BR112021014102A2

BR112021014102A2 - Moléculas de ligação a lilrb3 e usos das mesmas

Info

Publication number: BR112021014102A2
Application number: BR112021014102-2A
Authority: BR
Inventors: Richard Brokx; Jacqueline M. Mason; Mark R. Bray
Original assignee: University Health Network
Priority date: 2019-01-18
Filing date: 2020-01-16
Publication date: 2021-09-21
Also published as: US20220089723A1; CN113454123A; EP3911680A1; SG11202107663UA; EP3911680A4; AU2020209367A1; MX2021008507A; KR20210118116A; TW202031685A; EA202192008A1; WO2020146946A1; JP2022517809A; IL284781A; CA3126295A1

Abstract

moléculas de ligação a lilrb3 e usos das mesmas. a invenção fornece novos anticorpos anti-lilrb3, composições farmacêuticas compreendendo tais anticorpos e métodos terapêuticos para usar tais anticorpos e composições farmacêuticas para o tratamento de doenças, tal como câncer, doença autoimune ou inflamação alérgica. esta invenção também pode ser usada para modular diferenciação de osteoclasto.

Description

MOLÉCULAS DE LIGAÇÃO A LILRB3 E USOS DAS MESMAS

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDO RELACIONADO

[001] O presente pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido Provisório US 62/794.064, depositado em 18 de janeiro de 2019, cujo conteúdo é expressamente incorporado neste documento em sua totalidade para todos os fins.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[002] O presente pedido contém uma Listagem de Sequências a qual foi apresentada eletronicamente em formato ASCII e é por meio deste incorporada por referência em sua totalidade. A referida cópia ASCII, criada em 15 de janeiro de 2020, é denominada 011506-5022_ST25.txt e é de 72 kilobytes de tamanho.

CAMPO TÉCNICO

[003] A presente divulgação se refere a anticorpos que ligam especificamente a LILRB3, por exemplo, LILRB3 humano (hLILRB3) e composições farmacêuticas compreendendo tais anticorpos de ligação a LILRB3 dos mesmos. Métodos de uso dos anticorpos da invenção para detectar LILRB3 humano ou para modular atividade de LILRB3 humano no tratamento de várias doenças, incluindo doenças inflamatórias, doenças autoimunes e câncer, também são abrangidos pela invenção.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[004] A família do receptor tipo Ig de leucócito humano (LILR) pertence à superfamília de receptores emparelhados que têm o potencial para transmitir sinais estimuladores ou inibidores de acordo com a presença ou ausência de motifs de sinalização baseados em tirosina em sua cauda citoplasmática. LILRs humanos consistem em cinco receptores estimuladores (LILRA1-5), seis receptores inibitórios (LILRB1-6) e dois pseudogenes. LILRs são expressos em várias células, tal como células linfoides e mieloides, e os padrões de expressão são diferentes de receptor para receptor. Polimorfismo e variação de número de cópias contribuem para diversidade dentroi de humanos. Em geral, atividade de LILR pode resultar na suprarregulação ou infrarregulação de ambas as funções imunes inatas e adaptativas com uma faixa de efeitos em diferentes tipos de células. Estudos recentes concluíram que vários membros da família LILRB são expressos por células de câncer, em particular células de câncer hematopoiéticas, e podem suportar desenvolvimento e recidiva do câncer, bem como a atividade das células tronco de câncer.

[005] LILRB3 humano (também denominado CD85A, ILT5, LIR3 ou HL9) contém 4 domínios de imunoglobulina extracelular, um domínio transmembrana e 4 motifs de inibição à base de tirosina de imunorreceptor citoplasmático (ITIMs). Expressão de LILRB3 foi relatada em monócitos, osteoclastos derivados de monócitos, granulócitos, células dendríticas, osteoclastos e mastócitos progenitores. O ligando para LILRB3 não foi identificado e pouco se sabe sobre a função de LILRB3. Coletivamente, essas conclusões sugerem que o desenvolvimento de agentes úteis em modulação de sinalização de LILRB3 seria de grande benefício em doenças envolvendo desregulação do sistema imune, incluindo doenças inflamatórias, doenças autoimunes e câncer.

SUMARIO DA INVENÇÃO

[006] Em um aspecto, a presente invenção se refere a novos anticorpos anti-LILRB3. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:1 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:2. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:3 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ

ID NO:4. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:5 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:6. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:7 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:8. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:9 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:10. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:11 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:12. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:13 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:14. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:15 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:16. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:17 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:18. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:19 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:20. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:21 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:22. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:23 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:24. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:25 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO:26.

[007] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 inclui uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 27, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 28, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 29, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 30, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 31 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 32. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 33, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 34, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 35, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 36, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 37 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 38. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 39, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 40, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 41, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 42, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 43 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 44. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO:45, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO:46, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO:47, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 48, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO:49 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO:50. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 51, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 52, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 53, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 54, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 55 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 56. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LIBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 57, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 58, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 59, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 60, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 61 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 62. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 63, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 64, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 65, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 66, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 67 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 68. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 69, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 70, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 71, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 72, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 73 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 75, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 76, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 77, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 78, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 79 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 80. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 81, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 82, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 83, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 84, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 85 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 86. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO:87, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO:88, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO:89, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO:90, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO:91 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO:92. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO:93, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO:94, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO:95, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO:96, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO:97 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO:98. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO:99, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO:100, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO:101, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO:102, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO:103 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO:104.

[008] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 aqui descritos ligam LILRB3 humano.

[009] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a uma composição de ácido nucleico codificando qualquer um dos anticorpos anti-LILRB3 aqui descritos.

[010] Outro aspecto da presente invenção se refere a uma composição de vetor de expressão que inclui qualquer uma das composições de ácido nucleico aqui descritas. Em algumas modalidades, o primeiro ácido nucleico está contido em um primeiro vetor de expressão e o segundo ácido nucleico está contido em um segundo vetor de expressão. Em algumas outras modalidades, o primeiro ácido nucleico e o segundo ácido nucleico estão contidos em um único vetor de expressão.

[011] Outro aspecto da presente invenção se refere a uma célula hospedeira que inclui qualquer um dos vetores de expressão aqui descritos. Também é apresentado um método para fazer anticorpos anti-LILRB3 e o método inclui cultivar a célula hospedeira sob condições em que os anticorpos expressaram e recuperação dos anticorpos.

[012] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a uma composição que inclui qualquer um dos anticorpos anti-LILRB3 descritos neste documento e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.

[013] Também é descrito um método para modular uma resposta imune em um sujeito e o método inclui administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de qualquer um dos anticorpos anti-LILRB3 aqui descritos, ou qualquer uma das composições aqui descritas. Em algumas modalidades, o método inclui administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-LILRB3 que serve como um antagonista de LILRB3 ou uma composição farmacêutica do mesmo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-LILRB3 que serve como um agonista de LILRB3, ou uma composição farmacêutica do mesmo.

[014] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a um método para tratar câncer em um sujeito, e o método inclui administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-LILRB3 aqui descrito ou qualquer uma das composições aqui descritas. Em algumas modalidades, o câncer a ser tratado suprarregula LILRB3 em comparação com o tecido não canceroso correspondente. Em algumas modalidades, o sujeito a ser tratado expressa um alto nível de LILRB3 em células hematopoiéticas. O câncer a ser tratado pode ser qualquer câncer. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB3 é usado em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais para tratar o câncer. Em algumas modalidades, esses agentes terapêuticos anticâncer são outros inibidores de ponto de verificação imune, tal como Ipilimumabe, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe e Atezolizumabe.

[015] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a um método para tratar doença autoimune em um sujeito, e o método inclui administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de qualquer um dos anticorpos anti-LILRB3 aqui descritos ou qualquer uma das composições aqui descritas.

[016] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a um método para tratar uma doença autoimune em um sujeito, e o método inclui administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-LILRB3 aqui descrito ou qualquer uma das composições aqui descritas.

[017] Em um aspecto adicional, a presente invenção se refere a um método para tratar informação alérgica em um sujeito, e o método inclui administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de qualquer um dos anticorpos anti-LILRB3 aqui descritos ou qualquer uma das composições aqui descritas.

[018] Em um aspecto adicional, a presente invenção se refere a um método para modular diferenciação de osteoclasto em um sujeito, e o método inclui administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de qualquer um dos anticorpos anti-LILRB3 aqui descritos ou qualquer uma das composições aqui descritas.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[019] A invenção pode ser mais bem compreendida a partir da seguinte descrição detalhada quando lida em conjunto com os desenhos anexos. Incluídos nos desenhos estão as seguintes figuras:

[020] FIGURA 1A e FIGURA 1B mostram a expressão de superfície de LILBR3 em vários subconjuntos hematopoiéticos usando citometria de fluxo.

[021] FIGURA 2 mostra o efeito de anticorpos LILRB3 ou proteína LILRB3- Fc em responsividade de células T em reações de linfócitos mistos primários

(MLR).

[022] FIGURA 3 mostra a capacidade de PBMCs regularem expressão de superfície de marcadores de ativação em resposta à estimulação de célula T após incubação com o anticorpo LILRB3 7C5.

[023] FIGURA 4 mostra o efeito do anticorpo LILRB3 7C5 em produção de citocina por PBMCs em resposta à estimulação de célula T.

[024] FIGURA 5 mostra a liberação de citocina de sangue não estimulado quando incubado com o anticorpo LILRB3 7C5.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[025] A presente divulgação fornece novos anticorpos anti-LILRB3. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 agem para modular uma resposta imune em um sujeito e, por exemplo, tratar câncer ou uma doença autoimune. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 agem para tratar inflamação alérgica. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 modulam diferenciação de osteoclasto.

[026] Para facilitar uma compreensão da presente invenção, uma série de termos e frases são definidos abaixo.

[027] Conforme usado neste documento, cada um dos termos a seguir tem o significado associado a ele nesta seção.

[028] Os artigos "um" e "uma" são usados para se referir a um ou mais de um (isto é, a pelo menos um) do objeto gramatical do artigo. A título de exemplo, "um elemento" significa um elemento ou mais de um elemento.

[029] “Cerca de", conforme usado neste documento, quando se referindo a um valor mensurável, tal como uma quantidade, uma duração temporal e semelhantes, se destina a abranger variações de ±20% ou ±10%, mais preferivelmente ±5%, ainda mais preferivelmente ±1%, e ainda mais preferivelmente ±0,1% do valor especificado, pois tais variações são apropriadas para realizar os métodos divulgados.

[030] Por “domínio de ligação a antígeno” ou “ABD”, no presente documento, significa um conjunto de seis Regiões Determinantes de Complementaridade (CDRs) que, quando presentes como parte de uma sequência de polipeptídeo, ligam especificamente a um antígeno alvo, conforme discutido no presente documento. Assim, um "domínio de ligação de antígeno" liga um antígeno alvo conforme descrito neste documento. Conforme conhecido na técnica, essas CDRs estão geralmente presentes como um primeiro conjunto de CDRs pesadas variáveis (vhCDRs ou VHCDRs ou CDR-HC) e um segundo conjunto de CDRs leves variáveis (vlCDRs ou VLCDRs ou CDR-LC), cada uma compreendendo três CDRs: vhCDR1, vhCDR2, vhCDR3 para a cadeia pesada e vlCDR1, vlCDR2 e vlCDR3 para a cadeia leve. As CDRs estão presentes nos domínios leve variável e pesado variável, respectivamente, e juntos formam uma região Fv. Desse modo, em alguns casos, as seis CDRs do domínio de ligação a antígeno são contribuídas por uma cadeia pesada variável e leve variável. Em um formato “Fab”, o conjunto de 6 CDRs é disponibilizado por duas sequências polipeptídicas diferentes, o domínio variável pesado (vh ou VH; que contém o vhCDR1, vhCDR2 e vhCDR3) e o domínio variável da luz (vl ou VL; que contém o vlCDR1, vlCDR2 e vlCDR3), sendo que o terminal C do domínio vh é fixado ao terminal N do domínio CH1 da cadeia pesada e o terminal C do domínio vl é fixado ao terminal N do domínio leve constante (e, formando, assim, a cadeia leve). Em um formato scFv, os domínios VH e VL são covalentemente fixados, de modo geral, através do uso de um ligante, conforme delineado no presente documento, em uma sequência de polipeptídeo simples que pode ser qualquer de (começando do N terminal) vh-ligante-vl ou vl-ligante-vh, com o primeiro sendo geralmente preferido (incluindo ligantes de domínio opcionais em cada lado, dependendo do formado usado. Como é entendido na técnica, as CDRs são separadas por regiões framework em cada um dos domínios variável pesado e variável leve: para a região variável leve, estas são FR1-vlCDR1-FR2-vlCDR2- FR3-vlCDR3-FR4 e para a região variável pesada, estas são FR1-vhCDR1-FR2- vhCDR2-FR3-vhCDR3-FR4, com as regiões framework mostrando alta identidade com sequências de linha germinativa humana. Domínios de ligação de antígeno da invenção incluem Fab, Fv e scFv.

[031] O termo "anticorpo" é usado no sentido mais amplo e inclui, por exemplo, uma imunoglobulina intacta ou uma porção de ligação de antígeno. Porções de ligação de antígeno podem ser produzidas por técnicas de DNA recombinante ou por clivagem enzimática ou química de anticorpos intactos. Assim, o termo anticorpo inclui anticorpos tetraméricos tradicionais de duas cadeias pesadas e duas cadeias leves, bem como fragmentos de ligação de antígeno, tal como Fv, Fab e scFvs. Em alguns casos, a invenção fornece anticorpos biespecíficos que incluem pelo menos um domínio de ligação de antígeno conforme delineado neste documento.

[032] Por "modificação" queremos dizer no presente documento uma substituição, inserção e/ou deleção de aminoácido em uma sequência de polipeptídeo ou uma alteração em uma fração quimicamente ligada a uma proteína. Por exemplo, uma modificação pode ser uma estrutura de PEG ou de carboidrato alterada ligada a uma proteína. Por "modificação de aminoácidos" entende-se, no presente documento, uma substituição, inserção e/ou deleção de aminoácidos em uma sequência polipeptídica. Para maior clareza, a menos que observado de outra forma, a modificação de aminoácido é sempre em um aminoácido codificado pelo DNA, por exemplo, os 20 aminoácidos que têm códons no DNA e RNA.

[033] Por "substituição de aminoácido" ou "substituição" entende-se, no presente documento, a troca de um aminoácido em uma posição particular em uma sequência polipeptídica parental por um aminoácido diferente. Em particular, em algumas modalidades, a substituição é de um aminoácido que não ocorre naturalmente na posição particular ou que não ocorre naturalmente dentro do organismo ou em qualquer organismo. Por exemplo, a substituição de M252Y se refere a um polipeptídeo variante, neste caso, uma variante Fc, no qual a metionina na posição 252 é substituída por tirosina. A título de esclarecimento, uma proteína que foi geneticamente modificada para alterar a sequência de codificação do ácido nucleico, mas para não alterar o aminoácido inicial (por exemplo, trocar CGG (que codifica a arginina) por CGA (que ainda codifica a arginina) a fim de aumentar os níveis de expressão do organismo hospedeiro) não é uma “substituição de aminoácido”; ou seja, apesar da criação de um novo gene que codifica a mesma proteína, caso a proteína tenha o mesmo aminoácido na posição específica com a qual a mesma começou, isso não é uma substituição de aminoácido.

[034] Por "proteína variante" ou "variante de proteína", ou "variante”, conforme usado no presente documento, entende-se uma proteína que é diferente da proteína parental devido a pelo menos uma modificação de aminoácido. A variante de proteína pode se referir à própria proteína, uma composição que compreende a proteína ou a sequência amino que codifica a mesma. De preferência, a variante de proteína tem pelo menos uma modificação de aminoácido em comparação com uma proteína parental, por exemplo, de cerca de uma a cerca de setenta modificações de aminoácidos e, de preferência, de cerca de uma a cerca de cinco modificações de aminoácidos em comparação com a parental. Conforme descrito abaixo, em algumas modalidades, o polipeptídeo parental, por exemplo, um polipeptídeo parental Fc, é uma sequência do tipo selvagem humana, tal como a região Fc de IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4. A sequência de variante de proteína terá, no presente documento,

preferencialmente, pelo menos cerca de 80% de identidade com uma sequência de proteínas parentais e, com máxima preferência, pelo menos cerca de 90% de identidade, com mais preferência pelo menos cerca de 95%-98%-99% de identidade. A proteína variante pode se referir à própria proteína variante, a composições que compreendem a variante de proteína ou à sequência de DNA que codifica a mesma.

[035] Consequentemente, por "variante de anticorpo" ou "anticorpo variante”, conforme usado no presente documento, entende-se um anticorpo que é diferente de um anticorpo parental devido a pelo menos uma modificação de aminoácidos, "variante de IgG" ou "IgG variante”, conforme usado no presente documento, significa um anticorpo que é diferente de uma IgG parental (novamente, em muitos casos, de uma sequência de IgG humana) devido a pelo menos uma modificação de aminoácido, e "variante de imunoglobulina" ou “imunoglobulina variante”, conforme usado no presente documento, significa uma sequência de imunoglobulina que é diferente de uma sequência de imunoglobulina parental devido a pelo menos uma modificação de aminoácido. "Variante de Fc" ou “Fc variante", conforme usado no presente documento, significa uma proteína que compreende uma modificação de aminoácido em um domínio Fc. As variantes de Fc da presente invenção são definidas de acordo com as modificações de aminoácidos que compõem as mesmas. Assim, por exemplo, M252Y ou 252Y é uma variante de Fc com a tirosina de substituição na posição 252 em relação ao polipeptídeo Fc parental, em que a numeração está de acordo com o índice EU. Do mesmo modo, M252Y/S254T/T256E define uma variante de Fc com as substituições M252Y, S254T e T256E em relação ao polipeptídeo Fc parental. A identidade do aminoácido tipo selvagem pode não ser especificada, em cujo caso a variante mencionada acima é denominada como 252Y/254T/256E. Nota-se que a ordem na qual substituições são fornecidas é arbitrária, o que quer dizer, por exemplo, 252Y/254T/256E é a mesma variante de Fc que 254T/252Y/256E, e assim por diante. Para todas as posições discutidas na presente invenção que se referem a anticorpos, a menos que de outro modo observado, a numeração de posição de aminoácido está de acordo com Kabat para a numeração de região variável e está de acordo com o índice EU para as regiões constantes, incluindo a região de Fc. O índice EU ou índice EU, conforme em Kabat ou esquema de numeração EU, se refere à numeração do anticorpo EU (Edelman et al., 1969, Proc Natl Acad Sci EUA 63:78-85, incorporado a título de referência ao presente documento). A modificação pode ser uma adição, deleção ou substituição. As substituições podem incluir aminoácidos de ocorrência natural e, em alguns casos, aminoácidos sintéticos.

[036] Conforme usado no presente documento, "proteína" significa, no presente documento, pelo menos dois aminoácidos covalentemente ligados, que incluem proteínas, polipeptídeos, oligopeptídeos e peptídeos. O grupo peptidil pode compreender aminoácidos ocorrendo naturalmente e ligações de peptídeo.

[037] Por "Fab" ou "região Fab”, conforme usado no presente documento, entende-se o polipeptídeo que compreende os domínios de imunoglobulina VH, CH1, VL e CL. Fab pode se referir a essa região em isolamento, ou essa região no contexto de um anticorpo de comprimento completo, fragmento de anticorpo ou proteína de fusão Fab. Por "Fv" ou “fragmento Fv" ou "região Fv”, conforme usado no presente documento, queremos dizer um polipeptídeo que compreende os domínios VL e VH de um domínio de ligação de antígeno simples (ABD). Conforme será observado por aqueles versados na técnica, esses são, de modo geral, compostos a partir de duas cadeias, ou podem ser combinados (de modo geral, com um ligante, conforme discutido no presente documento) para formar um scFv.

[038] Por “aminoácido" e "identidade de aminoácido”, conforme usado no presente documento, entende-se um dos 20 aminoácidos de ocorrência natural que são codificados por DNA e RNA.

[039] Por "polipeptídeo parental", conforme usado no presente documento, entende-se um polipeptídeo de partida que é subsequentemente modificado para gerar uma variante. O polipeptídeo parental pode ser um polipeptídeo de ocorrência natural, ou uma versão variante ou modificada de um polipeptídeo de ocorrência natural. O polipeptídeo parental pode se referir ao próprio polipeptídeo, às composições que compreendem o polipeptídeo parental ou à sequência de aminoácidos que codifica o mesmo. Consequentemente, por "imunoglobulina parental”, conforme usado no presente documento, entende-se um polipeptídeo de imunoglobulina não modificado que é modificado para gerar uma variante e por "anticorpo parental”, conforme usado no presente documento, entende-se um anticorpo não modificado que é modificado para gerar um anticorpo variante. Deve-se observar que "anticorpo parental" inclui anticorpos comerciais conhecidos produzidos de maneira recombinante, comerciais conhecidos, conforme delineado abaixo.

[040] Por "região constante pesada" queremos dizer a porção CH1- dobradiça-CH2-CH3 de um anticorpo, geralmente de IgG1, IgG2 ou IgG4 humana.

[041] Por “antígeno alvo”, conforme usado no presente documento, queremos dizer a molécula que é ligada especificamente pela região variável de um dado anticorpo. No presente caso, o antígeno alvo é uma proteína LILRB3.

[042] Por “célula alvo”, conforme usado no presente documento, queremos dizer uma célula que expressa um antígeno alvo.

[043] Por "região variável", conforme usado no presente documento,

queremos dizer a região de uma imunoglobulina que compreende um ou mais domínios Ig substancialmente codificados por qualquer dos genes V.capa, V.lamda e/ou VH que compõem os loci genéticos de imunoglobulina capa, lambda e de cadeia pesada, respectivamente.

[044] Por “do tipo selvagem ou WT" entende-se, no presente documento, uma sequência de aminoácidos ou uma sequência de nucleotídeos que é encontrada na natureza, incluindo variações alélicas. Uma proteína WT tem uma sequência de aminoácidos ou uma sequência de nucleotídeos que não foi modificada intencionalmente.

[045] Por "posição”, conforme usado no presente documento, queremos dizer uma localização na sequência de uma proteína. As posições podem ser numeradas sequencialmente ou de acordo com um formato estabelecido, por exemplo, o índice EU para numeração de anticorpo.

[046] Por "resíduo", conforme usado no presente documento, queremos dizer uma posição em uma proteína e sua identidade de aminoácido associada. Por exemplo, Asparagina 297 (também denominada Asn297 ou N297) é um resíduo na posição 297 na seqüência de proteína.

[047] Os anticorpos da presente invenção são geralmente recombinantes. "Recombinante" significa que os anticorpos são gerados usando técnicas de ácido nucleico recombinante em células hospedeiras exógenas.

[048] "Percentagem (%) de identidade de sequências de aminoácidos" com relação a uma sequência de proteínas é definida como a porcentagem de resíduos de aminoácido em uma sequência candidata que são idênticos aos resíduos de aminoácido na sequências específica (parental), após alinhar as sequências e introduzir lacunas, caso necessário, para alcançar a identidade de sequência de porcentagem máxima e sem considerar quaisquer substituições conservadoras como parte da identidade de sequência. Alinhamento para fins de determinação da porcentagem de identidade de sequência de aminoácidos pode ser obtido de várias maneiras que estão dentro da habilidade na técnica, por exemplo, com o uso do software de computador disponível publicamente, tal como o software BLAST, BLAST-2, ALIGN ou Megalign (DNASTAR). Aqueles versados na técnica podem determinar parâmetros apropriados para medir o alinhamento, que inclui quaisquer algoritmos necessários para alcançar o alinhamento máximo ao longo de todo o comprimento das sequências que são comparadas. Um programa particular é o programa ALIGN-2 descrito nos parágrafos [0279] a [0280] da Publicação US 20160244525, incorporado no presente documento a título de referência. Outro alinhamento aproximado para sequências de ácido nucleico é fornecido pelo algoritmo de homologia local de Smith e Waterman, Advances in Applied Mathematics, 2:482-489 (1981). Este algoritmo pode ser aplicado a sequências de aminoácidos usando a matriz de pontuação desenvolvida por Dayhoff, Atlas of Protein Sequences and Structure, M.O. Dayhoff ed., 5 supl. 3:353-358, National Biomedical Research Foundation, Washington, D.C., USA, e normalizado por Gribskov, Nucl. Acids Res. 14(6):6745- 6763 (1986).

[049] Um exemplo de uma implementação deste algoritmo para determinar a porcentagem de identidade de uma sequência é fornecido pelo Genetics Computer Group (Madison, WI) no aplicativo utilitário “BestFit”. Os parâmetros default para este método são descritos no Wisconsin Sequence Analysis Package Program Manual, Versão 8 (1995) (disponível de Genetics Computer Group, Madison, WI). Outro método para estabelecer porcentagem de identidade no contexto da presente invenção é usar o pacote MPSRCH de programas com direitos autorais da Universidade de Edimburgo, desenvolvido por John F. Collins e Shane S. Sturrok e distribuído por IntelliGenetics, Inc. (Mountain View, CA). A partir deste conjunto de pacotes, o algoritmo Smith-

Waterman pode ser empregado onde parâmetros default são usados para a tabela de pontuação (por exemplo, penalidade de gap aberto de 12, penalidade de extensão de gap de um e um gap de seis). A partir dos dados gerados, o valor "Match" reflete a "identidade de sequência". Outros programas adequados para calcular a porcentagem de identidade ou similaridade entre sequências são geralmente conhecidos na técnica, por exemplo, outro programa de alinhamento é BLAST, usado com parâmetros default. Por exemplo, BLASTN e BLASTP podem ser usados usando os seguintes parâmetros default: código genético = padrão; filtro = nenhum; fita = ambos; corte = 60; esperar = 10; Matriz = BLOSUM62; Descrições = 50 sequências; classificar por = HIGH SCORE; Bases de dados = não redundante, GenBank + EMBL + DDBJ + PDB + traduções GenBank CDS + proteína Swiss + Spupdate + PIR. Detalhes desses programas podem ser encontrados no endereço de Internet localizado colocando http:// in front of blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi.

[050] O grau de identidade entre uma sequência de aminoácidos da presente invenção ("sequência de invenção") e a sequência de aminoácidos parentais é calculada como o número de correspondências exatas em um alinhamento das duas sequências, dividido pelo comprimento da "sequência de invenção” ou o comprimento da sequência parental, o que for mais curto. O resultado é expresso em porcentagem de identidade.

[051] Em algumas modalidades, duas ou mais sequências de aminoácidos são pelo menos 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% idênticas. Em algumas modalidades, duas ou mais sequências de aminoácidos são pelo menos 95%, 97%, 98%, 99% ou mesmo 100% idênticas.

[052] “Ligação específica” ou “se liga especificamente a” ou é “específica para” um antígeno ou um epítopo particular significa a ligação que é diferente de maneira mensurável de uma interação não específica. A ligação específica pode ser medida, por exemplo, determinando-se a ligação de uma molécula em comparação à ligação de uma molécula de controle, que geralmente é uma molécula de estrutura semelhante que não tem atividade de ligação. Por exemplo, a ligação específica pode ser determinada pela competição com uma molécula de controle que é semelhante ao alvo.

[053] O termo "Kassoc" ou "Ka", conforme usado neste documento, se destina a se referir à taxa de associação de uma interação anticorpo-antígeno particular, enquanto o termo "Kdis" ou "Kd", conforme usado neste documento, se destina a se referir à taxa de dissociação de uma interação particular anticorpo-antígeno. O termo "KD", como aqui utilizado, se destina a se referir à constante de dissociação, que é obtida a partir da razão de Kd para Ka (isto é, Kd/Ka) e é expressa como uma concentração molar (M). Os valores de KD para anticorpos podem ser determinados usando métodos bem estabelecidos na técnica. Em algumas modalidades, o método para determinar a KD de um anticorpo é usando ressonância de plásmon de superfície, por exemplo, usando um sistema biossensor, tal como um sistema BIACORE®. Em algumas modalidades, a KD de um anticorpo é determinada por Interferometria de Bio- Camada. Em algumas modalidades, o valor de KD é medido com o imobilizado. Em outras modalidades, o valor KD é medido com o anticorpo (por exemplo, anticorpo de camundongo parental, anticorpo quimérico ou variantes de anticorpos humanizados) imobilizado. Em certas modalidades, o valor de KD é medido em um modo de ligação bivalente. Em outras modalidades, o valor de KD é medido em um modo de ligação monovalente.

[054] Uma "doença" inclui um estado de saúde de um animal, incluindo um humano, em que o animal não pode manter homeostase e em que se a doença não for melhorada, então, a saúde do animal continua a deteriorar.

[055] Em contraste, um "distúrbio" em um animal, incluindo um humano,

inclui um estado de saúde no qual o animal é capaz de manter homeostase, mas no qual o estado de saúde do animal é menos favorável do que seria na ausência do distúrbio. Se não tratada, uma doença não causa necessariamente uma diminuição adicional do estado de saúde do animal.

[056] Os termos "tratamento", "tratando", "tratar" e semelhantes se referem à obtenção de um efeito farmacológico e/ou fisiológico desejado. O efeito pode ser profilático em termos de prevenir completamente ou parcialmente uma doença ou um sintoma da mesma ou reduzir a probabilidade de uma doença ou um sintoma da mesma e/ou pode ser terapêutico em termos de uma cura parcial ou completa para uma doença e/ou efeito adverso atribuível à doença. "Tratamento", tal como aqui utilizado, cobre qualquer tratamento de uma doença em um mamífero, particularmente em um ser humano, e inclui: (a) prevenir a ocorrência da doença em um sujeito que pode estar predisposto à doença, mas ainda não foi diagnosticado como tendo a mesma; (b) inibir a doença, ou seja, interromper seu desenvolvimento ou progressão; e (c) aliviar a doença, ou seja, causar a regressão da doença e/ou aliviar um ou mais sintomas da doença. "Tratamento" também se destina a abranger a entrega de um agente a fim de fornecer um efeito farmacológico, mesmo na ausência de uma doença ou condição. Por exemplo, "tratamento" abrange a entrega de uma composição que pode desencadear uma resposta imune ou conferir imunidade na ausência de uma condição de doença, por exemplo, no caso de uma vacina.

[057] Como aqui utilizado, o termo "mamífero" se refere a qualquer mamífero incluindo, mas não se limitando a, mamíferos da ordem Rodentia, tal como camundongos e hamsters, e mamíferos da ordem Logomorpha, tal como coelhos. Em algumas modalidades, os mamíferos são da ordem Carnivora, incluindo felinos (gatos) e caninos (cães). Em algumas modalidades, os mamíferos são da ordem Artiodactyla, incluindo bovinos (vacas) e suínos

(porcos) ou da ordem Perssodactyla, incluindo Equinos (cavalos). É mais preferido que os mamíferos sejam da ordem dos Primatas, Ceboides ou Simoides (macacos) ou da ordem Antrópodes (humanos e macacos). Em algumas modalidades, o mamífero é um humano. Em algumas modalidades, o mamífero é macaco cynomolgus.

[058] O termo "regressão", bem como as palavras decorrentes do mesmo, como aqui utilizadas, não implica necessariamente 100% ou regressão completa. Em vez disso, existem vários graus de regressão dos quais um especialista na técnica reconhece como tendo um benefício potencial ou efeito terapêutico. A este respeito, os métodos divulgados podem fornecer qualquer quantidade de qualquer nível de regressão de um câncer em um mamífero. Além disso, a regressão fornecida pelo método inventivo pode incluir regressão de uma ou mais condições ou sintomas da doença, por exemplo, um câncer. Além disso, para os propósitos deste documento, "regressão" pode abranger retardar o início da doença, retardar o início de um sintoma e/ou retardar o início de uma condição da mesma. Com relação a doenças e distúrbios progressivos, "regressão" pode abranger retardamento da progressão da doença ou do distúrbio, desacelerando a progressão de um sintoma da doença ou do distúrbio e/ou desacelrando a progressão de uma condição do mesmo.

[059] Uma "quantidade eficaz" ou "quantidade terapeuticamente eficaz" de uma composição inclui aquela quantidade da composição que é suficiente para fornecer um efeito benéfico ao sujeito ao qual a composição é administrada. Uma "quantidade eficaz" de um veículo de distribuição inclui aquela quantidade suficiente para ligar ou distribuir efetivamente uma composição.

[060] Por "indivíduo" ou "hospedeiro" ou "sujeito" ou "paciente" queremos dizer qualquer sujeito mamífero para o qual diagnóstico, tratamento ou terapia é desejado, particularmente humanos. Outros sujeitos podem incluir macaco cynomolgus, gado, cães, gatos, porquinhos-da-índia, coelhos, ratos, camundongos, cavalos e assim por diante.

[061] O termo "em combinação com", como aqui utilizado, se refere a usos onde, por exemplo, uma primeira terapia é administrada durante todo o curso de administração de uma segunda terapia; onde a primeira terapia é administrada por um período de tempo que se sobrepõe à administração da segunda terapia, por exemplo, onde a administração da primeira terapia começa antes da administração da segunda terapia e a administração da primeira terapia termina antes de a administração da segunda terapia terminar; onde a administração da segunda terapia começa antes da administração da primeira terapia e a administração da segunda terapia termina antes de a administração da primeira terapia terminar; onde a administração da primeira terapia começa antes de a administração da segunda terapia começar e a administração da segunda terapia termina antes de a administração da primeira terapia terminar; onde a administração da segunda terapia começa antes de a administração da primeira terapia começar e a administração da primeira terapia termina antes de a administração da segunda terapia terminar. Como tal, "em combinação" também pode se referir a regime envolvendo administração de duas ou mais terapias. "Em combinação com", como aqui utilizado, também se refere à administração de duas ou mais terapias que podem ser administradas nas mesmas ou em formulações diferentes, pelas mesmas ou por rotas diferentes, e no mesmo ou em tipo de forma de dosagem diferente.

[062] O termo "inflamação alérgica", como aqui utilizado, se refere a uma reação de hipersensibilidade local ou geral a pelo menos um alérgeno particular. Sintomas de “inflamação alérgica” podem variar grandemente em efeitos e intensidade.

[063] “Codificação” inclui a propriedade inerente de sequências específicas de nucleotídeos em um polinucleotídeo, tal como um gene, um cDNA ou um mRNA, para servir de modelo para síntese de outros polímeros e macromoléculas em processos biológicos tendo qualquer de uma sequência definida de nucleotídeos (isto é, rRNA, tRNA e mRNA) ou uma sequência definida de aminoácidos e as propriedades biológicas resultantes das mesmas. Assim, um gene codifica uma proteína se, por exemplo, transcrição e tradução de mRNA correspondente a esse gene produzirem a proteína em uma célula ou outro sistema biológico. Tanto a fita de codificação, cuja sequência de nucleotídeo é idêntica à sequência de mRNA e geralmente é fornecida em listagens de sequências, quanto a fita de não codificação, usada como o modelo para transcrição de um gene ou cDNA, podem ser denominadas como codificando a proteína ou outro produto desse gene ou cDNA.

[064] O termo "ácido nucleico" inclui moléculas de RNA ou DNA tendo mais de um nucleotídeo em qualquer forma, incluindo oligonucleotídeo ou polinucleotídeo de fita simples, fita dupla. O termo "sequência de nucleotídeo" inclui a ordenação de nucleotídeos em um oligonucleotídeo ou polinucleotídeo em uma forma de fita simples de ácido nucleico.

[065] Por “construto de ácido nucleico" queremos dizer uma sequência de ácido nucleico que foi construída para compreender uma ou mais unidades funcionais não encontradas juntas na natureza. Exemplos incluem moléculas de DNA extracromossômicas circulares, lineares, de fita dupla (plasmídeos), cosmídeos (plasmídeos contendo sequências COS do fago lambda), genomas virais incluindo sequências de ácido nucleico não nativas e semelhantes.

[066] O termo “operavelmente ligado", como aqui utilizado, inclui um polinucleotídeo em relação funcional com um segundo polinucleotídeo, por exemplo, uma fração de ácido nucleico de fita simples ou fita dupla compreendendo os dois polinucleotídeos dispostos dentro da fração de ácido nucleico de tal maneira que pelo menos um dos dois polinucleotídeos seja capaz de exercer um efeito fisiológico pelo qual ele seja caracterizado sobre o outro. A título de exemplo, um promotor operavelmente ligado à região de codificação de um gene é capaz de promover transcrição da região de codificação. A ordem especificada ao indicar a ligação operavável não é importante. Por exemplo, as frases: "o promotor é operavelmente ligado à sequência de nucleotídeo" e "a sequência de nucleotídeo é operavelmente ligada ao promotor" são usadas intercambiavelmente neste documento e são consideradas equivalentes. Em alguns casos, quando o ácido nucleico codificando a proteína desejada compreende ainda uma sequência promotora/reguladora, a sequência promotora/reguladora é posicionada na extremidade 5’ da sequência de codificação de proteína desejada, de modo que ela conduza expressão da proteína desejada em uma célula.

[067] Os termos "oligonucleotídeo", "polinucleotídeo" e "molécula de ácido nucleico", usados intercambiavelmente neste documento, se referem a formas poliméricas de nucleotídeos de qualquer comprimento, sejam ribonucleotídeos ou desoxirribonucleotídeos. Assim, este termo inclui, mas não está limitado a, DNA ou RNA de fita simples, dupla ou múltipla, DNA genômico, cDNA, híbridos de DNA-RNA ou um polímero compreendendo bases de purina e pirimidina ou outras bases de nucleotídeos naturais, quimicamente ou bioquimicamente modificadas, não naturais ou derivatizadas. A espinha dorsal do polinucleotídeo pode compreender açúcares e grupos fosfato (como pode ser tipicamente encontrado em RNA ou DNA), ou açúcar modificado ou substituído ou grupos fosfato.

[068] O termo "osteoclastos", conforme aqui utilizado, é uma grande célula multinucleada com abundante citoplasma acidofílico derivado de células tronco hematopoiéticas, funcionando na absorção e remoção de tecido ósseo.

[069] Como aqui utilizado, o termo "composição farmacêutica" se refere à combinação de um agente ativo com um transportador, inerte ou ativo, tornando a composição especialmente adequada para uso de diagnóstico ou terapêutico in vivo ou ex vivo.

[070] Como aqui utilizado, o termo "transportador farmaceuticamente aceitável" se refere a qualquer dos transportadores farmacêuticos padrão, tal como uma solução salina tamponada com fosfato, água, emulsões (por exemplo, tal como emulsões de óleo/água ou água/óleo) e vários tipos de agentes umectantes. As composições também podem incluir estabilizadores e conservantes. Para exemplos de transportadores, estabilizadores e adjuvantes, ver, por exemplo, Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15ª Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA [1975].

[071] Ao longo da descrição, onde composições são descritas como tendo, incluindo ou compreendendo componentes específicos, ou onde processos e métodos são descritos como tendo, incluindo ou compreendendo etapas específicas, é contemplado que, adicionalmente, existem composições da presente invenção que consistem essencialmente, ou consistem, nos componentes recitados, e que existem processos e métodos de acordo com a presente invenção que consistem essencialmente, ou consistem, nas etapas de processamento recitadas.

[072] Vários aspectos da invenção são estabelecidos abaixo em seções; no entanto, aspectos da invenção descritos em uma seção particular não serão limitados a qualquer seção particular. I. Anticorpos

[073] A presente divulgação fornece novos anticorpos anti-LILRB3. Tais anticorpos ligam e/ou afetam as propriedades funcionais de LILRB3 humano.

Tabela 1 lista sequências de peptídeos de regiões variáveis de cadeia pesada e regiões variáveis de cadeia leve que, em combinação conforme designado na Tabela 1, são anticorpos LILRB3. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve são dispostas em um formato Fab. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve são fundidas juntas para formar um scFv. Tabela 1 Clone Sequência de aminoácido de Sequência de aminoácido de região variável de cadeia região variável de cadeia leve pesada 2E1 MEWPCIFLFLLSVTEGVHSQVQLQ MHFQVQIFSFLLISASVIMSRGQI

QSGPELVKPGASVKISCKASDYAFS VLTQSPAIMSASPGEKVTITCSAS SSWMNWVKQRPGKGLEWIGRIY SSVNYMHWFQQKSGTSPKLWI PGDGDTNYNGKFKGKATLTADKS YSTSNLASGVPARFSGSGSGTSY SSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCAREI SLTISRMEAEDAATYYCQQRSSY YYDYDGYFDVWGTGTTVTVSSAK PYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIF TTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLG PPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYP CLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGV RDINVKWKIDGSERQNGVLNS HTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTW WTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKD

PSQTVTCNVAHPASSTKVDKKIVP EYERHNSYTCEATHKTSTSPR RDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKP SEQ ID NO: 2 (capa) KDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDQ CDR1 (SEQ ID NO: 30)- SSVNY SEQ ID NO: 1 (IgG1) CDR2 (SEQ ID NO: 31)- STS CDR1 (SEQ ID NO: 27)- CDR3 (SEQ ID NO: 32)-

DYAFSSSW CQQRSSYPY CDR2 (SEQ ID NO: 28)-

IYPGDGDT

CDR3 (SEQ ID NO: 29)-

AREIYYDYDGYFDV 3A3 MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQ MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQI

LQQSRTELMKPGASVKLSCKATGY VLTQSPAIMSASLGERVTMTCTA TFTGYWIEWVKQRPGHGLEWIGE SSSVSSSYLHWYQQKPGSSPKL ILPGSTNINYNERFKGKATITADTSS WIYSTSNLASGVPARFSGSGSGT NTAYMQLSSLTTEDSAIYYCARWA SYSLTISSMEAEDAATYYCHQYH SVVVGDYWGQGATLTVSSAKTTP RSPPTFGGGTKLEIKRADAAPTV PSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCL SIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNF VKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHT YPRDINVKWKIDGSERQNGVLN FPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPS SWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTK

QTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRD DEYERHNSYT CGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKD SEQ ID NO: 4 (capa) VLTITLTPKVTCVVVDISKDDQG CDR1 (SEQ ID NO: 36)- SEQ ID NO: 3 (IgG1) SSVSSSY CDR1 (SEQ ID NO: 33)- CDR2 (SEQ ID NO: 37)- STS GYTFTGYW CDR3 (SEQ ID NO: 38)- CDR2 (SEQ ID NO: 34)- ILPGSTNI HQYHRSPPT CDR3 (SEQ ID NO: 35)

ARWASVVVGDY 3B1 MKVLSLLYLLTAIPGILSDVQLQES MSVLTQVLALLLLWLTGARCDIQ

GPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITSA MTQSPASLSASVGETVTITCRAS YYWNWIRQFPENKLEWMGYISH GNIHNFLAWYQQKQGRSPQLLV DGSNTYNPSLKNRISITRDTSKNQF YNAKTLADGVPSRFSGSGSGAQ FLKLNSVTTEDTATYYCATFDSDEV YSLKVNSLQPEDFGNYYCQHFW YWGQGTLVTVSAAKTTPPSVYPLA STPFTFGSGTKLEAKRADAAPTV PGCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPES SIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNF VTVTWNSGSLSSSVHTFPALLQSG YPRDINVKWKIDGSERQNGVLN LYTMSSSVTVPSSTWPSQTVTCSV SWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTK

AHPASSTTVDKKLEPSGPISTINPC DEYERHNSYT PPCKECHKCPAPNLEGGPSVFIFPP SEQ ID NO: 6 (capa) KG CDR1 (SEQ ID NO: 42)- SEQ ID NO: 5 (IgG2b) GNIHNF CDR1 (SEQ ID NO: 39)- YSITSAYY CDR2 (SEQ ID NO: 43)- NAK CDR2 (SEQ ID NO: 40)- ISHDGSN CDR3 (SEQ ID NO: 44)- CDR3 (SEQ ID NO: 41)- QHFWSTPFT

ATFDSDEVY 6A10 MGWSWIFLLFLSGTAGVLSEVQL MESQTQVFLSLLLWVSGTCGNI

QQSGPELVKPGASVKIPCKASGYT MMTQSPSSLAVSAGEKVTMSC FTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGD KSSQSVLYSSNQKNYLAWYQQK INPNNGGTIYNQKFKGKATLTVDK PGQSPKLLIYWASTRESGVPDRF SSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCARR TGSGSGTDFTLTISRVQAEDLAV GIYYGSSYAMDYWGQGTSVTVSS YYCHQYLSPYTFGGGTKLEIKRA AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMV DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASV TLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLS VCFLNNFYPRDINVKWKIDGSER SGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPS QNGVLNSWTDQDSKDSTYSMS

STWPSQTVTCNVAHPASSTKVDK STLTLTKDEYERHNSYT KIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFP SEQ ID NO: 8 (capa) PKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKD CDR1 (SEQ ID NO: 48)-

DQG QSVLYSSNQKNY SEQ ID NO: 7 (IgG1) CDR2 (SEQ ID NO: 49)-WAS CDR1 (SEQ ID NO: 45)- CDR3 (SEQ ID NO: 50)-

GYTFTDYN HQYLSPYT CDR2 (SEQ ID NO: 46)-

INPNNGGT CDR3 (SEQ ID NO: 47)-

ARRGIYYGSSYAMDY 7C5 MEWELSLIFIFALLKDVQCDVQLLE MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQI

TGGGLVQPGGSRGLSCEGSGFTFS VLTQSPAIMSASLGERVTMTCTA GFWMSWVRQTPGKTLEWIGDIN SSSVSSAYLHWYQQKPGSSPKL SDGTAINYAPSIKDRFTIFRDNDKS WIYSTSNLASGVPTRFSGSGSGT TLYLQMSNVRSEDTATYFCMRSY SYSLTISSMEAEDAATYYCHQYH GSGPWCFDVWGTGTTVTVSSAKT RSPFTFGAGTKLELKRADAAPTV TAPSVYPLAPVCGGTTGSSVTLGC SIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNF

LVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVH YPKDKGEF TFPALLQSGLYTLSSSVTVTSNTWP SEQ ID NO: 10 (capa) SQTITCNVAHPASSTKVDKKIEPRV CDR1 (SEQ ID NO: 54)-

PITQNPCPPLKECPPCAAPDLLGG SSVSSAY PSVFIFP CDR2 (SEQ ID NO: 55)- STS SEQ ID NO: 9 (IgG2c) CDR3 (SEQ ID NO: 56)- CDR1 (SEQ ID NO: 51)- GFTFSGF QYHRSPFT CDR2 (SEQ ID NO: 52)-

INSDGTAI CDR3 (SEQ ID NO: 53)-

MRSYGSGPWCFDV 1D5 MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQ MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQI

LQQSGAELMKPGASVKLSCKSTDY VLTQSPAIMSASLGERVTMTCTA TFTGYWIEWVKQRPGHGLEWIGE SSSVSSTYLHWYQQKPGSSPKL ILFGSGTNNYNEKFNGKATFTADT WIYSTSNLASGVPARFSGSGSGT SSNTAYMQLSSLTTEDSAIYYCARR SYSLTITTMETEDAATYYCHQYH NNFYFDYWGQGTTLTVSSAKTTP RSPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVS PSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCL IFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFY VKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHT PRDINVKWKIDGSERQNGVLNS FPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPS WTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKD

QTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRD EYERHNSYTCEATHKTSTSPR CGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKD SEQ ID NO: 12 (capa) VLTITLTPKVTCVVVDISKDDQG CDR1 (SEQ ID NO: 60)- SSVSST SEQ ID NO: 11 (IgG1) CDR2 (SEQ ID NO: 61)- STS CDR1 (SEQ ID NO: 57)- CDR3 (SEQ ID NO: 62)-

DYTFTGYW HQYHRSPFT CDR2 (SEQ ID NO: 58)-

ILFGSGTN CDR3 (SEQ ID NO: 59)-

CARRNNFYFDY 4C8 MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQ MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQI

LQQSGGELMKPGASVKLSCKATEY VLTQSPAIMSASLGERVTMTCTA TFTGYWIEWIKQRPGHGLEWIGEI SSSVSSSYLHWYQQKPGSSPKL LFGNGVTNYNENFKGKATFTADA WIYSTSNLASGVPARFSGSGSGT SSNTAYMQLSSLTTEDSAIYYCARR SYSLTISSMEAEDAATYYCHQYH TYFYFDYWGQGTTLTVSSAKTTPP RSPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVS SVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLV IFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFY KGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTF PRDINVKWKIDGSERQNGVLNS PAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPS WTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKD

QTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRD EYERHNSYT CGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKD SEQ ID NO: 14 (capa) VLTITLTPKVTCVVVDISKDDQG CDR1 (SEQ ID NO: 66)- SEQ ID NO: 13 (IgG1) SSVSSSY CDR1 (SEQ ID NO: 63)- CDR2 (SEQ ID NO: 67)- STS

EYTFTGYW CDR3 (SEQ ID NO: 68)- CDR2 (SEQ ID NO: 64)- HQYHRSPFT

ILFGNGVT CDR3 (SEQ ID NO: 65)-

ARRTYFYFDY 7E10 MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQ MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQI

LQQSGAELMKPGASVKLSCKASG VLTQSPAIMSASLEERVTMTCTA YTFTGYWIEWVKQRPGHGLEWIG SSSVSSSYLHWFQQKPGSSPKL EILPGNGYTNYNEKFEGKATFTAD WIYSTSNLASGVPARFSGSGSGT TSSNTAYIQLNSLTTEDSAIYYCARR SYSLTISSMEAEDAATYYCHQYH GSWTMDFWGQGTSVTVSSAKTT RSPHTFGGGTKLEIKRADAAPTV PPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCL SIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNF VKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHT YPRDINVKWKIDGSERQNGVLN FPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPS SWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTK

QTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRD DEYERHNSYT CGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKD SEQ ID NO:16 (capa) VLTITLTPKVTCVVVDISKDDKG CDR1 (SEQ ID NO: 72)- SEQ ID NO: 15 (IgG1) SSVSSSY CDR1 (SEQ ID NO: 69)- CDR2 (SEQ ID NO: 73)- STS GYTFTGYW CDR3 (SEQ ID NO: 74)- CDR2 (SEQ ID NO: 70)- HQYHRSPHT

ILPGNGYT CDR3 (SEQ ID NO: 71)-

ARRGSWTMDF 9E8 MEWIWILLFILSGTAGVQSQVQL MHFQVQIFSFLLISASVIMSRGQI

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TVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDC RHNSYT GCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVL SEQ ID NO: 18 (capa) TITLTPKVTCVVVDISKDDQG CDR1 (SEQ ID NO: 78)- SSVSY SEQ ID NO: 17 (IgG1) CDR2 (SEQ ID NO: 79)- TTS CDR1 (SEQ ID NO: 75)- CDR3 (SEQ ID NO: 80)-

GYTFTSNG QQRSSYPPT CDR2 (SEQ ID NO: 76)-

IYPRSGNT CDR3 (SEQ ID NO: 77)-

LRERETGLFDF 3E8 MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQ MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQI

LQQSGAELMKPGASVRLSCKATG VLTQSPAIMSASLGERVTMTCTA YTFTGYWIEWVKQRPGHGLEWIG SSSVSSSYLHWYQQKPGSSPKL EILPGSGSSNYNEKFKGKATITADT WIYSTSNLASGVPARFSGSGSGT SSNTSDMQLNSLTTEDSAIYYCAR SYSLTISSMEAEDAATYYCHQYH WGHPFDYWGLGTTLTVSSAKTTP RSPRTFGGGTKLEIKRADAAPTV PSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCL SIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNF VKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHT YPRDINVKWKIDGSERQNGVLN FPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPS SWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTK

QTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRD DEYERHNSYT CGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKD SEQ ID NO: 20 (capa)

VLTITLTPKVTCVVVDISKDDQG CDR1 (SEQ ID NO: 84)- SEQ ID NO: 19 (IgG1) SSVSSSY CDR1 (SEQ ID NO: 81)- CDR2 (SEQ ID NO: 85)- STS GYTFTGYW CDR3 (SEQ ID NO: 86)- CDR2 (SEQ ID NO: 82)- HQYHRSPRT

ILPGSGSS CDR3 (SEQ ID NO: 83)-

RWGHPFDY 5C1 MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQ MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQI

LQQSGAELMKPGASVKLSCKATD VLTQSPAIMSASLGERVTMTCTA YTFTGYWIEWVKQRPGHGLEWIG SSSVSSTYLHWYQQKPGSSPKL QILPGSAYSNYNEKFQGKATFTAD WIYSTSNLASGVPPRFSGSGSGT TSSDTAFMQLSSLTAEDSAIYYCAR SYSLTISSMEAEDAATYYCHQYH RDYYTMDYWGQGTSVTVSSAKTT RSPFTFGSGTKLEIERADAAPTVS APSVYPLAPVCGGTTGSSVTLGCL IFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFY VKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHT PRDINVKWKIDGSERQNGVLNS FPALLQSGLYTLSSSVTVTSNTWPS WTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKD

QTITCNVAHPASSTKVDKKIEPRVP EYERHNSYT ITQNPCPPLKECPPCAAPDLLGGPS SEQ ID NO: 22 (capa) VFIFPPKIKDVLMISLSPMVTCVVV CDR1 (SEQ ID NO: 90)-

DVSEDDQG SSVSSTY SEQ ID NO: 21 (IgG2c) CDR2 (SEQ ID NO: 91)- STS CDR1 (SEQ ID NO: 87)- CDR3 (SEQ ID NO: 92)-

DYTFTGYW HQYHRSPFT CDR2 (SEQ ID NO: 88)-

ILPGSAYS CDR3 (SEQ ID NO: 89)-

ARRDYYTMDY 9A1 MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQ MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQI

LQQSGAELMKPGASVKLSCKATG VLTQSPAIMSASLGERVTMTCTA STFTGYWIEWVKQRPGHGLEWIG SSSVSSSYLHWYQQKPGSSPKL EILPGSGYTNYNENFKGKATITADT WIYSTSNLASGVPVRFSGSGSGT SSNTAYMQLSSLTTEDSAIYYCARR SYSLTISIMEAEDAATYYCHQYHR EWYYFDYWGQGTTLIVSSAKTTPP SPFTFGSGTKLDIKRADAAPTVSI SVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLV FPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFY KGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTF PRDINVKWKIDGSERQNGVLNS PAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPS WTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKD

QTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRD EYERHNSYT CGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKD SEQ ID NO: 24 (capa) VLTITLTPKVTCVVVDISKDDQG CDR1 (SEQ ID NO: 96)- SEQ ID NO: 23 (IgG1) SSVSSSY CDR1 (SEQ ID NO: 93)- CDR2 (SEQ ID NO: 97)- STS STFTGYW CDR3 (SEQ ID NO: 98)- CDR2 (SEQ ID NO: 94)- HQYHRSPFT

ILPGSGYT CDR3 (SEQ ID NO: 95)-

ARREWYYFDY 1B2 MEWTWVFLFLLSVTAGVHSQVQ MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQI

LQQSGAELMKPGASVKLSCKATG VLTQSPAIMSASLGERVTMTCTA YTFTVYWIEWVKQRPGHGLEWIG SSSVSSSYLHWYQQKPGSSPQL EILPGSGSINYIEKFKGKATITADTSS WIYSTSNLASGVPTRFSGSGSGT NTAYMQLSSLTTEDSAIYYCARRT SYSLTISSMEAEDAATYYCHQYH WYYFDYWGQGTTLTVSSAKTTPP RSPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVS SVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLV IFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFY KGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTF PRDINVKWKIDGSERQNGVLNS PAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPS WTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKD

QTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRD EYERHNSYT CGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKD SEQ ID NO: 26 (capa) VLTITLTPKVTCVVVDISKDDQG CDR1 (SEQ ID NO: 102)- SEQ ID NO: 25 (IgG1) SSVSSSY CDR1 (SEQ ID NO: 99)- CDR2 (SEQ ID NO: 103)- STS GYTFTVYW CDR3 (SEQ ID NO: 104)- CDR2 (SEQ ID NO: 100)- HQYHRSPFT

ILPGSGSI CDR3 (SEQ ID NO; 101)-

ARRTWYYFDY

[074] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 na presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:1 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido de pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:2.

[075] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 inclui uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 27, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 28, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 29, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 30, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 31 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 32. Em algumas modalidades, uma ou mais dessas 6 CDRs têm 1, 2, 3, 4 ou 5 modificações de aminoácidos. Em outras modalidades, uma única CDR contém 1 ou 2 substituições de aminoácidos e os anticorpos anti-LILRB3 modificados retêm ligação a LILRB3 humano.

[076] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 na presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:3 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido de pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:4.

[077] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 33, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 34, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 35, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 36, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 37 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 38. Em outras modalidades, uma única CDR contém 1 ou 2 substituições de aminoácidos e os anticorpos anti-LILRB3 modificados retêm ligação a LILRB3 humano.

[078] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 na presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:5 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido de pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:6.

[079] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 39, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 40, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 41, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 42, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 43 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 44. Em algumas modalidades, uma ou mais dessas 6 CDRs têm 1, 2, 3, 4 ou 5 modificações de aminoácidos. Em outras modalidades, uma única CDR contém 1 ou 2 substituições de aminoácidos e os anticorpos anti-LILRB3 modificados retêm ligação a LILRB3 humano.

[080] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 na presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:7 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido de pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:8.

[081] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO:45, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO:46, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO:47, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 48, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO:49 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO:50. Em algumas modalidades, uma ou mais dessas 6 CDRs têm 1, 2, 3, 4 ou 5 modificações de aminoácidos. Em outras modalidades, uma única CDR contém 1 ou 2 substituições de aminoácidos e os anticorpos anti-LILRB3 modificados retêm ligação a LILRB3 humano.

[082] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 na presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:9 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido de pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%,

83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:10.

[083] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 51, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 52, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 53, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 54, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 55 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 56. Em algumas modalidades, uma ou mais dessas 6 CDRs têm 1, 2, 3, 4 ou 5 modificações de aminoácidos. Em outras modalidades, uma única CDR contém 1 ou 2 substituições de aminoácidos e os anticorpos anti-LILRB3 modificados retêm ligação a LILRB3 humano.

[084] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 na presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:11 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido de pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:12.

[085] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LIBR3 que incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 57, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 58, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 59, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 60, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 61 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 62. Em algumas modalidades, uma ou mais dessas 6 CDRs têm 1, 2, 3, 4 ou 5 modificações de aminoácidos. Em outras modalidades, uma única CDR contém 1 ou 2 substituições de aminoácidos e os anticorpos anti-LILRB3 modificados retêm ligação a LILRB3 humano.

[086] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 na presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:13 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido de pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:14.

[087] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 que incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 63, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 64, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 65, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 66, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 67 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 68. Em algumas modalidades, uma ou mais dessas 6 CDRs têm 1, 2, 3, 4 ou 5 modificações de aminoácidos. Em outras modalidades, uma única CDR contém 1 ou 2 substituições de aminoácidos e os anticorpos anti-LILRB3 modificados retêm ligação a LILRB3 humano.

[088] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 na presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:15 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido de pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:16.

[089] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 que incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 69, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 70, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 71, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 72, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 73 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, uma ou mais dessas 6 CDRs têm 1, 2, 3, 4 ou 5 modificações de aminoácidos. Em outras modalidades, uma única CDR contém 1 ou 2 substituições de aminoácidos e os anticorpos anti-LILRB3 modificados retêm ligação a LILRB3 humano.

[090] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 na presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:17 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido de pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:18.

[091] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 75, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 76, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 77, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 78, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 79 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 80. Em algumas modalidades, uma ou mais dessas 6 CDRs têm 1, 2, 3, 4 ou 5 modificações de aminoácidos. Em outras modalidades, uma única CDR contém 1 ou 2 substituições de aminoácidos e os anticorpos anti-LILRB3 modificados retêm ligação a LILRB3 humano.

[092] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 na presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:19 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido de pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%,

98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:20.

[093] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 81, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 82, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 83, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 84, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 85 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 86. Em algumas modalidades, uma ou mais dessas 6 CDRs têm 1, 2, 3, 4 ou 5 modificações de aminoácidos. Em outras modalidades, uma única CDR contém 1 ou 2 substituições de aminoácidos e os anticorpos anti-LILRB3 modificados retêm ligação a LILRB3 humano.

[094] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 na presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:21 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido de pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:22.

[095] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO:87, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO:88, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO:89, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO:90, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO:91 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO:92. Em algumas modalidades, uma ou mais dessas 6 CDRs têm 1, 2, 3, 4 ou 5 modificações de aminoácidos. Em outras modalidades, uma única CDR contém 1 ou 2 substituições de aminoácidos e os anticorpos anti-LILRB3 modificados retêm ligação a LILRB3 humano.

[096] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 na presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:23 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido de pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:24.

[097] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO:93, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO:94, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO:95, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO:96, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO:97 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO:98. Em algumas modalidades, uma ou mais dessas 6 CDRs têm 1, 2, 3, 4 ou 5 modificações de aminoácidos. Em outras modalidades, uma única CDR contém 1 ou 2 substituições de aminoácidos e os anticorpos anti-LILRB3 modificados retêm ligação a LILRB3 humano.

[098] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 na presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:25 e uma região variável de cadeia leve tendo uma sequência de aminoácido de pelo menos 80% (por exemplo, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%) idêntica à SEQ ID NO:26.

[099] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILBR3 incluem uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO:99, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO:100, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO:101, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO:102, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO:103 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO:104. Em algumas modalidades, uma ou mais dessas 6 CDRs têm 1, 2, 3, 4 ou 5 modificações de aminoácidos. Em outras modalidades, uma única CDR contém 1 ou 2 substituições de aminoácidos e os anticorpos anti-LILRB3 modificados retêm ligação a LILRB3 humano.

[100] Além das variantes de sequências aqui descritas nas regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve e/ou CDRs, mudanças na(s) região(ões) de framework da(s) região(ões) variável(is) pesada e/ou leve podem ser feitas. Em algumas modalidades, variantes nas regiões de framework (por exemplo, excluindo as CDRs) retêm pelo menos cerca de 80, 85, 90 ou 95% de identidade com uma sequência de linha germinativa. Variantes podem ser feitas para reter pelo menos cerca de 80, 85, 90 ou 95% de identidade com qualquer um dos alelos V-GENE de cadeia leve, J-GENE de cadeia leve, V-GENE de cadeia pesada, J-GENE cadeia pesada e D-GENE de cadeia pesada.

[101] Em algumas modalidades, variações são feitas nas regiões de framework que retêm pelo menos 80, 85, 90 ou 95% de identidade com as sequências de gene de linha germinativa, embora mantendo 6 CDRs inalteradas.

[102] Em algumas modalidades, variações são feitas em ambas as regiões de framework que retêm pelo menos 80, 85, 90 ou 95% de identidade com as sequências de gene de linha germinativa. As CDRs podem ter modificações de aminoácidos (por exemplo, de 1, 2, 3, 4 ou 5 modificações de aminoácidos no conjunto de CDRs (isto é, as CDRs podem ser modificadas, desde que o número total de mudanças no conjunto de 6 CDRs seja menor que 6 modificações de aminoácidos, com qualquer combinação de CDRs sendo mudada; por exemplo, pode haver uma mudança em vlCDRl, duas em vhCDR2, nenhuma em vhCDR3, etc.).

[103] Selecionando sequências de aminoácidos de CDRs e/ou regiões variáveis de uma cadeia pesada e uma cadeia leve daquelas aqui descritas e combinando-as com sequências de aminoácidos de regiões de framework e/ou regiões constantes de uma cadeia pesada e uma cadeia leve de um anticorpo conforme apropriado, um especialista na técnica será capaz de desenhar um anticorpo anti-LILRB3 de acordo com a presente invenção. As regiões de framework de anticorpo e/ou a região constante (domínio Fc) descritas na presente invenção podem derivar de um anticorpo de qualquer espécie, tal como de humano, coelho, cão, gato, camundongo, cavalo ou macaco.

[104] Em algumas modalidades, a região constante é derivada de humano e inclui uma região constante de cadeia pesada derivada daqueles dos subtipos IgG, IgA, IgM, IgE e IgD ou variantes das mesmas e uma região constante de cadeia leve derivada de subtipos capa ou lambda ou variantes das mesmas. Em algumas modalidades, a região constante de cadeia pesada é derivada de uma IgG humana, incluindo IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácido da região constante de cadeia pesada é de pelo menos 80%, 85%, 90% ou 95% idêntica a uma região constante de IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 humana. Em algumas outras modalidades, a sequência de aminoácido da região constante é de pelo menos 80%, 85%, 90% ou 95% idêntica a uma região constante de anticorpo de outro mamífero, tal como coelho, cão, gato, camundongo, cavalo ou macaco. Em algumas modalidades, a região constante de anticorpo inclui uma dobradiça, um domínio CH2, um domínio CH3 e, opcionalmente, um domínio CH1.

[105] Em algumas modalidades, os anticorpos descritos no presente documento podem ser derivados de uma mistura e de diferentes espécies, por exemplo, formar um anticorpo quimérico e/ou um anticorpo humanizado. De modo geral, tanto “anticorpos quiméricos” quanto “anticorpos humanizados” se referem a anticorpos que combinam regiões de mais de uma espécie. Por exemplo, “anticorpos quiméricos” compreendem tradicionalmente região variável (ou regiões variáveis) de um camundongo (ou rato, em alguns casos) e a região (ou regiões constantes) de um ser humano. “Anticorpos humanizados” geralmente se refere a anticorpos não humanos que têm as regiões estruturantes de domínio variável trocadas por sequências constatadas em anticorpos humanos.

Geralmente, em um anticorpo humanizado, todo o anticorpo, com exceção das CDRs, é codificado por um polinucleotídeo de origem humana ou é idêntico a tal anticorpo com exceção das CDRs dos mesmos.

As CDRs, dentre as quais, todas ou algumas, são codificadas por ácidos nucleicos que se originam em um organismo não humano, são enxertados no framework de folha beta de uma região variável de anticorpo humano para criar um anticorpo cuja especificidade é determinada pelas CDRs enxertadas.

A criação de tais anticorpos é descrita, por exemplo, em WO 92/11018, Jones, 1986, Nature 321:522 a 525, Verhoeyen et al., 1988, Science 239:1.534 a 1.536, todos incorporados a título de referência em sua totalidade. “Retromutação” de resíduos de framework de aceptor selecionados para os resíduos doadores correspondentes é frequentemente necessária para recuperar a afinidade que é perdida no construto enxertado inicial (U.S 5530101; U.S 5585089; U.S 5693761; U.S 5693762; U.S 6180370; U.S 5859205; U.S 5821337; U.S 6054297; U.S 6407213, todas incorporadas ao presente documento a título de referência). O anticorpo humanizado também compreenderá, de modo ideal, pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina, tipicamente a de uma imunoglobulina humana, e assim compreenderá tipicamente uma região Fc humana.

Anticorpos humanizados também podem ser gerados usando camundongos com um sistema imune geneticamente engenheirado, como descrito, por exemplo, em Roque et al., 2004, Biotechnol.

Prog. 20:639 a 654, incorporado a título de referência em sua totalidade.

Várias técnicas e métodos para humanizar e reconformar anticorpos não humanos são bem conhecidos na técnica (Consulte Tsurushita & Vasquez, 2004, Humanization of Monoclonal

Antibodies, Molecular Biology of B Cells, 533-545, Elsevier Science (EUA), e as referências citadas no presente documento, todas incorporadas a título de referência em sua totalidade). Os métodos de humanização incluem, porém sem limitação, os métodos descritos em Jones et al., 1986, Nature 321:522 a 525; Riechmann et al., 1988; Nature 332:323 a 329; Verhoeyen et al., 1988, Science, 239:1.534 a 1.536; Queen et al., 1989, Proc Natl Acad Sci, EUA 86:10.029 a

10.033; He et al., 1998, J. Immunol. 160: 1029-1035; Carter et al., 1992, Proc Natl Acad Sci EUA 89:4.285 a 4.289, Presta et al., 1997, Cancer Res. 57(20):4.593 a

4.599; Gorman et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 88:4.181 a 4.185; O’Connor et al., 1998, Protein Eng 11:321 a 328, todos incorporados a título de referência em sua totalidade. Humanização ou outros métodos para reduzir a imunogeneicidade de regiões variáveis de anticorpo não humano podem incluir métodos de recomposição, como descrito, por exemplo, em Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 91:969 a 973, incorporados a título de referência em sua totalidade. Outros métodos de humanização podem envolver o enxerto de apenas partes das CDRs incluindo, porém sem limitação, métodos descritos em Tan et al., 2002, J. Immunol. 169:1.119 a 1.125; De Pascalis et al., 2002, J. Immunol. 169:3.076 a 3.084, todos incorporados a título de referência em sua totalidade.

[106] Em algumas modalidades, os anticorpos da presente invenção compreendem uma região variável de cadeia pesada derivada de um gene de imunoglobulina de cadeia pesada de linhagem germinativa particular e/ou uma região variável de cadeia leve de um gene de imunoglobulina de cadeia leve de linhagem germinativa particular. Esses anticorpos podem conter diferenças de aminoácidos em comparação com as sequências de linhagem germinativa humana, devido, por exemplo, a mutações somáticas ocorrendo naturalmente ou introdução intencional de mutação dirigida a sítio. No entanto, um anticorpo humanizado é tipicamente pelo menos 80% idêntico à sequência de aminoácidos a uma sequência de aminoácidos codificada por um gene de imunoglobulina de linhagem germinativa humana e contém resíduos de aminoácido que identificam o anticorpo como sendo derivado de sequências humanas quando em comparação às sequências de aminoácidos de imunoglobulina de linhagem germinativa de outras espécies (por exemplo, sequências de linhagem germinativa de murino). Em determinados casos, um anticorpo humanizado pode ser pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99%, ou até mesmo pelo menos 96%, 97%, 98% ou 99% idênticos nas sequências de aminoácidos em relação às sequências de aminoácidos codificadas pelo gene de imunoglobulina de linhagem germinativa humana. Tipicamente, um anticorpo humanizado derivado de uma determinada sequência da linhagem germinativa humana não apresentará mais do que 10 a 20 diferenças de aminoácidos da sequência de aminoácidos codificada pelo gene de imunoglobulina de linhagem germinativa humana. Em certos casos, o anticorpo humanizado pode exibir no máximo 5 ou até mesmo no máximo 4, 3, 2 ou 1 em diferença de aminoácido da sequência de aminoácidos codificada pelo gene de imunoglobulina de linhagem germinativa (novamente, antes da introdução de quaisquer variantes no presente documento, ou seja, o número de variantes é geralmente baixo).

[107] Em algumas modalidades, os anticorpos da presente divulgação são humanizados e amadurecidos por afinidade, como é conhecido na técnica. Métodos com base em estrutura podem ser empregados para humanização e maturação de afinidade, por exemplo, como descrito na Patente US 7.657.380. Métodos com base em seleção podem ser empregados para humanizar e/ou maturar por afinidade as regiões variáveis de anticorpo, incluindo, porém sem limitação, os métodos descritos em Wu et al., 1999, J. Mol. Biol. 294:151 a 162; Baca et al., 1997, J. Biol. Chem. 272(16):10.678 a 10.684; Rosok et al., 1996, J.

Biol. Chem. 271(37): 22.611 a 22.618; Rader et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 95: 8.910 a 8.915; Krauss et al., 2003, Protein Engineering 16(10):753 a 759, todos incorporados a título de referência em sua totalidade. II. Características dos anticorpos

[108] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 aqui descritos ligam a LILRB3 humano. Em algumas modalidades, ligação dos anticorpos anti- LILBR3 ao LILRB3 humano é medida por citometria de fluxo, tal como o ensaio exemplar descrito no Exemplo 1.

[109] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 exibem baixa imunogenicidade quando administrados em sujeitos humanos. Estes anticorpos podem conter um domínio Fc derivado de IgG1 humana, IgG2 humana ou IgG3 humana. Em algumas modalidades, esses anticorpos são humanizados usando as regiões de framework derivadas de imunoglobulinas humanas.

[110] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 afetam a responsividade de células T. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 regulam a expressão de superfície de marcadores de ativação em resposta a diferentes tipos de estimulação de célula T, tal como o ensaio exemplar descrito no Exemplo 3. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 regulam produção de citocina por PBMCs em resposta à estimulação de célula T, tal como o ensaio exemplar descrito no Exemplo 4.

[111] Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB3 descritos agem como antagonistas de LILRB3. Como resultado, tais anticorpos anti-LILRB3 inibem a atividade de LILRB3.

[112] Em algumas outras modalidades, anticorpos anti-LIRB3 aqui descritos agem como agonistas de LILRB3. Como resultado, tais anticorpos anti- LILRB3 promovem a atividade de LILRB3.

[113] Efeitos dos anticorpos anti-LILRB3 na função de célula T podem ser avaliados usando uma variedade de métodos conhecidos na técnica e descritos neste documento. Consequentemente, os anticorpos anti-LILRB3 podem servir como antagonistas de LILRB3 ou agonistas de LILRB3. III. Ácidos nucleicos da invenção

[114] Ácidos nucleicos codificando os anticorpos anti-LILRB3 descritos neste documento também são abrangidos pela presente divulgação, bem como vetores de expressão contendo tais ácidos nucleicos e células hospedeiras transformadas com tais ácidos nucleicos e/ou vetores de expressão. Conforme será observado pelas pessoas versadas na técnica, as sequências de proteínas representadas no presente documento podem ser codificadas por qualquer número de sequências de ácidos nucleicos possíveis devido à degenerescência do código genético e aqueles versados na técnica poderiam identificar prontamente essas sequências de ácidos nucleicos com base nas sequências de aminoácidos fornecidas aqui.

[115] Em algumas modalidades, composições de ácido nucleico codificando os anticorpos anti-LILRB3 e/ou domínios de ligação a LILRB3 também são abrangidas pela invenção. Como será apreciado por aqueles versados na técnica, no caso de domínios de ligação a antígeno, as composições de ácido nucleico geralmente incluem um primeiro ácido nucleico codificando a região variável de cadeia pesada e um segundo ácido nucleico codificando a região variável de cadeia leve. No caso de scFvs, um ácido nucleico simples codificando a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve, separadas por um ligante aqui descrito, pode ser feito. No caso de anticorpos tradicionais, as composições de ácido nucleico geralmente incluem um primeiro ácido nucleico codificando a cadeia pesada e um segundo ácido nucleico codificando a cadeia leve que mediante expressão em uma célula, compõem espontaneamente o formato tetramérico "tradicional" de duas cadeias pesadas e duas cadeias leves.

[116] Em algumas modalidades, as composições de ácido nucleico codificando os anticorpos anti-LILRB3 e/ou domínios de ligação a LILRB3 são versões ou variantes otimizadas de códon.

[117] Conforme conhecido na técnica, os ácidos nucleicos codificando os componentes da invenção podem ser incorporados em vetores de expressão e dependendo das células hospedeiras usadas para produzir os anticorpos da invenção. Estes dois ácidos nucleicos podem ser incorporados em um vetor de expressão simples ou em dois vetores de expressão diferentes. De modo geral, os ácidos nucleicos podem ser operavelmente ligados a qualquer número de elementos reguladores (promotores, origem de replicação, marcadores selecionáveis, sítios de ligação ribossômica, indutores, etc.) em um vetor de expressão. Os vetores de expressão podem ser extracromossômicos ou vetores de integração.

[118] Os ácidos nucleicos e/ou vetores de expressão da presente invenção podem ser introduzidos em qualquer tipo de células hospedeiras, que são bem conhecidas na técnica, incluindo células de mamíferos, bactérias, leveduras, insetos e fungos. Após transfecção, clones de células simples podem ser isolados para geração de banco de células usando métodos conhecidos na técnica, tal como diluição limitada, ELISA, FACS, microscopia ou Clonepix. Clones podem ser cultivados em condições adequadas para escalonamento de biorreator e mantida expressão dos anticorpos. Os anticorpos podem ser isolados e purificados usando métodos conhecidos na técnica, incluindo centrifugação, filtração profunda, lise celular, homogeneização, congelamento- descongelamento, purificação de afinidade, filtração de gel, cromatografia de troca iônica, cromatografia de troca de interação hidrofóbica e cromatografia de modo misto.

IV. Aplicações Terapêuticas

[119] A presente divulgação fornece um método para modular uma resposta imune em um sujeito e o método inclui administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-LILRB3 aqui descrito, ou uma composição farmacêutica contendo um anticorpo anti-LILRB3.

[120] Em algumas modalidades, os métodos para modular uma resposta imune abrangida pela presente divulgação compreendem inibir a atividade de LILRB3 em um sujeito e, em modalidades adicionais, tais métodos compreendem administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-LILRB3 que age como um antagonista de LILRB3 ou administrando uma composição farmacêutica contendo um anticorpo anti-LILRB3 antagonista.

[121] Em algumas modalidades, os métodos para modular uma resposta imune abrangida pela presente divulgação compreendem promover a atividade de LILRB3 em um sujeito e, em modalidades adicionais, tais métodos compreendem administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-LILRB3 que age como um agonista de LILRB3 ou administrando uma composição farmacêutica contendo um anticorpo anti-LILRB3 agonístico.

[122] Em algumas modalidades, um antagonista pode estimular uma resposta imune. Em outras modalidades, um antagonista pode inibir uma resposta imune. Em algumas modalidades, um agonista pode estimular uma resposta imune. Em outras modalidades, um agonista pode inibir uma resposta imune.

[123] A presente divulgação também fornece métodos para tratar câncer em um sujeito e tais métodos incluem administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-LILRB3 ou uma composição farmacêutica contendo tal anticorpo anti-LILRB3. Em algumas modalidades, o câncer a ser tratado expressa LILRB3 na superfície de célula de câncer. Em algumas modalidades, o câncer a ser tratado suprarregula LILRB3 em comparação com o tecido não canceroso correspondente. Em algumas modalidades, o sujeito a ser tratado expressa LILRB3 em um ou mais tipos de células imunes, incluindo células linfoides, células mieloides, monócitos, osteoclastos derivados de monócitos, granulócitos, células dendríticas, osteoclastos e mastócitos progenitores. Em algumas modalidades, o sujeito a ser tratado expressa um alto nível de LILRB3 em um ou mais tipos de células imunes, incluindo monócitos, osteoclastos derivados de monócitos, granulócitos, células dendríticas, osteoclastos e mastócitos progenitores. Em algumas modalidades, o sujeito a ser tratado expressa um alto nível de LILRB3 em células de câncer hematopoiéticas. Em algumas modalidades, o câncer a ser tratado é não responsivo a anticorpos imunomoduladores existentes dirigidos a outros pontos de verificação imunes, tal como CTLA-4, PD-1 ou PD-L1.

[124] Em algumas modalidades, o câncer é leucemia mieloide, leucemia linfoide B ou mieloma.

[125] Em algumas outras modalidades, o câncer é câncer de cérebro, câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, câncer endometrial, câncer esofágico, leucemia, câncer de pulmão, câncer de fígado, melanoma, câncer ovariano, câncer pancreática, câncer de próstata, câncer retal, câncer renal, câncer testicular ou câncer uterino. Em ainda outras modalidades, o câncer é um tumor vascularizado, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, carcinoma de células pequenas, neuroblastoma, sarcoma (por exemplo, um angiossarcoma ou condrossarcoma), câncer de laringe, câncer de parótida, câncer do trato biliar, câncer de tireoide, melanoma lentiginoso acral, ceratoses actínicas, leucemia linfocítica aguda, leucemia mieloide aguda, carcinoma adenoide cístico, adenomas, adenossarcoma, carcinoma adenoescamoso, câncer do canal anal, câncer anal, câncer de anorreto, tumor astrocítico,

carcinoma de glândula bartolínica, carcinoma de células basais, câncer biliar, câncer de osso, câncer da medula óssea, câncer brônquico, carcinoma das glândulas brônquicas, carcinoide, colangiocarcinoma, condossarcoma, papiloma/carcinoma do plexo coroide, leucemia linfocítica crônica, leucemia mieloide crônica, carcinoma de células claras, câncer do tecido conjuntivo, cistoadenoma, câncer do sistema digestivo, câncer do duodeno, câncer do sistema endócrino, tumor do seio endodérmico, hiperplasia endometrial, sarcoma do estroma endometrial, adenocarcinoma endometrioide, câncer de células endoteliais, câncer ependimal, câncer de células epiteliais, sarcoma de Ewing, câncer de olho e órbita, câncer genital feminino, hiperplasia nodular focal, câncer de vesícula biliar, câncer de antro gástrico, câncer de fundo gástrico, gastrinoma, glioblastoma, glucagonoma, câncer de coração, hemangiblastomas, hemangioendotelioma, hemangiomas, adenoma hepático, adenomatose hepática, câncer hepatobiliar, carcinoma hepatocelular, doença de Hodgkin, câncer de íleo, insulinoma, neoplasia intraepitelial, neoplasia de células escamosas interepiteliais, câncer do duto biliar intra-hepático, carcinoma de células escamosas invasivas, câncer de jejuno, câncer de articulação, sarcoma de Kaposi, câncer pélvico, carcinoma de células grandes, câncer de intestino grosso, leiomiossarcoma, melanomas lentigo maligno, linfoma, câncer genital masculino, melanoma maligno, tumores mesoteliais malignos, meduloblastoma, meduloepitelioma, câncer meníngeo, câncer mesotelial, carcinoma metastático, câncer de boca, carcinoma mucoepidermoide, mieloma múltiplo, câncer de músculo, câncer do trato nasal, câncer do sistema nervoso, adenocarcinoma neuroepitelial melanoma nodular, câncer de pele não epitelial, carcinoma de células de aveia, câncer oligodendroglial, câncer de cavidade oral, osteossarcoma, adenocarcinoma papilar seroso, câncer peniano, câncer de faringe, tumores pituitários, pseudossarcoma, blastoma pulmonar, câncer retal,

carcinoma de células renais, câncer do sistema respiratório, retinoblastoma, rabdomiossarcoma, sarcoma, carcinoma seroso, câncer de seio, câncer de pele, carcinoma de células pequenas, câncer de intestino delgado, câncer de músculo liso, câncer de tecido mole, tumor secretor de somatostatina, câncer de coluna, carcinoma de células escamosas, câncer de músculo estriado, câncer submesotelial, melanoma de disseminação superficial, leucemia de células T, câncer de língua, carcinoma indiferenciado, câncer de ureter, câncer de uretra, câncer de bexiga urinária, câncer de sistema urinário, câncer de colo uterino, câncer de corpo uterino, melanoma uveal, câncer vaginal, carcinoma verrucoso, VIPoma, câncer de vulva, carcinoma bem diferenciado, ou tumor de Wilms.

[126] Em algumas outras modalidades, o câncer a ser tratado é um linfoma não-Hodgkin, tal como um linfoma de células B ou linfoma de células T. Em certas modalidades, o linfoma não-Hodgkin é um linfoma de células B, tal como um linfoma de células B grandes difuso, linfoma de células B mediastinal primário, linfoma folicular, linfoma linfocítico pequeno, linfoma de células do manto, linfoma de células B de zona marginal, linfoma de células B de zona marginal extranodal, linfoma de células B de zona marginal nodal, linfoma de células B de zona marginal esplênica, linfoma de Burkitt, linfoma linfoplasmocitário, leucemia de células pilosas ou linfoma do sistema nervoso central (CNS) primário. Em certas outras modalidades, o linfoma não-Hodgkin é um linfoma de células T, tal como um linfoma linfoblástico T precursor, linfoma de células T periférico, linfoma de células T cutâneo, linfoma de células T angioimunoblástico, linfoma natural killer extranodal/células T, linfoma de células T tipo enteropatia, linfoma de células T semelhante a paniculite subcutânea, linfoma anaplásico de células grandes ou linfoma de células T periférico.

[127] A presente divulgação também fornece métodos para tratar distúrbios autoimunes ou inflamatórios em um sujeito e o método inclui administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-LILRB3 que age como um modulador de LILRB3. Em algumas modalidades, o sujeito a ser tratado expressa LILRB3 em um ou mais tipos de células imunes, incluindo células linfoides, células mieloides, monócitos, osteoclastos derivados de monócitos, granulócitos, células dendríticas, osteoclastos e mastócitos progenitores. Em algumas modalidades, o sujeito a ser tratado expressa um alto nível de LILRB3 em um ou mais tipos de células imunes, incluindo células linfoides, células mieloides, monócitos, osteoclastos derivados de monócitos, granulócitos, células dendríticas, osteoclastos e mastócitos progenitores. Em algumas modalidades, LILRB3 é expresso no sujeito em um alto nível em células imunes autorreativas (por exemplo, células T, células B, células natural killer, células dendríticas, células endoteliais e macrófagos em sítios onde a doença autoimune se desenvolve, por exemplo, gânglios linfáticos e sistema nervoso central no sujeito sofrendo de esclerose múltipla, articulações no sujeito sofrendo de artrite reumatoide e trato gastrointestinal no sujeito sofrendo de doença Celíaca). A administração de um anticorpo anti-LILRB3 que age como um antagonista de LILRB3 pode inibir atividade de LILRB3. A administração de um anticorpo anti-LILRB3 que age como um agonista de LILRB3 pode promover atividade de LILRB3.

[128] Em algumas modalidades, o distúrbio autoimune ou inflamatório a ser tratado é asma, esclerose múltipla, doença de Addison, esclerose lateral amiotrófica, doença de Crohn, Síndrome de Cushing, diabetes mellitus tipo 1, doença do enxerto versus hospedeiro, doença de Graves, síndrome de Guillain- Barré, lúpus eritematoso, psoríase, artrite psoriática, artrite reumatoide, sarcoidose, esclerodermia, lúpus eritematoso sistêmico, rejeição de transplante ou vasculite.

[129] Em algumas outras modalidades, os distúrbios autoimunes a serem tratados incluem, mas não estão limitados a, Encefalomielite disseminada aguda (ADEM), Agamm aglobulinemia, Alopecia areata, Espondilite Anquilosante, Síndrome antifosfolipídica, Síndrome antissintetase, Alergia atópica, Dermatite atópica, Anemia aplásica autoimune, Cardiomiopatia autoimune, Enteropatia autoimune, Anemia hemolítica autoimune, Hepatite autoimune, Síndrome do ouvido interno autoimune, Síndrome linfoproliferativa autoimune, Pancreatite autoimune, Neuropatia periférica autoimune, Síndrome polendócrina autoimune, Dermatite de progesterona autoimune, Púrpura trombocitopênica autoimune, Urticária autoimune, Uveíte autoimune, Doença de Balo/esclerose concêntrica de Balo, doença de Behcet, Doença de Berger, Encefalite de Bickerstaffs, Síndrome de Blau, Penfigoide Bolhoso, Câncer, Doença de Castleman, Doença celíaca, Doença de Chagas, Polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica, Polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica, Doença pulmonar obstrutiva crônica, Osteomielite multifocal recorrente crônica, Síndrome de Churg-Strauss, Penfigoide cicatricial, Síndrome de Cogan, Doença da aglutinina fria, Deficiência do componente do complemento 2, Dermatite de contato, Arterite craniana, síndrome de CREST, Angite leucocitoclástica cutânea, Doença de Dego, Doença de Dercum, Dermatite herpetiforme, Dermatomiosite, Esclerose sistêmica cutânea difusa, Lúpus eritematoso discoide, Síndrome de Dressler, Lúpus induzido por droga, Eczema, Endometriose, Fascite eosinofílica, Gastroenterite eosinofílica, Pneumonia eosinofílica, Acquisita bolhosa de epidermólise, Eritema nodoso, Eritroblastose fetal, Crioglobulinemia mista essencial, Síndrome de Evan, Fibrodisplasia ossificante progressiva, Fibrose alveolítica (ou Fibrose pulmonar idiopática), Gastrite, Penfigoide gastrointestinal, Glomerulonefrite, Síndrome de Goodpasture, Encefalopatia de Hashimoto, Tireoide de Hashimoto, Púrpura de

Henoch-Schonlein, Herpes gestacional também conhecida como Penfigoide Gestacional, Hidradenite supurativa, Síndrome de Hughes-Stovin, Hipogamaglobulinemia, Doenças desmielinizante inflamatória idiopática, Fibrose pulmonar idiopática, Púrpura trombocitopênica idiopática, neuropatia de IgA, Miosite corporal de inclusão, Cistite intersticial, Artrite idiopática juvenil também conhecida como artrite reumatoide juvenil, Doença de Kawasaki, Síndrome miastênica de Lambert-Eaton, Vasculite leucocitoclástica, Lichen planus, Lichen sclerosus, Doença de IgA linear, Hepatite lupoide também conhecida como Hepatite autoimune, Síndrome de Majeed, Colite microscópica, Poliangeíte microscópica, Síndrome de Miller-Fisher, Doença de tecido conjuntivo misto, Morphea, Doença de Mucha-Habermann também conhecida como Pitiríase lichenoides et varioliformis acuta, Esclerose múltipla, Miastenia grave, Miosite, Doença de Ménière, Narcolepsia, Neuromielite óptica, Neuromiotonia, Penfigoide cicatricial ocular, Síndrome de Opsoclonus myoclonus, Tireoidite de Ord, Reumatismo palindrômico, PANDAS (distúrbios neuropsiquiátricos autoimunes pediátricos associados a estreptococos), Degeneração cerebelar paraneoplásica, Hemoglobinúria paroxística noturna (PNH), Síndrome de Parry Romberg, Pars planitis, Síndrome de Parsonage- Turner, Pênfigo vulgar, Encefalomielite perivenosa, Anemia perniciosa, Síndrome de POEMS, Poliarterite nodosa, Polimialgia reumática, Polimiosite, Cirrose biliar primária, Colangite esclerosante primária, Neuropatia inflamatória progressiva, Aplasia eritrocitária pura, Pioderma gangrenoso, Encefalite de Rasmussen, Fenômeno de Raynaud, Síndrome de Reoter, Policondrite recidivante, Síndrome das pernas inquietas, Fibrose retroperitoneal, Febre reumática, Esquizofrenia, Síndrome de Schmidt, Síndrome de Schnitzler, Esclerite, Doença sérica, Síndrome de Sjögren, Espondiloartropatia, Síndrome de pessoa rígida, Doença de Still, Endocardite bacteriana subaguda (SBE), Síndrome de Susac, Síndrome de Sweet, Coreia de Sydenham, Oftalmia simpática, Arterite de Takayasu, Arterite temporal, Trombocitopenia, Síndrome de Tolosa-Hunt, Mielite transversa, Colite ulcerativa, Espondiloartropatia indiferenciada, Vasculite urticária, Vitiligo, Granulomatose de Wegener.

[130] A presente invenção também fornece métodos para tratar informação alérgica em um sujeito, e o método inclui administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de qualquer um dos anticorpos anti-LILRB3 aqui descritos ou qualquer uma das composições aqui descritas.

[131] Em algumas modalidades, a inflamação alérgica a ser tratada pode estar relacionada à asma alérgica, dermatite atópica, rinite alérgica, conjuntivite alérgica.

[132] A presente divulgação também fornece métodos para modular diferenciação de osteoclasto e o método inclui administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de qualquer um dos anticorpos anti-LILRB3 aqui descritos ou qualquer uma das composições aqui descritas. Em algumas modalidades, modulação de diferenciação de osteoclasto pode ser particularmente útil para tratar perda óssea ou reabsorção óssea em pacientes sofrendo ou suscetíveis de sofrer de uma condição selecionada do grupo consistindo em osteoporose, osteodistrofia, osteopenia, osteomalácia, hiperparatireoidismo, hipertireoidismo, hipogonadismo, tireotoxicose, mastocitose sistêmica, hipofosfatasia adulta, hiperadrenocorticismo, osteogênese imperfeita, doença de Paget, doença/síndrome de Cushing, síndrome de Tumer, doença de Gaucher, síndrome de Ehlers-Danlos, síndrome de Marfan, síndrome de Menkes, síndrome de Fanconi, mieloma múltiplo, hipercalcemia, hipocalcemia, artritides, doença periodontal, raquitismo (incluindo raquitismo hipofosfatêmico tipo I e II e ligado a x) ou outra forma de deficiência de vitamina D, tal como deficiência de vitamina D associada a doença renal crônica ou insuficiência renal, fibrogênese imperfeita óssea, distúrbios osteoscleróticos, tal como picnodisostose e danos ca usado por processos inflamatórios mediados por macrófagos. V. Terapia de combinação

[133] Anticorpos anti-LILRB3 aqui descritos podem ser usados em combinação com agentes terapêuticos adicionais para tratar câncer, distúrbios autoimunes e inflamação alérgica. Anticorpos anti-LILRB3 também podem ser usados em combinação com agentes terapêuticos adicionais para modular diferenciação de osteoclastos

[134] Agentes terapêuticos exemplares que podem ser usados como parte de uma terapia de combinação em tratamento de câncer incluem, por exemplo, radiação, mitomicina, tretinoína, ribomustina, gencitabina, vincristina, etoposídeo, cladribina, mitobronitol, metotrexato, doxorrubicina, carboquona, pentostatina, nitracrina, zinostatina, cetrorelix, letrozol, raltitrexed, daunorrubicina, fadrozol, fotemustina, timalfasina, sobuzoxano, nedaplatina, citarabina, bicalutamida, vinorrelbina, vesnarinona, aminoglutetimida, ansacrina, proglumida, eliptínio acetato, cetanserina, doxifluridina, etretinato, isotretinoína, estreptozocina, nimustina, vindesina, flutamida, drogenil, butocina, carmofur, razoxano, sizofilano, carboplatina, mitolactol, tegafur, ifosfamida, prednimustina, picibanil, levamisol, teniposida, improssulfan, enocitabina, lisurida, oximetolona, tamoxifeno, progesterona, mepitiostano, epitiostanol, formestano, interferon alfa, interferon-2 alfa, interferon beta, interferon gama, fator estimulador de colônia 1, fator estimulador de colônia 2, denileucina diftitox, interleucina 2, fator de liberação do hormônio luteinizante e variações dos agentes acima mencionados que podem exibir ligação diferencial a seu receptor cognato e elevada ou diminuída meia vida sérica.

[135] Uma classe adicional de agentes que podem ser usados como parte de uma terapia de combinação no tratamento do câncer são inibidores de ponto de controle imune. Inibidores de ponto de verificação imune exemplares incluem agentes que inibem um ou mais de (i) antígeno associado a T-linfócito citotóxico 4 (CTLA4), (ii) proteína de morte celular programada 1 (PD1), (iii) PDL1, (iv) LAG3, (v) B7-H3, (vi) B7-H4, e (vii) TIM3, tal como Ipilimumabe, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe e Atezolizumabe.

[136] Ainda, outros agentes que podem ser usados como parte de uma terapia combinada em tratamento do câncer são agentes de anticorpos monoclonais que têm como alvo alvos não de ponto de verificação (por exemplo, herceptina) e agentes não citotóxicos (por exemplo, inibidores de tirosina cinase).

[137] Ainda outras categorias de agentes anticâncer incluem, por exemplo: (i) um inibidor selecionado de um inibidor de ALK, um inibidor de ATR, um antagonista de A2A, um Inibidor de Reparo de Excisão de Base, um Inibidor de Tirosina Cinase Bcr-Abl, um Inibidor de Tirosina Cinase de Bruton, um Inibidor de CDC7, um Inibidor de CHK1, um Inibidor de Cinase Dependente de Ciclina, um Inibidor de DNA-PK, um Inibidor de ambos DNA-PK e mTOR, um Inibidor de DNMT1, um Inibidor de DNMT1 mais 2-cloro-desoxiadenosina, um inibidor de HDAC, um Inibidor de Via de Sinalização de Hedgehog, um Inibidor de IDO, um Inibidor de JAK, um Inibidor de mTOR, um Inibidor de MEK, um Inibidor de MELK, um Inibidor de MTH1, um Inibidor de PARP, um Inibidor de Fosfoinositídeo 3- Cinase, um Inibidor de ambos PARP1 e DHODH, um Inibidor de Proteassoma, um Inibidor de Topoisomerase-II, um Inibidor de Tirosina Cinase, um Inibidor de VEGFR e um Inibidor de WEE1; (ii) um agonista de OX40, CD137, CD40, GITR, CD27, HVEM, TNFRSF25 ou ICOS; e (iii) uma citocina selecionada de IL-12, IL-15, GM-CSF e G-CSF. Anticorpos da invenção também podem ser usados como um adjunto para remoção cirúrgica de câncer da lesão primária.

[138] Agentes terapêuticos exemplares que podem ser usados como parte de uma terapia de combinação com os anticorpos anti-LILRB3 para tratar, retardar a progressão, prevenir uma recaída ou aliviar um sintoma de um distúrbio autoimune ou inflamatório incluem, por exemplo, qualquer de uma variedade de terapias anti-inflamatórias e/ou imunossupressoras conhecidas. Em algumas modalidades, as terapias anti-inflamatórias e/ou imunossupressoras incluem, mas não estão limitadas a metotrexato, ciclosporina A (incluindo, por exemplo, microemulsão de ciclosporina), tacrolimus, corticosteroides, estatinas, interferon beta, agentes anti- inflamatórios não esteroidais e 6-MP (Mercaptopurina, também chamada de 6- Mercaptopurina ou Purinetol).

[139] Em algumas modalidades, terapias anti-inflamatórias e/ou imunossupressoras para combinar com os anticorpos anti-LILRB3 incluem, mas não estão limitadas a um inibidor TOPK (por exemplo, OTS964 ((R)-9-(4-(1- (dimetilamino)propan-2-il)fenil)-8-hidroxi-6-metiltieno[2,3-c] quinolin-4(5H)- ona) (Oncotherapy Science)), um inibidor da tirosina cinase (por exemplo, axitinibe, dasatinibe, icotinibe), um inibidor da topoisomerase (por exemplo, topotecano), um agonista do receptor de esfingosina-1-fosfato (por exemplo, fingolimod, KRP-203), imunoglobulina anti-células T (por exemplo, AtGam), anticorpo anti-receptor de IL-2 (por exemplo, daclizumabe), amidas (CTX), ifosfamida (IFO), adriamicina (ADM), daunorrubicina (DNR), vincristina (VCR), vinblastina (VBL), etoposídeo (VP16), vermeer (Vumon), carboplatina (CBP), tacrolimus, sirolimus, everolimus, azatioprina, brequinar, leflunomida, LEA-29Y, anticorpo anti-CD3 (por exemplo, OKT3), aspirina, moléculas bloqueadoras de B7-CD28 (por exemplo, belatacept, abatacept), moléculas bloqueadoras de CD40-CD154 (anticorpos anti-CD40), acetaminofeno, ibuprofeno, naproxeno, pi roxicam e esteroides anti-inflamatórios (por exemplo, prednisolona ou dexametasona).

[140] Em algumas modalidades, as terapias anti-inflamatórias e/ou imunossupressoras para combinação com os anticorpos anti-LILRB3 incluem ablação de células autoimunes, por exemplo, por administração de TNF-alfa, CFA, interleucina-1 (IL-1), inibidores de proteassoma, Inibidores de NFκB, drogas anti-inflamatórias, ativador do plasminogênio tecidual (TPA), lipopolissacarídeo, luz UV e um mediador intracelular da via de sinalização de TNF-alfa. Esses agentes induzem a apoptose de linfócitos autorreativos interrompendo a via a jusante da sinalização do receptor de TNF-alfa ou agem a jusante da ligação ao receptor de TNF-alfa. (Baldwin et al., Ann. Rev. Immunol.(1996) 12:141; Baltimore, Cell (1996) 87:13).

[141] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB3 são usados em conjunto com um método cirúrgico para tratar ou de outro modo aliviar doenças autoimunes.

[142] Agentes terapêuticos exemplares que podem ser usados como parte de uma terapia de combinação com os anticorpos anti-LILRB3 para tratar, retardar a progressão, prevenir uma recaída ou aliviar um sintoma de inflamação alérgica incluem, por exemplo, qualquer um de uma variedade de terapias anti- inflamatórias e/ou imunossupressoras conhecidas. Em algumas modalidades, as terapias anti-inflamatórias e/ou imunossupressoras para combinar com anticorpos anti-LILRB3 incluem, mas não estão limitadas a: β2-agonistas de ação curta, β2-agonistas de longa ação, anticolinérgicos, corticosteroides, corticosteroides sistêmicos, estabilizadores de mastócitos, modificadores de leucotrieno, metilxantinas, β2-agonistas, albuterol, levalbuterol, pirbuterol, artformoterol, formoterol, salmeterol, anticolinérgicos incluindo ipratrópio e tiotrópio; corticosteroides incluindo beclometasona, budesonida, flunisolida, fluticasona, mometasona, triancinolona, metiprednisolona, prednisolona,

prednisona; modificadores de leucotrieno incluindo montelucaste, zafirlucaste e zileuton; estabilizadores de mastócitos incluindo cromolina e nedocromil; metilxantinas incluindo teofilina; drogas de combinação, incluindo ipratrópio e albuterol, fluticasona e salmeterol, budesonida e formoterol; anti-histamínicos incluindo hidroxizina, difenidramina, loratadina, cetirizina e hidrocortisona; drogas moduladoras do sistema imune, incluindo tacrolimus e pimecrolimus; ciclosporina; azatioprina; micofenolatemofetil; e combinações dos mesmos.

[143] Em outras modalidades, agentes terapêuticos que podem ser usados como parte de uma terapia de combinação com os anticorpos anti-LILRB3 para tratar, retardar a progressão, prevenir uma recaída ou aliviar um sintoma de inflamação alérgica também podem incluir esses agentes terapêuticos especificado para doenças autoimunes ou inflamatórias.

[144] Agentes terapêuticos exemplares que podem ser usados como parte de uma terapia de combinação com os anticorpos anti-LILRB3 para modular a atividade de osteoclastos incluem, mas não estão limitados a bisfosfonatos, calcitonina, reposição de estrogênio, anticorpos de esclerostina, anticorpos RANKL, peptídeos de paratireoide, estrôncioranelato, inibidores de ranelato , inibidores do fator 1 estimulador de colônias, inibidores de TNFα, inibidores do receptor de estimulador de colônia 1, inibidores da catepsina K, inibidores da V- ATPase e peptídeo tipo glucagon 2.

[145] A quantidade dos anticorpos e agentes terapêuticos adicionais e a temporização relativa de administração pode ser selecionada a fim de atingir um efeito terapêutico combinado desejado. Por exemplo, ao administrar uma terapia de combinação a um paciente em necessidade de tal administração, os agentes terapêuticos na combinação, ou uma composição farmacêutica ou composições compreendendo os agentes terapêuticos, podem ser administrados em qualquer ordem, tal como, por exemplo, sequencialmente,

simultaneamente, juntos, simultaneamente e semelhantes. Além disso, por exemplo, uma proteína de ligação multiespecífica pode ser administrada durante um período em que o(s) agente(s) terapêutico(s) adicional(is) exerce(m) seu(s) efeito(s) profilático(s) ou terapêutico(s), ou vice-versa. VI. Composição farmacêutica e administração

[146] A presente divulgação também apresenta composições/formulações farmacêuticas que contêm uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-LILRB3 aqui descrito. A composição pode ser formulada para uso em uma variedade de sistemas de distribuição de drogas. Um ou mais excipientes ou transportadores fisiologicamente aceitáveis também podem ser incluídos na composição para formulação adequada. Formulações adequadas para uso na presente divulgação são encontradas em Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed.,

1985. Para uma breve revisão dos métodos para distribuição de drogas, ver, por exemplo, Langer (Science 249: 1527-1533, 1990).

[147] Os anticorpos da presente divulgação podem existir em uma formulação liofilizada ou formulação farmacêutica aquosa líquida. O transportador aquoso de interesse aqui é aquele que é farmaceuticamente aceitável (seguro e não tóxico para administração a um humano) e é útil para a preparação de uma formulação líquida. Transportadores ilustrativos incluem água estéril para injeção (SWFI), água bacteriostática para injeção (BWFI), uma solução tamponada de pH (por exemplo, solução salina tamponada com fosfato), solução salina estéril, solução de Ringer ou solução de dextrose.

[148] Os anticorpos da presente divulgação podem existir em uma formulação liofilizada incluindo as proteínas e um lioprotetor. O lioprotetor pode ser açúcar, por exemplo, dissacarídeos. Em certas modalidades, o lioprotetor é sacarose ou maltose. A formulação liofilizada também pode incluir um ou mais de um agente tamponante, um surfactante, um agente de volume e/ou um conservante.

[149] Níveis de dosagem reais dos ingredientes ativos nas composições farmacêuticas desta invenção podem ser variados de modo a obter uma quantidade do ingrediente ativo que seja eficaz para atingir a resposta terapêutica desejada para um paciente, uma composição e um modo de administração particular, sem ser tóxico para o paciente. Ele pode ser administrado na faixa de 0,1 mg a 1 g e de preferência na faixa de 0,5 mg a 500 mg de anticorpo activo por administração para adultos. Alternativamente, a dose de um paciente pode ser adaptada ao peso corporal aproximado ou área de superfície do paciente. Outros fatores na determinação da dosagem apropriada podem incluir a doença ou condição a ser tratada ou prevenida, a severidade da doença, a rota de administração e a idade, sexo e condição médica do paciente. O refinamento adicional dos cálculos necessários para determinar a dosagem apropriada para tratamento é rotineiramente feito por aqueles versados na técnica, especialmente à luz das informações de dosagem e ensaios aqui divulgados. A dosagem também pode ser determinada através do uso de ensaios conhecidos para determinar dosagens utilizadas em conjunto com dados de dose-resposta apropriados. A dosagem de um paciente individual pode ser ajustada conforme o progresso da doença é monitorado. Níveis sanguíneos do construto ou complexo de alvo em um paciente podem ser medidos para ver se a dosagem precisa ser ajustada para atingir ou manter uma concentração eficaz. Farmacogenômica pode ser usada para determinar quais construtos e/ou complexos direcionáveis, e dosagens dos mesmos, são mais prováveis de serem eficazes para um dado indivíduo (Schmitz et al., Clinica Chimica Acta 308: 43-53, 2001; Steimer et al., Clinica Chimica Acta 308: 33-41, 2001).

[150] Doses podem ser administradas uma ou mais vezes ao dia,

semanalmente, mensalmente ou anualmente, ou mesmo uma vez a cada 2 a 20 anos. Os versados na técnica podem facilmente estimar taxas de repetição para dosagem com base em tempos de residência medidos e concentrações do construto ou complexo alvo em fluidos ou tecidos corporais. A administração da presente invenção pode ser intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, intramuscular, subcutânea, intrapleural, intratecal, intracavitária, por perfusão através de um cateter ou por injeção intralesional direta. Isso pode ser administrado uma ou mais vezes ao dia, uma ou mais vezes por semana, uma ou mais vezes por mês e uma ou mais vezes por ano.

EXEMPLOS

[151] A invenção agora sendo geralmente descrita, será mais prontamente compreendida por referência aos seguintes exemplos, que são incluídos apenas para fins de ilustração de certos aspectos e modalidades da presente invenção, e não se destinam a limitar a invenção. Exemplo 1 - Expressão de superfície de LILRB3 em subconjuntos de células hematopoiéticas

[152] Expressão de superfície de LILRB3 foi medida em vários subconjuntos hematopoiéticos na forma de representações de citometria de fluxo bidimensional (FCM) chamadas de gráficos de contorno de quantis (gráficos de probabilidade). Células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) de um doador humano saudável foram coradas com o anticorpo LILRB3 3A3, bem como anticorpos específicos para o subconjunto de células indicado. Gráficos da FIGURA 1A representam expressão de LILRB3 por células T CD3+CD4+ bloqueadas, células T CD3+CD8+ ou monócitos CD11b+. Na FIGURA 1B, sangue total fresco de um doador humano saudável foi corado como na FIGURA 1A. Os gráficos representam expressão de LILRB3 por células T CD3+CD4+ bloqueadas, células T CD3+CD8+, monócitos CD11b+ ou granulócitos CD11b+. Porcentagens de células bloqueadas e de células LILRB3+ dentro da população bloqueada são representadas dentro dos gráficos (primeiro e segundo números, respectivamente). Expressão de LILRB3 é demonstrada em monócitos e granulócitos, e baixa expressão de LILRB3 é demonstrada em células T CD4+ ou CD8+. Especificidade da coloração de LILRB3 foi determinada corando todos os subconjuntos de células acima com um anticorpo de controle de isotipo IgG1. Dados são representativos de vários experimentos independentes utilizando diferentes amostras de sangue humano. Exemplo 2 - O efeito de anticorpos LILRB3 ou proteína LILRB3-Fc na responsividade de células T em reações primárias de linfócitos mistos (MLR)

[153] Células T CD3+ [1x105 células, população efetora (E)] e monócitos CD14+ alogênicos irradiados (IR) [2x105 células, população de estimulador (S)] de doadores humanos saudáveis foram cocultivadas na presença ou ausência das quantidades indicadas de anticorpos de controle de isotipo IgG1 ou IgG2b, anticorpos LILRB3, proteína Fc ou proteína Fc-LILRB3. Após 3 dias, as células foram marcadas com 3H-timidina por mais 18 horas para medir proliferação de células T. O anticorpo LILRB3 7C5 e as proteínas LILRB3 Fc inibiram proliferação de células T (Fi 2). Dados mostrados são representativos de vários experimentos independentes utilizando diferentes pares de efetor/estimulador e são relatados como as contagens médias por minuto (cpm) ± erro padrão de poços em triplicata. Exemplo 3 - PBMC incubadas com anticorpo LILRB3 7C5 são incapazes de regular totalmente a expressão de superfície de marcadores de ativação em resposta à estimulação de células T

[154] PBMCs (2x105 células) de um doador humano saudável foram cultivadas na presença ou ausência de 7C5 ou anticorpo de controle de isotipo (20 µg/mL) e as quantidades indicadas de anticorpos anti-CD3 e anti-CD28. Após

24 horas, as células foram coradas com anticorpos específicos para o subconjunto de células indicado e marcadores de ativação. No Painel A, os gráficos representam expressão de CD69, CD25 e CD62L por células T CD3+CD4+ bloqueadas (FIGURA 3A). No Painel B, os gráficos representam expressão de CD69, CD25 e CD62L por células T CD3+CD8+ bloqueadas (FIGURA 3B). O anticorpo LILRB3 7C5 inibe a ativação de células T CD4+ e CD8+ por anticorpos anti-CD3 e anti-CD28, conforme mostrado pela expressão reduzida de CD69 (receptor de lectina C tipo II) e CD25 (receptor de IL-2), e liberação reduzida de CD62L (L-selectina). Dados são representativos de vários experimentos independentes utilizando diferentes amostras de PBMC humanas e são apresentados como a intensidade média de fluorescência (MFI) ± erro padrão de poços em triplicata. Exemplo 4 - Anticorpos LILRB3 alteram produção de citocina por PBMC em resposta à estimulação de célula T.

[155] PBMCs (2x105 células) de um doador humano saudável foram cultivadas na presença ou ausência de 7C5 ou anticorpo de controle de isotipo (20 µg/mL) e anticorpos anti-CD3 (1 ng/mL) e anti-CD28 (100 ng/mL). Após 24 horas, níveis de citocinas em sobrenadantes de cultura foram determinados por um Painel de Citocina Th Humana BioLegend LEGENDplex, por instruções de fabricante. Na presença de 7C5, o nível de certas citocinas, incluindo IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, IL-17 e IFNɣ foram diminuídos, enquanto o nível de IL-6, IL-10 e TNF foi aumentado (FIGURA 4). Dados são representativos de vários experimentos independentes utilizando diferentes amostras de PBMC humanas e são relatados como a mudança em vezes para 7C5 em relação ao anticorpo de controle de isotipo de poços em duplicata. Exemplo 5 - O anticorpo LILRB3 7C5 não causa liberação significativa de citocinas de sangue total não estimulado.

[156] Sangue fresco de doadores humanos saudáveis (n=4) foi diluído 4:1 com meio RPMI 1640 e cultivado por 4 horas na presença de 7C5 ou anticorpo de controle de isotipo (50 µg/mL). LPS (1 µg/mL) foi usado como um controle positivo. Níveis de citocinas em amostras de soro foram determinados por um Painel de Citocina Th BioLegend LEGENDplex Humana de acordo com instruções do fabricante. O anticorpo LILRB3 7C5 não apresentou efeito estimulador significativo na ausência de um estímulo do receptor de célula T (FIGURA 5). Dados são representativos de vários experimentos independentes e são relatados como a mudança em vezes média para 7C5 em relação ao anticorpo de controle de isotipo de poços em duplicata.

INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA

[157] Toda a divulgação de cada um dos documentos de patentes e artigos científicos aqui referenciados é incorporada por referência para todos os fins.

EQUIVALENTES

[158] A invenção pode ser incorporada em outras formas específicas sem se afastar do espírito ou das características essenciais da mesma. As modalidades anteriores, portanto, serão consideradas em todos os aspectos ilustrativas em vez de limitativas da invenção aqui descrita. O escopo da invenção é, assim, indicado pelas reivindicações anexas, em vez da descrição anterior, e todas as mudanças que venham dentro do significado e do alcance de equivalência das reivindicações serão incorporadas neste documento.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Anticorpo, caracterizado pelo fato de que compreende: a) uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2; b) uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4; c) uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; d) uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 8; e) uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 9 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 10; f) uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; g) uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 13 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14; h) uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 15 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 17 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18; j) uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 20; k) uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 21 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22; l) uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24; ou m) uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 26.

2. Anticorpo, caracterizado pelo fato de que compreende: a) uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 27, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 28, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 29, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 30, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 31 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 32; b) uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 33, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 34, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 35, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 36, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 37 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 38; c) uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 39, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 40, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 41, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 42, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 43 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 44;

d) uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 45, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 46, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 47, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 48, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 49 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 50; e) uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 51, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 52, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 53, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 54, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 55 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 56; f) uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 57, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 58, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 59, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 60, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 61 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 62; g) uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 63, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 64, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 65, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 66, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 67 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 68; h) uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 69, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 70, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 71, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 72, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 73 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 74; i) uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 75, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 76, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 77, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 78, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 79 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 80; j) uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 81, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 82, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 83, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 84, uma vlCDR2 compreendendo SEQ

ID NO: 85 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 86; k) uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 87, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 88, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 89, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 80, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 81 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 82; l) uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 93, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 94, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 95, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 96, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 97 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 98; ou m) uma vhCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 99, uma vhCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 100, uma vhCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 101, uma vlCDR1 compreendendo SEQ ID NO: 102, uma vlCDR2 compreendendo SEQ ID NO: 103 e uma vlCDR3 compreendendo SEQ ID NO: 104.

3. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o anticorpo liga LILRB3 humano.

4. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região constante com uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica a uma IgG humana.

5. Anticorpo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a IgG humana é selecionada a partir de um grupo consistindo em IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4.

6. Anticorpo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a IgG é uma IgG1.

7. Anticorpo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a IgG é uma IgG2.

8. Composição de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que codifica o anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7.

9. Composição de vetor de expressão, caracterizada pelo fato de que compreende a composição de ácido nucleico definida na reivindicação 8, em que o primeiro ácido nucleico está contido em um primeiro vetor de expressão e o segundo ácido nucleico está contido em um segundo vetor de expressão.

10. Composição de vetor de expressão, caracterizada pelo fato de que compreende a composição de ácido nucleico definida na reivindicação 8, em que o primeiro ácido nucleico e o segundo ácido nucleico estão contidos em um único vetor de expressão.

11. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende a composição de vetor de expressão definida na reivindicação 9 ou 10.

12. Método para preparar um anticorpo, caracterizado pelo fato de que compreende cultivar a célula hospedeira definida na reivindicação 11 sob condições em que o anticorpo é expresso e recuperar o anticorpo.

13. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7 e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.

14. Método para modular uma resposta imune em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito uma quantidade eficaz do anticorpo defindo em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou da composição definida na reivindicação 13.

15. Método para tratar câncer em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito uma quantidade eficaz do anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou da composição definida na reivindicação 13.

16. Método de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o câncer suprarregula LILRB3.

17. Método de acordo com a reivindicação 15 ou 16, caracterizado pelo fato de que o sujeito tem um alto nível de LILRB3 em células de câncer hematopoiéticas.

18. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 17, caracterizado pelo fato de que o câncer é leucemia.

19. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 17, caracterizado pelo fato de que o câncer é mieloma.

20. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 19, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é combinado com um ou mais agentes terapêuticos adicionais para tratar câncer.

21. Método de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que os agentes terapêuticos adicionais são outros inibidores de ponto de verificação imunes.

22. Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que os outros inibidores de ponto de verificação imunes são selecionados a partir do grupo consistindo em Ipilimumabe, Nivolumabe, Pembrolizumabe, Avelumabe, Durvalumabe e Atezolizumabe.

23. Método para tratar uma doença autoimune em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito uma quantidade eficaz do anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou da composição definida na reivindicação 13.

24. Método de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é combinado com um ou mais agentes terapêuticos adicionais para tratar doença autoimune.

25. Método para tratar inflamação alérgica em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito uma quantidade eficaz do anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou da composição definida na reivindicação 13.

26. Método de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é combinado com uma ou mais terapias adicionais para tratar inflamação alérgica.

27. Método para modular diferenciação de osteoclastos em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito uma quantidade eficaz do anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou da composição definida na reivindicação 13.

28. Método de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é combinado com uma ou mais terapias adicionais para modular diferenciação de osteoclastos.

FIGURA Células T Células T Monócitos Petição 870210084262, de 13/09/2021, pág. 79/83 1/5

FIGURA Células T Monócitos Granulócitos Células T

FIGURA

Contagens Médias por Minuto (cpm)

Petição 870210084262, de 13/09/2021, pág. 81/83

FIGURA Controle de Isotipo Não Tratado 3/5

FIGURA Controle de Isotipo Não Tratado

Petição 870210084262, de 13/09/2021, pág. 82/83 Mudança em Vezes para 7C5 Em Relação a Controle de Isotipo

FIGURA 4/5

Mudança em Vezes Média para 7C5 Petição 870210084262, de 13/09/2021, pág. 83/83 Em Relação a Controle de Isotipo 5/5

FIGURA