BRPI0507240B1 - Compositions intended for the topical application, and, use of the same - Google Patents

Abstract

composições destinadas à aplicação tópica, e utilização das mesmas composições destinadas à aplicação tópica caracterizadas pelo fato de que elas compreendem a título de princípio ativo um ou mais fragmentos de hialuronato cujo peso molecular está compreendido entre 50.000 e 750.000 da e eventualmente um retinóide.

Description

“COMPOSIÇÕES DESTINADAS À APLICAÇÃO TÓPICA, E, UTILIZAÇÃO DAS MESMAS” [0001] A presente invenção tem por objeto composições tópicas a base de hialuronato, sua utilização em cosmetologia e em dermatologia.

[0002] O hialuronato (HA) é um componente principal da matriz extracelular. Ele está sobretudo presente nos tecidos conjuntivos ditos “moles” por oposição a outros glicosaminoglicanos como o ácido condroitina sulfúrico presentes nos tecidos ditos “duros”, tais como a cartilagem. Ele é assim encontrado em quantidades grandes, principalmente na pele.

[0003] O HA é um glicosaminoglicano linear não sulfatado composto de unidades repetitivas de D-ácido glucurônico e de N-acetil-D-glucosamina (Tammi FL, Agren UM., Tuhkanen AL., Tammi M. Hyaluronan metabolism in skin. Progress in Histochemistry & Cytochemistry. 29(2): 1-81,1994).

[0004] Na pele normal, o HA é sintetizado essencialmente pelos fibroblastos dérmicos e os ceratinócitos epidérmicos (Tammi R., já citado). Graças a seus resíduos que trazem uma carga negativa, o HA atua como uma bomba a água permitindo manter a elasticidade da pele. O HA tem um papel principal no controle da difusão dos alimentos, hormônios, vitaminas e sais inorgânicos do tecido conjuntivo e na limpeza dos dejetos metabólicos que podem induzir reações inflamatórias. Com a idade, a quantidade de HA e seu grau de polimerização diminuem, resultando em uma diminuição da quantidade de água retida no tecido conjuntivo. A pele sofre então um processo de envelhecimento que leva a um aumento da fibrose e a uma baixa do teor em fibras elásticas.

[0005] Na pele humana normal, o HA existe sob forma de um polímero de alto peso molecular (600.000-1.000.000 Da). A degradação fisiológica do HA na pele se faz por (i) a internalização pelos ceratinócitos via o CD44 e (ii) a fragmentação intracelular em fragmentos de tamanho intermediário pelas hialuronidases (60.000 - 300.000 Da). O HA fragmentado é solto pelos ceratinócitos, passa a membrana basal e é liberado diretamente nos vasos linfáticos (Tammi R. e al., já citado).

[0006] Nessas condições inflamatórias, o acúmulo das formas de baixo peso molecular de HA foi demonstrada no animal. Durante a inflamação, fatores quimiotácticos plaquetares como a fibrina estimulam o afluxo e a ativação dos fibroblastos que degradam o HA por secreção de hialuronidase que resulta em concentrações tissulares elevadas de pequenos fragmentos de HA. A geração desses pequenos fragmentos de HA se faz também por diversos mecanismos como a despolimerização pelas espécies reativas de oxigênio liberadas pelos granulócitos, ou na pele irradiada pelos raios ultravioletas, ou a síntese de novo de fragmentos de baixo peso molecular. Vários estudos sugerem que o HA de alto e baixo peso molecular pode ter efeitos biológicos diferentes nas células e os tecidos (McKee CM., Penno MB., Cowman M., Burdick MD., Strieter RM., Bao C., Noble PW. Hyaluronan (HA) fragments induce chemokine gene expression in alveolar macrophages. The role of HA size and CD44. Journal of Clinicai Investigation. 98 (10) 2403-13, 1996; Termeer CC., Hennies J., Voith U., Ahrens T., Weiss JM., Prehm P., Simon JC. Oligosaccharides of Hyaluronan are potent activators of dendritic cells. Journal of Immunology. 165(4): 1863-70, 2000; Fitzgerald KA., Bowie AG., Skeffington BS., 0'Neill LA., Ras, Protein kinase C zeta, and I kappa B kinases 1 and 2 are downstream effectors of CD44 during the activation of NF-kappa B by hyaluronic acid fragments in T-24 carcinoma cells. Journal of Immunology. 164(4): 2053-63, 2000).

[0007] Demonstrou-se que o HA de pesos moleculares intermediários (50.000- 250.000 Da), aplicado na pele de murinos e humanos, atravessa as camadas epidérmicas e dérmicas. Os produtos de degradação aparecem no soro 2 horas após a aplicação do HA na pele. O peso molecular do HA recuperado no soro é ligeiramente inferior ao do HA aplicado na pele, demonstrando assim que a passagem transcutânea do HA não se limita unicamente a fragmentos de menor tamanho (100 - 10.000 Da) (Brown TJ., Alcorn D, Fraser JR. Absorption of Hyaluronan applied to the surface of intact skin. Journal of Investigative Dermatology. 113(5):740-6, 1999).

[0008] A vitamina A (retinol) e seus derivados naturais e sintéticos, coletivamente designados como retinóides, constituem uma grande variedade de substâncias que têm efeitos marcados notadamente na embriogênese, a reprodução, o mecanismo da visão, a regulação do crescimento e o fenômeno de diferenciação celular (Blomhoff R. et ai. 1991, Pbysiol. Rev. 71:951-990; Sporn M.B. et ai. (1994) in the Retinoids, 2a Ed, Raven Press, NY).

[0009] Os retino ides naturais são definidos pela fórmula geral (I) seguinte tal como definido em (IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature in Eur. J, Biochem. (1982), 129, 1-5): íi) [0010] na qual [0011] R = CH2OH corresponde ao retino! (ROL) [0012] R= CHO corresponde ao retinal (RAL) [0013] R= COOH corresponde ao ácido retinóico (RA).

[0014] Os efeitos biológicos dos retinóides sao mediados por sua interação com os receptores nucleares do tipo RAR (receptor do ácido retinóico) e RXR (receptor X do ácido retinóico). O ligante conhecido dos receptores RARs é o isômero trans da forma ácida da vitamina A (ácido trans-retinóico).

[0015] Em muitos dos tipos celulares, aqui compreendidas as células epiteliais, o ROL é metabolizado em retinilésteres.

[0016] A importância dos retinóides em dermatologia remonta às primeiras observações no animal de anomalias cutâneas induzidas por um déficit em vitamina A (Wolbach et Howe, J. exp. Med. 43: 753).

[0017] Atualmente, vários retinóides foram sintetizados. Os domínios principais de utilização permanecem nas indicações dermatológicas tais como as ceratoses actínicas, a acne e de uma maneira geral o tratamento por via tópica ou oral das desordens de ceratinização tais como a psoríase e o mal de Darier.

[0018] Além disso, um certo número de combinações ou de associações com retinóides são conhecidos: - combinações de moléculas que agem na diferenciação celular e a imunomodulação, por exemplo combinação de retinóides e de quimioterapia nos linfomas cutâneos (Thestrup-Petersen et al. Br. J. Dermatol. 118: 811 -818), - combinação de retinóides e de fototerapia por exemplo em associação com os psoralenos (Saurat et al. Dermatológica 177:218-224) - combinação de moléculas que afetam o metabolismo dos retinóides. Ou seja, por exemplo o caso de interação entre os nitrogênios e os derivados da vitamina D que inibem o metabolismo dos retinóides e que permitem aumentar as taxas intracelulares de hormônio ativo (Kato et al. Biochem. J. (1992) 286: 755-760, Jugert et al. Skin Pharmacol. 1998).

[0019] Sabe-se, além disso, que um dos efeitos secundários principais dos retinóides durante uma aplicação tópica permanece a irritação induzida. Este efeito pode ser inibidor à observância do tratamento.

[0020] O retinaldeído (RAL), um membro da família dos retinóides, é um metabólito natural da vitamina A, atualmente utilizado em aplicação tópica no homem. Demonstrou-se que o RAL exerce uma atividade biológica na pele induzindo-se uma hiperplasia epidérmica, assim como um claro aumento da expressão do CD44 e do HA na epiderme folicular e interfolicular dos camundongos C57BL/6 e SKH1 sem pêlos (SKH1 hairless). Esses efeitos foram igualmente observados seguindo a aplicação tópica do ácido retinóico (RA) e do retinol (ROL). Entretanto, a expressão do CD44 e esta do HA foram mais fortemente aumentadas nos camundongos tratados ao RAL que nestes tratados ao RA ou ao ROL.

[0021] O CD44 é uma glicoproteína transmembranar polimórfica que tem várias isoformas geradas pelo emaranhamento alternativo e as modificações pós-traducionais. Em um estudo recente, os requerentes demonstraram que duas funções principais do CD44 na pele de murinos são (i) a regulação da proliferação ceratinocitária em resposta a estímulos extracelulares e (ii) a manutenção da homeostase local do HA (Kaya G., Rodriguez I., Jorcano JL., Vassalli P., Stamenkovic I. Selective suppression of CD44 in keratinocytes of mice bearing na antisense CD44 transgene driven by a tissue-specific promoter disrupts hyaluronate metabolism in the skin and impairs keratinocyte proliferation. Genes & Development. 11(8): 996-1007, 1997). Os requerentes igualmente observaram uma diminuição da expressão do CD44 epidérmico nos pacientes que sofrem de moléstia dartosa esclero-atrófica, que é potencialmente responsável pela deposição dérmica do HA e da atrofia epidérmica nesta doença (Kaya G., Augsburger E., Stamenkovic K., Saurat JH. Decrease in epidermal CD44 expression as a potential mechanism for abnormal hyaluronate accumulation in superficial dermis in lichen sclerosus and atrophicus, Journal of Investigate Dermatology. 115(6): 1054-8, 2000).

[0022] O CD44 está implicado nas interações célula-célula e célula- matriz. Um estudo recente evidenciou que o par formado pelo CD44 e os fragmentos de HA (CD44-HAF) é indutor de mitoses e de neosíntese de HA (Laurent TC, Laurent UB, Fraser JR. The structure and function of hyaluronan: An overview. Immunol Cell Biol 74(2): 1-7,1996). Os efeitos epidérmicos e dérmicos do HA e do RAL parecem então ser mediados pelo CD44.

[0023] Atualmente, existem preparações farmacêuticas e cosméticas que contêm sais inorgânicos do HA de alto peso molecular, notadamente Healon, Hyalgan, Provisc, Vitrax, e estes citados em Martindale The Complete Drug reference, 32a ed., 1999, The Pharmaceutical Press Editor.

[0024] Entretanto, o HA dificilmente passa através da pele sendo seu peso molecular elevado.

[0025] Isto porque, no pedido internacional WO 02/076470 A1, os autores propõem uma composição que associa a N-acetil-glucosamina a um retinóide. Esta combinação permite aumentar de maneira sinérgica a síntese de ácido hialurônico pelas células epidérmicas in vitro. Nenhum resultado obtido após aplicação da formulação in vivo foi mencionado.

[0026] O pedido japonês 11279042 descreve composições a base de fragmentos de ácido hialurônico sulfatado, os ditos fragmentos tendo, de preferência, um peso molecular compreendido entre 1.000 e 50.000 Da, os grupamentos sulfatos ocupando 10 a 90% do conjunto dos substituintes R1, R2, R3 e R4 na fórmula.

Esses fragmentos de baixo peso molecular são bastante ativos para manter a elasticidade da pele e evitar a ceratinização. Ao contrário, fragmentos de ácido hialurônico não sulfatados são revelados inativos no teste.

[0027] Agora, os inventores mostraram de maneira surpreendente que o HA não sulfatado hidrolisado em fragmentos de pesos moleculares compreendidos entre 50.000 e 750.000 Da possuem uma atividade biológica sobre a pele que é amplificada quando esses fragmentos estão associados a um retinóide.

[0028] A presente invenção tem em conseqüência por objeto composições destinadas à aplicação tópica caracterizadas pelo fato de que elas compreendem a título de princípio ativo um ou mais fragmentos de hialuronato de baixo peso molecular compreendido entre 50.000 e 750.000 Da.

[0029] Em um modo de realização preferido da invenção, o peso molecular dos fragmentos de hialuronato está compreendido entre 50.000 e 250.000 Da ou entre 250.000 e 750.000 Da.

[0030] Em um outro modo de realização preferido da invenção, as composições contém, além disso, ao menos um retinóide.

[0031] A combinação de fragmentos de hialuronato de um peso molecular compreendido entre 50.000 e 750.000 Da com um retinóide tem um efeito sinérgico na síntese do ácido hialurônico pelos ceratinócitos.

[0032] No sentido da presente invenção, entende-se por retinóides, o retinol e seus isômeros, o retinal, o ácido retinóico e seus isômeros e os ésteres do ácido retinóico.

[0033] Entende-se por hialuronato não importa qual sal, notadamente o hialuronato de sódio.

[0034] As composições tópicas de acordo com a invenção podem conter igualmente colorantes, óleos silicones, retinóide ou pigmentos colorantes, antisépticos, óleos vegetais, antioxidantes, sais minerais, espessantes, modificadores de pH, agentes absorventes dos raios ultravioletas, vitaminas ou qualquer outro excipiente aceitável em dermatologia e em farmácia.

[0035] As composições de acordo com a invenção podem ser utilizadas em cosmetologia e em dermatologia para prevenir ou melhorar as peles com rugas, as peles secas e permitem manter a firmeza e a umidade da pele.

[0036] As composições de acordo com a invenção podem ser utilizadas nas preparações tópicas, no domínio da dermatologia ou da cosmetologia, no objetivo de prevenir ou tratar as dermatoses associadas a uma atrofia do tecido cutâneo e para os quais será necessário melhorar o estado de hidratação da pele, diminuir a atrofia cutânea, como por exemplo nos efeitos secundários aos tratamentos corticóides, diminuir as rugas, lutar contra o envelhecimento cutâneo fotoinduzido ou não, lançar novamente a atividade celular epidérmica e dérmica, firmar a pele, e aumentar sua elasticidade.

[0037] A invenção é ilustrada pelos exemplos e figuras que seguem.

[0038] A figura 1 representa a quantidade de HA medida na epiderme nos animais não tratados ou animais tratados duas vezes por dia pela preparação 5, a preparação 3 ou a preparação 7 obtidas de acordo com os modos operatórios descritos nos exemplos 1 e 2.

[0039] A figura 2 representa a dosagem do HA na derme nos animais não tratados ou tratados com a preparação 5, 3 ou 7 preparadas tais como nos exemplos 1 e 2.

Exemplo 1: Efeito dos fragmentos de hialuronato utilizados por via tópica 1. MATERIAIS E MÉTODOS 1.1. Preparações [0040] 3 tipos de fragmentos de hialuronato (HAF) foram avaliados: ■ HAF de muito alto peso molecular {1.000.000-2.000.000 Da) ■ HAF de baixo peso molecular (50.000-750.000 Da) - HAF ¢250.000-750.000 Da) - HAF (50.000-250.000 Da) ■ HAF de muito baixo peso molecular (1.000-20.000 Da) [0041] Esses fragmentos foram incluídos nas preparações cosméticas clássicas, cujos dois exemplos de composição são dados na tabela 1 abaixo: 1.2. Medida da atividade dos HAF

[0042] Utilizam-se camundongos SKH1 sem pêlos (SKH1 hairless) a razão de 3 animais por grupo.

[0043] As diferentes preparações são aplicadas por via tópica.

[0044] A espessura dérmica é medida por um ocular graduado (Zeiss); aumentado 40 vezes, faz-se a média de 5 campos por camundongo.

[0045] A celular idade dérmica é avaliada calculando-se o número de células dérmicas, aumentada 40 vezes, faz-se a média de 5 campos por camundongo.

[0046] O número das células proliferativas da epiderme e da derme é evidenciado pela i mu no-marcação de Kí 67 com um anticorpo anti Ki-67 (rato anticamundongos, Dako}.

[0047] A presença do hialuronato na derme é medida após aplicação das diferentes preparações a razão de duas aplicações por dia de acordo com a técnica ELISA (Corgenix) e o hialuronato é evidenciado nos cortes histológicos pela coloração de ferro coloidal.

2. RESULTADOS 2.1. Efeitos na espessura epidérmica, a celuiaridade dérmica e o número de células proliferativas [0048] Os resultados estão reunidos nas tabelas 2 e 3.

[0049] As preparações 2 e 3 formuladas com os HAF de baixo peso molecular de acordo com a invenção e aplicadas por via tópica, aumentam de maneira significativa a espessura epidérmica e a celularidade dérmica no camundongo SKH1 sem pêlos (SKH1 hairless), em relação às preparações 1 e 4 que contêm respectivamente HAF de alto e muito baixo peso molecular (tabela 2). A preparação 3 aumenta também de maneira significativa o número de células proliferativas da epiderme e da derme no camundongo SKH1 sem pêlos (SKH1 hairless), em relação às preparações 1 e 4 (tabela 3).

[0050] A aplicação tópica das preparações 2 e 3 induz uma celularidade aumentada na derme superficial e profunda. As células que são aumentadas em número são principalmente fibroblastos que apresentam um fenótipo de ativação com um retículo endoplásmico bem desenvolvido. 2.2 Efeitos na taxa de HA na derme [0051] Os resultados estão reunidos na tabela 4.

[0052] A presença de HA na derme foi detectada para as preparações 2 e 3 (preparação 3 > preparação 2).

[0053] A taxa de HA não é detectável após aplicação das preparações 1 e 4.

[0054] Assim os inventores mostraram que a aplicação tópica de HAF de baixo peso molecular tem duas conseqüências principais: 1- A hiperplasia epidérmica grande acompanhada por um aumento da proliferação celular. 2- Acumulação focal do HA na derme superficial com um aumento grande do número de fibroblastos.

[0055] conseqüências que não são observadas com os HAF de alto ou de muito baixo peso molecular.

Exemplo 2: Efeito da associação de um retinóide com HAF de baixo peso molecular 1. MATERIAIS E MÉTODOS

[0056] Os fragmentos da tabela 5 estão incluídos nas preparações cosméticas clássicas tais como exemplificadas precedentemente.

2. RESULTADOS

[0057] Eles estão reunidos nas tabelas 6 e 7 e nas figuras 1 e 2. A aplicação tópica das preparações 6 e 7 aumenta o número de regiões de epiderme espessa.

[0058] O efeito da aplicação do RAL sozinho (preparação 5) é comparável ao efeito obtido com a preparação 8 associando-se o HAF de pequeno tamanho molecular com o RAL, prova que não existe sinergia entre RAL e fragmentos de muito baixo peso molecular.

[0059] O efeito sinérgico da associação HAF-RAL é particularmente visível no nível da celularidade dérmica para as preparações 6 e 7 (cf tabela 5).

[0060] A aplicação tópica das preparações 6 e 7 aumenta igualmente a coloração de HA dérmica (preparação 7> preparação 6) (cf tabela 7).

[0061] O efeito sinérgico da associação HAF-RAL foi igualmente evidenciado por dosagem ELISA da presença de HA na derme e a epiderme dos camundongos que foram tratados pelas diferentes preparações mencionadas acima.

[0062] Os resultados mostram um aumento significativo da produção de HA tanto na derme (figura 2) quanto na epiderme (figura 1) após tratamento pela associação HAF-RAL (preparação 7) comparativamente ao tratamento por RAL sozinho (preparação 5) ou HAF sozinho (preparação 3).

REIVINDICAÇÕES

Claims (4)

1. Composições destinadas à aplicação tópica caracterizada pelo fato de que elas compreendem a título de princípio ativo 0*2-1 % por peso de um ou mais fragmentos de híaluronato cujo peso molecular está compreendido entre 50.000 e 750.000 Da em que, contêm, além disso, 0,05% por peso de retinal.

2. Composições, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo fato de que o peso molecular dos fragmentos de híaluronato está compreendido entre 50.000 e 250.000 Da ou entre 250.000 e 750.000 Da.

3. Utilização de uma composição, tal como definida em qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizada pelo fato de ser usada em cosmetologia de forma a manter ou melhorar a firmeza da pele, para manter ou melhorar o teor de umidade da pele, para prevenir ou reduzir rugas, para prevenir ou melhorar peles secas, para combater envelhecimento cutâneo fotoinduzido ou não, lançar novamente a atividade celular epidérmica e dérmica, firmar a pele, e aumentar sua elasticidade.

4. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizada pelo fato de ser um medicamento utilizável em dermatologia, para prevenir ou tratar as dermatoses associadas a uma atrofia do tecido cutâneo e para reduzir a atrofia cutânea, tal como nos efeitos secundários aos tratamentos corticoides.