BRPI0609630A2 - composições e métodos para tratamento de doenças epidérmicas hiperproliferativas - Google Patents

Abstract

COMPOSIçõES E MéTODOS PARA TRATAMENTO DE DOENçAS EPIDéRMICAS HIPERPROLIFERATIVAS. A presente invenção fornece composições e métodos para uso no tratamento de doenças epidérmicas hiperproliferativas. De modo específico, a presente invenção descreve composições farmacêuticas para administração tópica consis- tindo essencialmente de nicotinamida e um metabólito de vitamina D, calcipotriol, os quais são particularmente eficazes no tratamento e na manutenção do tratamento da psoríase e outros distúrbios e doenças dermatológicas relacionadas.

Description

"COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA TRATAMENTO DE DOENÇASEPIDÉRMICAS HIPERPROLIFERATIVAS"

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a composições úteispara o tratamento de doenças epidérmicas hiperproliferati-vas. De modo especifico, a presente invenção proporciona umacomposição tópica consistindo, essencialmente de metabólitode vitamina D, calcipotriol e nicotinamida, que são particu-larmente eficazes no tratamento da psoriase e de outros dis-túrbios e doenças dérmicas relacionadas.

Fundamentos da Invenção

Distúrbios e Doenças de Pele Hiperproliferativas

Distúrbios de pele hiperproliferativos referem-sea um conjunto de doenças e distúrbios, os quais se caracte-rizam por um nivel maior que o normal de proliferação de cé-lulas epidérmicas conhecidas como ceratinócitos, e como umaregra, pela diferenciação anormal também.

A patologia epidérmica hiperproliferativa pode sermaligna ou benigna. Patologias epidérmicas hiperprolifera-tivas malignas incluem: carcinoma de célula escamosa (SCC),carcinoma de célula basal (BCC) e outros cânceres de peleque não melanomas (NMSCs). Exemplos representativos de pato-logias epidérmicas hiperproliferativas benignas incluem pso-riases, verrugas comuns, ceratocantoma, ceratose seborréica,seborréia e ictiose.

A psoriase é um distúrbio de pele não contagiosoque afeta até 2% da população mundial. Estima-se que, dezmilhões nos Estados Unidos e na Europa padecem de psoriase eaté 260.000 novos casos são diagnosticados a cada ano. Sónos Estados Unidos há mais de 1.500.000 visitas clinicas porano de casos de psoriase e os custos anuais de pacientes nãohospitalizados ao estimados atualmente, em cerca de 2 bi-Ihões de dólares.

A psoriase é ocasionada por fatores desconhecidosque, estimulam a ativação, proliferação e liberação de lin-fócitos T e liberação de citocinas que levam à hiperprolife-ração de ceratinócitos. Embora etiologia da psoriase sejadesconhecida, os ceratinócitos afetados são responsáveis pe-las características clinicas tipicas da doença; lesões depele inflamadas bem demarcadas cobertas com uma escamaçãobranco-prateado, que cobre cerca de 10%-15% da superfíciecorpórea. A psoriase afeta, principalmente, os adultos, epode manifestar-se de formas variadas e em diferentes grausde gravidade.

A estratégia principal para o tratamento de doen-ças de pele hiperproliferativas incluindo a psoriase é pre-venir a divisão exagerada de ceratinócitos e estimular a di-ferenciação celular .

Atualmente existem três modalidades de tratamentoda psoriase:

1) administração tópica de creme ou ungüento tera-pêutico, para tratamento de casos brandos e moderados;

2) Fototerapia (UVA ou UVB) usada em separado, ouem combinação com medicação ou tratamento tópico, requer vi-sitas repetidas ao clinico e expõe o paciente a perigos deradiação concomitante;3) tratamento sistêmico, confia na terapia imunos-supressora, e está limitado aos casos graves, devido a sé-rios efeitos colaterais.

Vitamina D e Doença de Pele Hiperproliferativa

A vitamina D é um pró-hormônio com vários metabó-litos ativos que agem como hormônios. Na pele, a pré-vitamina D3 é sintetizada fotoquimicamente de 7-deidrocolesterol e é lentamente isomerizada a vitamina D3que é removida por proteína de ligação à vitamina D. No fí-gado a vitamina D3 é convertida em 25(OH)D3, a forma circu-lante principal, que passa através da circulação entero-hepática e é reabsorvida do intestino. Nos rins, ela é ain-da hidroxilada na forma mais metabolicamente ativa,la,25(OH)2D3 (la,25-diidroxicolecalciferol, calcitriol, hor-mônio de vitamina D

A evidencia experimental demonstrou, que a vitami-na D funciona como um agente anti-proliferativo e estimula adiferenciação terminal de ceratinócitos. Em lesões psoriá-ticas, os ceratinócitos epidérmicos apresentam hiperprolife-ração e diferenciação prejudicada acionada por inflamação.Portanto, a vitamina D e alguns análogos são eficazes notratamento da psoriasis vulgaris (revisto em DeLuca 1988;Lehmann et al., 2004). A administração sistêmica dessescompostos está limitada por sua toxicidade e efeitos adver-sos no metabolismo do cálcio, portanto são preferidas prepa-rações tópicas.

Calcipotriol (calcipotrieno) um derivado de vita-mina D3 é comercializado nos Estados Unidos como um anti-psoriático tópico sob a marca registrada Dovonex1 ' (EUA) ouDaivonex(R) ( (Europa) . 0 calcipotriol é tão potente quanto ocalcitriol que ocorre naturalmente, na regulação da prolife-ração celular, porém tem o beneficio de ser muito menos a-tivo em seu efeito no metabolismo do cálcio. Apesar disto,o calcipotriol é apenas parcialmente eficaz no tratamento delesões psoriáticas.

A técnica proporciona alguns exemplos de análogosde vitamina D e derivados e composições compreendendo os mesmos.

Análogos de vitamina D estão descritos na Patenten° 4.851.401 (análogos de ciclopentano-vitamina D), PatenteUS n° 5.120.722 (derivados triidroxicalciferol) , Patente USn0 5.446.035 (vitamina D substituída com 20-metila), PatenteUS n° 5.411.949 (derivados 23-oxa), Patente US. n°5.237.110(compostos 19-nor-vitamina D), Patente US n° 4.857.518 (de-rivados de 24-homo-vitamina D hidroxilados) Análogos de vi-tamina D adicionais são ensinados nas Patentes US n°s.4.804.502, 4.866.048, 5.145.846, 5.374.629, 5.403.940,5.446.034 e 5.447.924.

A Patente US n° 5.037.816 dirige-se a um método detratamento da psoriase que compreende a administração tópicade uma quantidade eficaz de um composto de vitamina D,que écapaz de estimular a diferenciação de células tumorais cul-tivadas ou roedores normais ou fibroblastos humanos ou cera-tinócitos in vitro.

A Patente n° 6.552.009 apresenta uma composiçãocompreendendo um análogo de vitamina D e um derivado de re-tinóide útil no tratamento de distúrbios caracterizados porproliferação celular anormal e/ou diferenciação celular. Emalgumas modalidades preferidas o análogo de vitamina D é se-lecionado de calcitriol e calcipotriol.

A Patente US n° 6.753.013 descreve uma composiçãofarmacêutica para uso dérmico compreendendo uma combinaçãode um análogo doe vitamina D e um corticosteróide, sendo queessa composição alivia a inconveniência de um regime de doiscomponentes para o tratamento da psoriase e de outras doenças de pele inflamatórias.

Nicotinamida

A nicotinamida (NA, niacinamida) um derivado davitamina B3 e um precursor da coenzima nicotinamida adeninadinucleotideo (NAD) desempenha múltiplas funções no metabo-lismo celular. NA demonstrou induzir a diferenciação de cé-lulas produtoras de insulina (Otonkoski et al., 1993) e aproteção de células P pancreáticas de agentes genotóxicos(Pipeleers e Van de Winkel, 1986) . A Patente US n°6.248.763 refere-se a composições tópicas especificas para otratamento de condições de pele por exemplo, acne e psoria-se, compreendendo de 0,01% a 1% de metil nicotinato, como oingrediente ativo.

Os efeitos sinérgicos de NA e metabólitos de vita-mina D na diferenciação e proliferação de células epidérmi-cas humanas foram recentemente descritos por alguns dos pre-sentes inventores.

Publicações do Pedido de Patente Internacional WO01/51051 e WO 2004/006887 de alguns dos presente inventoressão direcionados a composições e métodos de tratamento deuma patologia epidérmica hiperproliferativa benigna ou ma-ligna compreendendo a administração ao indivíduos de umaquantidade terapeuticamente eficaz de um agente selecionadodo grupo consistindo de nicotinamida e/ou adenosina difosfa-to ciclica/ribose (cADPR) e de seus análogos. Os pedidostambém apresentam a combinação de metabólito de vitaminaD3(la 25 (0H2) D3) e NA e de seu efeito sinérgico na diferen-cia e proliferação de célula epidérmicas humanas.

a vitamina D3 e análogos de vitamina D3 são conhe-cidos por serem dotados de propriedades anti-proliferativase pro-diferenciação e, portanto, são eficazes no tratamentode distúrbios de pele hiperproliferativos, por exemplo, pso-riasis vulgaris. O efeito sinérgico da vitamina D3 com ni-cotinamida para inibir mais ainda a proliferação de cerati-nócitos foi demonstrado por alguns inventores da presenteinvenção. Embora o efeito inibidor sinérgico da vitamina D3e da nicotinamida tenha sido demonstrado em ceratinócitos invitro, a otimização dos dois componentes numa composiçãofarmacêutica nunca foi demonstrada.

A técnica não ensinou, tampouco sugeriu formula-ções especificas consistindo, essencialmente de um análogode vitamina D3 e um análogo de nicotinamida para prevenção,tratamento ou mitigação de distúrbios associados com doençasde pele hiperproliferativas.

Permanece portanto, a necessidade no campo médiconão atendida quanto a composições e métodos úteis na preven-ção e tratamento de sintomas associados com doença hiperpro-liferativa, particularmente, psoriase.Sumário da Invenção

A presente invenção proporciona composições con-sistindo, essencialmente, de um análogo de vitamina D3 enicotinamida, e a métodos para emprego dos mesmos no trata-mento de doença hiperproliferativa. Em particular, os in-ventores da presente invenção descobriram, inesperadamente,que o metabólito de vitamina D, calcipotriol, quando previs-to em combinação com nicotinamida, produz um efeito sinérgi- co na redução dos sintomas de doença hiperproliferativa numafaixa de concentração especifica. Portanto, a presente in-venção proporciona composições terapêuticas altamente efica-zes, consistindo, essencialmente, de calcipotriol e de nico-tinamida, em faixas de concentração definidas.

Adicionalmente a invenção revela que, em contrapo-sição a formulações conhecidas compreendendo calcipotriol, ocalcipotriol na presente composição não penetra de maneirasignificativa à pele, prevenindo assim, a exposição sistêmi-ca ao fármaco e concomitante efeitos colaterais. A compo-sição da presente invenção é portanto útil, de forma inespe-rada, no tratamento imediato de doença hiperproliferativa,bem como na terapia de manutenção a longo prazo

As composições da presente invenção foram formula-da para serem altamente eficazes e seguras na inibição daproliferação celular, em particular de células da pele, emais particularmente de ceratinócitos e são portanto, úteisno tratamento da psoriase e de outras doenças de pele hiper-prolif erativas .Num aspecto da presente invenção é proporcionadouma composição farmacêutica para administração tópica útilno tratamento de doenças e distúrbios de pele hiperprolife-rativos, consistindo essencialmente, de:

calcipotriol numa concentração de cerca de 10 |ig/g(microgramas por grama) a cerca de 100 |J.g/g,

nicotinamida a uma composição de cerca de 0,1 mg/ga cerca de 50 mg/g; e

um excipiente ou veiculo dermatologicamente acei-tável .

Em algumas modalidades a composição é proporciona-da numa forma que é selecionada do grupo consistindo de umasolução aquosa, uma solução não aquosa, uma loção, um creme,um gel, um ungüento, espuma, musse, um spray, uma emulsão euma microemulsão.

Em algumas modalidades a composição é proporciona-da na forma de um ungüento, creme, loção ou gel dermatológi-co.

Em algumas modalidades o excipiente dermatológicocompreende polietileno glicol (PEG) . Em algumas modalidadesPEG é selecionado de PEg-4 00, PEG-4 000 e uma mistura dosdois. Preferivelmente, a composição compreende uma misturade PEG-400 e PEG-4000.

Em algumas modalidades, o veiculo compreende aindaum tensoativo. Um exemplo não limitante de um tensoativo a-dequado é álcool estearilico polioxietilado (esteareth). Emalgumas modalidades preferidas o veiculo dermatológico com-preende PEG-400, PEG-4000 e Steareth 20. Em algumas modali-dades, a composição da presente invenção consiste, essenci-almente de calcipotriol, nicotinamida, PEG e Steareth-20.

Em modalidades especificas a composição dermatoló-gica possui a seguinte formulação:cerca de 10 ug/g a cerca de 100 ug/g de calcipotriol ,cerca de 0,5 a cerca de 25 mg/g de nicotinamida,cerca de 70% a cerca de 80% (peso/peso) PEG-400,cerca de 15% a cerca de 25% (peso/peso) PEG 4000,cerca de 1% a cerca de 5% (peso/peso) de Steareth- 20, E .cerca de 0,1 a cerca de 1% (peso/peso) de vitamina

Em algumas modalidades, o calcipotriol é propor-cionado a uma concentração de cerca de 20 ug/g a cerca de 70\xg/g. Em modalidades especifica, o calcipotriol é previstoa uma concentração de cerca de 50 ug/g.

Em outras modalidades o calcipotriol é proporcio-nado a uma concentração de cerca de 10 ug/g a cerca de 50ug/g, preferivelmente a uma concentração de cerca de 15 ug/ga cerca de 35 ug/g. Em algumas modalidades, o calcipotriol,é dado a uma concentração de cerca de ....... a cerca de 30 ug/g.

Em algumas modalidades, a nicotinamida é propor-cionada a uma concentração de cerca de 0,5 mg/g a cerca de25 mg/g. Em algumas modalidades, a nicotinamida é proporcio-nada a uma concentração de cerca de 1 mg/g a cerca de 20mg/g. Em outras modalidades, a nicotinamida é proporcionadaa uma concentração de cerca de 2 mg/g a cerca de 10 mg/g.Em modalidades especificas a nicotinamida é dada a uma con-centração final de cerca de 2,1 mg/g.

Portanto, a presente invenção proporciona um un-güento a base de PEG para administração tópica útil no tra-tamento de doenças e distúrbios de pele hiperproliferativosconsistindo essencialmente de:

calcipotriol a uma concentração de cerca de 50u/g,

nicotinamida a uma concentração de cerca de 2,1mg/g, e

um excipiente ou veiculo a base de PEG dermatolo-gicamente aceitável.

Em algumas modalidades a doença de pele hiperpro-liferativa é uma doença hiperproliferativa benigna selecio-nada dentre psoriase, ceratose solar (actinica) ictiose, do-ença de Grover (dermatose acantolitica passageira) , verrugascomuns, ceratocantoma, ceratose seborréica, escleroderma eseborréia.

Em outras modalidades, a doença de pele hiperpro-lif erativa é uma doença de pele hiperproliferativa maligna.Exemplos representativos de patologias epidérmicas hiperpro-liferativas malignas incluem, sem limitação, carcinoma decélula escamosa (SCC), carcinoma de célula basal (BCC) e ou- tros cânceres de pele que não melanomas (NMSCs).

Em modalidades especificas a doença hiperprolife-rativa é psoriase.

Num outro aspecto, a presente invenção proporcionaum método de prevenir ou tratar uma doença ou distúrbio depele hiperproliferativo compreendendo a etapa de:

administração tipica a um indivíduo em necessidadeda mesma, de' uma quantidade terapeuticamente eficaz de umacomposição consistindo essencialmente de calcipotriol, a umaconcentração de cerca de 10 ug/g a cerca de 100 ug/g, nico-tinamida a uma concentração de cerca de 0,1 mg/g a cerca de50 mg/g, e um excipiente ou veiculo dermatologicamente acei-tável .

0 método compreende, de preferência, a administra-ção tópica de até cerca de quatro vezes diárias de uma dosa-gem terapeuticamente suficiente dessa composição. Em modali-dades especificas a composição é administrada uma ou duasvezes ao dia. Em algumas modalidades, a composição é aplica-da duas vezes ao dia a intervalos de cerca de 12 horas. Emoutras modalidades, a composição é administrada uma vez aodia.

Em algumas modalidades, o método de tratamento in-clui dois períodos de tratamento,: um tratamento inicial, euma tratamento de manutenção. Primeiro, no tratamento ini-cial, administra-s a um paciente uma dosagem inicial da com-posição consistindo essencialmente de calcipotriol a umaconcentração de cerca de 10 ug/g a cerca de 100 ug/g; nico-tinamida a uma concentração de cerca de 0,1 mg/g a cerca de50 mg/g; e um excipiente ou veiculo dermatologicamente acei-tável por um período inicial e após isto, administra-se aopaciente uma dosagem de manutenção menor de uma composiçãoconsistindo essencialmente de calcipotriol a uma concentra-ção de cerca de 10 f^g/g a cerca de 50 f-ig/g; nicotinamida auma concentração de cerca de 0,1 mg/g a cerca de 50 mg/g; eum excipiente ou veiculo dermatologicamente aceitável.

Para a dose de manutenção, o calcipotriol é dado a uma concentração de cerca de 10 ug/g a cerca de 50 |^g/g. Emainda outras modalidades, o calcipotriol é proporcionado auma concentração de cerca de 15 ug/g a cerca de 3 5ug/g. Emmodalidades especificas o calcipotriol é dado a uma concen-tração de cerca de 30 |J.g/g.

Em algumas modalidades, a nicotinamida é dada auma concentração de cerca de 0,5 mg/g a cerca de 25 mg/g.Em algumas modalidades, ela é fornecida a uma concentraçãode cerca de 1 mg/g a cerca de 20 mg/g. Em outras modalida-des a nicotinamida é dada a uma concentração de cerca de 2 mg/g a cerca de 10 mg/g, preferivelmente a uma concentraçãode cerca de 2,1 mg/g.

De acordo com as modalidades preferidas da presen-te invenção e proporcionado um método de prevenção ou trata-mento de uma doença ou distúrbio de pele hiperproliferativocompreendendo as etapas de:

administração tópica a um indivíduo em necessidadeda mesma, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de umacomposição consistindo essencialmente de calcipotriol a umaconcentração de cerca de 10 |_ig/g a cerca de 100 ja,g/g; nico-tinamida a uma concentração de cerca de 0,5 mg/g a cerca de25 mg/g; e um excipiente ou veiculo dermatologicamente acei-tável durante um periodo inicial de tempo a fim de reduziros sintomas da doença hiperproliferativa, eadministração tópica a um indivíduo em necessidadeda mesma de uma quantidade terapeuticamente eficaz de umacomposição consistindo essencialmente de calcipotriol a umaconcentração de cerca de 10 uq/g a cerca de 50 ug/g, nicoti-namida a uma concentração de cerca de 0,5 mg/g a cerca de 25mg/g, e um excipiente ou veiculo dermatologicamente aceitá-vel por um segundo periodo de tempo.

Numa modalidade o periodo de tempo inicial é cercade 4 semanas a cerca de 24 semanas, preferivelmente, cercade 4 semanas a cerca de 16 semanas. Em algumas modalidadespreferidas o periodo inicial de tratamento é de cerca de 6semanas a cerca de 12 semanas, preferivelmente cerca de 8semanas. O segundo periodo de tempo é cerca de 8 semanas acerca de 52 semanas, preferivelmente de cerca de 12semans acerca de 26 semanas.

Em algumas modalidades, o indivíduo é um mamífero.Em modalidades especificas o indivíduo é um ser humano.

Em um outro aspecto adicional da presente invençãoé proporcionada uma composição compreendendo calcipotriol,onde o calcipotriol não penetra significantemente a pele.Em algumas modalidades, menos que 10% do calcipotriol pene-tra a pele, preferivelmente menos que 5%. Em algumas modali-dades, menos que 3% e preferivelmente, menos que 1% do cal-cipotriol penetra a pele.

Em algumas modalidades, a composição consiste, es-sencialmente de calcipotriol, pelo menos um PEG e um tensoa-tivo. Em modalidades especificas, a composição consiste,essencialmente de calcipotriol, PEG-400, PEG-4000 e Steare-th-20.

A presente invenção propicia ainda o uso de umacomposição consistindo essencialmente, de calcipotriol, a a cerca de 100 \iq/q, e nicotinamida a uma concentração decerca de 0,1 mg/g a cerca de 50 mg/g. na preparação de umacomposição terapêutica para tratamento tópico de doença hi-perproliferativa.

A presente invenção proporciona ainda uma composi- ção da presente invenção embalada num recipiente adequadopara fornecimento da dita composição, juntamente com instru-ções de uso.

Portanto, de acordo com aspectos ulteriores dapresente invenção são previstos kits farmacêuticos, compre- endendo uma composição consistindo essencialmente de:

calcipotriol a uma concentração de cerca de 10|j,g/g a cerca de 100 |-ig/g,

nicotinamida a uma composição de cerca de 0,1 mg/ga cerca de 50 mg/g,

um excipiente ou veiculo dermatologicamente acei-tável;

e instruções de uso.

De acordo com algumas modalidades preferidas apresente invenção proporciona um kit compreendendo uma com-posição tópica consistindo essencialmente de calcipotriol auma concentração de cerca de 50 ug/g; niconitamida a umaconcentração de cerca de 2,1 mg/g, um excipiente ou veiculodermatologicamente aceitável, e instruções de uso.De acordo com outras modalidades preferidas o kitcompreende também uma composição tópica consistindo intrin-secamente, de calcipotriol a uma concentração de cerca de 10p.g/g a cerca de 50 6g/g; nicotinamida a uma concentração decerca de 2,1 mg/g; e um excipiente ou veiculo dermatologica-mente aceitável junto com instruções de uso. Concentraçõespreferidas de calcipotriol são cerca de 15 jag/g a cerca de35 \iq/q, preferivelmente cerca de 30 ug/g.

estas e outras modalidades da presente invençãotornar-se-ão evidentes em conjunto com as Figuras, descriçãoe reivindicações que seguem

DESCRIÇÃO SUCINTA DAS FIGURAS

Figuras 1A-1B: A Figura IA é um gráfico mostrandoo nivel de orto-ceratose induzida por diferentes formulaçõesde ungüento estáveis. A Figura 1B é um gráfico mostrando aatividade do fármaco as formulações de ungüento estáveis. Asformulações compreendem 50 |J.g/g de calcipotriol e 0,61 mg/gde NA.

Figuras 2A-2B: A Figura 2A é um gráfico mostrandoa otimização da concentração de NA na formulação de ungüen-to, conforme determinado por um aumento na orto-ceratose. AFigura 2B é um gráfico mostrando a atividade do fármaco dasformulações com 50 ng/g de calcipotriol. e diferentes con-centrações de NA derivadas da Figura 2A.

A Figura 3 mostra o efeito sinérgico de CP e de NAcomo um aumento na orto-ceratose.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A presente invenção dirige-se a composições farma-cêuticas, kits e métodos, os quais podem ser usados no tra-tamento de distúrbios de pele, relacionados à hiperprolife-ração de células epidérmicas.

Como até aqui descrito, a vitamina D3 e seus aná-logos são conhecidos como agente úteis no tratamento da pso-riase e de outras doenças de pele inflamatórias (Morimoto etal., 1986). A nicotinamida e seus análogos demonstraram sereficazes na inibição da hiperproliferação de ceratinócitos ena indução da diferenciação celular. A presente invençãoprove composições dermatológicas consistindo, essencialmentede um derivado de vitamina D, calcipotriol e nicotinamida, aqual é altamente eficaz no tratamento de doenças e distúr-bios de pele hiperproliferativos.

Uma composição que combina calcipotriol e NA pro-porciona sinergia na forma de beneficio adicional ao pacien-te, além do valor terapêutico direto das substâncias ativasindividuais.

O tratamento médico satisfatório de distúrbios dapele, tal como psoriase, pode ser obtido num periodo maiscurto de tempo mediante uso da composição de acordo com ainvenção. Além disso, a composição da presente invenção nãocontém esteróides, prevenindo assim, os efeitos colateraiscom esta classe de fármacos.

A composição da presente invenção propicia umaformulação tópica segura e eficaz para o tratamento de do-enças hiperproliferativas e oferece as seguintes vantagenssobre as composições de calcipotriol comercialmente disponí-veis:a) Efeito duplo anti-proliferativo e promotor dediferenciação em células epidérmicas;

b) efeito terapêutico sinérgico do calcipotriol enicotinamida os quais intensificam o efeito terapêutico po-tencial da composição para distúrbios hiperproliferativosbenignos e malignos;

c) efeito antioxidante,

d) Formulação não tóxica aprovada para indicaçõestópicas,

e) Calcipotriol na presente formulação não penetrana pele, evitando assim, exposição sistêmica ao fármaco econcomitantes efeitos colaterais,

f) a formulação de ácido nicotinico-calcipotriolda invenção foi classificada como um irritante insignifican-te, enquanto os produtos comercialmente disponíveis são ro-tulados como irritantes;

g) Evita os compostos esteróides e corticosterói-des e os resultantes efeitos colaterais.

Definições

Por conveniência e clareza de alguns termos empregados nesterelatório descritos, os exemplos e reivindicações são aquidescritos.

Como aqui empregado, a frase "quantidade eficaz"e "quantidade terapeuticamente eficaz" descreve uma quan-tidade do agente que é suficiente para anular, aliviar, ini-bir reduzir ou prevenir, substancialmente, os sintomas dadoença hiperproliferativa. Os sintomas da psoriase inclui umou mais efeitos dermatológicos: vermelhidão, pele escamosa,rachadura, coceira, placas, bolhas.

De acordo com a presente invenção, a concentraçãode calcipotriol, varia, tipicamente entre 10 ug/ e 100 ug dacomposição, pref erivelmente entre cerca de 20 ug/g e 70 ug/g.Em composições especificas o calcipotriol é fornecido a umaconcentração de cerca de 50 ug/g.

Em algumas modalidades uma composição compreenden-do uma concentração final de cerca de 10 ug.q a cerca de 50(ug/g, de calcipotriol é adequada para terapia de manutençãoda doença hiperproliferativa dermatológica. Em algumas mo-dalidades, a concentração final é fornecida de cerca de 15(ug/g a cerca de 35 ng/g de calcipotriol, pref erivelmentecerca de 30 |ag/g de calcipotriol.

O termo "não penetra significativamente na pele"refere-se a uma composição compreendendo calcipotriol, ondemenos que cerca de 10% do calcipotriol na composição penetraas células da pele, conforme determinado por exemplo, numensaio de célula de pele de orelha de suinos. Em algumas mo-dalidades, menos que 5%, preferivelmente menos que 3% e maispreferivelmente menos que 1% do calcipotriol penetra a pele.Os efeitos sistêmicos adversos da vitamina D3 são do conhe-cimento da técnica, portanto é altamente desejada uma com-posição, que evita a penetração do calcipotriol nas célulasda pele.

"Terapia de manutenção" refere-se ao tratamentode, ou prevenir a recorrência ou recidiva ou prevenir o pro-gresso dos sintomas associados com doença hiperproliferati-va. Nicotinamida (niacinamida) é uma das duas formas prin-cipais da vitamina B3 do complexo B, niacina. Alguns inven-tores da presente invenção identificaram NA como um inibidord proliferação celular, em particular de ceratinócitos. Deacordo com a presente invenção, as concentrações finais deNA variam, tipicamente entre 0,1 mg/g e 25 mg/g da composi-ção, pref erivelmente entre cerca de 1 mg/g e 20 mg/g. Emcomposições especificas Na é fornecido a uma composição decerca de 2 mg/g a cerca de 10 mg/g e mais pref erivelmente auma composição de 2 mg/g a cerca de 6,5 mg/g. Uma composiçãopreferida é 2,1 mg/g.

No presente, o termo "tratamento" inclui, anula-ção, inibição, retardo ou reversão substancial do progresso,melhora substancial dos sintomas clínicos, ou prevençãosubstancial da aparição dos sintomas associados com doençahiperproliferativa. O termo "tratamento" significa adicio-nalmente, a inclusão de hidratação, cura ou suavização dapele. Os sintomas incluem, sem limitação a desenvolvimen-tos, pele escamosa, pele seca, pele áspera, pústulas e peleirritada. Este tratamento inclui adicionalmente, a preven-ção desses sintomas e em particular, pele escamada e irri-tada, antes destes sintomas ocorrerem.

Como aqui empregado, a frase "veiculo dermatologi-camente aceitável refere-se a um veiculo ou um diluente quenão ocasiona irritação significativa à pele e ao anula aatividade biológica e as propriedades do agente ativo aplicado .

Exemplos de veiculos dermatologicamente aceitáveisúteis no contexto da presente invenção incluem, sem limita-ção, emulsões, cremes, soluções aquosas, óleos, ungüentos,pastas, geles, loções, leites, espumas, suspensões e pós.Veículos preferidos são elementos da familia de polímerospolietileno glicol (PEG).

O veiculo dermatologicamente aceitável da presenteinvenção pode incluir, por exemplo, um espessante, um emoli-ente, um emulsificante, um umectante, um tensoativo, um a-gente de suspensão, um agente formador de filme, um agenteconstrutor de'espuma, um conservante, um agente anti-espuma,uma fragrância, um poliol monoalcoólico inferior, um solven-te com alto ponto de ebulição , um propulsor,um colorante,um pigmento ou misturas destes. Um tensoativo preferido éSteareth-20.

Portanto, a composição da presente invenção pode ser encontrada por exemplo, na forma de um óleo, um gel, umbastão sólido, uma loção, um creme, um leite, um aerossol,um spray, uma espuma, uma musse, um ungüento, ou um ungüentooleoso ou um pó.

As composições da presente invenção podem ser ma- nufaturadas por processos bem conhecidos na técnica, por e-xemplo, por meio de processos de misturação convencional,dissolução, granulação, fabricação de drágeas, pulverização,emulsificação, encapsulação, encerramento ou liofilização.

As composições para uso de acordo com a presenteinvenção podem assim, ser formuladas de modo convencionalusando um ou mais veículos fisiologicamente aceitáveis, com-preendendo excipientes e auxiliares, que facilitam o proces-samento dos compostos ativos em preparações farmacêutica-mente aceitáveis.

Formulações

As composições da invenção compreendem um veiculodermatológica ou cosmeticamente aceitável para agir com umdiluente, dispersor ou veiculo para o calcipotriol e nicoti-namida, de modo a facilitar sua distribuição quando a compo-sição é aplicada à pele. Veículos diferentes da água ou a-lém desta incluem, emolientes líquidos ou sólidos, solventesumectantes, espessantes e pós. A presente invenção pode serformulada para administração tópica, na forma de soluçõesaquosas ou não aquosas, loções, cremes, geles, ungüentos,espumas, musse, sprays, emulsões, microemulsoes, emplastrosadesivos, pós e similar.

Numa modalidade preferida, a composição da inven-ção é uma composição monofásica, ou seja, uma composição quecompreende um único sistema solvente, tal como um ungüento.Exemplos não limitantes de formulações são como a seguir:

Ungüentos

Os ungüentos propiciam um método eficaz na aplica-ção de agentes ativos para a pele. Numa modalidade o veiculodermatológico compreende polietileno glicol. Em algumas mo-dalidades uma mistura de PEGs é preferida. Em algumas moda-lidades, a composição dermatológica da presente invençãopossui a seguinte formulação:

cerca de 10 |ag/g a cerca de 100 |ag/g de calcipotriol ,

cerca de 0,5 mg/g a cerca de 25 mg/g de nicotinamida,cerca de 70% a cerca de 80% (peso/peso) PEG-400,cerca de 15% a cerca de 25% (peso/peso) PEG-4000,cerca de 1% a cerca de 5% (peso/peso) Steareth-20,cerca de 0,1 a cerca de 1% (peso/peso) de vitamina E.

Em modalidades especificas, a presente invençãopropicia uma composição dermatológica com a seguinte fórmu-la:

50 \iq/q de calcipotriol,2,1 mg/g de nicotinamida,77,7% (peso/peso) de PEG-400,20% (peso/peso) de PEG-4000,2% (peso/peso) de Steareth-20,0,3% (peso/peso) de vitamina E.

Em outras modalidades especificas, a presente in-venção propicia um ungüento dermatológico com a seguintecomposição:

10-50 ng/g de calcipotriol,2,1 mg/g de nicotinamida,77,7% (peso/peso) de PEG-400,20% (peso/peso) de PEG-4000,2% (peso/peso) de Steareth-20,0,3% (peso/peso) de vitamina E.

Outras composições de ungüento dermatológico podemter como base vaselina e têm a seguinte composição:

cerca de 10 \ig/q a cerca de 100 fig/g de calcipo-triol, cerca de 0,5 mg/g a cerca de 25 mg/g de nicotinamida,cerca de 35% a cerca de 60% (peso/peso) de vaselina, cercade 35% a cerca de 55% (peso/peso) de óleo mineral, cerca de1% a cerca de 10% (peso/peso) Steareth-2; cerca de 0,1 acerca de 1% (peso/peso) de vitamina E.

Num aspecto da presente invenção é proporcionadauma composição compreendendo calcipotriol, onde o calcipo-triol não penetra de modo significativo à pele. Ensaios depermeação epidérmicos são conhecidos da técnica. Um exemploé dado no exemplo 7, abaixo. Em algumas modalidades, menosque 10% preferivelmente, menos que 5% do calcipotriol pene-tra na pele. Em algumas modalidades menos que cerca de 3% epreferivelmente menos que 1% do calcipotriol penetra na pe-le. A composição compreende um ungüento a base de PEG com-preendendo :

cerca de 10 f-ig/g a cerca de 100 [ig/g de calcipotriol,

cerca de 70% a cerca de 80% (peso/peso) de PEG-400,

cerca de 15% a cerca de 25% (peso/peso) de PEG-4000,

cerca de 1% a cerca de 5% (peso/peso) de Steareth-20,

cerca de 0,1 a cerca de 1% (peso/peso) de vitamina E.

Em algumas modalidades preferidas a composição é como a seguir:

cerca de 20 |ag/g a cerca de 40 ug/g de calcipotriol ,

cerca de 77,7% (peso/peso) de PEG-400,cerca de 20% de PEG-4000,

cerca de 2% (peso/peso) de Steareth-20,

cerca de 0,1 a cerca de 1% (peso/peso) de vitamina E.

Loções e Cremes

A composição da presente invenção pode ser forne-cida como uma loção ou como um creme e pode incluir pelo me-nos um ou mais emolientes, que podem funcionar, ou como umlubrificante ou como um agente espessante, ou ambos. Os e-molientes compreendem num total de cerca de 0,1% a cerca de50%, preferivelmente, de cerca de 15 a cerca de 10% em pesoda composição. Quaisquer emolientes conhecidos dos versadosna técnica conforme sejam adequados para aplicação à pelehumana, podem ser utilizados. Estes incluem, sem limitação aóleos e graxas de hidrocarboneto, incluindo óleo mineral,vaselina, parafina, cersina, ozokerita, cera microcristali-na, polietileno e per-hidroesqualeno, óleos de silicone,gorduras e óleos de triglicerideos incluindo os derivados defonte vegetal, animal e marinha, incluindo óleo de jojoba e manteiga de Galam, esteres acetoglicerideos tais como mono-glicerideos acetilados, glicerideos etoxilados, tais comomonoestearato de glicerila etoxilado, ácidos graxos, álcooisgraxos, e seus derivados. Outros emolientes adequados in-cluem lanolina e derivados de lanolina, álcoois poliidricos e derivados de poliéter, esteres de álcool poliidrico, este-res de cera, ceras vegetais, fosfolipidios, tais como leci-tina e derivados, esteróis, incluindo, sem limitação, co-lesterol e esteres de ácido graxo de colesterol, amidas taiscomo amidas de ácido graxo, amidas de ácido graxo etoxiladose alcanolamidas de ácido graxo sólidas.

As loções podem conter ainda de cerca de 1% a cer-ca de 10%, mais preferivelmente de 2% a 5% de um emulsifi-cante. Os emulsificantes podem ser não iônicos, aniônicos oucatiônicos. Os versados na técnica podem escolher emulsifi-cantes adequados para as composições dermatológicas.

Outros componentes convencionais de tais loções ecremes podem ser incluídos. Um desses aditivos é um agenteespessante a um nivel de 1% a 10% da composição. Exemplosde agentes espessante adequados, incluem, sem limitação a:polímeros de carboxipolimetileno reticulados, etil celulose,polietileno glicóis, goma tragacanto, goma caraia, goma xan-tana, bentonita e outras argilas, hidroxietil celulose e hi-droxipropil celulose.

AS loções e cremes são formulados, simplesmente,misturando todos os componentes juntos. Preferivelmente, ocalcipotriol dissolvido, suspenso ou de outra forma dispersouniformemente na mistura.

Soluções e Suspensões

As soluções, que podem ser aquosas ou não aquosas,são formuladas para conterem uma concentração eficaz de cadaum dos agentes ativos, calcipotriol e NA.

Materiais orgânicos adequados úteis como o solven-te, ou uma parte de um sistema solvente, são como a seguir:propileno glicol , polietileno glicol, glicerina, ésteressorbitol, 1, 2,6-hexanotriol, etanol, isopropanol, dietiltartarato, butanodiol, e misturas destes. Tais sistemas sol-vente também podem conter água.

Quando as concentrações da invenção são formuladascomo uma emulsão, a proporção da fase gordurosa pode variardesde cerca de 5% a cerca de 80% em peso e preferivelmentede cerca de 5% a cerca de 50% em peso, em relação ao pesototal da composição. Óleos, emulsificantes e co-emulsificantes incorporados na composição na forma de emul-são são selecionados dentre aqueles conhecidos dos versadosna técnica do campo cosmético ou dermatológico.

Geles e sólidos

As composições de gel podem ser formuladas, mis-turando-se, simplesmente, um agente espessante adequado paraas composições em solução ou suspensão. Exemplos de agen-tes espessantes adequados foram anteriormente descritos comrelação a loções.

As composições gelificadas contém uma concentraçãoeficaz dos agentes ativos, de cerca de 5% a cerca de 75% deum solvente orgânico conforme antes descrito, de cerca de0,5% a cerca de 20% de um agente espessante, sendo o equili-brio água, um outro veiculo aquoso ou uma combinação de veí-culos .

As composições de forma sólida podem ser formula-das como composições do tipo grude destinadas a aplicação àpele. Os sólidos também contém de cerca de 50% a cerca de98% dos emolientes anteriormente descritos. Esta composiçãopode conter ainda de cerca de 1% a cerca de 20% de um agenteespessante adequado, e, caso desejado ou necessário emulsi-ficantes e água ou tampões. Agentes espessantes anterior-mente descritos com relação a loções são adequadamente em-pregados nas composições na forma sólida.

Outros ingredientes tais como conservantes, inclu-indo metil parabeno ou etil parabeno, perfume, corantes ousimilar, conhecidos na técnica para dar a estabilidade dese-jada, fragrância ou cor, ou outras propriedades desejáveisàs composições para aplicação à pele.

As composições formuladas como soluções ou suspen-sões podem ser aplicadas diretamente à pele, ou podem serformuladas como um aerossol, e aplicada à pele como um s-pray, espuma ou musse. As composições em aerossol contémainda, de cerca de 20% a 80%, preferivelmente de 30% a 50%de um propulsor adequado. Exemplos de tais propulsores sãohidrocarbonetos de menor peso molecular clorados, fluoradose cloros-fluorados. Oxido nitroso, dióxido de carbono, bu-tano, e propano também são usados como gases propulsores.Esses propulsores são usados conforme conhecimento da técni-ca numa quantidade e sob uma pressão adequada para expelir oconteúdo do recipiente. No caso de um aerossol pressurizadoa unidade de dose pode ser determinada provendo-se uma vál-vula distribuidora de uma quantidade medida.

Em outras modalidades as composições formuladascomo soluções, suspensões, loções e geles da presente inven-ção são formulados como uma espuma ou musse para aplicação àepiderme. Veiculos relevantes para a formulação como uma es-puma ou musse são descritos, por exemplo, na Publicação doPedido de Patente Internacional n° WO 2004/037225 e PatenteUS n° 6.730.288 .Dose

As composições da presente invenção são formuladaspara administração tópica dos ingredientes ativos em atéquatro vezes ao dia. Preferivelmente, a formulação é tera-peuticamente eficaz para uma única administração diária.

Aditivos

A composição tópica pode incluir, ainda um tercei-ro ou quarto componente farmaceuticamente aceitável. A in-venção também se refere a uma preparação farmacêutica prefe-rida de acordo com a invenção, que é especialmente útil parao tratamento de doenças de pele hiperproliferativas, que secomplicam por infecções fúngicas adicionais, e que contemtambém um agente antifúngico. Exemplos não limitantes de umantifúngico, incluem miconazol, clotrimazol, terbinafin, ci-clopirox, bifonazol, nistatina, cetoconazol, econazol e amo-rolfina.

Outros exemplos de aditivos incluem protetores so-lares. Protetores solares incluem os materiais comumenteempregados para bloquear a luz ultravioleta. Compostos i-lustrativos são os derivados de PABA, cinamato e salicilato.Por exemplo, metoxicinamato de octila (parsol MCX) e 2-hidróxi-4-metóxi benzofenona (também conhecido como oxiben-zona e benzofenona-3). A quantidade do protetor solar empre-gado nas composições pode variar, dependendo do grau de pro-teção de radiação UV desejado. O protetor solar deve sercompatível com o composto ativo, mas em geral a composiçãopode compreender de cerca de 1% a cerca de 20% de um prote-tor solar. Quantidades precisas irão variar, dependendo doprotetor solar escolhido e do Fator de Proteção Solar (SPF)desej ado.

A composição da presente invenção pode compreenderainda um antioxidante. A inclusão de um varredor de radi-cal/antioxidante pode fornecer estabilidade à composição. 0varredor de radical/antioxidante pode ser adicionado às com-posições da presente invenção numa faixa de concentração decerca de 0,1% a cerca de 10% do peso total da composição.Varredores de radica/antioxidantes incluem ácido ascórbico(Vitamina C) e seus sais e tocoferol (vitamina E). UM aditi-vo preferido é vitamina E. Uma faixa determinada de concen-tração preferida é cerca de 0,1% a cerca de 1%.

Outros aditivos incluindo glicosaminoglicanos taiscomo ácido hialurônico e similar.

Métodos de Tratamento

A presente invenção proporciona ainda métodos deprevenir ou tratar uma doença ou distúrbio de pele hiperpro-liferativo compreendendo a etapa de:

administração tópica a um indivíduo em necessidadedo mesmo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de umacomposição consistindo, essencialmente de calcipotriol a umacomposição de cerca de 10 ug/g a cerca de 100 [ig/g, nicoti-namida a uma concentração de cerca de 0,1 mg/g a cerca de 50mg/g e um excipiente ou veiculo dermatologicamente aceitá-vel.

O método compreende a administração tópica dacomposição em até cerca de quatro vezes diariamente. Em mo-dalidades preferidas a composição é administrada uma ou du-as vezes ao dia. Em algumas modalidades a composição é a-plicada duas vezes ao dia em intervalos de cerca de 12 ho-ras. Em outras modalidades, a composição é administrada umavez ao dia.

Em algumas modalidades, o método de tratamento in-clui dois periodos de tratamento: um tratamento inicial e umtratamento de manutenção.

Sem querer estar ligado a qualquer teoria, o tra-tamento inicial se presta a reduzir pelo menos alguns dossinais e sintomas da doença, enquanto o segundo tratamentode manutenção se presta a prevenir a recidiva ou progressoda doença.

Portanto, o tratamento inicial de um paciente con-siste de uma dosagem inicial da composição, consistindo es-sencialmente de calcipotriol a uma concentração de cerca de10 ng/g a cerca de 100^g/g, nicotinamida a uma concentraçãode cerca de 0,1 mg/g a cerca de 50 mg/g, e um excipiente ouveiculo dermatologicamente aceitável para um período iniciale a seguir, administra-se ao paciente uma dosagem de manu-tenção menor de uma composição consistindo essencialmente decalcipotriol a uma concentração de cerca de 10 (ig/g a cercade 50 ug/g, nicotinamida a uma concentração de cerca de 0,1mg/g a cerca de 50 mg/g, e um excipiente ou veiculo dermato-logicamente aceitável.

A dose inicial de calcipotriol é preferivelmentede cerca de 20 6g/g a cerca de 70 |^g/g, mais pref erivelmentecerca de 50 |ag/g; a dose inicial de NA é cerca de 0,5 mg/g acerca de 25 mg/g, preferivelmente cerca de 1 mg/g a cerca de20 mg/g, e mais preferivelmente cerca de 2,1 mg/g.

Para manutenção da dosagem, o calcipotriol é dadoa uma concentração de cerca de 10 ug/g a cerca de 50 ug/g.Em algumas modalidades, o calcipotriol é dado a uma concen-tração de cerca de 15 ug/g a cerca de 35 ug/g. Em modalida-des especificas, o calcipotriol é dado a uma concentração decerca de 30 ug/g. Uma dosagem de manutenção de NA é cerca de0,5 mg/g a cerca de 25 mg/g. Em algumas modalidades, a nico-tinamida é dada a uma concentração de cerca de 1 mg.g a cer-ca de 20 mg. g. Em outras modalidades, a nicotinamida é dadaa uma concentração de cerca de 2 mg/g a cerca de 10 mg/g,preferivelmente a uma concentração de cerca de 2,1 mg/g.

De acordo com algumas modalidades preferidas apresente invenção propicia um método de prevenção ou trata-mento de uma doença ou distúrbio de pele hiperproliferativocompreendendo as etapas de:

administração tópica a um indivíduo em necessidadeda mesma, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de umacomposição consistindo essencialmente de calcipotriol a umaconcentração de cerca de 50 ug/g, nicotinamida a uma concen-tração de cerca de 2,1 mg/g, e um excipiente ou veiculo der-matologicamente aceitável para um periodo de tempo inicialna redução dos sintomas da doença hiperproliferativa, eadministração tópica a um indivíduo em necessidadeda mesma, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de umacomposição consistindo essencialmente de calcipotriol a umaconcentração de cerca de 15 ug/g a cerca de 35 ug/g, nicoti-namida a uma concentração de cerca de 2,1 mg/g, e um excipi-ente ou veiculo dermatologicamente aceitável por um segundoperiodo de tempo.

Numa modalidade o periodo inicial de tratamento éde cerca de 4 semanas a cerca de 24 semanas, preferivelmentede cerca de 4 semanas a cerca de 16 semanas. Em determinadasmodalidades preferidas o periodo inicial de tratamento é decerca de 6 semanas a cerca de 12 semanas, preferivelmentecerca de 8 semanas. 0 segundo periodo de tempo e cerca de 8semanas a cerca de 52 semanas, preferivelmente de cerca de12 semanas a cerca de 2 6 semanas

Embalagem do Produto e Kits

Em uso, uma pequena quantidade da composição porexemplo, de cerca de 0,1 ml a cerca de 100 ml é aplicada emáreas expostas da pele, de um recipiente ou aplicador ade-quado, e, caso necessário, é a seguir espalhada sobre a peleou nela esfregada usando as mãos, dedos ou um dispositivoadequado. O produto pode ser formulado especificamente paraemprego como um tratamento para as mãos ou face.

Quando formulada, a composição pode ser embaladanum recipiente adequado para ajustar sua viscosidade e usopretendido pelo consumidor. Por exemplo, um ungüento podeser embalado num tubo, uma loção ou creme pode ser embaladanum frasco, ou um dispositivo de aerossol acionado por pro-pulsor ou um recipiente equipado com uma bomba adequado paraoperação manual. Quando a composição é um creme, ela Poeser simplesmente armazenada num frasco não deformável, ourecipiente de aperto, tal como um tubo ou um frasco com tam-pa. A invenção portanto, proporciona também um recipientefechado contendo uma composição dermatológica ou cosmetica-mente aceitável como até aqui descrito. A forma do recipi-ente não está limitada nesta invenção, podendo ser um tubo,um fornecedor com bomba, um fornecedor comprimido um frasco,um spray, um sachê ou similar.

Muitos agentes nas composições reivindicadas dapresente invenção podem ser providos como sais fisiologica-mente aceitáveis onde o agente pode formar as espécies decarga negativa ou positiva. Exemplos de sais nos quais oagente forma a fração carregada positivamente, incluem, semlimitação, sais de amônio quaternário, tais como os sais decloridrato, sulfato, carbonato, lactato, tartarato, maleato,succinato e similar, onde o nitrogênio do grupo amônio qua-ternário é um nitrogênio de um composto da presente inven-ção o qual reage com um ácido apropriado. Sais nos quais oagente forma as espécies carregadas negativamente, sem limi-tação incluem, os sais de sódio, potássio, cálcio, e magné-sio formados pela reação de um grupo ácido carboxilico namolécula com a base apropriada (por exemplo, hidróxido desódio (NaOH), hidróxido de potássio (KOH), hidróxido de cál-cio (Ca (OH) 2) , etc.

As composições da presente invenção podem, casodesejado, ser apresentada numa embalagem ou dispositivo for-necedor, tal como um kit aprovado por uma agencia regulado-ra podendo conter uma ou mais formas de dosagem unitárias,contendo o ingrediente ativo. A embalagem, pode, por exem-plo, compreender folha de metal ou de plástico tal como umaembalagem de blister. A embalagem ou dispositivo fornecedorpode ser acompanhado por instruções de administração. A em-balagem ou fornecedor podem também ser acompanhados por umainformação associada com o recipiente na forma prescritapela agencia governamental que regula a manufatura, uso ouvenda das composições, cuja informação é reflexiva de apro-vação pela agencia da forma das composições ou administraçãohumana ou veterinária. Em outras modalidades, as composi-ções são preparadas para uso e venda sem prescrição médica(OTC).

As composições compreendendo os agentes da inven-ção formuladas num veiculo compatível também podem ser pre-paradas, colocadas num recipiente apropriado e rotuladas pa-ra prevenção e tratamento de distúrbios de pele associadoscom envelhecimento.

Objetos adicionais, vantagens e novos aspectos dapresente invenção tornar-se-ão evidentes aos de prática or-dinária com o exame dos exemplos a seguir, os quais não pre-tendem ser limitantes da invenção. Além disso, cada uma dasvárias modalidades e aspectos da presente invenção, conformeesboçados supra e conforme reivindicados na parte das rei-vindicações a seguir, encontram apoio experimental nos exem-plos que se seguem.

EXEMPLOS

Os exemplos a seguir devem ser considerados mera-mente como ilustrativos e não limitantes por natureza. Fica-rá evidente ao versado na técnica, para o qual a presenteinvenção é pertinente, que, muitas modificações, permutaçõese variações podem ser feitas, sem se afastar do escopo damesma.

Os dados in vitro e in vivo que proporcionaram abase para a composição da presente invenção ao como segue:

Exemplo 1 - Experimentos in vitro

Alguns ensaios in vitro baseados em cultura de ce-ratinócitos foram realizados para ensaio de NA e a combina-ção de NA + calcipotriol. 0 projeto experimental foi descri-to na Publicação de Patente PCT WO 01/51051, de alguns in-ventores do presente pedido.

Os resultados dos testes in vitro indicam que:

A proliferação de todas as linhas de célula (cera-tinócitos HaCat, ceratinócitos humanos primários, A431,KM12) foram significantemente inibidas por NA em concentra-ções farmacológicas num modo dependente de dose;

Uma combinação de NA com calcipotriol propicia umefeito antiproliferativo sinérgico,

NA promove os processos de diferenciação em célu-las epidérmicas benignas e malignas como se vê pela expres-são aumentada de (K10) primitivo, (Involucrina) tardia, emarcadores de diferenciação terminal (formação de célulacornificada encapsulada);

NA não induz morte apoptótica em células HaCat e A4 31; e

O tratamento a longo prazo de ceratinócitos HaCatcom NA demonstrou um alto nivel de proteção ao estresse oxi-dativo (peróxido de hidrogênio) e altos niveis de enzimasantioxidativas (glutationa peroxidase e catalase).

Os experimentos e seus resultados resumem-se abai-xo:

Cultura de Célula

A atividade antiproliferativa de calcipotriol enicotinamida foi testada em dois sistemas modelo: o primeiroum ceratinócito humano espontaneamente imortalizado, que éreferido aqui como "células HaCat" ou "ceratinócitos HaCat", prestando-se como um modelo para epiderme altamente proli-ferativa, tal como, sem limitação, epiderme psoriática (0-kenfels et al. , 1998), e como um modelo para efeitos de mo-duladores externos de diferenciação epidérmica (Paramio, etal., 1997) . 0 segundo sistema inclui a rápida proliferaçãode ceratinócitos humanos, os quais são aqui referidos como"ceratinócitos epidérmicos humanos cultivados" e se prestacomo um modelo para detecção de agentes antiproliferativosno tratamento da psoriase (Nikoloff, et al., 1988)

Esses modelos foram usados, de acordo com a pre-sente invenção, para avaliar a eficácia antiproliferativados agentes aqui descritos. As células HaCat de ceratinóci-to humano imortalizado são rotineiramente cultivadas emfrascos de 75 cm2 usando meio essencial minimo de Eagle(MEM-EAGLE) suplementado com 5% de soro bovino fetal (FCS) e1% de antibióticos (penicilina 20 unidades/ml, estreptomici-na 20 ng/m e nistatina 2,5 unidades/ml) a 37°C em 95% de 02/5% de CO2. O meio é substituído cada 3-4 dias.

aS culturas a longo prazo de células HaCat cresci-das com calcipotriol foram obtidas por cultivo de célulasHaCat durante 6 meses, num meio rotineiramente usado.

Outras culturas a longo prazo de células com ou-tros agentes são similarmente obtidas por cultivo da célulasHaCat, durante um periodo prolongado de tempo, em meio su-plementado com combinações de NA, vitamina D e seus deriva-dos e vitamina A.

Ceratinócitos Epidérmicos Humanos (passagens 3-6)obtidos de cirurgia de lifting facial comum, foram cultiva-dos em meio KGM(R)-2 BulleKit(R) isento de soro (Clonetics,USA) com baixo cálcio para proliferação acelerada dos cera-tinócitos .

Reagentes:

Nicotinamida(NA); calcitriol (la,25-diidróxi-vitamina D3); brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT); iodeto de propidio, dimetilsulfó-xido (DMSO); albumina de soro bovino (BSA), sacarose, citra-to trissódico, igepal CA-630 (NP-40). Tris-(hidroximetil)-aminometano; tripsina, inibidor de tripsina, ribonuclease A,tetracloridrato de espermina, dodecilsulfato de sódio (SDS);P-mercaptoetanol e peróxido de hidrogênio (H2O2) , sendo to-dos obtidos de Sigma (USA).

Meio essencial minimo de Eagle (MEM-EAGLE); DMEM<antibióticos soro bovino fetal (FCS); L-glutamina, soluçãosalina tamponada com fosfato da Dulbecco (PBS), e solução detripsina 0,05%-EDTA foram obtidos de Biological Industries(Israel).

Keratinocyte Growth Medium(R)-2 Bullet Kit(R) CC-3107 (para proliferação acelerada) foi recebido de BioWhit-taker, Inc,. (Clonetics, USA).

Anticorpos monoclonais de camundongo citoqueratinaanti-humana 10 (NCL-CK10) e involucrina (NCL-INV) , foramobtidos de Novocastra Laboratories Ltd (UK) e IgG anti-camundongo de cabra conjugado a Cy™2- foi obtido de JacksomImmunoresearch Laboratories, Inc. (USA).

Células HaCat foram propagadas em 25 cm2 ou 75 cm3de frascos de cultura de tecido (Corning, USA) e placas decultura de tecido de 24 e 96 poços (Corning, USA) foram usa-das para incubação das células com diferentes doses de NA(1-50 mM/I) e calcipotriol (1-10000 nM) .

Ensaios de Proliferação (método MTT)

A viabilidade e/ou proliferação de células HaCat eCeratinócitos Epidérmicos Humanos Cultivados, seguinte aotratamento com varias concentrações de calcipotriol, nicoti-namida (NA) ou uma combinação destes, foi determinada peloensaio MTT, de acordo com o fabricante em placas de microti-tulo de 96 poços.

Apoptose e ensaios de atividade mitóticaA estimativa da apoptose e necrose foi analisadausando microscopia fluorescente como antes descrito (Harelet al., 2002). Em resumo as células HaCat forma cultivadasem lâminas de vidro e expostas a concentrações variadas deNA (5, 10, 20 e 50 mM). Após 72 horas, as células foram man-chadas com corantes de ligação ao DNA da Hoechst 33342 e io-deto de propidio. As células viáveis foram identificadas pe-los núcleos intatos e sua fluorescência azul, células necró-sicas por núcleos intatos e fluorescência vermelha e as cé-lulas na fase primitiva ou tardia de apoptose por núcleosfragmentados e fluorescência azul ou vermelha. Pelo menosmil (1000) células foram contadas para cada tratamento.

A determinação da apoptose e parâmetros de ciclocelular foi realizada por citometria de fluxo. As célulasforam semeadas em frascos de cultura de tecido de 25 cm2 ecultivadas por 48 horas e a seguir foram expostas a 5, 10 e20 mM de NA por 72 horas. A citometria de fluxo foi reali-zada em núcleos preparados com um método detergente-tripsinae manchada com iodeto de propidio (Vindelov et al., 1983).

análise de imunomanchamento da expressão PARP:complexos imuno foram detectados por incubação com anticorpoAP124A conjugado a fosfatase alcalina de anti-camundongo se-cundário (diluição 1:5000) seguido por revelação com subs-trato colorido BCIP/NBT.

Curva de crescimento e atividade mitótica: Célu-las 2 x IO4 por ml foram semeadas em placas de cultura detecido de 24 poços e incubadas com ou sem NA 10 mM. As cé-lulas foram destacadas por tripsinização em ocasiões diver-sas (48 h-168 h) seguinte passagem e avaliação mediante usode um hemocitômetro e tetra-aliquotas. Para estimação daatividade mitótica as células foram cultivadas em lâminascom cobertura de vidro central finíssima para proteção doespécime, em discos Petri. Após 72 h de incubação com ousem NA 10 mM as células foram fixadas com metanol, manchadascom Giemsa e analisadas por microscopia óptica. A freqüên-cia das células mitóticas em diferentes estágios do ciclomitótico (fases pro-, meta-, ana- e telo) foi calculada.Pelo menos 1000 células foram contadas para cada experimento.Análises de diferenciação

Formação de Envoltório Cornifiçado: Processos dediferenciação tardios em células HaCat tratadas com NA e/oucalcipotriol foram medidos por determinação da formação doenvoltório celular cornificado, de acordo com os procedimen-tos descritos em Sun e Green (1976) e publicação PCT WO01/51051.

Imunofluorescência indireta:

Efeitos de NA e/ou calcipotriol em processo de di-ferenciação primitivos (expressão klO de ceratina ) e tardi-os (expressão de involucrina) em células HaCat foram estima-dos por imunofluorescência indireta.

Em resumo, 2 x IO4 células/ml foram semeadas emlâminas com cobertura de vidro finíssima em discos Petri com0, 5, 10 e 20 mM de NA ou calcipotriol. Após 72 horas deincubação, as células nas lâminas com cobertura oram lavadacom PbS, fixadas por mistura resfriada em gelo de meta-nol:acetona (1:1) e incubadas a -20°C por 10 minutos. As cé-lulas fixadas foram lavada em PBS e incubadas com tampão debloqueio (BSA a 1% em PBS) por 10 minutos, para mnimizar aabsorção não especifica dos anticorpos primários às lâminascobertas. A seguir, as células foram incubadas por 1 horascom anticorpos monoclonais (expressão de Ceratina 10 foi de-tectada por anticorpo monoclonal de camundongo anti-humano,a uma diluição final de 1/50; A expressão de involucrina foidetectada por anticorpo monoclinal de camundongo em involu-crina anti-humana a uma diluição final de 1/100 a 37 "C/horanuma câmara umedecida. As células lavadas exaustivamentecom PBS foram incubadas com IgG anti-camundongo de cabraconjugado a fluoróforo a uma diluição final de 1/50, durante30 minutos a temperatura ambiente. As lâminas foram visua-lizadas sob um microscópio Zeiss (Axioskop-2) equipado comóptica epifluorescente e filtros apropriados de modo a evi-tar contaminação transversal do canal. O nivel de expressãode ceratina 10 e involucrina foi estimado por contagem dascélulas positivas em relação ao número de célula total. Decada lâmina, pelo menos 500-1000 células foram contadas.

Análise estatística

Os resultados são apresentados com desvio médio +padrão da média (média ± SD) . Significância estatística(P<0,05 foi derivada pelo teste t de Student.

Resultados

NA inibiu a proliferação de célula HaCat num mododose-dependente. A incubação por 72 horas com baixas dosesde NA (0,5-5 mM) não alterou a taxa de proliferação celularHaCat. Contudo, concentrações maiores de NA reduziram acen-tuadamente a resposta proliferativa num modo dose-dependente. Uma concentração farmacológica de cerca de 10mM, resultando em inibição dupla da proliferação celular,foi escolhida par efeito de análise de NA na atividade mitó-tica de célula HaCat, curva de crescimento e progresso dociclo celular. A análise microscópica da atividade mitóticaindicou que, a percentagem de células mitóticas era cerca de2,5 vezes menor na população de células tratadas com NA com-parado às não tratadas. Resultados semelhantes de retardodo crescimento foram obtidos após incubação de células HaCatcom NA a 10 mM por 48-168 horas.

De modo a explicar a perturbação no ciclo celularque pode conduzir ao retardo do crescimento induzido portratamento com NA, a freqüência de células em G0-G1, e fasesG2-M foi estudada por análise de citometria de fluxo. Umacorrelação contrária entre o progresso das células atravésda fase G0-G1 do ciclo celular e redução do número de célu-las em fases S e G2-M após incubação com NA por 72 horas nomodo dose-dependente foi mostrado.

NA induz apoptose, mas não necrose em células Ha-Cat. Usando microscopia fluorescente, uma estimativa da a-poptose e necrose pode ser feita numa única amostra. Osniveis de apoptose espontânea e necrose em células HaCat in-tatas, foi 0,8±0,22% e 0,3±0,1%, respectivamente. Concen-trações de nicotinamida de 20 mM e 50 mM apresentaram efeitoapoptogênico significativo em ceratinócitos HaCat. A 50 mMde NA cerca de 91% das células em teste apresentaram sinaisde apoptose tardia (núcleos fragmentados e condensados emvermelho) e apenas 9% das células estavam no estágio de a-poptose primária (núcleos fragmentados e condensados em a-zul) . Entretanto, nenhuma concentração em teste de NA indu-ziu morte celular necrósica. Assim, NA e um bom candidatopara o tratamento de distúrbios dermatológicos.

Os dados na análise de manchamento Western demons-tram que, as células HaCat intatas e as células tratadas com10 mM ou 20 mM de NA expressam um nivel basal de proteinatotal PARP de 116 kDa não degradado. Contudo, uma dose deNA de 50 mM induziu degradação de PARP e aparição de frag-mento de clivagem de 85 kDa de PARP. A diferenciação termi-nal de ceratinócitos foi estimada pelo nivel de formação decélula de cápsula cornificada, que reflete reação de reticu-lação proteina-proteina catalisada por transglutaminase nolado citoplasmático da membrana plasmática (Steiner and Ma-rekov, 1997). A maioria das células HaCat não tratadas con-sistiu de células basais não maturadas (58,6±10,24%) , en-quanto as células com cápsula cornificada diferenciadasconstituiram-se em apenas 4,4±2,78% do número de célula to-tal. A incubação das células com NA a 5 mM ou NA a 10 mM neoteve efeito significativo estatístico na freqüência de, tan-to células de envoltório cornifiçado e basal. Quando se au-mentou as concentrações de NA em 15 mM, o nivel de célulasbasais foi grandemente reduzido para 25,6±5.76%. Nesta con-centração de NA a formação de célula com envoltório cornifi-cado aumentou. A redução adicional do número de células ba-sais e aumento de formação de célula cornificada no envoltó-rio foi visto a NA a 20 mM Nesta concentração de NA a fre-qüência de tanto, células cornificada no envoltório como ba-sais era idêntica, sendo igual a cerca de 15% da populaçãocelular total.

Para estimar os processos de diferenciação-promoção, precedentes, foi determinada a formação de célulacom envoltório cornificado, o nivel de ceratina 10 (K10) eexpressão de involucrina. Uma concentração de NA a 20 mMocasionou um aumento na expressão de ceratina 10 e involu-crina em ceratinócitos HaCat. Q análise quantitativa indi-cou que, NA em concentrações de 5 mM a 10 mM não teve efeitonenhum na expressão de K10 comparado com as células de con-trole. Contudo, uma maior concentração de NA (20 mM) indu-ziu a estimulação da expressão de K10 em 3 vezes nas célulasHaCat. Em contraste com K10, a expressão de involucrina foisignificativamente mais sensivel ao tratamento com NA. Onivel de expressão de involucrina em células HaCat com NA a5 mM foi aumentado em cerca de 2 vezes (11,2+1,68% versus6,0+1,22% nas células de controle). A fregüência aumentadade células positivas para involucrina foi vista em 10 mM e20 mM (11,0±1,13% e 15,1±3,93%, respectivamente). Esses re-sultados demonstram, que o tratamento com NA estimula a ex-pressão de vários marcadores de diferenciação células em cé-lulas HaCat num modo dose-dependente.

Concluindo-se, tanto o fato de que as doses farma-cológicas de NA são uma terapia segura e os dados supracita-dos no efeito antiproliferativo e promotor de diferenciaçãodesta vitamina em ceratinócitos HaCat epidérmicos humanossugere um forte potencial terapêutico de NA para o tratamen-to de diferentes distúrbios de pele hiperproliferativos.

Exemplo 2 - Estratégia de Desenvolvimento da Formulação

A estratégia do desenvolvimento da formulação foibaseada nos seguintes princípios:

a) Formulações com ampla diversidade na composição;

b) Emprego de grau farmacêutico, ingredientes aprovados;

c) Determinação da estabilidade acelerada a 40°C epotência medida no modelo de teste cauda camundongo.Preparação de Formulações de ungüentoForam preparadas oito formulações básicas distin-tas. Formulações de 1-4 e 8 eram uma base de óleo gel de pe-tróleo/mineral; formulação 5 era uma base de PEG, formulação6 era uma base de triglicerideo-água, fórmula 7 era uma basede triglicéride /glicerina. Para as formulações básicas (e-numeradas de 1 a 8) 50 ug/g de calcipotriol e 0,61 mg/g denicotinamida foram adicionados. Cerca de 300 g de cada for-mulação foi preparada. Essas preparações foram usadas paradesenvolvimento do método analítico (extração), estabilidadeacelerada a 40°C e avaliação da atividade biológica (potên-cia) .

Determinação do Calcipotriol (Método HPLC)

Este método foi usado para se determinar o teor decalcipotriol nas formulações de ungüento de Calcipotriol-Nicotinamida usando HPLC com detecção a luz UV.

Materiais: Todos os materiais: grau analítico,todos os solventes: grau HP1C

Calcipotriol padrão (5,0 p,g/ml de calcipotriol)

MetanolAcetonitrila

Condições HPLC:Hypersil(R) ODS-2, 5 pm, coluna 250x 4, 6 mm.Coluna Guia: Opto-Guard(R), C18,l mmFase Móvel: 60% de acetonitrila em águaPreparação da fase móvel: Para cada litro da fasemóvel misturar bem 600 ml de acetonitrila e 400 ml de água.Diluente: metanol em água a 90%.

Velocidade de fluxo: 1 ml/min, Volume da amostra:50 |il, Detetor: UV a 264 nm; Temperatura da coluna: 25°C.Temperatura do equipamento de amostragem: 25°C - temperatura controlada; Tempo de operação: 12 minutos.

Cálculos: O teor de calcipotriol nas formulaçõesfoi calculado da relação entre a área de pico da amostra pa-ra a área de pico média de todas as injeções de solução pa-drão em andamento.

Determinação de Nicotinamida (Método HPLC)

Este método destina-se à determinação do teor denicotinamida niacinamida) em formulações creme de calcipo-triol-nicotinamida usando HPLC com detecção UV.

Materiais:

Nicotinamida padrão (24 |_ig/mlDiidrogeno fosfato de potássio (kh2po4)Hidróxido de potássio (KOH)AcetonitrilaÁgua

Condições HPLC:

Coluna & Acondicionamento: Crom-Sil 120 0DS-5ST, 5fim, 150x4 mm, ou equivalente.

Coluna Guia: Opti-Guard<R>, cl8, 1 mm.Fase móvel: Eluente A: Acetonitrila em tampão defosfato a 3% (pH 6,6), Eluente B: Acetonitrila em tampão defosfato a 50% (pH 6,6).

Velocidade de fluxo: 0,8 ml/min; volume da inje-ção: 20 jíL, detetor: UV 261 nm: Temperatura da coluna: 30°C.Temperatura do equipamento de amostra : cerca de 20°C, Tempode operação 9 minutos para soluções padrão, 23 minutos parasoluções de amostra.

Cálculos: Teor de nicotinamida na formulação foicalculado da relação entre a área de pico da amostra par aárea de pico média de todas as injeções de solução padrão emandamento.

Método de extração de Calcipotriol & Nicotinamida

Formulados

Extração do Calcipotriol das Formulações

As formulações 1, 2, 4, 5, 6, 7 foram tratadas co-mo segue;

1. Cerca de 1 (um) g da amostra foi pesado numfrasco de vidro de 20 mL, 10 mL do diluente (metanol: água9:1 v/v) foi adicionado, submetido a vórtice por 1 minutose deixados em repouso por 5 minutos.

2. Cerca de 1 mL da mistura resultante foi trans-ferida para um tubo centrifugo com filtro de 0,22 mm e cen-trifugada por 5 minutos a 13000 rpm.

3. O filtrado coletado foi injetado em HPLC.

Formulações 3, 8 foram tratadas como a seguir:

1. Cerca de 1 g (um) da amostra foi pesada numfrasco de vidro de 20 ml, 10 mL do diluente (metanol: água9:1 v/v) foi adicionado e submetido a vórtice por 1 minuto.

2. Realizou-se tratamento com som por 10 minutoscom agitação vigorosa periódica.

3. Misturação por meio de vórtice por cerca de 1minuto.4. Cerca de 1 mL da mistura resultante foi trans-ferida para um tubo centrifugo com filtro de 0,22 mm e cen-trifugada por 5 minutos a 13.000 rpm.

5. OI filtrado coletado foi injetado em HPLC.Extração de Nicotinamida das FormulaçõesFormulações 2, 4, 5, 6, 7 foram tratadas como aseguir:

1. Cerca de 1 g da amostra foi pesada num frascocom volume de 25 mL, dissolvida por misturação e elevada atéo volume com água.

2. Tratamento com som e agitação vigorosa perió-dica foi realizado por 10 minutos.

3. Cerca de 1 mL da mistura resultante foi trans-ferida para um tubo centrifugo com filtro de 0,22 mm e cen-trifugado por 5 minutos a 13.000 rpm.

4. O filtrado coletado foi injetado em HPLC.Formulações 1, 3, 8 foram tratadas como segue:

1. Cerca de 1 g da amostra foi pesado num frascode vidro de 50 ml, 25 mL de água foi adicionado e misturadopor vórtice por 30 segundos, seguido por tratamento com soma 40°C por 30 minutos com agitação vigorosa periódica.

2. A seguir a mistura resultante foi deixada res-friar a temperatura ambiente e filtrada através de filtro de0,45 mm.

O filtrado foi injetado em HPLC.

Resultados:

As formulações 1, 2, e 5 foram verificadas seremmais estáveis, após exposição ao 40°C por 60 dias (mais que85% de recuperação de calcipotriol e NA) . A formulações 5permaneceu a mais estável mesmo após 180 dias de exposição.

Exemplo 3 : Avaliação da Potência

A análise de avaliação potência foi realizada comformulações 1, 2 e 5. A avaliação da potência foi realizadade acordo com o procedimento publicado em Bossman B., et al. ,(1992) com as seguintes modificações:

Foram colocados coleiras nos camundongos para evi-tar que lambessem no lugar de colocação de um tubo na áreatratada, e camundongos albino machos (ICR) foram usados nolugar de camundongos albino machos (NMRI) com a mesma idadee mesmo peso.

Dois experimentos foram realizados: O primeiro en-saio foi realizado para avaliar a potência relativa de di-ferentes composições básicas compreendendo 50 ug/g de calci-potriol e 0,61 mg/g. Visto as fórmulas 1, 2, e 5 serem vis-tas como as mais estáveis, ou seja, os ingredientes ativospermaneceram estáveis após 60 dias a 40°C, os resultadosdeste experimento estão apresentados nas Figura IA (% de or-to-ceratose) e a Figura 1B (% de atividade dos ingredientesativos). A letra "V" refere-se a apenas veiculo, e V-l, V-2e V-5 referem-se a veiculos das composições 1, 2, e 5, res-pectivamente. Os números 1, 2 e 5 referem-se às formulações1, 2 e 5 respectivamente.

O segundo ensaio referiu-se à otimização de con-centrações de nicotinamida nas composições. Portanto, seisdiferentes composições foram selecionadas quanto a sua po-tência, usando uma concentração de 50 (J.g de calcipotriol econcentrações de nicotinamida aumentadas em 3 vezes inician-do com 0,70 mg/g de formulação. Essas formulações foram ad-quiridas como uma composição comercialmente disponíveis com-preendendo 50 u/g de calcipotriol.

O esboço experimental está apresentado na Tabela 1abaixo. Os resultados da orto-ceratose estão apresentadosna Tabela 2 abaixo.

Tabela 1

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Tabelas 2

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A Figura 2A é um gráfico mostrando os niveis deorto-ceratose induzidos em caudas de camundongos por váriascomposições da invenção. De modo especifico, demonstrou-sea otimização da concentração de NA numa composição compreen-dendo 50 |J.g/g de calcipotriol. A Figura 2B mostra o nivel deatividade do fármaco em diferentes formulações de acordo coma presente invenção.

Ambos os gráficos mostram que, as composições in-cluindo 50 ng/g de calcipotriol e todas as concentraçõestestadas de NA desempenharam melhor do que uma composiçãocomercialmente disponível (Daivonex) de 50 ug/g de calcipo-triol. Os melhores resultados foram obtidos por uma compo-sição de 50 ug/g de calcipotriol e 2,1 mg/g de NA (II) . Osnúmeros romanos I, II, II e IV referem-se às composições de50 ug/g de calcipotriol e, ou 0,7 mg/g (I); 2,1 mg/g (II);6,3 mg/g (III) ou 18,9 mg/g (IV) de nicotinamida.

Exemplo 4: Formulações

Método para preparar a formulação do fármacoDissolveu-se calcipotriol em propileno glicol(PG) . A solução a 5% peso/peso de calcipotriol foi misturadacom 95% peso/peso da formulação a base de PEG. Adicionou-senicotinamida seja para a solução de calcipotriol, ou junta-mente com Vitamina E para a mistura emulsionada de PEG-4000e Steareth-20 em PEG-440, a exatamente 45°C para se atingiruma concentração final de 2,1 mg de NA/g da formulação.

Tabela 3 mostra uma formulação básica com base emPEG da invenção.

Tabela 3: Formulação Básica

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Métodos Detalhadas da Preparação

Um (1) mg de calcipotriol foi adicionado para um(1) mL de PG num banho de água a 40°C com ligeira misturaçãoaté que todo o calcipotriol tivesse dissolvido e que nenhumcristal fosse observado. Esta solução é adequada para umapreparação de 20 g (concentração final de 50 ug/g).

PEG-4000 e Steareth-20 em PEG-400 foram dissolvi-dos juntos num banho de água a (~60°C) e misturados bem atéa homogeneidade. A mistura foi resfriada para abaixo de 50°C.Adicionou-se Vitamina E e calcipotriol/PG para amistura de PEG-4000 e Steareth-20 em mistura de PEG-400 auma relação de 5% peso/peso de solução CP em PG com 95% pe-so/peso da mistura.

Alternativamente, pode ser adicionado nicotinamidacom a Vitamina E: 42,0 mg de NA para 20 g da preparação(concentração final NA 2,1 mg/g) ou pode-se dissolver na so-lução de calcipotriol.

A mistura foi bem combinada e as bisnagas enchidas.

Exemplo 5 - Efeito sinérgico de Calcipotriol e NA in vivo

Os testes in vivo objetivaram medir a atividade(potência) anti-psoriática das composições compreendendo Nae calcipotriol utilizando o teste padrão da cauda de camun-dongo (ver Exemplo 3) A indução de uma camada granular (or-to-ceratose ou maturação normal) em áreas escamadas da peleda cauda de camundongo e/ou maturação anormal (paraceratose)é um parâmetro relevante na atividade anti-psoriática.

O teste foi realizado em larga escala, com 100 me-dições cada para Placebo (PL), Calcipotriol (CP) 50 (ig/g euma mistura pf de Calcipotriol e Nicotinamida (CPNA). Foramobtidas 90 medições para Nicotinamida (NA) a 2,1 mg/g.

Todos os camundongos participantes foram aleatori-zados antes da avaliação e dos tratamentos, foram re-destinados aos pontos de dados apenas após a análise micros-cópica estar completa num procedimento totalmente às cegas.

Os tratamentos foram analisados usando um procedi-mento ANOVA para todos os tratamentos. O tratamento com CPou NA apenas proporcionou bons resultados, porém o tratamen-to com CPNA foi significativamente melhor, indicando um e-feito sinérgico de CP e NA.

As médias e seus desvios padrão obtidos dão dados na Tabela 4 abaixo:

Tabela 4

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Para pontos de dose únicos/tratamento foi possivelavaliar-se uma estimativa S do efeito sinérgico por meio decalculo de uma relação dos resultados do tratamento combina-do para uma soma dos tratamentos separados, onde todos ostratamentos são ajustados por subtração do resultado do pla-cebo de cada um dos resultados separados, como na equação aseguir:

S = (CPNA - PL)/{[(CP - PL) + (NA - PL) }

O valor S foi estimado em 2,16 com uma estimativade seu erro padrão: 0,0211. Fica, portanto, evidente que,existe sinergismo entre CP e NA para as condições do testerealizado.

A Tabela 5 abaixo mostra os resultados desta ava-liação.

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A Figura 3 é um gráfico ilustrando os resultadosda análise supra. O efeito sinérgico de calcipotriol e ni-cotinamida nas concentrações supracitadas fica evidente(combinação (CP+NA).

Exemplo 6 Irritação/Esfoliação Dermatológica Agudaem Coelhos

Este teste foi realizado para estar de acordo com: OECD Principies of Good Laboratory Practice (conforme re-visto em 1997); OECD Enviromental Health and Safety Publica-tions Series on Principies of Good Laboratory Practice andCompliance Monitoring - número 1. ENV/MC/CHEM (98) 17 ;OECDE Guideline for the Testing of Chemicals, parágrafo 4,n° 404, "Acute dermal Irritation/Corrosion" adotado em 24 deabril de 2002, e ISO 10993-10:2002 (E) segunda edição, 1 desetembro de 2002, Biological Evaluation of Medicai Devicesparte 10: Tests for Irritation and Delayed-Type Hypersensi-tivity. Parágrafo 6.3 Animal Skin Irritation Test.

Objetivo: Avaliação do potencial dos Itens deTeste para produzir irritação/esfoliação dermatológico poraplicação em dose única a coelhos, propiciando por esse meio,informação sobre possíveis perigos para a saúde prováveis desurgirem da exposição da pele às substancias de teste sobcondições de seu uso projetado como um agente terapêuticopara Psoriase.

Material de Teste: Calcipotriol + nicotinamida(NA) nas seguintes concentrações: 50 microgramas/g calcipo-triol, 2,1 miligrama/g NA numa base de PEG.

Sistema de Teste: Coelho fêmeas New Zealand White(NZW)m de cerca de 3-4 meses de idade, cerca de 2 kg no ini-cio do teste. Os animais são aclimatados por pelo menos 5dias, sendo examinados por um veterinário quanto ao estadode saúde dos animais usados neste teste na chegada. Apenasos animais com boa saúde são climatizados às condições labo-ratoriais e empregados no teste.

Encarceramento: Os coelhos são enjaulados indivi-dualmente em gaiolas de aço inoxidável montadas em baterias.As gaiolas mediam 60 cm (comprimento) x 50cm (largura) x45cm (altura) mais uma prateleira com dimensões de cerca de50cm (comprimento) x 20 cm (largura) colocada acerca de 20cm acima do assoalho da gaiola. Os coelhos foram equipadoscom assoalhos de plástico perfurado sobre bandejas colocadaspor baixo.

Alimento e Água: Aos animais proporcionou-se umadieta de aproximadamente 100 g/coelho/dia de alimento de co-elho comercial deixando-se livre acesso a água, fornecidapara cada gaiola via garrafas de polietileno dotadas de tu-bos para sorver de aço inoxidável. A água foi filtrada(filtro de 0,1 ^) , clorada e acidulada e é monitorada porcontaminantes duas vezes ao ano.

Ambiente: Condições ambientais automaticamentecontrolada foram ajustadas para manter a temperatura a 17-23°C com uma umidade relativa (RH) de 30-70%, um ciclo claro

- escuro de 12 h - 12 h e 15-30 mudanças de ar/hora na sala de teste. A temperatura e a UR foram monitoradas diariamen-te. O ciclo de luz foi monitorado por computador de con-trole.

Identificação : Os animais foram identificadospelo criador por meio de tatuagem ou por um número na orelha com corante marcador. Este número também aparece no cartãoda gaiola, visivel pela frente de cada gaiola. O cartão dagaiola continha além disso, o número do teste e detalhes re-levantes do grupo de tratamento e nivel de dose.

Termino: Os coelhos foram eutanizados por uma su-per dosagem i.v de pentobarbital de sódio (75 mg/kg) emqualquer tempo em que um animal demonstrasse sinais contí-nuos de dor ou desconforto grave ou no caso onde o examehistopatológico fosse necessário para evidenciar respostasequívocas.

Justificativas: O coelho albino foi selecionadopara este teste, porque ele é a espécie de escolha especifi-cada pelas Linhas de Orientação OECD e EPA para emprego emtestes de irritação/esfoliação dermatológica.Dose: 0,5 g/ animal

Procedimentos de Teste:

Princípio do Teste: O método seqüencial aplicadoneste teste representa um procedimento por etapas destinadoa evitar uso desnecessário dos animais. 0 teste foi reali-zado, de inicio, usando um animal. Dependendo dos resulta-dos, um teste de confirmação usando animais adicionais foirealizado. 0 Item de Teste foi aplicado em dose única paraa pele do animal de teste. Áreas adjacentes da pele não tra-tada de cada animal prestou-se como um controle. 0 grau deirritação/esfoliação é avaliado e marcado a intervalos espe-cíficos.

Preparações Pré-Teste dos Animais: Aproximadamen-te 24 horas antes do teste, removeu-se o pêlo tosquiando-serente a área dorsal do tronco dos animais usando-se um tos-quiador elétrico. Tomou-se cuidado para evitar esfolar apele e apenas os animais com a pele intacta e saudável foramusados. No caso em que fossem observadas áreas de cresci-mento de pelo denso, estas não são usadas como locais para oteste.

Aplicação do Item de Teste: 0 Item de Teste foiaplicado seja diretamente à pele, ou a um chumaço de gaze(aproximadamente 6 cm2) que foi então aplicado imediatamentee diretamente à pele. 0 chumaço foi mantido em contato coma pele por meio de uma fita não irritante de um curativo se-mi-oclusivo (tecido de meia TUBIGRIP ) a fim de manter o a-desivo de gaze e o Item de Teste por todo o periodo de expo-sição de 4 horas e assegurar que o animal não possa ingeriro Item de Teste. A área de pele não tratada de cada animalse presta como um controle. O item de Teste foi aplicado emseqüência como a seguir:

Teste Inicial: Um único emplastro foi aplicado aum animal por 4 horas (Caso houvesse esfolamento dermatoló-gico o teste teria de ser imediatamente concluído).

Teste Confirmatório: Não foi necessário. Casofosse observado um efeito irritante no teste inicial, o tes-te confirmatório teria de ser realizado num modo seqüencialou por exposição de dois animais adicionais simultaneamente.

Períodos de Exposição e

Remoção dos Adesivos: No final do periodo de expo-sição de 4 horas, o Item de teste residual foi removido u-sando água morna ou um solvente apropriado sem alterar aresposta existente ou a integridade da epiderme. As bordasdo local de teste foram marcadas com tinta não irritante eindelével de modo a facilitar subseqüentes sessões de ob-servação .

Analgesia: Um analgésico opióide pode ser usadocomo uma base caso-por-caso, visando-se considerações debem-estar do animal pazra uso em animais de laboratório, naspesquisas.

OBSERVAÇÕES:

Período de Observação: A duração do periodo deobservação deve ser suficiente para avaliar-se totalmente aamplitude e reversibilidade dos efeitos observados. Contudo,o experimento teria terminado em qualquer tempo que o ani-mal demonstre sinais contínuos de dor ou desconforto grave.Os animais que não desenvolvem lesões de pele são observa-dos por um periodo de 72 horas seguinte a remoção dos adesi-vos. Observações posteriores podem ser necessárias a fim dese estabelecer a reversibilidade até 14 dias pós-aplicação.No caso de um periodo de observação prolongado além de 72horas, cada animal é observado até que a reversibilidade se-ja evidenciada, ou até um máximo de 14 dias.

Observações Clínicas e Graduação das Reações dePele:

Todos os animais foram examinados quanto a sinais de eritemae edema, e as respostas são contadas a 1, 24, 48 e 72 horasapós remoção do adesivo. Para o teste inicial em um animalo local de teste também foi examinado imediatamente após oadesivo ter sido removido. Caso os animais fossem observadospor até 14 dias, mais exames são realizados uma vez ao dia,seguinte a remoção do adesivo, de modo a determinar o estadodas lesões, e sua reversibilidade. Os graus de reações depele foram registrados a cada exame.

Quaisquer reações dermatológicas diferentes daque- Ias relacionadas (por exemplo, alopecia em área limitada,hiperceratose, hiperplasia e escamação) foram registradosseparadamente e contados (embora não calculados no PrimaryIrritation Index) de acordo com uma escala de graduação de 4pontos, em ordem ascendente de gravidade (0 = nenhuma; 1 = branda; 2 = moderada, 3 = grave)

Além disso, o exame de quaisquer efeitos adversossistêmicos foi feito pelo menos uma vez ao dia ou mais fre-qüentemente, quando indicado pela resposta do animal ao tra-tamento.

Considerações Terminais humanas: Os animais vistosnuma condição moribunda e os animais demonstrando dor gravee sinais constantes de desconforto grave tiveram de ser hu-manamente aniquilados.

Pesos Corpóreos; A determinação dos pesos corpó-reos dos indivíduos foi feita antes da aplicação do Item deTeste e no término do teste. Para animais observados até 14dias, determinações do peso corporeo adicionais foram feitasem 7 e 14 dias seguinte remoção do adesivo.

Patologia: Ao arbítrio do instrutor do teste esujeito às reações observadas o exame histopatológico podeser feito para esclarecer reações duvidosas.

Avaliação dos Dados: índice de Irritação Primário(PU): A avaliação final dos efeitos de irritação potenci-ais do Item de Teste foi baseada na determinação do PrimaryIrritation Index (PII)C) de acordo com etapas por computadormostradas abaixo. Apenas as contagens de observado de 24,48 e 72 horas foram usada pra calculo do PII. Quaisquer ob-servações feitas antes da aplicação ou após 72 horas desti-nadas a monitorar a recuperação, não foram usadas na deter-minação .

Para cada animal o Irritation Scores para, tantoeritema quanto edema foram calculados para obter-se o Pri-mary Irritation Index (PII)

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Quando respostas tais como alopecia (área limita-da) , hiperceratose, hiperplasia e escamação persistem até ofinal do periodo de observação, o Item de Teste seria consi-derado como um irritante.

Definições (de acordo com linhas de orientaçãoEPA e OEDC):

Irritação dermatológica é a produção de alteraçõesinflamatórias reversíveis ou qualquer dano na pele seguinteaplicação da substancia de teste por até 4 horas.

Esfolamento dermatológico é a produção de dano aotecido irreversível na pele seguinte aplicação de uma subs-tância de teste (ou seja, necrose visivel pela epiderme e àderme, seguinte aplicação de uma substância de teste, poraté quatro horas. Reações esfoliantes são tipificadas porúlceras, sangramento, sarna sanguinolenta, e, no final daobservação em 14 dias, por descoloração devido ao alvejamen-to da pele, áreas completas de alopecia e escaras).

Resultados

A reação dermatológica consistiu unicamente de e-ritema, com uma incidência de 2 dentre 3 animais testados. Aarremetida do eritema foi, ou imediato- ou em 1 hora apósremoção do adesivo. Em um animal o eritema teve graduação 2(bem definido) no tempo imediato após a remoção do adesivo,porém a seguir, caiu para 1 (muito leve), num outro animal oeritema obteve grau 1. A recuperação foi observada no pri-meiro em 72 horas após remoção do adesivo, e no último, em24 horas do ponto de observação.

Nenhum sinal clinico sistêmico visivel na reaçãoao tratamento ficou evidente, em quaisquer animais por todoo periodo de teste.

Nenhuma alteração insólita foi observada nos pesoscorpóreos.

Conclusão: Em consideração a um índice de Irrita-ção Primário calculado (PU) o nivel irritante da composiçãoda presente invenção é considerado como um "Irritante derma-tológico Insignificante" . Este resultado indica que, acombinação de CP e NA propicia uma formulação com menos ir-ritação dermatológica do que a formulação consistindo de CPapenas.

Em contraste, o creme Daivonex(R) (Leo) é acompa-nhado por um aFolha de Dados mostrando um nivel de 31,8 % deefeitos adverso sem pacientes. Esses efeitos adversos in-cluem, inter alia, irritação lesional e peri-lesional(13,9%) e irritação da face e/ou do escalpo (10,6%).

Exemplo 7: Permeação à Pele do Calcipotriol e Ni-cotinamida de Três Formulações Tópicas: NA, CP e combinaçãoCP-NA

O objetivo do presente teste foi medir-se o com-portamento de permeação epidérmico do Calcipotriol e Nicoti-namida de três formulações tópicas: Uma composição dom NAapenas, uma composição dom Calcipotriol apenas, e uma compo-sição com NA e Calcipotriol.

Estudo Farmacocinético

Calcipotriol: 0 calcipotriol é tipicamente comer-cializado a concentração de 0,005% como uma loção, creme,gel, ungüento ou solução para o couro cabeludo. A dose se-mana é limitada a 100 g por semana de creme ou ungüento ou60 ml/semanas de solução para o escalpo de modo a evitar ir-ritação e hipercalcemia de pele passageira.

Nicotinamida: A nicotinamida (NA) é uma amida hi-drossolúvel de ácido nicotinico e é uma das duas formasprincipais da vitamina do Complexo B, B3. A farmacocinéticade NA /e dependente de dose, das espécies, gênero e via deadministração. A administração tópica de ge de nicotinamidaa 4% foi vista ser de eficácia comparável a 1% de gel declindamicina no tratamento da acne vulgaris (Shalita, et al 1995) .

Formulações e Métodos

Três formulações foram preparadas. A primiera eracomposta por Nicotinamida (NA, 2,1 mg/g) a segunda Calcipo-triol (CP, 50 ug/g) e a terceira uma combinação de Calcipotriol (50 ng/g) e Nicotinamida (2,1 mg/g (CPNA)

Medições de permeação à pele

O conjunto de célula de Franz e pele de orelha deporco foram usados para medir a permeação dos fármacos atra-vés da pele in vitro de vários sistemas e formas de dosagem(Dick et al., 1992; Simon et al., 2000; Touitou et al.,1998; Chien 1992). Os experimentos foram feitos in vitrousando a montagem celular de difusão de Franz e pele de es-pessura total de orelha de porco. As células de difusão sãoproduzidas de um material inerte e a montagem permite boamistura receptor-fluido e controle da temperatura.

A pele da orelha de porco foi excisada da parte externa da orelha e separada da cartilagem subjacente. A pe-le foi armazenada sob congelamento a -20°C até o uso, sempremenos que uma semana. Logo antes de um experimento, a pelefoi descongelada a temperatura ambiente por 1 hora e o pêlofoi tosqueado. A pele foi verificada para integridade, aseguir cortada e montada nas células de difusão com o estra-to córneo no sentido do compartimento do doador. Uma quan-tidade de 100 mg de formulação de teste foi colocada sobre apele de 1,77 cm3 no compartimento doador. 0 compartimentoreceptor foi enchido com etanol:água (3:7) de modo a mantercondições de pseudo-imersão no sistema. Os receptores forammantidos a 37°C e agitados par garantir meio homogêneo du-rante o experimento.

Os experimentos foram operados sem oclusão pro 12horas. As amostra foram retiradas do receptor a 1, 2, 4, 6,9 11, e 12 horas. As amostras foram analisadas para concen-trações de Nicotinamida e Calcipotriol por HPLC conforme a-inda descrito. Os experimentos foram feitos em triplicatas.Um total de 24 células foram usadas, 8 células para cadaformulação de teste (NA, CP e CPNA).

Quanto aos produtos tópicos, procedimentos de dosefinita foram usados. 0 doador foi mantido aberto às condi-ções atmosféricas, isto imita a situação de uso clinico.

MétodosCada formulação foi testada em oito peças de pele.Um total de 24 peças foi usado.

Análise de HPLC: A análise HP1C de nicotinamida ecalcipotriol foram feitas como a seguir: Nicotinamida foianalisada num sistema Waters Alliance 2795 LC e cromatogra-fia Quattro micro™HPL LC-EM com coluna Hypersil BDS C18, 3u/m, 150 x 2,1 mm (CN28103-152130, lote N° 4796). O ensaiofoi feito com uma fase móvel composta de TFA a 0,1% em á-gua:acetonitrila (9:1) ao fluxo de 0,23 mL/minutos.

Calcipotriol foi analisado em cromatografia TSPHPL equipado com detetor de UV com sistema HPLC de célula defluxo de 5 cm a 266 nm. A separação foi feita usando colunaHypersil ODS 2,5 pm, 250 x 4, 6 mm (CN 31605-020, lote n°5/120/5745) com uma fase móvel contendo água:acetonitrila(4:6) a um fluxo de 1,8 mL/minutos.

Soluções hidroetanólicas de Nicotinamida e Calci-potriol foram usadas para as curvas de calibração e comopadrões externos.

Resultados

Os resultados de permeação de pele são dados como:

1. Qr- Quantidade de molécula permeável no recep-tor em cada ponto no tempo do experimento (média ±SD).

2. Qrl2 - quantidade da molécula permeável quepermeou a pele durante as 12 horas e acumulou-se no receptor(média ± SE).

3. Perfis de permeação de pele - Quantidades defármaco cumulativas que permearam a pele versus tempo.

Permeação de calcipotriol das formulações de CP eCPNA

Nenhum calcipotriol foi detectado pela analise deHP1C no compartimento receptor de qualquer célula durante oexperimento de permeação de 12 horas. 0 menor nivel dequantificação (QL) de calcipotriol em solução de etanol-água foi visto em 1,3 ng/mL. Assim, o calcipotriol na pre-sente formulação não penetra na pele.

Sem querer estar ligado à teoria, a falta de pene-tração do calcipotriol na pele coloca inúmeras vantagens dapresente formulação incluindo:

a) um nivel mais alto de segurança devido à elimi-nação de efeitos colaterais sistêmicos, tais como hipercal-cemia, o mais das vezes visto em pacientes que fazem uso docalcipotriol comercialmente disponível, e

b) alto nivel de eficácia, visto o calcipotriolpermanecer sobre a superfície da pele em contato com suascélulas alvo, os ceratinócitos.

Permeação de nicotinamida das formulações -NA eCPNA

AS quantidades (Qr) de nicotinamida que permearama pele das formulações de NA e de CPNA estão resumidas naTabela 6

Tabela 6 - Nicotinamida permeou a pele das formu-lações de NA e CPNA

Formulações

<table>table see original document page 69</column></row><table><table>table see original document page 70</column></row><table>

* n = 7** n = 6

Exemplo 8 - Fase de Teste Clinico I/IIa: Tratamen-to Novo não esteroidal para Psoríase Moderada

A substancia ativa: "Formulação de CPNA"0,05% de calcipotriol e 0,21% de nicotinamida numa base de0,3% de vitamina E, 2% Steareth 20, 77,7% PEG-400 e 20% PEG-4000.

Metodologia: Placebo aleatorizado, duplo-cegomulticentralizado e teste comparativo controlado ativo

Objetivos Principais: Os principais objetivosdeste teste foram a) avaliar a segurança e eficácia da apli-cação tópica da formulação de CPNA administrada duas vezesao dia por 8 semanas em pacientes com Psoriase moderada; e

b) determinar que a formulação de CPNA não é inferior aocompetidor Daivonex(R> (Leo) .

Objetivos Secundários: Os objetivos secundáriosdesta analise são: a) Reforço da avaliação de PGA (Physi-cian's Global Assessment) (Avaliação Global do Médico) ; b)Reforço da avaliação de PSA (Patient Self Assessment) = (Au-to-avaliação do paciente); c) efeito perdurável pós-tratamento; d) tratamento com formulação de CPNA não tem e-feito rebote como é de costume para alguns tratamentos dapsoriase, especialmente composições com base em esteróides.Avaliação de PGA (Gottlieb et al. , 2003) : Por ocasião da vi-sita de seleção, a visita de inclusão (VI) e em todas as vi-sitas a seguir, a avaliação da psoriase será realizada usan-do a contagem PGA. O Physician's Global Assessment (PGA)tem a prescrição do investigador de uma única estimativa dagravidade da doença geral do paciente. Uma escala de setepontos de inexistente a grave foi usada, a gual está ilus-trada na Tabela 7.

Tabela 7 : Avaliação PGA

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Avaliação PASI (Feldman e Krueger, 2005): Pela vi-sita de classificação, visita de inclusão (V) e em todas asvisitas a seguir, a avaliação da psoriase será realizada u-sando o índice de Gravidade na Área de Psoriase (PASI).

Avaliação de sintomas: Eritema (E), Perduração (I)e Escamação (S) são contados usando a escala mostrada na ta-bela 8, a seguir/

Tabela 8> Avaliação de sintomas

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% de Avaliação da Área : Uma avaliação da áreaatribuída para cada área do corpo como se vê na Tabela 9

Tabela 9: Avaliação dos sintomas<table>table see original document page 73</column></row><table>

A avaliação PASI foi calculada como segue:AVALIAÇÃO PASI = 0,1 [(E + I + S) x Avaliação daÁrea] Cabeça +0,2 [(E + I + S) x Avaliação da área] MembrosSuperiores + 0,3 [ (E + I + S) x Avaliação da Área] Tronco + 0,4 [(E + I + S) x Avaliação d Área] Membros Inferiores

Auto-Avaliação do Paciente: Ao paciente exigiu-seavaliar genericamente, o efeito do tratamento à tolerânciae em duas visitas semanais (V2) e em todas as visitas a se-guir, por avaliação geral (da eficácia e tolerância. Alémdisso, na visita de inclusão (VI), o paciente usou a mesmaavaliação de eficácia para descrever o estado da doença nocomeço do teste. A auto-Avaliaçao do Paciente teve 5 defi-nições graduadas (usadas tanto para (i) eficácia (Tabela10A) como para (ii) Tolerância (Tabela 10 B)):

Tabela 10A

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Tabela 10B <table>table see original document page 74</column></row><table>

Número de pacientes aleatorizados : 12 0 pacientesforam recrutados e aleatorizados em três grupos Placebo,formulações de CP-NA e DAivonex (40 pacientes por grupo>

Medicação do Teste: Formulação de CP-NA, placebo eproduto competidor. Todos os tratamentos foram aplicados du-as vezes ao dia, pela manhã e à noite por 8 semanas, por a-plicação tópica.

Duração do tratamento: 8 semanas, seguinte a 4-8semanas de periodo de depuração anterior, caso necessário,ao primeiro tratamento.

Período de reforço: 4 semanas (pós- último tratamento) .

Critérios de Inclusão: Homens ou mulheres com ida-de acima de 18 anos; Paciente com uma história pessoal depsoriase branda; Paciente com uma avaliação PASI menor que14; Pacientes com um teste de gravidez de urina negativo,incluindo para mulheres com potencial de prenhez e usandoum contraceptivo eficiente (contraceptivos orais, IUD, ouligação tubária), Pacientes concordando em participar doteste e a assinar um consentimento informado por escrito.

Critérios de Exclusão: Pacientes tratados comtratamento tópico para psoriase branda dentro de um mês an-tes da inclusão no teste (corticóides, retinóides, derivadosde vitamina D);

Pacientes tratados com tratamento sistêmico parapsoriase (biológicos, metotrexato, ciclosporina, retinóides)dentro de dois meses antes da inclusão no teste; Pacientesque iniciaram ou modificaram um tratamento com beta-bloqueadores dentro de dois meses antes da inclusão no tes-te; Pacientes que possuem uma ou mais formas de: psoriasede couro cabeludo, psoriase de unha, Psoriase Flexural, Pso-riase palmo-plantar, Psoriase pustular, Mulheres grávidas ouamamentando ou mulheres que não usam contraceptivos, Pacien-tes com um histórico de hipersensibilidade ao Daivonex; Pa-cientes que participaram num teste clinico dentro de trêsmeses antes da inclusão; Pacientes que tem um histórico dedoença ou cirurgia médica/psiquiátrica que, no julgamento doinvestigador, podem interferir com o metabolismo da medica-ção e/ou implementação do teste e/ou avaliação dos parâme-tros de teste; Pacientes incapazes de entender a informação(por motivos lingüísticos ou mentais) e a dar (ela/ele) con-sentimento informado em participar do teste; Pacientes relu-tantes a dar consentimento informado em participar do teste;Pacientes que estão sob tutela.

Critérios de Avaliação: Os critérios primários emavaliar a eficácia dos tratamentos serão avaliação PASI eavaliação PGA (Gottlieb et al., 2003; Feldman and Krueger, 2005) .

As medições foram tomadas em 0, 2, 4, 6, 8 e 12semanas, avaliada por investigadores do teste. Os critériossecundários serão: Auto-avaliação do paciente sobre eficá-cia e segurança. Os dados serão registrados em 0, 2, 4, 6, 8 e 12 semanas.

Análise Estatística: Todas as análises estatísti-cas forma feitas usando um terminal SASlR) Windows(R) 2000versão 9.1 Todas as análises estatísticas descritivas forampropostas pelo Grupo e todos. Variáveis numéricas foram ta-buladas usando Desvio Padrão Médio, Mínimo, Médio, Máximo eNúmero de Observações. Variáveis categóricas foram tabuladasusando Número de Observações e Percentagem.

Análise de segurança: A segurança e tolerânciaforam avaliadas pelo paciente e registrada pelo médico. To-dos os eventos adversos do "tratamento emergencial" foramdescritos. A percentagem, freqüência, e a responsabilidadecom o tratamento de cada evento adverso foram expressos.

RESULTADOS PRELIMINARES

O beneficiamento médio da Visita 1 a Visita 5 (combase em 115 indivíduos ITT) foi mostrada como 15,4% para ogrupo de placebo e 46% (média de 52,7% e 38,5% em cada res-pectivo centro medico) . Portanto, a presente formulação évista como um tratamento eficaz para psoríase.Embora a presente invenção tenha sido particular-mente descrita, o versado na técnica apreciará que, muitasvariações e modificações podem ser feitas. Portanto, a in-venção não deve ser construída como restrita às modalidadesparticularmente descritas, ao contrário, o escopo, espiritoe conceito da invenção será mais prontamente entendido comreferência às reivindicações a seguir:REFERÊNCIAS:

Bosraan B. Matthiesen T Hess V, Friderichs E.1992. A quantitative method for measuring antipsoriatric ac-tivity of drugs by the mouse-tail model. Skin Pharma 5:41-48 .

Chien,Y.W. 1992. Novel Drug Delivery Systems,Chapter 7, Mareei Dekker, New York, pp. 337-338.

Dayan N, Touitou E. 2000. Carriers for skin deliv-ery of trihexyphenidyl HC1: ethosomes vs. liposomes. Bioma-terials. 21:1879-85.

DeLuca, H. 1988. The vitamin D story: a collabora-tive effort of basic science and clinicai medicine. FASEB2(3):224-236.

Dick IP, Scott RC. 1992. Pig ear skin as an in vi-tro model for human skin permeability. J Pharm Pharmacol;44:640-645. Feldman, SR and Krueger, GG. 2005 Psoriasis as-sessment tools in clinicai trials Annals of the RheumaticDiseases 64 : Ü65-Ü68 .

Gottlieb AB, Chaudhari U, Baker DG, Perate M, Doo-ley LT. 2003. The National Psoriasis Foundation PsoriasisScore (NPF-PS) system versus the Psoriasis Area Severity In-dex (PASI) and Physician's Global Assessment (PGA): a com-parison. J Drugs Dermatol. 2(3):260-6.

Harel A, Bloch O, Vardi P, Bloch K. 2002. Sensi-tivity of HaCat keratinocytes to diabetogenic toxins. Bio-chem Pharmacol. 15;63(2):171-8 .

Lehmann B, Querings K, Reichrath J. 2004. VitaminD and skin: new aspects for dermatology. Exp Dermatol;13Suppl 4:11-5.

Morimoto S, Yoshikawa K, Kozuka T, Kitano Y3 Ima-naka S, Fukuo K, Koh E, Kumahara Y. 1986. An open study ofvitamin D3 treatment in psoriasis vulgaris. Br. J. Dermatol, 115 (4) :421-429.

Nikoloff, BJ, Fisher, GJ, Mitra, RS, Voorhees,JJ. 1988. Additive and Synergistic Antiproliferative Effectof Cyclosporin A and Gamma Interferon on Cultured HumanKeratinocytes. Amer. J. Pharmacol., 131:12-18.

Ohyama, Y and Yamasaki, Y. 2004. Eight CytochromeP450s Catalyze Vitamin D Metabolism. Frontiers in Bioscience9, 3007-3018.

Otonkoski T, Beattie GM, Mally MI, Ricordi C,Hayek A. 1993. Nicotinamide is a potent inducer of endocrinedifferentiation in cultured human fetal pancreatic cells. JClin Invest. 92 (3) :1459-66.

Paramio, JM, and Jorcano, JL. 1997. Role of pro-tein kinases in the in vitro differentiation of human HaCatcells. Brit. J. Dermatol, 137:44-50.

Pipeleers D, Van de Winkel M. 1986. Pancreatic Bcells possess defense mechanisms against cell-specific tox-icity. Proc Natl Acad Sei USA. 83 (14):5267-71.

Rindelov, LL. 1983. A detergent trypsin method forthe preparation of nuclei for FACS DNA analysis, Cytometry3(5)323-327.

Shalita AR, Smith JG, Parish LC, Sofman MS,Chalker DK. 1995. Topical nicotinamide compared with clinda-mycin gel in the treatment of inflammatory acne vulgaris.Int J Dermatol. 34:434-7.

Simon GA, Maibach HI. The pig as an experimentalanimal model of percutaneous permeation in man: qualitativeand quantitative observations-an overview. Skin PharmacolAppl Skin Physiol. 2000; 13:229-34.

Steinert PM, Marekov LN. 1997. Direct evidencethat nvolucrin is a major early isopeptide cross-linked com-ponent of the keratinocyte cornified cell envelope. J BiolChem. 272 (3) :2021-30 .

Sun T-T, Green, H. 1976. Dif f erentiation of theepidermal keratinocytes in cell culture: formation of corni-fied envelope, Cell, 9:511-521.

Touitou E, Meidan VM, Horwitz E. 1998. Methods forquantitative determination of drug localized in the skin. JControl Release 56:7-21.

Vindelov LL, Christensen IJ, Nissen NI. 1983. Adetergent-trypsin method for the preparation of nuclei forflow cytometric DNA analysis. Cytometry 3(5):323-7.

Claims (59)

1. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fa-to de ser para aplicação tópica, consistindo essencialmentede calcipotriol, nicotinamida e um excipiente dermatológica-mente aceitável à base de polietileno glicol.

2. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato do excipiente compre-ender uma mistura de PEG-4000 e PEG-400.

3. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato da referida composiçãoconsistir, essencialmente de calcipotriol, nicotinamida euma mistura de PEG-4000 e PEG-400.

4. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 3, CARACTERIZADA pelo fato de ter a seguinte for-mulação:cerca de 10 a cerca de 100 jxg/g de calcipotriol,cerca de 0,5 a cerca de 25 mg/g de nicotinamida,cerca de 70% a cerca de 80% (peso/peso) de PEG-400;cerca de 15% a cerca de 25% (peso/peso) de PEG-4000,cerca de 1% a cerca de 5% (peso/peso) de Steareth-20; ecerca de 0,1 a cerca de 1% (peso/peso) de vitamina E.

5. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 4, CARACTERIZADA pelo fato do calcipotriol serproporcionado numa concentração de cerca de 20 |J.g/g a cercade 7 0 jag/g.

6. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 4, CARACTERIZADA pelo fato do calcipotriol serproporcionado numa concentração de cerca de 50 ug/g.

7. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 4, CARACTERIZADA pelo fato da calcipotriol serproporcionado numa concentração de cerca de 30 jag/g.

8. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 4, CARACTERIZADA pelo fato da nicotinamida serproporcionada numa concentração de cerca de 0,5 a cerca de-25 mg/g.

9. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 4, CARACTERIZADA pelo fato da nicotinamida serproporcionada numa concentração de cerca de 1 a cerca de 20 mg/g.

10. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 4, CARACTERIZADA pelo fato da nicotinamida serproporcionada numa concentração de cerca de 2 mg/g a cercade 10 mg/g.

11. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 4, CARACTERIZADA pelo fato da nicotinamida serproporcionada numa concentração de cerca de 2,1 mg/g.

12. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 4, CARACTERIZADA pelo fato de ter a seguinte com-posição:cerca de 50 [ig/g de calcipotriol,cerca de 2,1 mg/g de nicotinamida,cerca de 77,7% (peso/peso) de PEG-400,cerca de 20% (peso/peso) de PEG-4000,cerca de 2% (peso/peso) de Steareth-20, ecerca de 0,3% (peso/peso) de vitamina E.

13. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 4, CARACTERIZADA pelo fato de ter a seguinte for-mulação :cerca de 30 (ig/g de calcipotriol,cerca de 2,1 mg/g de nicotinamida,cerca de 77,7% (peso/peso) de PEG-400,cerca de 20% (peso/peso) de PEG-4000,cerca de 2% (peso/peso) de Steareth-20, ecerca de 0,3% (peso/peso) de vitamina E.

14. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelofato de compreender calcipotriol e um excipiente ou veiculodermatologicamente aceitável, onde o calcipotriol não pene-tra, significativamente a pele.

15. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 14, CARACTERIZADA pelo fato de que menos que 5%do calcipotriol penetra a pele.

16. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 14, CARACTERIZADA pelo fato do excipiente ser umexcipiente a base de PEG.

17. Composição farmacêutica de acordo com a rei-vindicação 16, CARACTERIZADA pelo fato do excipiente compre-ender uma mistura de PEG-400 e PEG-4000.

18. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 14, CARACTERIZADA pelo fato de consistir essenci-almente de calcipotriol e um excipiente a base de PEG.

19. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 18, CARACTERIZADA pelo fato de ter a seguinteformulação:cerca de 10 |ig/g a cerca de 100 jig/g de calcipotriol,cerca de 7 0% a cerca de 80% (peso/peso) de PEG-400,cerca de 15% a cerca de 25% (peso/peso) de PEG-4000,cerca de 1% a cerca de 5% (peso/peso) de Steareth-20,cerca de 0,1% a cerca de 1% (peso/peso) de vitamina E.

20. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 19, CARACTERIZADA pelo fato de ter a seguinteformulação:cerca de 50 (-ig/g de calcipotriol,cerca de 70% (peso/peso) de PEG-400,cerca de 20% (peso/peso) de PEG-4000,cerca de 2% (peso/peso) de Steareth-20, ecerca de 0,3% (peso/peso) de vitamina E.

21. Composição farmacêutica, de acordo com quais-quer reivindicações 19 ou 20, CARACTERIZADA pelo fato dacomposição compreender adicionalmente nicotinamida.

22. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 21, CARACTERIZADA pelo fato da nicotinamida serproporcionada a uma concentração de cerca de 0,5 a cerca de 25 mg/g.

23. Composição farmacêutica, de acordo com quais-quer reivindicações 1-22, CARACTERIZADA pelo fato de serpara o tratamento de uma doença ou distúrbio de pele hiper-prolif erativo .

24. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 23, CARACTERIZADA pelo fato da doença ou distúr-bio de pele hiperproliferativo ser selecionado(a) de uma do-ença ou distúrbio hiperproliferativo benigno e uma doença oudistúrbio hiperproliferativo maligno.

25. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 24, CARACTERIZADA pelo fato da doença ou distúr-bio hiperproliferativo benigno ser selecionado de psoriase,ceratose solar, ictiose, doença de Grover, verrugas comuns,ceratoacantoma, ceratose seborréica, escleroderma e sebor-réia.

26. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 25, CARACTERIZADA pelo fato da doença hiperproli-ferativa ser psoriase.

27. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 24, CARACTERIZADA pelo fato da doença ou distúr-bio de pele hiperproliferativo maligno ser selecionado decarcinoma de célula escamosa (SCC) carcinoma de célula basal(BCC).

28. Método de prevenção ou tratamento de uma doen-ça ou distúrbio de pele hiperprolif erativo, CARACTERIZADOpor compreender as etapas de:administração tópica a um indivíduo em necessidadedo tratamento, de uma quantidade terapeuticamente eficaz deuma composição farmacêutica de acordo com quaisquer reivin-dicações 1-22.

29. Método, de acordo com a reivindicação 28,CARACTERIZADO pelo fato do calcipotriol ser proporcionado auma concentração de cerca de 50 [iq/g e nicotinamida ser pro-porcionada numa concentração de cerca de 2,1 mg/g.

30. Método, de acordo com a reivindicação 29,CARACTERIZADO pela composição farmacêutica ser um ungüentodermatológico consistindo essencialmente de:cerca de 50 \xg/g de calcipotriol,cerca de 2,1 mg/g de nicotinamida,e um veiculo a base de PEG.

31. Método, de acordo com a reivindicação 30,CARACTERIZADO pelo fato da composição farmacêutica ser umungüento dermatológico com a fórmula;cerca de 50 |ig/g de calcipotriol,cerca de 2,1 mg/g de nicotinamida,cerca de 77,7% (peso/peso) de PEG-400,cerca de 20% (peso/peso) de PEG-4000,cerca de 2% (peso/peso) de Steareth-20, ecerca de 0,3% (peso/peso) de vitamina E.

32. Método, de acordo com a reivindicação 28,CARACTERIZADO pelo fato do indivíduo ser um mamífero.

33. Método, de acordo com a reivindicação 32,CARACTERIZADO pelo fato do indivíduo ser um indivíduo humano .

34. Método, de acordo com a reivindicação 28,CARACTERIZADO pelo fato da doença hiperprolif erativa serpsoriase.

35. Método, de acordo com a reivindicação 28 ,CARACTERIZADO pelo fato de compreender a administração tópi-ca uma ou duas vezes ao dia de uma dosagem medicinalmentesuficiente da referida composição.

36. Método de prevenção ou tratamento de uma do-ença ou distúrbio de pele hiperproliferativo, CARACTERIZADOpelo fato de compreender as etapas de:administração tópica a um indivíduo em necessidadede tal tratamento, de uma quantidade terapeuticamente eficazde uma composição consistindo essencialmente de calcipotriola uma concentração de cerca de 10 \iq/ g a cerca de 100 |ig/g;nicotinamida a uma concentração de cerca de 0,5 a cerca de-25 mg/g, e um excipiente ou veiculo dermatologicamente acei-tável por um per iodo de tempo inicial, a fim de reduzir ossintomas da doença hiperproliferativa, eadministração tópica a um indivíduo em necessidadede tal tratamento de uma quantidade terapeuticamente eficazde uma composição consistindo essencialmente de calcipotriola uma concentração de cerca de 10 ng/g a cerca de 50 |ig/g,nicotinamida a uma concentração de cerca de 0,5 a cerca de-25 mg/g, e um excipiente ou veiculo dermatologicamente acei-tável por um segundo periodo de tempo.

37. Método de tratamento de uma doença ou distúr-bio de pele hiperprolif erativo, CARACTERIZADO por compreen-der as etapas de:administração tópica a um indivíduo em necessidadede tal tratamento, de uma quantidade terapeuticamente eficazde uma composição consistindo essencialmente de calcipotriola uma concentração de cerca de 50 jag/ g; nicotinamida a umaconcentração de cerca de 2,lmg/g, e um excipiente ou veiculodermatologicamente aceitável por um periodo de tempo inici-al, a fim de reduzir os sintomas da doença hiperproliferativa, eadministração tópica a um indivíduo em necessidadede tal tratamento de uma quantidade terapeuticamente eficazde uma composição consistindo essencialmente de calcipotriola uma concentração de cerca de 15 jag/g a cerca de 35 ng/g,nicotinamida a uma concentração de cerca de 2,1 mg/g, e umexcipiente ou veiculo dermatologicamente aceitável por umsegundo periodo de tempo.

38. Método, de acordo com quaisquer reivindicações 36 ou 37, CARACTERIZADO pelo periodo de tratamento inicialser de cerca de 4 semanas a cerca de 24 semanas.

39. Método, de acordo com quaisquer reivindicações 36 ou 37, CARACTERIZADO pelo segundo periodo de tempo ser decerca de 8 semanas a cerca de 52 semanas.

40. Uso de uma composição, CARACTERIZADA pelo fatode consistir essencialmente de calcipotriol a uma concentra-ção de cerca de 10 (ag/g (microgramas por grama) a cerca de 100 ug/g, e nicotinamida a uma concentração de cerca de 0,1mg/g a cerca de 50 mg/g, para preparar uma composição tera-pêutica para tratamento tópico de doenças hiperproliferativas.

41. Uso de acordo com a reivindicação 4 0,CARACTERIZADO pelo fato do calcipotriol ser fornecido a umaconcentração de cerca de 20 |J.g/g a cerca de 70 |ig/g.

42. Uso, de acordo com a reivindicação 40,CARACTERIZADO pelo fato do calcipotriol ser fornecido a umaconcentração de cerca de 50 ng/g.

43. Uso, de acordo com a reivindicação 40,CARACTERIZADO pelo fato do calcipotriol ser fornecido a umaconcentração de cerca de 30 |J.g/g.

44. Uso, de acordo com a reivindicação 40,CARACTERIZADO pelo fato da nicotinamida ser fornecida a umaconcentração de cerca de 0,5 a cerca de 25 mg/g.

45. Uso, de acordo com a reivindicação 40,CARACTERIZADO pelo fato da nicotinamida ser fornecida a umaconcentração de cerca de 1 a cerca de 20 mg/g.

46. Uso, de acordo com a reivindicação 40,CARACTERIZADO pelo fato da nicotinamida ser fornecida a umaconcentração de cerca de 2 mg/g a cerca de 10 mg/g.

47. Uso, de acordo com a reivindicação 40,CARACTERIZADO pelo fato da nicotinamida ser fornecida a umaconcentração de cerca de 2,1 mg/g.

48. Uso, de acordo com a reivindicação 40,CARACTERIZADO pelo fato da concentração terapêutica consis-tir essencialmente de calcipotriol a uma concentração decerca de 50 ng/g e nicotinamida a uma concentração de cercade 2,1 mg/g.

49. Uso, de acordo com a reivindicação 40,CARACTERIZADO pela composição terapêutica ser proporcionadana forma selecionada do grupo consistindo de uma solução a-quosa , uma solução não aquosa, uma loção, um creme, um gel,um ungüento, espuma, mousse, um spray, uma emulsão, e umamicroemulsão.

50. Uso, de acordo com a reivindicação 48,CARACTERIZADO pela composição terapêutica ser proporcionadacomo um creme, loção, gel ou ungüento.

51. Uso, de acordo com a reivindicação 49,CARACTERIZADO pela composição terapêutica ser uma formulaçãoa base de polietileno glicol.

52. Uso, de acordo com a reivindicação 50,CARACTERIZADO pela composição terapêutica compreender umamistura de PEG-4000 e PEG-400.

53. Uso, de acordo com a reivindicação 51,CARACTERIZADO pela composição terapêutica consistir essenci-almente de calcipotriol, nicotinamida e uma mistura de PEG-4000 e PEG-400.

54. Uso, de acordo com a reivindicação 40,CARACTERIZADO pela composição terapêutica ter a seguintecomposição:cerca de 50 ng/g de calcipotriol,cerca de 2,1 mg/g de nicotinamida,cerca de 77,7% (peso/peso) de PEG-400,cerca de 20% (peso/peso) de PEG-4000,cerca de 2% (peso/peso) de Steareth-20, ecerca de 0,3% (peso/peso) de vitamina E.

55. Uso, de acordo com a reivindicação 40,CARACTERIZADO pela composição terapêutica ter a seguintecomposição:cerca de 30 fig/g de calcipotriol,cerca de 2,1 mg/g de nicotinamida,cerca de 77,7% (peso/peso) de PEG-400,cerca de 20% (peso/peso) de PEG-4000,cerca de 2% (peso/peso) de Steareth-20, ecerca de 0,3% (peso/peso) de vitamina E.

56. Uso, de acordo com a reivindicação 40,CARACTERIZADO pelo fato da doença ou distúrbio de pele hi-perproliferativo ser selecionado(a) de uma doença ou distúr-bio hiperproliferativo benigno e uma doença ou distúrbio hi-perproliferativo maligno.

57. Uso, de acordo com a reivindicação 56,CARACTERIZADO pelo fato da doença ou distúrbio hiperprolife-rativo benigno ser selecionado de psoriase, ceratose solar,ictiose, doença de Grover, verrugas comuns, ceratoacantoma,ceratose seborréica, escleroderma e seborréia.

58. Uso, de acordo com a reivindicação 57,CARACTERIZADA pelo fato da doença hiperprolif erativa serpsoriase.

59. Composição farmacêutica, de acordo com a rei-vindicação 56, CARACTERIZADA pelo fato da doença ou distúr-bio de pele hiperproliferativo maligno ser selecionado decarcinoma de célula escamosa (SCC) carcinoma de célula ba-sal (BCC).