11%, e Dulcosídeo A - 1,35% foi usado como um material de partida exemplificativo para ilustrar a purificação de Rebaudiosídeo D.[00124] Stevia Extract containing Stevioside - 25.40%, Rebaudioside A - 59.14%, Rebaudioside C - 9.71%, Rebaudioside D - 2.03%, Rebaudioside B - 0.56%, Rebaudioside E - 0 .68%, Rebaudioside F - 1.02%, Steviolbioside - 0.11%, and Dulcoside A - 1.35% was used as an exemplary starting material to illustrate the purification of Rebaudioside D.

[00125] Com referência agora à FIG. 3, a invenção oferece uma purificação de uma etapa de Rebaudiosídeo A de alta pureza com teor relativamente alto de Rebaudiosídeo D de acordo com uma modalidade da presente invenção. Extrato de Stevia foi dissolvido em uma primeira solução de etanol-água a 50-70oC, de preferência 55-60oC, por cerca de 10-30 min, de preferência 15-20 min, e em seguida a 15-40oC, de preferência 20-22oC por cerca de 18-48 horas, de preferência 20-24 horas com agitação. Quando a temperatura atingiu 22oC, 1-2% (p/vol.) de Rebaudiosídeo A altamente purificado foram adicionados à mistura reacional como uma substância de partida para iniciar a cristalização. A proporção de extrato e da primeira solução de etanol-água dependeu do teor de glicosídeos secundários e variou entre 1,0 : 2,5 - 1,0: 10,0, p/v, de preferência 1,0 : 3,0-5,0, p/v.[00125] Referring now to FIG. 3, the invention provides a one-step purification of high purity Rebaudioside A with relatively high content of Rebaudioside D according to an embodiment of the present invention. Stevia extract was first dissolved in an ethanol-water solution at 50-70oC, preferably 55-60oC, for about 10-30 min, preferably 15-20 min, and then at 15-40oC, preferably 20 -22oC for about 18-48 hours, preferably 20-24 hours with stirring. When the temperature reached 22oC, 1-2% (w/vol) of highly purified Rebaudioside A was added to the reaction mixture as a starting substance to initiate crystallization. The ratio of extract and the first ethanol-water solution depended on the secondary glycoside content and varied between 1.0 : 2.5 - 1.0 : 10.0, w/v, preferably 1.0 : 3.0 -5.0, w/v.

[00126] Durante este tempo formou-se um primeiro precipitado, que foi separado por filtração ou centrifugação.[00126] During this time, a first precipitate formed, which was separated by filtration or centrifugation.

[00127] A concentração de etanol na primeira solução de etanol-água varia entre 75-99%, de preferência 82-88%. O teor de Rebaudiosídeo A e Rebaudiosídeo D no primeiro precipitado varia entre 79-99% e 0,8-4,0%, respectivamente.[00127] The concentration of ethanol in the first ethanol-water solution varies between 75-99%, preferably 82-88%. The content of Rebaudioside A and Rebaudioside D in the first precipitate varies between 79-99% and 0.8-4.0%, respectively.

[00128] A pureza e o rendimento de Rebaudiosídeo A dependeu da proporção de extrato para a solução de etanol-água e da concentração etanol. Os dados a várias concentrações de etanol estão resumidos na TABELA 3. A proporção extrato: etanol foi de 1:3,0, p/v.[00128] The purity and yield of Rebaudioside A depended on the ratio of extract to the ethanol-water solution and the ethanol concentration. Data at various ethanol concentrations are summarized in TABLE 3. The extract:ethanol ratio was 1:3.0, w/v.

[00129] O nível de purificação e o rendimento de Rebaudiosídeo A em vários volumes da solução de etanol a 88% estão resumidos na TABELA 4. TABELA 3 TABELA 4 [00129] The purification level and yield of Rebaudioside A in various volumes of the 88% ethanol solution are summarized in TABLE 4. TABLE 3 TABLE 4

[00130] O teor de Rebaudiosídeo D aumenta com o aumento da concentração de etanol até 88-90% e a redução da proporção de solução de etanol-água para extrato. Ao mesmo tempo a pureza do Rebaudiosídeo A aumentou com soluções mais diluídas de etanol e proporções mais altas de solução de etanol-água para extrato.[00130] The content of Rebaudioside D increases with increasing ethanol concentration up to 88-90% and reducing the ratio of ethanol-water solution to extract. At the same time the purity of Rebaudioside A increased with more dilute ethanol solutions and higher ratios of ethanol-water solution to extract.

[00131] O rendimento do produto nesta etapa para extratos de Stevia com vários teores de Rebaudiosídeo A, depois de tratamento com proporções de 1:3 (p/vol.) de etanol a 88% está resumido na TABELA 5. Como era de se esperar, o rendimento do produto aumenta com o aumento do teor de Rebaudiosídeo A no extrato inicial. TABELA 5 [00131] The product yield at this stage for Stevia extracts with various levels of Rebaudioside A, after treatment with proportions of 1:3 (w/vol.) of 88% ethanol is summarized in TABLE 5. As expected wait, product yield increases with increasing Rebaudioside A content in the initial extract. TABLE 5

[00132] O precipitado foi separado por filtração ou centrifugação, lavado com cerca de dois volumes de etanol absoluto e secado. Qualquer tipo de equipamento que permite a separação de precipitado de líquido, tal como vários tipos de centrífugas ou sistemas de filtração, pode ser usado nesta etapa. Diferentes tipos de secadores, tais como secador a vácuo giratório, secador de leito fluido, secador de túnel giratório e secador de placas, são adequados para produzir glicosídeos de esteviol purificados na forma de pó.[00132] The precipitate was separated by filtration or centrifugation, washed with about two volumes of absolute ethanol and dried. Any type of equipment that allows separation of precipitate from liquid, such as various types of centrifuges or filtration systems, can be used in this step. Different types of dryers such as rotary vacuum dryer, fluid bed dryer, rotary tunnel dryer and plate dryer are suitable for producing purified steviol glycosides in powder form.

[00133] No caso em que o extrato inicial contém uma grande quantidade de Rebaudiosídeo B e Rebaudiosídeo D, para a purificação de Rebaudiosídeo A e posteriormente de Rebaudiosídeo D é preferível usar concentrações mais baixas de etanol e uma proporção mais alta da solução de etanol-água para o extrato (TABELA 6; TABELA 7). Nesta série de experiências o teor de Rebaudiosídeo A no extrato inicial era de 48,7%.[00133] In the case where the initial extract contains a large amount of Rebaudioside B and Rebaudioside D, for the purification of Rebaudioside A and subsequently of Rebaudioside D it is preferable to use lower concentrations of ethanol and a higher proportion of the ethanol- water for the extract (TABLE 6; TABLE 7). In this series of experiments the Rebaudioside A content in the initial extract was 48.7%.

[00134] O rendimento do produto com alto teor de Rebaudiosídeo A e Rebaudiosídeo D pode ser aumentado com o uso de etanol para posterior precipitação. Para tanto, ao final da cristalização, 0,5-1,0, v/p, de preferência 0,5-0,8, v/p, de etanol absoluto para o sólido inicial, foi adicionado à mistura e o processo continuou por mais 2-3 horas. O rendimento e a pureza do produto proveniente do extrato com teor de Rebaudiosídeo A de 48,7% estão resumidos na TABELA 8. TABELA 6 TABELA 7 TABELA 8 [00134] The yield of the product with a high content of Rebaudioside A and Rebaudioside D can be increased with the use of ethanol for subsequent precipitation. Therefore, at the end of the crystallization, 0.5-1.0, v/w, preferably 0.5-0.8, v/w, of absolute ethanol for the initial solid, was added to the mixture and the process continued. for another 2-3 hours. The yield and purity of the product from the extract with a Rebaudioside A content of 48.7% are summarized in TABLE 8. TABLE 6 TABLE 7 TABLE 8

[00135] Para proc uzir Rebaudiosíd leo A de alta pureza o processo pode ser realizado a 30-50oC sem uma etapa de resfriamento. Embora a pureza do Rebaudiosídeo A fosse mais alta, o processo resultou em menor rendimento do produto. A qualidade do produto aumentou a temperaturas de lavagem mais altas. Os resultados obtidos usando 3,5 volumes de etanol a 85% para uma parte de extrato depois de 24 horas e com e sem um estágio posterior de precipitação estão resumidos na TABELA 9. TABELA 9 [00135] To produce high purity Rebaudioside A, the process can be carried out at 30-50oC without a cooling step. Although the purity of Rebaudioside A was higher, the process resulted in a lower product yield. Product quality increased at higher wash temperatures. The results obtained using 3.5 volumes of 85% ethanol for one part extract after 24 hours and with and without a further precipitation stage are summarized in TABLE 9. TABLE 9

[00136] Quando o teor de Rebaudiosídeo A no produto final era inferior a 97% principalmente devido ao alto teor de Rebaudiosídeo B e/ou Rebaudiosídeo D, o produto era adicionalmente lavado com uma solução aquosa de etanol. Para tanto, o Rebaudiosídeo A obtido depois da precipitação foi suspendido na mistura de etanol-água à temperatura ambiente por 30-40 min. Depois de obtida uma suspensão homogênea a temperatura foi aumentada até 35-50oC, de preferência 38-42oC e a suspensão foi agitada por cerca de 10-20 horas, de preferência 12-15 horas, e em seguida a 10-25oC, de preferência 20-22oC por cerca de 3-20 horas, de preferência 5-10 horas. A proporção de Rebaudiosídeo A e etanol foi de 1,0:2,0 - 1,0:5,0, p/v, de preferência 1,0:2,5-4,0, p/v. A concentração de etanol ficou entre 85-93%, de preferência 88-90%.[00136] When the content of Rebaudioside A in the final product was less than 97% mainly due to the high content of Rebaudioside B and/or Rebaudioside D, the product was additionally washed with an aqueous ethanol solution. For this purpose, the Rebaudioside A obtained after precipitation was suspended in the ethanol-water mixture at room temperature for 30-40 min. After obtaining a homogeneous suspension, the temperature was increased to 35-50oC, preferably 38-42oC and the suspension was stirred for about 10-20 hours, preferably 12-15 hours, and then at 10-25oC, preferably 20-22oC for about 3-20 hours, preferably 5-10 hours. The ratio of Rebaudioside A and ethanol was 1.0:2.0 - 1.0:5.0 w/v, preferably 1.0:2.5-4.0 w/v. The ethanol concentration was between 85-93%, preferably 88-90%.

[00137] No caso em que a pureza do Rebaudiosídeo A era inferior a 97% devido ao alto teor de Steviosídeo, o produto era lavado com etanol absoluto da mesma maneira que aquela descrita acima para o produto contaminado com Rebaudiosídeo B e Rebaudiosídeo D. A proporção de Rebaudiosídeo A e etanol foi de 1,0:2,0 - 1,0:5,0, p/v, de preferência 1,0: 2,5-4,0, p/v.[00137] In cases where the purity of Rebaudioside A was less than 97% due to the high content of Stevioside, the product was washed with absolute ethanol in the same way as described above for the product contaminated with Rebaudioside B and Rebaudioside D. A. ratio of Rebaudioside A and ethanol was 1.0:2.0 - 1.0:5.0, w/v, preferably 1.0:2.5-4.0, w/v.

[00138] Com referência agora à FIG. 5, oferecemos um fluxograma para a purificaçãao de Rebaudiosídeo A e Rebaudiosídeo D de acordo com uma modalidade da presente invenção.[00138] Referring now to FIG. 5, we provide a flowchart for the purification of Rebaudioside A and Rebaudioside D according to an embodiment of the present invention.

[00139] A purificação de Rebaudiosídeo D a partir de cristais/precipitados com teor de Rebaudiosídeo A e Rebaudiosídeo D em torno de 75-80% e 2,0-3,5%, respectivamente, foi desenvolvida da seguinte maneira. Deve-se observar que os cristais com Rebaudiosídeo A e Rebaudiosídeo D podem ser obtidos pelo processo descrito em relação à FIG. 3.[00139] The purification of Rebaudioside D from crystals/precipitates with Rebaudioside A and Rebaudioside D content around 75-80% and 2.0-3.5%, respectively, was developed as follows. It should be noted that crystals with Rebaudioside A and Rebaudioside D can be obtained by the process described in relation to FIG. 3.

[00140] O precipitado com alto teor de Rebaudiosídeo A e Rebaudiosídeo D foi misturado com uma segunda solução de etanol-água e incubado a 45- 65oC, de preferência 50-55oC por 2-6 horas, de preferência 3-4 horas com agitação. Em seguida, a mistura foi resfriada para a temperatura ambiente por 1-3 horas, de preferência 0,5-1,0 hora. O precipitado foi separado por filtração.[00140] The precipitate with high content of Rebaudioside A and Rebaudioside D was mixed with a second ethanol-water solution and incubated at 45-65oC, preferably 50-55oC for 2-6 hours, preferably 3-4 hours with stirring . Then the mixture was cooled to room temperature for 1-3 hours, preferably 0.5-1.0 hours. The precipitate was filtered off.

[00141] A proporção preferível de sólidos para a solução aquosa de etanol foi de 1 a 5, p/v, e a concentração ótima de etanol foi de 78%. Entretanto, a concentração de etanol pode variar nos limites de 70-80% e a proporção, de 1:2,5 - 1,7, p/v.[00141] The preferable ratio of solids to the aqueous ethanol solution was 1 to 5, w/v, and the optimal concentration of ethanol was 78%. However, the ethanol concentration can vary within the limits of 70-80% and the ratio from 1:2.5 - 1.7 w/v.

[00142] Para facilitar a filtração do precipitado com alto teor de Rebaudiosídeo D, carvão ativo em uma quantidade de 0,5-3,0% em volume, de preferência 1,0-1,5 % em volume foi adicionado à mistura antes da filtração. O precipitado foi então misturado com 3-5 volumes de 30-50% de metanol. A suspensão foi mantida com agitação a 45-65oC, de preferência 57- 62oC por 1-5 horas, de preferência 2-3 horas e submetida à filtração. Eluição dos glicosídeos adsorvidos sobre o carvão ativo foi efetuada com metanol.[00142] To facilitate the filtration of the precipitate with a high content of Rebaudioside D, active carbon in an amount of 0.5-3.0% by volume, preferably 1.0-1.5% by volume was added to the mixture before of filtration. The precipitate was then mixed with 3-5 volumes of 30-50% methanol. The suspension was maintained with stirring at 45-65oC, preferably 57-62oC for 1-5 hours, preferably 2-3 hours and subjected to filtration. Elution of the glycosides adsorbed on activated charcoal was carried out with methanol.

[00143] Tanto os precipitados obtidos sem aplicação de carvão quanto aqueles obtidos com aplicação de carvão contêm 19-22,1% de Rebaudiosídeo D nas condições ótimas (TABELA 10). TABELA 10 [00143] Both the precipitates obtained without charcoal application and those obtained with charcoal application contain 19-22.1% of Rebaudioside D under optimal conditions (TABLE 10). TABLE 10

[00144] Em principalmentecípio, quanto maior o volume aplicado de metanol mais rápido pode ser o processo de eluição. O processo pôde ser terminado em um período de tempo mais curto quando uma solução aquosa de metanol foi usada.[00144] In principle, the greater the applied volume of methanol, the faster the elution process can be. The process could be completed in a shorter period of time when an aqueous methanol solution was used.

[00145] A fração metanol foi evaporada até a secura.[00145] The methanol fraction was evaporated to dryness.

[00146] Quando o material inicial contendo 95,6% de Rebaudiosídeo A e 3,5% de Rebaudiosídeo D (FIG. 4a) foi misturado com 3,5 volumes of 78,0% de etanol, a mistura foi fervida por 10-15 minutos e o material não dissolvido foi separado por filtração a quente, e a produção de precipitado variou dentro dos limites de 6-7,0% com teores de 52-53,0% e 43-45,0% de Rebaudiosídeo A e Rebaudiosídeo D (FIG. 4b), respectivamente.[00146] When the starting material containing 95.6% Rebaudioside A and 3.5% Rebaudioside D (FIG. 4a) was mixed with 3.5 volumes of 78.0% ethanol, the mixture was boiled for 10- 15 minutes and the undissolved material was separated by hot filtration, and the precipitate production varied within the limits of 6-7.0% with contents of 52-53.0% and 43-45.0% of Rebaudioside A and Rebaudioside D (FIG. 4b), respectively.

[00147] Para purificação adicional, o precipitado foi suspendido em 50% de etanol a uma proporção de 1:2, p/v e a 30-40oC, de preferência 33-37oC, e mantido por 2-15 horas, de preferência 10-12 horas com agitação. A suspensão foi filtrada e secada. O rendimento de precipitado com teor de cerca de 1517,0% de Rebaudiosídeo A e 80-82% de Rebaudiosídeo D variou na faixa de 42-46,0%. Em princípio até cinco volumes de etanol aquoso podem ser aplicados nesta etapa. A concentração de etanol pode variar dentro dos limites de 10-80%, de preferência 45-52%.[00147] For further purification, the precipitate was suspended in 50% ethanol at a ratio of 1:2, w/v and at 30-40oC, preferably 33-37oC, and kept for 2-15 hours, preferably 10-12 hours with agitation. The suspension was filtered and dried. The precipitate yield with content of about 1517.0% Rebaudioside A and 80-82% Rebaudioside D ranged from 42-46.0%. In principle, up to five volumes of aqueous ethanol can be applied in this step. The ethanol concentration can vary within the limits of 10-80%, preferably 45-52%.

[00148] O precipitado foi submetido a um tratamento semelhante. O precipitado foi separado por filtração, lavado com cerca de dois volumes de metanol anidro e secado. Qualquer tipo de equipamento, que permite separar precipitado de líquido, tal como vários tipos de centrífugas ou sistemas de filtração, pode ser usado nesta etapa. Diferentes tipos de secadores, tais como secador a vácuo giratório, secador de leito fluido, secador de túnel giratório e secador de placas, são adequados para produzir Rebaudiosídeo D purificado na forma de pó.[00148] The precipitate was subjected to a similar treatment. The precipitate was filtered off, washed with about two volumes of anhydrous methanol and dried. Any type of equipment, which allows separating precipitate from liquid, such as various types of centrifuges or filtration systems, can be used in this step. Different types of dryers such as rotary vacuum dryer, fluid bed dryer, rotary tunnel dryer and plate dryer are suitable for producing purified Rebaudioside D in powder form.

[00149] A pureza do Rebaudiosídeo D foi de cerca de 95-99% (FIG. 4c). O rendimento do produto foi de cerca de 58-60%.[00149] The purity of Rebaudioside D was about 95-99% (FIG. 4c). Product yield was about 58-60%.

[00150] A solução combinada remanescente depois do isolamento de Rebaudiosídeo D foi misturada com uma pequena quantidade de Rebaudiosídeo A como substância de partida e deixada cristalizar a 20- 22oC por 20-24 horas. O teor de Rebaudiosídeo A nos cristais variou entre 97,7-99,4%.[00150] The combined solution remaining after the isolation of Rebaudioside D was mixed with a small amount of Rebaudioside A as a starting substance and allowed to crystallize at 20-22oC for 20-24 hours. The Rebaudioside A content in the crystals ranged from 97.7-99.4%.

[00151] A solução remanescente da primeira precipitação pode ser usada para isolamento de Rebaudiosídeo A ou de uma mistura de glicosídeos de esteviol altamente purificada.[00151] The remaining solution from the first precipitation can be used for isolation of Rebaudioside A or a mixture of highly purified steviol glycosides.

[00152] O Rebaudiosídeo D de alta pureza obtido nesta invenção tem um peso molecular de 1129,15, fórmula molecular C50H80O28 e a estrutura apresentada na FIG. 2, e está na forma de um pó branco e inodoro. O composto é cerca de 180-200 vezes mais doce que o açúcar quando comparado a uma solução de sacarose a 10%. O espectro de absorção no infravermelho está mostrado na FIG. 6. O Rebaudiosídeo D apresenta uma absorção característica máxima a cerca de 1730 cm-1. Outras propriedades do Rebaudiosídeo D puro são as seguintes:[00152] The high purity Rebaudioside D obtained in this invention has a molecular weight of 1129.15, molecular formula C50H80O28 and the structure shown in FIG. 2, and is in the form of a white, odorless powder. The compound is about 180-200 times sweeter than sugar when compared to a 10% sucrose solution. The infrared absorption spectrum is shown in FIG. 6. Rebaudioside D has a characteristic maximum absorption at around 1730 cm-1. Other properties of pure Rebaudioside D are as follows:

[00153] Ponto de fusão: 248-249oC.[00153] Melting point: 248-249oC.

[00154] Rotação específica: [α]D25 -29,5o em 50% de etanol (C=1,0).[00154] Specific rotation: [α]D25 -29.5o in 50% ethanol (C=1.0).

[00155] A solubilidade em água é de cerca de 0,2% que aumenta com o aumento da temperatura. Ele precipita novamente com o resfriamento da solução. Altamente solúvel durante a etapa de separação cromatográfica e antes da cristalização.[00155] The solubility in water is about 0.2% which increases with increasing temperature. It precipitates again on cooling the solution. Highly soluble during the chromatographic separation step and before crystallization.

[00156] Solúvel em soluções diluídas de metanol, etanol, n-propanol, e isopropanol.[00156] Soluble in dilute solutions of methanol, ethanol, n-propanol, and isopropanol.

[00157] Insolúvel em acetona, benzeno, clorofórmio, e éter.[00157] Insoluble in acetone, benzene, chloroform, and ether.

[00158] O Rebaudiosídeo D obtido nesta invenção é estável ao calor e ao pH.[00158] The Rebaudioside D obtained in this invention is stable to heat and pH.

[00159] O Rebaudiosídeo D obtido de acordo com esta invenção pode ser incorporado como um adoçante natural de alta intensidade em alimentos, bebidas, composições farmacêuticas, cosméticos, gomas de mascar, produtos de mesa, cereais, laticínios, pastas de dentes e outras composições para a cavidade oral etc. Os exemplos que se seguem mostram proporções representativas que podem ser empregadas.[00159] Rebaudioside D obtained according to this invention can be incorporated as a high-intensity natural sweetener in foods, beverages, pharmaceutical compositions, cosmetics, chewing gum, tableware, cereals, dairy products, toothpastes and other compositions for the oral cavity etc. The examples that follow show representative proportions that can be employed.

[00160] Além disso, o Rebaudiosídeo D pode ser usado como adoçante não apenas em bebidas, alimentos, e outros produtos dedicados ao consumo humano, mas também em ração animal e forragem com características aperfeiçoadas.[00160] In addition, Rebaudioside D can be used as a sweetener not only in beverages, foods, and other products dedicated to human consumption, but also in animal feed and forage with improved characteristics.

[00161] Durante a manufatura de alimentos, bebidas, produtos farmacêuticos, cosméticos, produtos de mesa, gomas de mascar, os métodos convencionais tais como misturação, amassamento, dissolução, desoxidação, permeação, percolação, borrifação, atomização, infusão e outros métodos podem ser usados.[00161] During the manufacture of food, beverages, pharmaceuticals, cosmetics, tableware, chewing gum, conventional methods such as mixing, kneading, dissolving, deoxidation, permeation, percolation, spraying, atomization, infusion and other methods can be used.

[00162] O adoçante obtido nesta invenção pode ser usado em formas secas ou líquidas. Ele pode ser adicionado antes ou depois do tratamento térmico dos produtos alimentícios. A quantidade de adoçante depende da finalidade de uso. Ele pode ser acrescentado isolado ou em combinação com outros compostos.[00162] The sweetener obtained in this invention can be used in dry or liquid forms. It can be added before or after heat treatment of food products. The amount of sweetener depends on the purpose of use. It can be added alone or in combination with other compounds.

[00163] Em uma modalidade particular desta invenção o Rebaudiosídeo D, como composto adoçante, pode ser empregado como o único adoçante, ou ele pode ser usado junto com outros adoçantes naturais de alta intensidade.[00163] In a particular embodiment of this invention, Rebaudioside D, as a sweetening compound, can be used as the only sweetener, or it can be used together with other high-intensity natural sweeteners.

[00164] A expressão “adoçantes naturais de alta intensidade”, conforme usada neste relatório, refere-se a quaisquer composições que são encontradas na natureza e que possuem poder adoçante superior ao da sacarose, frutose ou glicose.[00164] The expression “high-intensity natural sweeteners”, as used in this report, refers to any compositions that are found in nature and that have a sweetening power greater than that of sucrose, fructose or glucose.

[00165] Exemplos não limitativos de natural adoçantes de alta intensidade incluem Steviosídeo, Rebaudiosídeo A, Rebaudiosídeo B, Rebaudiosídeo C, Rebaudiosídeo E, Rebaudiosídeo F, Steviolbiosídeo, Dulcosídeo A, Rubusosídeo, mogrosídeos, brazeína, ácido glicirrízico e seus sais, taumatina, perilartina, pernandulcin, mucuroziosídeos, baiyunosídeo, flomisosídeo-I, ácido dimetil- hexahidrofluoreno-dicarboxílico, abrusosídeos, periandrina, carnosiflosídeos, ciclocariosídeo, pterocariosídeos, polipodosídeo A, brazilina, hernandulcin, filodulcin, glicifilina, florizina, trilobatina, dihidroflavonol, dihidroquercetin-3- acetato, neoastilibina, trans-cinamaldeído, monatina e seus sais, seligueaina A, hematoxilina, monelina, osladina, pterocariosídeo A, pterocariosídeo B, mabinlina, pentadina, miraculina, curculina, neoculina, ácido clorogênico, cinarina, adoçante Luo Han Guo, siamenosídeo e similares, e combinações dos mesmos.[00165] Non-limiting examples of natural high intensity sweeteners include Stevioside, Rebaudioside A, Rebaudioside B, Rebaudioside C, Rebaudioside E, Rebaudioside F, Steviolbioside, Dulcoside A, Rubusoside, mogrosides, brazein, glycyrrhizic acid and its salts, thaumatin, perilartin , pernandulcin, mucuroziosides, baiyunosides, flomisoside-I, dimethylhexahydrofluorene-dicarboxylic acid, abrusosides, perandrin, carnosiflosides, cyclocaryoside, pterocaryosides, polypodoside A, brazilin, hernandulcin, filodulcin, glycifylline, phlorizin, trilobatin, dihydroflavonol, dihydroquercetin- 3- acetate , neoastilibin, trans-cinnamaldehyde, monatin and its salts, seligeain A, hematoxylin, monellin, osladin, pterocaryoside A, pterocaryoside B, mabinlin, pentadine, miraculin, curculin, neoculin, chlorogenic acid, cynarin, Luo Han Guo sweetener, siamenoside and the like , and combinations thereof.

[00166] Em uma outra modalidade particular o Rebaudiosídeo D como composto adoçante pode ser usado junto com adoçantes sintéticos ou artificiais de alta intensidade.[00166] In another particular embodiment, Rebaudioside D as a sweetening compound can be used together with high-intensity synthetic or artificial sweeteners.

[00167] A expressão “adoçantes sintéticos ou artificiais de alta intensidade”, conforme usado neste relatório, refere-se a quaisquer composições que não são encontradas na natureza e que têm um poder adoçante superior ao da sacarose, frutose ou glicose.[00167] The expression “high-intensity synthetic or artificial sweeteners”, as used in this report, refers to any compositions that are not found in nature and that have a sweetening power greater than that of sucrose, fructose or glucose.

[00168] Exemplos não limitativos adoçantes sintéticos ou artificiais de alta intensidade incluem sucralose, acesulfame potássio, aspartame, alitame, sacarina, neo-hesperidina di-hidrochalcona, ciclamato, neotame, dulcin, suosan, éster 1-metílico de N-[N-[3-(3-hidroxi-4-metoxifenil)propil]-L- a- aspartil]-L-fenilalanina, éster 1-metílico de N-[N- [3-(3-hidroxi-4-metoxifenil)-3-metilbutil]-L- a- aspartil]-L- fenilalanina, éster 1-metílico de N-[N- [3-(3-metoxi-4-hidroxifenil) propil]-L- a-aspartil]- L-fenilalanina, sais dos mesmos, entre outros, e combinações dos mesmos.[00168] Non-limiting examples of high intensity synthetic or artificial sweeteners include sucralose, acesulfame potassium, aspartame, alitame, saccharin, neohesperidin dihydrochalcone, cyclamate, neotame, dulcin, suosan, N-[N-1-methyl ester [3-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)propyl]-L-α-aspartyl]-L-phenylalanine, N-[N-[3-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)-3 1-methyl ester -methylbutyl]-L-α-aspartyl]-L-phenylalanine, N-[N-[3-(3-methoxy-4-hydroxyphenyl)propyl]-L-α-aspartyl]-L-phenylalanine 1-methyl ester , salts thereof, among others, and combinations thereof.

[00169] Em uma modalidade o Rebaudiosídeo D pode ser usado em combinação com supressores naturais de adoçante tais como ácido gimnêmico, hodulcin, zizifina, lactisol, entre outros.[00169] In one embodiment, Rebaudioside D can be used in combination with natural sweetener suppressors such as gymnemic acid, hodulcin, zizifin, lactisol, among others.

[00170] Em uma outra modalidade o Rebaudiosídeo D pode ser combinado com vários realçadores de sabor umami.[00170] In another embodiment, Rebaudioside D can be combined with various umami flavor enhancers.

[00171] Em uma modalidade particular o Rebaudiosídeo D pode ser formulado com aminoácidos que incluem, porém sem limitação, ácido aspártico, arginina, glicina, ácido glutâmico, prolina, treonina, teanina, cisteína, cistina, alanina, valina, tirosina, leucina, isoleucina, asparagina, serina, lisina, histidina, ornitina, metionina, camitina, ácido aminobutírico (isômeros alfa-, beta, ou gama), glutamina, hidroxiprolina, taurina, norvalina, sarcosina, e suas formas de sal tais como sais de sódio ou de potássio ou sais de ácido. Os aditivos aminoacídicos também podem estar na configuração D- ou L- ou na monoforma, diforma, ou triforma dos mesmos aminoácidos ou de aminoácidos diferentes. Adicionalmente, os aminoácidos podem ser isômeros a-, β-, y-, δ-, e ε- se apropriado. Combinações dos aminoácidos acima e seus sais correspondentes (por exemplo, sais de sódio, potássio, cálcio, magnésio ou sais de outros metais alcalinos ou alcalinos terrosos, ou sais de ácido), também podem ser aditivos adequados. Os aminoácidos podem ser naturais ou sintéticos. Os aminoácidos também podem ser modificados. Aminoácidos modificados referem-se a qualquer aminoácido no qual pelo menos um átomo fora adicionado, removido, substituído, ou combinações destes eventos (por exemplo, N-alquil aminoácido, N-acil aminoácido, ou N-metil aminoácido). Exemplos não limitativos de aminoácidos modificados incluem derivados de aminoácido tais como trimetil glicina, N-metil- glicina, e N-metil-alanina. Conforme usado neste relatório, aminoácidos abrangem aminoácidos modificados e aminoácidos não modificados. Conforme usado neste relatório, aminoácido modificado também abrange peptídios e polipeptídios (por exemplo, dipeptídios, tripeptídios, tetrapeptídios, e pentapeptídios) tais como glutationa e L-alanil-L- glutamina.[00171] In a particular embodiment, Rebaudioside D can be formulated with amino acids that include, but are not limited to, aspartic acid, arginine, glycine, glutamic acid, proline, threonine, theanine, cysteine, cystine, alanine, valine, tyrosine, leucine, isoleucine, asparagine, serine, lysine, histidine, ornithine, methionine, camitin, aminobutyric acid (alpha-, beta, or gamma isomers), glutamine, hydroxyproline, taurine, norvaline, sarcosine, and their salt forms such as sodium salts or potassium or acid salts. Amino acid additives can also be in the D- or L- configuration or in the monoform, diform, or triform of the same or different amino acids. Additionally, the amino acids may be α-, β-, y-, δ-, and ε- isomers if appropriate. Combinations of the above amino acids and their corresponding salts (e.g. sodium, potassium, calcium, magnesium or other alkali metal or alkaline earth salts, or acid salts) may also be suitable additives. Amino acids can be natural or synthetic. Amino acids can also be modified. Modified amino acids refer to any amino acid in which at least one atom has been added, removed, replaced, or combinations of these events (eg, N-alkyl amino acid, N-acyl amino acid, or N-methyl amino acid). Non-limiting examples of modified amino acids include amino acid derivatives such as trimethylglycine, N-methylglycine, and N-methylalanine. As used in this report, amino acids encompass both modified and unmodified amino acids. As used in this report, modified amino acid also encompasses peptides and polypeptides (eg, dipeptides, tripeptides, tetrapeptides, and pentapeptides) such as glutathione and L-alanyl-L-glutamine.

[00172] Em uma modalidade particular o Rebaudiosídeo D podem ser formulados com aditivos poliaminoacídicos que incluem ácido poli-L- aspártico, poli-L-lisina (por exemplo, poli-L- a- lisina ou poli-L- e-lisina) , poli-L-ornitina (por exemplo, poli-L- a-ornitina ou poli-L- e-ornitina) , poli-L-arginina, outras formas poliméricos de aminoácidos, e as formas de sal dos mesmos (por exemplo, sais de magnésio, cálcio, potássio, ou sódio tais como sal monossódico de ácido L- glutâmico). Os aditivos poliaminoacídicos também podem estar na configuração D- ou L-. Adicionalmente, os poliaminoácidos podem ser isômeros a -, β-, y-, δ -, e e- se apropriado. Combinações dos poliaminoácidos acima e seus sais correspondentes (por exemplo, sais de sódio, potássio, cálcio, magnésio ou sais de outros metais alcalinos ou alcalinos terrosos, ou sais de ácido), também são aditivos realçadores do sabor doce adequados nas modalidades desta invenção. Os poliaminoácidos descritos nesta invenção também podem compreender copolímeros de diferentes aminoácidos. Os poliaminoácidos podem ser naturais ou sintéticos. Os poliaminoácidos também podem ser modificados, tais como aqueles nos quais pelo menos um átomo fora adicionado, removido, substituído, ou combinações destes eventos (por exemplo, N-alquil poliaminoácido ou N-acil poliaminoácido). Conforme usado neste relatório, poliaminoácidos abrangem poliaminoácidos modificados e poliaminoácidos não modificados. De acordo com modalidades particulares, poliaminoácidos modificados incluem, porém sem limitação, poliaminoácidos de vários pesos moleculares (PM) , tais como poli-L- a-lisina com um PM de 1.500, PM de 6.000, PM de 25.200, PM de 63.000, PM de 83.000, ou PM de 300.000.[00172] In a particular embodiment, Rebaudioside D can be formulated with polyaminoacidic additives that include poly-L-aspartic acid, poly-L-lysine (for example, poly-L-al-lysine or poly-L-e-lysine) , poly-L-ornithine (e.g., poly-L-a-ornithine or poly-L-e-ornithine), poly-L-arginine, other polymeric forms of amino acids, and salt forms thereof (e.g., magnesium, calcium, potassium, or sodium salts such as L-glutamic acid monosodium salt). Polyamino acid additives can also be in the D- or L- configuration. Additionally, the polyamino acids may be α-, β-, y-, δ-, and e- isomers if appropriate. Combinations of the above polyamino acids and their corresponding salts (e.g., sodium, potassium, calcium, magnesium or other alkali or alkaline earth metal salts, or acid salts) are also suitable sweet taste enhancing additives in the embodiments of this invention. The polyamino acids described in this invention can also comprise copolymers of different amino acids. Polyamino acids can be natural or synthetic. Polyamino acids can also be modified, such as those in which at least one atom has been added, removed, replaced, or combinations of these events (eg, N-alkyl polyamino acid or N-acyl polyamino acid). As used in this report, polyamino acids encompass both modified polyamino acids and unmodified polyamino acids. In accordance with particular embodiments, modified polyamino acids include, but are not limited to, polyamino acids of various molecular weight (MW), such as poly-L-α-lysine having a MW of 1500, MW 6000, MW 25,200, MW 63,000, 83,000 PM, or 300,000 PM.

[00173] Em uma outra modalidade particular o Rebaudiosídeo D pode ser combinado com polióis ou álcoois de açúcar. O termo “poliol” refere-se a uma molécula que contém mais de um grupo hidroxil. Um poliol pode ser um diol, triol, ou um tetraol que contém 2, 3, e 4 grupos hidroxil, respectivamente. Um poliol também pode conter mais de quatro grupos hidroxil, tal como um pentaol, hexaol, heptaol, ou similar, que contêm 5, 6, ou 7 grupos hidroxil, respectivamente. Adicionalmente, um poliol também pode ser um álcool de açúcar, um álcool poli- hídrico, ou um poliálcool que é uma forma reduzida de carboidrato, no qual o grupo carbonil (aldeído ou cetona, açúcar redutor) fora reduzido para um grupo hidroxil primário ou secundário.[00173] In another particular embodiment, Rebaudioside D can be combined with polyols or sugar alcohols. The term "polyol" refers to a molecule that contains more than one hydroxyl group. A polyol can be a diol, triol, or a tetraol that contains 2, 3, and 4 hydroxyl groups, respectively. A polyol can also contain more than four hydroxyl groups, such as a pentaol, hexaol, heptaol, or the like, which contain 5, 6, or 7 hydroxyl groups, respectively. Additionally, a polyol can also be a sugar alcohol, a polyhydric alcohol, or a polyalcohol that is a reduced form of carbohydrate, in which the carbonyl group (aldehyde or ketone, reducing sugar) has been reduced to a primary hydroxyl group or secondary.

[00174] Exemplos não limitativos de polióis incluem eritritol, maltitol, manitol, sorbitol, lactitol, xilitol, inositol, isomalte, propileno glicol, glicerol, treitol, galactitol, isomaltulose hidrogenada, isomalto-oligossacarídeos reduzidos, xilo-oligossacarídeos reduzidos, gentio- oligossacarídeos reduzidos, xarope de maltose reduzida, xarope de glicose reduzida, hidrolisados de amido hidrogenados, poliglicitóis e álcoois de açúcar ou quaisquer outros carboidratos que podem ser reduzidos e que não afetam negativamente o sabor da composição de adoçante, e combinações dos mesmos.[00174] Non-limiting examples of polyols include erythritol, maltitol, mannitol, sorbitol, lactitol, xylitol, inositol, isomalt, propylene glycol, glycerol, threitol, galactitol, hydrogenated isomaltulose, reduced isomalto-oligosaccharides, reduced xylo-oligosaccharides, gentio-oligosaccharides reduced maltose syrup, reduced glucose syrup, hydrogenated starch hydrolysates, polyglycitols and sugar alcohols or any other carbohydrates which can be reduced and which do not adversely affect the taste of the sweetener composition, and combinations thereof.

[00175] Em uma modalidade particular o Rebaudiosídeo D pode ser combinado com adoçantes de calorias reduzidas tais como D-tagatose, L-açúcares, L-sorbose, L-arabinose, e outros e combinações dos mesmos.[00175] In a particular embodiment Rebaudioside D can be combined with reduced calorie sweeteners such as D-tagatose, L-sugars, L-sorbose, L-arabinose, and others and combinations thereof.

[00176] Em uma outra modalidade particular o Rebaudiosídeo D pode ser combinado com vários carboidratos. O termo “carboidrato” refere-se em geral a compostos de aldeído ou cetona substituídos com múltiplos grupos hidroxila, da fórmula geral (CH2O) n, onde “n” é 3-30, assim como seus oligômeros e polímeros. Os carboidratos da presente invenção podem, ainda, ser substituídos ou desoxigenados em uma ou mais posições. Carboidratos, conforme usado neste relatório, abrangem carboidratos não modificados, derivados de carboidrato, carboidratos substituídos, e carboidratos modificados. Conforme usado neste relatório, as expressões “derivados de carboidrato”, “carboidrato substituído”, e “carboidratos modificados” são sinônimos. Carboidrato modificado significa qualquer carboidrato no qual pelo menos um átomo fora adicionado, removido, substituído, ou combinações destes eventos. Assim sendo, derivados de carboidrato ou carboidratos substituídos incluem monossacarídeos, dissacarídeos, oligossacarídeos, e polissacarídeos substituídos e não-substituídos. Os derivados de carboidrato ou carboidratos substituídos podem ser opcionalmente desoxigenados em qualquer posição de C correspondente, e/ou substituídos com uma ou mais porções tais como hidrogênio, halogênio, haloalquil, carboxil, acil, acilóxi, amino, amido, derivados carboxílicos, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alcóxi, arilóxi, nitro, ciano, sulfo, mercapto, imino, sulfonyl, sulfenil, sulfinil, sulfamoil, carboalcóxi, carboxamido, fosfonil, fosfinil, fosforil, fosfino, tioéster, tioéter, oximino, hidrazino, carbamil, fosfo, fosfonato, ou qualquer outro grupo funcional viável contanto que o derivado de carboidrato ou carboidrato funcione sirva para melhorar o sabor adocicado da composição de adoçante.[00176] In another particular embodiment, Rebaudioside D can be combined with various carbohydrates. The term "carbohydrate" generally refers to aldehyde or ketone compounds substituted with multiple hydroxyl groups, of the general formula (CH2O)n, where "n" is 3-30, as well as their oligomers and polymers. The carbohydrates of the present invention may further be substituted or deoxygenated at one or more positions. Carbohydrates, as used in this report, encompass unmodified carbohydrates, carbohydrate derivatives, substituted carbohydrates, and modified carbohydrates. As used in this report, the terms “carbohydrate derivatives”, “substituted carbohydrate”, and “modified carbohydrates” are synonymous. Modified carbohydrate means any carbohydrate in which at least one atom has been added, removed, replaced, or combinations thereof. Accordingly, carbohydrate derivatives or substituted carbohydrates include substituted and unsubstituted monosaccharides, disaccharides, oligosaccharides, and polysaccharides. The carbohydrate or substituted carbohydrate derivatives may optionally be deoxygenated at any corresponding C position, and/or substituted with one or more moieties such as hydrogen, halogen, haloalkyl, carboxyl, acyl, acyloxy, amino, amido, carboxylic derivatives, alkylamino, dialkylamino, arylamino, alkoxy, aryloxy, nitro, cyano, sulfo, mercapto, imino, sulfonyl, sulphenyl, sulfinyl, sulfamoyl, carboalkoxy, carboxamido, phosphonyl, phosphinyl, phosphoryl, phosphine, thioester, thioether, oximino, hydrazine, carbamyl, phospho, phosphonate, or any other viable functional group so long as the carbohydrate or carbohydrate derivative functions to enhance the sweet taste of the sweetener composition.

[00177] Exemplos não limitativos de carboidratos nas modalidades desta invenção incluem tagatose, trealose, galactose, ramnose, várias ciclodextrinas, oligossacarídeos cíclicos, vários tipos de maltodextrinas, dextrana, sacarose, glicose, ribulose, frutose, treose, arabinose, xilose, lixose, alose, altrose, manose, idose, lactose, maltose, açúcar invertido, isotrealose, neotrealose, isomaltulose, eritrose, desoxirribose, gulose, idose, talose, eritrulose, xilulose, psicose, turanose, celobiose, amilopectina, glucosamina, manosamina, fucose, ácido glicurônico, ácido glicônico, glucono-lactona, abequose, galactosamina, oligossacarídeos de beterraba, isomalto- oligossacarídeos (isomaltose, isomaltotriose, panose, entre outros), xilo-oligossacarídeos (xilotriose, xilobiose, entre outros), oligossacarídeos xilo-terminados, gentio- oligossacarídeos (gentiobiose, gentiotriose, gentiotetraose, entre outros), sorbose, nigero- oligossacarídeos, palatinose oligossacarídeos, fruto-oligossacarídeos (questose, nistose, entre outros), maltotetraol, maltotriol, malto- oligossacarídeos (maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, malto-hexaose, malto-heptaose, entre outros), amido, inulina, inulo-oligossacarídeos, lactulose, melibiose, rafinose, ribose, açúcares líquidos isomerizados tais como xarope de milho de alto teor de frutose, açúcares de acoplamento, e oligossacarídeos da soja. Adicionalmente, os carboidratos, conforme usado neste relatório, pode estar na configuração D- ou L-. Nas formulações, quaisquer combinações dos compostos podem ser usadas.[00177] Non-limiting examples of carbohydrates in the embodiments of this invention include tagatose, trehalose, galactose, rhamnose, various cyclodextrins, cyclic oligosaccharides, various types of maltodextrins, dextran, sucrose, glucose, ribulose, fructose, threose, arabinose, xylose, lyxose, allose, altrose, mannose, idose, lactose, maltose, invert sugar, isotrehalose, neotrehalose, isomaltulose, erythrose, deoxyribose, gluttony, idose, thalose, erythrulose, xylulose, psychose, turanose, cellobiose, amylopectin, glucosamine, mannosamine, fucose, acid glucuronic acid, gluconic acid, glucono-lactone, abequose, galactosamine, beet oligosaccharides, isomalto-oligosaccharides (isomaltose, isomaltotriose, panose, among others), xylo-oligosaccharides (xylotriose, xylobiose, among others), xylo-terminated oligosaccharides, gentio- oligosaccharides (gentiobiose, gentiotriose, gentiotetraose, among others), sorbose, nigeroligosaccharides, palatinose oligosaccharides, fructooligosaccharides (questosis, nystose, among others), maltotetraol, maltotriol, maltooligosaccharides (maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, maltohexaose , maltoheptaose, among others), starch, inulin, inulooligosaccharides, lactulose, melibiose, raffinose, ribose, isomerized liquid sugars such as high fructose corn syrup, coupling sugars, and soy oligosaccharides. Additionally, carbohydrates, as used in this report, can be in the D- or L- configuration. In the formulations, any combinations of the compounds can be used.

[00178] Em uma modalidade particular o Rebaudiosídeo D podem ser formulados com ácidos de açúcar que incluem, porém sem limitação, ácido aldônico, ácido urônico, ácido aldárico, ácido algínico, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido glucárico, ácido galactárico, ácido galacturônico, e seus sais (por exemplo, sais de sódio, potássio, cálcio, magnésio ou outros sais fisiologicamente aceitáveis), e combinações dos mesmos.[00178] In a particular embodiment, Rebaudioside D can be formulated with sugar acids including, but not limited to, aldonic acid, uronic acid, aldaric acid, alginic acid, gluconic acid, glucuronic acid, glucaric acid, galactaric acid, galacturonic acid , and their salts (for example, sodium, potassium, calcium, magnesium or other physiologically acceptable salts), and combinations thereof.

[00179] Em uma modalidade particular o Rebaudiosídeo D pode ser usado em combinação com várias substâncias fisiologicamente ativas ou ingredientes funcionais. Os ingredientes funcionais geralmente são classificados em categorias tais como carotenoides, fibras dietéticas, ácidos graxos, saponinas, antioxidantes, nutracêuticos, flavonoides, isotiocianatos, fenóis, esteróis e estanóis de plantas (fitosteróis e fitostanóis); polióis; prebióticos, probióticos; fitoestrogênios; proteínas da soja; sulfetos/tióis; aminoácidos; proteínas; vitaminas; e minerais. Os ingredientes funcionais também podem ser classificados com base em seus benefícios para a saúde, tais como cardiovasculares, redutores de colesterol, e anti- inflamatórios.[00179] In a particular embodiment Rebaudioside D can be used in combination with various physiologically active substances or functional ingredients. Functional ingredients are generally classified into categories such as carotenoids, dietary fiber, fatty acids, saponins, antioxidants, nutraceuticals, flavonoids, isothiocyanates, phenols, sterols and plant stanols (phytosterols and phytostanols); polyols; prebiotics, probiotics; phytoestrogens; soy proteins; sulfides/thiols; amino acids; proteins; vitamins; and minerals. Functional ingredients can also be classified based on their health benefits, such as cardiovascular, cholesterol-lowering, and anti-inflammatory.

[00180] A composição com Rebaudiosídeo D pode incluir um agente flavorizante que pode ser de origem natural ou artificial. Conforme usado neste relatório, a menos que de outra indicado, o termo “flavorizante” significa qualquer material de grau alimentício que pode ser adicionado às presentes composições para proporcionar um sabor desejado ao alimento. Flavorizantes úteis na presente invenção incluem, por exemplo, um óleo essencial, tal como um óleo derivado de uma planta ou de uma fruta, óleo de hortelã-pimenta, óleo de hortelã verde, óleos de outras mentas, óleo de cravo-da-índia, óleo de canela, óleo de gualtéria, louro, tomilho, folha de cedro, noz-moscada, pimenta-da-jamaica, sálvia, flor da noz-moscada, e amêndoas. O agente flavorizante pode ser um extrato vegetal ou uma essência de fruta tal como maçã, banana, melancia, pera, pêssego, uva, morando, framboesa, cereja, ameixa, abacaxi, damasco, e misturas das mesmas. O agente flavorizante pode ser um sabor cítrico, tal como um extrato, essência, ou óleo de limão, lima, laranja, tangerina, toronja, cidra, ou kumquat. Sabores úteis na presente invenção também podem incluir creme, avelã, baunilha, chocolate, canela, noz-pecã, limão, lima, framboesa, pêssego, manga, vanilina, manteiga, caramelo, chá, laranja, tangerina, açúcar queimado, morango, banana, uva, ameixa, cereja, mirtilo, abacaxi, baga de sabugueiro, melancia, goma de mascar, cantalupo, goiaba, kiwi, papaya, coco, menta, hortelã verde, derivados, e combinações dos mesmos.[00180] The composition with Rebaudioside D can include a flavoring agent that can be of natural or artificial origin. As used in this report, unless otherwise indicated, the term "flavoring" means any food-grade material that can be added to the present compositions to provide a desired food flavor. Flavoring agents useful in the present invention include, for example, an essential oil such as an oil derived from a plant or a fruit, peppermint oil, green peppermint oil, oils from other mints, clove oil , cinnamon oil, wintergreen oil, bay leaf, thyme, cedar leaf, nutmeg, allspice, sage, nutmeg flower, and almonds. The flavoring agent may be a plant extract or fruit essence such as apple, banana, watermelon, pear, peach, grape, cranberry, raspberry, cherry, plum, pineapple, apricot, and mixtures thereof. The flavoring agent may be a citrus flavor, such as an extract, essence, or oil of lemon, lime, orange, mandarin, grapefruit, citron, or kumquat. Flavors useful in the present invention may also include cream, hazelnut, vanilla, chocolate, cinnamon, pecan, lemon, lime, raspberry, peach, mango, vanillin, butter, caramel, tea, orange, tangerine, burnt sugar, strawberry, banana , grape, plum, cherry, blueberry, pineapple, elderberry, watermelon, chewing gum, cantaloupe, guava, kiwi, papaya, coconut, mint, mint, derivatives, and combinations thereof.

[00181] A composição com Rebaudiosídeo D pode incluir um componente aromatizante. Conforme usado neste relatório, unless otherwise indicated, the term "componente aromatizante " significa uma substância volátil de grau alimentício que pode ser empregada para produzir um perfume desejado, por exemplo, quando misturado com um produto alimentício. Aromas úteis na presente invenção incluem, por exemplo, óleos essenciais (óleo de cítrico), óleos expressos (óleo de laranja), óleos destilados (óleo de rosas), extratos (frutas), anetol (alcaçuz, semente de anis, ouzo, funcho), anisol (semente de anis), benzaldeído (marzipã, amêndoa), álcool benzílico (marzipã, amêndoa), cânfora (cinamomo-cânfora), cinamaldeído (canela), citral (óleo de citronela, óleo limão), d-limoneno (laranja), etil butanoato (abacaxi), eugenol (óleo de cravo-da-índia), furaneol (morango), furfural (caramelo), linalool (coentro, pau-rosa), mentol (hortelã-pimenta), metil butanoato (maçã, abacaxi), metil salicilato (óleo de gualtéria), neral (flores da laranja), nerolina (flores da laranja), pentil butanoato (pera, damasco), pentil pentanoato (maçã, abacaxi), sotolon (xarope de bordo, curry, feno- grego), cetona de morango (morango), pirazinas substituídas, por exemplo, 2-etoxi-3- isopropilpirazina; 2-metoxi-3-sec-butilpirazina; e 2-metoxi-3-metilpirazina (sementes torradas de feno- grego, cominho, e coetro), tujona (junípero, sálvia comum, cipreste de Nootka, e absinto), timol (semelhante à confora), trimetilamina (peixe), vanilina (baunilha), e combinações dos mesmos. Componentes aromatizantes preferidos de acordo com a presente invenção incluem óleos essenciais (óleo cítrico), óleos expressos (óleo de laranja), óleos destilados (óleo de rosas), extratos (frutas), benzaldeído, d-limoneno, furfural, mentol, metil butanoato, pentil butanoato, sais, derivados, e combinações dos mesmos.[00181] The composition with Rebaudioside D may include a flavoring component. As used in this report, unless otherwise indicated, the term "flavor component" means a volatile food-grade substance that can be employed to produce a desired scent, for example when mixed with a food product. Flavorings useful in the present invention include, for example, essential oils (citrus oil), expressed oils (orange oil), distillate oils (rose oil), extracts (fruit), anethole (licorice, aniseed, ouzo, fennel ), anisole (aniseed), benzaldehyde (marzipan, almond), benzyl alcohol (marzipan, almond), camphor (cinnamon-camphor), cinnamaldehyde (cinnamon), citral (citronella oil, lemon oil), d-limonene ( orange), ethyl butanoate (pineapple), eugenol (clove oil), furaneol (strawberry), furfural (caramel), linalool (coriander, rosewood), menthol (peppermint), methyl butanoate (apple , pineapple), methyl salicylate (oil of wintergreen), neral (orange blossoms), nerolin (orange blossoms), pentyl butanoate (pear, apricot), pentyl pentanoate (apple, pineapple), sotolon (maple syrup, curry, fenugreek), strawberry ketone (strawberry), substituted pyrazines, for example 2-ethoxy-3-isopropylpyrazine; 2-methoxy-3-sec-butylpyrazine; and 2-methoxy-3-methylpyrazine (roasted seeds of fenugreek, cumin, and coriander), thujone (juniper, common sage, Nootka cypress, and wormwood), thymol (similar to conphora), trimethylamine (fish), vanillin (vanilla), and combinations thereof. Preferred flavor components in accordance with the present invention include essential oils (citric oil), expressed oils (orange oil), distillate oils (rose oil), extracts (fruit), benzaldehyde, d-limonene, furfural, menthol, methyl butanoate , pentyl butanoate, salts, derivatives, and combinations thereof.

[00182] As composições com Rebaudiosídeo D podem compreender um aditivo nucleotídico para uso nas modalidades desta invenção. Eles incluem, porém sem limitação, monofosfato de inosina, monofosfato de guanosina, monofosfato de adenosina, monofosfato de citosina, monofosfato de uracil, difosfato de inosina, difosfato de guanosina, difosfato de adenosina, difosfato de citosina, difosfato de uracil, trifosfato de inosina, trifosfato de guanosina, trifosfato de adenosina, trifosfato de citosina, trifosfato de uracil, e seus sais de metais alcalinos e de metais alcalinos terrosos, e combinações dos mesmos. Os nucleotídeos descritos nesta invenção também podem compreender aditivos relacionados com nucleotídeos tais como nucleosídeos ou bases de ácidos nucleicos (por exemplo, guanina, citosina, adenina, timina, uracil).[00182] Compositions with Rebaudioside D may comprise a nucleotide additive for use in the embodiments of this invention. They include, but are not limited to, inosine monophosphate, guanosine monophosphate, adenosine monophosphate, cytosine monophosphate, uracil monophosphate, inosine diphosphate, guanosine diphosphate, adenosine diphosphate, cytosine diphosphate, uracil diphosphate, inosine triphosphate , guanosine triphosphate, adenosine triphosphate, cytosine triphosphate, uracil triphosphate, and their alkali metal and alkaline earth metal salts, and combinations thereof. Nucleotides described in this invention may also comprise nucleotide-related additives such as nucleosides or nucleic acid bases (e.g., guanine, cytosine, adenine, thymine, uracil).

[00183] As composições com Rebaudiosídeo D podem compreender um aditivo do tipo ácido orgânico. Ácidos orgânicos são compostos que compreendem uma porção -COOH. Aditivos do tipo ácido orgânico adequados para uso nas modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, ácidos carboxílicos C2-C30, ácidos carboxílicos C1-C30 substituídos, ácido benzoico, ácidos benzoicos substituídos (por exemplo ácido 2,4-dihidroxibenzoico), ácidos cinâmicos substituídos, hidroxiácidos, ácidos hidroxibenzoicos substituídos, ácidos ciclo-hexil carboxílicos substituídos, ácido tânico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido glicônico, ácidos glico-heptônicos, ácido adípico, ácido hidroxicítrico, ácido málico, ácido frutárico (uma mistura de ácidos málico, fumárico e tartárico), ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido clorogênico, ácido salicílico, creatina, cloridrato de glicosamina, glucono delta lactona, ácido cafeico, ácidos biliares, ácido acético, ácido ascórbico, ácido algínico, ácido critórbico, ácido poliglutâmico, e seus derivados do tipo sais de metais alcalinos ou alcalinos terrosos. Além disso, os aditivos do tipo ácido orgânico também podem estar na configuração D- ou L-.[00183] Compositions with Rebaudioside D may comprise an organic acid type additive. Organic acids are compounds that comprise a -COOH moiety. Organic acid-type additives suitable for use in embodiments of this invention include, but are not limited to, C2-C30 carboxylic acids, substituted C1-C30 carboxylic acids, benzoic acid, substituted benzoic acids (e.g., 2,4-dihydroxybenzoic acid), cinnamic acids substituted hydroxy acids, substituted hydroxybenzoic acids, substituted cyclohexyl carboxylic acids, tannic acid, lactic acid, tartaric acid, citric acid, gluconic acid, glycoheptonic acids, adipic acid, hydroxycitric acid, malic acid, frutaric acid (a mixture of malic, fumaric and tartaric acids), fumaric acid, maleic acid, succinic acid, chlorogenic acid, salicylic acid, creatine, glucosamine hydrochloride, glucono delta lactone, caffeic acid, bile acids, acetic acid, ascorbic acid, alginic acid, crithorbic acid , polyglutamic acid, and derivatives thereof as salts of alkali metals or alkaline earth metals. Furthermore, organic acid-type additives can also be in the D- or L- configuration.

[00184] As composições com Rebaudiosídeo D podem compreender um aditivo do tipo sal de ácido orgânico. Eles incluem, porém sem limitação, sais de sódio, cálcio, potássio, e magnésio de todos os ácidos orgânicos, tais como sais de ácido cítrico, ácido málico, ácido tartárico, ácido flunárico, ácido láctico (por exemplo, lactato de sódio), ácido algínico (por exemplo, alginato de sódio), ácido ascórbico (por exemplo, ascorbato de sódio), ácido benzoico (por exemplo, benzoato de sódio ou benzoato de potássio), e ácido adípico. Os exemplos dos aditivos do tipo sal de ácido orgânico que melhoram o sabor adocicado descritos acima podem ser opcionalmente substituídos com uma ou mais das seguintes porções selecionadas do grupo que consiste em hidrogênio, alquil, alquenil, alquinil, halo, haloalquil, carboxil, acil, acilóxi, amino, amido, derivados carboxílicos, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alcóxi, arilóxi, nitro, ciano, sulfo, tiol, imina, sulfonil, sulfenil, sulfinil, sulfamil, carboxalcóxi, carboxamido, fosfonil, fosfinil, fosforil, fosfino, tioéster, tioéter, anidrido, oximino, hidrazino, carbamil, fosfo, fosfonato, e qualquer outro grupo funcional viável, contanto que o aditivo do tipo sal de ácido orgânico substituído sirva para melhorar o sabor adocicado da composição de adoçante.[00184] Compositions with Rebaudioside D may comprise an organic acid salt type additive. They include, but are not limited to, the sodium, calcium, potassium, and magnesium salts of all organic acids, such as salts of citric acid, malic acid, tartaric acid, flunaric acid, lactic acid (e.g., sodium lactate), alginic acid (eg, sodium alginate), ascorbic acid (eg, sodium ascorbate), benzoic acid (eg, sodium benzoate or potassium benzoate), and adipic acid. Examples of the sweet taste enhancing organic acid salt type additives described above may optionally be replaced with one or more of the following moieties selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, halo, haloalkyl, carboxyl, acyl, acyloxy, amino, starch, carboxylic derivatives, alkylamino, dialkylamino, arylamino, alkoxy, aryloxy, nitro, cyano, sulfo, thiol, imine, sulfonyl, sulphenyl, sulfinyl, sulfamyl, carboxalkoxy, carboxamido, phosphonyl, phosphinyl, phosphoryl, phosphine, thioester , thioether, anhydride, oximino, hydrazino, carbamyl, phospho, phosphonate, and any other viable functional group, provided that the substituted organic acid salt type additive serves to enhance the sweetness of the sweetener composition.

[00185] As composições com Rebaudiosídeo D podem compreender um aditivo do tipo ácido inorgânico para uso nas modalidades desta invenção. Eles incluem, porém sem limitação, ácido fosfórico, ácido fosforoso, ácido polifosfórico, ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido carbônico, fosfato diácido de sódio, e seus sais de metais alcalinos ou alcalinos terrosos correspondentes (por exemplo, hexafosfato Mg/Ca de inositol).[00185] Compositions with Rebaudioside D may comprise an inorganic acid type additive for use in the embodiments of this invention. They include, but are not limited to, phosphoric acid, phosphorous acid, polyphosphoric acid, hydrochloric acid, sulfuric acid, carbonic acid, sodium diacid phosphate, and their corresponding alkali metal or alkaline earth metal salts (e.g. inositol Mg/Ca hexaphosphate ).

[00186] As composições com Rebaudiosídeo D podem compreender um composto amargo como aditivo para uso nas modalidades desta invenção, porém sem limitação, cafeína, quinino, ureia, óleo de laranja amargo, naringina, quassia, e sais dos mesmos.[00186] Compositions with Rebaudioside D may comprise a bitter compound as an additive for use in the embodiments of this invention, but without limitation, caffeine, quinine, urea, bitter orange oil, naringin, quassia, and salts thereof.

[00187] As composições com Rebaudiosídeo D podem compreender realçadores de doçura artificiais ou naturais e combinações dos mesmos.[00187] Compositions with Rebaudioside D may comprise artificial or natural sweetness enhancers and combinations thereof.

[00188] A formulação de Rebaudiosídeo D pode incluir um aditivo polimérico para uso nas modalidades desta invenção, porém sem limitação, quitosano, pectina, ácido péctico, pectínico, poliurônico, ácido poligalacturônico, amido, hidrocoloide de grau alimentício ou extratos brutos do mesmo (goma acácia senegal (Fibergum.TM.), goma acácia seyal, carragenana), poli-L-lisina (por exemplo, poli-L- α-lisina ou poli-L- e-lisina), poli- L-ornitina (por exemplo, poli-L- a-ornitina ou poli- L- e-ornitina), poliarginina, polipropileno glicol, polietileno glicol, poli(etileno glicol metil éter), ácido poliaspártico, ácido poliglutâmico, polietilenoimina, ácido algínico, alginato de sódio, alginato de propileno glicol, hexametafosfato de sódio (SHMP) e seus sais, e polietilenoglicolalginato de sódio e outros polímeros catiônicos e aniônicos.[00188] The formulation of Rebaudioside D may include a polymeric additive for use in the embodiments of this invention, but without limitation, chitosan, pectin, pectic acid, pectin, polyuronic acid, polygalacturonic acid, starch, food grade hydrocolloid or crude extracts thereof ( senegal acacia gum (Fibergum.TM.), seyal acacia gum, carrageenan), poly-L-lysine (e.g. poly-L-α-lysine or poly-L-e-lysine), poly-L-ornithine (e.g. poly-L-a-ornithine or poly-L-e-ornithine), polyarginine, polypropylene glycol, polyethylene glycol, poly(ethylene glycol methyl ether), polyaspartic acid, polyglutamic acid, polyethyleneimine, alginic acid, sodium alginate, propylene glycol alginate, sodium hexametaphosphate (SHMP) and their salts, and sodium polyethylene glycol alginate and other cationic and anionic polymers.

[00189] A formulação de Rebaudiosídeo D pode incluir uma proteína ou hidrolisados de proteína como aditivos para uso nas modalidades desta invenção, porém sem limitação, albumina sérica bovina, proteína de soro de leite (incluindo frações ou concentrados da mesma tais como isolado proteína de soro de leite instantâneo a 90%, proteína de soro de leite a 34%, proteína de soro de leite hidrolisada a 50%, e 80% concentrado de proteína de soro de leite), proteína de arroz solúvel, proteína de soja, isolados de proteínas, hidrolisasdos de proteínas, produtos reacionais de hidrolisasdos de proteínas, glicoproteínas, e/ou proteoglicanos contendo aminoácidos (por exemplo, glicina, alanina, “senrne”, treonina, asparagina, glutamina, arginina, valina, isoleucina, leucina, norvalina, metionina, prolina, tirosina, hidroxiprolina, entre outros), colágeno (por exemplo, gelatina), colágeno parcialmente hidrolisado (por exemplo, colágeno de peixe hidrolisado), e hidrolisados de colágeno (por exemplo, hidrolisados de colágeno de porco).[00189] The formulation of Rebaudioside D may include a protein or protein hydrolysates as additives for use in the embodiments of this invention, but without limitation, bovine serum albumin, whey protein (including fractions or concentrates thereof such as whey protein isolate 90% instant whey, 34% whey protein, 50% hydrolyzed whey protein, and 80% whey protein concentrate), soluble rice protein, soy protein, proteins, protein hydrolysates, reaction products of protein hydrolysates, glycoproteins, and/or proteoglycans containing amino acids (e.g., glycine, alanine, senrine, threonine, asparagine, glutamine, arginine, valine, isoleucine, leucine, norvaline, methionine , proline, tyrosine, hydroxyproline, among others), collagen (e.g. gelatin), partially hydrolyzed collagen (e.g. hydrolyzed fish collagen), and collagen hydrolysates (e.g. pork collagen hydrolysates).

[00190] A formulação de Rebaudiosídeo D pode incluir aditivos do tipo tensoativo para uso nas modalidades desta invenção, porém sem limitação, polissorbatos (por exemplo, polioxietileno sorbitan monooleato (polissorbato 80), polissorbato 20, polissorbato 60), dodecilbenzenesulfonato de sódio, dioctil sulfosuccinato ou dioctil sulfosuccinato de sódio, dodecil sulfato de sódio, cloreto de cetilpiridínio (cloreto de hexadecilpiridínio), brometo de hexadeciltrimetilamônio, colato de sódio, carbamoil, cloreto de colina, glicocolato de sódio, taurodeoxicolato de sódio, arginato láurico, estearoil lactilato de sódio, taurocolato de sódio, lecitinas, ésteres de oleato de sacarose, ésteres de estearato de sacarose, ésteres de palmitato de sacarose, ésteres de laurato de sacarose, e outros emulsificantes, entre outros.[00190] The formulation of Rebaudioside D may include surfactant-type additives for use in the embodiments of this invention, but without limitation, polysorbates (for example, polyoxyethylene sorbitan monooleate (polysorbate 80), polysorbate 20, polysorbate 60), sodium dodecylbenzenesulfonate, dioctyl Sodium sulfosuccinate or dioctyl sulfosuccinate, sodium dodecyl sulfate, cetylpyridinium chloride (hexadecylpyridinium chloride), hexadecyltrimethylammonium bromide, sodium cholate, carbamoyl choline chloride, sodium glycocholate, sodium taurodeoxycholate, lauric arginate, sodium stearoyl lactylate , sodium taurocholate, lecithins, sucrose oleate esters, sucrose stearate esters, sucrose palmitate esters, sucrose laurate esters, and other emulsifiers, among others.

[00191] A formulação de Rebaudiosídeo D pode incluir um aditivo do tipo flavonoide para uso nas modalidades desta invenção que geralmente são classificados como flavonóis, flavonas, flavanonas, flavan-3-óis, isoflavonas ou antocianidinas. Exemplos não limitativos de aditivos do tipo flavonoide incluem catequinas (por exemplo, extratos de chá verde), polifenóis, rutinas, neo-hesperidina, naringina, neo-hesperidina di-hidrochalcona, entre outros.[00191] The formulation of Rebaudioside D may include a flavonoid-type additive for use in the embodiments of this invention that are generally classified as flavonols, flavones, flavanones, flavan-3-ols, isoflavones or anthocyanidins. Non-limiting examples of flavonoid-type additives include catechins (e.g., green tea extracts), polyphenols, rutins, neohesperidin, naringin, neohesperidin dihydrochalcone, among others.

[00192] A formulação pode incluir um aditivo do tipo álcool para uso nas modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, etanol.[00192] The formulation may include an alcohol-type additive for use in embodiments of this invention include, but are not limited to, ethanol.

[00193] A formulação pode incluir um composto adstringente como aditivo que inclui, porém sem limitação, ácido tânico, cloreto de európio (EuC3), cloreto de gadolínio (GdCl3), cloreto de térbio (TbCl3), alúmen, ácido tânico, e polifenóis (por exemplo, polifenóis do chá).[00193] The formulation may include an astringent compound as an additive which includes, but is not limited to, tannic acid, europium chloride (EuC3), gadolinium chloride (GdCl3), terbium chloride (TbCl3), alum, tannic acid, and polyphenols (e.g. tea polyphenols).

[00194] A formulação pode incluir uma vitamina. Vitaminas são compostos orgânicos que o corpo humano precisa em quantidades pequenas para seu funcionamento normal. O corpo utiliza as vitaminas sem quebrá-las, ao contrário de outros nutrientes tais como carboidratos e proteínas. As vitaminas para uso na modalidade incluem, porém sem limitação, vitamina A (retinol, retinaldeído, ácido retinoico, retinoides, retinal, ácido retinoico), vitamina D (vitaminas D1-D5; colecalciferol, lumisterol, ergocalciferol, di-hidrotaquisterol, 7- desidrocolesterol), vitamina E (eocoferol, tocotrienol), vitamina K (filoquinona, naftoquinona), vitamina B1 (tiamina), vitamina B2 (riboflavina, vitamina G), vitamina B3 (niacina, ácido nicotínico, vitamina PP), vitamina B5 (ácido pantotênico), vitamina B6 (piridoxina, piridoxal, piridoxamina), vitamina B7 (biotina, vitamina H), vitamina B9 (ácido fólico, folato, folacina, vitamina M, ácido pteroil-L-glutâmico), vitamina B12 (cobalamina, cianocobalamina), e vitamina C (ácido ascórbico).[00194] The formulation may include a vitamin. Vitamins are organic compounds that the human body needs in small amounts for normal functioning. The body uses vitamins without breaking them down, unlike other nutrients such as carbohydrates and proteins. Vitamins for use in the embodiment include, but are not limited to, vitamin A (retinol, retinaldehyde, retinoic acid, retinoids, retinal, retinoic acid), vitamin D (vitamins D1-D5; cholecalciferol, lumisterol, ergocalciferol, dihydrotachysterol, 7- dehydrocholesterol), vitamin E (eocopherol, tocotrienol), vitamin K (phylloquinone, naphthoquinone), vitamin B1 (thiamine), vitamin B2 (riboflavin, vitamin G), vitamin B3 (niacin, nicotinic acid, vitamin PP), vitamin B5 (acid pantothenic), vitamin B6 (pyridoxine, pyridoxal, pyridoxamine), vitamin B7 (biotin, vitamin H), vitamin B9 (folic acid, folate, folacin, vitamin M, pteroyl-L-glutamic acid), vitamin B12 (cobalamin, cyanocobalamin) , and vitamin C (ascorbic acid).

[00195] Vários outros compostos foram classificados como vitaminas por alguns órgãos. Esses compostos podem ser chamados de pseudo-vitaminas e incluem, porém sem limitação, compostos tais como ubiquinona (coenzima Q10), ácido pangâmico, dimetilglicina, taestrile, amigdalina, flavanoides, ácido para- aminobenzoico, adenina, ácido adenílico, e s- metilmetionina. Conforme usado neste relatório, o termo vitamina inclui pseudo-vitaminas.[00195] Several other compounds have been classified as vitamins by some bodies. These compounds may be called pseudo-vitamins and include, but are not limited to, compounds such as ubiquinone (coenzyme Q10), pangamic acid, dimethylglycine, taestrile, amygdalin, flavanoids, para-aminobenzoic acid, adenine, adenylic acid, and s-methylmethionine. . As used in this report, the term vitamin includes pseudo-vitamins.

[00196] A formulação com Rebaudiosídeo D pode incluir uma fibra dietética. Fibra dietética, também conhecida como cargas ou substâncias não digeríveis, é a porção do alimento resistente à hidrólise pelas enzimas digestivas humanas e geralmente compreende a porção não digerível de materiais de planta que se desloca através do sistema digestivo e estimula o intestino ao peristaltismo.[00196] The formulation with Rebaudioside D may include a dietary fiber. Dietary fiber, also known as fillers or nondigestible substances, is the portion of food resistant to hydrolysis by human digestive enzymes and generally comprises the nondigestible portion of plant materials that travels through the digestive system and stimulates the intestine to peristalsis.

[00197] Numerosos carboidratos polímeros tendo estruturas significativamente diferentes tanto em suas composições como em suas ligações se enquadram na definição de fibra dietética. Tais compostos são bastante conhecidos pelos especialistas na técnica, exemplos não limitativos que incluem polissacarídeos diferentes de amido, lignina, celulose, metilcelulose, hemiceluloses, β -glicanos, pectinas, gomas, mucilagem, ceras, inulina, oligossacarídeos, fructo-oligossacarídeos, ciclodextrinas, quitinsa, e combinações dos mesmos.[00197] Numerous carbohydrate polymers having significantly different structures both in their compositions and in their bindings fall within the definition of dietary fiber. Such compounds are well known to those skilled in the art, non-limiting examples including polysaccharides other than starch, lignin, cellulose, methylcellulose, hemicelluloses, β-glycans, pectins, gums, mucilage, waxes, inulin, oligosaccharides, fructo-oligosaccharides, cyclodextrins, chitinsa, and combinations thereof.

[00198] Fontes alimentícias de fibra dietética incluem, porém sem limitação, grãos, legumes, frutas e verduras. Grãos que fornecem fibra dietética incluem, porém sem limitação, aveia, centeio, cevada, trigo. Legumes que fornecem fibra incluem, porém sem limitação, ervilhas e favas tais como feijão de soja. Frutas e verduras que fornecem uma fonte de fibra incluem, porém sem limitação, maçã, laranja, pera, banana, cereja, tomate, vagem, brócoli, couve-flor, cenoura, batata, aipo. Alimentos vegetais tais como farelo, nozes e sementes (tais como semente de linhaça) também são fontes de fibra dietética. Partes de plantas que fornecem fibra dietética incluem, porém sem limitação, caules, raízes, folhas, sementes, polpa e casca.[00198] Food sources of dietary fiber include, but are not limited to, grains, legumes, fruits, and vegetables. Grains that provide dietary fiber include, but are not limited to, oats, rye, barley, wheat. Legumes that provide fiber include, but are not limited to, peas and broad beans such as soybeans. Fruits and vegetables that provide a source of fiber include, but are not limited to, apples, oranges, pears, bananas, cherries, tomatoes, green beans, broccoli, cauliflower, carrots, potatoes, celery. Plant foods such as bran, nuts and seeds (such as flaxseed) are also sources of dietary fiber. Parts of plants that provide dietary fiber include, but are not limited to, stems, roots, leaves, seeds, pulp, and bark.

[00199] Embora a fibra dietética geralmente seja derivada de fontes vegetais, produtos animais não digeríveis tais como quitinas também são classificados como fibra dietética. A quitina é um polissacarídeo composto de unidades de acetilglicosamina unidades por ligações β(1-4), semelhantes às ligações de celulose.[00199] Although dietary fiber is generally derived from plant sources, non-digestible animal products such as chitins are also classified as dietary fiber. Chitin is a polysaccharide composed of acetylglucosamine units linked by β(1-4) bonds, similar to cellulose bonds.

[00200] A formulação contendo Rebaudiosídeo D pode compreender um antioxidante. Exemplos de antioxidantes adequados para as modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, vitaminas, cofatores vitamínicos, minerais, hormônios, carotenoides, terpenoides carotenoides, terpenoides não carotenoides, flavonoides, polifenólicos flavonoides (por exemplo, bioflavonoides), flavonóis, flavonas, fenóis, polifenóis, ésteres de fenóis, ésteres de polifenóis, fenólicos não flavonoides, isotiocianatos, e combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o antioxidante pode incluir vitamina A, vitamina C, vitamina E, ubiquinona, selênio mineral, manganês, melatonina, α-caroteno, β-caroteno, licopeno, luteína, zeantina, cripoxantina, reservatol, eugenol, quercetina, catequina, gossipol, hesperetina, curcumina, ácido ferúlico, timol, hidroxitirosol, tumérico, tomilho, óleo de oliva, ácido lipoico, glutatinona, gulamina, ácido oxálico, compostos derivados de tocoferol, hidroxianisol butilado, hidroxiolueno butilado, ácido etilenodiaminatetra-acético, ter-butil- hidroquinona, ácido acético, pectina, tocotrienol, tocoferol, coenzima Q10, zeaxantina, astaxantina, cantaxantina, saponinas, limonoides, kaempfedrol, miricetina, isorhamnetina, proantocianidinas, quercetina, rutina, luteolina, apigenina, tangeritina, hesperetina, naringenina, erodictiol, flavan-3-óis (por exemplo, antocianidinas), galocatequinas, epicatequina e suas formas de galato, epigalocatequina e suas formas de galato, teaflavina e suas formas de galato, tearubiginas, fitoestrogênios de isotlavona, genisteína, daidzeína, gliciteína, anitocianinas, cianiding, delfinidina, malvidina, pelargonidina, peonidina, petunidina, ácido elágico, ácido gálico, ácido salicílico, ácido rosmarínico, ácido cinâmico e seus derivados (por exemplo, ácido ferúlico), ácido clorogênico, ácido chicórico, galotanninas, elagitaninas, antoxantinas, betacianinas e outros pigmentos vegetais, silimarina, ácido cítrico, lignano, antinutrientes, bilirubina, ácido úrico, ácido R-. alfa.-lipoico, N-acetilcisteína, emblicanina, extrato de maçã, extrato de casca de maçã (“applefenon”), extrato de chá vermelho, extrato de chá de rooibos, extrato de baga de pilriteiro verde, extrato de framboesa vermelha, antioxidante de café verde, extrato de semente de uva a 20% de extrato de aronia, extrato de cacau, extrato de lúpulo, extrato de mangostão, extrato de casca de mangostão, extrato de arando, extrato de romã, extrato de casca de romã, extrato de semente de romã, extrato de baga de pilriteiro, extrato de romã pomela, extrato de casca de canela, extrato de casca de uva, extrato de arando, extrato de casca de abacaxi, picnogenol, extrato de baga de sabugueiro, extrato de raiz de amora, extrato de sinforina (gogi), extrato de amora-preta, extrato de mirtilo, extrato de folha de mirtilo, extrato de framboesa, extrato de turmérico, bioflavonoides cítricos, groselha preta, gengibre, pó de açaí, extrato de grão de café verde, extrato de chá verde, e ácido fítico, ou combinações dos mesmos. Em modalidades alternativas, o antioxidante pode compreender um antioxidante sintético tal como hidroxitolueno butilado ou hidroxianisol butilado, por exemplo. Outras fontes de antioxidantes adequados para as modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, frutas, verduras, chá, cacau, chocolote, especiarias, ervas, arroz, carne de gado, levedura, grãos integrais, ou grãos de cereais.[00200] The formulation containing Rebaudioside D may comprise an antioxidant. Examples of antioxidants suitable for embodiments of this invention include, but are not limited to, vitamins, vitamin cofactors, minerals, hormones, carotenoids, carotenoid terpenoids, non-carotenoid terpenoids, flavonoids, polyphenolic flavonoids (e.g., bioflavonoids), flavonols, flavones, phenols, polyphenols, phenol esters, polyphenol esters, non-flavonoid phenolics, isothiocyanates, and combinations thereof. In some embodiments, the antioxidant may include vitamin A, vitamin C, vitamin E, ubiquinone, mineral selenium, manganese, melatonin, α-carotene, β-carotene, lycopene, lutein, zeanthin, crypoxanthin, reservatol, eugenol, quercetin, catechin, gossypol, hesperetin, curcumin, ferulic acid, thymol, hydroxytyrosol, tumeric, thyme, olive oil, lipoic acid, glutatinone, gulamine, oxalic acid, tocopherol derivative compounds, butylated hydroxyanisole, butylated hydroxyoluene, ethylenediaminetetraacetic acid, tert-butyl - hydroquinone, acetic acid, pectin, tocotrienol, tocopherol, coenzyme Q10, zeaxanthin, astaxanthin, canthaxanthin, saponins, limonoids, kaempfedrol, myricetin, isorhamnetin, proanthocyanidins, quercetin, rutin, luteolin, apigenin, tangeritin, hesperetin, naringenin, erodictyol, flavan -3-ols (e.g. anthocyanidins), gallocatechins, epicatechin and its gallate forms, epigallocatechin and its gallate forms, theaflavin and its gallate forms, thearubigins, isotlavone phytoestrogens, genistein, daidzein, glycitein, anitocyanins, cyaniding, delphinidin, malvidin, pelargonidin, peonidin, petunidin, ellagic acid, gallic acid, salicylic acid, rosmarinic acid, cinnamic acid and its derivatives (eg ferulic acid), chlorogenic acid, chicric acid, gallotannins, ellagitannins, anthoxanthines, betacyanins and others plant pigments, silymarin, citric acid, lignan, antinutrients, bilirubin, uric acid, R- acid. alpha-lipoic acid, N-acetylcysteine, emblicanin, apple extract, applefenon extract, red tea extract, rooibos tea extract, green hawthorn extract, red raspberry extract, antioxidant Green Coffee Extract, 20% Grape Seed Extract, Aronia Extract, Cocoa Extract, Hops Extract, Mangosteen Extract, Mangosteen Peel Extract, Cranberry Extract, Pomegranate Extract, Pomegranate Peel Extract, Extract Pomegranate Seed Extract, Hawthorn Berry Extract, Pomegranate Pomela Extract, Cinnamon Bark Extract, Grape Bark Extract, Cranberry Extract, Pineapple Bark Extract, Pycnogenol, Elderberry Extract, Pineapple Root Extract Cranberry, Symphorin (Gogi) Extract, Blackberry Extract, Bilberry Extract, Bilberry Leaf Extract, Raspberry Extract, Turmeric Extract, Citrus Bioflavonoids, Black Currant, Ginger, Acai Powder, Coffee Bean Extract green tea, green tea extract, and phytic acid, or combinations thereof. In alternative embodiments, the antioxidant may comprise a synthetic antioxidant such as butylated hydroxytoluene or butylated hydroxyanisole, for example. Other sources of antioxidants suitable for embodiments of this invention include, but are not limited to, fruits, vegetables, tea, cocoa, chocolate, spices, herbs, rice, beef, yeast, whole grains, or cereal grains.

[00201] Alguns antioxidantes pertencem à classe de fitonutrientes chamados polifenóis (também conhecidos como “polifenólicos”), que constituem um grupo de substâncias químicas encontradas em plantas, caracterizadas pela presença de mais de um grupo fenol por molécula. Diversos benefícios para a saúde podem ser derivados dos polifenóis, incluindo prevenção contra câncer, doenças cardíacas, e doenças inflamatórias crônicas e resistência mental e resistência física melhoradas, por exemplo. Polifenóis adequados para as modalidades desta invenção incluem catequinas, proantocianidinas, procianidinas, antocianinas, quercerina, rutina, reservatrol, isoflavonas, curcumina, punicalagina, elagitanina, hesperidina, naringina, flavonoides cítricos, ácido clorogênico, outros materiais semelhantes, e combinações dos mesmos.[00201] Some antioxidants belong to the class of phytonutrients called polyphenols (also known as “polyphenolics”), which constitute a group of chemical substances found in plants, characterized by the presence of more than one phenol group per molecule. Several health benefits can be derived from polyphenols, including prevention against cancer, heart disease, and chronic inflammatory diseases and improved mental toughness and physical endurance, for example. Polyphenols suitable for embodiments of this invention include catechins, proanthocyanidins, procyanidins, anthocyanins, quercerin, rutin, reservatrol, isoflavones, curcumin, punicalagin, ellagitanin, hesperidin, naringin, citric flavonoids, chlorogenic acid, other similar materials, and combinations thereof.

[00202] Fontes adequadas de catequinas para as modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, chá verde, chá branco, chá preto, chá oolong, chocolate, cacau, vinho tinto, semente de uva, casca de uva vermelha, casca de uva roxa, suco de uva vermelha, suco de uva roxa, bagas, picnogenol, e casca de maçã vermelha. Fontes adequadas de antioxidantes tais como proantocianidinas e procianidinas para as modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, uva vermelha, uva roxa, cacau, chocolate, semente de uva, vinho tinto, grãos de cacau, arando, casca de maçã, ameixa, mirtilo, groselha preta, arônia, chá vrede, sorgo, canela, cevada, feijão roxo, feijão cavalo, lúpulo, amêndoa, avelã, noz- pecã, pistache, picnogenol, e bagas coloridas. Fontes adequadas de antocianinas para as modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, frutas vermelhas, mirtilo, arando, oxicoco, framboesa, cereja, romã, morango, baga de sabugueiro, arônia, casca de uva vermelha, casca de uva roxa, semente de uva, vinho tinto, groselha preta, groselha vermelha, cacau, ameixa, casca de maçã, pêssego, pera vermelha, repolho roxo, cebola roxa, laranja vermelha, e amora-preta. Fontes adequadas de quercetina e rutina para as modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, maçã vermelha, cebola, couve, arando do pântano, “lingonberrys”, arânio, oxicoco, amora-preta, mirtilo, morango, framboesa, groselha preta, chá verde, chá preto, ameixa, damasco, salsa, alho-poró, brócoli, pimenta chilli, “berry wine”, e gingo. Fontes adequadas de resveratrol para as modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, uva vermelha, amendoim, oxicoco, mirtilo, arando, amora, chá de Itadori, e vinho tinto. Fontes adequadas de isoflavonas para as modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, feijão se soja, produtos de soja, legumes, grão de alfalfa, grão-de- bico, amendoim, e trevo vermelho. Fontes adequadas de curcuma para as modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, turmérico e mostarda. Fontes adequadas de punicalagina e elagitanina para as modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, romã, framboesa, morango, noz, e vinho tinto envelhecido em carvalho. Fontes adequadas de flavonides cítricos, tais como hesperidina ou naringina, para as modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, laranja, toronja, e sucos cítricos. Fontes adequadas de ácido clorogênico para as modalidades desta invenção incluem, porém sem limitação, café verde, erva mate, vinho tinto, semente de uva, casca de uva vermelha, casca de uva roxa, suco de uva vermelha, suco de uva roxa, suco de maçã, oxicoco, romã, mirtilo, morango, girassol, Echinacea, picnogenol, e casca de maçã.[00202] Suitable sources of catechins for the embodiments of this invention include, but are not limited to, green tea, white tea, black tea, oolong tea, chocolate, cocoa, red wine, grape seed, red grape skin, purple grape skin , red grape juice, purple grape juice, berries, pycnogenol, and red apple peel. Suitable sources of antioxidants such as proanthocyanidins and procyanidins for embodiments of this invention include, but are not limited to, red grape, red grape, cocoa, chocolate, grape seed, red wine, cocoa beans, cranberry, apple peel, plum, blueberry , blackcurrant, aronia, green tea, sorghum, cinnamon, barley, kidney bean, horse bean, hops, almond, hazelnut, pecan, pistachio, pycnogenol, and colored berries. Suitable sources of anthocyanins for embodiments of this invention include, but are not limited to, berries, blueberries, cranberries, cranberries, raspberries, cherries, pomegranates, strawberries, elderberries, aronia, red grape skins, purple grape skins, grape, red wine, black currant, red currant, cocoa, plum, apple peel, peach, red pear, red cabbage, red onion, red orange, and blackberry. Suitable sources of quercetin and rutin for embodiments of this invention include, but are not limited to, red apple, onion, kale, marsh cranberry, lingonberrys, cranberry, cranberry, blackberry, blueberry, strawberry, raspberry, blackcurrant, tea green tea, black tea, plum, apricot, parsley, leek, broccoli, chilli pepper, berry wine, and ginger. Suitable sources of resveratrol for embodiments of this invention include, but are not limited to, red grapes, peanuts, cranberries, blueberries, cranberries, blackberries, Itadori tea, and red wine. Suitable sources of isoflavones for embodiments of this invention include, but are not limited to, beans and soybeans, soy products, legumes, alfalfa grain, chickpeas, peanuts, and red clover. Suitable sources of turmeric for embodiments of this invention include, but are not limited to, turmeric and mustard. Suitable sources of punicalagin and ellagitanin for embodiments of this invention include, but are not limited to, pomegranate, raspberry, strawberry, walnut, and oak-aged red wine. Suitable sources of citrus flavonoids, such as hesperidin or naringin, for embodiments of this invention include, but are not limited to, orange, grapefruit, and citrus juices. Suitable sources of chlorogenic acid for embodiments of this invention include, but are not limited to, green coffee, yerba mate, red wine, grape seed, red grape skin, purple grape skin, red grape juice, purple grape juice, Apple, Cranberry, Pomegranate, Blueberry, Strawberry, Sunflower, Echinacea, Pycnogenol, and Apple Peel.

[00203] A composição de Rebaudiosídeo D pode incluir ácidos graxos. Conforme usado neste relatório, “ácido graxo” refere-se a qualquer ácido monocarboxílico de cadeia reta e inclui ácidos graxos saturados, ácidos graxos insaturados, ácidos graxos de cadeia longa, ácidos graxos de cadeia média, ácidos graxos de cadeia curta, precursores de ácidos graxos (inclusive precursores de ácidos graxos ômega-9), e ácidos graxos esterificados. Conforme usado neste relatório, “ácido graxo poli- insaturado de cadeia longa” refere-se a qualquer ácido carboxílico ou ácido orgânico poli-insaturado com uma cauda alifática longa. Conforme usado neste relatório, “ácido graxo ômega-3” refere-se a qualquer ácido graxo poli-insaturado tendo uma primeira ligação dupla como a terceira ligação carbono-carbono a partir da extremidade metil terminal de sua cadeia de carbonos. Em modalidades particulares, o ácido graxo ômega-3 pode compreender um ácido graxo ômega-3 de cadeia longa. Conforme usado neste relatório, “ácido graxo ômega-6” refere- se a qualquer ácido graxo poli-insaturado tendo uma primeira ligação dupla como a sexta ligação carbono- carbono a partir da extremidade metil terminal de sua cadeia de carbonos.[00203] The composition of Rebaudioside D may include fatty acids. As used in this report, “fatty acid” refers to any straight-chain monocarboxylic acid and includes saturated fatty acids, unsaturated fatty acids, long-chain fatty acids, medium-chain fatty acids, short-chain fatty acids, acid precursors. fatty acids (including omega-9 fatty acid precursors), and esterified fatty acids. As used in this report, “long-chain polyunsaturated fatty acid” refers to any carboxylic acid or polyunsaturated organic acid with a long aliphatic tail. As used in this report, “omega-3 fatty acid” refers to any polyunsaturated fatty acid having a first double bond as the third carbon-carbon bond from the terminal methyl end of its carbon chain. In particular embodiments, the omega-3 fatty acid may comprise a long chain omega-3 fatty acid. As used in this report, “omega-6 fatty acid” refers to any polyunsaturated fatty acid having a first double bond as the sixth carbon-carbon bond from the terminal methyl end of its carbon chain.

[00204] A composição com Rebaudiosídeo D pode incluir um sal. O termo “sal” também se refere a complexos que retêm a atividade química desejada das composições que melhoram o sabor doce da presente invenção e são seguros para consumo humano ou animal dentro de um limite geralmente aceito. Sais de metais alcalinos (por exemplo, sódio ou potássio) ou de metais alcalinos terrosos (por exemplo, cálcio ou magnésio) também podem ser feitos. Sais também podem incluir combinações de metais alcalinos e de metais alcalinos alcalinos. Exemplos não limitativos de tais sais são (a) sais de adição de ácido formados com ácidos inorgânicos e sais formados com ácidos orgânicos; (b) sais de adição de base formados com cátions metálicos tais como cálcio, bismuto, bário, magnésio, alumínio, cobre, cobalto, níquel, cádmio, sódio, potássio, entre outros, ou com um cátion formado de amônia, N, N-dibenziletilenodiamina, D- glicosamina, tetraetilamônio, ou etilenodiamina; ou (c) combinações de (a) e (b). Por conseguinte, qualquer forma de sal que pode ser derivado das composições que melhoram o sabor doce pode ser usada com as modalidades da presente invenção contanto que os sais dos aditivos que melhoram o sabor doce não afetem negativamente o sabor das composições de adoçante compreendendo o pelo menos adoçante natural e/ou sintético de alta potência. As formas de sal dos aditivos podem ser adicionadas à composição de adoçante natural e/ou sintética nas mesmas quais que suas formas de ácido ou de base.[00204] The composition with Rebaudioside D may include a salt. The term "salt" also refers to complexes that retain the desired chemical activity of the sweet taste enhancing compositions of the present invention and are safe for human or animal consumption within a generally accepted range. Alkali metal (eg sodium or potassium) or alkaline earth metal (eg calcium or magnesium) salts can also be made. Salts can also include combinations of alkali metals and alkali metals. Non-limiting examples of such salts are (a) acid addition salts formed with inorganic acids and salts formed with organic acids; (b) base addition salts formed with metallic cations such as calcium, bismuth, barium, magnesium, aluminum, copper, cobalt, nickel, cadmium, sodium, potassium, among others, or with a cation formed of ammonia, N, N -dibenzylethylenediamine, D-glucosamine, tetraethylammonium, or ethylenediamine; or (c) combinations of (a) and (b). Accordingly, any form of salt that can be derived from the sweetness enhancing compositions can be used with the embodiments of the present invention as long as the salts of the sweetness enhancing additives do not adversely affect the taste of the sweetener compositions comprising the hair less high potency natural and/or synthetic sweetener. The salt forms of the additives can be added to the natural and/or synthetic sweetener composition in the same as their acid or base forms.

[00205] Em modalidades particulares, sais inorgânicos adequados úteis nessas modalidades incluem, porém sem limitação, cloreto de sódio, cloreto de potássio, sulfato de sódio, citrato de potássio, cloreto de európio (EuCl3), cloreto de gadolínio (GdCl3), cloreto de térbio (TbCl3), sulfato de magnésio, alúmen, cloreto de magnésio, sais sódicos ou potássicos monobásicos, dibásicos e tribásicos de ácido fosfórico (por exemplo, fosfatos inorgânicos), sais de ácido clorídrico (por exemplo, cloretos inorgânicos), carbonato de sódio, bissulfato de sódio, e bicarbonato de sódio. Além disso, em modalidades particulares, sais orgânicos adequados úteis como aditivos que melhoram o sabor doce incluem, porém sem limitação, cloreto de colina, sal sódico de ácido algínico (alginato de sódio), sal sódico de ácido glico-heptônico, sal sódico de ácido glicônico (gliconato de sódio), sal potássico de ácido glicônico (gliconato de potássio), guanidina HCl, glicosamina HCl, amrilorida HCl, glutamato monossódico, sal de monofosfato de adenosina, gliconato de magnésio, tartarato de potássio (mono-hidratado), e tartarado de sódio (di-hidratado).[00205] In particular embodiments, suitable inorganic salts useful in these embodiments include, but are not limited to, sodium chloride, potassium chloride, sodium sulfate, potassium citrate, europium chloride (EuCl3), gadolinium chloride (GdCl3), chloride terbium (TbCl3), magnesium sulfate, alum, magnesium chloride, monobasic, dibasic and tribasic sodium or potassium salts of phosphoric acid (for example, inorganic phosphates), hydrochloric acid salts (for example, inorganic chlorides), sodium carbonate sodium, sodium bisulfate, and sodium bicarbonate. Furthermore, in particular embodiments, suitable organic salts useful as sweet taste enhancing additives include, but are not limited to, choline chloride, sodium alginic acid salt (sodium alginate), sodium salt of glycoheptonic acid, sodium salt of Glyconic Acid (Sodium Gluconate), Glyconic Acid Potassium Salt (Potassium Gluconate), Guanidine HCl, Glucosamine HCl, Amriloride HCl, Monosodium Glutamate, Adenosine Monophosphate Salt, Magnesium Gluconate, Potassium Tartrate (Monohydrate), and sodium tartrate (dihydrate).

[00206] A composição de Rebaudiosídeo D obtida de acordo com esta invenção pode ser aplicada como adoçante de alta intensidade para a produção de bebidas e produtos alimentícios de zero caloria, caloria reduzida ou para diabéticos com características de sabor melhoradas. Ela também pode ser usada drinques, gêneros alimentícios, produtos farmacêuticos, e outros produtos nos quais não se pode usar açúcar.[00206] The Rebaudioside D composition obtained according to this invention can be applied as a high-intensity sweetener for the production of zero-calorie, reduced-calorie or diabetic food products and beverages with improved flavor characteristics. It can also be used in drinks, foodstuffs, pharmaceuticals, and other products where sugar cannot be used.

[00207] Além disso, a composição de Rebaudiosídeo D pode ser usada como adoçante não apenas em drinques, gêneros alimentícios, e outros produtos dedicados ao consumo humano, mas também em ração animal e forragem com características melhoradas.[00207] In addition, the composition of Rebaudioside D can be used as a sweetener not only in drinks, foodstuffs, and other products dedicated to human consumption, but also in animal feed and forage with improved characteristics.

[00208] Exemplos de produtos nos quais as composições de Rebaudiosídeo D podem ser usadas como composto adoçante podem ser bebidas alcólicas tais como vodka, vinho, cerveja, licor, saquê etc.; sucos naturais, bebidas refrescantes, refrigerantes, bebidas dietéticas, bebidas de zero caloria, bebidas e alimentos de caloria reduzida, iogurtes, sucos instantâneos, café instantâneo, bebidas instantâneas em pó, produtos enlatados, xaropes, pasta de soja fermentada, molho de soja, vinagre, molhos, maionese, ketchup, curry, sopa, caldos instantâneos, molho de soja em pó, vinagre em pó, tipos de biscoitos, biscoito de arroz, bolachas, pão, chocolates, caramelos, balas, gomas de mascar, gelatina, pudim, frutas e verduras em conserva, creme fresco, geleia, marmelada, flores em pasta, leite em pó, sorvete, sorbet, verduras e frutas acondicionados em frascos, feijão enlatado e cozido, carne e alimentos cozidos em molho adocicado, produtos alimentícios à base de hortaliças, frutos do mar, presunto, salsicha, embutido de peixe, salsicha de peixe, pasta de peixe, produtos fritos à base de peixe, produtos fritos à base de frutos do mar, produtos alimentícios congelados, algas marinhas em conserva, carne em conserva, tabaco, produtos medicinais, e muitos outros. Em princípio, ela pode ter aplicações ilimitadas.[00208] Examples of products in which Rebaudioside D compositions can be used as a sweetening compound can be alcoholic beverages such as vodka, wine, beer, liquor, sake, etc.; natural juices, refreshing drinks, soft drinks, diet drinks, zero-calorie drinks, reduced-calorie drinks and foods, yogurts, instant juices, instant coffee, instant powder drinks, canned goods, syrups, fermented soy paste, soy sauce, vinegar, sauces, mayonnaise, ketchup, curry, soup, instant broth, soy sauce powder, vinegar powder, types of biscuits, rice biscuits, crackers, bread, chocolates, caramels, candies, chewing gum, gelatine, pudding , preserved fruits and vegetables, fresh cream, jam, marmalade, paste flowers, powdered milk, ice cream, sorbet, vegetables and fruits packed in jars, canned and cooked beans, meat and foods cooked in a sweet sauce, food based products vegetables, seafood, ham, sausage, fish sausage, fish sausage, fish paste, fried fish products, fried seafood products, frozen food products, preserved seaweed, meat in preserves, tobacco, medicinal products, and many others. In principle, it can have unlimited applications.

[00209] A composição adoçada compreende uma bebida, exemplos não limitativos da qual incluem bebidas não gasosas e bebidas gasosas tais como colas, ginger ales, bebidas não alcoólicas feitas de raízes, cidras, bebidas leves flavorizadas com frutas por exemplo, bebidas leves flavorizadas com cítricos tais como lima-limão ou laranja), bebidas leves em pó, entre outros; sucos de fruta provenientes de frutas ou verduras, sucos de fruta incluindo sucos espremidos entre outros, sucos de furta contendo pedaços de fruta, bebidas à base de fruta, bebidas à base de suco de fruta, bebidas contendo sucos de fruta, bebidas com sabor de fruta, sucos de verdura, sucos contendo verduras, e sucos mistos contendo frutas e verduras; bebidas esportivas, bebidas energéticas, água maltada (“near water”) e bebidas similares (por exemplo, água com flavorizantes naturais ou sintéticos); bebidas tipo chá ou bebidas populares tais como café, cacau, chá preto, chá verde, chá oolong, entre outras; bebidas contendo componentes lácteos tais como bebidas lácteas, café contendo componentes lácteos, café com leite, chá com leite, bebidas lácteas à base de frutas, iogurte para beber, bebidas com bactérias do ácido láctico, entre outras; e laticínios.[00209] The sweetened composition comprises a drink, non-limiting examples of which include non-carbonated drinks and carbonated drinks such as colas, ginger ales, non-alcoholic drinks made from roots, ciders, light drinks flavored with fruit for example, light drinks flavored with citric fruits such as lemon-lime or orange), light powdered drinks, among others; fruit juices made from fruits or vegetables, fruit juices including but not limited to squeezed juices, fruit juices containing pieces of fruit, fruit-based drinks, fruit juice-based drinks, drinks containing fruit juices, fruit-flavored drinks fruit, vegetable juices, juices containing vegetables, and mixed juices containing fruits and vegetables; sports drinks, energy drinks, malted water (“near water”) and similar beverages (for example, water with natural or synthetic flavorings); tea-like drinks or popular drinks such as coffee, cocoa, black tea, green tea, oolong tea, among others; beverages containing dairy components such as dairy beverages, coffee containing dairy components, coffee with milk, tea with milk, fruit-based dairy drinks, drinking yogurt, drinks with lactic acid bacteria, among others; and dairy.

[00210] Geralmente, a quantidade de adoçante presente em uma composição adoçada varia amplamente dependendo do tipo particular de composição adoçada e sua doçura desejada. Os especialistas na técnica vão perceber facilmente qual a quantidade apropriada de adoçante a ser usada na composição adoçada.[00210] Generally, the amount of sweetener present in a sweetened composition varies widely depending on the particular type of sweetened composition and its desired sweetness. Those skilled in the art will readily appreciate the appropriate amount of sweetener to use in the sweetened composition.

[00211] Na descrição detalhada, apenas algumas modalidades exemplificativas da presente invenção estão mostradas e descritas, a título de ilustração. Os especialistas na técnica vão perceber que a invenção pode ser praticada de muitas formas diferentes e que ela não deve ser interpretada como estando limitada às modalidades apresentadas neste relatório.[00211] In the detailed description, only some exemplary embodiments of the present invention are shown and described, by way of illustration. Those skilled in the art will appreciate that the invention can be practiced in many different ways and that it should not be construed as being limited to the embodiments set forth in this report.

[00212] O adoçante obtido nesta invenção pode ser obtida em formas secas ou líquidas. Ele pode ser adicionado antes ou depois do tratamento térmico dos produtos alimentícios. A quantidade de adoçante depende da finalidade de uso. Ele pode adicionado isolado ou em combinação com outros compostos.[00212] The sweetener obtained in this invention can be obtained in dry or liquid forms. It can be added before or after heat treatment of food products. The amount of sweetener depends on the purpose of use. It can be added alone or in combination with other compounds.

[00213] Durante a manufatura de gêneros alimentícios, bebidas, produtos farmacêuticos, cosméticos, produtos de mesa, gomas de mascar, os métodos convencionais tais como misturação, amassamento, dissolução, desoxidação, permeação, percolação, borrifação, atomização, infusão e outros métodos podem ser usados.[00213] During the manufacture of foodstuffs, beverages, pharmaceuticals, cosmetics, tableware, chewing gum, conventional methods such as mixing, kneading, dissolving, deoxidation, permeation, percolation, spraying, atomization, infusion and other methods can be used.

[00214] Portanto, as composições da presente invenção podem ser feitas por qualquer método conhecido pelos especialistas na técnica que resulte em misturas homogêneas uniformes ou homogêneas dos ingredientes. Esses métodos incluem misturação a seco, secagem por aspersão, aglomeração, granulação por via úmida, compactação, cocristalização, entre outros.[00214] Therefore, the compositions of the present invention can be made by any method known to those skilled in the art that results in uniform or homogeneous mixtures of the ingredients. These methods include dry blending, spray drying, agglomeration, wet granulation, compaction, co-crystallization, and others.

[00215] Na forma sólida a composição adoçante da presente invenção pode ser apresentada aos consumidores em qualquer forma adequada para aplicação a comestíveis a serem adoçados, as quais incluem sachês, pacotes, sacos ou caixas com o adoçante a granel, cubos, tabletes, névoas, ou tiras solúveis. A composição pode ser apresentada na forma de uma dose unitária ou a granel.[00215] In solid form, the sweetener composition of the present invention can be presented to consumers in any form suitable for application to edibles to be sweetened, which include sachets, packets, bags or boxes with the sweetener in bulk, cubes, tablets, mists , or soluble strips. The composition may be presented in unit dose or bulk form.

[00216] Para sistemas e composições de adoçante líquido podem ser criadas variedades convenientes de formas fluidas, semifluidas, em pasta e em creme, apropriadas para serem acondicionadas usando material de embalagem apropriado de qualquer formato ou forma que sejam convenientes para levar ou dispensar ou armazenar ou transportar qualquer combinação contendo qualquer produto adoçante acima ou combinação de produtos produzidos acima.[00216] For liquid sweetener systems and compositions, convenient varieties of fluid, semi-fluid, paste and cream forms can be created, suitable for packaging using appropriate packaging material of any shape or form that are convenient to carry or dispense or store or carry any combination containing any of the above sweetening products or combination of products produced above.

[00217] Estudos realizados mostraram que a combinação de Rebaudiosídeo D com outros glicosídeos de esteviol, adoçantes naturais de alta intensidade e adoçantes artificiais de alta intensidade produz uma composição adoçante com perfil de sabor melhorado.[00217] Studies have shown that the combination of Rebaudioside D with other steviol glycosides, high intensity natural sweeteners and high intensity artificial sweeteners produces a sweetener composition with an improved flavor profile.

[00218] Rebaudiosídeo D e outros adoçantes de alta intensidade foram combinados em várias misturas onde a contribuição do Rebaudiosídeo D na doçura da composição variou de 10% a 90%.[00218] Rebaudioside D and other high-intensity sweeteners were combined in various blends where the contribution of Rebaudioside D to the sweetness of the composition ranged from 10% to 90%.

[00219] Quanto mais alto era o teor de Rebaudiosídeo D na mistura, mais considerável era o efeito de melhoria.[00219] The higher the Rebaudioside D content in the mixture, the more considerable was the improvement effect.

[00220] A composição pode incluir vários agentes de encorpamento, ingredientes funcionais, corante, flavorizantes.[00220] The composition may include various bulking agents, functional ingredients, coloring, flavoring.

[00221] Os exemplos a seguir ilustram modalidades preferidas da invenção para o isolamento e a purificação de Rebaudiosídeo D e compostos relacionados e o uso dos mesmos em gêneros alimentícios e produtos farmacêuticos. Ficará entendido que a invenção não se limita aos materiais, proporções, condições e procedimentos apresentados nos exemplos, que são apenas ilustrativos.[00221] The following examples illustrate preferred embodiments of the invention for the isolation and purification of Rebaudioside D and related compounds and their use in foodstuffs and pharmaceuticals. It will be understood that the invention is not limited to the materials, proportions, conditions and procedures set forth in the examples, which are illustrative only.

EXEMPLO 1EXAMPLE 1

[00222] Purificação de Rebaudiosídeo D[00222] Purification of Rebaudioside D

[00223] Um kg de extrato de Stevia contendo extrato de Stevia contendo Steviosídeo - 25,40%, Rebaudiosídeo A - 59,14%, Rebaudiosídeo C - 9,71%, Rebaudiosídeo D - 2,03%, Rebaudiosídeo B - 0,56%, Rebaudiosídeo E - 0,68%, Rebaudiosídeo F - 1,02%, Steviolbiosídeo- 0,11%, e Dulcosídeo A - 1,35% foi dissolvido em 3000 ml de álcool etílico a 95% e a solução foi mantida a 80 ° C por 35 minutos, e em seguida a 15 ° C por 12 horas com agitação. Quando a temperatura atingiu 22oC, 1,0% de Rebaudiosídeo A altamente purificado foi adicionado à mistura reacional como substância de partida para iniciar a cristalização.[00223] One kg of Stevia extract containing Stevia extract containing Stevioside - 25.40%, Rebaudioside A - 59.14%, Rebaudioside C - 9.71%, Rebaudioside D - 2.03%, Rebaudioside B - 0, 56%, Rebaudioside E - 0.68%, Rebaudioside F - 1.02%, Steviolbioside - 0.11%, and Dulcoside A - 1.35% was dissolved in 3000 ml of 95% ethyl alcohol and the solution was kept at 80°C for 35 minutes, then at 15°C for 12 hours with stirring. When the temperature reached 22oC, 1.0% highly purified Rebaudioside A was added to the reaction mixture as a starting substance to initiate crystallization.

[00224] O precipitado foi separado por filtração e lavado com cerca de dois volumes de 99,5% de etanol.[00224] The precipitate was filtered off and washed with about two volumes of 99.5% ethanol.

[00225] O rendimento do material cristalino foi de 47,1% com teor de Steviosídeo (8,8%), Rebaudiosídeo A (81,7%), Rebaudiosídeo C (5. 1%), Rebaudiosídeo D (3,3%), Rebaudiosídeo B (0,1%), Rebaudiosídeo E (0,3%), Rebaudiosídeo F (0,4%), e Dulcoside A (0,3%).[00225] The yield of crystalline material was 47.1% with content of Stevioside (8.8%), Rebaudioside A (81.7%), Rebaudioside C (5.1%), Rebaudioside D (3.3% ), Rebaudioside B (0.1%), Rebaudioside E (0.3%), Rebaudioside F (0.4%), and Dulcoside A (0.3%).

[00226] A solução remanescente contém Steviosídeo (40,2%), Rebaudiosídeo A (39,1%), Rebaudiosídeo C (13,8%), Rebaudiosídeo D (0,9%), Rebaudiosídeo B (1,0%), Rebaudiosídeo E (1,0%), Rebaudiosídeo F (1,6%), Steviolbiosídeo (0,2%), e Dulcosídeo A (2,3%), e pode ser usada para o isolamento de Rebaudiosídeo A ou de uma mistura altamente purificada de glicosídeos de esteviol.[00226] The remaining solution contains Stevioside (40.2%), Rebaudioside A (39.1%), Rebaudioside C (13.8%), Rebaudioside D (0.9%), Rebaudioside B (1.0%) , Rebaudioside E (1.0%), Rebaudioside F (1.6%), Steviolbioside (0.2%), and Dulcoside A (2.3%), and can be used for the isolation of Rebaudioside A or a highly purified blend of steviol glycosides.

[00227] O precipitado foi misturado com 3,5 volumes de 77,7% de etanol e incubado a 50°C por 3 horas com agitação. Em seguida, a mistura foi resfriada para a temperatura ambiente e o precipitado foi separado por filtração. O rendimento de cristais ficou em torno de 14% e 65,9 g de produto foram obtidos com um teor de Steviosídeo (1,4%), Rebaudiosídeo A (72,8%), Rebaudiosídeo C (1,5%), Rebaudiosídeo D (21,4%), Rebaudiosídeo B (0,1%), Rebaudiosídeo E (2,1%), e Rebaudiosídeo F (0,7%).[00227] The precipitate was mixed with 3.5 volumes of 77.7% ethanol and incubated at 50°C for 3 hours with stirring. Then the mixture was cooled to room temperature and the precipitate was filtered off. The yield of crystals was around 14% and 65.9 g of product were obtained with a content of Stevioside (1.4%), Rebaudioside A (72.8%), Rebaudioside C (1.5%), Rebaudioside D (21.4%), Rebaudioside B (0.1%), Rebaudioside E (2.1%), and Rebaudioside F (0.7%).

[00228] O teor dos vários glicosídeos no filtrado foi o seguinte: Steviosídeo (10,0%), Rebaudiosídeo A (83,15%), Rebaudiosídeo C (5,69%), Rebaudiosídeo D (0,35%), Rebaudiosídeo B (0,1%), Rebaudiosídeo E (0,01%), Rebaudiosídeo F (0,35%), e Dulcosídeo A (0,35%).[00228] The content of the various glycosides in the filtrate was as follows: Stevioside (10.0%), Rebaudioside A (83.15%), Rebaudioside C (5.69%), Rebaudioside D (0.35%), Rebaudioside B (0.1%), Rebaudioside E (0.01%), Rebaudioside F (0.35%), and Dulcoside A (0.35%).

[00229] Para purificação adicional do Rebaudiosídeo D o precipitado foi suspendido em 50% de etanol a uma proporção de 1:2 p/v e mantido por 12 horas a 35 ° C com agitação. A suspensão foi filtrada e o precipitado foi secado. O rendimento de precipitado ficou em torno de 23% e ele contém Steviosídeo (0,8%), Rebaudiosídeo A (16,2%), Rebaudiosídeo C (0,7%), Rebaudiosídeo D (81,6%), Rebaudiosídeo E (0,5%), e Rebaudiosídeo F (0,2%). Cerca de 15,2 g de material seco foram obtidos neste estágio.[00229] For further purification of Rebaudioside D the precipitate was suspended in 50% ethanol at a ratio of 1:2 w/v and kept for 12 hours at 35°C with stirring. The suspension was filtered and the precipitate was dried. The precipitate yield was around 23% and it contains Stevioside (0.8%), Rebaudioside A (16.2%), Rebaudioside C (0.7%), Rebaudioside D (81.6%), Rebaudioside E (0.5%), and Rebaudioside F (0.2%). About 15.2 g of dry material was obtained at this stage.

[00230] O teor dos vários glicosídeos no filtrado resultante foi o seguinte: Steviosídeo (1,6%), Rebaudiosídeo A (89,7%), Rebaudiosídeo C (1,7%), Rebaudiosídeo D (3,4%), Rebaudiosídeo B (0,1%), Rebaudiosídeo E (2,6%), e Rebaudiosídeo F (0,8%). Ele foi combinado com o filtrado do estágio anterior.[00230] The content of the various glycosides in the resulting filtrate was as follows: Stevioside (1.6%), Rebaudioside A (89.7%), Rebaudioside C (1.7%), Rebaudioside D (3.4%), Rebaudioside B (0.1%), Rebaudioside E (2.6%), and Rebaudioside F (0.8%). It was combined with the filtrate from the previous stage.

[00231] O precipitado foi submetido a um tratamento similar com uma solução de etanol a 50% para obter um produto com um teor de 3,8% de Rebaudiosídeo A e 95,7% de Rebaudiosídeo D. O produto também contém Steviosídeo, Rebaudiosídeo C e Rebaudiosídeo F 0,1% cada, assim como 0,2% de Rebaudiosídeo E. O rendimento deste produto ficou em torno de 75% e foram obtidos cerca de 11,4g de cristais.[00231] The precipitate was subjected to a similar treatment with a 50% ethanol solution to obtain a product with a content of 3.8% Rebaudioside A and 95.7% Rebaudioside D. The product also contains Stevioside, Rebaudioside C and Rebaudioside F 0.1% each, as well as 0.2% of Rebaudioside E. The yield of this product was around 75% and about 11.4g of crystals were obtained.

[00232] A quantidade de filtrado neste estágio foi de cerca de 3,8g com 39,3% e 53,4% de Rebaudiosídeo D e Rebaudiosídeo A, respectivamente.[00232] The amount of filtrate at this stage was about 3.8g with 39.3% and 53.4% of Rebaudioside D and Rebaudioside A, respectively.

[00233] O Rebaudiosídeo D obtido foi dissolvido em 2 volumes de metanol a 30% e tratado com 0,3% de carvão ativo a 60°C por 30 minutos e então submetido a filtração a quente. O Rebaudiosídeo D precipitou espontaneamente depois da filtração.[00233] The Rebaudioside D obtained was dissolved in 2 volumes of 30% methanol and treated with 0.3% active charcoal at 60°C for 30 minutes and then subjected to hot filtration. Rebaudioside D spontaneously precipitated after filtration.

[00234] Os cristais foram separados por filtração e secados a 80oC por 12 horas. O rendimento de precipitado ficou em torno de 8,8 g e ele contém 98,4% Rebaudiosídeo D em termos secos.[00234] The crystals were separated by filtration and dried at 80oC for 12 hours. The precipitate yield was around 8.8 g and it contains 98.4% Rebaudioside D in dry terms.

[00235] O filtrado combinado do segundo e terceiro estágios de precipitação pesa 455,8 g e contém Steviosídeo (9,1%), Rebaudiosídeo A (83,9%), Rebaudiosídeo C (5,2%), Rebaudiosídeo D (0,7%), Rebaudiosídeo B (0,1%), Rebaudiosídeo E (0,3%), Rebaudiosídeo F (0,4%), e Dulcosídeo A (0,3%). Ele foi misturado com 1% de Rebaudiosídeo A como substância de partida e deixado cristalizar a 22°C por 12 horas. Os cristais foram separados por filtração e lavados com cerca de dois volumes de etanol. O teor de Rebaudiosídeo A nos cristais foi de 98,8% em termos secos. A quantidade foi de 273,5 g depois da secagem.[00235] The combined filtrate from the second and third precipitation stages weighs 455.8 g and contains Stevioside (9.1%), Rebaudioside A (83.9%), Rebaudioside C (5.2%), Rebaudioside D (0. 7%), Rebaudioside B (0.1%), Rebaudioside E (0.3%), Rebaudioside F (0.4%), and Dulcoside A (0.3%). It was mixed with 1% Rebaudioside A as starting material and allowed to crystallize at 22°C for 12 hours. The crystals were filtered off and washed with about two volumes of ethanol. The Rebaudioside A content in the crystals was 98.8% in dry terms. The amount was 273.5 g after drying.

[00236] A pureza do Rebaudiosídeo D foi determinada usando HPLC que foi realizada usando uma coluna ZORBAX NH2 (150 x 4,6 mm, 5 μm) a uma temperatura de 30°C. A fase móvel compreendia uma solução de 20% de tampão (0,0125% de ácido acético e 0,0125% de acetato de amônio) e 80% de acetonitrila uma taxa de fluxo de 1,0mL/min. 12μL de cada amostra foram injetados em duplicata e a amostra foi analisada usando um detector de UV a 210nm (largura de faixa 4nm) com uma referência de 260nm (largura de faixa 100nm). A análise requereu um tempo de operação de 40 a 60 min.[00236] The purity of Rebaudioside D was determined using HPLC which was performed using a ZORBAX NH2 column (150 x 4.6 mm, 5 μm) at a temperature of 30°C. The mobile phase comprised a solution of 20% buffer (0.0125% acetic acid and 0.0125% ammonium acetate) and 80% acetonitrile at a flow rate of 1.0mL/min. 12μL of each sample was injected in duplicate and the sample was analyzed using a UV detector at 210nm (bandwidth 4nm) with a reference of 260nm (bandwidth 100nm). The analysis required an operating time of 40 to 60 min.

[00237] Uma solução tampão de 0,0125% de ácido acético e 0,0125% de acetato de amônio foi preparada por dissolução de 0,125g de acetato de amônio e 125μL de ácido acético glacial em um litro de água. O tempo de retenção do Rebaudiosídeo B foi ajustado variando-se a proporção de acetato de amônio para ácido acético enquanto era mantido um total de 0,025% dos dois combinados. O aumento da quantidade de ácido acético diminuiu o tempo de retenção do Rebaudiosídeo B.[00237] A buffer solution of 0.0125% acetic acid and 0.0125% ammonium acetate was prepared by dissolving 0.125g of ammonium acetate and 125μL of glacial acetic acid in one liter of water. Rebaudioside B retention time was adjusted by varying the ratio of ammonium acetate to acetic acid while maintaining a total of 0.025% of the two combined. Increasing the amount of acetic acid decreased the retention time of Rebaudioside B.

[00238] Uma solução diluente foi preparada por misturação de 500mL de álcool etílico e 500mL da solução tampão. Padrões de Rebaudiosídeo D foram preparados por diluição de 10,0 ± 0,5mg (registrado com aproximação de 0,1mg) do padrão de Rebaudiosídeo D com 4mL da solução diluente para fazer uma solução padrão de aproximadamente 2500mg/L. A solução padrão de Rebaudiosídeo D foi injetada a 10,8, 11,4, 12,6 e 13,2μL. O teor de umidade foi medido por análise de Karl Fischer toda vez que um padrão era preparado e as correções foram feitas com base na pureza do solvente de acordo com o certificado de análise.[00238] A diluent solution was prepared by mixing 500mL of ethyl alcohol and 500mL of buffer solution. Rebaudioside D standards were prepared by diluting 10.0 ± 0.5mg (recorded to the nearest 0.1mg) of the Rebaudioside D standard with 4mL of the diluent solution to make a standard solution of approximately 2500mg/L. The standard Rebaudioside D solution was injected at 10.8, 11.4, 12.6 and 13.2μL. Moisture content was measured by Karl Fischer analysis every time a standard was prepared and corrections were made based on solvent purity as per the certificate of analysis.

[00239] Padrões de Steviosídeo foram preparados por diluição de 12,5 ±0,5mg (registrado com aproximação de 0,1mg) do padrão de Steviosídeo com 5mL da solução diluente para fazer uma solução padrão de aproximadamente 2500mg/L (estoque A) (correção da umidade e da pureza). O padrão de Steviosídeo foi então diluído usando um mL do estoque A para dez mL de diluente para produzir um padrão de 250mg/L (estoque B), e padrões de estoque foram diluídos até concentrações finais de 2,5 a 50mg/L.[00239] Stevioside standards were prepared by diluting 12.5 ±0.5mg (registered to the nearest 0.1mg) of the Stevioside standard with 5mL of the diluent solution to make a standard solution of approximately 2500mg/L (stock A) (humidity and purity correction). The Stevioside standard was then diluted using one mL of Stock A to ten mL of diluent to produce a 250mg/L standard (Stock B), and stock standards were diluted to final concentrations of 2.5 to 50mg/L.

[00240] Amostras das composições de Rebaudiosídeo D foram preparadas por diluição de 125 ±2mg (registrado com aproximação de 0,1 mg) da composição de Rebaudiosídeo D com 50 mL da solução diluente para fazer uma solução padrão de aproximadamente 2500mg/L (correção da umidade). Amostras em duplicada preparadas individualmente foram injetadas a 12μL. Se as amostras não fossem analisadas imediatamente, elas eram armazenadas sem folga, em uma atmosfera de nitrogênio, e desidratadas.[00240] Samples of the Rebaudioside D compositions were prepared by diluting 125 ±2mg (registered to the nearest 0.1 mg) of the Rebaudioside D composition with 50 mL of the diluent solution to make a standard solution of approximately 2500mg/L (correction of humidity). Individually prepared duplicate samples were injected at 12μL. If samples were not analyzed immediately, they were stored without clearance in a nitrogen atmosphere and dehydrated.

[00241] A TABELA 11 oferece um guia para os tempos de retenção para o ebaudiosídeo D e outros glicosídeos de esteviol. No entanto, os especialistas na técnica vão perceber que os tempos de retenção podem ser modificados conforme necessário. TABELA 11 [00241] TABLE 11 provides a guide to retention times for ebaudioside D and other steviol glycosides. However, those skilled in the art will appreciate that retention times can be modified as needed. TABLE 11

EXEMPLO 2EXAMPLE 2

[00242] Suco de laranja de baixa caloria[00242] Low calorie orange juice

[00243] 60g de suco de laranja concentrado foram misturados com 1,1g de ácido cítrico, 0,24g de vitamina C, 1,0g de essência de laranja, 0,76g de Rebaudiosídeo D e água para criar uma mistura homogeneamente dissolvida de 1000mL de quantidade total. Em seguida, a mistura foi pasteurizada por um período de 20 segundos a cerca de 95°C para preparar um suco de laranja semelhante àquele feito pelo método convencional. O produto apresentou um perfil de sabor excelente.[00243] 60g of concentrated orange juice was mixed with 1.1g of citric acid, 0.24g of vitamin C, 1.0g of orange essence, 0.76g of Rebaudioside D and water to create a homogeneously dissolved mixture of 1000mL of total quantity. Then, the mixture was pasteurized for a period of 20 seconds at about 95°C to prepare an orange juice similar to that made by the conventional method. The product had an excellent flavor profile.

[00244] Sucos de outras frutas, tais como maçã, limão, damasco, cereja, abacaxi etc., podem ser preparados usando a mesma abordagem.[00244] Juices from other fruits, such as apple, lemon, apricot, cherry, pineapple, etc., can be prepared using the same approach.

EXEMPLO 3EXAMPLE 3

[00245] Sorvete[00245] Ice cream

[00246] 1,50kg de leite integral foi aquecido até 45oC, e 300 gramas de creme de leite, 100 gramas de tagatose, 90 gramas de sorbitol, 6 gramas de carragenano como estabilizante, 3 gramas de polissorbato-80 como emulsificante, e 1,0 grama de Rebaudiosídeo D como no EXEMPLO 10, foram acrescentados ao leite e a mistura foi agitada ate os ingredientes dissolverem completamente. A mistura foi então pasteurizada a uma temperatura de 80oC por 25 segundos. Depois da homogeneização as amostras foram mantidas a uma temperatura de 4oC oor 24 horas para completar o processo de envelhecimento. Sabor baunilha (1,0% em peso da mistura) e corante (0,025% em peso da mistura) foram adicionados à mistura depois de envelhecida. A mistura foi então transferida para uma máquina de sorvete para produzir sorvete automaticamente. Amostras do sorvete produzido foram transferidas para recipientes vedados e foram mantidas na geladeira a uma temperatura de -18oC.[00246] 1.50 kg of whole milk was heated to 45oC, and 300 grams of cream, 100 grams of tagatose, 90 grams of sorbitol, 6 grams of carrageenan as a stabilizer, 3 grams of polysorbate-80 as an emulsifier, and 1 .0 grams of Rebaudioside D as in EXAMPLE 10 was added to the milk and the mixture stirred until the ingredients completely dissolved. The mixture was then pasteurized at a temperature of 80oC for 25 seconds. After homogenization, the samples were kept at a temperature of 4oC for 24 hours to complete the aging process. Vanilla flavor (1.0% by weight of the blend) and color (0.025% by weight of the blend) were added to the aged blend. The mixture was then transferred to an ice cream machine to automatically produce ice cream. Samples of the ice cream produced were transferred to sealed containers and kept in the refrigerator at a temperature of -18oC.

[00247] A aplicação de adoçantes não afeta as propriedades físico-químicas do sorvete, assim como as qualidades gerais de cor, suavidade, textura superficial, célula aerada, intensidade do aroma de baunilha, sabor de baunilha, gredosidade, congelação e taxa de fusão.[00247] The application of sweeteners does not affect the physicochemical properties of ice cream, as well as the general qualities of color, smoothness, surface texture, aerated cell, intensity of vanilla aroma, vanilla flavor, chalkiness, freezing and melting rate .

EXEMPLO 4EXAMPLE 4

[00248] Iogurte[00248] Yogurt

[00249] Em 1kg de leite desnatado, foi dissolvido 0,8 grama de Rebaudiosídeo D de alta pureza, preparado de acordo com a invenção. Depois de pasteurizar a 82oC por 20 minutos, o leite foi resfriado para 40oC. Um fermento em uma quantidade de 30 gramas foi adicionado e a mistura foi incubada a 37oC por 6 horas. Em seguida, a massa fermentada foi mantida a 10-15oC por 12 horas.[00249] In 1 kg of skimmed milk, 0.8 grams of high purity Rebaudioside D, prepared according to the invention, was dissolved. After pasteurizing at 82oC for 20 minutes, the milk was cooled to 40oC. A yeast in an amount of 30 grams was added and the mixture was incubated at 37oC for 6 hours. Then, the fermented mass was kept at 10-15oC for 12 hours.

[00250] O produto é um iogurte de baixa caloria e pouco cariogênico, sem sabor e odor estranhos.[00250] The product is a low-calorie, low-cariogenic yogurt with no strange taste or odor.

EXEMPLO 5EXAMPLE 5

[00251] Ice tea de limão[00251] Lemon ice tea

[00252] A fórmula para a bebida foi a seguinte: [00252] The formula for the drink was as follows:

[00253] Todos os ingredientes foram misturados e dissolvidos na água, e pasteurizados. O produto possui gosto e aroma excelentes.[00253] All ingredients were mixed and dissolved in water, and pasteurized. The product has an excellent taste and aroma.

EXEMPLO 6EXAMPLE 6

[00254] Pão[00254] Bread

[00255] 1kg de farinha, 37,38 gramas de xarope de fruto-oligossacarídeo, 80 gramas de margarina, 20 gramas de sal, 20 gramas de levedura, e 0,25 grama de Rebaudiosídeo D de alta pureza, obtido de acordo com a invenção foram colocados no liquidificador e bem misturados. 600 ml de água foram despejados na mistura e a mistura foi amassada o suficiente. Ao término do processo de amassamento, a massa foi modelada e deixada crescer por 30 a 45 minutos. A massa pronta foi colocada no forno e assada oor 45 minutos. As amostras de pão tinham uma cor branca cremosa, e uma textura lisa.[00255] 1kg of flour, 37.38 grams of fructooligosaccharide syrup, 80 grams of margarine, 20 grams of salt, 20 grams of yeast, and 0.25 grams of high purity Rebaudioside D, obtained in accordance with invention were placed in the blender and mixed well. 600 ml of water was poured into the mixture and the mixture was kneaded sufficiently. At the end of the kneading process, the dough was shaped and allowed to rise for 30 to 45 minutes. The finished dough was placed in the oven and baked for 45 minutes. The bread samples had a creamy white color and a smooth texture.

EXEMPLO 7EXAMPLE 7

[00256] Diet cookie[00256] Diet cookie

[00257] Farinha, 50,0%; margarina, 30,0%; frutose, 10,0%; maltitol, 8,0%; leite integral, 1,0%; sal, 0,2%; fermento, 0,15%; baunilha, 0,1%; Rebaudiosídeo D, 0,55%; obtido de acordo com esta invenção foram bem amassados em uma máquina de misturar massa. Depois de modelagem da massa os cookies foram assados a 200oC por 15 minutos.[00257] Flour, 50.0%; margarine, 30.0%; fructose, 10.0%; maltitol, 8.0%; whole milk, 1.0%; salt, 0.2%; yeast, 0.15%; vanilla, 0.1%; Rebaudioside D, 0.55%; obtained in accordance with this invention were well kneaded in a dough mixing machine. After modeling the dough, the cookies were baked at 200oC for 15 minutes.

[00258] O produto é um diet cookie de baixa caloria com gosto excelente e doçura apropriada.[00258] The product is a low-calorie diet cookie with excellent taste and appropriate sweetness.

EXEMPLO 8EXAMPLE 8

[00259] Molho de soja[00259] Soy sauce

[00260] 0,8 g de Rebaudiosídeo D foi adicionado a 1000mL de molho de soja e misturado homogeneamente. O produto apresentou um gosto e textura excelentes.[00260] 0.8g of Rebaudioside D was added to 1000mL of soy sauce and mixed homogeneously. The product had an excellent taste and texture.

EXEMPLO 9EXAMPLE 9

[00261] Pasta de dente[00261] Toothpaste

[00262] Uma pasta de dente foi preparada amassando- se uma composição compreendendo fosfato de cálcio, 45,0%; carboximetilcelulose, 1,5%; carragenano, 0,5%; glicerol, 18,0%; polioxietileno sorbitan monoéster, 2,0%; beta-ciclodextrina, 1,5%; laurilsarcosinato de sódio, 0,2%; flavorizante, 1,0%; preservativo, 0,1%; Rebaudiosídeo D, obtido de acordo com esta invenção, 0,2%; e água para totalizar 100%, da maneira usual. O produto possui bom poder de espumação e limpeza com a doçura apropriada.[00262] A toothpaste was prepared by kneading a composition comprising calcium phosphate, 45.0%; carboxymethylcellulose, 1.5%; carrageenan, 0.5%; glycerol, 18.0%; polyoxyethylene sorbitan monoester, 2.0%; beta-cyclodextrin, 1.5%; sodium lauryl sarcosinate, 0.2%; flavoring, 1.0%; condom, 0.1%; Rebaudioside D, obtained according to this invention, 0.2%; and water to 100% in the usual way. The product has good foaming and cleaning power with appropriate sweetness.

EXEMPLO 10EXAMPLE 10

[00263] Bolo[00263] Cake

[00264] 123g de ovo de galinha, 45g de açúcar, 345g de sorbitol líquido, 2,0g de éster de ácido graxo de sacarose, 0,35g de Rebaudiosídeo D com 95% de pureza foram misturados com 100g de farinha de trigo e 200g de água para preparar um bolo de acordo com um método convencional. O produto teve um gosto excelente e um ótimo sabor doce.[00264] 123g of chicken egg, 45g of sugar, 345g of liquid sorbitol, 2.0g of sucrose fatty acid ester, 0.35g of Rebaudioside D with 95% purity were mixed with 100g of wheat flour and 200g of water to prepare a cake according to a conventional method. The product tasted great and had a great sweet taste.

EXEMPLO 11EXAMPLE 11

[00265] Bebida gasosa de baixa caloria[00265] Low calorie fizzy drink

[00266] A fórmula para a bebida foi a seguinte: [00266] The formula for the drink was as follows:

[00267] As bebidas preparadas com diferentes adoçantes foram dadas a 10 juízes para serem comparadas.[00267] Drinks prepared with different sweeteners were given to 10 judges to be compared.

[00268] A TABELA 3 mostra os resultados. TABELA 3 [00268] TABLE 3 shows the results. TABLE 3

[00269] Os resultados acima mostram que as bebidas preparadas usando Rebaudiosídeo D altamente purificado possuem boas características organolépticas.[00269] The above results show that beverages prepared using highly purified Rebaudioside D have good organoleptic characteristics.

EXEMPLO 12EXAMPLE 12

[00270] Chocolate[00270] Chocolate

[00271] Uma composição contendo 30kg de licor de cacau, 11,5kg de manteiga de cacau, 14kg de leite em pó, 44kg de sorbitol, 0,1kg de sal, e 0,1kg de Rebaudiosídeo D de alta pureza foi amassada o suficiente, e a mistura foi então colocada em um refinador para reduzir seu tamanho de partícula por 24 horas. Em seguida, o conteúdo foi transferido para uma concha, 300 gramas de lecitina foram adicionados, e a composição foi amassada a 50°C por 48 horas. Em seguida, o conteúdo foi colocado em um aparelho de modelar, e solidificou.[00271] A composition containing 30kg of cocoa liquor, 11.5kg of cocoa butter, 14kg of powdered milk, 44kg of sorbitol, 0.1kg of salt, and 0.1kg of high purity Rebaudioside D was kneaded enough , and the mixture was then placed in a refiner to reduce its particle size for 24 hours. Then the contents were transferred into a ladle, 300 grams of lecithin were added, and the composition was kneaded at 50°C for 48 hours. Then the contents were placed in a modeling apparatus, and it solidified.

[00272] Os produtos são chocolate pouco catiogênicos e de baixa caloria com excelente textura. Também, o teste organoléptico realizado com 20 degustadores revelou que não havia sabor residual prlongado. Os produtos mais desejáveis foram aqueles com Rebaudiosídeo D com pelo menos 95% de pureza.[00272] The products are low-calorie, low-calorie chocolate with excellent texture. Also, the organoleptic test carried out with 20 tasters revealed that there was no prolonged aftertaste. The most desirable products were those with at least 95% purity of Rebaudioside D.

EXEMPLO 13EXAMPLE 13

[00273] Tablete de mesa[00273] Table tablet

[00274] Uma mistura, consistindo em 58,5% de lactose, 10% de silicato de cálcio, 5% de croscarmelose, 5% de L-leucina, 1% de aerosol 200, 0,5% de estearato de magnésio, e 20% de Rebaudiosídeo D foi amassada o suficiente. Em seguida a mistura foi modelada com o uso de uma máquina de fazer tabletes, equipada com saca-bocados de 6,2mm de diâmetro, em tabletes de 70mg cada, 3,0mm de espessura, e 10±1 kg de dureza.[00274] A mixture, consisting of 58.5% lactose, 10% calcium silicate, 5% croscarmellose, 5% L-leucine, 1% aerosol 200, 0.5% magnesium stearate, and 20% Rebaudioside D was kneaded enough. Then, the mixture was modeled using a tablet making machine, equipped with a 6.2mm diameter punch, into tablets of 70mg each, 3.0mm thick, and 10±1 kg hardness.

[00275] Os tabletes podem ser facilmente administrados devido a sua doçura apropriada. No entanto, as formulações que utilizam baixo grau de Rebaudiosídeo D ficaram um pouco pegajosas com uma solubilidade de cerca de 3-4 minutos em água a 25 °C. Os tabletes, preparados com Rebaudiosídeo D altamente purificado mostram as melhores características com a solubilidade em torno de 20-30 segundos.[00275] The tablets can be easily administered due to their appropriate sweetness. However, formulations using low grade Rebaudioside D were somewhat sticky with a solubility of about 3-4 minutes in water at 25°C. Tablets prepared with highly purified Rebaudioside D show the best characteristics with solubility around 20-30 seconds.

[00276] Deve ficar entendido que as descrições e modalidades específicas precedentes aqui mostradas são meramente ilustrativas do melhor modo da invenção e de seus princípios, e que modificações e adições podem ser facilmente feitas pelos especialistas na técnica sem se afastarem do espírito e escopo da invenção, que por conseguinte fica limitada apenas pelo escopo das reivindicações anexas. Referências 1 Kovylyaeva, G.I., Bakaleinik, G.A., Strobykina, I.Y., Gubskaya, V.I., Sharipova, R.R., Alfonsov, V.A., Kataev, V.E., and Tolstikov, A.G. 2007. Glycosides from Stevia rebaudiana. Chemistry of Natural Compounds. V,43, No,1, 81-85. 2 Kohda, H., Kasai, R., Yamazaki, K., Murakami, K., and Tanaka, O. 1976. New sweet diterpene glucosides from Stevia rebaudiana. Phytochemistry. V,15, 981-983. 3 Starratt, A.N., Kirbi, C.W., Pocs, R., and Brandle J.E. 2002. Rebaudioside F, a diterpene glycoside from Stevia rebaudiana. Phytochemistry. V,59, 367-370. 4 Kobayashi, M., Horikawa, S., Dergandi, I.H., Ueno, J., and Mitsuhashi, H. 1977. Dulcoside A and B, New diterpene glycosides from Stevia rebaudiana. Phytochemistry. V/16. 1405-1408. 5 Shi, R., Xu, M., Shi, Z., Fan, Y., Guo, X., Liu, Y., Wang, C., and He, B. 2002. Synthesis of bifunctional polymeric adsorbent and its application in purification of Stevia glycosides. Reactive & Functional Polymers. V,50. 107-116 6 Chen, T., Zhang, Y., Liu, X., Shi, Z., Sun, J. and He, B. 1998. Science in China. V,41. N4. 436 - 441. 7 Chen, T., Zhang, Y., Liu, X., Shi, Z., Sun, J. and He, B. 1999. Science in China. V,42. N3. 277 282. 8 Fuh, W-S., Chiang, B-H. 1990. Purification of steviosides by membrane and ion exchange process. Journal of Food Science. V,55. N5. 1454-1457. 9 Zhang, S.Q., Kumar, A., Kutowy, O. 2000. Membrane-based separation scheme for processing sweetener from Stevia leaves. Food Research International. V,33. 617-620. 10 Liu, Y., Yiming, C., Lining, W., and J. Jianhua. 1991. Study of stevioside preparation by membrane separation process. Desalination. V,83. 375-382. 11 Chen, T., Zhang, Y., Liu, X., and He, B. 1999. Studies on the adsorptive selectivity of the polar resin with carbonyl group on rebaudioside A. Acta Polymeric Scnica. N4. 398-403. 12 Moraes, E., Machado., N.R. 2001. Clarification of Stevia rebaudiana (Bert.) Bertoni extract by adsorption in modified zeolites. Acta Scientiarum. V,23. N6. 1375-1380. 13 Montovaneli, I.C.C., Ferretti, E.C., Simxes, M.R., and C. Silva. 2004. The effect of temperature and flow rate on the clarification of the aqueous Stevia-extract in fixed-bed column with zeolites. Brazilian Journal of Chemical Engineering. V,21. N3. 449-458. 14 Pol, J., Ostra, E.V., Karasek, P., Roth, M., Benesova, K., Kotlarikova, P., and J.Caslavsky. 2007. V,388. 1847-1857. 15 Bandna, V.J., Singh, B., and V.K.Kaul. 2009. An efficient microwave-assisted extraction process of stevioside and rebaudioside A from Stevia rebaudiana (Bertoni). Phytochemical Analysis. V,20. 240-245. 16 Teo, C.C., Tan, S.N., Yong, J.W.H., Hew, C.S., and E.S.Ong. 2009. Validation of green-solvent extraction combined with chromatographic chemical fingerprint to evaluate quality of Stevia rebaudiana Bertoni. J.Sep.Sci. V,32. 613-622. 17 Yoda, S.K., Marques, M.O.M., Ademir J. Petenate, A.J., and M. A. Meireles. 2003. Supercritical fluid extraction from Stevia rebaudiana Bertoni using CO2 and CO2+ water: extraction kinetics and identification of extracted components. Journal of Food Engineering. V, 57. 125-134.[00276] It should be understood that the foregoing descriptions and specific embodiments shown herein are merely illustrative of the best mode of the invention and its principles, and that modifications and additions can be easily made by those skilled in the art without departing from the spirit and scope of the invention , which is therefore limited only by the scope of the appended claims. References 1 Kovylyaeva, G.I., Bakaleinik, G.A., Strobykina, I.Y., Gubskaya, V.I., Sharipova, R.R., Alfonsov, V.A., Kataev, V.E., and Tolstikov, A.G. 2007. Glycosides from Stevia rebaudiana. Chemistry of Natural Compounds. V,43, No,1, 81-85. 2 Kohda, H., Kasai, R., Yamazaki, K., Murakami, K., and Tanaka, O. 1976. New sweet diterpene glucosides from Stevia rebaudiana. Phytochemistry. V,15, 981-983. 3 Starratt, A.N., Kirbi, C.W., Pocs, R., and Brandle J.E. 2002. Rebaudioside F, a diterpene glycoside from Stevia rebaudiana. Phytochemistry. V,59, 367-370. 4 Kobayashi, M., Horikawa, S., Dergandi, I.H., Ueno, J., and Mitsuhashi, H. 1977. Dulcoside A and B, New diterpene glycosides from Stevia rebaudiana. Phytochemistry. V/16. 1405-1408. 5 Shi, R., Xu, M., Shi, Z., Fan, Y., Guo, X., Liu, Y., Wang, C., and He, B. 2002. Synthesis of bifunctional polymeric adsorbent and its application in purification of Stevia glycosides. Reactive & Functional Polymers. V.50. 107-116 6 Chen, T., Zhang, Y., Liu, X., Shi, Z., Sun, J. and He, B. 1998. Science in China. V,41. N4. 436 - 441. 7 Chen, T., Zhang, Y., Liu, X., Shi, Z., Sun, J. and He, B. 1999. Science in China. V,42. N3. 277 282. 8 Fuh, W-S., Chiang, B-H. 1990. Purification of steviosides by membrane and ion exchange process. Journal of Food Science. V.55. N5. 1454-1457. 9 Zhang, S.Q., Kumar, A., Kutowy, O. 2000. Membrane-based separation scheme for processing sweetener from Stevia leaves. Food Research International. V,33. 617-620. 10 Liu, Y., Yiming, C., Lining, W., and J. Jianhua. 1991. Study of stevioside preparation by membrane separation process. Desalination. V.83. 375-382. 11 Chen, T., Zhang, Y., Liu, X., and He, B. 1999. Studies on the adsorptive selectivity of the polar resin with carbonyl group on rebaudioside A. Acta Polymeric Scnica. N4. 398-403. 12 Moraes, E., Machado., N.R. 2001. Clarification of Stevia rebaudiana (Bert.) Bertoni extract by adsorption in modified zeolites. Acta Scientiarum. V,23. N6. 1375-1380. 13 Montovaneli, I.C.C., Ferretti, E.C., Simxes, M.R., and C. Silva. 2004. The effect of temperature and flow rate on the clarification of the aqueous Stevia-extract in fixed-bed column with zeolites. Brazilian Journal of Chemical Engineering. V,21. N3. 449-458. 14 Pol, J., Ostra, E.V., Karasek, P., Roth, M., Benesova, K., Kotlarikova, P., and J. Caslavsky. 2007. V,388. 1847-1857. 15 Bandna, V.J., Singh, B., and V.K.Kaul. 2009. An efficient microwave-assisted extraction process of stevioside and rebaudioside A from Stevia rebaudiana (Bertoni). Phytochemical Analysis. V,20. 240-245. 16 Teo, C.C., Tan, S.N., Yong, J.W.H., Hew, C.S., and E.S.Ong. 2009. Validation of green-solvent extraction combined with chromatographic chemical fingerprint to evaluate quality of Stevia rebaudiana Bertoni. J.Sep.Sci. V,32. 613-622. 17 Yoda, S.K., Marques, M.O.M., Ademir J. Petenate, A.J., and M.A. Meireles. 2003. Supercritical fluid extraction from Stevia rebaudiana Bertoni using CO2 and CO2+ water: extraction kinetics and identification of extracted components. Journal of Food Engineering. V, 57. 125-134.

Claims (1)

1. Método de obtenção de rebaudiosídeo D purificado caracterizado pelas etapas de: fornecer um extrato da planta Stevia rebaudiana Bertoni; dissolver o extrato em uma primeira solução aquosa de solvente orgânico para resultar em uma primeira mistura de glicosídeos de esteviol; induzir a cristalização na primeira mistura; filtrar a primeira mistura para obter um primeiro precipitado e um primeiro filtrado; dissolver o primeiro precipitado em uma segunda solução aquosa de solvente orgânico para resultar em uma segunda mistura; induzir a cristalização na segunda mistura; filtrar a segunda mistura para obter um segundo precipitado e um segundo filtrado; dissolver o segundo precipitado em uma terceira solução aquosa de solvente orgânico para resultar em uma terceira mistura; induzir a cristalização na terceira mistura; e filtrar a terceira mistura para obter um terceiro precipitado e um terceiro filtrado; secagem do terceiro precipitado fornecendo o Rebaudiosídeo D purificado; onde: a primeira solução aquosa de solvente orgânico é uma solução de etanol-água com 75-99% de etanol; a segunda solução aquosa de solvente orgânico é uma solução de etanol-água com 70-80% de etanol; a terceira solução aquosa de solvente orgânico é uma solução de etanol-água com 10-80% de etanol; a etapa de induzir a cristalização na primeira mistura compreende adicionar Rebaudiosídeo A para promover a cristalização; o primeiro filtrado é concentrado formando uma mistura de glicosídeo de esteviol; ao segundo filtrado é adicionado Rebaudiosídeo Apara promover a cristalização de Rebaudiosídeo A; e assim o Rebaudiosídeo A cristalizado é recuperado para dar o Rebaudiosídeo A com uma pureza de 97-99% em peso em termos secos; e ainda as etapas de: dissolver o terceiro precipitado em uma quarta solução aquosa de solvente orgânico, em que a solução aquosa contém etanol a 50%, para resultar em uma quarta mistura; induzir a cristalização na quarta mistura; filtrar a quarta mistura para obter um quarto precipitado; e secagem do quarto precipitado proporcionando o Rebaudiosídeo D com uma pureza superior a 95%.1. Method for obtaining purified rebaudioside D characterized by the steps of: supplying an extract of the plant Stevia rebaudiana Bertoni; dissolving the extract in a first aqueous solution of organic solvent to result in a first mixture of steviol glycosides; inducing crystallization in the first mixture; filtering the first mixture to obtain a first precipitate and a first filtrate; dissolving the first precipitate in a second aqueous organic solvent solution to result in a second mixture; inducing crystallization in the second mixture; filtering the second mixture to obtain a second precipitate and a second filtrate; dissolving the second precipitate in a third aqueous solution of organic solvent to give a third mixture; inducing crystallization in the third mixture; and filtering the third mixture to obtain a third precipitate and a third filtrate; drying the third precipitate yielding purified Rebaudioside D; where: the first aqueous organic solvent solution is an ethanol-water solution with 75-99% ethanol; the second aqueous organic solvent solution is an ethanol-water solution with 70-80% ethanol; the third aqueous organic solvent solution is an ethanol-water solution with 10-80% ethanol; the step of inducing crystallization in the first mixture comprises adding Rebaudioside A to promote crystallization; the first filtrate is concentrated forming a steviol glycoside mixture; to the second filtrate is added Rebaudioside A to promote the crystallization of Rebaudioside A; and thus crystallized Rebaudioside A is recovered to give Rebaudioside A with a purity of 97-99% by weight in dry terms; and further the steps of: dissolving the third precipitate in a fourth aqueous solution of organic solvent, wherein the aqueous solution contains 50% ethanol, to result in a fourth mixture; inducing crystallization in the fourth mixture; filter the fourth mixture to obtain a fourth precipitate; and drying the fourth precipitate providing Rebaudioside D in greater than 95% purity.