BRPI0619476A2 - Interleukin-11 compositions and methods of use - Google Patents

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BRPI0619476A2
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conjugate
antibody
calicheamicin
thrombocytopenia
administration
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BRPI0619476-1A
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Nitin K Damle
John Francis Dijoseph
Paul F Schendel
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Wyeth Corp
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Abstract

COMPOSIçõES DE INTERLEUCINA-11 E MéTODOS DE USO. A presente invenção refere-se a métodos para o tratamento e/ou a prevenção de trombocitopenia incluindo trombocitopenia associada à lesão hepática induzida por fármaco trombocitopenia associado à destruição da medula óssea induzida por fármaco. Os métodos de tratamento da invenção incluem a administração de interleucina-11 a um indivíduo que sofre de trombocitopenia ou está suscetível à mesma e/ou que recebe ou está para receber um tratamento envolvendo um agente terapêutico conjugado cuja administração resulta em trombocitopenia. Também são fornecidas composições farmacêuticas e kits úteis para realizar estes métodos de tratamento.COMPOSITIONS OF INTERLEUCIN-11 AND METHODS OF USE. The present invention relates to methods for the treatment and / or prevention of thrombocytopenia including thrombocytopenia associated with drug-induced liver injury thrombocytopenia associated with drug-induced bone marrow destruction. Treatment methods of the invention include administering interleukin-11 to an individual suffering from or being susceptible to thrombocytopenia and / or receiving or about to receive treatment involving a conjugated therapeutic agent whose administration results in thrombocytopenia. Pharmaceutical compositions and kits useful for carrying out these treatment methods are also provided.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSI- ÇÕES DE INTERLEUCINA-11 E MÉTODOS DE USO".Patent Descriptive Report for "INTERLEUCIN-11 COMPOSITIONS AND METHODS OF USE".

Pedidos CorrelatosRelated Requests

O presente pedido reivindica a prioridade do Pedido Provisório N° 60/742.658, depositado em 6 de dezembro de 2005 e do Pedido Provisó- rio N° 60/842.294 depositado em 5 de setembro de 2006, ambos intitulados "Interleukin-11 Compositions and Methods of Use". Cada um dos pedidos provisórios está aqui incorporado em sua integridade a título de referência.This application claims the priority of Provisional Application No. 60 / 742,658, filed on December 6, 2005 and Provisional Application No. 60 / 842,294 filed on September 5, 2006, both entitled "Interleukin-11 Compositions and Methods. of Use ". Each of the provisional applications is incorporated herein by reference in its entirety.

Antecedentes da InvençãoBackground of the Invention

As plaquetas são importantes para manter a homeostasia e para iniciar a formação de coágulo sangüíneo em locais de lesão. As plaquetas também liberam fatores de crescimento no local da formação do coágulo que, entre diversas funções, aceleram o processo de cicatrização. Em paci- entes sofrendo de níveis reduzidos de plaquetas (uma condição conhecida como trombocitopenia), a incapacidade de formar coágulos é a conseqüên- cia mais imediata. Trombocitopenia grave resulta em um padrão típico de sangramento: múltiplas petéquias na pele, freqüentemente mais evidente nas pernas inferiores; pequenas equimoses espalhadas em locais de trauma secundário; sangramento mucoso incluindo sangramento nasal, sangramen- to gengival, sangramento nos tratos gastrointestinal e genitourinário; e san- gramento excessivo após cirurgia. Sangramento gastrointestinal pesado e sangramento do sistema nervoso central (CNS) podem levar a risco de vida.Platelets are important for maintaining homeostasis and for initiating blood clot formation at injury sites. Platelets also release growth factors at the site of clot formation that, among many functions, accelerate the healing process. In patients suffering from low platelet levels (a condition known as thrombocytopenia), the inability to form clots is the most immediate consequence. Severe thrombocytopenia results in a typical bleeding pattern: multiple skin petechiae, often more evident in the lower legs; small bruises scattered at secondary trauma sites; mucosal bleeding including nasal bleeding, gingival bleeding, bleeding in the gastrointestinal and genitourinary tract; and excessive bleeding after surgery. Heavy gastrointestinal bleeding and central nervous system (CNS) bleeding can be life-threatening.

A trombocitopenia se manifesta se uma das etapas no processo trombopoiético sofrer interferência resultando em produção de plaquetas insuficiente, distribuição anormal de plaquetas, destruição aumentada de plaquetas, e/ou consumo aumentado de plaquetas. A diferenciação e prolife- ração de células hematopoiéticas podem sofrer a interferência de causas congênitas ou adquiridas, e essas causas podem variar bastante. Por e- xemplo, a hipoplasia amegacariocítica congênita pode diminuir seletivamen- te a produção de megacariócitos, as células responsáveis pela produção de plaquetas, dessa forma resultando em trombocitopenia. Níveis baixos de plaquetas circulantes também pode ocorrer depois de exposição a um agen- te ou fármaco químico ou tratamento com o mesmo. Esta trombocitopenia induzida por fármaco geralmente é tratada com a suspensão parcial ou total do agente agressor.Thrombocytopenia manifests if one of the steps in the thrombopoietic process is interfered with resulting in insufficient platelet production, abnormal platelet distribution, increased platelet destruction, and / or increased platelet consumption. Hematopoietic cell differentiation and proliferation may be interfered with by congenital or acquired causes, and these causes may vary widely. For example, congenital amegacaryocytic hypoplasia may selectively decrease the production of megakaryocytes, the cells responsible for platelet production, thus resulting in thrombocytopenia. Low levels of circulating platelets may also occur after exposure to or treatment with a chemical agent or drug. This drug-induced thrombocytopenia is usually treated with partial or total suspension of the offending agent.

A trombocitopenia pode ser uma complicação potencialmente fatal de muitas terapias para câncer que incluem irradiação gama, exposição terapêutica à radiação, tratamento com fármaco quimioterapêutico citotóxi- ca, e transplante de medula óssea. O diagnóstico da trombocitopenia em pacientes com câncer geralmente é complicado pelo fato de que tais pacien- tes freqüentemente são tratados com vários fármacos e também podem re- ceber procedimento que intensificam a toxicidade dos fármacos. A tromboci- topenia induzida por fármaco pode portanto limitar os benefícios da quimio- terapia para malignidades potencialmente curáveis impedindo a administra- ção apropriada de fármacos nas doses e no programa ideais, o que pode levar a um aumento na morbidade por câncer ou mesmo na mortalidade. Sumário da InvençãoThrombocytopenia can be a potentially fatal complication of many cancer therapies that include gamma irradiation, therapeutic radiation exposure, cytotoxic chemotherapeutic drug treatment, and bone marrow transplantation. The diagnosis of thrombocytopenia in cancer patients is often complicated by the fact that such patients are often treated with various drugs and may also receive procedures that intensify drug toxicity. Drug-induced thrombocytopenia may therefore limit the benefits of chemotherapy for potentially curable malignancies by preventing proper drug delivery at the optimal dose and schedule, which may lead to increased cancer morbidity or even mortality. . Summary of the Invention

A presente invenção abrange o reconhecimento de que certos agentes quimioterapêuticos, e em particular conjugados de porções direcio- nadoras protéicas com agentes citotóxicos, apresentam riscos particulares em relação ao desenvolvimento de trombocitopenia. A invenção fornece um novo sistema para o controle de pacientes que sofrem de trombocitopenia induzida pela administração de tal agente. Em particular, a presente inven- ção fornece composições farmacêuticas e métodos que são úteis para a prevenção e/ou para o tratamento de trombocitopenia, tal como trombocito- penia induzida por fármaco (por exemplo trombocitopenia induzida por qui- mioterápicos, particularmente quimioterápicos conjugados). As composições farmacêuticas e os métodos de tratamento inventivos também podem ser usados para prevenir ou tratar trombocitopenia associada à lesão hepática (por exemplo, lesão hepática induzida por fármaco). Alternativamente ou adicionalmente, as composições farmacêuticas e os métodos de tratamento inventivos podem ser usados para prevenir ou tratar trombocitopenia asso- ciada à destruição da medula óssea (por exemplo, destruição da medula óssea induzida por fármaco). Mais especificamente, em um aspecto, a presente invenção for- nece métodos para aliviar a trombocitopenia em um indivíduo compreen- dendo uma etapa de: administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de interleucina-11 ao indivíduo sofrendo de trombocitopenia ou suscetível à mesma, onde a trombocitopenia é associada à administração ao indivíduo de um conjugado compreendendo uma porção direcionadora e de um fár- maco citotóxico. A interleucina-11 usada nos métodos da presente invenção pode ser, por exemplo, interleucina-11 humana recombinante.The present invention encompasses the recognition that certain chemotherapeutic agents, and in particular conjugates of protein targeting moieties with cytotoxic agents, present particular risks with respect to the development of thrombocytopenia. The invention provides a novel system for the control of patients suffering from thrombocytopenia induced by administration of such agent. In particular, the present invention provides pharmaceutical compositions and methods that are useful for the prevention and / or treatment of thrombocytopenia, such as drug-induced thrombocytopenia (for example chemotherapy-induced thrombocytopenia, particularly conjugated chemotherapy). . The inventive pharmaceutical compositions and treatment methods may also be used to prevent or treat liver injury-associated thrombocytopenia (e.g., drug-induced liver injury). Alternatively or additionally, the inventive pharmaceutical compositions and treatment methods may be used to prevent or treat thrombocytopenia associated with bone marrow destruction (e.g., drug-induced bone marrow destruction). More specifically, in one aspect, the present invention provides methods for alleviating thrombocytopenia in an individual comprising a step of: administering a therapeutically effective amount of interleukin-11 to the individual suffering from or susceptible to thrombocytopenia, where thrombocytopenia It is associated with the administration to the individual of a conjugate comprising a targeting moiety and a cytotoxic drug. Interleukin-11 used in the methods of the present invention may be, for example, recombinant human interleukin-11.

Em certas modalidades dos métodos da presente invenção, a etapa de administrar compreende administrar uma quantidade terapeutica- mente eficaz de interleucina-11 a um indivíduo que sofre de câncer ou de uma doença cancerosa.In certain embodiments of the methods of the present invention, the administration step comprises administering a therapeutically effective amount of interleukin-11 to an individual suffering from cancer or a cancerous disease.

Em certas modalidades, a porção direcionadora no conjugado cuja administração resulta em trombocitopenia, compreende um anticorpo, tal como um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo an- ti-Lewis Y, um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quaisquer combinações dos mesmos. O fármaco citotóxico no conjugado pode ser uma caliqueamicina, um derivado de caliqueamicina, uma esperamicina, ou um derivado de esperamicina. Por exemplo, o conjugado pode ser um con- jugado de anticorpo anti-CD22-caliqueamicina, um conjugado de anticorpo anti-CD33-caliqueamicina, um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y- caliqueamicina, um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina, ou um conjugado de anticorpo anti-CD30-caliqueamicina.In certain embodiments, the targeting moiety in the conjugate whose administration results in thrombocytopenia comprises an antibody, such as an anti-CD22 antibody, an anti-CD33 antibody, an anti-Lewis Y antibody, an anti-5T4 antibody, an antibody anti-CD30, or any combinations thereof. The cytotoxic drug in the conjugate may be a calicheamicin, a calicheamicin derivative, a speramycin, or a speramycin derivative. For example, the conjugate may be an anti-CD22-calicheamicin antibody conjugate, an anti-CD33-calicheamicin antibody conjugate, an anti-Lewis Y-calicheamicin antibody conjugate, an anti-5T4-calicheamicin antibody conjugate, or an anti-CD30-calicheamicin antibody conjugate.

Em certas modalidades dos métodos da presente invenção, a interleucina-11 é administrada antes da administração do conjugado.In certain embodiments of the methods of the present invention, interleukin-11 is administered prior to administration of the conjugate.

Em certas modalidades, a administração de interleucina-11 de acordo com os métodos da invenção previne, reduz, alivia ou detém a trom- bocitopenia no indivíduo. Trombocitopenia produzida por administração do conjugado pode ser, pelo menos em parte, resultante de destruição da me· dula óssea. Alternativamente ou adicionalmente, trombocitopenia produzida por administração do conjugado pode ser, pelo menos em parte, resultante de lesão hepática. Em tais modalidades, a administração de interleucina-11 pode prevenir, reduzir, aliviar ou deter uma lesão hepática e/ou uma infla- mação associada à lesão hepática no indivíduo.In certain embodiments, administration of interleukin-11 according to the methods of the invention prevents, reduces, alleviates or arrests thrombocytopenia in the subject. Thrombocytopenia produced by administration of the conjugate may be at least in part resulting from bone marrow destruction. Alternatively or additionally, thrombocytopenia produced by administration of the conjugate may be at least in part resulting from liver injury. In such embodiments, administration of interleukin-11 may prevent, reduce, alleviate or deter liver damage and / or liver injury-associated inflammation in the subject.

Em um outro aspecto, a presente invenção fornece composi- ções farmacêuticas compreendendo uma quantidade terapeuticamente efi- caz de interleucina-11, pelo menos um conjugado cuja administração resulta em trombocitopenia, e pelo menos um veículo fisiologicamente aceitável, onde o conjugado compreende uma porção direcionadora e um fármaco citotóxico. Em certas modalidades, a interleucina-11 incluída em uma com- posição farmacêutica da presente invenção compreende interleucina-11 humana recombinante. Em algumas modalidades, interleucina-11, pelo me- nos um conjugado e pelo menos um veículo fisiologicamente aceitável são combinados como uma ou mais preparações para a administração simultâ- nea ou seqüencial da interleucina-11 e do conjugado.In another aspect, the present invention provides pharmaceutical compositions comprising a therapeutically effective amount of interleukin-11, at least one conjugate whose administration results in thrombocytopenia, and at least one physiologically acceptable carrier, wherein the conjugate comprises a targeting moiety. and a cytotoxic drug. In certain embodiments, interleukin-11 included in a pharmaceutical composition of the present invention comprises recombinant human interleukin-11. In some embodiments, interleukin-11, at least one conjugate and at least one physiologically acceptable carrier are combined as one or more preparations for simultaneous or sequential administration of interleukin-11 and the conjugate.

A porção direcionadora no conjugado pode ser um anticorpo (por exemplo, um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticor- po anti-Lewis Y, um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quais- quer combinações dos mesmos), e o fármaco citotóxico pode ser uma cali- queamicina, um derivado de caliqueamicina, uma esperamicina, ou um deri- vado de esperamicina. Por exemplo, o conjugado incluído em uma composi- ção farmacêutica da invenção pode ser um conjugado de anticorpo anti- CD22-caliqueamicina, um conjugado de anticorpo anti-CD33-caliqueamicina, um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y-caliqueamicina, um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina, ou um conjugado de anticorpo anti-CD30- caliqueamicina.The targeting moiety in the conjugate may be an antibody (e.g., an anti-CD22 antibody, an anti-CD33 antibody, an anti-Lewis Y antibody, an anti-5T4 antibody, an anti-CD30 antibody, or any combinations thereof), and the cytotoxic drug may be a calicheamicin, a calicheamicin derivative, a speramycin, or a speramycin derivative. For example, the conjugate included in a pharmaceutical composition of the invention may be an anti-CD22-calicheamicin antibody conjugate, an anti-CD33-calicheamicin antibody conjugate, an anti-Lewis Y-calicheamicin antibody conjugate, a anti-5T4-calicheamicin antibody, or an anti-CD30-calicheamicin antibody conjugate.

Em certas modalidades, a administração de uma composição farmacêutica da presente invenção a um indivíduo previne, reduz ou detém a trombocitopenia no indivíduo. Como mencionado acima, o indivíduo pode sofrer de câncer ou de uma doença cancerosa. Trombocitopenia produzida por administração do conjugado pode ser, pelo menos em parte, resultante de destruição da medula óssea. Alternativamente ou adicionalmente, trom- bocitopenia produzida por administração do conjugado pode ser, pelo me- nos em parte, resultante de lesão hepática. Em tais modalidades, a adminis- tração de uma composição farmacêutica da presente invenção pode preve- nir, reduzir, aliviar ou deter uma lesão hepática e/ou uma inflamação associ- ada à lesão hepática no indivíduo.In certain embodiments, administration of a pharmaceutical composition of the present invention to an individual prevents, reduces or arrests thrombocytopenia in the individual. As mentioned above, the individual may suffer from cancer or a cancerous disease. Thrombocytopenia produced by administration of the conjugate may be at least in part due to bone marrow destruction. Alternatively or additionally, thrombocytopenia produced by administration of the conjugate may be at least in part resulting from liver injury. In such embodiments, administration of a pharmaceutical composition of the present invention may prevent, reduce, alleviate or deter liver damage and / or inflammation associated with liver injury in the subject.

Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um kit com- preendendo: interleucina-11 e pelo menos um conjugado cuja administração resulta em trombocitopenia. O conjugado compreende uma porção direcio- nadora (por exemplo, um anticorpo como descrito acima) e um fármaco cito- tóxico (por exemplo, uma caliqueamicina, um derivado de caliqueamicina, uma esperamicina ou um derivado de esperamicina). Trombocitopenia que resulta da administração do conjugado pode resultar, pelo menos em parte, de lesão hepática. Alternativamente ou adicionalmente, trombocitopenia que resulta da administração do conjugado pode resultar, pelo menos em parte, de destruição da medula óssea.In another aspect, the present invention provides a kit comprising: interleukin-11 and at least one conjugate whose administration results in thrombocytopenia. The conjugate comprises a targeting moiety (e.g., an antibody as described above) and a cytotoxic drug (e.g., a calicheamicin, a calicheamicin derivative, a speramycin or a speramycin derivative). Thrombocytopenia resulting from administration of the conjugate may result, at least in part, from liver damage. Alternatively or additionally, thrombocytopenia resulting from administration of the conjugate may result, at least in part, from bone marrow destruction.

Estes e similares objetivos, vantagens e aspectos da presente invenção tornar-se-ão aparentes para os especialistas na técnica que lerem a descrição detalhada a seguir.These and similar objects, advantages and aspects of the present invention will become apparent to those skilled in the art reading the following detailed description.

Breve Descrição do DesenhoBrief Description of Drawing

A Figura 1 é um gráfico mostrando os efeitos de IL-11 sobre a trombocitopenia induzida por CMC-544 em camundongos nus. Os resulta- dos apresentados nesta Figura foram obtidos da maneira descrita no exem- plo 1. Camundongos nus receberam veículo isolado, CMC-544 (200 μ/kg) isolado, IL-11 isolado, IL-11 (125 μg/kg sc) depois da administração de CMC-544 (200 μ/kg bid), ou IL-11 (250 μ/kg sc) antes e depois da adminis- tração de CMC-544 (200 μ/kg).Figure 1 is a graph showing the effects of IL-11 on CMC-544-induced thrombocytopenia in nude mice. The results shown in this Figure were obtained as described in Example 1. Nude mice received isolated vehicle, isolated CMC-544 (200 µ / kg) isolated, IL-11 isolated, IL-11 (125 µg / kg sc) after administration of CMC-544 (200 μ / kg bid), or IL-11 (250 μ / kg sc) before and after administration of CMC-544 (200 μ / kg sc).

A Figura 2 é um gráfico mostrando os efeitos de IL-11 sobre a trombocitopenia induzida por CMC-544 em camundongos nus. Os resulta- dos apresentados nesta Figura foram obtidos da maneira descrita no exem- plo 1. Camundongos nus receberam veículo isolado, CMC-544 (160 μ/kg) isolado, IL-11 (250 μ/kg sc) depois da administração de CMC-544 (160 μ/kg), ou IL-11 (250 μ/kg sc) antes e depois da administração de CMC-544 (160 μ/kg).Figure 2 is a graph showing the effects of IL-11 on CMC-544-induced thrombocytopenia in nude mice. The results presented in this Figure were obtained as described in Example 1. Nude mice received isolated vehicle, CMC-544 (160 μ / kg sc) isolated, IL-11 (250 μ / kg sc) after CMC administration. -544 (160 μ / kg), or IL-11 (250 μ / kg sc) before and after administration of CMC-544 (160 μ / kg).

A Figura 3 é um gráfico mostrando os efeitos da administração intravenosa de CMC-544 sobre a contagem de plaquetas de macacos cino- molgos. Os resultados apresentados foram obtidos em uma experiência on- de 9 macacos receberam uma dose de CMC-544 a 4,28 mg/m2 (25 μ/kg de caliqueamicina) por semana durante quatro semanas (a administração de CMC-544 está representada por setas no gráfico). As contagens de plaque- tas foram feitas em função do tempo.Figure 3 is a graph showing the effects of intravenous administration of CMC-544 on platelet counts of cynomolgus monkeys. The results presented were obtained in one experiment where 9 monkeys received a dose of CMC-544 at 4.28 mg / m2 (25 μg / kg calicheamicin) per week for four weeks (administration of CMC-544 is represented by arrows on the graph). Platelet counts were made as a function of time.

A Figura 4 é um gráfico mostrando os efeitos de IL-11 sobre a trombocitopenia induzida por CMC-544 em macacos cinomolgos. As con- centrações de plaquetas estão representadas em função do dia do procedi- mento. Os detalhes das experiências apresentados neste gráfico estão des- critos no exemplo 2. Quatro (4) macacos de teste receberam IL-11 (repre- sentados por símbolos escuros no gráfico) e 4 (quatro) macacos de controle receberam o veículo isolado (representado por símbolos vazios no gráfico) seguindo um programa de administração similar.Figure 4 is a graph showing the effects of IL-11 on CMC-544-induced thrombocytopenia in cynomolgus monkeys. Platelet concentrations are plotted against the day of the procedure. Details of the experiments presented in this graph are described in example 2. Four (4) test monkeys received IL-11 (represented by dark symbols on the graph) and 4 (four) control monkeys received the isolated vehicle (represented by empty symbols on the graph) following a similar administration program.

A Figura 5 representa dois gráficos mostrando os efeitos de IL- 11 sobre o aumento de enzimas hepáticas induzido por CMC-544(ALT) em macacos cinomolgos. Detalhes das experiências estão descritos no exemplo 2. Os resultados apresentados na Figura 5(A) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de controle que receberam CMC-544 e o veículo isolado. Os resul- tados apresentados na Figura 5(B) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de teste que receberam CMC-544 e IL-11.Figure 5 represents two graphs showing the effects of IL-11 on CMC-544 (ALT) -induced liver enzyme augmentation in cynomolgus monkeys. Details of the experiments are described in Example 2. Results shown in Figure 5 (A) were obtained for 4 (four) control monkeys that received CMC-544 and the vehicle alone. The results shown in Figure 5 (B) were obtained for 4 (four) test monkeys that received CMC-544 and IL-11.

A Figura 6 apresenta dois gráficos mostrando os efeitos de IL- 11 sobre as contagens aumentadas de neutrófilos do sangue periférico as- sociadas a CMC-544 em macacos cinomolgos. Detalhes das experiências estão descritos no exemplo 2. Os resultados apresentados na Figura 6(A) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de controle que receberam CMC-544 e o veículo isolado. Os resultados apresentados na Figura 6(B) foram obti- dos para 4 (quatro) macacos de teste que receberam CMC-544 e IL-11.Figure 6 presents two graphs showing the effects of IL-11 on increased peripheral blood neutrophil counts associated with CMC-544 in cynomolgus monkeys. Details of the experiments are described in Example 2. Results shown in Figure 6 (A) were obtained for 4 (four) control monkeys that received CMC-544 and the vehicle alone. The results shown in Figure 6 (B) were obtained for 4 (four) test monkeys that received CMC-544 and IL-11.

A Figura 7 apresenta dois gráficos mostrando os efeitos de IL- 11 sobre a albumina sérica diminuída associada a CMC-544 em macacos cinomolgos. Detalhes das experiências estão descritos no exemplo 2. Os resultados apresentados na Figura 7(A) foram obtidos para 4 (quatro) maca- cos de controle que receberam CMC-544 e o veículo isolado. Os resultados apresentados na Figura 7(B) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de teste que receberam CMC-544 and IL-11.Figure 7 presents two graphs showing the effects of IL-11 on CMC-544-associated decreased serum albumin in cynomolgus monkeys. Details of the experiments are described in example 2. The results shown in Figure 7 (A) were obtained for 4 (four) control monkeys that received CMC-544 and the vehicle alone. The results shown in Figure 7 (B) were obtained for 4 (four) test monkeys receiving CMC-544 and IL-11.

A Figura 8 apresenta dois gráficos mostrando os efeitos de IL- 11 sobre a redução de massa de células vermelhas (hemoglobina) associa- da a CMC-544 em macacos cinomolgos. Detalhes das experiências estão descritos no exemplo 2. Os resultados apresentados na Figura 8(A) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de controle que receberam CMC-544 e o veículo isolado. Os resultados apresentados na Figura 8(B) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de teste que receberam CMC-544 e IL-11.Figure 8 presents two graphs showing the effects of IL-11 on CMC-544-associated red cell mass (hemoglobin) reduction in cynomolgus monkeys. Details of the experiments are described in Example 2. Results shown in Figure 8 (A) were obtained for 4 (four) control monkeys that received CMC-544 and the vehicle alone. The results shown in Figure 8 (B) were obtained for 4 (four) test monkeys receiving CMC-544 and IL-11.

A Figura 9 apresenta dois gráficos mostrando os efeitos da ad- ministração de IL-11 em combinação com CMC-544 sobre a fosfatase alca- Iina em macacos cinomolgos. Detalhes das experiências estão descritos no exemplo 2. Os resultados apresentados na Figura 9(A) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de controle que receberam CMC-544 e o veículo isolado. Os resultados apresentados na Figura 9(B) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de teste que receberam CMC-544 and IL-11.Figure 9 presents two graphs showing the effects of IL-11 administration in combination with CMC-544 on alkaline phosphatase in cynomolgus monkeys. Details of the experiments are described in Example 2. Results shown in Figure 9 (A) were obtained for 4 (four) control monkeys that received CMC-544 and the vehicle alone. The results shown in Figure 9 (B) were obtained for 4 (four) test monkeys receiving CMC-544 and IL-11.

A Figura 10 apresenta dois gráficos mostrando os efeitos da administração de PBS (veículo), CMC-544 ou carboplatina sobre os níveis de plaquetas circulantes (Figura 10(A)) e de trombopoietina circulante (TPO) (Figura 10(B)) em camundongos nus. Detalhes das experiências estão des- critos no exemplo 5.Figure 10 presents two graphs showing the effects of PBS (vehicle), CMC-544 or carboplatin administration on circulating platelet (Figure 10 (A)) and circulating thrombopoietin (TPO) levels (Figure 10 (B)) in naked mice. Details of the experiments are described in example 5.

A Figura 11 apresenta um gráfico que permite a comparação dos efeitos da administração de PBS (veículo), CMC-544 ou carboplatina sobre os níveis de plaquetas circulantes e sobre os níveis de trombopoietina circulante em camundongos nus. Detalhes das experiências estão descritos no exemplo 5.Figure 11 provides a graph allowing comparison of the effects of administration of PBS (vehicle), CMC-544 or carboplatin on circulating platelet levels and circulating thrombopoietin levels in nude mice. Details of the experiments are described in example 5.

A Figura 12 apresenta dois gráficos mostrando os efeitos da administração de CMC-544 (Figura 12(A)) e de CMC-544 + NEUMEGA (Fi- gura 12(B)) sobre a contagem de plaquetas (do pré-estudo ao dia 10) em macacos cinomolgos tratados da maneira descrita no segundo estudo do exemplo 2. A Figura 13 representa dois gráficos mostrando os efeitos da administração de CMC-544 (Figura 13(A)) e de CMC-544 + NEUMEGA (Fi- gura 13(B)) sobre AST (do pré-estudo ao dia 14) em macacos cinomolgos tratados da maneira descrita no segundo estudo do exemplo 2.Figure 12 presents two graphs showing the effects of CMC-544 (Figure 12 (A)) and CMC-544 + NEUMEGA (Figure 12 (B)) administration on platelet count (pre-study to day). 10) in cynomolgus monkeys treated as described in the second study of example 2. Figure 13 represents two graphs showing the effects of CMC-544 (Figure 13 (A)) and CMC-544 + NEUMEGA administration (Figure 13). (B)) on AST (from pre-study to day 14) in cynomolgus monkeys treated as described in the second study of example 2.

Descrição Detalhada de Certas Modalidades PreferidasDetailed Description of Certain Preferred Modalities

Como mencionado acima, a presente invenção abrange o reco- nhecimento de que quimioterápicos conjugados podem causar riscos parti- culares para o desenvolvimento de trombocitopenia nos pacientes. Tais con- jugados geralmente incluem uma porção direcionadora protéica ligada a um agente citotóxico. De acordo com a presente invenção, a porção direciona- dora protéica pode vetorizar o quimioterápico conjugado para metabolismo preferencial no fígado, onde o agente citotóxico pode induzir uma lesão que resulta em trombocitopenia ou que exacerba a mesma. Conjugados conten- do anticorpos ou outras proteínas bastante glicosiladas podem ser particu- larmente problemáticos neste sentido.As mentioned above, the present invention encompasses the recognition that conjugated chemotherapies may cause particular risks for the development of thrombocytopenia in patients. Such conjugates generally include a protein targeting moiety linked to a cytotoxic agent. In accordance with the present invention, the protein targeting moiety may vectorize the conjugate chemotherapy for preferential metabolism in the liver, where the cytotoxic agent may induce a lesion that results in or exacerbates thrombocytopenia. Conjugates containing antibodies or other highly glycosylated proteins may be particularly problematic in this regard.

A presente invenção envolve a descoberta de que a administra- ção de interleucina-11 pode bloquear a diminuição induzida por fármaco nas plaquetas circulantes no sangue periférico (isto é, trombocitopenia). Além disso, foi verificado que a administração de IL-11 bloqueia a lesão hepática induzida por fármaco, e limita a inflamação associada à lesão hepática. Por conseguinte, a presente invenção fornece composições farmacêuticas e mé- todos para a prevenção e/ou o tratamento de trombocitopenia induzida por fármaco, tal como aquele resultante de lesão hepática e/ou de destruição da medula óssea.The present invention involves the discovery that administration of interleukin-11 may block drug-induced decrease in circulating platelets in peripheral blood (i.e. thrombocytopenia). In addition, administration of IL-11 has been found to block drug-induced liver injury and limit inflammation associated with liver injury. Accordingly, the present invention provides pharmaceutical compositions and methods for the prevention and / or treatment of drug-induced thrombocytopenia, such as that resulting from liver injury and / or bone marrow destruction.

No contexto da presente invenção, um conjugado compreende uma porção direcionadora e um fármaco citotóxico. Conjugados cuja admi- nistração resulta em trombocitopenia incluem qualquer um de uma varieda- de de conjugados de fármacos conhecidos ou suspeitos de causar, ocasio- nar, ou estimular a ocorrência de trombocitopenia ou de estarem associados a um ou mais sintomas de trombocitopenia. De acordo com a presente in- venção, a administração de IL-11 antes, depois, ou concomitante com a administração de um ou mais destes conjugados alivia a trombocitopenia. Especificamente, tal administração previne, reduz, retarda, trata ou detém a trombocitopenia. Como será observado pelo versado na técnica, a adminis- tração de IL-11 pode prevenir, reduzir ou deter a trombocitopenia prevenin- do, reduzindo ou detendo a destruição ou o consumo aumentado de plaque- tas e/ou prevenindo, reduzindo ou detendo a produção diminuída de plaque- tas pela medula óssea.In the context of the present invention, a conjugate comprises a targeting moiety and a cytotoxic drug. Conjugates whose administration results in thrombocytopenia include any of a variety of drug conjugates known or suspected of causing, causing, or stimulating the occurrence of thrombocytopenia or being associated with one or more symptoms of thrombocytopenia. According to the present invention, administration of IL-11 before, after, or concomitantly with administration of one or more of these conjugates alleviates thrombocytopenia. Specifically, such administration prevents, reduces, delays, treats or arrests thrombocytopenia. As will be appreciated by those skilled in the art, administration of IL-11 can prevent, reduce or arrest by preventing thrombocytopenia by reducing or stopping the destruction or increased consumption of platelets and / or by preventing, reducing or stopping decreased production of platelets by the bone marrow.

I. Trombocitopenia resultante da administração de conjuga- dosI. Thrombocytopenia resulting from administration of conjugates

No contexto da presente invenção, trombocitopenia, em um sen- tido amplo, refere-se a uma condição fisiológica nos mamíferos geralmente caracterizada por uma contagem anormalmente baixa das plaquetas san- güíneas, tipicamente resultante em fácil contusão e sangramento anormal dos capilares. Nos seres humanos, a contagem de plaquetas no sangue cir- culante normalmente varia entre 150 e 400 milhões por mililitro de sangue (ou 150 a 400 x 109/l).In the context of the present invention, thrombocytopenia, in a broad sense, refers to a physiological condition in mammals generally characterized by an abnormally low blood platelet count, typically resulting in easy bruising and abnormal capillary bleeding. In humans, the circulating blood platelet count usually ranges from 150 to 400 million per milliliter of blood (or 150 to 400 x 109 / l).

As plaquetas são produzidas na medula óssea por células gran- des chamadas megacariócitos por meio de um processo chamado endomi- tose (Y. Nagata et a!., J. Cell Biol., 1997, 139: 449-457; L. Roy et ai, Blood, 2001, 97: 2238-2247). Em resposta a uma contagem diminuída de plaquetas circulantes, a taxa do processo endomitótico aumenta, e o número de me- gacariócitos na medula óssea pode aumentar até 3 vezes (L.A. Harker, J. Clin. Invest., 1968, 47: 458-465). Este mecanismos, por sua vez, causa a produção e a liberação na circulação de plaquetas adicionais. Ao contrário, em resposta a uma contagem elevada de plaquetas circulantes, a taxa en- domitótica diminui, e o número de megacariócitos na medula óssea pode diminuir 50%. O mecanismo de retroalimentação fisiológico exato pelo qual a massa de plaquetas circulantes regula a taxa endomitótica e número de megacariócitos na medula óssea ainda não é totalmente conhecido. Entre- tanto, acredita-se que o principal fator circulante envolvido no circuito de re- troalimentação, e portanto na produção de plaquetas, é a trombopoietina (K. Kaushansky et ai, Proc. Natl. Acad. Sei. EUA, 1995, 92: 3234-3238; K. Kaushansky, Thromb. Haemost., 1995, 74: 521-525), que é produzido por hepatócitos no fígado (F.J. de Sauvage et ai, Nature1 1994, 369; 533-538; R. Sungaran et ai, Blood1 1997, 89: 101-107; S. Nomura et ai, Exp. Hema- tol., 1997, 25: 565-572). Portanto, no contexto da presente invenção, a trombocitopenia pode resultar de destruição da medula óssea, lesão hepáti- ca, ou uma combinação das duas.Platelets are produced in the bone marrow by large cells called megakaryocytes by a process called endomytosis (Y. Nagata et al., J. Cell Biol., 1997, 139: 449-457; L. Roy et al., Blood, 2001, 97: 2238-2247). In response to a decreased circulating platelet count, the rate of the endomitotic process increases, and the number of bone marrow megakaryocytes can increase up to 3-fold (LA Harker, J. Clin. Invest., 1968, 47: 458-465. ). These mechanisms, in turn, cause the production and release in the circulation of additional platelets. In contrast, in response to a high circulating platelet count, the endomitotic rate decreases, and the number of megakaryocytes in the bone marrow may decrease by 50%. The exact physiological feedback mechanism by which circulating platelet mass regulates endomitotic rate and number of megakaryocytes in the bone marrow is not yet fully understood. However, it is believed that the major circulating factor involved in the feedback loop, and therefore in platelet production, is thrombopoietin (K. Kaushansky et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, 92). : 3234-3238; K. Kaushansky, Thromb. Haemost., 1995, 74: 521-525), which is produced by hepatocytes in the liver (FJ from Sauvage et al., Nature 1994, 369; 533-538; R. Sungaran et. al., Blood 1997, 89: 101-107; S. Nomura et al., Exp. Hematol., 1997, 25: 565-572). Therefore, in the context of the present invention, thrombocytopenia may result from bone marrow destruction, liver damage, or a combination of the two.

Em algumas modalidades, a administração de um conjugado resulta, pelo menos em parte, em lesão hepática, que finalmente resulta em trombocitopenia. Conjugados cuja administração resulta em lesão hepática geralmente incluem os agentes citotóxicos conjugados cuja administração causa, ocasiona ou estimula uma lesão hepática ou está associada a um ou mais sintomas de lesão hepática. Em certas modalidades, tais conjugados possuem uma porção direcionadora que é ou inclui uma proteína; em algu- mas modalidades a porção direcionadora é um ou inclui um anticorpo.In some embodiments, administration of a conjugate results, at least in part, in liver injury, which ultimately results in thrombocytopenia. Conjugates whose administration results in liver damage generally include conjugated cytotoxic agents whose administration causes, causes or stimulates a liver injury or is associated with one or more symptoms of liver injury. In certain embodiments, such conjugates have a targeting moiety that is or includes a protein; in some embodiments the targeting moiety is one or includes an antibody.

Lesão hepática de acordo com a presente invenção inclui não apenas degeneração ou necrose das células parenquimatosas do fígado (hepatócitos) (por exemplo, que resulta de lesão ou dano causado por um certo fator), mas também fenômenos indesejáveis causados por reação bio- lógica ao dano ou lesão, tais como mobilização, infiltração, ativação das cé- lulas de Kupffer, leucócitos, e similares, inchaço do fígado, fibrose do tecido hepático etc., que podem ocorrer isolados ou em combinação. Lesão, defei- to ou disfunção hepática que totalmente ou menos que totalmente causada, ocasionada ou estimulada pela administração de um ou mais conjugados é considerada pelo menos em parte induzida por fármaco. Por conseguinte, antes da administração de um ou mais conjugados, o indivíduo pode ter um fígado saudável (isto é, um fígado que não apresenta sinais detectáveis de lesão, defeito, dano ou disfunção) ou, alternativamente, o indivíduo pode apresentar um nível existente de lesão/dano/defeito/disfunção hepática (por exemplo, devido a doenças, vírus, produtos químicos, fármacos, ou outros fatores).Liver injury in accordance with the present invention includes not only degeneration or necrosis of liver parenchymal cells (hepatocytes) (eg resulting from injury or damage caused by a certain factor), but also undesirable phenomena caused by biological reaction to the liver. damage or injury, such as mobilization, infiltration, activation of Kupffer cells, leukocytes, and the like, liver swelling, liver tissue fibrosis, etc., which may occur alone or in combination. Liver injury, defect or dysfunction that wholly or less than wholly caused, caused or stimulated by the administration of one or more conjugates is considered at least in part drug induced. Therefore, prior to administration of one or more conjugates, the individual may have a healthy liver (ie, a liver that shows no detectable signs of injury, defect, damage or dysfunction) or, alternatively, the individual may have an existing level. liver injury / damage / defect / dysfunction (eg due to disease, viruses, chemicals, drugs, or other factors).

Em certas modalidades, a administração de IL-11 antes, depois, ou concomitante com a administração de um ou mais conjugados previne, reduz, retarda, trata ou detém a trombocitopenia resultante, pelo menos em parte, de lesão hepática induzida pelo conjugado.In certain embodiments, administration of IL-11 prior to, or concomitantly with administration of one or more conjugates prevents, reduces, delays, treats or arrests thrombocytopenia resulting at least in part from conjugate-induced liver injury.

Em algumas modalidades, a administração de um conjugado resulta, alternativamente (ou em alguns casos adicionalmente), pelo menos em parte, em destruição da medula óssea, o que produz trombocitopenia. Conjugados cuja administração resulta em destruição da medula óssea in- cluem os agentes citotóxicos conjugados cuja administração causa, ocasio- na, estimula a destruição da medula óssea ou está associada a um ou mais sintomas de destruição da medula óssea. Destruição da medula óssea (isto é, lesão, defeito ou disfunção da medula óssea) inclui qualquer condição afetando a medula óssea que resulta em produção de plaquetas anormal- mente baixa.In some embodiments, administration of a conjugate results alternatively (or in some cases additionally) at least in part in destruction of the bone marrow, which produces thrombocytopenia. Conjugates whose administration results in bone marrow destruction include conjugated cytotoxic agents whose administration causes, on occasion, stimulates bone marrow destruction or is associated with one or more symptoms of bone marrow destruction. Bone marrow destruction (ie, bone marrow injury, defect or dysfunction) includes any condition affecting the bone marrow that results in abnormally low platelet production.

De acordo com a presente invenção, a administração de IL-11 antes, depois, ou concomitante com a administração de um ou mais conju- gados previne, reduz, retarda, trata ou detém a trombocitopenia resultante, pelo menos em parte, de destruição da medula óssea. Em certas modalida- des, a administração de IL-11 de acordo com a presente invenção previne, reduz ou detém a produção diminuída de plaquetas devido à destruição da medula óssea. Antes da administração do conjugado que induz destruição da medula óssea, o indivíduo pode ter uma medula óssea saudável (isto é, uma medula óssea que não apresenta sinais detectáveis de destruição, le- são, defeito ou disfunção) ou alternativamente, o indivíduo pode apresentar um nível existente de destruição/defeito/disfunção da medula óssea (por exemplo, devido a um câncer, tal como leucemia ou linfoma; infecção viral ou anemia aplásica ou causada por produtos químicos tóxicos, radioterapia ou quimioterapia anterior).According to the present invention, administration of IL-11 prior to, or concomitantly with the administration of one or more conjugates prevents, reduces, delays, treats or arrests thrombocytopenia resulting at least in part from the destruction of bone marrow. In certain embodiments, administration of IL-11 in accordance with the present invention prevents, reduces or arrests decreased platelet production due to bone marrow destruction. Prior to administration of the bone marrow destruction-inducing conjugate, the individual may have a healthy bone marrow (ie, a bone marrow that shows no detectable signs of destruction, injury, defect or dysfunction) or alternatively, the individual may have an existing level of bone marrow destruction / defect / dysfunction (for example, due to cancer, such as leukemia or lymphoma; viral infection or aplastic anemia or caused by toxic chemicals, radiotherapy, or previous chemotherapy).

II. ConjugadosII. Conjugates

Um conjugado geralmente é uma molécula resultante da ligação de pelo menos duas outras moléculas. A ligação entre as duas moléculas pode ser covalente ou não-covalente. Como já mencionado acima, um con- jugado nesta invenção compreende uma porção direcionadora e um fárma- co citotóxico.A conjugate is usually a molecule resulting from the binding of at least two other molecules. The bond between the two molecules may be covalent or non-covalent. As already mentioned above, a conjugate in this invention comprises a targeting moiety and a cytotoxic drug.

Porções direcionadoras são entidades que possuem algum grau de atração para um alvo de interesse quando compreendida em um conju- gado. Uma porção direcionadora normalmente apresenta grande afinidade e/ou especificidade para o alvo, isto é, ela especificamente e/ou eficiente- mente reconhece, interage com, se liga a, ou marca o alvo nas condições ou circunstâncias de sua exposição ao alvo. Um alvo pode ser um tecido ou órgão específico no corpo, um tipo específico de células ou um componente celular específico (por exemplo, receptor ou antígeno de superfície celular). As porções direcionadoras podem ser desejavelmente entidades atóxicas estáveis que retêm suas propriedades em condições in vitro e/ou in vivo. A interação entre uma porção direcionadora e um alvo pode ser covalente ou não-covalente. Mais freqüentemente, a interação entre uma porção direcio- nadora e um alvo é não-covalente. Exemplos de interações não-covalentes incluem, porém sem limitação, interações hidrófobas, interações eletrostáti- cas, interações dipolares, interações de van der Waals, e ligação de hidro- gênio. Independente da natureza da interação, a ligação entre um alvo e uma porção direcionadora em um conjugado é de preferência seletiva, es- pecífica, e suficientemente forte para permitir que o fármaco desempenhe seu papel (por exemplo, exercer sua atividade anticâncer se o fármaco cito- tóxico for um quimioterápico).Steering portions are entities that have some degree of attraction to a target of interest when understood in a conjunct. A targeting moiety usually exhibits high affinity and / or specificity to the target, that is, it specifically and / or efficiently recognizes, interacts with, binds to, or marks the target under the conditions or circumstances of its exposure to the target. A target may be a specific body tissue or organ, a specific cell type, or a specific cellular component (e.g., cell surface receptor or antigen). The targeting moieties may desirably be stable non-toxic entities that retain their properties under in vitro and / or in vivo conditions. The interaction between a targeting moiety and a target may be covalent or noncovalent. More often, the interaction between a directing moiety and a target is non-covalent. Examples of non-covalent interactions include, but are not limited to, hydrophobic interactions, electrostatic interactions, dipolar interactions, van der Waals interactions, and hydrogen bonding. Regardless of the nature of the interaction, the binding between a target and a targeting moiety in a conjugate is preferably selective, specific, and sufficiently strong to allow the drug to play its role (for example, exert its anticancer activity if the cytotoxic drug is used). - toxic for a chemotherapy).

Em um conjugado, um fármaco citotóxico pode ser associada a porção direcionadora em qualquer uma de várias maneiras. Em muitas mo- dalidades, o fármaco é covalentemente ligado à porção direcionadora. Co- mo será observado pelos especialistas na técnica, o fármaco e a porção di- recionadora podem ser ligados um ao outro seja diretamente ou indireta- mente (por exemplo, através de um ligador).In a conjugate, a cytotoxic drug may be associated with the targeting moiety in any of several ways. In many instances, the drug is covalently attached to the targeting moiety. As will be appreciated by those skilled in the art, the drug and the guiding moiety may be attached to each other either directly or indirectly (e.g. via a linker).

Em certas modalidades, o fármaco citotóxico e a porção direcio- nadora são ligados direta e covalentemente um ao outro. A ligação covalen- te direta pode se dar através de uma ligação tal como uma ligação amida, éster, carbono-carbono, dissulfeto, carbamato, éter, tioéter, uréia, amina, ou carbonato. A ligação covalente pode ser obtida aproveitando-se os grupos funcionais presentes no fármaco e na porção direcionadora. Grupos funcio- nais adequados que podem ser usados para ligar as duas porções incluem, porém sem limitação, aminas, anidridos, grupos hidróxi, grupos carbóxi, e tióis. Um agente ativador, tal como uma carbodiimida, pode ser usado para formar uma ligação direta. Uma ampla gama de agentes ativadores são co- nhecidos na técnica e são adequados para ligar um fármaco e uma porção direcionadora.In certain embodiments, the cytotoxic drug and the targeting moiety are directly and covalently linked to one another. Direct covalent bonding can be through a bond such as an amide, ester, carbon-carbon, disulfide, carbamate, ether, thioether, urea, amine, or carbonate bond. Covalent bonding can be obtained by taking advantage of the functional groups present in the drug and in the targeting moiety. Suitable functional groups which may be used to bond the two moieties include, but are not limited to, amines, anhydrides, hydroxy groups, carboxy groups, and thiols. An activating agent, such as a carbodiimide, may be used to form a direct bond. A wide range of activating agents are known in the art and are suitable for binding a drug and a targeting moiety.

Em outras modalidades, o fármaco citotóxico e a porção dire- cionadora são ligadas indireta e covalentemente uma à outra por meio de um grupo ligador. Isto pode ser efetuado usando-se qualquer número de agentes bifuncionais adequados bem-conhecidos na técnicatura, que inclu- em Iigadores homofuncionais e heterofuncionais (vide, por exemplo, Pierce Catalog and Handbook). O uso de um ligador bifuncional difere do uso de um agente ativador pelo fato de o primeiro resultar em uma porção Iigadora estar presente no conjugado resultante, ao passo que o último resulta em um acoplamento direto entre as duas porções envolvidas na reação. O pa- pel do ligador bifuncional pode ser o de permitir a reação entre duas porções de outra forma inertes. Alternativamente ou adicionalmente, o ligador bifun- cional, que vem a fazer parte do produto reacional, pode ser selecionado de modo a conferir algum grau de flexibilidade conformacional ao conjugado. Alternativamente ou adicionalmente, o ligador bifuncional pode ser selecio- nado de modo que a ligação formada entre o fármaco e a porção direciona- dora sejam hidrolisáveis (para exemplos de tais ligadores, vide por exemplo as Patentes US NoS 5.773.001, 5.739.116 e 5.877.296). Estes ligadores são de preferência usados quando se observa uma atividade mais alta do fár- maco depois da hidróiise da porção direcionadora. Mecanismos exemplifica- tivos pelos quais um fármaco é clivado a partir da porção direcionadora (por exemplo, anticorpo) incluem hidróiise no pH ácido dos Iisossomas (hidrazo- nas, acetais, e amidas similares a cis-aconitatos), clivagem peptídica por enzimas lisossômicas (as captepsinas e similares enzimas lisossômicas), e redução de dissulfetos.In other embodiments, the cytotoxic drug and the targeting moiety are indirectly and covalently linked to each other via a linker group. This can be accomplished using any number of suitable bifunctional agents well known in the art, including homofunctional and heterofunctional linkers (see, for example, Pierce Catalog and Handbook). The use of a bifunctional linker differs from the use of an activating agent in that the former results in a linker moiety being present in the resulting conjugate, whereas the latter results in a direct coupling between the two moieties involved in the reaction. The role of the bifunctional connector may be to allow reaction between two otherwise inert portions. Alternatively or additionally, the bifunctional linker, which forms part of the reaction product, may be selected to impart some degree of conformational flexibility to the conjugate. Alternatively or additionally, the bifunctional linker may be selected such that the bond formed between the drug and the targeting moiety is hydrolysable (for examples of such linkers, see for example US Patent Nos. 5,773,001, 5,739,116 and 5,877,296). These binders are preferably used when higher drug activity is observed after the hydrolysis of the targeting moiety. Exemplary mechanisms by which a drug is cleaved from the targeting moiety (eg, antibody) include hydrolysis at acid pH of lysosomes (hydrazones, acetals, and cis -conmitate-like amides), peptide cleavage by lysosomal enzymes ( captepsins and similar lysosomal enzymes), and disulfide reduction.

Um exemplo de um conjugado adequado reside na conjugação de hidrazidas e similares nucleófilos aos aldeídos gerados por oxidação dos carboidratos que ocorrem naturalmente em anticorpos. Conjugados conten- do hidrazona podem ser feitos com grupos carbonila introduzidos que pro- porcionam as propriedades desejadas de liberação de fármaco. Os conju- gados também podem ser feitos com um Iigador que possui um dissulfeto em uma extremidade, uma cadeia alquila no meio, e um derivado de hidra- zina na outra extremidade. As antraciclinas constituem um exemplo de cito- toxinas que podem ser conjugadas a anticorpos usando esta tecnologia.An example of a suitable conjugate is the conjugation of hydrazides and similar nucleophiles to the oxidation-generated aldehydes naturally occurring in antibodies. Conjugates containing hydrazone can be made with introduced carbonyl groups that provide the desired drug release properties. Conjugates may also be made with a linker having a disulfide at one end, an alkyl chain at the middle, and a hydrazine derivative at the other end. Anthracyclines are an example of cytotoxins that can be conjugated to antibodies using this technology.

Ligadores contendo grupos funcionais diferentes de hidrazonas têm o potencial de ser clivados no meio ácido dos lisossomas. Por exemplo, os conjugados podem ser feitos de Iigadores reativos com tiol que contêm um sítio diferente de uma hidrazona que é clivável intracelularmente, tais como ésteres, amidas, e acetais/cetais. Camptotecina é um agente citotóxi- co que pode ser conjugado usando esses ligadores. Cetais feitos a partir de uma cetona de 5 a 7 membros no anel e que tem um dos átomos de oxigê- nio ligado ao agente citotóxico e o outro a um Iigador para ligação a um anti- corpo também podem ser usados. As antraciclinas constituem mais uma vez um exemplos de um agente citotóxico adequado para uso com esses ligado- res.Linkers containing functional groups other than hydrazones have the potential to be cleaved in the acidic environment of lysosomes. For example, conjugates may be made of thiol-reactive linkers that contain a site other than a hydrazone that is intracellularly cleavable, such as esters, amides, and acetals / ketals. Camptothecin is a cytotoxic agent that can be conjugated using these linkers. Ketals made from a 5- to 7-membered ketone in the ring and which has one oxygen atom attached to the cytotoxic agent and the other to a linker for antibody binding can also be used. Anthracyclines are once again an example of a cytotoxic agent suitable for use with such binders.

Um outro exemplo de uma classe de ligadores sensíveis ao pH são os cis-aconitatos, que possuem um grupo ácido carboxílico justaposto a um grupo amida. O ácido carboxílico acelera a hidrólise de amida nos lisos- somas ácidos. Ligadores que obtêm um tipo similar de aceleração da taxa de hidrólise com vários outros tipos de estruturas também podem ser usa- dos. Os maitansinóides constituem um exemplo de citotoxina que podem ser usados com ligadores ligados em C-9.Another example of a class of pH-sensitive binders is cisconitates, which have a carboxylic acid group juxtaposed with an amide group. Carboxylic acid accelerates amide hydrolysis in acid lysosomes. Bonders that achieve a similar type of hydrolysis rate acceleration with various other types of structures may also be used. Maytansinoids are an example of cytotoxin that can be used with C-9 linked linkers.

Um outro método de liberação potencial para conjugados de fármacos é a hidrólise enzimática de peptídios pelas enzimas lisossômicas. Em um exemplo, um peptídio é ligado por meio de uma ligação amida ao álcool para-aminobenzílico e em seguida um carbamato ou carbonato é feito entre o álcool benzílico e o agente citotóxico. Clivagem do peptídio leva ao colapso, ou auto-imolação, do aminobenzil carbamato ou carbonato. Os a- gentes citotóxicos exemplificados com esta estratégia incluem antraciclinas, taxanos, mitomicina C, e as auristatinas. Em um exemplo, um fenol também pode ser liberado por colapso do Iigador no lugar do carbamato. Em uma outra variação, redução de dissulfeto é usada para iniciar o colapso de um para-mercaptobenzil carbamato ou carbonato.Another potential release method for drug conjugates is the enzymatic hydrolysis of peptides by lysosomal enzymes. In one example, a peptide is linked via an amide bond to para-aminobenzyl alcohol and then a carbamate or carbonate is made between the benzyl alcohol and the cytotoxic agent. Peptide cleavage leads to the collapse, or self-immolation, of aminobenzyl carbamate or carbonate. Cytotoxic agents exemplified with this strategy include anthracyclines, taxanes, mitomycin C, and auristatins. In one example, a phenol may also be released by collapse of the linker in place of carbamate. In another variation, disulfide reduction is used to initiate the collapse of a para-mercaptobenzyl carbamate or carbonate.

Muitos agentes citotóxicos têm pouca, quando têm, solubilidade em água e isso pode limitar a carga de fármaco no conjugado devido à a- gregação ao conjugado. Uma abordagem para superar este problema é adi- cionar grupos solubilizantes ao ligador. Podem ser usados conjugados feitos com um ligador consistindo em PEG e um dipeptídio, inclusive aqueles ten- do um diácido de PEG1 um ácido de tiol, ou um ácido de maleimida ligado à porção direcionadora (por exemplo, anticorpo), um espaçador dipeptídico, e uma amida ligada à amina de uma antraciclina ou um análogo de duocarmi- cina. Um outro exemplo são conjugados que são feitos com um dissulfeto ligador contendo PEG ligado a um agente citotóxico e amida ligada a um anticorpo. Abordagens que incorporam grupos PEG podem ser vantajosas para superar a agregação e os limites na carga de fármaco. A. Anticorpos direcionadoresMany cytotoxic agents have little, if any, water solubility and this may limit the drug load on the conjugate due to conjugate aggregation. One approach to overcoming this problem is to add solubilizing groups to the linker. Conjugates made with a linker consisting of PEG and a dipeptide may be used, including those having a PEG1 diacid, a thiol acid, or a maleimide acid attached to the targeting moiety (e.g., antibody), a dipeptide spacer, and an amine linked amide of an anthracycline or a duocarmine analogue. Another example is conjugates which are made with a PEG-containing linker disulfide linked to a cytotoxic agent and amide bound to an antibody. Approaches incorporating PEG groups may be advantageous in overcoming aggregation and limits on drug loading. A. Targeting Antibodies

Em certas modalidades, o conjugado compreende um anticorpo como porção direcionadora. Estes tipos de conjugados geralmente são chamados de imunoconjugados, com os conjugados que têm um radiosóto- po como o fármaco sendo chamados de radioimunoconjugados e aqueles tendo um agente quimioterapêutico como o fármaco sendo chamados de quimioimunoconjugados. De um modo geral, um anticorpo com esta finali- dade pode ser qualquer imunoglobulina (isto é, uma molécula de imunoglo- bulina intata, uma porção ativa de uma molécula de imunoglobulina etc.) que se liga a um epítopo específico. O termo abrange anticorpos monoclonais e composições de anticorpo com especificidade poliepitópica (isto é, anticor- pos policlonais).In certain embodiments, the conjugate comprises an antibody as the targeting moiety. These types of conjugates are generally called immunoconjugates, with conjugates having a radiosotope as the drug being called radioimmunoconjugates and those having a chemotherapeutic agent such as the drug being called chemoimmunoconjugates. Generally, an antibody for this purpose may be any immunoglobulin (i.e. an intact immunoglobulin molecule, an active portion of an immunoglobulin molecule, etc.) that binds to a specific epitope. The term encompasses monoclonal antibodies and antibody compositions with polyepitopic specificity (i.e. polyclonal antibodies).

Os anticorpos direcionadores podem ser provenientes de prati- camente qualquer espécie de mamífero (por exemplo, camundongo, ser humano, primata, cachorro etc.) e podem ser produzidos por vários métodos bem-conhecidos na técnicatura (por exemplo, anticorpos murinos via hibri- domas, anticorpos humanos via hibridomas de camundongos transgênicos etc.).Targeting antibodies can be derived from virtually any mammalian species (e.g., mouse, human, primate, dog, etc.) and can be produced by various methods well known in the art (e.g., murine antibodies via hybridization). human antibodies via transgenic mouse hybridomas, etc.).

Exemplos de anticorpos que podem ser usados na formação de conjugados úteis na presente invenção incluem anticorpos monoclonais (mAbs), por exemplo, anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anti- corpos primatizados, anticorpos revestidos, anticorpos humanos e fragmen- tos biologicamente ativos dos mesmos. Como já mencionado acima, o termo anticorpo é usado amplamente para indicar tanto moléculas de anticorpo quanto uma variedade de moléculas derivadas de anticorpo. Tais moléculas derivadas de anticorpo geralmente compreendem pelo menos uma região determinante de complementaridade (CDR) de uma região variável de ca- deia pesada ou de cadeia leve, incluindo moléculas tais como fragmentos Fab, fragmentos F(ab')2, fragmentos Fd1 fragmentos Fabc, anticorpos Sc (anticorpos de cadeia simples), diacorpos, cadeias simples leves de anticor- po individual, cadeias pesadas de anticorpo individual, fusões quiméricas entre cadeias de anticorpo e similares moléculas, e similares. Anticorpos miméticos com afinidade de ligação para um antígeno mas não tendo uma ou mais CDRs tradicionais também podem ser usados na formação de con- jugados úteis na presente invenção.Examples of antibodies that may be used in the formation of conjugates useful in the present invention include monoclonal antibodies (mAbs), for example, chimeric antibodies, humanized antibodies, primatized antibodies, coated antibodies, human antibodies, and biologically active fragments thereof. As already mentioned above, the term antibody is used broadly to denote both antibody molecules and a variety of antibody derived molecules. Such antibody-derived molecules generally comprise at least one complementarity determining region (CDR) of a heavy chain or light chain variable region, including molecules such as Fab fragments, F (ab ') 2 fragments, Fd1 fragments Fabc fragments , Sc antibodies (single chain antibodies), diabodies, single antibody light single chains, individual antibody heavy chains, chimeric fusions between antibody chains and the like molecules, and the like. Binding affinity mimetic antibodies to an antigen but lacking one or more traditional CDRs may also be used in the formation of conjugates useful in the present invention.

Em certas modalidades, um anticorpo direcionador de um con- jugado é direcionado contra um ou mais antígenos da superfície celular ex- pressos em células e/ou tecidos alvo em distúrbios proliferativos tal como câncer.In certain embodiments, a targeting antibody of a conjugate is directed against one or more cell surface antigens expressed on target cells and / or tissues in proliferative disorders such as cancer.

Exemplos de anticorpos específicos direcionados contra antíge- nos da superfície celular incluem, sem limitação, anticorpos contra o antíge- no CD22, que é superexpresso na maioria dos Iinfomas de células B; G5/44, uma forma humanizada de um anticorpo monoclonal anti-CD22 murino; an- ticorpos contra o antígeno CD33 da superfície celular, que é predominante em certos tumores mielóides humanos, especialmente leucemia mielóide aguda (vide, por exemplo, os Pedidos de Patentes US NoS 2004-0192900 e 2004-0082764, cada um deles aqui incorporado em sua integridade a título de referência); hP67.6, uma forma humanizada do anticorpo murino anti- CD33 (vide Patente US N0 5.773.001, que está aqui incorporada em sua integridade a título de referência); um anticorpo contra o antígeno PEM en- contrado em muitos tumores de origem epitelial designados mP67.6 (vide, por exemplo, I.D. Bernstein et aí., J. Clin. Invest., 1987, 79: 1153-1159 e I.D. Bernstein et al., J. Immunol., 1992, 128: 867-881, cada um deles está aqui incorporado em sua integridade a título de referência), e um anticorpo hu- manizado contra o antígeno do carboidrato de Lewis Y superexpresso em muitos tumores sólidos e designado hu3S193 (vide, por exemplo, a Patente US Nº 6.310.185, que aqui incorporada em sua integridade a título de refe- rência).Examples of specific antibodies directed against cell surface antigens include, without limitation, antibodies against the CD22 antigen, which is overexpressed in most B cell lymphomas; G5 / 44, a humanized form of a murine anti-CD22 monoclonal antibody; antibodies against cell surface CD33 antigen, which is prevalent in certain human myeloid tumors, especially acute myeloid leukemia (see, for example, US Patent Nos. 2004-0192900 and 2004-0082764, each incorporated herein into its integrity by reference); hP67.6, a humanized form of the anti-CD33 murine antibody (see US Patent No. 5,773,001, which is incorporated herein by reference in its entirety); an antibody against the PEM antigen found in many tumors of epithelial origin designated mP67.6 (see, for example, ID Bernstein et al., J. Clin. Invest., 1987, 79: 1153-1159 and ID Bernstein et al. ., J. Immunol., 1992, 128: 867-881, each of which is incorporated herein by reference in its entirety), and a humanized antibody against the Lewis Y carbohydrate antigen overexpressed in many solid tumors and designated hu3S193 (see, for example, US Patent No. 6,310,185, which is incorporated herein by reference in its entirety).

Outros anticorpos adequados incluem anticorpos direcionados contra o antígeno oncofetal 5T4. O antígeno 5T4 é uma glicoproteína trans- membranosa alta glicosilada de 72 kDa compreendendo um núcleo não gli- cosalisado de 42 kDa (Hole et ai, Br. J. Câncer, 1988, 57: 239-246; Hole et al., Int. J. Câncer, 1990, 45: 179-184; WO 89/07947; Patente US Nº 5.869.053, cada um deles aqui incorporado em sua integridade a título de referência). O 5T4 inclui um domínio extracelular caracterizado por duas re- petições ricas em Ieucina (LRRs) e uma região hidrófila intermediária, que é um antígeno acessível para terapia direcionada (Myers et al., J. Biol. Chem., 1994, 269: 9319-9324). Outros anticorpos adequados incluem anticorpos direcionados contra o antígeno CD30, que é superexpresso em uma varie- dade de malignidades hematológicas. O CD30 é um alvo atraente para tera- pia de câncer porque ele tem expressão mínima em tecidos normais. SGN- 30 é um exemplo de um anticorpo anti-CD30 que mostrou induzir atividade anticâncer direta em células tumorosas expressando CD30 (A. Forero et al., J. Clin. Oncol., 2005: Vol. 23, No. 16S: 6601).Other suitable antibodies include antibodies directed against the 5T4 oncofetal antigen. The 5T4 antigen is a 72 kDa glycosylated high transmembrane glycoprotein comprising a 42 kDa unglycosylated nucleus (Hole et al., Br. Cancer, 1988, 57: 239-246; Hole et al., Int. J. Cancer, 1990, 45: 179-184; WO 89/07947; US Patent No. 5,869,053, each incorporated herein by reference in its entirety). 5T4 includes an extracellular domain characterized by two leucine-rich repeat (LRRs) and an intermediate hydrophilic region, which is an accessible antigen for targeted therapy (Myers et al., J. Biol. Chem., 1994, 269: 9319 -9324). Other suitable antibodies include antibodies directed against the CD30 antigen, which is overexpressed in a variety of hematological malignancies. CD30 is an attractive target for cancer therapy because it has minimal expression in normal tissues. SGN-30 is an example of an anti-CD30 antibody that has been shown to induce direct anticancer activity in CD30-expressing tumor cells (A. Forero et al., J. Clin. Oncol., 2005: Vol. 23, No. 16S: 6601) .

Além disso, existem vários anticorpos comercialmente disponí- veis direcionados contra antígenos de superfície celular, tais como rituximab (Rituxan™) e trastuzumab (Herceptin™), que podem ser usados como por- ções direcionadoras em conjugados quimioterapêuticos. Rituximab (Ritu- xan™) é um anticorpo anti-CD20 quimérico usado para tratar vários Iinfomas de células B e trastuzumab (Herceptin™) é um anticorpo anti-Her2 humani- zado usado para tratar câncer de mama. Em certas modalidades da invenção, uma porção direcionadora de um agente quimioterapêutico é um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo anti-Lewis Y, um anticorpo anti-CD30, ou um anti- corpo anti-5T4.In addition, there are several commercially available antibodies directed against cell surface antigens, such as rituximab (Rituxan ™) and trastuzumab (Herceptin ™), which can be used as targeting moieties in chemotherapeutic conjugates. Rituximab (Rituxan ™) is a chimeric anti-CD20 antibody used to treat various B cell lymphomas and trastuzumab (Herceptin ™) is a humanized anti-Her2 antibody used to treat breast cancer. In certain embodiments of the invention, a targeting portion of a chemotherapeutic agent is an anti-CD22 antibody, an anti-CD33 antibody, an anti-Lewis Y antibody, an anti-CD30 antibody, or an anti-5T4 antibody.

B. Fármacos citotóxicosB. Cytotoxic Drugs

Fármacos citotóxicos adequados incluem qualquer uma de uma grande variedade de substâncias, moléculas, compostos, agentes, ou fato- res que são tóxicos para células vivas. Administrada como um conjugado a um paciente, um fármaco citotóxico adequada é associada à trombocitope- nia. Trombocitopenia pode resultar, pelo menos em parte, de lesão hepática induzida por fármaco. Alternativamente ou adicionalmente, trombocitopenia pode resultar pelo menos em parte, de destruição da medula óssea induzida por fármaco.Suitable cytotoxic drugs include any of a wide variety of substances, molecules, compounds, agents, or factors that are toxic to living cells. Administered as a conjugate to a patient, a suitable cytotoxic drug is associated with thrombocytopenia. Thrombocytopenia may result, at least in part, from drug-induced liver damage. Alternatively or additionally, thrombocytopenia may result at least in part from drug-induced bone marrow destruction.

Como será observado pelo versado na técnica, um fármaco cito- tóxico pode ser um composto sintético ou um composto natural; uma molé- cula simples ou um complexo de moléculas diferentes. Fármacos citotóxicos adequadas podem pertencer a qualquer uma de várias classes de compos- tos incluindo, porém sem limitação, moléculas pequenas, peptídios, sacarí- deos, esteróides, anticorpos, proteínas de fusão, polinucleotídeos anti- sentido, ribozimas, RNAs interferentes pequenos, peptidomiméticos, e simi- lares. Quando fármacos citotóxicos são usados no tratamento de câncer ou de uma doença cancerosa, elas podem ser selecionadas entre as seguintes classes de fármacos anticâncer: agentes alquilantes, fármacos antimetabóli- tos, antibióticos antimitóticos, agentes antitumorais alcaloidais, hormônios e anti-hormônios, interferons, fármacos antiinflamatórias não-esteróides, e vários outros agentes antitumorais.As will be appreciated by one skilled in the art, a cytotoxic drug may be a synthetic compound or a natural compound; a single molecule or a complex of different molecules. Suitable cytotoxic drugs may belong to any of several classes of compounds including, but not limited to, small molecules, peptides, saccharides, steroids, antibodies, fusion proteins, antisense polynucleotides, ribozymes, small interfering RNAs, peptidomimetics. , and similar. When cytotoxic drugs are used to treat cancer or a cancerous disease, they may be selected from the following classes of anticancer drugs: alkylating agents, antimetabolite drugs, antimitotic antibiotics, alkaloid antitumor agents, hormones and anti-hormones, interferons, nonsteroidal antiinflammatory drugs, and various other antitumor agents.

Exemplos de fármacos adequadas para uso em imunoconjuga- dos incluem os taxanos, maitansinas, CC-1065 e duocarmicinas, as calique- amicinas e similares enediinas, e as auristatinas. Outros exemplos incluem os antifolatos, alcalóides de vinca, e as antraciclinas. Toxinas vegetais, ou- tras proteínas bioativas, enzimas (isto é, ADEPT), radioisótopos, fotossensi- bilizadores tais como aqueles empregados em terapia fotodinâmica, também podem ser usados em imunoconjugados. Além disso, conjugados podem ser feitos usando veículos secundários como o agente citotóxico, tais como Iipossomas ou polímeros, por exemplo.Examples of drugs suitable for use in immunoconjugates include taxanes, maytansins, CC-1065 and duocarmycins, calicamycins and the like enediines, and auristatins. Other examples include antifolates, vinca alkaloids, and anthracyclines. Plant toxins, other bioactive proteins, enzymes (ie ADEPT), radioisotopes, photosensitizers such as those employed in photodynamic therapy, may also be used in immunoconjugates. In addition, conjugates may be made using secondary carriers such as the cytotoxic agent such as liposomes or polymers, for example.

Em certas modalidades, o fármaco citotóxico pertence à família enediina de antibióticos. Como família, os antibióticos de enediina são os agentes antitumorais mais potentes descobertos até hoje. Alguns membros são 1000 vezes mais potentes que a adriamicina, um dos antibióticos anti- tumorais mais eficazes clinicamente usados (Y.S. Zhen et al., J. Antibiot., 1989,42:1294-1298).In certain embodiments, the cytotoxic drug belongs to the enediine family of antibiotics. As a family, enediin antibiotics are the most potent antitumor agents discovered to date. Some limbs are 1000 times more potent than adriamycin, one of the most clinically effective anti-tumor antibiotics used (Y.S. Zhen et al., J. Antibiot.

Em certas modalidades, o fármaco citotóxico é um membro da família enediina de caliqueamicinas. Originalmente isoladas de um extrato delíquido do microorganismo de solo Micromonospora echinospora ssp. ca- lichensis, as caliqueamicinas foram detectadas em um rastreamento por po- tentes agentes prejudiciais a DNA (M.D. Lee et a!., J. Am. Chem. Soc., 1987, 109: 3464-3466; M.D. Lee et al., J. Am. Chem. Soc., 1987, 109: 3466-3468; W.M. Maiese et al., J. Antibiot., 1989, 42: 558-563; M.D. Lee et al., J. Antibi- ot., 1989, 42: 1070-1087).In certain embodiments, the cytotoxic drug is a member of the enediine family of calicheamicins. Originally isolated from a deliquid extract of the soil microorganism Micromonospora echinospora ssp. calichensis, calicheamicins were detected on a screening for potential DNA-damaging agents (MD Lee et al., J. Am. Chem. Soc., 1987, 109: 3464-3466; MD Lee et al., J. Am. Chem. Soc., 1987, 109: 3466-3468; WM Maiese et al., J. Antibiot., 1989, 42: 558-563; MD Lee et al., J. Antibiot. , 42: 1070-1087).

As caliqueamicinas caracterizam-se por uma estrutura de nú- cleo de trissulfeto alílico de enediina bicíclica rígida e complexa ligada atra- vés de ligações glicosila a uma cadeia oligossacarídeo. A porção oligossaca- rídeo contém inúmeros derivados de açúcar substituído, e um anel tetrahi- dropirano substituído. Foi relatado que as porções de núcleo contendo ene- diina (ou aglicona) e as porções carboidrato de caliqueamicinas possuem funções diferentes na atividade biológica dessas moléculas. Sem a intenção de se ater a qualquer teoria particular, foi observado que geralmente se a- credita que a porção de núcleo cliva o DNA, ao passo que a porção oligos- sacarídeo das caliqueamicinas servem como um sistema de reconhecimento e distribuição e guia o fármaco até um sulco menor do DNA de cordão duplo onde o fármaco se ancora. Uma vez posicionado no sulco menor do DNA, o núcleo de enediina sofre um rearranjo eletrônico (ciclização de Bergman) para formar um dirradical 1,4-benzenóide transitório. A formação do dirradi- cal intermediário pode ser desencadeada pela presença de agentes reduto- res tais como NADPH ou ditiotrietol. A espécie de dirradical fornece a força propulsora termodinâmica para a reação de clivagem do DNA promovendo a separação do átomo de hidrogênio das desoxirriboses. A reação dos radi- cais centralizados no carbono da desoxirribose resultantes com oxigênio molecular inicia um processo que resulta em clivagens de DNA de cordão simples e de DNA de cordão duplo ("Enediyne Antibiotics as Antitumor A- gents", Doyle & Borders1 1995, Marcel-Dekker: New York; N. Zein et ai, Sci- ence, 1988, 240: 1198-1201; N. Ikemoto et ai., Proc. Natl. Acad. Sci., EUA, 1995, 92: 10506-10510; A.G. Myers et ai., J. Am. Chem. Soc., 1994, 116: 1255-1271: M.D. Lee et ai., Acc. Chem. Res., 1991, 24: 235-243; Y. Xu et ai., Biochemistry, 1997, 36: 14975-14984). Clivagem de DNA de cordão du- plo é um tipo de dano que geralmente não é restaurável ou não é facilmente restaurável para a célula e na maior parte das vezes é letal.Calicheamicins are characterized by a complex and rigid bicyclic enediine allyl trisulphide core structure linked through glycosyl bonds to an oligosaccharide chain. The oligosaccharide moiety contains numerous substituted sugar derivatives and a substituted tetrahydropyrane ring. It has been reported that the eneine (or aglycone) containing nucleus portions and the calicheamicin carbohydrate moieties have different functions in the biological activity of these molecules. Without intending to adhere to any particular theory, it has been observed that it is generally believed that the nucleus portion cleaves DNA, whereas the oligosaccharide portion of calicheamicins serves as a recognition and distribution system and guides the drug. to a smaller groove of double stranded DNA where the drug is anchored. Once positioned in the smaller groove of DNA, the enediin nucleus undergoes an electronic rearrangement (Bergman's cyclization) to form a transient 1,4-benzenoid diradical. Formation of the intermediate diradal may be triggered by the presence of reducing agents such as NADPH or dithiothrietol. The dirradical species provides the thermodynamic driving force for the DNA cleavage reaction by promoting the separation of the hydrogen atom from deoxyriboses. Reaction of the resulting carbon-deoxyribose radicals with molecular oxygen initiates a process that results in single-stranded and double-stranded DNA cleavages ("Enediyne Antibiotics as Antitumor Agents", Doyle & Borders1 1995, Marcel Dekker: New York, N. Zein et al., Sciece, 1988, 240: 1198-1201; N. Ikemoto et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1995, 92: 10506-10510; AG Myers et al., J. Am. Chem. Soc., 1994, 116: 1255-1271: MD Lee et al., Acc. Chem. Res., 1991, 24: 235-243; , Biochemistry, 1997, 36: 14975-14984). Double-stranded DNA cleavage is a type of damage that is usually not restorable or not easily restorable to the cell and is often lethal.

Por causa de suas propriedades químicas e biológicas, diversos análogos das caliqueamicinas foram testados em modelos pré-clínicos como agentes antitumorais potenciais. Seu desenvolvimento como terapias com um único agente não foi adiante por causa das toxicidades retardadas que limitam a faixa de dose terapêutica para tratamento. No entanto, sua potên- cia torna-os particularmente úteis para quimioterapia direcionada por conju- gado, onde os limites na expressão do conjugado alvo podem requerer alta potência para atingir eficácia (C. Liu & R.V.J. Chri, Exp. Opin. Invest. Drugs, 1997, 6: 169-172; R.V.J. Chari et ai., Câncer Res., 1995, 55: 4079-4084).Because of their chemical and biological properties, several calicheamicin analogs have been tested in preclinical models as potential antitumor agents. Their development as single agent therapies did not go ahead because of delayed toxicities that limit the therapeutic dose range for treatment. However, their potency makes them particularly useful for conjugate-directed chemotherapy, where limits on target conjugate expression may require high potency to achieve efficacy (C. Liu & RVJ Chri, Exp. Opin. Invest. Drugs , 1997, 6: 169-172; RVJ Chari et al., Cancer Res., 1995, 55: 4079-4084).

Por conseguinte, em certas modalidades da presente invenção, o quimioterápico compreende um conjugado de anticorpo-caliqueamicina.Accordingly, in certain embodiments of the present invention, the chemotherapeutic comprises an antibody-calicheamicin conjugate.

Será percebido que o termo "caliqueamicina" pode se referir a qualquer membro da família de agentes antibacterianos e antitumorais co- nhecidos como caliqueamicinas, por exemplo, como descrito nas Patentes US Nos 4.970.198 e 5.108.912 (cada uma delas aqui incorporada em sua integridade a título de referência). Análogos ou derivados de caliqueamici- nas, tais como, por exemplo, derivados N-acílicos descritos na Patente US N0 5.079.233 (que está aqui incorporada em sua integridade a título de refe- rência); análogos dissulfeto de caliqueamicina (por exemplo, como descrito nas Patentes US NoS 5.606.040 e 5.770.710, cada delas estando aqui incor- porada em sua integridade a título de referência); derivados de dihidro (por exemplo, como descrito na Patente US N0 5.037.651, que está aqui incorpo- rada em sua integridade a título de referência); e derivados N-acetilados (por exemplo, como descrito na Patente US N0 5.079.233, que está aqui incorpo- rada em sua integridade a título de referência) podem ser empregados.It will be appreciated that the term "calicheamicin" may refer to any member of the family of antibacterial and antitumor agents known as calicheamicins, for example as described in U.S. Patent Nos. 4,970,198 and 5,108,912 (each incorporated herein by integrity by way of reference). Calicheamic analogs or derivatives, such as, for example, N-acyl derivatives described in US Patent No. 5,079,233 (which is incorporated herein by reference in their entirety); calicheamicin disulfide analogs (for example, as described in US Patent Nos. 5,606,040 and 5,770,710, each of which is incorporated herein by reference in their entirety); dihydro derivatives (for example, as described in US Patent No. 5,037,651, which is incorporated herein by reference in their entirety); and N-acetylated derivatives (for example, as described in US Patent No. 5,079,233, which is incorporated herein by reference in their entirety) may be employed.

Vários conjugados anticorpo-caliqueamicina foram preparados e testados quanto as suas propriedades antitumorais (L.M. Hinmam et al., Câncer Res., 1993, 53: 3336-3342; P.R. Hamann et al., Bioconj. Chem., 2005, 16: 346-353; N.K. Damle & P. Frost, Curr. Opin. Pharmacol., 2003, 3: 386-390). Em certas modalidades, um conjugado de anticorpo- caliqueamicina pode ser incluído em uma composição farmacêutica da in- venção ou usado em um método de tratamento da invenção; tais conjuga- dos incluem os conjugados descritos nas Patentes US Nos 5.773.001, 5.739.116, 5.712.374, 5.714.586, e 5.877.296; no pedido PCT WO 03/092623, cada um deles estando aqui incorporado em sua integridade a título de referência.Several antibody-calicheamicin conjugates were prepared and tested for their antitumor properties (LM Hinmam et al., Cancer Res., 1993, 53: 3336-3342; PR Hamann et al., Bioconj. Chem., 2005, 16: 346- 353; NK Damle & P. Frost, Curr. Opin Pharmacol., 2003, 3: 386-390). In certain embodiments, an antibody-calicheamicin conjugate may be included in a pharmaceutical composition of the invention or used in a treatment method of the invention; such conjugates include the conjugates described in US Patent Nos. 5,773,001, 5,739,116, 5,712,374, 5,714,586, and 5,877,296; in PCT application WO 03/092623, each of which is incorporated herein by reference in its entirety.

Em certas modalidades da presente invenção, o conjugado anti- corpo-caliqueamicina é CMC-544. O CMC-544 é direcionado para CD22 ex- presso por malignidades de linfóide Β. O CMC-544 compreende um anticor- po monoclonal (mAb) lgG4 anti-CD22 humanizado, G5/44, covalentemente ligado à /V-acetil-y-caliquemicina dimetil hidrazida (CaIichDMH) via um Iiga- dor ácido 4-(4'-acetilfenóxi)butanóico lábil a ácido. O CMC-544 pode ser preparado, por exemplo, da maneira descrita em J.F. DiJoseph et al., Blood, 2004, 103: 1807-1814 e nos Pedidos de Patente US N°s 2004-0082764A1 e 2004-0192900A1, cada um deles aqui incorporado em sua integridade a títu- lo de referência.In certain embodiments of the present invention, the antibody-calicheamicin conjugate is CMC-544. CMC-544 is directed to CD22 expressed by lymphoid malignancies Β. CMC-544 comprises a humanized anti-CD22 monoclonal (mAb) IgG4 antibody, G5 / 44, covalently linked to the dimethyl hydrazide / V-acetyl-γ-caliquemicin (CaIichDMH) via a 4- (4 ') acid linker -acetylphenoxy) butanoic acid labile. CMC-544 may be prepared, for example, in the manner described in JF DiJoseph et al., Blood, 2004, 103: 1807-1814 and in US Patent Applications 2004-0082764A1 and 2004-0192900A1, each incorporated herein by reference in its entirety.

Em outras modalidades, o conjugado anticorpo-caliqueamicina é CMD-193, que está descrito no Pedido de Patente US N0 10/080.587 (aqui incorporado em sua integridade a título de referência). O CMD-193 é N- acetil-y-caliqueamicina dimetil hidrazida covalentemente ligado ao anticorpo anti-Lewis Y G193 com a carga média de conjugado de caliqueamicina de cerca de 5 a cerca de 7 moles de caliqueamicina por mol de anticorpo e fra- ção conjugada baixa (LCF) do conjugado menor que cerca de 10%.In other embodiments, the antibody-calicheamicin conjugate is CMD-193, which is described in US Patent Application No. 10 / 080,587 (incorporated herein by reference in its entirety). CMD-193 is N-acetyl-γ-calicheamicin dimethyl hydrazide covalently linked to anti-Lewis Y G193 antibody with the average calicheamicin conjugate loading of from about 5 to about 7 moles of calicheamicin per mole of antibody and fraction. low conjugate (LCF) of the conjugate less than about 10%.

Em outras modalidades, o conjugado anticorpo-caliqueamicina é MYLOTARG®, também conhecido como, CMA-676, CMA, ou gemtuzumab ozogamicina (vide, por exemplo, E.L. Sievers et a!., Blood, 1999, Blood, 93: 3678-3584, e Patentes US NoS 5.712.374, 5.714.586, 5.739.116, 5.767.285, 5.773.001, 5.877.296 e Pedido de Patente US N0 2004-0152632, cada um deles estando aqui incorporado a título de referência). MYLOTARG® já foi aprovado para o tratamento de leucemia mielóide aguda em pacientes ido- sos. O conjugado consiste em um anticorpo contra CD33 que é ligado à ca- liqueamicina por meio de um Iigador hidrolisável por ácido. O análogo dissul- feto da N-acetil-y-caliqueamicina semi-sintética é usado na conjugação (Pa- tentes US N°s 5.606.040 e 5.770.710).In other embodiments, the antibody-calicheamicin conjugate is MYLOTARG®, also known as CMA-676, CMA, or gemtuzumab ozogamycin (see, for example, EL Sievers et al., Blood, 1999, Blood, 93: 3678-3584 , and U.S. Patent Nos. 5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,773,001, 5,877,296 and US Patent No. 2004-0152632, each of which is incorporated herein by reference). MYLOTARG® has already been approved for the treatment of acute myeloid leukemia in elderly patients. The conjugate consists of an antibody to CD33 which is bound to ca liqueamycin via an acid hydrolyzable linker. The semi-synthetic N-acetyl-γ-calicheamicin disulfide analogue is used in the conjugation (US Pat. Nos. 5,606,040 and 5,770,710).

Em outras modalidades, o conjugado anticorpo-caliqueamicina é CME-548 (vide, por exemplo, o Pedido de Patente US N0 11/221.902 (aqui incorporado a título de referência)).In other embodiments, the antibody-calicheamicin conjugate is CME-548 (see, for example, US Patent Application No. 11 / 221,902 (incorporated herein by reference)).

Em certas outras modalidades, o fármaco citotóxico pertence à família enediina de esperamicinas. As esperamicinas foram identificadas em culturas de Actinomadura verrucosospora (M. Konishi et al., J. Antibiot., 1985, 38: 1605-1609), e a elucidação de suas estruturas foi reportada (J. Golik etal., J. Am. Chem. Soc., 1987, 109: 3461-3462; J. Golik etal., J. Am. Chem. Soc., 1987, 109: 3462-3464). O mecanismo pelo qual estas molécu- las produzem citotoxicidade foi investigado e verificou-se que ele é similar àquele das caliqueamicinas e envolvem a participação de uma espécie dir- radial que leva à formação de ruturas de DNA de cordão simples e de cor- dão duplo (B.H. Long etal., Proc. Natl. Acad. Sei. EUA, 1989, 86: 2-6).In certain other embodiments, the cytotoxic drug belongs to the enediin family of speramycin. Speramycins have been identified in Actinomadura verrucosospora cultures (M. Konishi et al., J. Antibiot., 1985, 38: 1605-1609), and elucidation of their structures has been reported (J. Golik etal., J. Am. Chem. Soc., 1987, 109: 3461-3462; J. Golik et al., J. Am. Chem. Soc., 1987, 109: 3462-3464). The mechanism by which these molecules produce cytotoxicity has been investigated and found to be similar to that of calicheamicins and involves the participation of a diradial species that leads to the formation of single-stranded and double-stranded DNA disruptions. (BH Long et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86: 2-6).

Em certas modalidades da presente invenção, o conjugado quimioterapêutico é um conjugado anticorpo-esperamicina. Como será ob- servado, o termo "esperamicina" pode referir-se a qualquer membro da famí- lia esperamicina de agentes antibacterianos e antitumorais conhecidos na técnicatura; análogos ou derivados destas esperamicinas também podem ser empregados (vide, por exemplo, as Patentes US NoS 4.675.187, 4.539.203, 4.554.162, and 4.837.206, cada uma delas estando aqui incorpo- rada em sua integridade a título de referência).In certain embodiments of the present invention, the chemotherapeutic conjugate is an antibody-speramycin conjugate. As will be appreciated, the term "speramycin" may refer to any member of the speramycin family of antibacterial and antitumor agents known in the art; analogues or derivatives of these speramycin may also be employed (see, for example, US Patent Nos. 4,675,187, 4,539,203, 4,554,162, and 4,837,206, each of which is incorporated herein in their entirety by way of reference).

III. lnterleucina-11III. Interleukin-11

A presente invenção fornece métodos de administração de, e composições farmacêuticas compreendendo, interleucina-11 (IL-11).The present invention provides methods of administering and pharmaceutical compositions comprising interleukin-11 (IL-11).

Interleucina-11 é um membro de uma família de fatores de crescimento que inclui hormônio do crescimento, fator estimulante de colô- nia de granulócitos (G-CSF), e similares fatores de crescimento. IL-11 tam- bém é um membro de uma família de citocinas que inclui IL-6, fator inibitório de leucemia (LIF), oncostatina M (OSM)1 e fator neurotrófico ciliar (CNTF), que sinalizam todos através de uma subunidade receptora comum, gp130 (S. Neben & K. Turner, Stem Cells, 1993, 11: 156-162). IL-11, que é produ- zida naturalmente pelas células estromatosas da medula óssea, é um fator de crescimento trombopoiético que, em conjunto com outros fatores, estimu- la a proliferação de células-tronco hematopoiéticas e células progenitoras de megacarióxitos e induz a maturação resultando em produção aumentada de plaquetas.Interleukin-11 is a member of a growth factor family that includes growth hormone, granulocyte colony stimulating factor (G-CSF), and similar growth factors. IL-11 is also a member of a family of cytokines that includes IL-6, leukemia inhibitory factor (LIF), oncostatin M (OSM) 1 and ciliary neurotrophic factor (CNTF), which all signal via a receptor subunit. common, gp130 (S. Neben & K. Turner, Stem Cells, 1993, 11: 156-162). IL-11, which is naturally produced by bone marrow stromal cells, is a thrombopoietic growth factor that, together with other factors, stimulates the proliferation of hematopoietic stem cells and megakaryoxide progenitor cells and induces maturation. resulting in increased platelet production.

Tipicamente, os métodos e as composições inventivas utilizam IL-11 em uma forma ativa, e geralmente em uma forma ativa substancial- mente livre de associação a outras proteínas ou materiais proteináceos de mamíferos.Typically, inventive methods and compositions utilize IL-11 in an active form, and generally in an active form substantially free of association with other mammalian proteins or proteinaceous materials.

lnterleucina-11 (ou IL-11), usada de acordo com a presente in- venção, geralmente é uma proteína isolada compreendendo a seqüência de polipeptídios inteira da IL-11 do tipo selvagem ou mutante ou um fragmento ativo da mesma. Uma proteína ou polipeptídio pode ser considerado isolado em virtude de sua origem ou manipulação, por exemplo se (a) estiver pre- sente em uma célula hospedeira como o produto de expressão de uma por- ção de um vetor de expressão; ou (b) estiver ligado a uma proteína ou por- ção química diferente daquela à qual ele está ligado na natureza; ou (c) não ocorrer na natureza. Alternativamente ou adicionalmente, um polipeptídio ou proteína isolada pode ser um polipeptídio ou proteína que é produzida ou preparada (inclusive por síntese química) pela mão do homem. Os especia- listas na técnica vão perceber que um polipeptídio ou proteína do tipo selva- gem tem uma seqüência de aminoácidos normal encontrada na natureza, ao passo que um polipeptídio ou proteína mutante tem uma seqüência de ami- noácidos que é idêntica àquela do tipo selvagem na maioria das posições, mas que inclui um ou mais diferenças (por exemplo, substituições, adições, deleções, alterações ou combinações das mesmas) em locais precisos. Um mutante pode ter mais de uma diferença mas, como pode ser observado pelos especialistas na técnica, a similaridade de seqüência com o tipo sel- vagem como um todo é mantida.Interleukin-11 (or IL-11), used according to the present invention, is generally an isolated protein comprising the entire wild type or mutant IL-11 polypeptide sequence or an active fragment thereof. A protein or polypeptide may be considered isolated by virtue of its origin or manipulation, for example if (a) it is present in a host cell as the expression product of a portion of an expression vector; or (b) is linked to a protein or chemical moiety different from that to which it is linked in nature; or (c) does not occur in nature. Alternatively or additionally, an isolated polypeptide or protein may be a polypeptide or protein that is produced or prepared (including by chemical synthesis) by the hand of man. Those skilled in the art will appreciate that a wild type polypeptide or protein has a normal amino acid sequence found in nature, whereas a mutant polypeptide or protein has an amino acid sequence that is identical to that of the wild type. in most positions, but including one or more differences (for example, substitutions, additions, deletions, alterations or combinations thereof) at precise locations. A mutant may have more than one difference but, as can be appreciated by those skilled in the art, sequence similarity to the wild type as a whole is maintained.

Em certas modalidades, a IL-11 utilizada de acordo com a pre- sente invenção tem a seqüência da IL-11 humana natural ou de outros ma- míferos (por exemplo, camundongo, rato, coelho, macaco, cachorro, gato, porco, vaca, cavalo e similares). A clonagem molecular e a caracterização da interleucina-11 murina foi apresentada por J.C. Norris et ai, (Exp. Hema- tol., 1996, 24: 1369-1376, que está aqui incorporado em sua integridade a título de referência). A seqüência de cDNA e a seqüência de aminoácidos (código de uma letra) de clones de primata (macaco saudável) e de clones humanos do polipeptídio IL-11 podem ser encontradas nas Patentes US N°s 5.371.193, 5.700.664, 5.854.028 e 6.066.317 (cada uma delas estando aqui incorporada em sua integridade a título de referência). A seqüência de nu- cleotídeo de primata compreende 1100 pares de bases, incluindo uma se- qüência não-codificadora 5' de 72 bases e uma seqüência não-codificadora 3' de 431 bases. A seqüência de nucleotídeo humana contém similarmente uma única estrutura de leitura comprida de 597 nucleotídeos. Tanto a prote- ína IL-11 de primata quanto a proteína IL-11 humana têm uma massa mole- cular de aproximadamente 19.000 dáltons; 178 aminoácidos de comprimen- to; e são não-glicosiladas. Um polinucleotídeo que codificado IL-11 de pri- mata ou ser humano foi descrito na Patente US N0 5.215.895 (que está aqui incorporada em sua integridade a título de referência).In certain embodiments, the IL-11 used in accordance with the present invention has the sequence of natural human IL-11 or other mammals (e.g., mouse, rat, rabbit, monkey, dog, cat, pig, cow, horse and the like). Molecular cloning and characterization of murine interleukin-11 has been presented by J.C. Norris et al. (Exp. Hematol., 1996, 24: 1369-1376, which is incorporated herein by reference in its entirety). The cDNA sequence and amino acid sequence (one letter code) of primate clones (healthy monkey) and human IL-11 polypeptide clones can be found in US Patent Nos. 5,371,193, 5,700,664, 5,854 .028 and 6,066,317 (each of which is incorporated herein by reference in its entirety). The primate nucleotide sequence comprises 1100 base pairs, including a 72 base 5 'non-coding sequence and a 431 base 3' non-coding sequence. The human nucleotide sequence similarly contains a single 597 nucleotide long reading frame. Both primate IL-11 protein and human IL-11 protein have a molecular mass of approximately 19,000 Daltons; 178 length amino acids; and are unglycosylated. A polynucleotide that is human or human IL-11 encoded has been described in US Patent No. 5,215,895 (which is incorporated herein by reference in its entirety).

Por conseguinte, em certas modalidades, a IL-11 incluída em uma composição farmacêutica ou usada em um método de tratamento da presente invenção compreende IL-11 murina. Em outras modalidades, a IL- 11 compreende IL-11 de primata. Em ainda outras modalidades, a IL-11 compreende IL-11 humana. Em algumas modalidades, o tipo de proteína IL- 11 utilizada coincide com aquela da espécie alvo (isto é, a espécie de indiví- duo que vai passar pelo tratamento com IL-11). Por exemplo, em algumas modalidades, a IL-11 humana é usada em composições e métodos para tratamento de seres humanos.Accordingly, in certain embodiments, IL-11 included in a pharmaceutical composition or used in a treatment method of the present invention comprises murine IL-11. In other embodiments, IL-11 comprises primate IL-11. In still other embodiments, IL-11 comprises human IL-11. In some embodiments, the type of IL-11 protein used coincides with that of the target species (ie, the species of individual undergoing treatment with IL-11). For example, in some embodiments, human IL-11 is used in compositions and methods for treating humans.

Em outras modalidades, a seqüência de aminoácidos da IL-11 a ser usada nas composições e métodos da presente invenção é suficiente- mente homóloga à IL-11 natural (por exemplo, a uma ou mais seqüências publicadas nas referências citadas acima e/ou listadas em bancos de dados estabelecidos tais como GenBank, SwissProt etc.). Tipicamente, polipeptí- dios ou proteínas são considerados suficientemente homólogos à IL-11 na- tural se eles compartilharem identidade de seqüência geral de pelo menos 35% com a IL-11. Em certas modalidades, a identidade de seqüência é pelo menos 40%, 60%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais. Os cál- culos da percentagem de homologia ou identidade de duas seqüências de aminoácidos podem ser efetuados por alinhamento das duas seqüências para fins de comparação otimizada (por exemplo, hiatos podem ser introdu- zidos em uma ou ambas de uma primeira e uma segunda seqüência de a- minoácidos para alinhamento ótimo e as seqüências não homólogas podem ser desconsideradas para fins de comparação). Em certas modalidades, o comprimento de uma seqüência de referência alinhada para fins de compa- ração é pelo menos 30%, 40%, 60%, 80%, 90%, 95% ou mais, por exemplo, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% do comprimento da seqüência de referência.In other embodiments, the amino acid sequence of IL-11 to be used in the compositions and methods of the present invention is sufficiently homologous to natural IL-11 (e.g., one or more sequences published in the references cited above and / or listed in established databases such as GenBank, SwissProt etc.). Typically, polypeptides or proteins are considered sufficiently homologous to natural IL-11 if they share at least 35% overall sequence identity with IL-11. In certain embodiments, the sequence identity is at least 40%, 60%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more. Calculations of the percent homology or identity of two amino acid sequences can be performed by aligning the two sequences for optimal comparison purposes (for example, gaps may be introduced into one or both of a first and a second sequence of amino acids). amino acids for optimal alignment and non-homologous sequences may be disregarded for comparison purposes). In certain embodiments, the length of a reference sequence aligned for comparison purposes is at least 30%, 40%, 60%, 80%, 90%, 95% or more, e.g. 96%, 97%, 98%, 99% or 100% of the reference sequence length.

Os resíduos de aminoácido nas posições de aminoácidos correspondentes são então comparados. Quando uma posição na primeira seqüência é ocu- pada pelo mesmo resíduo de aminoácidos que a posição correspondente na segunda seqüência, então as moléculas são idênticas (ou homólogas) na- quela posição. A percentagem de identidade entre as duas seqüências é função do número de posições idênticas compartilhadas pelas seqüências, levando-se em consideração o números de hiatos, e o comprimento de cada hiato, que precisam ser introduzidos para alinhamento ótimo das duas se- qüências.The amino acid residues at the corresponding amino acid positions are then compared. When a position in the first sequence is occupied by the same amino acid residue as the corresponding position in the second sequence, then the molecules are identical (or homologous) in that position. The percent identity between the two sequences is a function of the number of identical positions shared by the sequences, taking into account the number of gaps and the length of each gap that need to be entered for optimal alignment of the two sequences.

A comparação de seqüências e a determinação da percentagem de identidade entre duas seqüências podem ser efetuadas usando um algo- ritmo matemático. Por exemplo, a percentagem de identidade entre duas seqüências de aminoácidos pode ser determinada usando o algoritmo de Needleman e Wunsch (J. Mol. Biol., 1970, 48: 444-453), que foi incorporado no programa GAP no pacote de software GCG (disponível em http://www.gcq.com), usando uma matriz Blossum 62 ou uma matriz PAM250, e um peso de hiato de 16, 14, 12, 10, 8, 6, ou 4 e um peso de comprimento de 1, 2, 3, 4, 5, ou 6. A percentagem de identidade entre duas seqüências de aminoácidos também pode ser determinada usando o algo- ritmo de Meyers e Miller (CABIOS, 1989, 4: 11-17), que foi incorporado no programa ALIGN (versão 2.0), usando uma tabela de resíduo de peso PAM120, um comprimento de intervalo de penalidade de 12 e um intervalo de penalidade 4.Sequence comparison and percent identity determination between two sequences can be performed using a mathematical algorithm. For example, percent identity between two amino acid sequences can be determined using the Needleman and Wunsch algorithm (J. Mol. Biol., 1970, 48: 444-453), which was incorporated into the GAP program in the GCG software package. (available at http://www.gcq.com), using a Blossum 62 matrix or a PAM250 matrix, and a gap weight of 16, 14, 12, 10, 8, 6, or 4 and a length weight of 1, 2, 3, 4, 5, or 6. The percent identity between two amino acid sequences can also be determined using the Meyers and Miller algorithm (CABIOS, 1989, 4: 11-17), which has been incorporated. in the ALIGN program (version 2.0), using a PAM120 weight residual table, a penalty range length of 12, and a penalty range 4.

Comparada com a seqüência de aminoácidos da IL-11 natural, uma seqüência suficientemente homóloga pode incluir uma ou mais substi- tuições conservadoras, adições, alterações ou deleções de um ou mais re- síduos de aminoácidos. Como será entendido pelos especialistas na técni- ca, substituições conservadoras geralmente representam substituições que são fisicamente ou funcionalmente similares ao resíduo de referência cor- respondente, por exemplo, que têm um tamanho, formato, carga elétrica, propriedades químicas, inclusive a capacidade de formar ligações covalen- tes ou de hidrogênio, ou outros fatores similares. Em algumas modalidades, substituições conservadoras são aquelas que satisfazem os critérios defini- dos para uma "mutação pontual aceita" por Dayhoff et ai ("Atlas of Protein Sequence and Structure", 1978, Nat. Biomed. Res. Foundation, Washington, DC, Suppl. 3, 22: 354-352). Técnicas para tais substituições, inserções ou deleções de resíduos individuais ou conjuntos de resíduos são bem- conhecidas na literatura (vide, por exemplo, a Patente US N0 4.518.584).Compared to the natural IL-11 amino acid sequence, a sufficiently homologous sequence may include one or more conservative substitutions, additions, alterations or deletions of one or more amino acid residues. As will be appreciated by those skilled in the art, conservative substitutions generally represent substitutions that are physically or functionally similar to the corresponding reference residue, for example, which have a size, shape, electrical charge, chemical properties, including the ability to form. covalent or hydrogen bonds, or other similar factors. In some embodiments, conservative substitutions are those that meet the criteria defined for an "accepted point mutation" by Dayhoff et al ("Atlas of Protein Sequence and Structure", 1978, Nat. Biomed. Res. Foundation, Washington, DC, Suppl 3, 22: 354-352). Techniques for such individual residue substitutions, insertions or deletions or residue assemblies are well known in the literature (see, for example, US Patent No. 4,518,584).

Em algumas modalidades da invenção, a seqüência de aminoá- cidos da IL-11 a ser usada nas composições e métodos da presente inven- ção é um fragmento ativo da seqüência natural de IL-11 ou um fragmento ativo de uma seqüência que é suficientemente homóloga à seqüência natu- ral de IL-11.In some embodiments of the invention, the IL-11 amino acid sequence to be used in the compositions and methods of the present invention is an active fragment of the natural IL-11 sequence or an active fragment of a sequence that is sufficiently homologous. to the natural sequence of IL-11.

Fragmentos ativos de IL-11 geralmente têm uma seqüência que é idêntica ou suficientemente homóloga à IL-11 mas inclui menos aminoáci- dos que a proteína de comprimento integral, e retém a capacidade de blo- quear a trombocitopenia, lesão hepática e/ou inflamação associada à lesão hepática. Especificamente, um fragmento ativo de IL-11, para os propósitos da presente invenção, pode ser um fragmento que retém a capacidade de prevenir, aliviar, reduzir ou deter a trombocitopenia; prevenir, aliviar, reduzir ou deter uma lesão hepática; limitar uma inflamação associada à lesão he- pática; ou qualquer combinação destes, quando administrado a um indiví- duo. Tipicamente, um fragmento ativo pode compreender um domínio ou motivo da proteína de comprimento integral tendo atividade. Um fragmento ativo pode ser de polipeptídio que tem, por exemplo, 10, 25, 50, 100, 150, 175, 177, 178, 180, 185, 190, 195, 200 ou mais aminoácidos de comprimen- to. Quando aplicado à IL-11, o termo "fragmento ativo" refere-se a qualquer peptídio compreendendo uma seqüência de aminoácidos suficientemente homóloga à seqüência de aminoácidos da IL-11 natural ou derivada da mesma, que inclui menos aminoácidos que a proteína de comprimento inte- gral, e retém a capacidade de prevenir, aliviar, reduzir ou deter a tromboci- topenia; prevenir, aliviar, reduzir ou deter uma lesão hepática; limitar uma inflamação associada à lesão hepática; ou qualquer combinação destes, quando administrado a um indivíduo.Active IL-11 fragments generally have a sequence that is identical or sufficiently homologous to IL-11 but includes fewer amino acids than the full-length protein, and retains the ability to block thrombocytopenia, liver damage, and / or inflammation. associated with liver damage. Specifically, an active IL-11 fragment for purposes of the present invention may be a fragment that retains the ability to prevent, alleviate, reduce or arrest thrombocytopenia; prevent, relieve, reduce or deter liver damage; limit inflammation associated with liver damage; or any combination thereof when administered to an individual. Typically, an active fragment may comprise a full length protein domain or motif having activity. An active fragment may be polypeptide having, for example, 10, 25, 50, 100, 150, 175, 177, 178, 180, 185, 190, 195, 200 or more amino acids in length. When applied to IL-11, the term "active fragment" refers to any peptide comprising an amino acid sequence sufficiently homologous to the amino acid sequence of or derived from natural IL-11, which includes fewer amino acids than the full-length protein. - gral, and retains the ability to prevent, relieve, reduce or deter thrombocytopenia; prevent, relieve, reduce or deter liver damage; limit inflammation associated with liver damage; or any combination thereof when administered to an individual.

Fragmentos ativos particulares de IL-11 têm seqüências de a- minoácidos substancialmente idênticas a uma porção da seqüência de ami- noácidos da seqüência da IL-11 natural. Estas seqüências substancialmente idênticas contêm um número significativo de resíduos de aminoácidos que são (i) idênticos a, ou (ii) substituições conservadoras de resíduos de ami- noácidos alinhados de modo que elas incluem o domínio estrutural relevante e/ou a atividade funcional da IL-11. Por exemplo, seqüências de aminoáci- dos que contêm um domínio estrutural comum apresentando pelo menos cerca de 60% ou 65% de identidade, pelo menos 75% de identidade, ou pe- lo menos 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 100% de identidade com um domínio relevante de IL-11 podem ser substancialmente idênticas.Particular active IL-11 fragments have amino acid sequences substantially identical to a portion of the amino acid sequence of the natural IL-11 sequence. These substantially identical sequences contain a significant number of amino acid residues that are (i) identical to, or (ii) conservative substitutions of aligned amino acid residues such that they include the relevant structural domain and / or functional activity of IL. -11. For example, amino acid sequences that contain a common structural domain having at least about 60% or 65% identity, at least 75% identity, or at least 85%, 90%, 95%, 96%. , 97%, 98%, 99%, or 100% identity with a relevant IL-11 domain may be substantially identical.

A interleucina-11 a ser usada nas composições e métodos da presente invenção pode ser obtida por qualquer método adequado. Métodos de produção de polipeptídios ou proteínas são bem-conhecidos na técnica- tura. Por exemplo, a IL-11 pode ser obtida como uma proteína homogênea purificada de uma linhagem celular mamífera que a secreta; ou pode ser sintetizada quimicamente. Alternativamente, a interleucina-11 pode ser pro- duzida por técnicas recombinantes para possibilitar a produção de uma grande quantidade de IL-11 ativa pura útil para aplicações terapêuticas (co- mo descrito nas Patentes US N°s 5.215.895, 5.31.193, 5.700.664, 5.854.028 and 6.066.317, cada uma delas aqui incorporada em sua integridade a título de referência).Interleukin-11 to be used in the compositions and methods of the present invention may be obtained by any suitable method. Methods of producing polypeptides or proteins are well known in the art. For example, IL-11 may be obtained as a purified homogeneous protein from a secreting mammalian cell line; or may be chemically synthesized. Alternatively, interleukin-11 may be produced by recombinant techniques to enable the production of a large amount of pure active IL-11 useful for therapeutic applications (as described in US Patent Nos. 5,215,895, 5,331,193. , 5,700,664, 5,854,028 and 6,066,317, each incorporated herein by reference in its entirety).

Por exemplo, a IL-11 incluída em uma composição farmacêutica da invenção ou usada em um método de tratamento da invenção pode ser produzida em uma célula hospedeira por métodos de DNA recombinante. As células hospedeiras podem ser células de mamíferos ou não mamíferos. Células mamíferas adequadas incluem, porém sem limitação, células de cultura de tecido mamíferas não humanas tais como células de ovário de hamster chinês (CHO), células COS de macaco, e células NHI3T3 de fibro- blasto de camundongo; e células de cultura de tecido humanas tais como células HeLa, células HL-60, células 293 renais, e células S431 epidérmicas. Células hospedeiras não mamíferas incluem células de bactérias tais como Escherichia coli, Bacillus subtilis, cepas atenuadas de Salmonella typhimuri- um, e similares; células de levedura tais como Saccharomyees eerevisiae, Schizosaceharomyees pombe, cepas de Kluyveromyees, Candida, ou qual- quer cepa de levedura capaz de expressar proteínas; células de inseto tais como Spodoptera frugiperda.For example, IL-11 included in a pharmaceutical composition of the invention or used in a treatment method of the invention may be produced in a host cell by recombinant DNA methods. Host cells may be mammalian or non-mammalian cells. Suitable mammalian cells include, but are not limited to, non-human mammalian tissue culture cells such as Chinese hamster ovary (CHO) cells, monkey COS cells, and mouse fibroblast NHI3T3 cells; and human tissue culture cells such as HeLa cells, HL-60 cells, renal 293 cells, and epidermal S431 cells. Non-mammalian host cells include bacteria cells such as Escherichia coli, Bacillus subtilis, attenuated Salmonella typhimurone strains, and the like; yeast cells such as Saccharomyees eerevisiae, Schizosaceharomyees pigeon, Kluyveromyees strains, Candida, or any yeast strain capable of expressing proteins; insect cells such as Spodoptera frugiperda.

Em certas modalidades, a IL-11 incluída em uma composição farmacêutica da invenção ou usada em um método de tratamento da inven- ção é IL-11 humana produzida em Eseheriehia coli (E. coli) por métodos de DNA recombinante. A proteína produzida por este método tem 177 aminoá- cidos de comprimento e difere do comprimento de 178 aminoácidos da IL-11 nativa somente por faltar-lhe o resíduo prolina amino-terminal. Esta altera- ção não mostrou resultar em diferenças mensuráveis na bioatividade seja in vitro ou in vivo (Patente US N0 6.066.317).In certain embodiments, IL-11 included in a pharmaceutical composition of the invention or used in a method of treating the invention is human IL-11 produced in Eseheriehia coli (E. coli) by recombinant DNA methods. The protein produced by this method is 177 amino acids long and differs from the 178 amino acid length of native IL-11 only in that it lacks the amino terminal proline residue. This change has not been shown to result in measurable differences in bioactivity either in vitro or in vivo (US Patent No. 6,066,317).

IL-11 humana recombinante produzida por este método é cha- mada de Oprelvekin (S.V. Sitaraman & A.T. Gewirtz, Curr. Opin. Invest. Drugs, 2001, 2: 1395-1400). Oprelvekin1 é o ingrediente ativo em NEUME- GA® (Wyeth), o primeiro e único fator de crescimento plaquetário comerci- almente disponível até hoje. Em novembro de 1997, o FDA liberou o Oprel- vekin para a prevenção de trombocitopenia grave e para a redução da ne- cessidade de transfusões de plaquetas subseqüente à quimioterapia mie- Iossupressora em pacientes suscetíveis com malignidades não-mielóides (J.A. Kaye, Stem Cells, 1996, 14 Suppl. 1: 256-260). NEUMEGA® (Oprelve- kin) pode ajudar a prevenir as contagens de plaquetas progressivamente mais baixas causadas por quimioterapia. Em particular, o tratamento com NEUMEGA® pode ajudar pacientes com câncer a manter a dose planejada de quimioterapia no tempo (PDOT), evitando assim a redução da dose e atrasos da dose, e pode ajudar a reduzir a necessidade de transfusão de plaquetas. NEUMEGA® (OpreIvekin) também apresentou potente atividade trombopoiética em modelos animais de hematopoiese comprometida, inclu- indo camundongos e primatas não humanos moderadamente a severamen- te mielossuprimidos. Nestes modelos, o NEUMEGA® melhorou os nadires de plaquetas e acelerou as recuperações de plaquetas comparado com con- troles.Recombinant human IL-11 produced by this method is called Oprelvekin (S.V. Sitaraman & A.T. Gewirtz, Curr. Opin. Invest. Drugs, 2001, 2: 1395-1400). Oprelvekin1 is the active ingredient in NEUMAGA® (Wyeth), the first and only commercially available platelet growth factor to date. In November 1997, the FDA released Oprelvekin for the prevention of severe thrombocytopenia and to reduce the need for platelet transfusions following myelosuppressive chemotherapy in susceptible patients with non-myeloid malignancies (JA Kaye, Stem Cells). , 1996, 14 Suppl. 1: 256-260). NEUMEGA® (Oprelvekin) may help to prevent progressively lower platelet counts caused by chemotherapy. In particular, treatment with NEUMEGA® can help cancer patients maintain their planned dose of chemotherapy over time (PDOT), thus avoiding dose reduction and dose delays, and may help reduce the need for platelet transfusion. NEUMEGA® (OpreIvekin) also showed potent thrombopoietic activity in animal models of compromised hematopoiesis, including moderately to severely myelosuppressed mice and non-human primates. In these models, NEUMEGA® improved platelet nadirs and accelerated platelet retrieval compared to controls.

IV. Métodos de tratamentoIV. Treatment Methods

Em um aspecto, a presente invenção refere-se a métodos e/ou sistemas para o controle de trombocitopenia induzida por fármaco incluindo trombocitopenia resultante, pelo menos em parte, de lesão hepática induzi- da por fármaco e trombocitopenia resultante, pelo menos em parte, de des- truição da medula óssea induzida por fármaco. Especificamente, a invenção fornece métodos e/ou sistemas para aliviar a trombocitopenia (isto é, para prevenir, reduzir, aliviar ou deter a trombocitopenia).In one aspect, the present invention relates to methods and / or systems for the control of drug-induced thrombocytopenia including thrombocytopenia resulting at least in part from drug-induced liver injury and thrombocytopenia at least in part. drug-induced bone marrow destruction. Specifically, the invention provides methods and / or systems for alleviating thrombocytopenia (i.e., to prevent, reduce, alleviate or arrest thrombocytopenia).

Em geral, os métodos de prevenção visam retardar ou prevenir o aparecimento de uma condição médica. Nestes métodos, a terapia é tipi- camente administrada antes do aparecimento da condição para uma ação profilática. Os métodos de tratamento em geral, visam (1) aliviar ou deter a progressão, o agravamento, ou a deterioração dos sintomas de uma condi- ção médica; (2) causar a melhora de um ou mais sintomas da condição; e/ou (3) curar a condição. Nestes métodos, a terapia é tipicamente adminis- trada depois do início da condição, para uma ação terapêutica.Prevention methods generally aim to delay or prevent the onset of a medical condition. In these methods, therapy is typically administered prior to the onset of the condition for prophylactic action. Treatment methods generally aim to (1) alleviate or halt the progression, aggravation, or deterioration of the symptoms of a medical condition; (2) cause the improvement of one or more symptoms of the condition; and / or (3) cure the condition. In these methods, therapy is typically administered after the onset of the condition for therapeutic action.

Os métodos da presente invenção incluem a etapa de: adminis- trar uma quantidade terapeuticamente eficaz de interleucina-11 a um indiví- duo com necessidade do mesmo. Indivíduos ou pessoas apropriados que recebem a terapia da invenção incluem seres humanos ou outros mamíferos (por exemplo, camundongos, ratos, coelhos, cachorros, gatos, gado bovino, gado suíno, gado caprino, cavalos ou primatas) que sofrem ou podem vir a sofrer, ou estão suscetíveis, a uma doença ou distúrbio (por exemplo, trom- bocitopenia, lesão hepática ou destruição da medula óssea) mas podem ter ou não a doença ou distúrbio ou os sintomas da doença ou distúrbio. Em algumas modalidades, o indivíduo às vezes é um paciente humano.The methods of the present invention include the step of: administering a therapeutically effective amount of interleukin-11 to an individual in need thereof. Suitable individuals or persons receiving the therapy of the invention include humans or other mammals (e.g., mice, rats, rabbits, dogs, cats, cattle, pigs, goats, horses or primates) who suffer or may suffer. , or are susceptible to a disease or disorder (eg thrombocytopenia, liver damage or bone marrow destruction) but may or may not have the disease or disorder or the symptoms of the disease or disorder. In some embodiments, the individual is sometimes a human patient.

Os métodos da presente invenção geralmente envolvem a ad- ministração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente parti- cular. Uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para obter (em princípio, para um indivíduo de características equiparáveis, tais como espécie, tipo de corpo, tamanho, dimensão da doença ou distúr- bio, grau ou tipo de sintomas, histórico de sensibilidade, e/ou estado geral de saúde) uma resposta biológica ou médica ou benefício terapêutico dese- jados em um tecido, sistema ou indivíduo. Por exemplo, uma resposta dese- jável pode incluir um ou mais de: retardar ou prevenir o aparecimento de uma condição médica, doença ou distúrbio, aliviar ou deter a progressão, o agravamento, ou a deterioração dos sintomas da condição, causar melhoras dos sintomas da condição, e curar a condição. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um quimioterápico é tipicamente uma quantidade suficiente para obter um retardamento, uma redução ou uma melhora desejada do progresso de um tumor. Uma quanti- dade terapeuticamente eficaz de IL-11 pode ser diferente dependendo da resposta desejada. Por exemplo, uma quantidade de IL-11 eficaz para pre- venir a trombocitopenia pode ser diferente de uma quantidade de IL-11 efi- caz para tratar a trombocitopenia, e pode ser diferente das quantidades para prevenir ou tratar lesão hepática ou destruição da medula óssea. Similar- mente, uma quantidade de IL-11 eficaz para tratar trombocitopenia induzida por um primeiro fármaco pode ser diferente de uma quantidade de IL-11 efi- caz para prevenir trombocitopenia induzida por um segundo fármaco dife- rente, etc.The methods of the present invention generally involve administering a therapeutically effective amount of a particular agent. A therapeutically effective amount is an amount sufficient to obtain (in principle for an individual of comparable characteristics such as species, body type, size, disease size or disorder, degree or type of symptoms, sensitivity history, and / or general health) a desired biological or medical response or therapeutic benefit in a tissue, system or individual. For example, a desirable response may include one or more of: delaying or preventing the onset of a medical condition, disease or disorder, alleviating or stopping the progression, worsening, or deterioration of the symptoms of the condition, causing symptom improvement. of the condition, and cure the condition. A therapeutically effective amount of a chemotherapeutic is typically an amount sufficient to achieve a desired delay, reduction or improvement in the progress of a tumor. A therapeutically effective amount of IL-11 may differ depending on the desired response. For example, an amount of IL-11 effective to prevent thrombocytopenia may be different from an amount of IL-11 effective to treat thrombocytopenia, and may differ from amounts to prevent or treat liver damage or marrow destruction. bone Similarly, an amount of IL-11 effective to treat a first drug-induced thrombocytopenia may be different from an effective IL-11 amount to prevent thrombocytopenia induced by a different second drug, etc.

Também, será observado que, quando combinações de agentes terapêuticos são administradas, a quantidade de qualquer agente individual necessária na combinação pode ser diferente da quantidade necessária da- quele mesmo agente para obter seu efeito terapêutico isolado. Em alguns casos, sinergias entre os agentes terapêuticos usados em uma combinação podem reduzir as quantidades necessárias; em outros casos, interações inibitórias podem aumentar as quantidades necessárias. Por conseguinte, de um modo geral, quantidades terapeuticamente eficazes de uma combi- nação de agentes podem utilizar quantidades absolutas dos agentes dife- rentes daquelas que constituem quantidades terapeuticamente eficazes dos agentes individualmente.Also, it will be appreciated that when combinations of therapeutic agents are administered, the amount of any individual agent required in the combination may be different from the amount required of that same agent to achieve its isolated therapeutic effect. In some cases, synergies between therapeutic agents used in a combination may reduce the required amounts; In other cases, inhibitory interactions may increase the required amounts. Therefore, generally therapeutically effective amounts of a combination of agents may utilize absolute amounts of agents other than those which constitute therapeutically effective amounts of the agents individually.

Os métodos da presente invenção podem ser usados para pre- venir o aparecimento de trombocitopenia (por exemplo, em um indivíduo passando ou que vá passar por uma terapia envolvendo um conjugado tera- pêutico cuja administração resulta ou pode resultar em trombocitopenia). Alternativamente, os métodos da presente invenção podem ser usados para tratar trombocitopenia (por exemplo, em um indivíduo que tenha recebido e/ou esteja recebendo uma terapia envolvendo um conjugado terapêutico cuja administração resulta trombocitopenia). Será observado que contagens de plaquetas diferentes podem assegurar um diagnóstico de trombocitope- nia para diferentes espécies de mamíferos. Nos seres humanos, a conta- gem de plaquetas no sangue circulante normalmente varia entre 150 e 400 milhões por mililitro de sangue (ou 150 a 400 χ 109/l).The methods of the present invention may be used to prevent the onset of thrombocytopenia (for example, in an individual undergoing or undergoing therapy involving a therapeutic conjugate whose administration results in or may result in thrombocytopenia). Alternatively, the methods of the present invention may be used to treat thrombocytopenia (for example, in an individual who has received and / or is receiving therapy involving a therapeutic conjugate whose administration results in thrombocytopenia). It will be appreciated that different platelet counts may ensure a diagnosis of thrombocytopenia for different mammalian species. In humans, the platelet count in circulating blood usually ranges from 150 to 400 million per milliliter of blood (or 150 to 400 χ 109 / l).

Exames de laboratório usados para diagnosticar trombocitope- nia (ou para avaliar os efeitos dos métodos de tratamento da presente in- venção) incluem contagem de sangue total. Uma análise de contagem de células pode ser feita manualmente, observando uma lâmina preparada com uma amostra do sangue do paciente em um microscópio, ou automatica- mente, usando um analisador automático (por exemplo, um instrumento Coulter Model S-pIus). Uma contagem de sangue total normalmente fornece informações sobre as concentrações das diferentes células presentes no sangue, inclusive plaquetas.Laboratory tests used to diagnose thrombocytopenia (or to evaluate the effects of the methods of treatment of this invention) include whole blood counts. A cell count analysis can be done manually by observing a slide prepared with a patient's blood sample under a microscope, or automatically using an automated analyzer (eg, a Coulter Model S-pIus instrument). A whole blood count usually provides information on the concentrations of different cells present in the blood, including platelets.

A. Lesão hepáticaA. Liver injury

Certas modalidades da presente invenção fornecem métodos e composições para administração a um indivíduo sofrendo de ou suscetível à trombocitopenia resultante de lesão hepática induzida por fármaco. Um indi- víduo pode estar sofrendo de ou pode estar suscetível à lesão hepática se esse indivíduo tiver sido diagnosticado com lesão hepática (por exemplo, tiver sido testado e ter sido verificado que ele tem lesão hepática); for sus- peito de ter lesão hepática (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas indicativos de lesão hepática, tiver um ou mais fatores de risco, ou estiver sendo testado quanto à lesão hepática); for clinicamente sabido que ele tem tendência a sofrer de lesão hepática (por exemplo, tiver um histórico de le- são hepática); ou tiver recebido, estar recebendo ou estar para receber um tratamento envolvendo um agente terapêutico cuja administração resulta em lesão hepática. Indivíduos que já passaram por uma terapia para lesão he- pática também podem ser considerados como sofrendo de ou estando sus- cetível à lesão hepática.Certain embodiments of the present invention provide methods and compositions for administration to an individual suffering from or susceptible to thrombocytopenia resulting from drug-induced liver injury. An individual may be suffering from or susceptible to liver injury if that individual has been diagnosed with liver injury (for example, has been tested and found to have liver damage); you are suspected of having liver damage (for example, have one or more symptoms indicating liver damage, have one or more risk factors, or are being tested for liver damage); it is clinically known to be prone to liver damage (eg, have a history of liver damage); or have received, are receiving or are about to receive treatment involving a therapeutic agent whose administration results in liver damage. Individuals who have already undergone liver injury therapy may also be considered to be suffering from or susceptible to liver injury.

Lesão hepática pode incluir qualquer lesão, defeito ou disfunção do fígado causada por um fator particular (por exemplo, um conjugado) ou uma combinação de fatores. Por exemplo, lesão hepática inclui, porém sem limitação, degeneração ou necrose das células parenquimatosas do fígado; mobilização, infiltração, ativação das células de Kupffer, leucóticos, e simila- res; inchaço do fígado; fibrose do tecido hepático; assim como qualquer rea- ção biológica ou condição que resulta da lesão (incluindo, porém sem limita- ção, inflamação e esplenomegalia).Liver injury may include any liver injury, defect or dysfunction caused by a particular factor (eg, a conjugate) or a combination of factors. For example, liver damage includes, but is not limited to, parenchymal cell degeneration or necrosis of the liver; mobilization, infiltration, activation of Kupffer cells, leukotics, and the like; swelling of the liver; liver tissue fibrosis; as well as any biological reaction or condition resulting from the injury (including, but not limited to, inflammation and splenomegaly).

Em certas modalidades, os métodos e as composições farma- cêuticas da presente invenção são usados para prevenir ou tratar lesão he- pática induzida por fármaco que resulta em trombocitopenia. Por exemplo, os métodos e as composições farmacêuticas da invenção podem ser usa- dos para prevenir o aparecimento de lesão hepática induzida por fármaco (por exemplo, em um indivíduo a ser submetido a um tratamento envolvendo um conjugado cuja administração resulta em lesão hepática). Alternativa- mente ou adicionalmente, os métodos e as composições farmacêuticas da invenção podem ser usados para tratar lesão hepática induzida por fármaco (por exemplo, em um indivíduo que tenha recebido um tratamento envolven- do um conjugado cuja administração resulta em lesão hepática).In certain embodiments, the methods and pharmaceutical compositions of the present invention are used to prevent or treat drug-induced liver damage that results in thrombocytopenia. For example, the methods and pharmaceutical compositions of the invention may be used to prevent the appearance of drug-induced liver injury (for example, in an individual undergoing treatment involving a conjugate whose administration results in liver injury). Alternatively or additionally, the methods and pharmaceutical compositions of the invention may be used to treat drug-induced liver injury (for example, in a subject who has received treatment involving a conjugate whose administration results in liver injury).

Lesão hepática pode ser diagnosticada de acordo com técnicas estabelecidas. Por exemplo, lesão hepática freqüentemente é diagnosticada usando um conjunto de exames de sangue de laboratório bioquímicos clíni- cos criados para fornecer informações sobre o estado do fígado do indiví- duo. Como o fígado produz a maior parte das proteínas plasmáticas no cor- po, medir a quantidade de proteína total e/ou a quantidade de albumina (o principal constituinte de proteína total e uma proteína produzida especifica- mente pelo fígado) no sangue nos dá informações a respeito do estado de funcionamento do fígado. Quando o fígado é lesionado, ele pode deixar de produzir fatores de coagulação do sangue: o tempo de protrombina pode ser medido para diagnosticar distúrbios de coagem do sangue, geralmente san- gramento, resultantes de lesão hepática. A concentração de bilirubina sérica também pode ser medida como uma indicação do estado do fígado do paci- ente. A bilirubina é o principal produto de decomposição que resulta da des- truição de células sangüíneas vermelhas velhas (assim como outras fontes). Ela é removida do sangue pelo fígado, quimicamente modificada por um processo denominado conjugação, secretada na bile, passada para o intes- tino e até certo ponto reabsorvida do intestino. Muitas doenças e condições hepáticas diferentes podem fazer com que as concentrações de bilirubina sérica sejam elevadas. Também podem ser feitos exames de sangue para medir uma ou mais de alanina transaminase (ALT), fosfatase alcalina (ALP), aspartato transaminase (AST),e gama glutamil transpeptidase (GGT). ALT é uma enzima presentes nos hepatócitos. Quando uma célula hepática é Iesi- onada, esta enzima vaza para o sangue, onde ela pode ser medida. A ALT aumenta drasticamente em uma lesão hepática aguda, tal como hepatite viral ou superdosagem de acetaminofeno. As elevações geralmente são medidas em múltiplos do limite superior de normal (ULN). A ALP é uma en- zima presente nas células que revestem os dutos biliares do fígado. Se hou- ver uma obstrução no duto biliar (por exemplo, cálculos biliares), os níveis de ALP no plasma vão aumentar. AST é similar à ALT no sentido de ser uma outra enzima associada às células parenquimatosas do fígado, que é aumentada na lesão hepática aguda. GGT é uma enzima cujos níveis po- dem ser elevados com níveis subclínicos ainda menores de disfunção hepática.Liver injury can be diagnosed according to established techniques. For example, liver injury is often diagnosed using a set of clinical biochemical laboratory blood tests designed to provide information about an individual's liver status. Since the liver produces most of the body's plasma proteins, measuring the amount of total protein and / or the amount of albumin (the main constituent of total protein and a protein specifically produced by the liver) in the blood gives us information. about the state of functioning of the liver. When the liver is injured, it can no longer produce blood clotting factors: prothrombin time can be measured to diagnose bleeding disorders, usually bleeding, resulting from liver damage. Serum bilirubin concentration can also be measured as an indication of the patient's liver condition. Bilirubin is the major decomposition product that results from the destruction of old red blood cells (as well as other sources). It is removed from the blood by the liver, chemically modified by a process called conjugation, secreted in the bile, passed to the intestine and to some extent resorbed from the intestine. Many different liver diseases and conditions can cause serum bilirubin concentrations to be elevated. Blood tests may also be performed to measure one or more alanine transaminase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), aspartate transaminase (AST), and gamma glutamyl transpeptidase (GGT). ALT is an enzyme present in hepatocytes. When a liver cell is dissected, this enzyme leaks into the blood, where it can be measured. ALT increases dramatically in an acute liver injury, such as viral hepatitis or acetaminophen overdose. Elevations are usually measured in multiples of the upper limit of normal (ULN). ALP is an enzyme present in the cells that line the bile ducts of the liver. If there is a bile duct obstruction (eg gallstones), plasma ALP levels will increase. AST is similar to ALT in that it is another enzyme associated with liver parenchymal cells, which is increased in acute liver injury. GGT is an enzyme whose levels may be elevated with even lower subclinical levels of liver dysfunction.

Alternativamente ou adicionalmente, estes exames de laborató- rio para o diagnóstico de lesão hepática podem ser usados para avaliar os efeitos dos métodos da presente invenção.Alternatively or additionally, these laboratory tests for the diagnosis of liver injury may be used to evaluate the effects of the methods of the present invention.

Em certas modalidades da presente invenção, a lesão hepática a lesão hepática é associada à (isto é, inclui, é acompanhada de ou resulta em) inflamação. Inflamação é uma conseqüência natural de lesão do tecido adulto e da tentativa inicial do corpo de se curar sozinho. Durante a fase ini- cial da inflamação, neutrófilos e macrófagos são atraídos para o local da lesão/inflamação. Uma vez ativados, eles produzem grandes quantidades de espécie de oxigênio reativo (ROS) através de uma explosão respiratório consumidora de oxigênio. Uma finalidade desses produtos celulares é des- truir o tecido lesionado, eliminar os organismos invasores e prevenir a infec- ção. Apesar deste efeito benéfico, a produção prolongada de níveis altos de ROS pode prejudicar a cicatrização e causar dano adicional e severo do te- cido e sua deterioração. Os métodos e as composições farmacêuticas da presente in- venção podem ser usados para prevenir ou limitar a inflamação associada à lesão hepática induzida por fármaco. Por exemplo, os métodos e as compo- sições farmacêuticas da invenção podem ser usados para limitar a extensão ou o grau de inflamação de outra forma observado depois da administração de um conjugado que produz lesão hepática.In certain embodiments of the present invention, liver injury is a liver injury associated with (i.e. includes, is accompanied by or results in) inflammation. Inflammation is a natural consequence of injury to adult tissue and the body's initial attempt to heal itself. During the initial phase of inflammation, neutrophils and macrophages are attracted to the injury / inflammation site. Once activated, they produce large amounts of reactive oxygen species (ROS) through an oxygen-consuming respiratory explosion. One purpose of these cellular products is to destroy injured tissue, eliminate invasive organisms and prevent infection. Despite this beneficial effect, prolonged production of high ROS levels can impair healing and cause additional and severe tissue damage and deterioration. The methods and pharmaceutical compositions of the present invention may be used to prevent or limit inflammation associated with drug-induced liver injury. For example, the methods and pharmaceutical compositions of the invention may be used to limit the extent or degree of inflammation otherwise observed after administration of a liver damage producing conjugate.

A extensão da inflamação e/ou dos efeitos dos métodos e com- posições da invenção podem ser avaliados usando qualquer um de varieda- de de exames adequados conhecidos na técnicatura. Estes exames incluem ensaios que medem a taxa de sedimentação dos eritrócitos (ESR)1 que ser- ve de maneira conveniente para pesquisar qualquer processo inflamatório no corpo; ensaios que medem a proteína C-reactiva (CRP, cuja produção pelo fígado aumenta até mil vezes em resposta a um insulto); e ensaios que medem as contagens de neutrófilos.The extent of inflammation and / or effects of the methods and compositions of the invention may be evaluated using any of a variety of suitable examinations known in the art. These tests include assays that measure the erythrocyte sedimentation rate (ESR) 1 that conveniently serves to screen for any inflammatory process in the body; assays measuring C-reactive protein (CRP, whose production by the liver increases up to 1,000-fold in response to an insult); and assays that measure neutrophil counts.

B. Destruição da medula ósseaB. Bone Marrow Destruction

Certas modalidades da presente invenção referem-se a méto- dos e composições para administração a um indivíduo que sofre de ou seja suscetível à trombocitopenia resultante de destruição da medula óssea in- duzida por fármaco. Um indivíduo pode estar sofrendo de ou estar suscetível à destruição da medula óssea se esse indivíduo tiver sido diagnosticado com destruição da medula óssea (por exemplo, tiver sido testado e verifica- do que ele apresenta lesão, defeito ou disfunção da medula óssea); for sus- peito de ter destruição da medula óssea (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de destruição da medula óssea); ou tiver recebido, estiver recebendo ou estiver para receber um tratamento envolvendo um conjugado cuja administração resulta em destruição da medula óssea.Certain embodiments of the present invention pertain to methods and compositions for administration to an individual suffering from or susceptible to thrombocytopenia resulting from drug-induced bone marrow destruction. An individual may be suffering from or susceptible to bone marrow destruction if that individual has been diagnosed with bone marrow destruction (for example, has been tested and found to have bone marrow injury, defect or dysfunction); you are suspected of having bone marrow destruction (for example, have one or more symptoms of bone marrow destruction); or have received, are receiving or are about to receive treatment involving a conjugate whose administration results in bone marrow destruction.

Destruição da medula óssea pode incluir qualquer lesão, defeito ou disfunção da medula óssea causada por um fator particular (por exemplo, conjugado) ou uma combinação de fatores que resulta na produção diminuí- da ou defeituosa de plaquetas. Por exemplo, destruição da medula óssea inclui, porém sem limitação, degeneração ou necrose de megacariócitos, produção diminuída de megacariócitos, e alteração ou lesão da medula ós- sea produzindo um ambiente desfavorável para a produção de plaquetas a partir de megacariócitos.Bone marrow destruction may include any bone marrow injury, defect or dysfunction caused by a particular factor (eg, conjugate) or a combination of factors that results in decreased or defective platelet production. For example, bone marrow destruction includes, but is not limited to, megakaryocyte degeneration or necrosis, decreased megakaryocyte production, and bone marrow alteration or injury producing an unfavorable environment for platelet production from megakaryocytes.

Em certas modalidades, os métodos e as composições farma- cêuticas da invenção são usados para prevenir ou tratar destruição da me- dula óssea induzida por fármaco que resulta em trombocitopenia. Por e- xemplo, os métodos e as composições farmacêuticas da presente invenção podem ser usados para prevenir a destruição da medula óssea induzida por fármaco (por exemplo, em um indivíduo a ser submetido a um tratamento envolvendo um conjugado cuja administração resulta na destruição da me- dula óssea) ou para tratar destruição da medula óssea induzida por fármaco (por exemplo, em um indivíduo que tenha recebido um tratamento envolven- do um conjugado cuja administração resulta em destruição da medula ós- sea).In certain embodiments, the methods and pharmaceutical compositions of the invention are used to prevent or treat drug-induced bone marrow destruction resulting in thrombocytopenia. For example, the methods and pharmaceutical compositions of the present invention may be used to prevent drug-induced bone marrow destruction (for example, in an individual undergoing treatment involving a conjugate whose administration results in the destruction of the drug). - bone marrow) or to treat drug-induced bone marrow destruction (for example, in an individual who has received treatment involving a conjugate whose administration results in bone marrow destruction).

Destruição da medula óssea pode ser diagnosticada de acordo com técnicas estabelecidas. Por exemplo, destruição da medula óssea pode ser diagnostica avaliando-se a celularidade e morfologia de células eritróides residuais em um aspirado ou biópsia da medula óssea. A atividade da me- dula óssea também pode ser determinada por métodos radiográficos ou mé- todos de imagem que incluem imagem por ressonância magnética (MRI) e tomografia por emissão de pósitrons (PET).Bone marrow destruction can be diagnosed according to established techniques. For example, bone marrow destruction can be diagnosed by assessing the cellularity and morphology of residual erythroid cells in a bone marrow aspirate or biopsy. Bone marrow activity can also be determined by radiographic methods or imaging methods that include magnetic resonance imaging (MRI) and positron emission tomography (PET).

C. Seleção de indivíduosC. Selection of Individuals

Em certas modalidades, indivíduos adequados para receber um tratamento de acordo com a presente invenção incluem indivíduos que so- frem de trombocitopenia induzida por fármaco; indivíduos clinicamente cons- tatados como tendo tendência a sofrer de trombocitopenia induzida por fár- maco; indivíduos que tenham recebido, estejam recebendo ou estejam para receber um tratamento envolvendo um agente terapêutico conjugado cuja administração resulta em trombocitopenia. Indivíduos adequados podem já ter recebido ou não tratamento tradicional para a condição.In certain embodiments, subjects suitable for treatment according to the present invention include individuals who experience drug-induced thrombocytopenia; individuals clinically found to be prone to drug-induced thrombocytopenia; individuals who have received, are receiving or are about to receive treatment involving a conjugated therapeutic agent whose administration results in thrombocytopenia. Suitable individuals may or may not have already received traditional treatment for the condition.

Antes da administração de uma terapia ou composição da in- venção, o indivíduo pode ser testado quanto à trombocitopenia, lesão hepá- tica, inflamação, e/ou destruição da medula óssea, usando um ou mais dos métodos descritos acima. Os mesmos métodos ou métodos similares po- dem ser usados para determinar os efeitos do tratamento/composição far- macêutica da invenção no indivíduo.Prior to administration of a therapy or composition of the invention, the subject may be tested for thrombocytopenia, liver injury, inflammation, and / or bone marrow destruction using one or more of the methods described above. The same or similar methods may be used to determine the effects of the treatment / pharmaceutical composition of the invention on the individual.

Indivíduos que sofrem de ou são suscetíveis à trombocitopenia induzida por fármaco podem estar com câncer ou com uma doença cance- rosa. Em algumas modalidades, a trombocitopenia no indivíduo resulta, pelo menos em parte, de lesão hepática induzida por um conjugado quimiotera- pêutico. Alternativamente ou adicionalmente, a trombocitopenia resulta, pelo menos em parte, de destruição da medula óssea induzida por um conjugado quimioterapêutico.Individuals suffering from or susceptible to drug-induced thrombocytopenia may have cancer or a cancerous disease. In some embodiments, thrombocytopenia in the individual results, at least in part, from liver damage induced by a chemotherapeutic conjugate. Alternatively or additionally, thrombocytopenia results, at least in part, from bone marrow destruction induced by a chemotherapeutic conjugate.

Em geral, câncer ou doença cancerosa refere-se a ou descreve uma condição fisiológica em mamíferos que é tipicamente caracterizada por crescimento celular descontrolado. Exemplos de cânceres incluem, porém sem limitação, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma, e leucemia. Mais particularmente, exemplos de tais cânceres incluem carcinoma de células escamosas, câncer de pulmão de pequenas células, câncer de pulmão de não-pequenas células, câncer de pâncreas, glioblastoma multiforme, mela- noma, mieloma múltiplo, linfoma não-Hodgkin, câncer de esôfago/oral, cân- cer cervical, câncer de ovário, câncer endometrial, câncer de próstata, cân- cer de bexiga, hepatoma, câncer de mama, câncer de cólon e câncer retal, câncer ósseo, câncer renal, Ieucemias mielóide, linfocítica, mielocítica, e linfoblástica, e câncer de cabeça e pescoço, para mencionar alguns.In general, cancer or cancerous disease refers to or describes a physiological condition in mammals that is typically characterized by uncontrolled cell growth. Examples of cancers include, but are not limited to, carcinoma, lymphoma, blastoma, sarcoma, and leukemia. More particularly, examples of such cancers include squamous cell carcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, pancreatic cancer, glioblastoma multiforme, melanoma, multiple myeloma, non-Hodgkin's lymphoma, esophagus / oral, cervical cancer, ovarian cancer, endometrial cancer, prostate cancer, bladder cancer, hepatoma, breast cancer, colon and rectal cancer, bone cancer, kidney cancer, myeloid, lymphocytic, myelocytic, and lymphoblastic, and head and neck cancer, to name a few.

Em algumas modalidades, indivíduos adequados para receber uma terapia e/ou uma composição farmacêutica da invenção incluem paci- entes com câncer que sofrem de ou sejam suscetíveis à trombocitopenia. Tais pacientes com câncer podem incluir indivíduos diagnosticados com câncer (por exemplo, testados e verificados que têm câncer), indivíduos suspeitos de ter câncer (por exemplo, apresentando um ou mais sintomas indicativos de câncer, tendo um ou mais fatores de risco, ou sendo avalia- dos quanto à presença de câncer). Alternativamente ou adicionalmente, pa- cientes com câncer podem incluir indivíduos que já receberam terapia para câncer. D. Dosagem e administraçãoIn some embodiments, subjects suitable for receiving a therapy and / or pharmaceutical composition of the invention include cancer patients suffering from or susceptible to thrombocytopenia. Such cancer patients may include individuals diagnosed with cancer (eg, tested and found to have cancer), individuals suspected of having cancer (for example, having one or more symptoms indicative of cancer, having one or more risk factors, or being evaluated for the presence of cancer). Alternatively or additionally, cancer patients may include individuals who have already received cancer therapy. D. Dosage and Administration

A administração de IL-11 (e/ou outro agente), de acordo com os métodos da presente invenção, pode consistir em uma dose única ou em uma pluralidade de doses durante um período de tempo. A administração de interleucina-11 antes da administração de CMC-544 resulta na prevenção de lesão hepática e trombocitopenia associadas a CMC-544 (vide exemplo 1), e na redução de inflamação associada a CMC-544 (vide exemplo 2). Por con- seguinte, em certas modalidades, a IL-11 é antes da administração do con- jugado que produz trombocitopenia. Alternativamente ou adicionalmente, a IL-11 pode ser administrada concorrentemente com a administração do con- jugado e/ou subseqüente à administração do conjugado.Administration of IL-11 (and / or other agent) according to the methods of the present invention may consist of a single dose or a plurality of doses over a period of time. Administration of interleukin-11 prior to administration of CMC-544 results in prevention of CMC-544-associated liver damage and thrombocytopenia (see example 1), and reduction of CMC-544-associated inflammation (see example 2). Therefore, in certain embodiments, IL-11 is prior to administration of the thrombocytopenia-producing conjugate. Alternatively or additionally, IL-11 may be administered concurrently with administration of the conjugate and / or subsequent to administration of the conjugate.

As administrações da invenção podem ser efetuadas de qual- quer maneira conveniente tal como por injeção (subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, ou outra) ou por administração oral.The administrations of the invention may be effected in any convenient manner such as by injection (subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, or otherwise) or by oral administration.

Dependendo da via de administração, as doses eficazes podem ser calculadas segundo o peso corporal, a área superficial do corpo ou o tamanho do órgão. Otimização das dosagens apropriadas pode ser feita fa- cilmente pelo versado na técnica, por exemplo, à luz dos dados farmacoci- néticos em estudos pré-clínicos ou experiências clínicas com humanos. O regime de dosagem final geralmente vai ser determinado pelo médico assis- tente, que pode considerar vários fatores que modificam a ação dos fárma- cos, por exemplo, a atividade específica do fármaco, a severidade da lesão e a sensibilidade do paciente, a idade, a condição, o peso corporal, o sexo e a dieta do paciente, a severidade de qualquer infecção presente, o tempo de administração e similares fatores clínicos. À medida em que os estudos são conduzidos, vão surgir outras informação referentes aos níveis de dosagem apropriados e à duração do tratamento.Depending on the route of administration, effective doses may be calculated according to body weight, body surface area or organ size. Optimization of appropriate dosages may be readily accomplished by one of skill in the art, for example, in the light of pharmacokinetic data in preclinical studies or clinical trials with humans. The final dosing regimen will usually be determined by the attending physician, who may consider various factors that modify drug action, for example, specific drug activity, injury severity and patient sensitivity, age , the patient's condition, body weight, gender and diet, the severity of any infection present, the time of administration and similar clinical factors. As the studies are conducted, further information regarding appropriate dosage levels and duration of treatment will emerge.

Também será observado que, nos métodos da presente inven- ção, a IL-11 e/ou outros agentes terapêuticos (por exemplo, conjugados) podem ser empregados em terapias combinadas (isto é, podem ser adminis- trados concorrentemente com, antes de, ou subseqüente a uma ou mais terapias desejadas de procedimentos médicos). A combinação particular de terapias (terápicos ou procedimentos) a ser empregada em um regime com- binado normalmente vai levar em consideração a compatibilidade dos terá- picos e/ou procedimentos desejados e o efeito terapêutico desejado que se deseja obter.It will also be appreciated that in the methods of the present invention IL-11 and / or other therapeutic agents (e.g., conjugates) may be employed in combination therapies (ie, may be concurrently administered with, prior to, or subsequent to one or more desired therapies of medical procedures). The particular combination of therapies (therapies or procedures) to be employed in a combined regimen will normally take into consideration the compatibility of the desired therapies and / or procedures and the desired therapeutic effect desired.

Por exemplo, nas modalidades em que o conjugado é usado no tratamento de câncer, os métodos da presente invenção podem ser empre- gados em combinação com outros procedimentos que incluem cirurgia, ra- dioterapia (por exemplo, radiação γ, radioterapia com feixes de neurônios, radioterapia com feixes de elétrons, terapia com próton, braquiterapia, e isó- topos radioativos sistêmicos), terapia endócrina, hipertermia e crioterapia.For example, in the embodiments in which the conjugate is used to treat cancer, the methods of the present invention may be employed in combination with other procedures including surgery, radiotherapy (e.g., γ radiation, neuron beam radiotherapy). , electron beam radiotherapy, proton therapy, brachytherapy, and systemic radioactive isotopes), endocrine therapy, hyperthermia, and cryotherapy.

Alternativamente ou adicionalmente, os métodos da presente invenção podem ser empregados em combinação com outros agentes, por exemplo para atenuar um ou mais efeitos adversos (por exemplo, antieméti- cos, analgésicos, fármacos contra náusea), outras fármacos quimioterapêu- ticos aprovados, incluindo, porém sem limitação, fármacos alquilantes (me- cloretamina, clorambucila, ciclofosfamida, melfalano, ifosfamida), antimeta- bólitos (metotrexato), antagonistas de purina e antagonistas de pirimidina (6-mercaptopurina, 5-fluoruracila, citarabila, gencitabina), venenos de fuso (vimblastina, vincristina, vinorelbina, paclitaxel), podofilotoxinas (etoposida, irinotecano, topotecano), antibióticos (doxorubicina, bleomicina, mitomicina), nitrosouréias (carmustina, lomustina), íons inorgânicos (cisplatina, carbopla- tina), enzimas (asparaginase), e hormônios (tamoxifeno, leuprolida, flutami- da, e megestrol), para mencionar alguns. Para uma discussão mais comple- ta de terapias atuais para câncer, vide The Merck Manual, 17th Ed. 1999, cujas seções de terápicos contra câncer estão aqui incorporadas a título de referência.Alternatively or additionally, the methods of the present invention may be employed in combination with other agents, for example to alleviate one or more adverse effects (e.g., antiemetics, analgesics, nausea drugs), other approved chemotherapeutic drugs, including but without limitation, alkylating drugs (methloretamine, chlorambucil, cyclophosphamide, melphalan, ifosfamide), antimetabolites (methotrexate), purine antagonists and pyrimidine antagonists (6-mercaptopurine, 5-fluoruracil, cytarabyl, gemencitabine), venitabine spindle (vinblastine, vincristine, vinorelbine, paclitaxel), podophyllotoxins (etoposide, irinotecan, topotecan), antibiotics (doxorubicin, bleomycin, mitomycin), nitrosoureas (carmustine, lomustine), inorganic ions (cisplatin-asparinase, carboplatinase, cisplatin-enzymes) ), and hormones (tamoxifen, leuprolide, flutamide, and megestrol), to name a few. For a more complete discussion of current cancer therapies, see The Merck Manual, 17th Ed. 1999, whose sections on cancer therapies are incorporated herein by reference.

Os métodos da presente invenção também podem ser empre- gados junto com uma ou mais combinações de agentes citotóxicos como parte de um regime de tratamento, onde a combinação de agentes citotóxi- cos é selecionada, por exemplo, de CHOPP (cciclofosfamida, doxorubicina, vincristina, prednisona, e procarbazina); CHOP (ciclofosfamida, doxorubici- na, vincristina, e prednisona); COP (ciclofosfamida, vincristina, e predniso- na); CAP-BOP (ciclofosfamida, doxorubicina, procarbazina, bleomicina, vin- cristina, e prednisona); m-BACOD (metotrexato, bleomicina, doxorubicina, ciclofosfamida, vincristina, dexametasona, e leucovorina); ProMACE-MOPP (prednisona, metotrexato, doxorubicina, ciclofosfamida, etoposida, leucovo- rina, mecloetamina, vincristina, prednisona, e procarbazina); ProMACE- CytaBOM (prednisona, metotrexato, doxorubicina, ciclofosfamida, etoposida, leucovorina, citarabina, bleomicina, e vincristina); MACOP-B (metotrexato, doxorubicina, ciclofosfamida, vincristina, prednisona, bleomicina, e leucovo- rina); MOPP (mecloetamina, vincristina, prednisona, e procarbazina); ABVD (adriamicina/doxorubicina, bleomicina, vimblastina, e dacarbazina); MOPP (mecloetamina, vincristina, prednisona e procarbazina) alternando com ABV (adriamicina/doxorubicina, bleomicina, e vimblastina); MOPP (mecloetamina, vincristina, prednisona, e procarbazina) alternando com ABVD (adriamici- na/doxorubicina, bleomicina, vimblastina, e dacarbazina); ChIVPP (cloram- bucil, vimblastina, procarbazina, e prednisona); IMVP-16 (ifosfamida, meto- trexato, e etoposida); MIME (metil-gag, ifosfamida, metotrexato, e etoposi- da); DHAP (dexametasona, citaribina em alta dose, e cisplatina); ESHAP (etoposida, metilpredisolona, alta dose high-dose citarabina, e cisplatina); CEPP(B) (ciclofosfamida, etoposida, procarbazina, prednisona, e bleomici- na); CAMP (lomustina, mitoxantrona, citarabina, e prednisona); CVP-1 (ciclo- fosfamida, vincristina, e prednisona), ESHOP (etoposida, metilpredisolona, citarabina em alta dose, vincristina e cisplatina); EPOCH (etoposida, vincris- tina, e doxorubicina por 96 horas com doses de bolo de ciclofosfamida e prednisona oral), ICE (ifosfamida, ciclofosfamida, e etoposida), CEPP(B) (ciclofosfamida, etoposida, procarbazina, prednisona, e bleomicina), CHOP- B (ciclofosfamida, doxorubicina, vincristina, prednisona, e bleomicina), CEPP-B (ciclofosfamida, etoposida, procarbazina, e bleomicina), e P/DOCE (epirubicina ou doxorubicina, vincristina, ciclofosfamida, e prednisona).The methods of the present invention may also be employed in conjunction with one or more combinations of cytotoxic agents as part of a treatment regimen, wherein the combination of cytotoxic agents is selected, for example, from CHOPP (cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine , prednisone, and procarbazine); CHOP (cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine, and prednisone); COP (cyclophosphamide, vincristine, and prednisone); CAP-BOP (cyclophosphamide, doxorubicin, procarbazine, bleomycin, vincrine, and prednisone); m-BACOD (methotrexate, bleomycin, doxorubicin, cyclophosphamide, vincristine, dexamethasone, and leucovorin); ProMACE-MOPP (prednisone, methotrexate, doxorubicin, cyclophosphamide, etoposide, leukovorine, mecloetamine, vincristine, prednisone, and procarbazine); ProMACE-CytaBOM (prednisone, methotrexate, doxorubicin, cyclophosphamide, etoposide, leucovorin, cytarabine, bleomycin, and vincristine); MACOP-B (methotrexate, doxorubicin, cyclophosphamide, vincristine, prednisone, bleomycin, and leukovorine); MOPP (mecloetamine, vincristine, prednisone, and procarbazine); ABVD (adriamycin / doxorubicin, bleomycin, vinblastine, and dacarbazine); MOPP (mecloetamine, vincristine, prednisone and procarbazine) alternating with ABV (adriamycin / doxorubicin, bleomycin, and vinblastine); MOPP (mecloetamine, vincristine, prednisone, and procarbazine) alternating with ABVD (adriamycin / doxorubicin, bleomycin, vinblastine, and dacarbazine); ChIVPP (chloramobilyl, vinblastine, procarbazine, and prednisone); IMVP-16 (ifosfamide, methotrexate, and etoposide); MIME (methylgag, ifosfamide, methotrexate, and etoposide); DHAP (dexamethasone, high dose cytaribine, and cisplatin); ESHAP (etoposide, methylpredisolone, high-dose high-dose cytarabine, and cisplatin); CEPP (B) (cyclophosphamide, etoposide, procarbazine, prednisone, and bleomycin); CAMP (lomustine, mitoxantrone, cytarabine, and prednisone); CVP-1 (cyclophosphamide, vincristine, and prednisone), ESHOP (etoposide, methylpredisolone, high-dose cytarabine, vincristine, and cisplatin); EPOCH (etoposide, vincrystine, and doxorubicin for 96 hours with bolus doses of oral cyclophosphamide and prednisone), ICE (ifosfamide, cyclophosphamide, and etoposide), CEPP (B) (cyclophosphamide, etoposide, procarbazine, prednisone, and bleomycin) , CHOP-B (cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine, prednisone, and bleomycin), CEPP-B (cyclophosphamide, etoposide, procarbazine, and bleomycin), and P / DOCE (epirubicin or doxorubicin, vincristine, cyclophosphamide), and prednisone.

Alternativamente ou adicionalmente, os métodos da presente invenção podem ser empregados junto com terapias envolvendo a adminis- tração de um ou mais agentes bioativos selecionados do grupo que consiste em anticorpos, fatores de crescimento (por exemplo, fator de necrose turno- ral (TNF), fator estimulante de colônias (CSF)1 fator estimulante de colônias de granulócitos (G-CSF) ou fator estimulante de colônias de granulócitos- macrófagos (GM-CSF)), hormônios (por exemplo, estrogênios, androgênios, progestinas, e corticosteróides), citocinas, anti-hormônios, xantinas, interleu- cinas (por exemplo, IL-2), e interferons.Alternatively or additionally, the methods of the present invention may be employed in conjunction with therapies involving the administration of one or more bioactive agents selected from the group consisting of antibodies, growth factors (eg, shunt necrosis factor (TNF)). , Colony-stimulating factor (CSF) 1 Granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) or Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF)), hormones (eg, estrogens, androgens, progestins, and corticosteroids) , cytokines, antihormones, xanthines, interleukins (eg, IL-2), and interferons.

E. MecanismosE. Mechanisms

A cinética de diminuição de plaquetas fornece um guia grosseiro do mecanismo da trombocitopenia, apesar de a cinética de diminuição de plaquetas ser um critério altamente variável e poder ser dependente da enti- dade química usada. Por exemplo, camundongos tratados com ciclofosfa- mida mostraram desenvolver um nadir de plaquetas no dia 3 (G. Hangoc et al., Blood, 1993, 81: 965-972); e camundongos tratados com carboplatina e irradiação apresentam um nadir no dia 9 (J.P. Leonard et al., Blood, 1994, 83: 1499-1506). Com base nos presentes exemplos, a carboplatina isolada deu um nadir de 11. Todos esses agentes afetam a produção de plaquetas, mas eles têm efeitos muito diferentes no tempo do nadir de plaquetas. Efei- tos similares foram reportados em macacos. Foi verificado que a carboplati- na dá um nadir de plaquetas no dia 13-14 (F.J. Schlerman et al., Stem Cells 1996, 14: 517-532), mas o ACNU (isto é, cloridrato de 3-[(4-amino-2-metil-5- pirimidinil)metil]-1-(2-cloroetil)-1-nitrosouréia) não produz um nadir antes do dia 21 (M. Saitoh et al., J. Interferon and Cytokine Res., 2000, 20: 539-545). Em seres humanos, CHOP mostrou produzir um nadir em torno do dia 9. Apesar das diferenças, acredita-se que a trombocitopenia produzida por es- ses agentes quimioterapêuticos clássicos, todos eles sendo toxinas da me- dula óssea, resulta da rutura da produção de plaquetas na medula óssea.Platelet decrease kinetics provides a rough guide to the thrombocytopenia mechanism, although platelet decrease kinetics is a highly variable criterion and may be dependent on the chemical entity used. For example, cyclophosphamide-treated mice were shown to develop a platelet nadir on day 3 (G. Hangoc et al., Blood, 1993, 81: 965-972); and carboplatin-treated and irradiated mice show a nadir on day 9 (J.P. Leonard et al., Blood, 1994, 83: 1499-1506). Based on the present examples, carboplatin alone gave a nadir of 11. All of these agents affect platelet production, but they have very different effects on platelet nadir time. Similar effects have been reported in monkeys. Carboplatin is found to give a platelet nadir on day 13-14 (FJ Schlerman et al., Stem Cells 1996, 14: 517-532), but ACNU (ie 3 - [(4- amino-2-methyl-5-pyrimidinyl) methyl] -1- (2-chloroethyl) -1-nitrosurea) does not produce a nadir before day 21 (M. Saitoh et al., J. Interferon and Cytokine Res., 2000 , 20: 539-545). In humans, CHOP has been shown to produce a nadir around day 9. Despite the differences, it is believed that thrombocytopenia produced by these classic chemotherapeutic agents, all being bone marrow toxins, results from disruption of the production of platelets in the bone marrow.

Os mecanismos da trombopoiese também são muito complexos e podem ser impactados de muitas maneiras diferentes. Muitos agentes quimioterapêuticos têm efeitos diretos sobre os megacariócitos e sobre os progenitores mefacariocíticos humanos (CFU-megs). Como os megacarióci- tos não se dividem, eles não podem necessariamente interromper a produ- ção de plaquetas imediatamente quando atingidos por uma toxina específica para ciclo. Se os efeitos do agente químico forem direcionados mais para os progenitores e para os megacariócitos prematuros, o efeito sobre as plaque- tas periféricas é reduzido e o nadir ocorre mais tarde. Se os efeitos forem diretamente sobre os megacariócitos e afetarem proteínas assim como DNA, os efeitos sobre as plaquetas circulantes podem ocorrer mais rapida- mente.The mechanisms of thrombopoiesis are also very complex and can be impacted in many different ways. Many chemotherapeutic agents have direct effects on megakaryocytes and human mefakaryocytic progenitors (CFU-megs). Because megakaryocytes do not divide, they cannot necessarily stop platelet production immediately when struck by a cycle-specific toxin. If the effects of the chemical agent are directed more toward the progenitors and premature megakaryocytes, the effect on peripheral platelets is reduced and nadir occurs later. If the effects are directly on megakaryocytes and affect proteins as well as DNA, effects on circulating platelets may occur more rapidly.

Alternativamente, o CMC-544 (e outros conjugados de proteína similares) pode ter um nítido impacto sobre o fígado (transaminases libera- das) e sobre a produção de TPO no fígado (níveis reduzidos de TPO). A produção de TPO parece diminuir logo depois da administração de CMC- 544. É de se esperar que isto resulte em uma redução imediata na estimula- ção de megacariócitos e uma redução associada da produção de plaquetas. Entretanto, como a meia-vida da plaqueta é de cerca de 5 dias nos seres humanos, a cinética sugere que este não seja o único mecanismo da trom- bocitopenia.Alternatively, CMC-544 (and other similar protein conjugates) may have a clear impact on the liver (released transaminases) and liver TPO production (reduced TPO levels). TPO production appears to decrease soon after CMC-544 administration. This is expected to result in an immediate reduction in megakaryocyte stimulation and an associated reduction in platelet production. However, since platelet half-life is about 5 days in humans, kinetics suggest that this is not the only mechanism of thrombocytopenia.

Os efeitos do oprelvekin (IL-11) observados nos presentes e- xemplos são consistentes com os efeitos conhecidos como agente protetor do fígado (em animais, vide por exemplo, W.L. Trepicchio et ai, Toxicol. Pa- thol., 2001, 29: 242-249; e em seres humanos, vide por exemplo, R. Ghalib et ai, Hepatology, 2003, 37: 1165-1171). Sua capacidade de melhorar a queda de plaquetas associada ao tratamento com CMC-544, quando IL-11 é dada profilaticamente mas não quando ela é dada concomitantemente, tam- bém é consistente com a cinética conhecida de produtos plaquetários indu- zidos por IL-11. A administração de IL-11 6 horas depois da administração de CMC-544 pode ter sido muito tardia para produzir efeito protetor total so- bre o fígado, mas independente disso pode ter algum efeito positivo.The effects of oprelvekin (IL-11) observed in the present examples are consistent with the effects known as a liver protective agent (in animals, see for example, WL Trepicchio et al., Toxicol. Patol., 2001, 29: 242-249; and in humans, see for example, R. Ghalib et al., Hepatology, 2003, 37: 1165-1171). Its ability to improve platelet drop associated with CMC-544 treatment when IL-11 is given prophylactically but not when given concurrently is also consistent with the known kinetics of IL-11-induced platelet products. . Administration of IL-11 6 hours after CMC-544 administration may have been too late to produce full protective effect on the liver, but regardless it may have some positive effect.

Trombocitopenia associada ao tratamento usando CMC-544 (e outros conjugados de proteína similares) pode resultar, pelo menos em par- te, de rutura da produção de TPO secundária à lesão hepática e é distinta daquela causada por agentes quimioterapêuticos convencionais que rom- pem a produção de plaquetas Iesionando células da medula óssea. V. Composições farmacêuticas e kitsTreatment-associated thrombocytopenia using CMC-544 (and other similar protein conjugates) may result, at least in part, from disruption of TPO production secondary to liver injury and is distinct from that caused by conventional chemotherapeutic agents that disrupt platelet production Iesioning bone marrow cells. V. Pharmaceutical Compositions and Kits

Em um outro aspecto, a presente invenção fornece composi- ções farmacêuticas compreendendo uma quantidade terapeuticamente efi- caz de interleucina-11 (IL-11) e pelo menos um veículo ou excipiente fisiolo- gicamente aceitável.In another aspect, the present invention provides pharmaceutical compositions comprising a therapeutically effective amount of interleukin-11 (IL-11) and at least one physiologically acceptable carrier or excipient.

Um veículo ou excipiente fisiologicamente aceitável geralmente é um meio veículo ou um excipiente que não bloqueia a eficácia da atividade biológica dos ingredientes ativos da composição e que não excessivamente tóxico para o hospedeiro nas concentrações às quais ele é administrado. O termo inclui solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibac- terianos, agentes isotônicos, agentes retardadores de absorção, e similares. O uso de tais meios e agentes para a formulação de substâncias farmaceu- ticamente ativas é bem-conhecido na técnicatura (vide, por exemplo, "Re- mington's Pharmaceutical Sciences", E.W. Martin, 18th Ed., 1990, Mack Pu- blishing Co.: Easton, PA, que está aqui incorporado em sua integridade a título de referência).A physiologically acceptable carrier or excipient is generally a carrier medium or an excipient that does not block the effectiveness of the biological activity of the active ingredients of the composition and is not excessively toxic to the host at the concentrations to which it is administered. The term includes solvents, dispersion media, coatings, antibacterial agents, isotonic agents, absorption retarding agents, and the like. The use of such media and agents for the formulation of pharmaceutically active substances is well known in the art (see, for example, "Remington's Pharmaceutical Sciences", EW Martin, 18th Ed., 1990, Mack Publishing Co. .: Easton, PA, which is incorporated herein by reference in its entirety).

Em certas modalidades, a IL-11 é o único ingrediente ativo em uma composição farmacêutica da invenção. Em outras modalidades, a composição farmacêutica compreende ainda um ou mais outros agentes terapêuticos (por exemplo, um ou mais conjugados). Em ainda outras moda- lidades, a composição farmacêutica compreende ainda uma combinação de agentes terapêuticos. Um ou mais conjugados incluídos em uma composi- ção farmacêutica da invenção podem induzir lesão hepática e/ou destruição da medula óssea.In certain embodiments, IL-11 is the only active ingredient in a pharmaceutical composition of the invention. In other embodiments, the pharmaceutical composition further comprises one or more other therapeutic agents (e.g., one or more conjugates). In still other embodiments, the pharmaceutical composition further comprises a combination of therapeutic agents. One or more conjugates included in a pharmaceutical composition of the invention may induce liver damage and / or bone marrow destruction.

A. FormulaçõesA. Formulations

Em certas modalidades, uma composição farmacêutica da pre- sente invenção é administrada nas quantidades e pelo tempo necessários para obter um resultado desejado. Por exemplo, uma composição farmacêu- tica pode ser administrada nas quantidades e pelo tempo necessários para prevenir, reduzir, aliviar ou deter a trombocitopenia induzida por fármaco em um indivíduo (por exemplo, trombocitopenia resultante da administração de um conjugado). Mais especificamente, uma composição farmacêutica da invenção pode ser administrada nas quantidades e pelo tempo para preve- nir, reduzir, aliviar ou deter a destruição anormalmente alta das plaquetas circulantes e/ou a produção diminuída de plaquetas pela medula óssea.In certain embodiments, a pharmaceutical composition of the present invention is administered in the amounts and for the time necessary to obtain a desired result. For example, a pharmaceutical composition may be administered in the amounts and for the time necessary to prevent, reduce, alleviate or arrest drug-induced thrombocytopenia in an individual (e.g., thrombocytopenia resulting from the administration of a conjugate). More specifically, a pharmaceutical composition of the invention may be administered in amounts and time to prevent, reduce, alleviate or arrest the abnormally high destruction of circulating platelets and / or decreased bone marrow platelet production.

Uma composição farmacêutica da presente invenção também pode ser administrada nas quantidades e pelo tempo necessários para pre- venir, reduzir, aliviar ou deter a trombocitopenia resultante, pelo menos em parte, de lesão hepática induzida por fármaco. Alternativamente ou adicio- nalmente, uma composição farmacêutica pode ser administrada nas quanti- dades e pelo tempo necessários para prevenir, reduzir, aliviar ou deter a trombocitopenia resultante, pelo menos em parte, de destruição da medula óssea induzida por fármaco.A pharmaceutical composition of the present invention may also be administered in the amounts and for the time necessary to prevent, reduce, alleviate or arrest thrombocytopenia resulting at least in part from drug-induced liver injury. Alternatively or additionally, a pharmaceutical composition may be administered in the amounts and for the time necessary to prevent, reduce, alleviate or arrest thrombocytopenia resulting at least in part from drug-induced bone marrow destruction.

Em certas composições, interleucina-11 (IL-11), um ou mais conjugados e um ou mais veículos ou excipientes fisiologicamente aceitá- veis são combinados em uma ou mais preparações para administração si- multânea ou seqüêncial da IL-11 e dos conjugados. Mais especificamente, uma composição da invenção pode ser formulada de maneira que a IL-11 e os conjugados possam ser administrados ao mesmo ou independentemente um do outro (por exemplo, a composição pode compreender uma ou mais preparações em recipientes individuais).In certain compositions, interleukin-11 (IL-11), one or more conjugates and one or more physiologically acceptable carriers or excipients are combined in one or more preparations for simultaneous or sequential administration of IL-11 and conjugates. More specifically, a composition of the invention may be formulated such that IL-11 and conjugates may be administered to one another or independently of one another (for example, the composition may comprise one or more preparations in individual containers).

As composições farmacêuticas, de acordo com a presente in- venção, podem ser administradas usando qualquer quantidade e qualquer via de administração eficaz para prevenir, aliviar, reduzir ou deter a trombo- citopenia que de outra forma seria observada na ausência de administração de IL-11.Pharmaceutical compositions according to the present invention may be administered using any amount and any route of administration effective to prevent, alleviate, reduce or arrest thrombocytopenia that would otherwise be observed in the absence of IL-1 administration. 11

Como já mencionado acima, a quantidade exata de composição farmacêutica a ser administrada pode variar de indivíduo para indivíduo, de- pendendo da espécie, da idade, e da condição geral do indivíduo, da severi- dade da condição, do agente terapêutico particular, do modo de administra- ção, da severidade da trombocitopenia e/ou da lesão hepática ou destruição da medula óssea que ele induz, e similares fatores.As already mentioned above, the exact amount of pharmaceutical composition to be administered may vary from individual to individual, depending on the species, age, and general condition of the individual, the severity of the condition, the particular therapeutic agent, mode of administration, the severity of thrombocytopenia and / or liver damage or bone marrow destruction it induces, and similar factors.

As formulações farmacêuticas ótimas desejáveis podem ser de- terminadas dependendo da via de administração e da dosagem desejada. Tais formulações podem influenciar o estado físico, a estabilidade, a taxa de liberação in vivo, e taxa de depuração in vivo dos compostos administrados. As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser formuladas na forma de unidade de dosagem para facilidade de administra- ção e uniformidade da dosagem. A expressão "forma unitária de dosagem" refere-se tipicamente a uma unidade fisicamente distinta de IL-11 isolada, conjugado, isolado, ou combinação de IL-11 e conjugado apropriada para o paciente a ser tratado. Ficará entendido, no entanto, que a dosagem diária total das composições da presente invenção geralmente será decidida pelo médico assistente dentro do escopo de critério médico razoável.Desirable optimal pharmaceutical formulations may be determined depending upon the route of administration and the desired dosage. Such formulations may influence the physical state, stability, in vivo release rate, and in vivo clearance rate of the administered compounds. The pharmaceutical compositions of the present invention may be formulated in unit dosage form for ease of administration and uniformity of dosage. The term "dosage unit form" typically refers to a physically distinct unit of IL-11 isolated, conjugated, isolated, or combination of IL-11 and conjugate appropriate for the patient to be treated. It will be understood, however, that the total daily dosage of the compositions of the present invention will generally be decided by the attending physician within the scope of reasonable medical discretion.

Depois da formulação com um ou mais veículos ou excipientes fisiologicamente aceitáveis apropriados em uma dosagem desejada (ou do- sagens desejadas), as composições farmacêuticas da presente invenção podem ser administradas a seres humanos ou outros mamíferos por qual- quer via adequada. Por exemplo, as composições farmacêuticas da presen- te invenção podem ser administradas por via oral, parenteral, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular ou subcutânea, dependendo da condição sen- do tratada (por exemplo, trombocitopenia resultante de destruição da medu- la óssea ou trombocitopenia resultante de lesão hepática) por administração de pelo menos um agente terapêutico.Following formulation with one or more appropriate physiologically acceptable carriers or excipients at a desired dosage (or desired dosages), the pharmaceutical compositions of the present invention may be administered to humans or other mammals by any suitable route. For example, the pharmaceutical compositions of the present invention may be administered orally, parenterally, intravenously, intraperitoneally, intramuscularly or subcutaneously, depending on the condition being treated (e.g., thrombocytopenia resulting from bone marrow destruction or thrombocytopenia). resulting from liver damage) by administering at least one therapeutic agent.

Preparações injetáveis, por exemplo, suspensões aquosas ou oleaginosas injetáveis estéreis, podem ser formuladas de acordo com pro- cedimentos estabelecidos, por exemplo, usando agentes dispersantes ou umectantes adequados, e agentes suspensores. As preparações injetáveis estéreis também podem ser soluções, suspensões ou emulsões injetáveis estéreis em um diluente ou solvente parenteralmente aceitável atóxico, por exemplo, como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solven- tes aceitáveis que podem ser empregados estão água, solução de Ringer1 solução de cloreto de sódio U.S.P. e isotônica. Além disso, óleos fixos esté- reis são convencionalmente empregados como solvente ou meio de sus- pensão. Para tanto pode ser empregado qualquer óleo fixo doce inclusive monoglicerídeos ou diglicerídeos sintéticos. Ácidos graxos tais como ácido oléico também podem ser usados na preparação de injetáveis.Injectable preparations, for example, sterile injectable aqueous or oleaginous suspensions may be formulated according to established procedures, for example using suitable dispersing or wetting agents, and suspending agents. Sterile injectable preparations may also be sterile injectable solutions, suspensions or emulsions in a nontoxic parenterally acceptable diluent or solvent, for example, as a solution in 1,3-butanediol. Among the acceptable vehicles and solvents that may be employed are water, Ringer's solution1 sodium chloride solution U.S.P. and isotonic. In addition, sterile fixed oils are conventionally employed as a solvent or suspending medium. For this purpose any sweet fixed oil may be employed including synthetic monoglycerides or diglycerides. Fatty acids such as oleic acid may also be used in the preparation of injectables.

As formulações injetáveis da invenção podem ser esterilizadas, por exemplo, por filtração através de um filtro retentor de bactérias, ou pela incorporação de agentes esterilizantes na forma de composições sólidas estéreis que podem ser dissolvidas ou dispersadas em água estéril ou outro meio injetável estéril antes de serem usadas.The injectable formulations of the invention may be sterilized, for example, by filtration through a bacteria-retaining filter, or by incorporation of sterilizing agents in the form of sterile solid compositions which may be dissolved or dispersed in sterile water or other sterile injectable media. be used.

Para prolongar o efeito de um fármaco, geralmente é desejável reduzir a absorção do fármaco de uma injeção subcutânea ou intramuscular. Isto pode ser obtido, por exemplo, através do uso de uma suspensão líquida de material cristalino ou amorfo com pobre solubilidade em água. A taxa de absorção do fármaco depende então de sua taxa de dissolução querpor sua vez, pode depender do tamanho do cristal e da forma cristalina. Alternativa- mente, a absorção retardada de uma forma de fármaco administrada por via parenteral é obtida por dissolução ou suspensão do fármaco em um veículo oleoso. Formas de depósito injetáveis são feitas por formação de matrizes microencapsuladas do fármaco em polímeros biodegradáveis tais como poli- lactídeo-poliglicolídeo. Dependendo da proporção de fármaco para polímero e da natureza do polímero particular empregado, a taxa de liberação do fár- maco pode ser controlada. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli(ortoésteres) e poli(anidridos). Formulações de depósito injetá- veis também podem ser preparados por aprisionamento do fármaco em Ii- possomas ou microemulsões que são compatíveis com os tecidos do corpo.To prolong the effect of a drug, it is generally desirable to reduce the absorption of the drug from a subcutaneous or intramuscular injection. This can be achieved, for example, by using a liquid suspension of crystalline or amorphous material with poor water solubility. The absorption rate of the drug then depends on its dissolution rate which in turn may depend on crystal size and crystalline form. Alternatively, delayed absorption of a parenterally administered drug form is achieved by dissolving or suspending the drug in an oily vehicle. Injectable depot forms are made by forming microencapsulated drug matrices in biodegradable polymers such as poly lactide polyglycolide. Depending on the ratio of drug to polymer and the nature of the particular polymer employed, the rate of drug release may be controlled. Examples of other biodegradable polymers include poly (orthoesters) and poly (anhydrides). Injectable depot formulations may also be prepared by entrapping the drug in symptoms or microemulsions that are compatible with body tissues.

Formas de dosagem líquidas para administração oral incluem, porém sem limitação, emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xa- ropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. Além dos ingredientes ativos, as formas de dosagem líquidas podem conter diluentes inertes comumente usados na técnica tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agen- tes solubilizantes e emulsificantes tais como álcool etílico, álcool isopropílico etil carbonato, etil acetato, álcool benzílico, benzil benzoato, propileno glicol, 1,3-butileno glicol, dimetilformamida, óleos (em particular óleos de algodão, amendoim, milho, germe, oliva, rícino, e gergelim), glicerol, álcool tetrahidro- furfurílico, polietileno glicóis e ésteres de ácido graxo de sorbitana, e mistu- ras dos mesmos. Além de diluentes inertes, as composições orais também podem incluir adjuvantes tais como agentes umectantes, agentes emulsifi- cantes e suspensores, agentes adoçantes, flavorizantes, e perfumantes.Liquid dosage forms for oral administration include, but are not limited to, pharmaceutically acceptable emulsions, microemulsions, solutions, suspensions, syrups and elixirs. In addition to the active ingredients, liquid dosage forms may contain inert diluents commonly used in the art such as, for example, water or other solvents, solubilizing agents and emulsifiers such as ethyl alcohol, isopropyl ethyl carbonate alcohol, ethyl acetate, benzyl alcohol. , benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, dimethylformamide, oils (in particular cotton, peanut, corn, germ, olive, castor, and sesame oils), glycerol, tetrahydro-furfuryl alcohol, polyethylene glycols and esters of sorbitan fatty acid, and mixtures thereof. In addition to inert diluents, oral compositions may also include adjuvants such as wetting agents, emulsifying and suspending agents, sweetening, flavoring, and perfuming agents.

Formas de dosagem sólidas para administração oral incluem cápsulas, comprimidos, pílulas, pós, e grânulos. Nestas formas de dosagem sólidas, o composto ativo pode ser misturado com pelo menos um excipien- te ou veículo farmaceuticamente aceitável inerte tal como citrato de sódio ou fosfato dicálcico e/ou (a) cargas ou extensores tais como amidos, lactose, sacarose, glicose, manitol, e ácido silícico; (b) aglutinantes tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidinona, sa- carose, e acácia; (c) umectantes tais como gliceroí; (d) agentes desintegran- tes tais como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, certos silicatos, e carbonato de sódio; (e) agentes retardado- res de solução tais como parafina, (f) aceleradores de absorção tais como compostos de amônio quaternário; (g) agentes umectantes tais como, por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de gliceroí; (h) absorventes tais como caulina e bentonita; e (i) lubrificantes tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, Iauril sulfato de só- dio, e misturas dos mesmos. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, a forma de dosagem também pode compreender agentes tamponantes.Solid dosage forms for oral administration include capsules, tablets, pills, powders, and granules. In such solid dosage forms, the active compound may be mixed with at least one inert pharmaceutically acceptable excipient or carrier such as sodium citrate or dicalcium phosphate and / or (a) fillers or extenders such as starches, lactose, sucrose, glucose. mannitol and silicic acid; (b) binders such as, for example, carboxymethylcellulose, alginates, gelatin, polyvinylpyrrolidinone, saccharose, and acacia; (c) humectants such as glycerol; (d) disintegrating agents such as agar, calcium carbonate, potato or tapioca starch, alginic acid, certain silicates, and sodium carbonate; (e) solution retarding agents such as paraffin; (f) absorption accelerators such as quaternary ammonium compounds; (g) wetting agents such as, for example, cetyl alcohol and glycerol monostearate; (h) absorbents such as kaolin and bentonite; and (i) lubricants such as talc, calcium stearate, magnesium stearate, solid polyethylene glycols, sodium lauryl sulfate, and mixtures thereof. In the case of capsules, tablets and pills, the dosage form may also comprise buffering agents.

Composições sólidas de tipo similar também podem ser empre- gadas com cargas em cápsulas de gelatina mole e dura usando excipientes tais como lactose ou açúcar lácteo assim como polietileno glicóis de alto pe- so molecular e similares. As formas de dosagem sólidas como comprimidos, drágeas, cápsulas, pílulas, e grânulos podem ser preparadas com revesti- mentos e envoltórios tais como revestimentos entéricos e similares revesti- mentos bem-conhecidos na técnicatura de formulação farmacêutica. Elas podem opcionalmente conter agentes opacificantes e também podem ter uma composição tal que liberam os ingredientes ativos apenas, ou preferen- cialmente, em uma certa parte do trato intestinal, opcionalmente, de maneira retardada. Exemplos de composições de revestimento que podem ser usa- das incluem substâncias poliméricas e ceras. Composições sólidas de tipo similar também podem ser empregadas com cargas em cápsulas de gelatina mole e dura usando excipientes tais como lactose ou açúcar lácteo assim como polietileno glicóis de alto peso molecular e similares.Solid compositions of a similar type may also be employed as fillers in soft and hard gelatin capsules using excipients such as lactose or milk sugar as well as high molecular weight polyethylene glycols and the like. Solid dosage forms such as tablets, dragees, capsules, pills, and granules may be prepared with coatings and wraps such as enteric coatings and the like coatings well known in the pharmaceutical formulation art. They may optionally contain opacifying agents and may also have a composition such that they release the active ingredients only, or preferably in a certain part of the intestinal tract, optionally in a delayed manner. Examples of coating compositions that may be used include polymeric substances and waxes. Solid compositions of similar type may also be employed as fillers in soft and hard gelatin capsules using excipients such as lactose or dairy sugar as well as high molecular weight polyethylene glycols and the like.

Os compostos ativos (por exemplo, IL-11 e/ou um ou mais con- jugados) também podem estar em forma microencapsulada com um ou mais excipientes como observado acima. As formas de dosagem sólidas como comprimidos, drágeas, cápsulas, pílulas, e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e envoltórios tais como revestimentos entéricos, revesti- mentos para controle da liberação e similares revestimentos bem- conhecidos na técnica de formulação farmacêutica. Nestas formas de dosa- gem sólidas o composto ativo pode ser misturado com pelo menos um dilu- ente inerte tal como sacarose, Iactose ou amido. Tais formas de dosagem também podem compreender, como é comum na prática, substâncias adi- cionais que não diluentes inertes, por exemplo, lubrificantes de tabletagem e similares adjuvantes de tabletagem tais como estearato de magnésio e celu- lose microcristalina. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, as formas de dosagem também podem compreender agentes tamponantes. Elas po- dem opcionalmente conter agentes opacificantes e também podem uma composição tal que elas liberam os ingredientes ativos somente, ou prefe- rencialmente, em uma certa parte do trato intestinal, opcionalmente, de ma- neira retardada. Exemplos de composições de revestimento que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras. B. KitsThe active compounds (e.g., IL-11 and / or one or more conjugates) may also be in microencapsulated form with one or more excipients as noted above. Solid dosage forms such as tablets, pills, capsules, pills, and granules may be prepared with coatings and wraps such as enteric coatings, release control coatings and the like coatings well known in the pharmaceutical formulation art. In such solid dosage forms the active compound may be mixed with at least one inert diluent such as sucrose, lactose or starch. Such dosage forms may also comprise, as is common in practice, additional inert non-diluting substances, for example tableting lubricants and similar tableting aids such as magnesium stearate and microcrystalline cellulose. In the case of capsules, tablets and pills, the dosage forms may also comprise buffering agents. They may optionally contain opacifying agents and may also have a composition such that they release the active ingredients only, or preferably, in a certain portion of the intestinal tract, optionally delayed. Examples of coating compositions that may be used include polymeric substances and waxes. B. Kits

Em ainda um outro aspecto, a presente invenção fornece paco- tes ou kits farmacêuticos compreendendo um ou mais recipientes (por e- xemplo, frascos, ampolas, tubos de ensaio, balões ou garrafas) contendo um ou mais componentes das composições farmacêuticas da invenção, por exemplo, possibilitando a administração simultânea ou seqüêncial da inter- leucina-11 e dos conjugados.In yet another aspect, the present invention provides pharmaceutical packages or kits comprising one or more containers (e.g., vials, ampoules, vials, flasks or bottles) containing one or more components of the pharmaceutical compositions of the invention. for example, allowing simultaneous or sequential administration of interleukin-11 and conjugates.

Em certas modalidades, um kit da invenção inclui um ou mais agentes terapêuticos aprovados adicionais para uso como uma terapia combinada (por exemplo, uma ou mais fármacos anticâncer descritos aci- ma). Opcionalmente associada a estes recipientes pode vir um aviso no formato determinado por um órgão governamental regulador da produção, uso ou venda de produtos farmacêuticos, aviso este que indica a aprovação do parte do órgão para produção, uso ou venda para administração huma- na.In certain embodiments, a kit of the invention includes one or more additional approved therapeutic agents for use as a combination therapy (for example, one or more anticancer drugs described above). Optionally associated with these containers may come a notice in the format determined by a government agency regulating the production, use or sale of pharmaceutical products, which indicates the approval of the part of the agency for production, use or sale for human administration.

Os diferentes componentes podem ser fornecidos em forma só- lida (por exemplo, liofilizada) ou líquida. Cada componente geralmente será adequado na quantidade contida em seu respectivo recipiente ou oferecido em uma forma concentrada. Os kits também podem incluir meios para a re- constituição dos componentes liofilizados. Os recipientes individuais do kit são de preferência mantidos bem-guardados para venda comercial.The different components may be supplied in solid (eg lyophilized) or liquid form. Each component will generally be suitable in the amount contained in its respective container or offered in a concentrated form. Kits may also include means for reconstituting lyophilized components. The individual containers of the kit are preferably kept well-kept for commercial sale.

ExemplosExamples

Os exemplos a seguir descrevem alguns modos preferidos de fa- zer e praticar a presente invenção. No entanto, deve ficar entendido que es- ses exemplos são ilustrativos apenas e não pretendem limitar o escopo da invenção. Além disso, a menos que a descrição em um exemplo esteja a- presentada no tempo passado, o texto, assim como o resto do relatório, não sugere que as experiências tenham sido efetivamente realizadas nem que os dados tenham sido efetivamente obtidos.The following examples describe some preferred ways of doing and practicing the present invention. However, it should be understood that these examples are illustrative only and are not intended to limit the scope of the invention. Moreover, unless the description in one example is presented in the past tense, the text, like the rest of the report, does not suggest that the experiments were actually performed or that the data were actually obtained.

Exemplo 1: Efeito da IL-11 sobre a trombocitopenia induzida por CMC- 544 em camundongos nusExample 1: Effect of IL-11 on CMC-544-induced thrombocytopenia in nude mice

Desenho Experimental:Experimental draw:

O efeito da IL-11 (NEUMEGA®) sobre a trombocitopenia induzi- da por CMC-544 está mostrado no presente exemplo. A dose inicial de IL-11 foi administrada i.p. diariamente (250 mg/kg) começando até 2 dias antes, ou BID (125 mg/kg) começando até 8 horas depois da administração de CMC-544 (considerado dia 0). A IL-11 foi dada diariamente por até 8 dias após a administração de CMC-544. No dia O, os camundongos foram mistu- rados para obter valores de plaquetas da linha basal e então receberam veí- culo ou CMC-544 a 4 mg/camundongo i.p. Doses mais altas ou mais baixas de CMC-544 também foram administradas. Sangue foi coletado em vários ocasiões até 3 dias depois da administração do fármaco.The effect of IL-11 (NEUMEGA®) on CMC-544-induced thrombocytopenia is shown in the present example. The initial dose of IL-11 was administered i.p. daily (250 mg / kg) starting up to 2 days before, or BID (125 mg / kg) starting up to 8 hours after CMC-544 administration (considered day 0). IL-11 was given daily for up to 8 days after CMC-544 administration. On day O, the mice were mixed to obtain baseline platelet values and then received vehicle or CMC-544 at 4 mg / mouse i.p. Higher or lower doses of CMC-544 were also administered. Blood was collected on several occasions up to 3 days after drug administration.

Procedimentos:Procedures:

Uma agulha calibre 25 foi inserida na veia terminal do camun- dongo e em seguida retirada permitindo a passagem de uma gota de san- gue. Uma amostra de 5 μΙ de sangue foi coletada para análise. Os valores das plaquetas foram quantificados usando um contador de partículas Beck- man Coulter Z1 de limiar duplo (Fullerton, CA). Os valores limiares foram estabelecidos para medir as plaquetas dos camundongos segundo as espe- cificações do fabricante.A 25 gauge needle was inserted into the terminal vein of the mouse and then removed allowing a drop of blood to pass through. A 5 μΙ blood sample was collected for analysis. Platelet values were quantified using a Beckman Coulter Z1 double threshold particle counter (Fullerton, CA). Threshold values were established to measure mouse platelets according to the manufacturer's specifications.

Como mostrado nas figuras 1 e 2, a administração de IL-11 antes da admi- nistração de CMC-544 previne a redução induzida por CMC na contagem de plaquetas em camundongos nus. Exemplo 2: Efeitos da IL-11 sobre a trombocitopenia induzida por CMC- 544 em macacos A - Primeiro estudo Desenho Experimental:As shown in Figures 1 and 2, administration of IL-11 prior to CMC-544 administration prevents CMC-induced reduction in platelet count in nude mice. Example 2: Effects of IL-11 on CMC-544-induced thrombocytopenia in monkeys A - First Study Experimental Design:

Dez (10) macacos (macacos cinomolgos) foram misturados ini- cialmente no dia 9 para selecionar 8 (oito) deles com os valores sangüíneos mais normais para serem colocados em estudo. Os macacos selecionados foram divididos em 2 grupos de 4 cada. Um grupo de macacos de testes foi pré-tratado com IL-11 por 5 dias antes de receber o CMC-544. O outro gru- po de macacos (ou macacos de controle) foi tratado com o veículo de con- trole solução salina estéril. Isto forneceu o controle apropriado para o es- tresse envolvido na aplicação de IL-11 aos macacos com a finalidade de discernir entre os potenciais efeitos colaterais do veículo e/ou da IL-11 (isto é, efeitos sobre parâmetros sangüíneos ou hematológicos) se eles fossem ocorrer. Ambos os grupos receberam CMC-544 no dia 1. A administração de IL-11 ao grupo de teste também ocorreu no dia de e continuou por 4 dias após a administração de CMC-544. O grupo de teste recebeu um total de 10 doses de IL-11. Ambos os grupos de macacos foram monitorados por 6 dias depois do CMC-544 quando então sofreram eutanásia.Ten (10) monkeys (cynomolgus monkeys) were initially mixed on day 9 to select 8 (eight) of them with the most normal blood values to be put to study. The selected monkeys were divided into 2 groups of 4 each. One group of test monkeys was pretreated with IL-11 for 5 days before receiving CMC-544. The other monkey group (or control monkeys) was treated with the sterile saline control vehicle. This provided appropriate control for the stress involved in applying IL-11 to monkeys in order to discern between potential vehicle and / or IL-11 side effects (ie, effects on blood or haematological parameters) if they would occur. Both groups received CMC-544 on day 1. Administration of IL-11 to the test group also occurred on day 1 and continued for 4 days after CMC-544 administration. The test group received a total of 10 doses of IL-11. Both groups of monkeys were monitored for 6 days after CMC-544 when they were then euthanized.

Sangue foi coletado para análise no dia -11 (pré-teste), no dia -5 (época da primeira administração de IL-11), no dia 1 (época da administra- ção de CMC-544), nos dias 3, 4, 5 (época do nadir de plaquetas para o CMC-544), e no dia 7 (fim do estudo). Para cada dia que requer a coleta de uma amostra de sangue e administração de fármaco, o sangue foi coletado antes da administração de IL-11 ou CMC-544. No dia 1, a IL-11 foi adminis- trada imediatamente depois da administração do CMC-544.Blood was collected for analysis on day -11 (pretest), day -5 (time of first IL-11 administration), day 1 (time of CMC-544 administration), days 3, 4 , 5 (platelet nadir time for CMC-544), and on day 7 (end of study). For each day requiring blood sampling and drug administration, blood was collected prior to administration of IL-11 or CMC-544. On day 1, IL-11 was administered immediately after CMC-544 administration.

Mais especificamente, o grupo de teste de macacos foi subme- tido aos seguintes procedimentos: no dia -11: coleta de 6 ml de sangue; no dia -5: coleta de 2 ml de sangue, administração de IL-11; no dia -4: adminis- tração de IL-11; no dia -3: administração de IL-11; no dia -2: administração de IL-11; no dia -1: administração de IL-11; no dia 1 (coleta de 2 ml de san- gue, administração de IL-11 e CMC-544); no dia 2: administração de IL-11; no dia 3: coleta de 2 ml de sangue, administração de IL-11; no dia 4: coleta de 6 ml de sangue, administração de IL-11; no dia 5: coleta de 2 ml de san- gue, administração de IL-11; no dia 7: coleta de 6 ml de sangue, eutanásia, e necrópsia.More specifically, the monkey test group underwent the following procedures: on day -11: collection of 6 ml of blood; on day -5: collection of 2 ml blood, administration of IL-11; on day -4: administration of IL-11; on day -3: administration of IL-11; on day -2: administration of IL-11; on day -1: administration of IL-11; on day 1 (collection of 2 ml of blood, administration of IL-11 and CMC-544); on day 2: administration of IL-11; on day 3: 2 ml blood collection, IL-11 administration; on day 4: collection of 6 ml blood, administration of IL-11; on day 5: collection of 2 ml of blood, administration of IL-11; on day 7: collection of 6 ml of blood, euthanasia, and necropsy.

Procedimentos:Procedures:

Administração do fármaco: IL-11 foi administrada a 125 mg/kg (como uma solução) por injeção subcutânea. A IL-11 foi reconstituída fresca com água estéril e administrada dentro de 3 horas da reconstituição. O vo- lume da dose foi de 0,25/kg. A IL-11 foi administrada depois de coletadas todas as amostras de sangue programadas. O CMC-544 foi administrado a 25 mg/kg (dose baseada no teor de caliqueamicina DMH) por via intraveno- sa como uma solução. O volume da dose foi de 1 ml/kg. Os macacos foram anestesiados com cetamina (10 mg/kg) antes da injeção de iv de CMC-544 através de um cateter de retenção. O CMC-544 foi administrado depois de coletadas todas as amostras de sangue programadas e imediatamente an- tes da administração da IL-11.Drug administration: IL-11 was administered at 125 mg / kg (as a solution) by subcutaneous injection. IL-11 was reconstituted fresh with sterile water and administered within 3 hours of reconstitution. The dose volume was 0.25 / kg. IL-11 was administered after all programmed blood samples were collected. CMC-544 was administered at 25 mg / kg (dose based on calicheamicin DMH content) intravenously as a solution. The dose volume was 1 ml / kg. Monkeys were anesthetized with ketamine (10 mg / kg) prior to iv injection of CMC-544 through a retention catheter. CMC-544 was administered after all programmed blood samples were collected and immediately before IL-11 administration.

Coletas de amostra de sangue: Nos dias -11, 4 e 7, um total de 6 ml de sangue foram coletados de acordo com o seguinte procedimento: 3 ml foram coletados em um tubo de ponta vermelha (soro) para análise quí- mica clínica e 3 ml em um tubo de ponta da cor de alfazema (EDTA anticoa- gulante) para CBC (contagem sangüínea completa). Nos dias -5, 1, 3, e 5, 2 ml de sangue tratado com EDTA (em tubos de ponta da cor de alfazema) foram coletados para determinação das plaquetas. O sangue total coletado foi de 8 ml na primeira semana, 12 ml na segunda semana, e 6 ml na terceira semana. O volume de sangue total de um macaco está estimado em 5,4% do peso corporal (54 ml/kg). Portan- to, os macacos pesando > 2,5 kg tiveram menos de 10% do volume de san- gue retirados por semana.Blood Samples: On days -11, 4, and 7, a total of 6 ml of blood was collected according to the following procedure: 3 ml were collected in a red-tipped tube (serum) for clinical chemical analysis. and 3 ml in a lavender tip tube (anticoagulant EDTA) for CBC (complete blood count). On days -5, 1, 3, and 5, 2 ml of EDTA-treated blood (in lavender tipped tubes) were collected for platelet determination. The total blood collected was 8 ml in the first week, 12 ml in the second week, and 6 ml in the third week. The total blood volume of a monkey is estimated at 5.4% of body weight (54 ml / kg). Therefore, monkeys weighing> 2.5 kg had less than 10% of the blood volume removed per week.

III Efeitos:III Effects:

Os macacos foram monitorados diariamente quanto à saúde e um veterinário da equipe era informado da condição dos mesmos caso fos- sem observados efeitos desfavoráveis. 0"consumo de comida foi monitora- do diariamente.The monkeys were monitored daily for health and a team veterinarian was informed of their condition if unfavorable effects were observed. "Food consumption was monitored daily.

IL-11 (125 mg/kg s.c.) já fora previamente administrada aos ma- cacos sem relato de efeitos adversos (F.J. Schlerman et al., "The effect of rhlL-11 on Platelet Aggregation in vitro and ex vivo following Subcutaneous Administration to Non-Human Primates for 14 Days", Genetics Institute Re- port n° P98034-14; A.G. Bree et al., "Thrombopoietic Activity of Recombinant Human lnterleukin-11 Alone or in Combination with Recombinant Human Granulocyte-Colony Stimulating Factor in a Novel Myelosuppressed Non- Human Primate Model", Genetics Institute Report η° P99029-14; A.G. Bree et al., "Thrombopoietic Activity of a Normal or Short Course of Recombinant Human lnterleukin-11 in Combination with a Normal or Delayed Course of Reeombinant Human Granulocyte-Colony Stimulating Factor in a One-Cycle Myelosuppressed Non-Human Primate Model, Genetics Institute Report n9 P99030-14).IL-11 (125 mg / kg sc) had previously been administered to the macaque without reporting adverse effects (FJ Schlerman et al., "The effect of RhlL-11 on Platelet Aggregation in vitro and ex vivo following Subcutaneous Administration to Non -Human Primates for 14 Days ", Genetics Institute Report No. P98034-14; AG Bree et al.," Thrombopoietic Activity of Recombinant Human Interleukin-11 Allone or in Combination with Recombinant Human Granulocyte-Colony Stimulating Factor in Novel Myelosuppressed Non-Human Primate Model ", Genetics Institute Report η ° P99029-14; AG Bree et al.," Thrombopoietic Activity of a Normal or Short Course of Recombinant Human Interleukin-11 in Combination with a Normal or Delayed Course of Reeombinant Human Granulocyte- Colony Stimulating Factor in One-Cycle Myelosuppressed Non-Human Primate Model, Genetics Institute Report No. P99030-14).

Estudos anteriores com CMC-544 à dose de 25 mg/kg reporta- ram consumo reduzido de comida, êmese (75% dos macacos no dia 4 pós- administração do CMC-544) e alterações fecais tais como fezes líquidas, mucóides, moles e/ou reduzidas (do dia 4 ao dia 7 em > 50% dos macacos). Frutas frescas e agentes antidiarréicos (Kao-pectato) foram oferecidos no caso de inapetência e alterações fecais, respectivamente. Os macacos que apresentaram efeitos colaterais não previstos (diferentes dos 3 sintomas mencionados acima) foram encaminhados ao veterinário assistente para consulta. Eutanásia:Previous studies with 25 mg / kg CMC-544 reported reduced food intake, emesis (75% of monkeys on day 4 post-CMC-544 administration) and fecal changes such as liquid stools, mucoids, moles and / or reduced (from day 4 to day 7 in> 50% of monkeys). Fresh fruits and antidiarrheal agents (Kao-pectate) were offered in case of inappetence and fecal changes, respectively. Monkeys with unanticipated side effects (other than the 3 symptoms mentioned above) were referred to the attending veterinarian for consultation. Euthanasia:

Os macacos foram abatidos por uma superdosagem de barbitú- ricos (100 mg/kg i.v.).The monkeys were slaughtered by barbiturate overdose (100 mg / kg i.v.).

Necrópsia:Necropsy:

Amostras de tecidos post-mortem do fígado, da medula óssea (esternebra), do pulmão (uma seção de cada lado do pulmão), e do baço foram coletadas e fixadas em 10% de formalina. Esfregaços da medula ósse foram coletados de uma costela aberta.Postmortem tissue samples from the liver, bone marrow (sternum), lung (one section on each side of the lung), and spleen were collected and fixed in 10% formalin. Bone marrow smears were collected from an open rib.

Hematologia:Hematology:

Os parâmetros de hematologia e coagulação foram avaliados duas vezes nos dias 1, 3, 4, 5 e 7 da fase de pré-teste e da fase de adminis- tração. O volume médio de plaquetas (MPV) foi avaliado somente durante esses intervalos da fase de administração. Nos animais que receberam so- mente CMC-544, alterações relacionadas ao composto em animais individu- ais em relação aos seus valores de pré-teste ocorreram nas contagens de plaquetas (PLT), neutrófilos (NEU), monócitos (MONO), e eosinófilos (EOS). Nos animais que receberam rhulL-11 (NEUMEGA®), alterações relacionadas à rhulL-11 foram observadas em parâmetros da massa de células vermelha (hemoglobina, HGB, hematócito, HCT, e contagem de células sangüíneas vermelhas, RBC).Hematology and coagulation parameters were evaluated twice on days 1, 3, 4, 5 and 7 of the pretest phase and the administration phase. Mean platelet volume (MPV) was evaluated only during these administration phase intervals. In animals receiving CMC-544 alone, compound-related changes in individual animals relative to their pretest values occurred in platelet counts (PLT), neutrophils (NEU), monocytes (MONO), and eosinophils. (EOS). In animals receiving rhulL-11 (NEUMEGA®), changes related to rhulL-11 were observed in red cell mass parameters (hemoglobin, HGB, hematocyte, HCT, and red blood cell count, RBC).

Estas diminuições em PLT (31% a 69% em relação à primeira contagem no pré-teste) foram observadas em todos os animais que só re- ceberam CMC-544 nos dias 3, 4, 5 e (exceto para um animal) no dia 7 da fase de administração, com o nadir geralmente observado no dia 4 ou 5 a- pós a administração de CMC-544. Nesses mesmos animais, ligeiros aumen- tos em PLT (30% a 126%) no dia 1 da fase de administração precederam estas diminuições subseqüentes. Ao contrário, todos os macacos que rece- beram rhulL-11 antes do CMC-544, tiveram o PLT ligeiramente a modera- damente aumentado em todos os intervalos da fase de administração (48% a 272%), em relação ao primeiro valor do pré-teste). Estes aumentos tive- ram seu pico no dia 4, 5 ou 7 nesses animais. Estas diferenças em PLT en- tre grupos dão suporte ao fato de que pré-tratamento com rhulL-11 previne ou melhora as diminuições na contagem de plaquetas associadas a CMC- 544.These decreases in PLT (31% to 69% from the first pretest count) were observed in all animals that only received CMC-544 on days 3, 4, 5 and (except for one animal) on day 1. 7 of the administration phase, with nadir generally observed on day 4 or 5 after CMC-544 administration. In these same animals, slight increases in PLT (30% to 126%) on day 1 of the administration phase preceded these subsequent decreases. In contrast, all monkeys receiving rhulL-11 prior to CMC-544 had slightly to moderately increased PLT at all administration phase intervals (48% to 272%) from the first dose value. pre-test). These increases peaked on day 4, 5 or 7 in these animals. These differences in PLT between groups support the fact that pretreatment with rhulL-11 prevents or improves platelet count decreases associated with CMC-544.

Nos machos que receberam pré-tratamento com rhuIL-11, o MPV em geral também foi maior em todos os intervalos da fase de adminis- tração que nos machos que receberam somente CMC-544. No entanto, este padrão não foi observado na única fêmea que recebeu pré-tratamento com rhuIL-11 comparada com aquele que recebeu somente CMC-544; portanto, não foram tiradas conclusões referentes aos efeitos associados ao compos- to sobré o MPV.In males receiving rhuIL-11 pretreatment, MPV in general was also higher at all administration phase intervals than in males receiving CMC-544 alone. However, this pattern was not observed in the only female who received rhuIL-11 pretreatment compared to the one that received CMC-544 alone; therefore, no conclusions were drawn regarding the effects associated with the compound over MPV.

Em todos os animais que receberam apenas CMC-544, aumen- tos brandos a moderados no NEU acima das contagens pré-teste (85% a 212% em relação ao primeiro valor de pré-teste) foram observados em um ou mais intervalos da fase de administração. Igualmente, aumentos acima das contagens pré-teste em MONO (39% a 386%) e EOS (50% a 538%, em relação ao primeiro valor de pré-teste) ocorreram durante a fase de adminis- tração nesses mesmos animais. Ao contrário, aumentos na fase de adminis- tração acima dos valores de pré-teste ocorreram em apenas 1 de 4 animais que receberam pré-tratamento com rhuIL-11, (a única fêmea) em NEU (164% a 284%) e EOS (143%) no dia 4 e/ou 5, e em 2 de 4 animais (macho ou fêmea) que receberam pré-tratamento com rhuIL-11 em MONO (93% a 329%). Estas diferenças entre os grupos na incidência de contagens au- mentadas de leucócitos sugerem melhora ou prevenção parcial de uma res- posta inflamatória em animais que receberam rhuIL-11 antes do CMC-544. A alteração em NEU foi associada à hematopoiese ligeiramente aumentada extramedularmente no baço em alguns animais individuais que receberam apenas CMC-544.In all animals receiving CMC-544 alone, mild to moderate increases in NEU above pretest counts (85% to 212% over first pretest value) were observed at one or more phase intervals. administration. Likewise, increases above pre-test counts in MONO (39% to 386%) and EOS (50% to 538% over the first pretest value) occurred during the administration phase in these same animals. In contrast, increases in the administration phase above pre-test values occurred in only 1 of 4 animals receiving pretreatment with rhuIL-11, (the only female) in NEU (164% to 284%) and EOS. (143%) on day 4 and / or 5, and in 2 of 4 animals (male or female) that received rhuIL-11 pretreatment in MONO (93% to 329%). These differences between the groups in the incidence of increased white blood cell counts suggest partial improvement or prevention of an inflammatory response in animals receiving rhuIL-11 prior to CMC-544. The change in NEU was associated with slightly increased extramedullary hematopoiesis in the spleen in some individual animals receiving CMC-544 alone.

Em todos os animais que receberam rhuIL-11 antes do CMC- 544, diminuições em parâmetros de massa de células vermelhas (hemoglo- bina, hematócrito, contagem de células sangüíneas vermelhas) foram ob- servadas em quase todos a todos os intervalos da fase de administração (machos: 12% a 32%; fêmea: 22% a 42% em relação aos primeiros valores de pré-teste). Essas alterações em geral ultrapassaram aquelas em quase todos os intervalos para os receberam somente CMC-544 e eram um efeito previsto da alta dosagem de rhulL-11 em macacos. Não foram observadas diferenças significativas nas contagens de reticulócitos ou nos índices de células vermelhas entre os animais que receberam CMC-544 com ou sem rhulL-11, e nenhuma correlação entre essas diminuições na massa de célu- las vermelhas e hipocelularidade histológica da medula óssea.In all animals receiving rhuIL-11 prior to CMC-544, decreases in red cell mass parameters (hemoglobin, hematocrit, red blood cell count) were observed at almost all intervals of the administration (males: 12% to 32%; female: 22% to 42% over first pretest values). These changes generally surpassed those at almost every interval for CMC-544 alone and were a predicted effect of the high dosage of rhulL-11 in monkeys. No significant differences in reticulocyte counts or red cell indices were observed between animals receiving CMC-544 with or without rhulL-11, and no correlation between these decreases in red cell mass and histological bone marrow hypocellularity.

As diferenças em outros parâmetros hematológicos nos animais que receberam rhulL-11 comparados com animais que receberam apenas CMC-544 não dignas de nota devido aos seus valores absolutos e/ou gran- deza bastante coincidentes.Differences in other hematological parameters in animals receiving rhulL-11 compared with animals receiving only unremarkable CMC-544 due to their quite coincident absolute values and / or magnitude.

Química clínica:Clinical Chemistry:

Os parâmetros da química sérica foram avaliados uma vez no pré-teste e nos dias 4 e 7. Nos animais que receberam apenas CMC-544, ocorreram aumentos associados ao composto (em relação aos valores de pré-teste) na alanina aminotransferase (ALT). Em um animal que recebeu apenas CMC-544, e em todos os animais que receberam rhulL-11 (NEU- MEGA®), também ocorreram aumentos na fosfatase alcalina (AP); estes aumentos associados ao composto foram considerados parcialmente asso- ciados ao pré-tratamento com rhull_-11. Em todos os animais, ocorreram diminuições na albumina (ALB); a grandeza destas diminuições foi consis- tentemente maior com e relacionada à administração de rhulL-11.Serum chemistry parameters were evaluated once in the pretest and on days 4 and 7. In animals receiving CMC-544 alone, compound-associated increases (relative to pretest values) were observed in alanine aminotransferase (ALT). . In one animal receiving CMC-544 alone, and in all animals receiving rhulL-11 (NEU-MEGA®), increases in alkaline phosphatase (AP) also occurred; These compound-associated increases were considered partially associated with pretreatment with rhull-11. In all animals, decreases in albumin (ALB) occurred; The magnitude of these decreases was consistently greater with and related to the administration of rhulL-11.

Os aumentos em ALT (68% a 750%) ocorreram em 3 de 4 ani- mais que receberam apenas CMC-544. Estes aumentos ocorreram nos dias 4 e/ou 7 em relação à concentração de pré-teste de cada animal e sugeri- ram lesão hepática associada a CMC-544 mínima branda. Dando suporte à ocorrência de lesão hepática e correlacionando com as alterações em ALT nestes animais foram necrose hepatocelular multifocal branda microscópica (principalmente centrilobular) e necrose celular simples no macaco com o maior aumento em ALT (8,5 vezes, fêmea), e necrose celular simples bran- da em um outro animal (macho) com um leve aumento (1,7 vez) em ALT. A ocorrência destes aumentos em ALT nos animais que receberam apenas CMC-544 e não naqueles que receberam pré-tratamento com rhulL-11 deu suporte limitado (devido ao pequeno número de animais para avaliar) à me- lhora de lesão hepática com pré-tratamento com rhull_-11.Increases in ALT (68% to 750%) occurred in 3 of 4 animals receiving CMC-544 alone. These increases occurred on days 4 and / or 7 in relation to the pretest concentration of each animal and suggested liver damage associated with mild minimal CMC-544. Supporting the occurrence of liver injury and correlating with changes in ALT in these animals were microscopic mild multifocal hepatocellular necrosis (mainly centrilobular) and monkey simple cell necrosis with the largest increase in ALT (8.5 times female), and cell necrosis. simple bleaching in another animal (male) with a slight increase (1.7 times) in ALT. The occurrence of these ALT increases in animals receiving CMC-544 alone and not in those receiving rhulL-11 pretreatment gave limited support (due to the small number of animals to be evaluated) to improved pretreatment liver injury. with rhull_-11.

Aumentos em AP ocorreram em ambos os intervalos da fase de administração (em relação às concentrações de pré-teste) em um animal que recebeu CMC-544 (122% a 242%) e em todos os animais que recebe- ram pré-tratamento com rhulL-11 (276% a 589%). A maior incidência e grandeza de aumento de AP nos animais que receberam rhulL-11 e nos a- nimais que receberam CMC-544 indicou que alteração está parcialmente associada à rhulL-11. Aumentos similares em AP nos macacos subseqüente à administração de rhulL-11 foram anteriormente observados.Increases in AP occurred at both administration phase intervals (relative to pretest concentrations) in one animal receiving CMC-544 (122% to 242%) and in all animals receiving pretreatment with rhulL-11 (276% to 589%). The higher incidence and magnitude of AP increase in animals receiving rhulL-11 and animals receiving CMC-544 indicated that change is partially associated with rhulL-11. Similar increases in AP in monkeys following rhulL-11 administration were previously observed.

As diminuições em ALB que foram brandas a moderadas (17% a 45%) ocorreram em ambos os intervalos da fase de administração em to- dos animais que receberam pré-tratamento com rhulL-11. Estas diminuições correspondiam aos aumentos na massa de células vermelhas nesses ani- mais, como anteriormente reportado em macacos que receberam rhulL-11. Ao contrário, diminuições em ALB ocorreram em apenas alguns animais que receberam apenas CMC-544, e em um ou ambos os intervalos da fase de administração e foram leves a moderados (até 24%). A maior incidência e grandeza dessas diminuições nos animais que receberam rhulL-11 em rela- ção àqueles que receberam apenas CMC-544 indicou que diminuição está parcialmente associada à rhulL-11 e notavelmente exacerbada ou suplanta- da com a administração de rhulL-11 nos animais que receberam CMC-544.Mild to moderate decreases in ALB (17% to 45%) occurred at both administration phase intervals in all animals receiving pretreatment with rhulL-11. These decreases corresponded to increases in red cell mass in these animals, as previously reported in monkeys receiving rhulL-11. In contrast, decreases in ALB occurred in only a few animals receiving CMC-544 alone, and at one or both intervals of the administration phase and were mild to moderate (up to 24%). The greater incidence and magnitude of these decreases in animals receiving rhulL-11 compared to those receiving CMC-544 alone indicated that the decrease is partially associated with rhulL-11 and noticeably exacerbated or superseded by rhulL-11 administration in animals. animals receiving CMC-544.

As diferenças em outros valores da química sérica nos animais que receberam o composto comparados com os controles foram atribuídas à variação randômica devido a sua pequena grandeza, direção, ausência de padrão associado à dosagem, e/ou coincidência geral dos valores individu- ais.Differences in other serum chemistry values in animals receiving the compound compared with controls were attributed to random variation due to their smallness, direction, absence of pattern associated with dosing, and / or overall coincidence of individual values.

B - Segundo estudoB - Second study

Foi realizado um segundo estudo, cujo Desenho Experimental está apresentado na Tabela 1. Em resumo, foram usadas 8 macacas, 4 das quais receberam uma única dose i.v. de CMC-544 (no dia 1; 25 μg/kg) e as outras 4 receberam uma única dose i.v. de CMC-544 (no dia 1; 25 μg/kg) e 5 doses subcutâneas de NEUMEGA (125 μg/kg/dia) nos dias 1-5. Foram reali- zados estudos hematológicos, da maneira descrita acima, duas vezes pré- estudo e nos dias de administração 1 a 8, dia 10, dia 12 e dia 14 (sempre antes da administração de NEUMEGA). Foram efetuados exames de coagu- lação e química sérica, da maneira descrita acima, duas vezes pré-estudo e nos dias de administração 7 e 14.A second study was performed, the Experimental Design is shown in Table 1. In summary, 8 monkeys were used, 4 of which received a single iv dose of CMC-544 (on day 1; 25 μg / kg) and the other 4 received a single iv dose of CMC-544 (on day 1; 25 μg / kg) and 5 subcutaneous doses of NEUMEGA (125 μg / kg / day) on days 1-5. Hematological studies were performed, as described above, twice pre-study and on administration days 1 to 8, day 10, day 12 and day 14 (always before NEUMEGA administration). Coagulation and serum chemistry tests were performed, as described above, twice pre-study and on administration days 7 and 14.

A figura 12 mostra as alterações nas contagens de plaquetas observadas em ambos os grupos de macacos. O aparecimento e a grande- za das diminuições das contagens de plaquetas se mostraram equiparáveis entre os animais que receberam CMC-544 com ou sem NEUMEGA. O nadir ocorreu no dia 3 ou 4 pós-dose (apenas CMC-544: 70% a 87%; CMC-544 + NEUMEGA: 75% a 84% abaixo dos último valor de pré-teste). Resolução essencialmente completa destas diminuições (dentro de 90% do segundo valor de pré-teste) ocorreu no dia 7 ou 8 em todos os animais que recebe- ram CMC-544 + NEUMEGA, mas somente em um animal que recebeu ape- nas CMC-544.Figure 12 shows the changes in platelet counts observed in both groups of monkeys. The onset and large decreases in platelet counts were comparable among animals receiving CMC-544 with or without NEUMEGA. Nadir occurred on day 3 or 4 post-dose (CMC-544 only: 70% to 87%; CMC-544 + NEUMEGA: 75% to 84% below the last pretest value). Essentially complete resolution of these decreases (within 90% of the second pretest value) occurred on day 7 or 8 in all animals receiving CMC-544 + NEUMEGA, but only in one animal receiving only CMC- 544.

Tabela 1. Desenho Ex perimentalTable 1. Experimental Drawing

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a. Equivalentes de caliqueamicina (~ 82,5 μg/mg de proteína).The. Calicheamicin equivalents (~ 82.5 μg / mg protein).

b. conversão mg/m2 FDA: http://www.fda.gov/cder/cancer/animalframe.htmB. mg / m2 FDA conversion: http://www.fda.gov/cder/cancer/animalframe.htm

c. Volume da dose 1 ml/kg (CMC-544 administrado no dia 1, ~9 a.m).ç. Dose volume 1 ml / kg (CMC-544 administered on day 1, ~ 9 a.m).

d. 0,025 ml/kg de NEUMEGA administrado uma vez ao dia (~ 3 p.m), dias 1- 5.d. 0.025 ml / kg NEUMEGA administered once daily (~ 3 p.m), days 1-5.

Um ligeiro aumento no AST foi observado no dia 14 em todos os animais, e no dia 7 na maioria dos animais que receberam apenas CMC- 544 (39 - 124% acima do último valor do pré-estudo) (vide figura 13). O au- mento correspondente em ALT ocorreu em 2 desses quatro animais (82%- 198%). Os aumentos nessas enzimas séricas associadas ao fígado que fo- ram de grandeza em geral menor ocorreram nesses intervalos em 1 ou 2 dos 4 animais que receberam CMC-544 + NEUMEGA (AST: 35-79%; ALT: 66%).A slight increase in AST was observed on day 14 in all animals, and on day 7 in most animals receiving only CMC-544 (39 - 124% above the last pre-study value) (see Figure 13). The corresponding increase in ALT occurred in 2 of these four animals (82% - 198%). Increases in these liver-associated serum enzymes that were of generally lower magnitude occurred at these intervals in 1 or 2 of the 4 animals receiving CMC-544 + NEUMEGA (AST: 35-79%; ALT: 66%).

Uma diminuição leve a moderada na contagem de reticulócitos foi observada em todos os animais (8-56%) em geral nos dias 3-5. Estas diminuições foram associadas a diminuições leves a moderadas na massa de células vermelhas (até 22%) começando no dia 4. A incidência e o apa- recimento entre os animais que receberam apenas CMC-544 e os animais que receberam CMC-544 + NEUMEGA foram similares em termos de gran- — deza, e portanto, são consideradas principalmente associadas ao CMC-544 (assim como parcialmente associadas à coleta de sangue).A mild to moderate decrease in reticulocyte count was observed in all animals (8-56%) overall on days 3-5. These decreases were associated with mild to moderate red cell mass decreases (up to 22%) beginning on day 4. The incidence and onset between animals receiving CMC-544 alone and animals receiving CMC-544 + NEUMEGA were similar in terms of magnitude, and are therefore considered primarily associated with CMC-544 (as well as partially associated with blood collection).

Um aumento leve a moderado em GLOB foi observado para ambos os grupos de animais (apenas CMC-544: 17-42%; CMC-544 + NEU- MEGA: 19-52%) tanto no dia 7 quanto no dia 14 sem um padrão de resolu- ção consistente em qualquer dos grupos.A mild to moderate increase in GLOB was observed for both animal groups (CMC-544: 17-42% only; CMC-544 + NEU-MEGA: 19-52%) on either day 7 or day 14 without a pattern. consistent resolution in either group.

Um aumento moderado transitório em fibrinogênio foi observado por volta do dia 7 em todos os animais que receberam CMC-544 + NEU- MEGA (197% a 327% acima dos valores de pré-estudo. Estes aumentos em fibrinogênio mostraram resolução parcial rápida em relação aos valores de pré-teste no dia 14. Aumentos equiparáveis em fibrinogênio foram observa- dos em estudos anteriores em macacos que receberam NEUMEGA. Estes aumentos foram atribuídos à reação de fase aguda transitória induzida pela IL-11.A transient moderate increase in fibrinogen was observed around day 7 in all animals receiving CMC-544 + NEU-MEGA (197% to 327% above pre-study values. These increases in fibrinogen showed rapid partial resolution relative to to pretest values on day 14. Comparable increases in fibrinogen were observed in previous studies in monkeys receiving NEUMEGA, which were attributed to the transient acute phase reaction induced by IL-11.

Uma leve diminuição em albumina (17% a 23%) foi observada no dia 7 em todos os animais que receberam NEUMEGA e uma resolução parcial ocorreu por volta do dia 14. Esta leve diminuição é atribuída a uma resposta de fase aguda transitória. Embora uma expansão do volume de plasma também possa ter contribuído.A slight decrease in albumin (17% to 23%) was observed on day 7 in all animals receiving NEUMEGA and a partial resolution occurred around day 14. This slight decrease is attributed to a transient acute phase response. Although an expansion of plasma volume may also have contributed.

Os resultados obtidos neste segundo estudo mostraram que a resolução das diminuições da contagem de plaquetas associadas ao CMC- 544 ocorreram um pouco mais cedo nos macacos que receberam NEUME- GA por 5 dias começando 6 horas depois da única dose de CMC-544, do que na maioria dos animais que receberam apenas CMC-544. Os aumentos associados ao CMC nas enzimas séricas associadas ao fígado, AST e ALT ocorreram com uma grandeza e incidência um pouco menor nos animais que receberam CMC-544 + NEUMEGA do que nos animais que receberam apenas CMC-544. As alterações associadas ao NEUMEGA (diminuição em albumina, aumento transitório em fibrinogênio) observadas no presente es- tudo foram consistentes com aquelas já relatadas.The results obtained in this second study showed that resolution of platelet count decreases associated with CMC-544 occurred slightly earlier in monkeys receiving NEUMEGA for 5 days starting 6 hours after the single dose of CMC-544 than in most animals that received only CMC-544. CMC-associated increases in liver-associated serum enzymes, AST and ALT occurred with a slightly lower magnitude and incidence in animals receiving CMC-544 + NEUMEGA than in animals receiving CMC-544 alone. The changes associated with NEUMEGA (decrease in albumin, transient increase in fibrinogen) observed in the present study were consistent with those already reported.

Exemplo 3: Efeito de conjugados de caliqueamicina sobre os níveis das plaquetas no camundongo Desenho Experimental:Example 3: Effect of calicheamicin conjugates on mouse platelet levels Experimental Design:

No dia O, os camundongos foram misturados para obter valores de plaquetas da linha basal. Os camundongos então receberam veículo, CMC- 544 ou outros conjugados de caliqueamicina a 4 mg/camundongo i.v. ou i.p. Doses mais altas ou mais baixas também foram administradas. Sangue foi coletado em 72 horas (dia 3), 96 horas (dia 4), e 168 horas (dia 8) depois da administração do fármaco. Procedimentos:On day O, the mice were mixed to obtain baseline platelet values. The mice then received vehicle, CMC-544 or other 4 mg caliqueamicin / i.v. or i.p. Higher or lower doses were also administered. Blood was collected at 72 hours (day 3), 96 hours (day 4), and 168 hours (day 8) after drug administration. Procedures:

Uma agulha calibre 25 foi inserida na veia terminal do camun- dongo e em seguida retirada permitindo a passagem de uma gota de san- gue. Uma amostra de 5 μl de sangue foi coletada para análise. Sangue foi coletado no dia O, antes da administração do fármaco, e nos dias 3, 4, e 8, para um total de 4 coletas de 5 μΙ cada (total de 20 μl).A 25 gauge needle was inserted into the terminal vein of the mouse and then removed allowing a drop of blood to pass through. A 5 μl blood sample was collected for analysis. Blood was collected on day O, prior to drug administration, and on days 3, 4, and 8, for a total of 4 collections of 5 μΙ each (total 20 μl).

Aplicação: CMC-544 ou outros conjugados de caliqueamicina serão administrados uma vez por uma via intraperitoneal ou intravenosa a uma dose de 4 μg de caliqueamicina DMH. O volume da dose será de 200 μl para qualquer das vias de administração.Application: CMC-544 or other calicheamicin conjugates will be administered once intraperitoneally or intravenously at a dose of 4 μg calicheamicin DMH. The dose volume will be 200 μl for either route of administration.

Coleta de sangue: 5 μl de sangue serão coletadas da veia ter- minal.Blood collection: 5 μl of blood will be collected from the terminal vein.

Dor ou desconforto: não se prevê dor nem desconforto mas se ocorrerem, o veterinário assistente deverá ser consultado.Pain or discomfort: No pain or discomfort is anticipated but if they occur, the attending veterinarian should be consulted.

Toxicidade para o animal ou efeitos desfavoráveis: não foram observados efeitos tóxicos patentes do CMC-544 nos camundongos quando administrado a uma dose de 4 pg ou menos. Disposição dos animais:Animal toxicity or adverse effects: No patent toxic effects of CMC-544 have been observed in mice when administered at a dose of 4 pg or less. Animal Arrangement:

O estudo será encerrado depois da coleta de sangue final no dia 8 após a administração do fármaco. Os camundongos abatidos por eutaná- sia por inalação de CO2.The study will be terminated after final blood collection on day 8 after drug administration. Mice euthanized by CO2 inhalation.

Exemplo 4: Estudo de CMC-544 em pacientes com linfoma não-Hodgkin de células B (NHL)Example 4: Study of CMC-544 in Patients with Non-Hodgkin B Cell Lymphoma (NHL)

CMC-544 é um agente quimioterapêutico direcionado por anti- corpo composto de um anticorpo monoclonal, que especificamente vetoriza o antígeno CD22, conjugado à caliqueamicina, um potente antibiótico anti- tumoral citotóxico. As células malignas da linhagem de linfócitos B maduros expressam CD22; CMC-544 pode ser útil para tratar linfomas de origem nas células B.CMC-544 is an antibody-directed chemotherapeutic agent composed of a monoclonal antibody that specifically vectorizes the calikeamicin-conjugated CD22 antigen, a potent cytotoxic anti-tumor antibiotic. Malignant cells of the mature B lymphocyte lineage express CD22; CMC-544 may be useful for treating B-cell origin lymphomas.

Métodos: uma experiência com aumento progressivo da dose, fase I, de CMC-544 está em andamento em pacientes com NHL de células B reinci- dente ou refratário em 13 partes da Europa e Estados Unidos. O CMC-544 é administrado por via intravenosa a cada 3-4 semanas a doses de 0,4, 0,8, 1,34, 1,8, e 2,4 mg/m2. Dados de segurança e farmacocinéticos de referên- cia e dados preliminares de eficácia (avaliados usando o "International Workshop to Standardize Response Criteria for NHL") estão sendo coleta- dos.Methods: A phase-escalating dose phase I trial of CMC-544 is ongoing in patients with relapsed or refractory B-cell NHL in 13 parts of Europe and the United States. CMC-544 is administered intravenously every 3-4 weeks at doses of 0.4, 0.8, 1.34, 1.8, and 2.4 mg / m2. Reference safety and pharmacokinetic data and preliminary efficacy data (evaluated using the International Workshop to Standardize Response Criteria for NHL) are being collected.

A aceitação de pacientes com qualquer tipo de NHL de células B, exceto com linfomas de Burkitt e linfoblásticos, é permitida na fase de aumento progressivo da dose (1 - 6 pacientes por grupo). Depois de identifi- cada a dose tolerada máxima (MTD), 15 pacientes com linfoma folicular e 15 pacientes com linfoma de células B grandes difusas serão admitidos em um grupo de MTD expandida.Acceptance of patients with any type of B cell NHL, except Burkitt's and lymphoblastic lymphomas, is allowed in the phase of progressive dose escalation (1 - 6 patients per group). Once the maximum tolerated dose (MTD) has been identified, 15 patients with follicular lymphoma and 15 patients with diffuse large B-cell lymphoma will be admitted to an expanded MTD group.

Resultados: em junho de 2005, 34 pacientes (8 mulheres, idade média de 71 anos; 26 homens, idade média de 62 anos; número de tratamentos ante- riores, média 4, faixa 2-11) foram admitidos. O aumento progressivo da dose foi baseado no 1o ciclo de avaliações de segurança dos grupos de pa- cientes. As toxicidades limitadoras da dose (DTLs) foram reportadas para níveis de dose de 1,34 mg/m2 (trombocitopenia grau 4, 2/11 pacientes), 1,8 mg/m2 (hemorragia requerendo transfusão de plaquetas, 1/6 pacientes) e 2,4 mg/m2 (trombocitopenia grau 4, 1/6 pacientes; neutropenia grau 4 por 7 dias, 1/6 pacientes).Results: In June 2005, 34 patients (8 women, mean age 71 years; 26 men, mean age 62 years; number of previous treatments, mean 4, range 2-11) were admitted. The progressive dose increase was based on the first cycle of patient group safety assessments. Dose limiting toxicities (DTLs) have been reported at dose levels of 1.34 mg / m2 (grade 4 thrombocytopenia, 2/11 patients), 1.8 mg / m2 (hemorrhage requiring platelet transfusion, 1/6 patients) and 2.4 mg / m2 (grade 4 thrombocytopenia, 1/6 patients; grade 4 neutropenia for 7 days, 1/6 patients).

Assim, a MTD, o nível de dose antes daquele onde ocorreram = 33% de DTLs1 foi de 1,8 mg/m2. Os eventos adversos mais comuns associ- ados à fármaco (AEs, todos os graus) foram: trombocitopenia (65%), astenia (47%), náusea (41%), neutropenia (29%), exames de função hepática ele- vada (27%), anorexia (14%), e epistaxe (12%). AEs grau 3-4 que ocorreram com uma freqüência = 10% incluíram: trombocitopenia (38%), astenia (12%), e neutropenia (12%). O nadir da trombocitopenia foi de 9 ± 2 dias e as contagens de plaquetas foram recuperadas espontaneamente. Não foi reportado qualquer episódio importante de hemorragia. Nos níveis de dose de 1,8 e 2,4 mg/m2, os dados sugeriram um componente dose-dependente da recuperação de plaquetas para os níveis da linha basal e foram necessá- rios atrasos da dose entre doses sucessivas. As exposições ao CMC-544 e à caliqueamicina total no soro aumentaram com a dose. A depuração depois da 2a e 3a doses diminuíram aproximadamente 8 -14 vezes comparada com a 1a dose, e a meia-vida aumentou de aproximadamente 1 dia para 4 dias. Os dados disponíveis sugeriram uma associação de exposições a CMC-544 e/ou níveis de caliqueamicina totais de pico com diminuições nas contagens de plaquetas. Por conseguinte, os pacientes no grupo de MTD expandida receberam 1,8 mg/m2 de CMC-544 a intervalos de 4 semanas. Atividade antitumoral preliminar foi observada na maioria dos grupos. Respostas com- pletas e/ou parciais foram observadas nos grupos de 0,8 mg/m2 (1/3 pacien- tes), 1,34 mg/m2 (3/9 pacientes), 1,8 mg/m2 (2/5 pacientes), e 2,4 mg/m2 (2/5 pacientes), e nos 6 primeiros pacientes no grupo de MTD expandida (4/6 pacientes).Thus, the BAT, the dose level before the one where it occurred = 33% of DTLs1 was 1.8 mg / m2. The most common drug-associated adverse events (AEs, all grades) were: thrombocytopenia (65%), asthenia (47%), nausea (41%), neutropenia (29%), elevated liver function tests. (27%), anorexia (14%), and epistaxis (12%). Grade 3-4 AEs that occurred at a frequency = 10% included: thrombocytopenia (38%), asthenia (12%), and neutropenia (12%). The thrombocytopenia nadir was 9 ± 2 days and platelet counts recovered spontaneously. No major episodes of bleeding have been reported. At dose levels of 1.8 and 2.4 mg / m2, data suggested a dose-dependent platelet recovery component for baseline levels and dose delays between successive doses were required. Exposures to serum CMC-544 and total calicheamicin increased with dose. Clearance after the 2nd and 3rd doses decreased approximately 8-14 times compared to the 1st dose, and the half-life increased from approximately 1 day to 4 days. Available data suggested an association of CMC-544 exposures and / or peak total calicheamicin levels with decreases in platelet counts. Therefore, patients in the expanded MTD group received 1.8 mg / m2 CMC-544 at 4 week intervals. Preliminary antitumor activity was observed in most groups. Complete and / or partial responses were observed in groups of 0.8 mg / m2 (1/3 patients), 1.34 mg / m2 (3/9 patients), 1.8 mg / m2 (2/3 patients). 5 patients), and 2.4 mg / m2 (2/5 patients), and the first 6 patients in the expanded MTD group (4/6 patients).

Exemplo 5: Comparação dos efeitos do CMC-544 e da carboplatina so- bre as plaquetas e a trombopoietina no camundongoExample 5: Comparison of the effects of CMC-544 and carboplatin on platelets and thrombopoietin in mice

Veículo (PBS), carboplatina (125 mg/kg i.p.) ou CMC-544 (200 mg/kg i.p) foram, cada um deles, administrados a camundongos nus no dia 0. Sangue foi coletado da maneira descrita acima no dia 0, dia 4, dia 7, dia 11 e dia 13 para medir os níveis de plaquetas circulantes e de trombopoieti- na (TPO) circulante.Vehicle (PBS), carboplatin (125 mg / kg ip) or CMC-544 (200 mg / kg ip) were each administered to nude mice on day 0. Blood was collected as described above on day 0, day 4, day 7, day 11 and day 13 to measure circulating platelet and circulating thrombopoietin (TPO) levels.

Como mostrado nas figuras 10 e 11, que apresentam os resul- tados obtidos nessas experiências, foi verificado que o CMC-544 causa trombocitopenia em camundongos com nadir no dia 3 ou 4 após o tratamen- to; ao passo que a carboplatina causa trombocitopenia com nadir no dia 10 ou 11 após o tratamento.As shown in figures 10 and 11, which show the results obtained in these experiments, it was found that CMC-544 causes thrombocytopenia in nadir mice on day 3 or 4 after treatment; whereas carboplatin causes nadir thrombocytopenia on day 10 or 11 after treatment.

Sabe-se que quimioterapia convencional causa trombocitopenia acompanhada de níveis aumentos de trombopoietina (TPO) circulante. Nas presentes experiências, foi verificado que a administração de carboplatina causa níveis aumentos de trombopoietina (TPO) circulante ao passo que foi observada uma redução significativa nos níveis de TPO circulante no caso de CMC-544, sugerindo que o CMC-544 pode inibir a produção de TPO. A inibição mediada por CMC-544 da produção de TPO pode estar associada aos seus efeitos sobre a função hepática.Conventional chemotherapy is known to cause thrombocytopenia accompanied by increased circulating thrombopoietin (TPO) levels. In the present experiments, it was found that carboplatin administration causes increased levels of circulating thrombopoietin (TPO) whereas a significant reduction in circulating TPO levels was observed in the case of CMC-544, suggesting that CMC-544 may inhibit production. from TPO. CMC-544-mediated inhibition of TPO production may be associated with its effects on liver function.

Exemplo 6: Trombocitopenia induzida por CMC-544 e sua melhora com o uso de Oprelvekin (NEUMEGA®)Example 6: CMC-544-induced thrombocytopenia and its improvement with the use of Oprelvekin (NEUMEGA®)

CMC-544 demonstrou atividade antitumoral significativa em ex- periências pré-clínicas e clínicas em pacientes com Iinfoma não-Hodgkin B (B-NHL) (J.F. DiJoseph et ai, Blood, 2004, 103: 1807-1814; J.F. DiJoseph et ai, Clin. Câncer Res., 2004, 10: 8620-8629; J.F. DiJoseph et ai, Câncer Immunol. Immunother., 2005, 54: 11-24; J.F. DiJoseph et ai, Clin. Câncer Res., 2006, 12: 242-249; A Advani et al., Blood, 2005, 106: 230). Nessas experiências, trombocitopenia foi relatada como o evento adverso Iimitativo da dose mais comum. O presente estudo não clínico oferece introvisões na trombocitopenia observada associada ao tratamento com CMC-544 de paci- entes com B-NHL.CMC-544 has demonstrated significant antitumor activity in preclinical and clinical experiences in patients with non-Hodgkin B (NH-B) lymphoma (JF DiJoseph et al., Blood, 2004, 103: 1807-1814; JF DiJoseph et al. Clin, Cancer Res., 2004, 10: 8620-8629; JF DiJoseph et al., Cancer Immunol. Immunother., 2005, 54: 11-24; JF DiJoseph et al, Clin. Cancer Res., 2006, 12: 242- 249; A Advani et al., Blood, 2005, 106: 230). In these experiments, thrombocytopenia was reported as the most common dose-limiting adverse event. The present non-clinical study provides insights into the observed thrombocytopenia associated with CMC-544 treatment of NHL-B patients.

In vitro, o CMC-544 não se ligou nem causou agregação plaque- tária em plasma rico em plaquetas de origem humana ou murina. Quando administrado a camundongos, uma única dose de CMC-544 resultou em uma redução de 50% a 75% no número de plaquetas circulantes com um nadir no dia 3 ou 4. Os valores das plaquetas voltaram ao normal no máximo no dia 12. Efeitos similares também foram observados em macacos cino- molgos com nadires no dia 4 ou 5. O anticorpo anti-CD22 não conjugado, G5/44 (anticorpo lgG4 humanizado) não teve qualquer efeito sobre as pla- quetas circulantes. A trombocitopenia induzida por CMC-544 nos camun- dongos foi associada a uma redução concomitantes nos níveis circulantes de trombopoietina (TPO) com um nadir no dia 4. Ao contrário, tratamento com um agente quimioterapêutico citotóxico conhecido, carboplatina, causou trombocitopenia nos camundongos porém com um nadir no dia 11. Ao con- trário da trombocitopenia induzida por CMC-544, a trombocitopenia induzida por carboplatina foi associada a um aumento nos níveis de TPO circulante.In vitro, CMC-544 did not bind or cause platelet aggregation in human or murine platelet-rich plasma. When given to mice, a single dose of CMC-544 resulted in a 50 to 75% reduction in the number of circulating platelets with one nadir on day 3 or 4. Platelet values returned to normal by day 12. Similar changes were also observed in nadir cynomolgus monkeys on day 4 or 5. Unconjugated anti-CD22 antibody G5 / 44 (humanized IgG4 antibody) had no effect on circulating platelets. CMC-544-induced thrombocytopenia in mice was associated with a concomitant reduction in circulating thrombopoietin (TPO) levels with a nadir on day 4. In contrast, treatment with a known cytotoxic chemotherapeutic agent, carboplatin, caused thrombocytopenia in the mice; with a nadir on day 11. Unlike CMC-544-induced thrombocytopenia, carboplatin-induced thrombocytopenia was associated with an increase in circulating TPO levels.

Pré-tratamento subcutâneo de camundongos com oprelvekin (NEUMEGA® / rhlL-11) (250 ug/kg) reduziu significativamente a dimensão da trombocitopenia associada a CMC-544. Quando avaliado em macacos cinomolgos, o pré-tratamento subcutâneo diário com oprelvekin (125 ug/kg) por 5 dias preveniu completamente a trombocitopenia associada a CMC-544 mas também suprimiu as elevações nas aminotransferases hepáticas séri- cas associadas ao tratamento com CMC-544 isolado. A administração con- corrente de oprelvekin com CMC-544 não conseguiu prevenir a trombocito- penia inicial mas acelerou a recuperação completa das contagens de pla- quetas até os níveis pré-tratamento e também suprimiu as elevações nas aminotransferases hepáticas séricas circulantes.Subcutaneous pretreatment of oprelvekin mice (NEUMEGA® / rhlL-11) (250 µg / kg) significantly reduced the size of CMC-544-associated thrombocytopenia. When evaluated in cynomolgus monkeys, daily subcutaneous pretreatment with oprelvekin (125 µg / kg) for 5 days completely prevented CMC-544-associated thrombocytopenia but also suppressed elevations in serum hepatic aminotransferases associated with CMC-544 treatment. isolated. Concurrent administration of oprelvekin with CMC-544 failed to prevent initial thrombocytopenia but accelerated complete recovery of platelet counts to pretreatment levels and also suppressed elevations in circulating serum liver aminotransferases.

Este estudo fornece ainda evidências de que o uso profilático de oprelvekin pode melhorar a trombocitopenia induzida por CMC-544, aumen- tando potencialmente o benefício terapêutico do CMC-544 em pacientes com B-NHL.This study also provides evidence that prophylactic oprelvekin use may improve CMC-544-induced thrombocytopenia, potentially increasing the therapeutic benefit of CMC-544 in patients with NHL-B.

Alguns dos resultados apresentados nesta seção foram apre- sentados no encontro anual da Sociedade Americana de Hematologia ("A- merican Society of Hematology"), 9-12 de dezembro de 2006, Orlando, Fl., no seguinte abstract: "Thrombocytopenia induced by CMC-544 and its ame- lioration using oprelvekin (NEUMEGA®/ recombinant human interleukin-11", de John F DiJoseph, Dana Walker, Maureen M Dougher, Doug C Armellino, Dave Clarke & Nitin K Damle. Outras modalidadesSome of the results presented in this section were presented at the annual meeting of the American Society of Hematology, December 9-12, 2006, Orlando, Fl., In the following abstract: "Thrombocytopenia induced by CMC-544 and its enhancement using oprelvekin (NEUMEGA® / recombinant human interleukin-11 ", by John F DiJoseph, Dana Walker, Maureen M Dougher, Doug C Armellino, Dave Clarke & Nitin K Damle. Other modalities

Outras modalidades da invenção tornar-se-ão aparentes para os especialistas na técnica a partir de uma consideração do relatório descritivo ou da prática da invenção descrita neste relatório. Espera-se que o relatório e os exemplos sejam como apenas como exemplificativos, o verdadeiro es- copo da invenção estando indicado pelas reivindicações a seguir.Other embodiments of the invention will become apparent to those skilled in the art from a consideration of the disclosure report or the practice of the invention described in this report. The report and examples are expected to be by way of example only, the true scope of the invention being indicated by the following claims.

Claims (66)

1. Método para aliviar trombocitopenia em um indivíduo, o mé- todo compreendendo uma etapa de: administrar uma quantidade terapeuti- camente eficaz de interleucina-11 ao indivíduo, em que a trombocitopenia é associada à administração ao indivíduo de um conjugado compreendendo uma porção direcionadora e um fármaco citotóxico.1. A method of alleviating thrombocytopenia in an individual, the method comprising a step of: administering a therapeutically effective amount of interleukin-11 to the individual, wherein thrombocytopenia is associated with administering to the individual a conjugate comprising a targeting moiety. and a cytotoxic drug. 2. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o indivíduo sofre de câncer ou de uma doença cancerosa.A method according to claim 1, wherein the subject suffers from cancer or a cancerous disease. 3. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que a por- ção direcionadora compreende um anticorpo.The method of claim 1 or 2, wherein the targeting moiety comprises an antibody. 4. Método de acordo com a reivindicação 3, em que o anticorpo é um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo anti-Lewis Y1 um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quaisquer combina- ções dos mesmos.The method of claim 3, wherein the antibody is an anti-CD22 antibody, an anti-CD33 antibody, an anti-Lewis Y1 antibody, an anti-5T4 antibody, an anti-CD30 antibody, or any combinations thereof. of the same. 5. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o fár- maco citotóxico é uma caliqueamicina, um derivado de caliqueamicina, uma esperamicina, ou um derivado de esperamicina.The method of claim 1 or 2, wherein the cytotoxic drug is a calicheamicin, a calicheamicin derivative, a speramycin, or a speramycin derivative. 6. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD22-caliqueamicina.The method of claim 1 or 2, wherein the conjugate is an anti-CD22-calicheamicin antibody conjugate. 7. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD33-caliqueamicina.A method according to claim 1 or 2, wherein the conjugate is an anti-CD33-calicheamicin antibody conjugate. 8. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y-caliqueamicina.A method according to claim 1 or 2, wherein the conjugate is an anti-Lewis Y-calicheamicin antibody conjugate. 9. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina.A method according to claim 1 or 2, wherein the conjugate is an anti-5T4-calicheamicin antibody conjugate. 10. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD30-caliqueamicina.A method according to claim 1 or 2, wherein the conjugate is an anti-CD30-calicheamicin antibody conjugate. 11. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que inter- leucina-1 1 compreende interleucina-11 humana recombinante.The method of claim 1 or 2, wherein interleukin-11 comprises recombinant human interleukin-11. 12. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que a in- terleucina-1 1 é administrada antes da administração do conjugado.The method of claim 1 or 2, wherein interleukin-11 is administered prior to administration of the conjugate. 13. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o re- ferido método previné, reduz, alivia ou detém a trombocitopenia no indiví- duo.The method of claim 1 or 2, wherein said method prevents, reduces, alleviates or arrests thrombocytopenia in the subject. 14. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que a trombocitopenia é pelo menos em parte resultante de destruição da medula óssea.A method according to claim 1 or 2, wherein thrombocytopenia is at least in part resulting from bone marrow destruction. 15. Método de acordo com a reivindicação 14, em que a porção direcionadora compreende um anticorpo.The method of claim 14, wherein the targeting moiety comprises an antibody. 16. Método de acordo com a reivindicação 15, em que o anticor- po é um anticorpo"anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo anti- Lewis Y, um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quaisquer com- binações dos mesmos.The method of claim 15, wherein the antibody is an anti-CD22 antibody, an anti-CD33 antibody, an anti-Lewis Y antibody, an anti-5T4 antibody, an anti-CD30 antibody, or any combinations thereof. 17. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o fárma- co citotóxico é uma caliqueamicina, um derivado de caliqueamicina, uma esperamicina, ou um derivado de esperamicina.The method of claim 14, wherein the cytotoxic drug is a calicheamicin, a calicheamicin derivative, a speramycin, or a speramycin derivative. 18. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD22-caliqueamicina.The method of claim 14, wherein the conjugate is an anti-CD22-calicheamicin antibody conjugate. 19. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD33-caliqueamicina.The method of claim 14, wherein the conjugate is an anti-CD33-calicheamicin antibody conjugate. 20. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y-caliqueamicina.The method of claim 14, wherein the conjugate is an anti-Lewis Y-calicheamicin antibody conjugate. 21. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina.The method of claim 14, wherein the conjugate is an anti-5T4-calicheamicin antibody conjugate. 22. Método de acordo com a reivindicação 14 em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD30-caliqueamicina.The method of claim 14 wherein the conjugate is an anti-CD30-calicheamicin antibody conjugate. 23. Método de acordo com a reivindicação 14, em que interleu- cina-11 compreende interleucina-11 humana recombinante.The method of claim 14, wherein interleukin-11 comprises recombinant human interleukin-11. 24. Método de acordo com a reivindicação 14, em que a inter- leucina-11 é administrada antes da administração do conjugado.The method of claim 14, wherein interleukin-11 is administered prior to administration of the conjugate. 25. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o referido método previne, reduz, alivia ou detém a trombocitopenia que pelo menos em parte, é resultante de destruição da medula óssea.The method of claim 14, wherein said method prevents, reduces, alleviates or arrests thrombocytopenia which at least in part results from bone marrow destruction. 26. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que a trombocitopenia é pelo menos em parte resultante de lesão hepática.The method of claim 1 or 2, wherein thrombocytopenia is at least in part a result of liver injury. 27. Método de acordo com a reivindicação 26, em que a porção direcionadora compreende um anticorpo.The method of claim 26, wherein the targeting moiety comprises an antibody. 28. Método de acordo com a reivindicação 27, em que o anticor- po é um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo anti- Lewis Y, um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quaisquer com- binações dos mesmos.The method of claim 27, wherein the antibody is an anti-CD22 antibody, an anti-CD33 antibody, an anti-Lewis Y antibody, an anti-5T4 antibody, an anti-CD30 antibody, or any combinations thereof. 29. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o fárma- CO-citotóxico é uma caliqueamicina, um derivado de caliqueamicina, uma esperamicina, ou um derivado de esperamicina.The method of claim 26, wherein the CO-cytotoxic drug is a calicheamicin, a calicheamicin derivative, a speramycin, or a speramycin derivative. 30. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD22-caliqueamicina.The method of claim 26, wherein the conjugate is an anti-CD22-calicheamicin antibody conjugate. 31. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD33-caliqueamicina.The method of claim 26, wherein the conjugate is an anti-CD33-calicheamicin antibody conjugate. 32. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y caliqueamicina.The method of claim 26, wherein the conjugate is an anti-Lewis Y calicheamicin antibody conjugate. 33. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina.The method of claim 26, wherein the conjugate is an anti-5T4-calicheamicin antibody conjugate. 34. Método de acordo com a reivindicação 26 em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD30-caliqueamicina.The method of claim 26 wherein the conjugate is an anti-CD30-calicheamicin antibody conjugate. 35. Método de acordo com a reivindicação 26, em que interleu- cina-11 compreende interleucina-11 humana recombinante.The method of claim 26, wherein interleukin-11 comprises recombinant human interleukin-11. 36. Método de acordo com a reivindicação 26, em que a inter- leucina-11 é administrada antes da administração do conjugado.The method of claim 26, wherein interleukin-11 is administered prior to administration of the conjugate. 37. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o referido método previne, reduz, alivia ou detém a trombocitopenia pelo menos em parte resultante de lesão hepática.The method of claim 26, wherein said method prevents, reduces, alleviates or arrests thrombocytopenia at least in part as a result of liver injury. 38. Método de acordo com a reivindicação 37, em que o referido método ainda previne, reduz, alivia ou detém uma lesão hepática no indiví- duo.The method of claim 37, wherein said method further prevents, reduces, alleviates or detains a liver injury in the subject. 39. Método de acordo com a reivindicação 37, em que o referido método ainda previne, reduz, alivia ou detém uma inflamação associada à lesão hepática no indivíduo.The method of claim 37, wherein said method further prevents, reduces, alleviates or detains inflammation associated with liver injury in the subject. 40. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de interleucina-11, pelo menos um conjugado cuja administração resulta em trombocitopenia, e pelo menos um veículo fisiolo- gicamente aceitável, em que o conjugado compreende uma porção direcio- nadora e um fármaco citotóxico.40. A pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of interleukin-11, at least one conjugate whose administration results in thrombocytopenia, and at least one physiologically acceptable carrier, wherein the conjugate comprises a targeting moiety and a cytotoxic drug. 41. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que a porção direcionadora compreende um anticorpo.The pharmaceutical composition of claim 40, wherein the targeting moiety comprises an antibody. 42. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 41, em que o anticorpo é um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo anti-Lewis, um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quaisquer combinações dos mesmos.The pharmaceutical composition of claim 41, wherein the antibody is an anti-CD22 antibody, an anti-CD33 antibody, an anti-Lewis antibody, an anti-5T4 antibody, an anti-CD30 antibody, or any combination of the above. same. 43. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que o fármaco citotóxico é uma caliqueamicina, um derivado de calique- amicina, uma esperamicina, ou um derivado de esperamicina.The pharmaceutical composition of claim 40, wherein the cytotoxic drug is a calicheamicin, a calicheamicin derivative, a speramycin, or a speramycin derivative. 44. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD22- caliqueamicina.The pharmaceutical composition of claim 40, wherein the conjugate is an anti-CD22-calicheamicin antibody conjugate. 45. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD33- caliqueamicina.The pharmaceutical composition of claim 40, wherein the conjugate is an anti-CD33-calicheamicin antibody conjugate. 46. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y- caliqueamicina.The pharmaceutical composition of claim 40, wherein the conjugate is an anti-Lewis Y-calicheamicin antibody conjugate. 47. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina.The pharmaceutical composition of claim 40, wherein the conjugate is an anti-5T4-calicheamicin antibody conjugate. 48. Método de acordo com a reivindicação 26 em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD30-caliqueamicina.A method according to claim 26 wherein the conjugate is an anti-CD30-calicheamicin antibody conjugate. 49. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que interleucina-11 compreende interleucina-11 humana recombinante.The pharmaceutical composition of claim 40, wherein interleukin-11 comprises recombinant human interleukin-11. 50. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40 ou 49, em que a interleucina-11, o pelo menos um conjugado, e um veículo fisiologicamente aceitável são combinados como uma ou mais preparações para administração simultânea ou seqüêncial da interleucina-11 e do pelo menos um conjugado.The pharmaceutical composition of claim 40 or 49, wherein interleukin-11, the at least one conjugate, and a physiologically acceptable carrier are combined as one or more preparations for simultaneous or sequential administration of interleukin-11 and at least least one conjugate. 51. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que a administração da referida composição a um indivíduo previne, re- duz ou detém a trombocitopenia no indivíduo.The pharmaceutical composition of claim 40, wherein administering said composition to an individual prevents, reduces or arrests thrombocytopenia in the individual. 52. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 51, em que o indivíduo sofre de câncer ou de uma doença cancerosa.The pharmaceutical composition of claim 51, wherein the subject suffers from cancer or a cancerous disease. 53. Composição farmacêutica de aeordo com a reivindicação 40, em que a trombocitopenia produzida pela administração do pelo menos um conjugado resulta, pelo menos em parte, de destruição da medula óssea.The pharmaceutical composition of claim 40, wherein the thrombocytopenia produced by the administration of at least one conjugate results, at least in part, from bone marrow destruction. 54. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que a trombocitopenia produzida pela administração de pelo menos um conjugado resulta, pelo menos em parte, de lesão hepática.The pharmaceutical composition of claim 40, wherein the thrombocytopenia produced by the administration of at least one conjugate results at least in part from liver injury. 55. Kit compreendendo: interleucina-11; e pelo menos um conjugado cuja administração a um indivíduo resulta em trombocitopenia no indivíduo, em que o conjugado compreende uma porção direcionadora e um fármaco citotóxico.55. A kit comprising: interleukin-11; and at least one conjugate whose administration to an individual results in thrombocytopenia in the individual, wherein the conjugate comprises a targeting moiety and a cytotoxic drug. 56. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que a porção dire- cionadora compreende um anticorpo.The kit of claim 55, wherein the targeting moiety comprises an antibody. 57. Kit de acordo com a reivindicação 56, em que o anticorpo é um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo anti-Lewis, um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quaisquer combinações dos mesmos.The kit of claim 56, wherein the antibody is an anti-CD22 antibody, an anti-CD33 antibody, an anti-Lewis antibody, an anti-5T4 antibody, an anti-CD30 antibody, or any combinations thereof. . 58. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que o fármaco ci- totóxico é uma caliqueamicina, um derivado de caliqueamicina, uma espe- ramicina, ou um derivado de esperamicina.The kit of claim 55, wherein the cytotoxic drug is a calicheamicin, a calicheamicin derivative, a spheramycin, or a speramycin derivative. 59. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD22-caliqueamicina.The kit of claim 55, wherein the conjugate is an anti-CD22-calicheamicin antibody conjugate. 60. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD33-caliqueamicina.A kit according to claim 55, wherein the conjugate is an anti-CD33-calicheamicin antibody conjugate. 61. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y-caliqueamicina.The kit of claim 55, wherein the conjugate is an anti-Lewis Y-calicheamicin antibody conjugate. 62. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina.The kit of claim 55, wherein the conjugate is an anti-5T4-calicheamicin antibody conjugate. 63. Método de acordo com a reivindicação 55 em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD30-caliqueamicina.The method of claim 55 wherein the conjugate is an anti-CD30-calicheamicin antibody conjugate. 64. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que interleucina-11 compreende interleucina-11 humana recombinante.The kit of claim 55, wherein interleukin-11 comprises recombinant human interleukin-11. 65. Kit de acordo-com a reivindicação 55, em que a trombocito- penia produzida pela administração do pelo menos um conjugado resulta, pelo menos em parte, de destruição da medula óssea.A kit according to claim 55, wherein the thrombocytopenia produced by the administration of at least one conjugate results, at least in part, from bone marrow destruction. 66. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que a trombocito- penia produzida pela administração do pelo menos um conjugado resulta, pelo menos em parte, de lesão hepática.The kit of claim 55, wherein the thrombocytopenia produced by the administration of at least one conjugate results, at least in part, from liver injury.
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