BR112021004926A2

BR112021004926A2 - piridazinonas e métodos de uso das mesmas

Info

Publication number: BR112021004926A2
Application number: BR112021004926-6A
Authority: BR
Inventors: Mark W. Ledeboer; Matthew H. Daniels; Maolin Yu; Jean-Christophe P. Harmange
Original assignee: Goldfinch Bio, Inc.
Priority date: 2018-09-18
Filing date: 2019-09-18
Publication date: 2021-06-01
Also published as: WO2020061162A1; US11046690B2; IL281438B2; EP3852533B1; US20200102301A1; EP3852533A1; DK3852533T3; MX2021003152A; CN112911935A; FI3852533T3; UY38377A; KR20210069652A; CA3113236A1; AU2019344928A1; ECSP21026485A; US20220024917A1; IL281438A; JP2022500359A; EP3852533A4; PH12021550443A1

Abstract

piridazinonas e métodos de uso das mesmas. a presente invenção refere-se a compostos de acordo com a fórmula (i) e composições farmacêuticas relacionadas. também são divulgados métodos terapêuticos, por exemplo, de tratamento de doenças renais, usando os compostos de fórmula (i). fórmula i

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “PIRIDA- ZINONAS E MÉTODOS DE USO DAS MESMAS”.

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade para o Pe- dido de Patente Provisório U.S. 62/732.728, depositado em 18 de se- tembro de 2018; e o Pedido de Patente Provisório U.S. 62/780.553, de- positado em 17 de dezembro de 2018; cada um dos quais é incorporado por referência neste documento em sua totalidade.

FUNDAMENTOS

[002] A proteinúria é uma condição em que uma quantidade ex- cessiva de proteínas no sangue vaza para a urina. A proteinúria pode progredir de uma perda de 30 mg de proteína na urina ao longo de um período de 24 horas (chamada microalbuminúria) a > 300 mg / dia (cha- mada de macroalbuminúria), antes de atingir níveis de 3,5 gramas de proteína ou mais em um período de 24 horas período, ou 25 vezes o valor normal. A proteinúria ocorre quando há um mau funcionamento nos glomérulos renais, fazendo com que o líquido se acumule no corpo (edema). Demonstrou-se que o vazamento prolongado de proteínas re- sulta em insuficiência renal. A síndrome nefrótica (NS) é responsável por aproximadamente 12% dos casos de doença renal em estágio ter- minal prevalente a um custo anual nos Estados Unidos de mais de U$ 3 bilhões. Aproximadamente 5 em cada 100.000 crianças são diagnos- ticadas com NS todos os anos e 15 em cada 100.000 crianças vivem com a doença hoje. Para pacientes que respondem positivamente ao tratamento, a frequência de recaídas é extremamente alta. Noventa % das crianças com Síndrome Nefrótica responderão ao tratamento, no entanto, cerca de 75% terão recidiva. Há necessidade de métodos mais eficazes de tratamento ou redução do risco de desenvolvimento de do- enças renais, por exemplo, proteinúria.

[003] As proteínas do canal TRP de mamífero formam seis canais permeáveis a cátions transmembranares que podem ser agrupados em seis subfamílias com base na homologia da sequência de aminoácidos (TRPC, TRPV, TRPM, TRPA, TRPP e TRPML). Estudos recentes de canais de TRP indicam que eles estão envolvidos em várias funções celulares fundamentais e são considerados como desempenhando um papel importante na fisiopatologia de muitas doenças. Muitos TRPs são expressos no rim ao longo de diferentes partes do néfron e evidências crescentes sugerem que esses canais estão envolvidos em distúrbios renais hereditários e adquiridos. TRPC6, TRPM6 e TRPP2 foram impli- cados na glomeruloesclerose segmentar focal hereditária (GESF), hipo- magnesemia com hipocalcemia secundária (HSH) e doença renal poli- cística (PKD), respectivamente.

[004] Também foi relatado que TRPC5 contribui para os mecanis- mos subjacentes à regulação das respostas de medo inato. (J Neurosci. 2014 Mar 5; 34(10): 3653–3667). Portanto, há uma necessidade de inibidores adicionais de TRPC5 ou TRPC4 ou ambos.

SUMÁRIO

[005] Esta invenção é baseada, pelo menos em parte, na desco- berta de que o Canal de Cátion de Potencial Receptor Transiente, sub- família C, membro 5 (TRPC5), abole as fibras de estresse de actina e diminui a formação de adesão focal, tornando um fenótipo podocítico migratório móvel.

[006] Um aspecto da invenção são compostos que são antagonis- tas de TRPC5 ou TRPC4 ou ambos. Em algumas modalidades, o com- posto da invenção é um composto de fórmula estrutural I: (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que: “---” é uma ligação simples ou dupla X1 é CH ou N; quando “---” é uma ligação dupla, X2 é CH ou N; quando “---” é uma ligação simples, X2 é N(CH3), quando X1 é CH, X2 é N ou N(CH3); Y é -O-, -N(CH3)-, -N(CH2CH2OH)-, ciclopropan-1,1-di-ila, ou -CH(CH3)- ; Q é 2-trifluorometil-4-fluorofenila, 2-difluorometil-4-fluorofe- nila, 2-trifluorometilfenila, 2-metil-4-fluorofenila, 2-cloro-4-fluorofenila, 2- clorofenila, 1-(benzil)-4-metilpiperidin-3-ila, 4-trifluorometilpiridin-3-ila, 2-trifluorometil-6-fluorofenila, 2-trifluorometil-3-cianofenila, 2-etil-3-fluo- rofenila, 2-cloro-3-cianofenila, 2-trifluorometil- 5-fluorofenila ou 2-difluo- rometilfenila; R3 é hidrogênio, -CH2OH, -CH(OH)-CH2OH, -NH2, - CH(OH)CH3, -OCH3, ou -NH-(CH2)2OH; e quando “---” é uma ligação dupla, R4 está ausente; e quando “---” é uma ligação dupla, R3 e R4 são tomados jun- tos para formar = O; e cada um de R5 e R6 é independentemente hidrogênio ou - CH3, desde que se X1 for N, X2 é N, Y é -O- ou -N(CH3)-, e Q é 2-trifluorome- tilfenila, então pelo menos um de R3, R5, e R6 não é hidrogênio.

[007] Em algumas modalidades, o composto da invenção é repre- sentado pela fórmula estrutural II: (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,

em que: R1 é cloro, -CF3, -CHF2, ou -CH3; R2 é hidrogênio ou fluoro; e R3 é hidrogênio, -NH2, -CH2OH, ou CH(OH)-CH2OH.

[008] Em um aspecto, a invenção apresenta uma composição far- macêutica que compreende um composto da invenção e um transpor- tador farmaceuticamente aceitável.

[009] Em um aspecto, a invenção se refere a métodos de trata- mento ou redução do risco de desenvolver uma doença ou condição selecionada de doença renal, hipertensão arterial pulmonar, ansiedade, depressão, câncer, retinopatia diabética ou dor, compreendendo admi- nistrar a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade tera- peuticamente eficaz do composto ou da composição. Em algumas mo- dalidades, a doença é doença renal, ansiedade, depressão, câncer ou retinopatia diabética. Em algumas modalidades, a doença ou condição é doença renal selecionada de Glomeruloesclerose Focal Segmental (FSGS), Nefropatia diabética, síndrome de Alport, doença renal hiper- tensiva, síndrome nefrótica, síndrome nefrótica resistente a esteroides, doença de alteração mínima, nefropatia membranosa, nefropatia mem- branosa idiopática, glomerulonefrite membranoproliferativa (MPGN), MPGN mediada por imunocomplexos, MPGN mediada por comple- mento, nefrite lúpica, glomerulonefrite pós-infecciosa, doença da mem- brana basal fina, glomerulonefrite proliferativa mesangial, amiloidose (primária), nefropatia c1q, GN rapidamente progressiva, doença anti- GBM, glomerulonefrite C3, nefroesclerose hipertensiva ou nefropatia por IgA. Em algumas modalidades, a doença renal é uma doença renal proteinúrica. Em algumas modalidades, a doença renal é doença renal microalbuminuria ou macroalbuminuria. Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tratada é a hipertensão arterial pulmonar. Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tratada é a dor sele- cionada de dor neuropática e dor visceral.

[0010] Em algumas modalidades, a doença ou condição é câncer selecionado de carcinoma de mama quimiorresistente, câncer de mama resistente à adriamicina, câncer colorretal quimiorresistente, medulo- blastoma e angiogênese tumoral.

[0011] Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tra- tada é FSGS relacionada ao transplante, síndrome nefrótica relacionada ao transplante, proteinúria relacionada ao transplante, doença hepática colestática, doença renal policística, doença renal policística autossô- mica dominante (ADPKD), obesidade, resistência à insulina, Diabetes tipo II, pré-diabetes, síndrome metabólica, doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD) ou esteato-hepatite não alcoólica (NASH).

[0012] Os métodos são eficazes para uma variedade de indivíduos, incluindo mamíferos, por exemplo, seres humanos e outros animais, como animais de laboratório, por exemplo, camundongos, ratos, coe- lhos ou macacos, ou animais domésticos e de fazenda, por exemplo, gatos, cães, cabras, ovelhas , porcos, vacas ou cavalos.

[0013] A invenção oferece várias vantagens. Os métodos profiláti- cos e terapêuticos aqui descritos são eficazes no tratamento de doenças renais, por exemplo, proteinúria, e têm efeitos colaterais mínimos, se houver. Além disso, os métodos aqui descritos são eficazes para iden- tificar compostos que tratam ou reduzem o risco de desenvolver uma doença renal, ansiedade, depressão ou câncer.

[0014] Salvo definição em contrário, todos os termos técnicos e ci- entíficos utilizados neste documento têm o mesmo significado como co- mumente entendido por um versado na técnica à qual esta invenção pertence. Embora os métodos e materiais semelhantes ou equivalentes aos descritos neste documento possam ser usados na prática ou teste da presente invenção, os métodos e materiais adequados são descritos a seguir. Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes e outras referências mencionadas neste documento estão incorporadas para re- ferência em suas totalidades. Em caso de conflito, o presente relatório descritivo, incluindo definições, servirá de base para controle. Além disso os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não pretendem ser limitativos.

[0015] Outras características, objetos e vantagens da invenção se- rão evidentes a partir da descrição detalhada e das reivindicações.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0016] A Figura 1 mostra a excreção de albumina em ratos com lesão de PAN tratados com o composto 100 ou mizoribina.

[0017] A Figura 2 mostra os dados da razão de creatinina da pro- teína na urina em ratos transgênicos AT1R tratados com o composto 100 em comparação com o veículo, com infusão de AngII.

[0018] A Figura 3 mostra os dados da taxa de creatinina da proteína na urina apresentados na Figura 2 expressos como porcentagem da li- nha de base.

DESCRIÇÃO DETALHADA Definições

[0019] O termo "acila” é reconhecido na técnica e refere-se a um grupo representado pela fórmula geral hidrocarbilC(O)-, de preferência alquilC(O)-.

[0020] O termo "acilamino" é reconhecido na técnica e refere-se a um grupo amino substituído por um grupo acila e pode ser representado, por exemplo, pela fórmula hidrocarbilC(O)NH-.

[0021] O termo "aciloxi" é reconhecido na técnica e refere-se a um grupo representado pela fórmula geral hidrocarbilC(O)O-, preferencial- mente alquilC(O)O-.

[0022] O termo "alcoxi" se refere a um grupo alquila, de preferência um grupo alquila inferior, tendo um oxigênio ligado ao mesmo. Os gru- pos alcóxi representativos incluem metóxi, trifluorometóxi, etóxi, pro- póxi, terc-butóxi e semelhantes.

[0023] O termo "alcoxialquila” refere-se a um grupo alquil substitu- ído por um grupo alcóxi e pode ser representado pela fórmula geral al- quil-O-alquila.

[0024] O termo "alquenila”, como utilizado neste documento, refere- se a um grupo alifático contendo pelo menos uma ligação dupla e se destina a incluir tanto "alquenis não substituídos" quanto "alquenis subs- tituídos", o último dos quais se refere a frações de alquenil tendo subs- tituintes que substituem um hidrogênio em um ou mais carbonos do grupo alquenila. Esses substituintes podem ocorrer em um ou mais car- bonos que estão incluídos ou não incluídos em uma ou mais ligações duplas. Além disso, tais substituintes incluem todos aqueles contempla- dos para grupos alquila, como discutido abaixo, exceto onde a estabili- dade é proibitiva. Por exemplo, a substituição de grupos alquenil por um ou mais grupos alquila, carbociclila, arila, heterociclila ou heteroarila é contemplada.

[0025] Um grupo "alquila” ou "alcano" é um hidrocarboneto não aro- mático de cadeia linear ou ramificada que é completamente saturado. Tipicamente, um grupo alquila de cadeia linear ou ramificada tem de 1 a cerca de 20 átomos de carbono, preferencialmente de 1 a cerca de 10 a menos que definido de outra forma. Exemplos de grupos alquila de cadeia linear e ramificada incluem metila, etila, n-propila, éo-propila, n- butila, sec-butila, terc-butila, pentila, hexila, pentila e octila. Um grupo C1-C6 alquil de cadeia linear ou ramificada também é referido como um grupo "alquila inferior".

[0026] Além disso, o termo "alquila” (ou "alquila inferior"), conforme usado ao longo do relatório descritivo, exemplos e reivindicações, pre- tende incluir tanto "alquis não substituídos" quanto "alquis substituídos",

o último dos quais se refere a frações alquil tendo substituintes substi- tuindo um hidrogênio em um ou mais carbonos da espinha dorsal do hidrocarboneto. Tais substituintes, se não for especificado de outra forma, podem incluir, por exemplo, um halogênio (por exemplo, fluoro), uma hidroxila, uma carbonila (como uma carboxila, uma alcoxicarbonila, uma formila ou uma acila), uma tiocarbonila (como um tioéster, um tio- acetato ou um tioformato), um alcóxi, uma fosforila, um fosfato, um fos- fonato, um fosfinato, um amino, um amido, uma amidina, uma imina, um ciano, um nitro, um azido, uma sulfidrila, um alquiltio, um sulfato, um sulfonato, uma sulfamoila, um sulfonamido, uma sulfonila, uma hetero- ciclila, uma aralquila ou uma fração aromática ou heteroaromática. Em modalidades preferidas, os substituintes em alquis substituídos são se- lecionados de C1-6 alquila, C3-6 cicloalquila, halogênio, carbonila, ciano ou hidroxila. Em modalidades mais preferidas, os substituintes em alquis substituídos são selecionados de fluoro, carbonila, ciano ou hidroxila. Será entendido por aqueles versados na técnica que as frações substi- tuídas na cadeia de hidrocarboneto podem ser substituídas, se apropri- ado. Por exemplo, os substituintes de um alquil substituído podem incluir formas substituídas e não substituídas de amino, azido, imino, amido, fosforila (incluindo fosfonato e fosfinato), sulfonila (incluindo sulfato, sul- fonamido, sulfamoila e sulfonato) e grupos silila, também como éteres, alquiltios, carbonis (incluindo cetonas, aldeídos, carboxilatos e ésteres), -CF3, -CN e semelhantes. Alquis substituídos exemplificativos são des- critos abaixo. Os cicloalquis podem ser ainda substituídos por alquis, alquenis, alcoxis, alquiltios, aminoalquis, alquis substituídos por car- boinila, -CF3, -CN, e semelhantes.

[0027] A menos que especificado de outra forma, "alquileno" por si só ou como parte de outro substituinte se refere a um grupo divalente saturado de cadeia linear ou ramificada tendo o número declarado de átomos de carbono e derivado da remoção de dois átomos de hidrogê- nio do alcano correspondente. Exemplos de grupos alquileno de cadeia linear e ramificada incluem –CH2- (metileno), -CH2-CH2- (etileno), -CH2- CH2-CH2- (propileno), -C(CH3)2-, -CH2-CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-CH2-, - CH2-CH2-CH2-CH2-CH2- (pentileno), -CH2-CH(CH3)-CH2-, e -CH2- C(CH3)2-CH2-.

[0028] O termo "Cx-y", quando usado em conjunto com uma fração química, tal como acila, acilóxi, alquila, alquenila, alquinila ou alcóxi, pre- tende incluir grupos que contêm de x a y carbonos na cadeia. Por exem- plo, o termo “Cx-y alquila”; refere-se a grupos de hidrocarbonetos satu- rados substituídos ou não substituídos, incluindo grupos alquila de ca- deia linear e grupos alquila de cadeia ramificada que contêm de x a y carbonos na cadeia, incluindo grupos haloalquila. Os grupos haloalquil preferidos incluem trifluorometila, difluorometila, 2,2,2-trifluoroetila e pentafluoroetila. C0 alquil indica um hidrogênio onde o grupo está em uma posição terminal, uma ligação se interna. Os termos “C2-y alquenila” e “C2-y alquinila” referem-se a grupos alifáticos insaturados substituídos ou não substituídos análogos em comprimento e possível substituição aos alquis descritos acima, mas que contêm pelo menos uma ligação dupla ou tripla, respectivamente.

[0029] O termo "alquilamino", como utilizado neste documento re- fere-se a um grupo amino substituído por pelo menos um grupo alquila.

[0030] O termo "alquiltio", como utilizado neste documento, refere- se a um grupo tiol substituído por um grupo alquila e pode ser represen- tado pela fórmula geral alquilS-.

[0031] O termo "alquinila”, como utilizado neste documento, refere- se a um grupo alifático contendo pelo menos uma ligação tripla e se destina a incluir tanto "alquinis não substituídos" quanto "alquinis subs- tituídos", o último dos quais se refere a frações de alquinil tendo substi- tuintes que substituem um hidrogênio em um ou mais carbonos do grupo alquinila. Esses substituintes podem ocorrer em um ou mais carbonos que estão incluídos ou não incluídos em uma ou mais ligações triplas. Além disso, tais substituintes incluem todos aqueles contemplados para grupos alquila, como discutido acima, exceto onde a estabilidade é pro- ibitiva. Por exemplo, a substituição de grupos alquinil por um ou mais grupos alquila, carbociclila, arila, heterociclila ou heteroarila é contem- plada.

[0032] O termo "amida", como utilizado neste documento, refere-se a um grupo em que cada RA representa independentemente um grupo de hidrogê- nio ou hidrocarbila, ou dois RA são tomados em conjunto com o átomo N ao qual estão ligados, completam um heterociclo tendo de 4 a 8 áto- mos na estrutura do anel.

[0033] Os termos "amina" e "amino" são reconhecidos na técnica e referem-se a aminas substituídas e não substituídas e sais dos mesmos, por exemplo, uma fração que pode ser representada por ou em que cada RA representa independentemente um grupo de hidrogê- nio ou hidrocarbila, ou dois RA são tomados em conjunto com o átomo N ao qual estão ligados, completam um heterociclo tendo de 4 a 8 áto- mos na estrutura do anel.

[0034] O termo "aminoalquila”, como utilizado neste documento, re- fere-se a um grupo alquil substituído por um grupo amino.

[0035] O termo "aralquila”, como utilizado neste documento, refere- se a um grupo alquil substituído por um grupo arila.

[0036] O termo "arila”, como utilizado neste documento, inclui gru- pos aromáticos de anel único substituídos ou não substituídos em que cada átomo do anel é carbono. De preferência, o anel é um anel de 6 ou 10 membros, mais preferencialmente um anel de 6 membros. O termo "arila” também inclui sistemas de anel policíclicos tendo dois ou mais anéis cíclicos, nos quais dois ou mais carbonos são comuns aos dois anéis adjacentes em que pelo menos um dos anéis é aromático, por exemplo, os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquis, cicloalque- nis, aris, heteroaris e / ou heterociclis. Os grupos aril incluem benzeno, naftaleno, fenantreno, fenol, anilina e semelhantes.

[0037] O termo "carbamato" é reconhecido na técnica e se refere a um grupo ou em que cada RA representa independentemente hidrogênio ou um grupo hidrocarbila, tal como um grupo alquila, ou ambos RA tomados em con- junto com o(s) átomo(s) interveniente(s) completam um heterociclo tendo de 4 a 8 átomos na estrutura do anel.

[0038] Os termos "carbociclo" e "carbocíclico", como utilizados neste documento, referem-se a um anel saturado ou insaturado no qual cada átomo do anel é carbono. O termo carbociclo inclui carbociclos aromáticos e carbociclos não aromáticos. Os carbociclos não aromáti- cos incluem os anéis cicloalcano, nos quais todos os átomos de carbono estão saturados, e os anéis cicloalqueno, que contêm pelo menos uma ligação dupla. "Carbociclo" inclui anéis monocíclicos de 5 a 7 membros e anéis bicíclicos de 8 a 12 membros. Cada anel de um carbociclo bicí- clico pode ser selecionado a partir de anéis saturados, insaturados e aromáticos. Carbociclo inclui moléculas bicíclicas nas quais um, dois ou três ou mais átomos são compartilhados entre os dois anéis. O termo "carbociclo fundido" refere-se a um carbociclo bicíclico no qual cada um dos anéis compartilha dois átomos adjacentes com o outro anel. Cada anel de um carbociclo fundido pode ser selecionado a partir de anéis saturados, insaturados e aromáticos. Em uma modalidade exemplifica- tiva, um anel aromático, por exemplo, fenila, pode ser fundido a um anel saturado ou insaturado, por exemplo, ciclo-hexano, ciclopentano ou ci- clo-hexeno. Qualquer combinação de anéis bicíclicos saturados, insatu- rados e aromáticos, conforme a valência permite, está incluída na defi- nição de carbocíclico. "Carbociclos" exemplificativos incluem ciclopen- tano, ciclo-hexano, biciclo[2.2.1]heptano, 1,5-ciclo-octadieno, 1,2,3,4- tetra-hidronaftaleno, biciclo[4.2.0]oct-3-eno, naftaleno e adamantano. Carbociclos fundidos exemplificativos incluem decalina, naftaleno, 1,2,3,4-tetra-hidronaftaleno, biciclo[4.2.0]octano, 4,5,6,7-tetra-hidro-1H- indeno e biciclo[4.1.0]hept-3- ene. "Carbociclos" podem ser substituídos em qualquer uma ou mais posições capazes de conter um átomo de hidrogênio.

[0039] Um grupo "cicloalquila” é um hidrocarboneto cíclico que está completamente saturado. "Cicloalquila” inclui anéis monocíclicos e bicí- clicos. Normalmente, um grupo cicloalquil monocíclico tem de 3 a cerca de 10 átomos de carbono, mais tipicamente de 3 a 8 átomos de carbono, a menos que definido de outra forma. O segundo anel de um cicloalquil bicíclico pode ser selecionado de anéis saturados, insaturados e aromá- ticos. Cicloalquil inclui moléculas bicíclicas nas quais um, dois ou três ou mais átomos são compartilhados entre os dois anéis. O termo "ciclo- alquil fundido" refere-se a um cicloalquil bicíclico no qual cada um dos anéis compartilha dois átomos adjacentes com o outro anel. O segundo anel de um cicloalquil bicíclico fundido pode ser selecionado de anéis saturados, insaturados e aromáticos. Um grupo "cicloalquenila” é um hidrocarboneto cíclico contendo uma ou mais ligações duplas.

[0040] O termo "carbociclilalquila”, como utilizado neste documento, refere-se a um grupo alquil substituído por um grupo carbociclo.

[0041] O termo "carbonato" é reconhecido na técnica e se refere a um grupo -OCO2-RA, em que RA representa um grupo hidrocarbila.

[0042] O termo "carboxi", como utilizado neste documento, refere- se a um grupo representado pela fórmula -CO2H.

[0043] O termo "éster", como utilizado neste documento, refere-se a um grupo -C(O)ORA em que RA representa um grupo hidrocarbila.

[0044] O termo "éter", como utilizado neste documento, refere-se a um grupo hidrocarbil ligado por meio de um oxigênio a outro grupo hi- drocarbila. Consequentemente, um substituinte éter de um grupo hidro- carbil pode ser hidrocarbil-O-. Os éteres podem ser simétricos ou assi- métricos. Exemplos de éteres incluem, mas não estão limitados a, he- terociclo-O-heterociclo e aril-O-heterociclo. Os éteres incluem grupos "alcoxialquila”, que podem ser representados pela fórmula geral alquil- O-alquila.

[0045] Os termos "halo" e "halogênio", como utilizado neste docu- mento significam halogênio e incluem cloro, fluoro, bromo e iodo.

[0046] Os termos "hetaralquila” e "heteroaralquila”, como utilizado neste documento, referem-se a um grupo alquil substituído por um grupo hetarila.

[0047] O termo "heteroalquila”, como utilizado neste documento, re- fere-se a uma cadeia saturada ou insaturada de átomos de carbono e pelo menos um heteroátomo, em que não há dois heteroátomos adja- centes.

[0048] Os termos "heteroarila” e "hetarila” incluem estruturas de anel único aromáticas substituídas ou não substituídas, de preferência anéis de 5 a 7 membros, mais preferencialmente anéis de 5 a 6 mem- bros, cujas estruturas de anel incluem pelo menos um heteroátomo, de preferência um a quatro heteroátomos, mais preferencialmente um ou dois heteroátomos. Os termos "heteroarila” e "hetarila” também inclui sistemas de anel policíclicos tendo dois ou mais anéis cíclicos, nos quais dois ou mais carbonos são comuns aos dois anéis adjacentes em que pelo menos um dos anéis é heteroaromático, por exemplo, os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquis, cicloalquenis, aris, heteroaris e / ou heterociclis. Os grupos heteroaril incluem, por exemplo, pirrol, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, pirazol, piridina, pirazina, piridazina e pirimidina e semelhantes.

[0049] O termo "heteroátomo", como utilizado neste documento, significa um átomo de qualquer elemento diferente de carbono ou hidro- gênio. Os heteroátomos preferidos são nitrogênio, oxigênio e enxofre.

[0050] Os termos "heterociclila”, "heterociclo" e "heterocíclico" refe- rem-se a estruturas de anel não aromáticas substituídas ou não substi- tuídas, de preferência anéis de 3 a 10 membros, mais preferencialmente anéis de 3 a 7 membros, cujas estruturas de anel incluem pelo menos um heteroátomo, preferencialmente um a quatro heteroátomos, mais preferencialmente um ou dois heteroátomos. Os termos "heterociclila” e "heterocíclico" também inclui sistemas de anel policíclicos tendo dois ou mais anéis cíclicos, nos quais dois ou mais carbonos são comuns aos dois anéis adjacentes em que pelo menos um dos anéis é heterocíclico, por exemplo, os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquis, cicloalque- nis, aris, heteroaris e / ou heterociclis. Os grupos heterociclil incluem, por exemplo, piperidina, piperazina, pirrolidina, tetra-hidropirano, tetra- hidrofurano, morfolina, lactonas, lactamas e semelhantes.

[0051] O termo “heterociclilalquila” ou “heterocicloalquila”, como uti- lizado neste documento, refere-se a um grupo alquil substituído por um grupo heterociclo.

[0052] O termo "hidrocarbila”, como utilizado neste documento, re- fere-se a um grupo que está ligado através de um átomo de carbono que não tem um substituinte = O ou = S e, normalmente, tem pelo me- nos uma ligação carbono-hidrogênio e uma estrutura principal de car- bono, mas pode incluir opcionalmente heteroátomos. Assim, grupos como metila, etoxietila, 2-piridila e trifluorometil são considerados hidro- carbil para os fins deste pedido, mas substituintes como acetila (que tem um substituinte = O na ligação de carbono) e etóxi (que está ligado por oxigênio, não carbono), não. Os grupos hidrocarbil incluem, mas não estão limitados a arila, heteroarila, carbociclo, heterociclila, alquila, al- quenila, alquinila e combinações dos mesmos.

[0053] O termo "hidroxialquila”, como utilizado neste document, re- fere-se a um grupo alquil substituído por um grupo hidróxi.

[0054] O termo "inferior", quando usado em conjunto com uma fra- ção química, tal como acila, acilóxi, alquila, alquenila, alquinila ou alcóxi, pretende incluir grupos onde há dez ou menos átomos de não hidrogê- nio no substituinte, de preferência seis ou menos. Um "alquila inferior", por exemplo, refere-se a um grupo alquil que contém dez ou menos áto- mos de carbono, de preferência seis ou menos. Em certas modalidades, os substituintes acila, acilóxi, alquila, alquenila, alquinila ou alcóxi defi- nidos neste documento são, respectivamente, acila inferior, acilóxi infe- rior, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila inferior ou alcóxi inferior, quer apareçam sozinhos ou em combinação com outros substituintes, tal como nas recitações hidroxialquila e aralquila (caso em que, por exemplo, os átomos dentro do grupo aril não são contados ao contar os átomos de carbono no substituinte alquila).

[0055] Os termos "policiclila”, "policiclo" e "policíclico" referem-se a dois ou mais anéis (por exemplo, cicloalquis, cicloalquenis, aris, hetero- aris e / ou heterociclis) em que dois ou mais átomos são comuns a dois anéis adjacentes, por exemplo, os anéis são “anéis fundidos”. Cada um dos anéis do policiclo pode ser substituído ou não substituído. Em certas modalidades, cada anel do policiclo contém de 3 a 10 átomos no anel, de preferência de 5 a 7.

[0056] O termo "silila” refere-se a uma fração de silício com três fra- ções de hidrocarbil a ela ligadas.

[0057] O termo "substituído" refere-se a frações com substituintes que substituem um hidrogênio em um ou mais carbonos da espinha dor- sal.

Será compreendido que "substituição" ou "substituído por" inclui a condição implícita de que tal substituição está de acordo com a valência permitida do átomo substituído e do substituinte, e que a substituição resulta em um composto estável, por exemplo, que não sofre esponta- neamente transformação, como por rearranjo, ciclização, eliminação, etc.

Como utilizado neste documento, o termo "substituído" é contem- plado para incluir todos os substituintes permissíveis de compostos or- gânicos, a menos que indicado de outro modo.

Em um aspecto amplo, os substituintes permissíveis incluem substituintes acíclicos e cíclicos, ramificados e não ramificados, carbocíclicos e heterocíclicos, aromáti- cos e não aromáticos de compostos orgânicos.

Os substituintes permis- síveis podem ser um ou mais e os mesmos ou diferentes para compos- tos orgânicos apropriados.

Para os propósitos desta invenção, os hete- roátomos, tais como nitrogênio podem ter substituintes de hidrogênio e/ou quaisquer substituintes admissíveis de compostos orgânicos des- critos neste documento, os quais satisfazem as valências dos heteroá- tomos.

Os substituintes podem incluir quaisquer substituintes aqui des- critos, por exemplo, um halogênio, uma hidroxila, uma carbonila (como uma carboxila, uma alcoxicarbonila, uma formila ou uma acila), uma ti- ocarbonila (como um tioéster, um tioacetato ou um tioformato), um alcóxi, uma fosforila, um fosfato, um fosfonato, um fosfinato, um amino, um amido, uma amidina, uma imina, um ciano, um nitro, um azido, uma sulfidrila, um alquiltio, um sulfato, um sulfonato, uma sulfamoila, um sul- fonamido, uma sulfonila, uma heterociclila, uma aralquila ou uma fração aromática ou heteroaromática.

Em modalidades preferidas, os substi- tuintes em alquis substituídos são selecionados de C1-6 alquila, C3-6 ci- cloalquila, halogênio, carbonila, ciano ou hidroxila.

Em modalidades mais preferidas, os substituintes em alquis substituídos são seleciona- dos de fluoro, carbonila, ciano ou hidroxila. Será entendido por aqueles versados na técnica que os substituintes podem ser substituídos, se apropriado. A menos que seja especificamente indicado como "não substituído", entende-se que as referências a frações químicas aqui in- cluídas incluem variantes substituídas. Por exemplo, a referência a um grupo ou fração "arila” inclui implicitamente variantes substituídas e não substituídas.

[0058] O termo "sulfato" é reconhecido na técnica e refere-se ao grupo -OSO3H, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0059] O termo "sulfonamida" é reconhecido na técnica e refere-se ao grupo representado pelas fórmulas gerais ou em que cada RA representa independentemente hidrogênio ou hidrocar- bila, tal como alquila, ou ambos RA tomados em conjunto com o(s) átomo(s) interveniente(s) completam um heterociclo tendo de 4 a 8 áto- mos na estrutura do anel.

[0060] O termo "sulfóxido" é reconhecido na técnica e refere-se ao grupo -S(O)-RA, em que RA representa um hidrocarbila.

[0061] O termo "sulfonato" é reconhecido na técnica e refere-se ao grupo SO3H, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0062] O termo "sulfona" é reconhecido na técnica e refere-se ao grupo -S(O)2-RA, em que RA representa um hidrocarbila.

[0063] O termo "tioalquila”, como utilizado neste documento, refere- se a um grupo alquil substituído por um grupo tiol.

[0064] O termo "tioéster", como utilizado neste documento, refere- se a um grupo -C(O)SRA or -SC(O)RA em que RA representa um hidro- carbila.

[0065] O termo "tioéter", como utilizado neste documento, é equiva- lente a um éter, em que o oxigênio é substituído por um enxofre.

[0066] O termo “ureia” é reconhecido na técnica e pode ser repre- sentado pela fórmula geral em que cada RA representa independentemente hidrogênio ou um hi- drocarbila, tal como alquila, ou qualquer ocorrência de RA em conjunto com outro e o(s) átomo(s) interveniente(s) completam um heterociclo tendo de 4 a 8 átomos na estrutura do anel.

[0067] "Grupo de proteção" refere-se a um grupo de átomos que, quando ligados a um grupo funcional reativo em uma molécula, mas- cara, reduz ou impede a reatividade do grupo funcional. Normalmente, um grupo de proteção pode ser removido seletivamente conforme de- sejado durante o curso de uma síntese. Exemplos de grupos de prote- ção podem ser encontrados em Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 3rd Ed., 1999, John Wiley & Sons, NY and Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Vols. 1-8, 1971-1996, John Wiley & Sons, NY. Grupos de proteção de nitrogênio representati- vos incluem, mas não estão limitados a, formila, acetila, trifluoroacetila, benzila, benziloxicarbonila ("CBZ") terc-butoxicarbonila ("Boc"), trimetil- silila ("TMS"), 2-trimetilsilil-etanossulfonila ("TES"), grupos tritila e tritil substituído, aliloxicarbonila, 9-fluorenilmetiloxicarbonila ("FMOC"), nitro- veratrililoxicarbonila ("NVOC") e semelhantes. Os grupos de proteção de hidroxil representativos incluem, mas não estão limitados a, aqueles em que o grupo hidroxila é acilado (esterificado) ou alquilado, como éte- res de benzila e tritila, bem como éteres de alquila, éteres de tetra-hi- dropiranila, éteres de trialquilsilila (por exemplo, grupos TMS ou TIPS), éteres de glicol, tais como etileno glicol e derivados de propileno glicol e éteres alílicos.

[0068] Como utilizado neste documento, um agente terapêutico que "previne" ou "reduz o risco de desenvolver" uma doença, distúrbio ou condição se refere a um composto que, em uma amostra estatística, reduz a ocorrência da doença, distúrbio ou condição na amostra tratada em relação a uma amostra de controle não tratada, ou atrasa o início ou reduz a gravidade de um ou mais sintomas do distúrbio ou condição em relação à amostra de controle não tratada.

[0069] O termo "tratamento" inclui tratamentos profiláticos e/ou te- rapêuticos. O termo tratamento "profilático ou terapêutico" é reconhe- cido na técnica e inclui a administração ao hospedeiro de uma ou mais das composições em questão. Se ele for administrado antes da mani- festação clínica da condição indesejada (por exemplo, doença ou outro estado indesejado do animal hospedeiro), o tratamento é profilático (isto é, protege o hospedeiro contra o desenvolvimento da condição indese- jada); ao passo que, se ele for administrado após manifestação da con- dição indesejada, o tratamento é terapêutico (ou seja, se destina a dimi- nuir, melhorar ou estabilizar a condição indesejada existente ou os efei- tos colaterais da mesma).

[0070] As frases "administração conjunta" e "administrado conjun- tamente" se referem a qualquer forma de administração de dois ou mais compostos terapêuticos diferentes, de modo que o segundo composto seja administrado enquanto o composto terapêutico administrado ante- riormente ainda é eficaz no corpo (por exemplo, os dois compostos são simultaneamente eficazes no paciente, o que pode incluir efeitos sinér- gicos dos dois compostos). Por exemplo, os diferentes compostos tera- pêuticos podem ser administrados na mesma formulação ou em uma formulação separada, concomitantemente ou sequencialmente. Em cer- tas modalidades, os diferentes compostos terapêuticos podem ser ad- ministrados dentro de uma hora, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas, 72 horas ou uma semana um do outro. Assim, um indivíduo que recebe esse tratamento pode se beneficiar de um efeito combinado de diferen- tes compostos terapêuticos.

[0071] O termo "pró-fármaco" se destina a abranger compostos que, sob condições fisiológicas, são convertidos nos agentes terapeuti- camente ativos da presente invenção. Um método comum para fazer uma pró-fármaco é incluir uma ou mais frações selecionadas que são hidrolisadas sob condições fisiológicas para revelar a molécula dese- jada. Em outras modalidades, a pró-fármaco é convertida por uma ativi- dade enzimática do animal hospedeiro. Por exemplo, ésteres ou carbo- natos (por exemplo, ésteres ou carbonatos de álcoois ou ácidos carbo- xílicos) são pró-fármacos preferidas da presente invenção. Em certas modalidades, alguns ou todos os compostos da invenção em uma for- mulação representada acima podem ser substituídos pela pró-fármaco adequada correspondente (por exemplo, em que um hidroxil no com- posto parental é apresentado como um éster ou um carbonato ou ácido carboxílico presente no composto parental é apresentado como um és- ter).

[0072] Como utilizado neste documento, "moléculas pequenas" re- fere-se a pequenas moléculas orgânicas ou inorgânicas de peso mole- cular abaixo de cerca de 3.000 Daltons. Em geral, as moléculas peque- nas úteis para a invenção têm um peso molecular inferior a 3.000 Dal- tons (Da). As moléculas pequenas podem ser, por exemplo, de pelo me- nos cerca de 100 Da a cerca de 3.000 Da (por exemplo, entre cerca de 100 a cerca de 3.000 Da, cerca de 100 a cerca de 2500 Da, cerca de 100 a cerca de 2.000 Da, cerca de 100 a cerca de 1.750 Da, cerca de 100 a cerca de 1.500 Da, cerca de 100 a cerca de 1.250 Da, cerca de 100 a cerca de 1.000 Da, cerca de 100 a cerca de 750 Da, cerca de 100 a cerca de 500 Da, cerca de 200 a cerca de 1500, cerca de 500 a cerca de 1000, cerca de 300 a cerca de 1000 Da, ou cerca de 100 a cerca de 250 Da).

[0073] Em algumas modalidades, uma "molécula pequena" refere- se a um composto orgânico, inorgânico ou organometálico tipicamente com um peso molecular inferior a cerca de 1000. Em algumas modali- dades, uma molécula pequena é um composto orgânico, com um tama- nho da ordem de 1 nm. Em algumas modalidades, as fármacos de mo- léculas pequenas da invenção abrangem oligopeptídeos e outras bio- moléculas com um peso molecular inferior a cerca de 1000.

[0074] Uma "quantidade eficaz" é uma quantidade suficiente para efetuar resultados benéficos ou desejados. Por exemplo, uma quanti- dade terapêutica é aquela que atinge o efeito terapêutico desejado. Esta quantidade pode ser igual ou diferente de uma quantidade profilatica- mente eficaz, que é uma quantidade necessária para prevenir o início da doença ou dos sintomas da doença. Uma quantidade eficaz pode ser administrada em uma ou mais administrações, aplicações ou dosagens. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição depende da composição selecionada. As composições podem ser administradas de uma ou mais vezes por dia a uma ou mais vezes por semana; inclu- indo uma vez a cada dois dias. Versados entenderão que certos fatores podem influenciar a dosagem e periodicidade necessárias para tratar um indivíduo de forma eficaz, incluindo mas não limitado a, gravidade da doença ou distúrbio, tratamentos anteriores, estado geral de saúde e / ou idade do indivíduo e outras doenças presentes. Além disso, o tratamento de um indivíduo com uma quantidade terapeuticamente efi- caz das composições aqui descritas pode incluir um único tratamento ou uma série de tratamentos. Compostos da invenção

[0075] Um aspecto da invenção fornece inibidores de moléculas pe- quenas de TRPC5.

[0076] Em algumas modalidades, o composto da invenção é um composto de fórmula estrutural I:

(I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que: “---” é uma ligação simples ou dupla X1 é CH ou N; quando “---” é uma ligação dupla, X2 é CH ou N; quando “---” é uma ligação simples, X2 é N(CH3), quando X1 é CH, X2 é N ou N(CH3); Y é -O-, -N(CH3)-, -N(CH2CH2OH)-, ciclopropan-1,1-di-ila, ou -CH(CH3)-; Q é 2-trifluorometil-4-fluorofenila, 2-difluorometil-4-fluorofe- nila, 2-trifluorometilfenila, 2-metil-4-fluorofenila, 2-cloro-4-fluorofenila, 2- clorofenila, 1-(benzil)-4-metilpiperidin-3-ila, 4-trifluorometilpiridin-3-ila, 2-trifluorometil-6-fluorofenila, 2-trifluorometil-3-cianofenila, 2-etil-3-fluo- rofenila, 2-cloro-3-cianofenila, 2-trifluorometil- 5-fluorofenila ou 2-difluo- rometilfenila; R3 é hidrogênio, -CH2OH, -CH(OH)-CH2OH, -NH2, - CH(OH)CH3, -OCH3, ou -NH-(CH2)2OH; e quando “---” é uma ligação dupla, R4 está ausente; e quando “---” é uma ligação dupla, R3 e R4 são tomados jun- tos para formar = O; e cada um de R5 e R6 é independentemente hidrogênio ou - CH3, desde que se X1 for N, X2 é N, Y é -O- ou -N(CH3)-, e Q é 2-trifluorome- tilfenila, então pelo menos um de R3, R5, e R6 não é hidrogênio.

[0077] Em algumas modalidades, o composto da invenção é um composto representado pela fórmula estrutural II:

(II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é cloro, -CF3, -CHF2, ou -CH3; R2 é hidrogênio ou fluoro; e R3 é hidrogênio, -NH2, -CH2OH, ou CH(OH)-CH2OH.

[0078] Em algumas modalidades, quando R1 é -CHF2, R2 não é hi- drogênio.

[0079] Em algumas modalidades, o composto da invenção é seleci- onado de qualquer um dos seguintes compostos, ou um sal farmaceuti- camente aceitável do mesmo: Composto Estrutura 100 101 102 103

Composto Estrutura

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Composto Estrutura

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Composto Estrutura

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Composto Estrutura

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Composto Estrutura

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Composto Estrutura 136 137 138 139 140

[0080] Em algumas modalidades, o composto da invenção é seleci- onado de qualquer um dos seguintes compostos, ou um sal farmaceuti- camente aceitável do mesmo:

Composto Estrutura

100

101

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105

112

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Composto Estrutura

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125

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134

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Composto Estrutura 137

[0081] Em algumas modalidades, o composto da invenção é seleci- onado de qualquer um dos seguintes compostos, ou um sal farmaceuti- camente aceitável do mesmo: Composto Estrutura 100 101 102 104 105

Composto Estrutura

114

116

124

125

128

134

135

Composto Estrutura 137

[0082] Em certas modalidades, os compostos da invenção podem ser racêmicos. Em certas modalidades, os compostos da invenção po- dem ser enriquecidos em um enantiômero. Por exemplo, um composto da invenção pode ter mais que 30% ee, 40% ee, 50% ee, 60% ee, 70% ee, 80% ee, 90% ee, ou mesmo 95% ou mais ee.

[0083] Os compostos da invenção têm mais de um estereocentro. Consequentemente, os compostos da invenção podem ser enriquecidos em um ou mais diastereômeros. Por exemplo, um composto da inven- ção pode ter mais do que 30% de, 40% de, 50% de, 60% de, 70% de, 80% de, 90% de, ou mesmo 95% ou mais de de. Em certas modalida- des, os compostos da invenção têm substancialmente uma configura- ção éomérica em um ou mais centros estereogênicos e têm múltiplas configurações éoméricas nos centros estereogênicos restantes.

[0084] Em certas modalidades, o excesso enantiomérico do estere- ocentro é de pelo menos 40% ee, 50% ee, 60% ee, 70% ee, 80% ee, 90% ee, 92% ee, 94% ee, 95% ee, 96 % ee, 98% ee ou mais de ee.

[0085] Como utilizado neste documento, ligações simples desenha- das sem estereoquímica não indicam a estereoquímica do composto.

[0086] Como utilizado neste documento, ligações não em cunha pontilhadas ou em negrito indicam configuração estereoquímica rela- tiva, mas não absoluta (por exemplo, não distingue entre enantiômeros de um determinado diastereômero).

[0087] Como utilizado neste documento, as ligações em cunha pon- tilhadas ou em negrito indicam configuração estereoquímica absoluta.

[0088] Em algumas modalidades, a invenção se refere a uma com- posição farmacêutica que compreende um composto da invenção e um transportador farmaceuticamente aceitável. Em certas modalidades, uma preparação terapêutica ou composição farmacêutica do composto da invenção pode ser enriquecida para fornecer predominantemente um enantiômero de um composto. Uma mistura enantiomericamente enri- quecida pode compreender, por exemplo, pelo menos 60 mol por cento de um enantiômero, ou mais preferencialmente pelo menos 75, 90, 95 ou mesmo 99 mol por cento. Em certas modalidades, o composto enri- quecido em um enantiômero é substancialmente livre do outro enantiô- mero, em que substancialmente livre significa que a substância em questão constitui menos que 10%, ou menos que 5%, ou menos que 4%, ou menos que 3 % ou menos que 2% ou menos que 1% em com- paração com a quantidade do outro enantiômero, por exemplo, na com- posição ou mistura de compostos. Por exemplo, se uma composição ou mistura de compostos contiver 98 gramas de um primeiro enantiômero e 2 gramas de um segundo enantiômero, seria dito que contém 98 por cento em mol do primeiro enantiômero e apenas 2% do segundo enan- tiômero.

[0089] Em certas modalidades, uma preparação terapêutica ou composição farmacêutica pode ser enriquecida para fornecer predomi- nantemente um diastereômero do composto da invenção. Uma mistura diastereomericamente enriquecida pode compreender, por exemplo, pelo menos 60 mol por cento de um diastereômero, ou mais preferenci- almente pelo menos 75, 90, 95 ou mesmo 99 mol por cento. Métodos de Tratamento

[0090] Os canais de Canais de Potencial Receptor Transiente (TRP) não seletivos de Ca2+-atuam como sensores que transduzem pis- tas extracelulares para o ambiente intracelular em diversos processos celulares, incluindo remodelação de actina e migração celular (Greka et al., Nat Neurosci 6, 837-845, 2003; Ramsey et al., Annu Rev Physiol 68, 619-647, 2006; Montell, Pflugers Arch 451, 19-28, 2005; Clapham, Na- ture 426, 517-524, 2003). O rearranjo dinâmico do citoesqueleto de ac- tina depende do influxo de Ca2+ regulado espaço-temporalmente (Zheng and Poo, Annu Rev Cell Dev Biol 23, 375-404, 2007); Brandman and Meyer, Science 322, 390-395, 2008); Collins and Meyer, Dev Cell 16, 160-161, 2009) e as pequenas GTPases RhoA e Rac1 servem como moduladores chave dessas mudanças (Etienne-Manneville and Hall, Nature 420, 629-635, 2002); Raftopoulou and Hall, Dev Biol 265, 23-32, 2004). RhoA induz a formação de fibras de estresse e adesão focal, enquanto Rac1 medeia a formação de lamelipódios (Etienne-Manneville and Hall, Nature 420, 629-635, 2002). O Canal de Cátion de Potencial Receptor Transiente, subfamília C, membro 5 (TRPC5) atua em con- junto com TRPC6 para regular o influxo de Ca2+, remodelamento de actina e motilidade celular em podócitos renais e fibroblastos. O influxo de Ca2+ mediado por TRPC5 aumenta a atividade de Rac1, enquanto o influxo de Ca2+ mediado por TRPC6 promove a atividade de RhoA. O silenciamento de genes dos canais TRPC6 elimina as fibras de estresse e diminui os contatos focais, gerando um fenótipo celular migratório mó- vel. Em contraste, o silenciamento de genes de canais TRPC5 resgata a formação de fibras de estresse, tornando um fenótipo celular contrá- tila. Os resultados aqui descritos revelam um mecanismo de sinalização conservado pelo qual os canais TRPC5 e TRPC6 controlam um equilí- brio rigidamente regulado da dinâmica do citoesqueleto por meio do acoplamento diferencial a Rac1 e RhoA.

[0091] A remodelação dependente de Ca2+ do citoesqueleto de ac- tina é um processo dinâmico que conduz a migração celular (Wei et al., Nature 457, 901-905, 2009). RhoA e Rac1 atuam como interruptores responsáveis pelos rearranjos do citoesqueleto em células em migração (Etienne-Manneville and Hall, Nature 420, 629-635, 2002); Raftopoulou and Hall, Dev Biol 265, 23-32, 2004). A ativação de Rac1 medeia um fenótipo de célula móvel, enquanto a atividade de RhoA promove um fenótipo contrátila (Etienne-Manneville and Hall, Nature 420, 629-635, 2002). Ca2+ desempenha um papel central na pequena regulação de GTPase (Aspenstrom et al., Biochem J 377, 327-337, 2004). Cintilações restritas espacial e temporalmente de Ca2+ são enriquecidas perto da borda principal das células em migração (Wei et al., Nature 457, 901- 905, 2009). Microdomínios de Ca2+ juntaram-se, assim, a explosões locais na atividade de Rac1 (Gardiner et al., Curr Biol 12, 2029-2034, 2002; Machacek et al., Nature 461, 99-103, 2009) como eventos críticos na borda principal. Até o momento, as fontes de influxo de Ca2+ res- ponsáveis pela regulação da GTPase permanecem bastante elusivas. Os canais TRP (Potencial de Receptor Transiente) geram sinais de Ca2+ limitados no tempo e no espaço ligados à migração celular em fi- broblastos e cones de crescimento neuronal0. Especificamente, os ca- nais TRPC5 são reguladores conhecidos da orientação do cone de cres- cimento neuronal1 e sua atividade nos neurônios é dependente da ati- vidade de PI3K e Rac1 (Bezzerides et al., Nat Cell Biol 6, 709-720, 2004).

[0092] Os podócitos são células neuronais que se originam do mesênquima metanéfrico do glomérulo renal e são essenciais para a formação do aparelho de filtração renal (Somlo and Mundel, Nat Genet. 24, 333-335, 2000; Fukasawa et al., J Am Soc Nephrol 20, 1491-1503, 2009). Os podócitos possuem um repertório primorosamente refinado de adaptações do citoesqueleto às pistas ambientais (Somlo and Mun- del, Nat Genet 24, 333-335, 2000; Garg et al., Mol Cell Biol 27, 8698- 8712, 2007; Verma et al., J Clin Invest 116, 1346-1359, 2006; Verma et al., J Biol Chem 278, 20716-20723, 2003; Barletta et al., J Biol Chem 278, 19266-19271, 2003; Holzman et al., Kidney Int 56, 1481-1491, 1999; Ahola et al., Am J Pathol 155, 907-913, 1999; Tryggvason and

Wartiovaara, N Engl J Med 354, 1387-1401, 2006; Schnabel and Farqu- har, J Cell Biol 111, 1255-1263, 1990; Kurihara et al., Proc Natl Acad Sci USA 89, 7075-7079, 1992). Os eventos iniciais de lesão de podócitos são caracterizados pela desregulação do citoesqueleto de actina (Faul et al., Trends Cell Biol 17, 428-437, 2007; Takeda et al., J Clin Invest 108, 289-301, 2001; Asanuma et al., Nat Cell Biol 8, 485-491, 2006) e homeostase de Ca2+ (Hunt et al., J Am Soc Nephrol 16, 1593-1602, 2005; Faul et al., Nat Med 14, 931-938, 2008). Essas alterações estão associadas ao início da proteinúria, à perda de albumina no espaço uri- nário e, em última instância, à insuficiência renal (Tryggvason and War- tiovaara, N Engl J Med 354, 1387-1401, 2006). O hormônio vasoativo Angiotensina II induz o influxo de Ca2+ nos podócitos e o tratamento pro- longado resulta na perda de fibras de estresse (Hsu et al., J Mol Med 86, 1379-1394, 2008). Embora haja uma ligação reconhecida entre o influxo de Ca2+ e a reorganização do citoesqueleto, os mecanismos pe- los quais o podócito detecta e transduz pistas extracelulares que modu- lam a forma e a motilidade das células permanecem indefinidos. As mu- tações do canal TRP Canônico 6 (TRPC6) foram ligadas a lesão de po- dócitos (Winn et al., Science 308, 1801-1804, 2005; Reiser et al., Nat Genet 37, 739-744, 2005; Moller et al., J Am Soc Nephrol 18, 29-36, 2007; Hsu et al., Biochim Biophys Acta 1772, 928-936, 2007), mas pouco se sabe sobre as vias específicas que regulam este processo. Além disso, TRPC6 compartilha homologia próxima com seis outros membros da família de canais TRPC (Ramsey et al., Annu Rev Physiol 68, 619-647, 2006; Clapham, Nature 426, 517-524, 2003). Os canais TRPC5 antagonizam a atividade do canal TRPC6 para controlar um equilíbrio rigidamente regulado da dinâmica do citoesqueleto por meio do acoplamento diferencial a pequenas GTPases distintas. Proteinúria

[0093] A proteinúria é uma condição patológica em que a proteína está presente na urina. A albuminúria é um tipo de proteinúria. A micro- albuminúria ocorre quando o rim vaza pequenas quantidades de albu- mina na urina. Em um corpo funcionando adequadamente, a albumina normalmente não está presente na urina porque é retida na corrente sanguínea pelos rins. A microalbuminúria é diagnosticada por coleta de urina de 24 horas (20 a 200 μg / min) ou, mais comumente, por concen- trações elevadas (30 a 300 mg / L) em pelo menos duas ocasiões. A microalbuminúria pode ser um precursor da nefropatia diabética. Um ní- vel de albumina acima desses valores é denominado macroalbuminúria. Indivíduos com certas condições, por exemplo, nefropatia diabética, po- dem progredir de microalbuminúria para macroalbuminúria e atingir uma faixa nefrótica (> 3,5 g / 24 horas) conforme a doença renal atinge está- gios avançados. Causas da proteinúria

[0094] A proteinúria pode estar associada a uma série de condi- ções, incluindo glomeruloesclerose segmentar focal, nefropatia por IgA, nefropatia diabética, nefrite lúpica, glomerulonefrite membranoprolifera- tiva, glomerulonefrite progressiva (crescente) e glomerulonefrite mem- branosa. A. Glomeruloesclerose segmentar focal (FSGS)

[0095] A glomeruloesclerose segmentar focal (FSGS) é uma do- ença que ataca o sistema de filtragem do rim (glomérulos) causando cicatrizes graves. FSGS é uma das muitas causas de uma doença co- nhecida como Síndrome Nefrótica, que ocorre quando a proteína do sangue vaza para a urina (proteinúria).

[0096] Muito poucos tratamentos estão disponíveis para pacientes com FSGS. Muitos pacientes são tratados com regimes de esteroides, a maioria dos quais tem efeitos colaterais muito graves. Alguns pacien- tes mostraram responder positivamente às fármacos imunossupresso- ras, bem como às fármacos para a pressão arterial, que demonstraram reduzir o nível de proteína na urina. Até o momento, não há cura ou tratamento eficaz comumente aceito e não há fármacos aprovadas pela FDA para tratar FSGS. Portanto, métodos mais eficazes para reduzir ou inibir a proteinúria são desejáveis. B. Nefropatia por IgA

[0097] A nefropatia por IgA (também conhecida como nefrite por IgA, IgAN, doença de Berger e glomerulonefrite sinfaringítica) é uma forma de glomerulonefrite (inflamação dos glomérulos do rim). A nefro- patia por IgA é a glomerulonefrite mais comum em todo o mundo. A nefropatia por IgA primária é caracterizada pela deposição do anticorpo IgA no glomérulo. Existem outras doenças associadas aos depósitos glomerulares de IgA, sendo a mais comum a púrpura de Henoch-Schön- lein (HSP), considerada por muitos como uma forma sistêmica de ne- fropatia por IgA. A púrpura de Henoch-Schönlein se apresenta com erupção cutânea purpúrica característica, artrite e dor abdominal e ocorre mais comumente em adultos jovens (16-35 anos de idade). A HSP está associada a um prognóstico mais benigno do que a nefropatia por IgA. Na nefropatia por IgA, há uma progressão lenta para insuficiên- cia renal crônica em 25-30% dos casos durante um período de 20 anos. C. Nefropatia diabética

[0098] A nefropatia diabética, também conhecida como síndrome de Kimmelstiel-Wilson e glomerulonefrite intercapilar, é uma doença re- nal progressiva causada por angiopatia dos capilares nos glomérulos renais. É caracterizada por síndrome nefrótica e glomeruloesclerose di- fusa. É devido ao diabetes mellitus de longa data e é uma das principais causas de diálise. A primeira alteração detectável no curso da nefropatia diabética é um espessamento do glomérulo. Nesse estágio, o rim pode começar a permitir mais albumina sérica do que o normal na urina. À medida que a nefropatia diabética progride, um número crescente de glomérulos é destruído pela glomeruloesclerose nodular e a quantidade de albumina excretada na urina aumenta. D. Nefrite Lúpica

[0099] A nefrite lúpica é uma doença renal que é uma complicação do lúpus eritematoso sistêmico. A nefrite lúpica ocorre quando os anti- corpos e o complemento se acumulam nos rins, causando inflamação. Frequentemente, causa proteinúria e pode progredir rapidamente para insuficiência renal. Os resíduos de nitrogênio se acumulam na corrente sanguínea. O lúpus eritematoso sistêmico causa vários distúrbios das estruturas internas do rim, incluindo nefrite intersticial. A nefrite lúpica afeta aproximadamente 3 em cada 10.000 pessoas. E. Glomerulonefrite Membranoproliferativa I / II / III

[00100] A glomerulonefrite membranoproliferativa é um tipo de glo- merulonefrite causada por depósitos no mesângio glomerular do rim e espessamento da membrana basal, ativando o complemento e danifi- cando os glomérulos. Existem três tipos de glomerulonefrite membrano- proliferativa. O Tipo I é causado por complexos imunes que se deposi- tam no rim e acredita-se que esteja associado à via clássica do comple- mento. O Tipo II é semelhante ao Tipo I, no entanto, acredita-se que esteja associado à via alternativa do complemento. O Tipo III é muito raro e é caracterizado por uma mistura de depósitos subepiteliais e os achados patológicos típicos da doença do Tipo I. F. Glomerulonefrite Progressiva (Crescente)

[00101] A glomerulonefrite (PG) progressiva (crescente) é uma sín- drome do rim que, se não tratada, progride rapidamente para insuficiên- cia renal aguda e morte em poucos meses. Em 50% dos casos, a PG está associada a uma doença subjacente, como síndrome de Goodpas- ture, lúpus eritematoso sistêmico ou granulomatose de Wegener; os de- mais casos são idiopáticos. Independentemente da causa subjacente, a PG envolve lesão grave dos glomérulos renais, com muitos dos glomé-

rulos contendo cicatrizes características em forma de crescente. Paci- entes com PG apresentam hematúria, proteinúria e, ocasionalmente, hi- pertensão e edema. O quadro clínico é consistente com síndrome nefrí- tica, embora o grau de proteinúria possa ocasionalmente exceder 3 g / 24 horas, uma faixa associada à síndrome nefrótica. A doença não tra- tada pode progredir para diminuição do volume urinário (oligúria), que está associada à função renal deficiente. G. Glomerulonefrite Membranosa

[00102] A glomerulonefrite membranosa (MGN) é uma doença renal lentamente progressiva que afeta principalmente pacientes com idades entre 30 e 50 anos, geralmente caucasianos. Pode evoluir para sín- drome nefrótica. MGN é causada pelo complexo imune circulante. A pesquisa atual indica que a maioria dos complexos imunes é formada através da ligação de anticorpos a antígenos in situ à membrana basal glomerular. Os referidos antígenos podem ser endógenos à membrana basal ou depositados na circulação sistêmica. Medição dos níveis de proteína na urina

[00103] Os níveis de proteína na urina podem ser medidos usando métodos conhecidos na técnica. Até recentemente, uma medição pre- cisa de proteína exigia uma coleta de urina de 24 horas. Em uma coleta de 24 horas, o paciente urina em um recipiente, que é mantido refrige- rado entre as idas ao banheiro. O paciente é instruído a iniciar a coleta de urina após a primeira ida ao banheiro pela manhã. Cada gota de urina do resto do dia deve ser coletada no recipiente. Na manhã se- guinte, o paciente acrescenta a primeira micção após acordar e a coleta é concluída.

[00104] Mais recentemente, os pesquisadores descobriram que uma única amostra de urina pode fornecer as informações necessárias. Na técnica mais recente, a quantidade de albumina na amostra de urina é comparada com a quantidade de creatinina, um produto residual da des- truição muscular normal. A medição é chamada de razão albumina / creatinina na urina (UACR). Uma amostra de urina contendo mais de 30 miligramas de albumina para cada grama de creatinina (30 mg / g) é um aviso de que pode haver um problema. Se o teste de laboratório exceder 30 mg / g, outro teste UACR deve ser realizado 1 a 2 semanas depois. Se o segundo teste também mostrar níveis elevados de proteína, a pes- soa tem proteinúria persistente, um sinal de declínio da função renal, e deve fazer exames adicionais para avaliar a função renal.

[00105] Testes que medem a quantidade de creatinina no sangue também mostram se os rins de uma pessoa estão removendo os resí- duos de forma eficiente. O excesso de creatinina no sangue é um sinal de que uma pessoa tem danos renais. O médico pode usar a medição da creatinina para estimar a eficiência com que os rins filtram o sangue. Esse cálculo é denominado taxa de filtração glomerular estimada ou eGFR. A doença renal crônica está presente quando a eGFR é inferior a 60 mililitros por minuto (mL / min). TRPC5

[00106] TRPC é uma família de canais de cátion de potencial recep- tor transiente em animais. TRPC5 é um subtipo da família TRPC de ca- nais iônicos de potencial receptor transiente de mamíferos. Três exem- plos de TRPC5 são destacados abaixo na Tabela 1. TABELA 1 Os ortólogos TRPC5 de três espécies diferentes juntamente com seus Números de Acessão de Ref Seq GenBank Espécie Ácido Nucleico Aminoácido ID de Gene Homo sapiens NM_012471.2 NP_036603.1 7224 Mus musculus NM_009428.2 NP_033454.1 22067 Rattus nor- NM_080898.2 NP_543174.1 140933 vegicus

[00107] Por conseguinte, em certas modalidades, a invenção fornece métodos para tratar, ou reduzir o risco de desenvolver, uma doença ou condição selecionada de doença renal, hipertensão arterial pulmonar, ansiedade, depressão, câncer, retinopatia diabética ou dor, compreen- dendo administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção (por exemplo, um composto de fórmula estrutural I) ou uma composição far- macêutica compreendendo o referido composto.

[00108] Em algumas modalidades, a doença é doença renal, ansie- dade, depressão, câncer ou retinopatia diabética.

[00109] Em algumas modalidades, a doença ou condição é doença renal selecionada de Glomeruloesclerose Focal Segmental (FSGS), Ne- fropatia diabética, síndrome de Alport, doença renal hipertensiva, sín- drome nefrótica, síndrome nefrótica resistente a esteroides, doença de alteração mínima, nefropatia membranosa, nefropatia membranosa idi- opática, glomerulonefrite membranoproliferativa (MPGN), MPGN medi- ada por imunocomplexos, MPGN mediada por complemento, nefrite lú- pica, glomerulonefrite pós-infecciosa, doença da membrana basal fina, glomerulonefrite proliferativa mesangial, amiloidose (primária), nefropa- tia c1q, GN rapidamente progressiva, doença anti-GBM, glomerulone- frite C3, nefroesclerose hipertensiva ou nefropatia por IgA. Em algumas modalidades, a doença renal é uma doença renal proteinúrica. Em al- gumas modalidades, a doença renal é doença renal microalbuminuria ou macroalbuminuria.

[00110] Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tra- tada é a hipertensão arterial pulmonar.

[00111] Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tra- tada é a dor selecionada de dor neuropática e dor visceral.

[00112] Em algumas modalidades, a doença ou condição é câncer selecionado de carcinoma de mama quimiorresistente, câncer de mama resistente à adriamicina, câncer colorretal quimiorresistente, medulo- blastoma e angiogênese tumoral.

[00113] A invenção também fornece métodos de tratamento ou redu- ção do risco de desenvolvimento, ansiedade ou depressão ou câncer, compreendendo administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção (por exemplo, um composto de Fórmula I) , ou uma composição farma- cêutica compreendendo o referido composto.

[00114] Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tra- tada é FSGS relacionada ao transplante, síndrome nefrótica relacionada ao transplante, proteinúria relacionada ao transplante, doença hepática colestática, doença renal policística, doença renal policística autossô- mica dominante (ADPKD), obesidade, resistência à insulina, Diabetes tipo II, pré-diabetes, síndrome metabólica, doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD) ou esteato-hepatite não alcoólica (NASH). Indivíduos a serem tratados

[00115] Em um aspecto da invenção, um indivíduo é selecionado com base em que ele tem, ou está em risco de desenvolver, uma do- ença renal, hipertensão arterial pulmonar, ansiedade, depressão, cân- cer, retinopatia diabética ou dor. Em outro aspecto, um indivíduo é se- lecionado com base em que ele tem, ou está em risco de desenvolver, doença renal, ansiedade, depressão, câncer ou retinopatia diabética. Em outro aspecto da invenção, um indivíduo é selecionado com base em que ele tem, ou está em risco de desenvolver, dor, dor neuropática, dor visceral, FSGS relacionada ao transplante, síndrome nefrótica rela- cionada ao transplante, proteinúria relacionada ao transplante, doença hepática colestática, doença renal policística, doença renal policística autossômica dominante (ADPKD), obesidade, resistência à insulina, Di- abetes tipo II, pré-diabetes, síndrome metabólica, doença hepática gor- durosa não alcoólica (NAFLD) ou esteato-hepatite não alcoólica

(NASH).

[00116] Os indivíduos que têm, ou estão em risco de desenvolver, proteinúria incluem aqueles com diabetes, hipertensão ou certos ante- cedentes familiares. Nos Estados Unidos, o diabetes é a principal causa de doença renal em estágio terminal (ESRD). Tanto no diabetes tipo 1 quanto no tipo 2, a albumina na urina é um dos primeiros sinais de de- terioração da função renal. À medida que a função renal diminui, a quan- tidade de albumina na urina aumenta. Outro fator de risco para o desen- volvimento de proteinúria é a hipertensão. A proteinúria em uma pessoa com pressão alta é um indicador do declínio da função renal. Se a hi- pertensão não for controlada, a pessoa pode progredir para insuficiência renal total. Os afro-americanos têm maior probabilidade do que os bran- cos de ter pressão alta e desenvolver problemas renais por causa dela, mesmo quando a pressão arterial está apenas ligeiramente elevada. Outros grupos em risco de proteinúria são índios americanos, hispâni- cos / latinos, americanos das ilhas do Pacífico, adultos mais velhos e indivíduos com sobrepeso.

[00117] Em um aspecto da invenção, um indivíduo é selecionado com base no fato de ter ou estar em risco de desenvolver proteinúria. Um indivíduo que tem, ou está em risco de desenvolver, proteinúria é aquele que apresenta um ou mais sintomas da doença. Os sintomas de proteinúria são conhecidos pelos versados na técnica e incluem, sem limitação, grandes quantidades de proteína na urina, o que pode fazer com que pareça espumoso no banheiro. A perda de grandes quantida- des de proteínas pode resultar em edema, onde pode ocorrer inchaço nas mãos, pés, abdômen ou rosto. Estes são sinais de grande perda de proteínas e indicam que a doença renal progrediu. Os exames labora- toriais são a única maneira de descobrir se há proteína na urina de um indivíduo antes que ocorram danos renais extensos.

[00118] Os métodos são eficazes para uma variedade de indivíduos,

incluindo mamíferos, por exemplo, seres humanos e outros animais, como animais de laboratório, por exemplo, camundongos, ratos, coe- lhos ou macacos, ou animais domésticos e de fazenda, por exemplo, gatos, cães, cabras, ovelhas , porcos, vacas ou cavalos. Em algumas modalidades, o indivíduo é um mamífero. Em algumas modalidades, o indivíduo é um ser humano.

EXEMPLOS

[00119] A invenção será descrita ainda nos exemplos a seguir, que não limitam o escopo da invenção descrito nas reivindicações. Exemplo 1. Síntese do Composto 100 Composto 100 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]piri- midina-7-carboxilato de terc-butila

[00120] A uma solução agitada de 4-cloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butilade terc-butila (400 mg, 1,48 mmol, 1 equiv.) e 4-fluoro-2-(trifluorometil)fenol (400,6 mg, 2,22 mmol, 1,5 equiv.) em acetonitrila (10 mL) foi adicionado DBU (451,5 mg, 2,97 mmol, 2,00 equiv.) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agi- tada durante 2 h a 80°C. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura foi deixada resfriar até a temperatura ambiente. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura de resultante foi extraída com DCM (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lava-

das com salmoura (3 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtra- ção, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi puri- ficado por Prep-TLC (PE/EtOAc 2:1) para proporcionar 4-[4-fluoro-2-(tri- fluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (110 mg, 17,94%) como um sólido marrom. 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H, 6H,7H,8H-pirido[3,4-d]piri- midina

[00121] A uma solução agitada de 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (110 mg, 0,27 mmol , 1 equiv.) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL, 13,46 mmol, 50,59 equiv.) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura foi basificada a pH 8 com NaHCO3 (aq.). saturado. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (DCM / MeOH 12:1) para proporcionar 4-[4-fluoro-2-(tri- fluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (50 mg, 59,98%) como um sólido castanho. 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00122] A uma solução agitada de 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (50 mg, 0,16 mmol, 1 equiv.) em DIEA (2 mL) foi adicionado 4,5-dicloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropirida- zin-3-ona (47,5 mg, 0,19 mmol, 1,19 equiv.) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada durante 2 h a 100°C. A reação foi monito- rada por LCMS. A mistura foi deixada resfriar até a temperatura ambi- ente. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (PE/EtOAc 2:1) para propor- cionar 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (40 mg, 47,65%) como um sólido marrom.

4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00123] A uma solução agitada de 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluoro- metil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3- di-hidropiridazin-3-ona (40 mg, 0,08 mmol, 1 equiv.) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL, 13,46 mmol, 177,00 equiv.) gota a gota à tem- peratura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 1 h em tempera- tura ambiente. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura foi basificada a pH 8 com NaHCO3 (aq.). saturado. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto (40 mg) foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições (Coluna: XBridge Prep OBD C18 Coluna 30 × 150 mm 5um; Fase móvel A: Água (10MMOL / L NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo : 60 mL/min; Gradiente: 18% B a 47% B em 7 min; 220 nm; Rt: 6,22 min) para proporcionar 4-cloro-5-[4- [4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7- il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (8,6 mg, 25,59%) como um sólido branco. Exemplo 2. Síntese do Composto 140 Limpo/100ºC/2h Composto 140 4-bromo-5,6,7,8-tetra-hidro-1,7-naftiridina-7-carboxilato de terc-bu- tila

[00124] A uma solução de 4-bromo-5,6,7,8-tetra-hidro-1,7-naftiridina (250 mg, 1,173 mmol, 1 equiv.) em THF (10 mL, 123,430 mmol, 105,20 equiv.) foram adicionados Boc2O (512,13 mg, 2,347 mmol, 2,00 equiv.) e TEA (474,90 mg, 4,693 mmol, 4 equiv.) a 25°C. A solução foi agitada a 25°C durante 2 horas. A mistura resultante foi concentrada sob pres- são reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (PE/EA 5/1) para se obter 4-bromo-5,6,7,8-tetra-hidro-1,7-naftiridina-7-carboxilato de terc-butila (210 mg, 57,15%) como um óleo amarelo claro. 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5,6,7,8-tetra-hidro-1,7-naftiri- dina-7-carboxilato de terc-butila

[00125] A uma solução de 4-bromo-5,6,7,8-tetra-hidro-1,7-naftiri- dina-7-carboxilato de terc-butila (210 mg, 0,671 mmol, 1 equiv.) e 4-flu- oro-2-(trifluorometil)fenol (241,52 mg, 1,341 mmol, 2 equiv.) em DMSO (10 mL) foram adicionados Cs2CO3 (873,86 mg, 2,682 mmol, 4 equiv), ácido 2-(dimetilamino)acético (41,46 mg, 0,402 mmol, 0,6 equiv.) e CuI (76,62 mg, 0,402 mmol, 0,60 equiv). Após agitação durante 4 horas a 120°C sob uma atmosfera de nitrogênio, a mistura resultante foi con- centrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-TLC, eluído com PE / EA (5/1) para proporcionar 4-[4-fluoro-2-(trifluorome- til)fenoxi]-5,6,7,8-tetra-hidro-1,7-naftiridina-7-carboxilato de terc-butila (100 mg, 36,17%) como um sólido amarelo claro. 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5,6,7,8-tetra-hidro-1,7-naftiri- dina

[00126] A uma solução de 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5,6,7,8- tetra-hidro-1,7-naftiridina-7-carboxilato de terc-butila (150 mg, 0,364 mmol, 1 equiv.) em DCM (10 mL, 157,300 mmol, 432,46 equiv.) foi adi- cionado TFA (414,75 mg, 3,637 mmol, 10 equiv.) a 25°C. A solução foi agitada a 25°C durante 2 horas. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi usado na próxima etapa. 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5,6,7,8-tetra-hidro- 1,7-naftiridin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00127] Uma mistura de 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5,6,7,8- tetra-hidro-1,7-naftiridina (60 mg, 0,192 mmol, 1 equiv.) e 4,5-dicloro-2- (oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (47,86 mg, 0,192 mmol, 1,00 equiv.) em DIEA (49,67 mg, 0,384 mmol, 2 equiv.) foi agitada durante 2 horas a 100°C sob atmosfera de N2 . O resíduo foi purificado por Prep- TLC (PE/EA 1/1) para proporcionar 4-cloro-5-[4- [4-fluoro-2-(trifluorome- til)fenoxi]-5,6,7,8-tetra-hidro-1,7-naftiridin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidro- piridazin-3-ona (100 mg, 99,15%) como um sólido amarelo claro. 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5,6,7,8-tetra-hidro- 1,7-naftiridin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00128] A uma solução de 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- noxi]-5,6,7,8-tetra-hidro-1,7-naftiridin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiri- dazin-3-ona (100 mg, 0,191 mmol, 1 equiv.) em DCM (10 mL, 157,300 mmol, 825,67 equiv.) foi adicionado TFA (217,23 mg, 1,905 mmol, 10,00 equiv.) a 25°C. A solução foi agitada a 25°C durante 2 horas. O produto bruto (150 mg) foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condi- ções (Coluna: XBridge Shield RP18 OBD Coluna 30*150 mm, 5um; Fase móvel A:Água (10 mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo : 60 mL / min; Gradiente: 20% B a 40% B em 7min; 220 nm; Rt: 6,63 min) para proporcionar 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- noxi]-5,6,7,8-tetra-hidro-1,7-naftiridin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (42,9 mg, 51,09%) como um sólido branco. Exemplo 3. Síntese do Composto 120 DIEA/limpo/100ºC/2h Composto 120 2-Benzil-5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-1,2,3,4-tetra-hidro-2,6- naftiridina

[00129] A uma mistura agitada de 2-benzil-5-bromo-1,2,3,4-tetra-hi-

dro-2,6-naftiridina (250 mg, 0,825 mmol, 1 equiv.) e ácido 2-(dimetila- mino)acético (170,05 mg, 1,649 mmol, 2,00 equiv.) em DMSO (5 mL) foram adicionados 4-fluoro-2-(trifluorometil)fenol (89,10 mg, 0,495 mmol, 0,6 equiv.) e CuI (94,22 mg, 0,495 mmol, 0,6 equiv.) à tempera- tura ambiente. Em seguida, Cs2CO3 (1074,59 mg, 3,298 mmol,4 equiv.) foi adicionado à temperatura ambiente. A mistura de reação final foi ir- radiada com radiação de micro-ondas por 1 hora a 120°C. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura foi deixada resfriar até a temperatura ambiente. O produto bruto foi purificado por flash de fase reversa com as seguintes condições (Coluna: XBridge Prep OBD C18 Coluna 30 × 150 mm 5um; Fase móvel A:Água (10mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 60 mL / min; Gradiente: 18% B a 35% B em 8min; 220 nm; Rt: 7,12 min) para proporcionar 2-benzil-5-[4-fluoro-2-(tri- fluorometil)fenoxi]-1,2,3,4-tetra-hidro-2,6-naftiridina (180 mg, 54,25%) como um sólido castanho. 5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-1,2,3,4-tetra-hidro-2,6-naftiri- dina

[00130] A uma solução agitada de 2-benzil-5-[4-fluoro-2-(trifluorome- til)fenoxi]-1,2,3,4-tetra-hidro-2,6-naftiridina (180 mg) em MeOH (10 mL) foi adicionado Pd / C (20 mg) à temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 5 horas à tempera- tura ambiente sob atmosfera de hidrogênio. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (DCM/MeOH 12:1) para proporci- onar 5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-1,2,3,4-tetra-hidro-2,6-naftiri- dina (100 mg) como um sólido marrom. 4-cloro-5-[5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-1,2,3,4-tetra-hidro- 2,6-naftiridin-2-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00131] A uma solução agitada de 5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]- 1,2,3,4-tetra-hidro-2,6-naftiridina (100 mg, 0,320 mmol, 1 equiv.) em

DIEA (0,1 mL) foi adicionado 4,5-dicloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropirida- zin-3-ona (63,81 mg, 0,256 mmol, 0,8 equiv.) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada durante 1 hora a 90°C. A reação foi mo- nitorada por LCMS. A mistura foi deixada resfriar até a temperatura am- biente. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (DCM / MeOH; 12:1) para proporcionar 4-cloro-5-[5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-1,2,3,4-tetra- hidro-2,6-naftiridin-2-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (130 mg, 77,34%) como um sólido branco. 4-cloro-5-[5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-1,2,3,4-tetra-hidro- 2,6-naftiridin-2-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00132] A uma solução agitada de 4-cloro-5-[5-[4-fluoro-2-(trifluoro- metil)fenoxi]-1,2,3,4-tetra-hidro-2,6-naftiridin-2-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hi- dropiridazin-3-ona (107 mg, 0,204 mmol, 1 equiv.) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 1 hora em temperatura ambiente. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura foi basificada a pH 7 com NaHCO3 saturado (aq.). A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O produto em bruto (50 mg) foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condi- ções (Coluna: XBridge Prep OBD C18 Coluna 30×150 mm 5um; Fase móvel A:Água (10 mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 60 mL / min; Gradiente: 30% B a 50% B em 8min; 220 nm; Rt: 7,55 min) para proporcionar 4-cloro-5-[5-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- noxi]-1,2,3,4-tetra-hidro-2,6-naftiridin-2-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (60 mg, 66,78%) como um sólido branco. Exemplo 4. Síntese do Composto 118

Tolueno/rt/2h DIEA/limpo/100ºC/2h Composto 118 2-(benzilamino)propanoato de etila

[00133] A uma solução agitada de benzaldeído (8 g, 75,384 mmol, 1 equiv.) e TEA (7,63 g, 75,384 mmol, 1 equiv.) em DCE (100 mL, 1263,149 mmol, 16,76 equiv.) foi adicionado TEA (7,63 g, 75,384 mmol, 1 equiv.) e NaBH(OAc)3 (31,95 g, 150,767 mmol, 2 equiv.) em porções à temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi agi- tada em rt durante a noite. O produto desejado pode ser detectado por LCMS. A mistura de resultante foi extraída com DCM (2 x 150 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 90 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concen- trado sob pressão reduzida para se obter etil 2- (benzilamino)propano- ato (12 g, 76,80%) como um óleo incolor. óxi-4-[benzil(1-etóxi-1-oxopropan-2-il)amino]butanoato de metila

[00134] A uma solução agitada de 2-(benzilamino)propanoato de etila (8 g, 38,596 mmol, 1 equiv.) e metil 4-oxobutanoato (4,48 g, 38,596 mmol, 1,00 equiv.) em DCE (120 mL, 1515,779 mmol, 39,27 equiv.) foi adicionado TEA (3,91 g, 38,596 mmol, 1 equiv.) e NaBH(OAc)3 (16,36 g, 77,193 mmol, 2 equiv.) em porções à temperatura ambiente sob at- mosfera de nitrogênio. A mistura foi agitada em rt durante a noite. O produto desejado pode ser detectado por LCMS. A mistura de resultante foi extraída com DCM (2 x 150 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 90 mL), secas sobre Na 2SO4anidro. Após a filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para se obter óxi-4-[benzil(1-etóxi-1-oxopropan-2-il)amino]butanoato de metila (10g, 84,29%) como um óleo incolor. 1-benzil-2-metil-3-oxopiperidina-4-carboxilato de metila

[00135] A uma solução agitada de óxi-4-[benzil(1-etóxi-1-oxopropan- 2-il)amino]butanoato de metila (8 g, 26,026 mmol, 1 equiv.) em Tolueno (100 mL) foi adicionado t-BuOK (5,00 g, 52,051 mmol, 2 equiv.) em por- ções à temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi agitada a 80°C por 2 horas. O produto desejado foi detectado por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EtOAc (5:1 a 2:1) para se obter 1-benzil-2-metil-3-oxopiperidina-4-carboxilato de metila (6,5 g, 95,57%) como um sólido branco. 7-benzil-8-metil-5H, 6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol

[00136] A uma solução agitada de 1-benzil-2-metil-3-oxopiperidina- 4-carboxilato de metila (6 g, 22,960 mmol, 1 equiv.) em EtOH (80 mL, 1377,083 mmol, 59,98 equiv.) foi adicionado t-BuONa (4,41 g, 45,921 mmol, 2 equiv.) e cloridrato de metanimidamida (3,70 g, 45,921 mmol, 2,00 equiv.) em porções à temperatura ambiente sob atmosfera de ni- trogênio. A mistura foi agitada a 80°C durante 2h. O produto desejado pode ser detectado por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EtOAc (3:1 a 2:1) para proporcionar 7-benzil-8- metil-5H, 6H, 7H, 8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol (5 g, 85,29%) como um sólido branco.

óxi-4-hidróxi-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carbo- xilato de terc-butila

[00137] A uma solução de 7-benzil-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-ol (5 g, 19,583 mmol, 1 equiv.) em EtOH (60 mL, 1032,812 mmol, 52,74 equiv.) foi adicionado Boc2O (8,55 g, 39,166 mmol, 2 equiv), CH3COONa (1,81 g, 23,500 mmol, 1,2 equiv), Pd(OH)2/C (275,01 mg, 1,958 mmol, 0,1 equiv.) sob atmosfera de nitrogênio. A mis- tura foi hidrogenada à temperatura ambiente durante 2h sob atmosfera de hidrogênio, filtrada através de uma almofada de Celite e concentrada sob pressão reduzida para se obter óxi-4-hidróxi-8-metil-5H,6H,7H,8H- pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (4,5 g, 86,61%) como um sólido branco. 4-cloro-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00138] A uma solução agitada de óxi-4-hidróxi-8-metil- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (4,5 g, 16,961 mmol, 1 equiv.) e PPh3 (6,67 g, 25,442 mmol, 1,5 equiv.) em DCE (60 mL, 0,606 mmol, 0,04 equiv.) foi adicionado CCl 4 (5,22 g, 33,922 mmol, 2 equiv.) em porções à temperatura ambiente sob atmos- fera de nitrogênio. A mistura foi agitada a 70°C por 2 horas. O produto desejado pode ser detectado por LCMS. A mistura resultante foi con- centrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna de gel de sílica, eluído com PE/EtOAc (7:1) para proporcionar terc- butil 4-cloro-8-metil-5H, 6H, 7H, 8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato (4 g, 83,11%) como um sólido branco. 4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- dina-7-carboxilato de terc-butila

[00139] A uma solução agitada de terc-butil 4-cloro-8-metil- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato (4 g, 14,096 mmol, 1 equiv.) e 2 -cloro-4-fluorofenol (2,07 g, 14,096 mmol, 1 equiv.) em DMF

(50 mL) foi adicionado K2CO3 (3,90 g, 28,193 mmol, 2 equiv.) em por- ções à temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi agitada a 70 durante 1h. O produto desejado pode ser detectado por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EtOAc (1:1) para proporcionar terc-butil 4-(2-cloro-4-fluorofenóxi)-8- metil-5H, 6H, 7H, 8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato (4 g, 72,05%) como um sólido branco. 4-(2-Cloro-4-fluorofenoxi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- dina

[00140] A uma solução agitada de 4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-8-metil- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (4 g, 1 equiv.) em DCM (20 mL) foi adicionado TFA (4 mL) gota a gota / em porções à temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi agitada a rt por 2h. O produto desejado pode ser detectado por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar 4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina (2,7 g, 90,51%) como um sólido esbranquiçado. 4-cloro-5-[4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00141] A uma solução agitada de 4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-8-metil- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (1 g, 3,404 mmol, 1 equiv.) em DIEA (1 mL) foi adicionado 4,5-dicloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropirida- zin-3-ona (0,85 g, 3,404 mmol, 1 equiv.) em porções à temperatura am- biente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi agitada a 100°C du- rante a noite. O produto desejado pode ser detectado por LCMS. O re- síduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EtOAc (1:1 a 1:2) para fornecer 4-cloro-5-[4-(2-cloro-4-fluorofe- noxi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3- di-hidropiridazin-3-ona (1 g, 58,01%) como um sólido branco.

4-cloro-5-[4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00142] A uma solução agitada de 4-cloro-5-[4-(2-cloro-4-fluorofe- noxi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3- di-hidropiridazin-3-ona (1 g, 1 equiv.) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (2 mL) gota a gota à temperatura ambiente sob atmosfera de nitro- gênio. A mistura foi agitada a rt durante 1 h. O produto desejado pode ser detectado por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pres- são reduzida para gerar 4-cloro-5-[4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-8-metil- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (600 mg, 71,95%) como um sólido branco. 4-cloro-5-[(8R)-4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00143] 4-cloro-5-[4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (250 mg, 1 equiv.) foi separada por prep quiral-HPLC (Coluna: CHIRALPAK IG, 20*250 mm, 5 um; Fase móvel A:Hex:DCM = 3:1 (0,1% FA)--HPLC, Fase móvel B: EtOH--HPLC; Taxa de fluxo: 20 mL/min; Gradiente: 15 B a 15 B em 19 min; 220/254 nm; RT1: 13,016; RT2: 16,004) para proporcionar 4-cloro- 5-[(8R)-4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-8-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]piri- midin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (144 mg, 57,60%) como um sólido branco. Exemplo 5. Síntese do Composto 103 Composto 103

4-[2-(difluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7- carboxilato de terc-butila

[00144] A uma solução agitada de 4-cloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(800 mg, 2,966 mmol, 1 equiv.) e 2-(difluorometil)fenil acetato (1104,26 mg, 5,932 mmol, 2,00 equiv.) em DMF (20 mL) foram adicionados K2CO3 (1229,72 mg, 8,898 mmol, 3 equiv.) em porções a 80°C sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas. A reação foi monitorizada por LCMS. A reação foi extinta com água à temperatura ambiente. A mistura foi extraída com EtOAc (3 x 50 mL). As camadas orgânicas com- binadas foram lavadas com salmoura (3 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão re- duzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash reversa com as seguintes condições: coluna, sílica gel C18; fase móvel, MeOH em água, gradiente de 10% a 50% em 10 min; detector, UV 254 nm. para se obter 4-[2-(difluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina- 7-carboxilato de terc-butila (900 mg, 80,41%) como um sólido esbran- quiçado. 4-[2-(Difluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina

[00145] A uma solução agitada de 4-[2-(difluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (900 mg, 2,385 mmol, 1 equiv.) em DCM foi adicionado ácido 3,3,3-trifluoro- propanoico (3 mL, 6,00 equiv.) gota a gota à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 1,5 horas. A reação foi monitorada por TLC (PE/EtOAc 10:1). O resíduo foi basificado para pH 8 com NaHCO3 (aq.) saturado. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O produto em bruto (100 mg) foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições para proporcionar 4-[2-(difluorometil)fe- noxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (329 mg , 49,75%) como um sólido esbranquiçado.

4-Cloro-5-[4-[2-(difluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]piri- midin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00146] A uma solução agitada de 4-[2-(difluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (328 mg, 1,183 mmol, 1 equiv.) e 4,5-dicloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (169,05 mg, 0,679 mmol, 1,00 equiv.) foram adicionados DIEA (175,43 mg, 1,357 mmol, 2,00 equiv.) em porções a 70°C. A mistura foi agitada durante 2 horas a 70°C. O resíduo foi purificado por cromatografia flash reversa com as seguintes condições: coluna, sílica gel C18; fase móvel, MeOH em água, gradiente de 10% a 50% em 10 min; detector, UV 254 nm. para proporcionar 4-cloro-5-[4-[2-(difluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (328 mg, 56,60%) como um sólido esbranquiçado. 4-Cloro-5-[4-[2-(difluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]piri- midin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00147] A uma solução agitada de 4-cloro-5-[4-[2-(difluorometil)fe- noxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidro- piridazin-3-ona (328 mg, 0,670 mmol, 1 equiv.) em DCM (10 mL) foi adi- cionado ácido trifluoroacético (3 mL) gota a gota à temperatura ambi- ente. A mistura foi concentrada sob vácuo. O produto foi purificado por HPLC Prep para proporcionar 4-cloro-5-[4-[2-(difluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (256,4 mg, 94,38%) como um sólido esbranquiçado. Exemplo 6. Síntese do Composto 117 e 117a

Tolueno/rt/2 h Quiral-HPLC Composto 117a Composto 117 4-[(1-feniletil)amino]pentanoato de etila

[00148] A uma solução agitada de 1-feniletan-1-amina (25 g, 206,300 mmol, 1 equiv.) e etil 4-oxopentanoato (29,74 g, 206,300 mmol, 1 equiv.) em DCE (400 mL, 5052,598 mmol, 24,49 equiv.) foi adicionado NaBH (OAc)3 (65,59 g, 309,449 mmol, 1,5 equiv.) em porções a 25°C sob at- mosfera de nitrogênio. A solução foi agitada a 25°C durante 2 horas. A reação foi extinta pela adição de H2O (400 mL) a 0°C. A mistura resul- tante foi extraída com DCM (3 x 200 mL). As camadas orgânicas com- binadas foram lavadas com NaCl (aq.) saturado (3 x 200 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pres- são reduzida. O produto bruto foi usado para a próxima etapa. óxi-4-[(2-etóxi-2-oxoetil)(1-feniletil)amino]pentanoato de etila

[00149] A uma solução agitada de 4-[(1-feniletil)amino]pentanoato de etila (49 g, 196,508 mmol, 1 equiv.) e etil 2-oxoacetato (40,12 g, 392,990 mmol, 2,00 equiv.) em DCE (500 mL, 6315,747 mmol, 32,14 equiv.) foi adicionado NaBH (OAc)3 (62,47 g, 294,762 mmol, 1,5 equiv.) em por- ções a 25°C sob atmosfera de nitrogênio. A solução foi agitada a 25°C durante 2 horas. A reação foi extinta pela adição de H2O (400 mL) a 0°C. A mistura resultante foi extraída com DCM (3 x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl (aq.) saturado (3 x 200 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concen- trado sob pressão reduzida. O produto bruto óxi-4-[(2-etóxi-2-oxoetil)(1- feniletil)amino]pentanoato de etila (57 g, 86,47%) foi usado na próxima etapa. 2-metil-5-oxo-1-(1-feniletil)piperidina-4-carboxilato de etila

[00150] A uma solução de óxi-4-[(2-etóxi-2-oxoetil)(1-fenile- til)amino]pentanoato de etila (57 g, 169,924 mmol, 1 equiv.) em Tolueno (500 mL, 4699,452 mmol, 27,66 equiv.) adicionado t-BuOK (47,67 g, 424,810 mmol, 2,5 equiv.) em portas a 0°C. A mistura foi agitada a 25°C durante 2 horas. A mistura resultante foi concentrada sob pressão redu- zida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sí- lica, eluído com PE/EA (50/1 a 10/1) para proporcionar 2-metil-5-oxo-1- (1-feniletil)piperidina-4-carboxilato de etila (29 g, 58,98%) como um óleo amarelo 7-(1-ciclo-hexiletil)-6-metil-deca-hidropirido[3,4-d]pirimidin-4-ol

[00151] A uma solução de 2-metil-5-oxo-1-(1-feniletil)piperidina-4- carboxilato de etila (10 g, 34,557 mmol, 1 equiv.) e cloridrato de metani- midamida (4,17 g, 51,836 mmol, 1,50 equiv.) em EtOH (100 mL, 1721,353 mmol, 49,81 equiv.) foi adicionado EtONa (5,88 g, 86,393 mmol, 2,50 equiv.) em portas a 25°C. A mistura foi agitada a 90°C du- rante 2 horas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com DCM/MeOH (20/1 a 10/1) para proporcionar 7- (1-ciclo-hexiletil)-6-metil-deca-hidropirido[3,4-d]pirimidin-4-ol (3,4 g, 34,96%) como um sólido amarelo.

óxi-4-hidróxi-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carbo- xilato de terc-butila

[00152] A uma solução de 6-metil-7-(1-feniletil)-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-4-ol (3,5 g, 12,994 mmol, 1 equiv), HCOONH4 (4,10 g, 65,022 mmol, 5,00 equiv.) e Boc2O (8,51 g, 38,983 mmol, 3 equiv.) em EtOH (50 mL, 860,677 mmol, 66,23 equiv.) foi adicionado Pd(OH)2/C (0,36 g, 2,599 mmol, 0,2 equiv.) sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi hidrogenada a 70°C durante 2 horas sob atmosfera de hidrogênio usando um frasco de hidrogênio, filtrada através de uma almofada de Celite e concentrada sob pressão reduzida. Para proporcionar óxi-4-hi- dróxi-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc- butila (1,8 g, 52,21%) como um sólido amarelo. 4-cloro-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00153] A uma solução de óxi-4-hidróxi-6-metil-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (1,8 g, 6,784 mmol, 1 equiv.) e PPh3 (3,56 g, 13,569 mmol, 2 equiv.) em DCE (20 mL, 252,630 mmol, 37,24 equiv.) foi adicioado CCl4 (3,13 g, 20,353 mmol, 3 equiv.) a 25°C. A mistura foi agitada a 70°C durante 3 horas. A mistura resul- tante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EA (10/1 a 1/1) para se proporcionar 4-cloro-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- dina-7-carboxilato de terc-butila (1,1 g, 57,14%) como um sólido ama- relo. 4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- dina-7-carboxilato de terc-butila

[00154] A uma solução de 4-cloro-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (1,1 g, 3,877 mmol, 1 equiv.) e 2- cloro-4-fluorofenol (0,85 g, 5,800 mmol, 1,50 equiv.) em DMF (15 mL, 193,826 mmol, 50,00 equiv.) foi adicionado K2CO3 (1,07 g, 7,753 mmol,

2 equiv.) a 25°C. A mistura foi agitada a 70°C durante 1 hora. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EA (10/1 a 5/1) para se proporcionar 4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-6-metil- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (1,2 g, 78,60%) como um sólido amarelo. 4-Cloro-5-[4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-6-metil-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00155] Uma mistura de 4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-6-metil- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (800 mg, 2,724 mmol, 1 equiv.) e 4,5-dicloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (678,42 mg, 2,724 mmol, 1,00 equiv.) em DIEA (704,01 mg, 5,447 mmol, 2 equiv.) foi agi- tado durante 16 horas a 100°C sob atmosfera de nitrogênio. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (PE/EA 1/1) para proporcionar 4-cloro-5-[4- (2-cloro-4-fluorofenoxi)-6-metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]- 2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (530 mg, 38,43%) como um só- lido amarelo claro. 4-cloro-5-[(6R)-4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-6-metil-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00156] A uma solução de 4-cloro-5-[4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-6-me- til-5H,6H,7H,8H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiri- dazin-3-ona (530 mg, 1,047 mmol, 1 equiv.) em DCM (20 mL, 314,601 mmol, 300,57 equiv.) foi adicionado TFA (1193,47 mg, 10,467 mmol, 10 equiv.) a 25°C. A solução foi agitada a 25°C durante 2 horas. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto (600 mg) foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições (Coluna: XBridge Shield RP18 OBD Coluna 30*150 mm, 5um; Fase móvel A:Água (10 mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 60 mL/min; Gradiente: 20% B a 40% B em 7 min; 220 nm; Rt: 6,63 min)

para proporcionar o racemato (200 mg).O resíduo (200 mg) foi purifi- cado por Chiral-Prep-HPLC com as seguintes condições: Coluna: CHI- RALPAK IE, 2*25 cm, 5um; Fase móvel A:MTBE (0,1% FA)-HPLC, Fase móvel B: IPA--HPLC; Taxa de fluxo: 18 mL / min; Gradiente: 20 B a 20 B em 15 min; 220/254 nm. Embora os dois éômeros fossem separados por esta técnica, a orientação absoluta não foi determinada. O composto designado como 4-cloro-5-[(6S)-4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-6-metil- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (60,9 mg, 13,78%) foi obtido em 9,688 min como um sólido branco. O composto designado como 4-cloro-5-[(6R)-4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-6- metil-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3- ona (61,5 mg, 13,92%) foi obtido em 11,813 min como um sólido branco. Exemplo 7. Síntese do Composto 134 DIEA/limpo/100ºC/2h Composto 134 2-cloro-4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00157] A uma solução agitada de 2-(difluorometil)-4-fluorofenol (5,33 g, 32,879 mmol, 2,00 equiv.) e 2,4-dicloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(5 g, 16,438 mmol, 1 equiv.) em DMF (30 mL) foi adicionado NaHCO3 (4,14 g, 49,282 mmol, 3,00 equiv.) à temperatura ambiente. A solução foi agitada a 70°C durante 0,5 hora. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 10 mM NH4HCO3); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 70% B - 95% gradiente B em 100 min; Detector: 254 nm. As frações contendo o produto desejado foram cole- tadas a 92% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar terc-butil 2-cloro-4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoxi]-5H,6H,7H, 8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato (2,100 g) como um sólido esbranqui- çado. 2-metil 4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-2,7-dicarboxilato de 7-terc-butila

[00158] A uma solução de 2-cloro-4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (400 mg, 0,931 mmol, 1 equiv.) e TEA (188,34 mg, 1,861 mmol, 2 equiv.) em MeOH (15 mL, 370,484 mmol, 398,10 equiv.) foi adicionado Pd(PPh3)4 (107,54 mg, 0,093 mmol, 0,1 equiv.) em um tanque de pressão. A mis- tura foi purgada com nitrogênio por 1 hora e, em seguida, foi pressuri- zada a 10 atm com monóxido de carbono a 100°C por 16 horas. A mis- tura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e filtrada para re- mover os sólidos insolúveis. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 10 mM NH4HCO3); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL/min.; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min., 35% B - 65% B de gradiente em 20 min.; Detector: 254 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 62% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 2-metil 4-[2-(di- fluorometil)-4-fluorofenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-2,7-di- carboxilato de 7-terc-butila (100 mg, 23,70%) como um óleo incolor. 4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoxi]-2-(hidroximetil)-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00159] A uma solução agitada de 2-metil 4-[2-(difluorometil)-4-fluo- rofenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-2,7-dicarboxilato de 7-

terc-butila (100 mg, 0,221 mmol, 1 equiv.) em t-BuOH (6 mL, 63,139 mmol, 286,29 equiv.) foi adicionado NaBH4 (16,69 mg, 0,441 mmol, 2 equiv.) à temperatura ambiente. A solução foi agitada a 70°C durante 3 horas. À mistura foi adicionada água (3 mL). O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Co- luna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 10 mM NH4HCO3); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gra- diente: 5% - 5% B, 10 min, 45% B - 80% gradiente B em 20 min; Detec- tor: 254 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 74% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 4-[2- (difluorometil)-4-fluorofenoxi]-2-(hidroximetil)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (35 mg, 37,30%) como um óleo incolor. [4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]piri- midin-2-il]metanol

[00160] A uma solução agitada de 4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoxi]- 2-(hidroximetil)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (35 mg) em DCM (6 mg) foi adicionado TFA (1 mg) à tempe- ratura ambiente. A solução foi agitada a rt durante 2 horas. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por croma- tografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 10 mM NH4HCO3); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gra- diente: 5% - 5% B, 10 min, 25% B - 55% gradiente B em 20 min; Detec- tor: 254 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 41% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar [4-[2- (difluorometil)-4-fluorofenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2- il]metanol (20 mg) como óleo incolor. 4-cloro-5-[4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoxi]-2-(hidroximetil)-

5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropi- ridazin-3-ona

[00161] Em um frasco de fundo redondo de 25 mL foram adicionados [4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin- 2-il]metanol (20 mg, 0,061 mmol, 1 equiv.) e 4,5-dicloro-2-(oxan-2-il)- 2,3-di-hidropiridazin-3-ona (15,31 mg, 0,061 mmol, 1 equiv.) à tempera- tura ambiente. À mistura foi adicionado DIEA (15,89 mg, 0,123 mmol, 2 equiv.) a rt. A mistura foi agitada a 90°C durante 2 horas. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes con- dições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 10 mM NH4HCO3); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 35% B - 70% gradiente B em 20 min; Detector: 254 nm. As frações contendo o produto desejado fo- ram coletadas a 65% B e concentradas sob pressão reduzida para pro- porcionar 4-cloro-5-[4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoxi]-2-(hidroximetil)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropirida- zin-3-ona (30 mg, 90,71%) como um óleo incolor. 4-cloro-5-[4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoxi]-2-(hidroximetil)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00162] A uma solução agitada de 4-cloro-5-[4-[2-(difluorometil)-4- fluorofenoxi]-2-(hidroximetil)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2- (oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (30 mg) em DCM (5 mL) foi adici- onado TFA (1 mL) à temperatura ambiente. A solução foi agitada a rt durante 2 horas. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O pro- duto bruto (30 mg) foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes con- dições (Coluna: XBridge Prep OBD C18 Coluna 30×150 mm 5um; Fase móvel A: indefinido, Fase móvel B: indefinido; Taxa de fluxo: 60 mL / min; Gradiente: 20% B a 40% B em 8 min; 220 nm; Rt: 7,22 min) para proporcionar 4-cloro-5-[4-[2-(difluorometil)-4-fluorofenoxi]-2-(hidroxime- til)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

(8,7 mg) como um sólido branco.

[00163] Os compostos 128, 125, 114 foram preparados pelos méto- dos e esquema descritos neste Exemplo usando 2-trifluorometilfenol, 4- fluoro-2-trifluorometilfenol e 4-fluoro-2-clorofenol respectivamente, no lugar de 2-(difluorometil)-4 -fluorofenol na primeira etapa da síntese. Exemplo 8. Síntese do Composto 112 Limpo/100ºC/2h Composto 112 2-cloro-4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- dina-7-carboxilato de terc-butila

[00164] A uma mistura agitada de 2,4-dicloro-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (800 mg, 2,630 mmol, 1 equiv.) e 2-cloro-4-fluorofenol (578,16 mg, 3,945 mmol, 1,50 equiv.) em DMF (15 mL) foi adicionado K2CO3 (726,99 mg, 5,260 mmol, 2,00 equiv.) em porções a rt sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 0,5 hora a 70°C sob atmosfera de nitrogênio. A rea- ção foi monitorizada por LCMS. A mistura foi deixada esfriar até a rt. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura re- sultante foi extraída com EtOAc (3 x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão re- duzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EtOAc (30/1 a 10/1) para proporcionar 2-cloro-4- (2-cloro-4-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxi- lato de terc-butila (1 g, 91,78%) como um óleo amarelo. 4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-2-[[(4-metoxifenil)metil]amino]-

5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00165] A uma mistura agitada de 2-cloro-4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (700 mg, 1,690 mmol, 1 equiv.) em THF (30 mL) foi adicionada 1-(4-metoxi- fenil)metanamina (1159,02 mg, 8,449 mmol, 5,00 equiv.) em porções a rt sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 16 horas a 60°C sob atmosfera de nitrogênio. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura foi deixada esfriar até a rt. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (3 x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash reversa com as seguintes condições (coluna, gel de sílica C18; fase móvel, acetonitrila em água, gradiente de 60% a 95% em 20 min; detector, UV 220 nm) para proporcionar 4-(2-cloro-4-fluoro- fenoxi)-2-[[(4-metoxifenil)metil]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- dina-7-carboxilato de terc-butila (350 mg, 40,22%) como um óleo ama- relo. 4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-N-[(4-metoxifenil)metil]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-2-amina

[00166] A uma solução agitada de terc-butil 4-(2-cloro-4-fluorofe- noxi)-2-[[(4-metoxifenil) metil]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- dina-7-carboxilato (350 mg, 1 equiv.) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (1 mL) gota a gota a rt. A mistura de reação foi agitada durante 2 horas a rt. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado a pH = 8 com NH4HCO3 (aq.) saturado. A mistura de resultante foi extraída com DCM (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por HPLC Prep com as seguintes condições (Coluna: Coluna XBridge Shield RP18 OBD, 5um, 19*150 mm; Fase móvel A: Água (10mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 25 mL/min; Gra- diente: 2% B a 32% B em 1min; 220/254 nm; Rt: 7,08 min) para propor- cionar 4- (2-cloro-4-fluorofenoxi)-N-[(4-metoxifenil)metil]-5H,6H,7H,8H- pirido[3,4-d]pirimidin-2-amina (260 mg) como um óleo amarelo. 4-cloro-5-[4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-2-[[(4-metoxifenil)me- til]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3- di-hidropiridazin-3-ona

[00167] Em um frasco de fundo redondo de 50 mL foram adicionados 4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-N-[(4-metoxifenil)metil]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina-2-amina (260 mg, 0,627 mmol, 1 equiv), 4,5-di- cloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (156,11 mg, 0,627 mmol, 1,00 equiv.) e DIEA (242,99 mg, 1,880 mmol, 3,00 equiv.) a rt sob at- mosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 2 horas a 90°C sob atmosfera de nitrogênio. O resíduo foi purificado por croma- tografia flash reversa com as seguintes condições (coluna, gel de sílica C18; fase móvel, acetonitrila em água, gradiente de 50% a 85% em 25 min; detector, UV 220 nm) para proporcionar 4-cloro-5-[4-(2-cloro-4-flu- orofenoxi)-2-[[(4-metoxifenil)metil]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]piri- midin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (350 mg, 89,00%) como um sólido amarelo. 5-[2-amino-4-(2-cloro-4-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]piri- midin-7-il]-4-cloro-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00168] A uma solução agitada de 4-cloro-5-[4-(2-cloro-4-fluorofe- noxi)-2-[[(4-metoxifenil)metil]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin- 7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (200 mg) em TFA (8 mL, 107,704 mmol, 328,23 equiv). A mistura de reação final foi irradiada com radiação de micro-ondas por 2 horas a 80°C. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida.

O resíduo foi basificado a pH = 8 com NH4HCO3 (aq.) saturado. A mis- tura de resultante foi extraída com DCM (2 x 100 mL). As camadas or- gânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pres- são reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições (Coluna: XBridge Prep OBD C18 Coluna 30 × 150 mm 5um; Fase móvel A: Água (NH4HCO3 10 mM), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 60 mL / min; Gradiente : 25% B a 40% B em 8 min; 220 nm; Rt: 7,35 min) para proporcionar 5-[2-amino-4-(2-cloro-4-fluorofe- noxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-4-cloro-2,3-di-hidropirida- zin-3-ona (52,4 mg) como um sólido amarelo.

[00169] Os compostos 113, 116 e 102 foram preparados pelos mé- todos e esquema descritos neste Exemplo usando 2-clorofenol, 4-flu- oro-2-trifluorometilfenol, 2-trifluorofenol respectivamente, no lugar de 2- cloro-4-fluorofenol na primeira etapa da síntese. Exemplo 9. Síntese dos Compostos 129 e 130 Então, HCl adicionado separação Composto 130 Composto 129 1-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H, 6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pi- rimidin-2-il]etan-1-ona

[00170] A uma mistura de terc-butil 2-cloro-4-[4-fluoro-2-(trifluorome- til)fenoxi]-5H,6H,7H, 8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato (600 mg, 1,340 mmol, 1 equiv.) e tributila (1-etoxietenil)estanano (967,80 mg, 2,680 mmol, 2,00 equiv.) em tolueno (10 mL) foi adicionado Pd(PPh 3)4 (77,41 mg, 0,067 mmol, 0,05 equiv.) a rt sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 4 horas a 110°C. A reação foi mo- nitorada por LCMS. éto resultou em 2-(1-etoxietenil)-4-[4-fluoro-2-(triflu- orometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(700 mg, 108,06%) como um óleo amarelo. A mistura bruta resultante foi usada na próxima etapa diretamente sem purificação adi- cional.

[00171] A uma solução agitada de 2-(1-etoxietenil)-4-[4-fluoro-2-(tri- fluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(1 g, 2,068 mmol, 1 equiv.) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (3,33 mL, 29,239 mmol, 21,70 equiv.) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 2 horas em temperatura ambiente. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura/o resíduo foi basificada(o) a pH 8 com NaHCO3 (aq.). saturado. A mistura resultante foi concentrada sob pres- são reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM NH4HCO3); Fase móvel B: ace- tonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 43% B - 55% gradiente B em 20 min; Detector: 220 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 50% B e concentradas sob pres- são reduzida para proporcionar 1-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]- 5H, 6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]etan-1-ona (750 mg, 102,06%) como um sólido amarelo claro. 5-[2-Acetil-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-4-cloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin- 3-ona

[00172] Em um frasco de fundo redondo de 50 mL foram adicionados 1-[4-[4-fluoro-2- (trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- din-2-il]etan-1-ona (750 mg, 2,111 mmol, 1 equiv.) e 4,5-dicloro-2-(oxan- 2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (525,81 mg, 2,111 mmol, 1,00 equiv.) à temperatura ambiente. À mistura acima foi adicionado DIEA (818,47 mg, 6,333 mmol, 3,00 equiv). A mistura resultante foi agitada durante 2 horas a 100°C. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura foi deixada res- friar até a temperatura ambiente. O resíduo foi purificado por cromato- grafia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Sphe- rical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM NH4HCO3); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 60% B - 85% gradiente B em 20 min; Detector: 220 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 80% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 5-[2-acetil-4-[4- fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-4- cloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (230 mg, 19,18%) como um óleo amarelo claro. 4-Cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-2-(1-hidroxietil)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropi- ridazin-3-ona

[00173] A uma solução agitada de 5-[2-acetil-4-[4-fluoro-2-(trifluoro- metil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-4-cloro-2-(oxan-2- il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (230 mg, 0,405 mmol, 1 equiv.) em MeOH (10 mL) foi adicionado NaBH4 (30,64 mg, 0,810 mmol, 2,00 equiv.) em porções a 0°C sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agi- tada por 2 horas em temperatura ambiente. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (PE/EtOAc 1/1) para proporcionar 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-2-(1-hidroxietil)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropirida- zin-3-ona (120 mg, 51,99%) como um óleo amarelo claro. 4-Cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-2-[(1S)-1-hidroxietil]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona e 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-2-[(1R)-1-hidroxie- til]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3- ona

[00174] A uma solução agitada de 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluoro- metil)fenoxi]-2-(1-hidroxietil)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2- (oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (120 mg, 0,211 mmol, 1 equiv.) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (2,00 mL) , 17,541 mmol, 127,89 equiv.) gota a gota à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agi- tada por 2 horas em temperatura ambiente. A reação foi monitorizada por LCMS. O resíduo foi basificado para pH 8 com NaHCO3 (aq.) satu- rado. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O re- síduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as se- guintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM NH4HCO3); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 40% B - 80% gradiente B em 25 min; Detector: 220 nm. As frações contendo o produto desejado foram recolhidas a 55% B e concentradas sob pressão reduzida. O pro- duto em bruto (50 mg) foi purificado por Chiral-Prep-HPLC com as se- guintes condições (Coluna: CHIRALPAK IE, 2*25 cm, 5um; Fase móvel A:Hex (0,1% FA)--HPLC, Fase móvel B: EtOH--HPLC; Taxa de fluxo: 16 mL/min; Gradiente: 30 B a 30 B em 33 min; 220/254 nm; RT1: 26,219; RT2: 29,589). Embora os dois éômeros fossem separados por esta téc- nica, a orientação absoluta não foi determinada. O composto designado como 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-2-[(1S)-1-hidroxietil]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3, 4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (27,1 mg) foi obtido em 29,589 min como um sólido esbranquiçado. O composto designado como 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- noxi]-2- [(1R)-1-hidroxietil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3- di-hidropiridazin-3-ona (22,6 mg) foi obtido em 26,219 min como um só- lido esbranquiçado.

[00175] O composto 119 foi preparado pelos métodos e esquema descritos neste Exemplo usando terc-butil 2-cloro-4-[4-fluoro-2-clorofe- noxi]-5H, 6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato como material de partida.

[00176] Os compostos 122 e 123 foram preparados pelos métodos e esquema descritos neste Exemplo usando 2-cloro-4-[2-(trifluorometil)fe- noxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila como material de partida. Novamente, a orientação absoluta desses éô- meros separados não foi determinada e a designação como (S) ou (R) era arbitrária. Exemplo 10. Síntese do Composto 115 DIEA/limpo/90ºC/2h Composto 115 2-cloro-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- dina-7-carboxilato de terc-butila

[00177] A uma solução agitada de 2,4-dicloro-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(2 g, 6,58 mmol, 1 equiv.) e 2-(trifluorometil)fenol (1,6 g, 9,86 mmol, 1,5 equiv.) em aceto- nitrila (20 mL) foi adicionado DBU (2,0 g, 13,15 mmol, 2 equiv.) à tem- peratura ambiente. A solução foi agitada a rt durante 4 horas. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep- TLC (PE/EtOAc 10:1) para proporcionar 2-cloro-4-[2-(trifluorometil)fe- noxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (700 mg, 24,77%) como óleo incolor.

2-([2-[(terc-butildimetilsilil)oxi]etil]amino)-4-[2-(trifluorometil)fe- noxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-bu- tila

[00178] A uma solução de 2-cloro-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (500 mg, 1,163 mmol, 1 equiv.) em THF (15 mL) foi adicionado (2-amino- etoxi)(terc-butil)dimetilsilano (1019,89 mg, 5,816 mmol, 5,00 equiv.) à temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 16 h a 50°C. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (PE/EtOAc 3/1) para se obter terc-butil 2-([2- [(tert-butildimetilsilil)oxi]etil]amino)-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato (440 mg, 66,51%) como um óleo amarelo claro. 2-([4-[2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2- il]amino)etan-1-ol

[00179] A uma solução agitada de 2-([2-[(terc-butildimetilsi- lil)oxi]etil]amino)-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pi- rimidina-7-carboxilato de terc-butila (440 mg, 0,774 mmol, 1 equiv.) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (3 mL, 40,389 mmol, 52,20 equiv.) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 2 h em tem- peratura ambiente. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura re- sultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash reversa com as seguintes condições: coluna, sí- lica gel C18; fase móvel, ACN em água, gradiente de 40% a 60% em 15 min; detector, UV 254 nm para proporcionar 2-([4-[2-(trifluorometil)fe- noxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]amino)etan-1-ol (220 mg) como um óleo amarelo claro. 4-cloro-5-[2-[(2-hidroxietil)amino]-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]-

[00180] Em um frasco de fundo redondo de 50 mL foram adicionados 2-([4-[2- (trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2- il]amino)etano-1-ol (220 mg, 0,621 mmol, 1 equiv.) e 4,5-dicloro-2- (oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (154,66 mg, 0,621 mmol, 1,00 equiv.) à temperatura ambiente. À mistura acima foi adicionado DIEA (240,74 mg, 1,863 mmol, 3,00 equiv). A mistura resultante foi agitada durante 2 h a 100 graus C. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura foi deixada resfriar até a temperatura ambiente. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM NH4HCO3); Fase móvel B: ACN; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradi- ente: 5% - 5% B, 10 min, 45% B - 60% gradiente B em 20 min; Detector: 220 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 55% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 4-cloro-5-[2- [(2-hidroxietil)amino]-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (210 mg, 59,66%) como um amarelo sólido. 4-cloro-5-[2-[(2-hidroxietil)amino]-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00181] A uma solução agitada de 4-cloro-5-[2-[(2-hidroxietil)amino]- 4-[2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2- (oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (200 mg, 0,353 mmol, 1 equiv.) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (2 mL) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. A rea- ção foi monitorizada por LCMS. A mistura foi basificada a pH 8 com NaHCO3 (aq.). saturado. A mistura resultante foi concentrada sob pres- são reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições (Coluna: XBridge Prep OBD C18 Coluna 30 × 150 mm 5um;

Fase móvel A: indefinida, Fase móvel B: indefinida; Taxa de fluxo: 60 mL / min; Gradiente: 25% B a 50% B em 8 min; 220 nm; Rt: 7,67 min) para proporcionar 4-cloro-5-[2-[(2-hidroxietil)amino]-4-[2-(trifluorome- til)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin- 3-ona (106,3 mg) como um sólido branco. Exemplo 11. Síntese dos Compostos 138 e 139 Composto 138 Composto 139 7-Benzil-2-cloro-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H- pirido[3,4-d]pirimidina

[00182] A uma solução agitada de 4-fluoro-2-(trifluorometil)fenol (1469,32 mg, 8,158 mmol, 1,20 equiv.) e 7-benzil-2,4-dicloro- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (2000 mg, 6,799 mmol, 1 equiv.) em DMF (20 mL) foi adicionado K2CO3 (1879,20 mg, 13,597 mmol, 2 equiv.) à temperatura ambiente. A solução foi agitada a 70°C durante 0,5 hora. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes con- dições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM TFA); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 70% B - 95% gradiente B em 20 min; Detector: 254 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 95% B e concentradas sob pressão reduzida para proporci- onar 7-benzil-2-cloro-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H- pirido[3,4-d]pirimidina (2331 mg, 78,31%) como um sólido esbranqui- çado. 7-benzil-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-2-ona

[00183] Uma solução de 7-benzil-2-cloro-4-[4-fluoro-2-(trifluorome- til)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (2 g, 4,568 mmol, 1 equiv.) em HAc (10 mL, 174,515 mmol, 38,20 equiv.) e H2O (1 mL, 55,508 mmol, 12,15 equiv.) foi agitada durante 10 horas a 140°C sob atmosfera de N2. A mistura resultante foi concentrada sob pressão re- duzida. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (PE/EA 1/1) para propor- cionar 7-benzil-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-1H,2H,5H,6H,7H,8H- pirido[3,4-d]pirimidin-2-ona (530 mg, 27,67%) como um sólido amarelo claro. 4-[4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidin-2-ona

[00184] A uma solução de 7-benzil-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- noxi]-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-ona (530 mg, 1,264 mmol, 1 equiv.) em MeOH (10 mL, 246,989 mmol, 195,44 equiv.) foi adicionado Pd/C (268,98 mg, 2,528 mmol, 2 equiv.) sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi hidrogenada à temperatura ambiente C durante 4 horas sob atmosfera de hidrogênio usando um frasco de hidrogênio, filtrada através de uma almofada de Celite e concentrada sob pressão reduzida. Para proporcionar 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]- 1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-ona (430 mg, 103,34%) como um sólido amarelo claro. 4-Cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-2-oxo- 1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di- hidropiridazin-3-ona

[00185] Uma mistura de 4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]- 1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-ona (430 mg, 1,306 mmol, 1 equiv.) e 4,5-dicloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (357,84 mg, 1,437 mmol, 1,1 equiv.) em DIEA (337,58 mg, 2,612 mmol, 2,00 equiv.) foi agitado durante 2 horas a 100°C sob atmosfera de N2. O re- síduo foi purificado por Prep-TLC (PE/EA 1/1) para proporcionar 4-cloro- 5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-2-oxo-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (210 mg, 29,67%) como um sólido amarelo claro. 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-1-metil-2-oxo- 1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di- hidropiridazin-3-ona e 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- noxi]-2-metóxi-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2- il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00186] A uma solução de 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- noxi]-2-oxo-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2- il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (90 mg, 0,166 mmol, 1 equiv.) e NaHCO3 (27,90 mg, 0,332 mmol, 2 equiv.) em DMF (10 mL, 129,218 mmol, 778,02 equiv.) foi adicionado CH3I (47,15 mg, 0,332 mmol, 2,00 equiv.) gota a gota a 0°C sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi agitada a 25°C por 16 horas. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (PE/EA 0/1) para pro- porcionar 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-1-metil-2-oxo- 1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hi- dropiridazin-3-ona (60 mg, 64,99%) e 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluoro- metil)fenoxi]-2-metóxi-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan- 2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (15 mg) como um sólido amarelo claro. 4-Cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-1-metil-2-oxo- 1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropirida- zin-3-ona

[00187] A uma solução de 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- noxi]-1-metil-2-oxo-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2- (oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (60 mg, 0,108 mmol, 1 equiv.) em DCM (10 mL, 157,300 mmol, 1457,41 equiv.) foi adicionado TFA (123,07 mg, 1,079 mmol, 10 equiv.) a 25°C. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto (100 mg) foi purificado por Prep- HPLC com as seguintes condições (Coluna: XBridge Shield RP18 OBD Coluna 30*150 mm, 5um; Fase móvel A:Água (10 mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo : 60 mL / min; Gradiente: 20% B a 40% B em 7min; 220 nm; Rt: 6,63 min) para proporcionar 4-cloro-5-[4- [4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-1-metil-2-oxo-1H,2H,5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (29,3 mg, 57,54%) como um sólido branco. 4-Cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-2-metóxi- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00188] A uma solução de 4-cloro-5-[4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- noxi]-2-metóxi-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3- di-hidropiridazin-3-ona (15 mg, 0,027 mmol, 1 equiv.) em DCM (5 mL, 78,650 mmol, 2914,83 equiv.) foi adicionado TFA (30,77 mg, 0,270 mmol, 10 equiv.) a 25°C. A mistura resultante foi concentrada sob pres- são reduzida. O produto bruto (20 mg) foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições (Coluna: XBridge Shield RP18 OBD Coluna 30*150 mm, 5um; Fase móvel A:Água (10 mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo : 60 mL / min; Gradiente: 20% B a 40% B em 7min; 220 nm; Rt: 6,63 min) para proporcionar 4-cloro-5-[4-[4-fluoro- 2-(trifluorometil)fenoxi]-2-metóxi-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7- il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (7,5 mg, 58,91%) como um sólido branco. Exemplo 12. Síntese do Composto 110 limpo/100ºC/2h Composto 110 2-cloro-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- dina-7-carboxilato de terc-butila

[00189] A uma solução agitada de 2,4-dicloro-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(2 g, 6,58 mmol, 1 equiv.) e 2-(trifluorometil)fenol (1,6 g, 9,86 mmol, 1,5 equiv.) em aceto- nitrila (20 mL) foi adicionado DBU (2,0 g, 13,15 mmol, 2 equiv.) à tem- peratura ambiente. A solução foi agitada a rt durante 4 horas. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep- TLC (PE/EtOAc 10:1) para proporcionar 2-cloro-4-[2-(trifluorometil)fe- noxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (700 mg, 24,77%) como óleo incolor. óxi-2-metóxi-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]-5H, 6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00190] A uma solução de 2-cloro-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (1 g, 2,327 mmol, 1 equiv.) em MeOH (20 mL, 493,978 mmol, 212,32 equiv.) foi adicionado NaOMe (0,25 g, 0,005 mmol, 2 equiv.) a 25°C. A mistura foi agitada a 25°C durante 4 horas. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna de gel de sílica, eluído com PE/EA (10/1 a 1/1) para proporcionar óxi-2-metóxi-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- dina-7-carboxilato de terc-butila(100 mg, 10,10%) como um sólido ama- relo claro.

2-Metóxi-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]-5H, 6H,7H,8H-pirido[3,4-d]piri- midina

[00191] A uma solução de óxi-2-metóxi-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(100 mg, 0,235 mmol, 1 equiv.) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (268,03 mg, 2,351 mmol, 10 equiv.) a 25°C. A solução foi agitada a 25°C durante 4 horas. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O produto em bruto (150 mg) foi purificado por Prep-HPLC com as seguin- tes condições (coluna: XBridge Shield RP18 OBD Coluna 30*150 mm, 5um; Fase móvel A: Água (10 mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetoni- trila; Taxa de fluxo: 60 mL/min; Gradiente: 20% B a 40% B em 7min; 220 nm; Rt: 6,63 min) para proporcionar 2-metóxi-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (80 mg, 104,62%) como um sólido amarelo claro. 4-Cloro-5-[2-metóxi-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00192] Uma solução de 2-metóxi-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (80 mg, 0,246 mmol, 1 equiv.) e 4,5-dicloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (61,26 mg, 0,246 mmol, 1 equiv.) em DIEA (63,57 mg, 0,492 mmol, 2,00 equiv.) foi agitada durante 2 horas a 100°C sob atmosfera de nitrogênio. O resíduo foi pu- rificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EA (5/1 a 1/1) para proporcionar 4-cloro-5-[2-metóxi-4-[2-(trifluorometil)fe- noxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidro- piridazin-3-ona (120 mg, 90,71%) como uma luz sólido amarelo. 4-Cloro-5-[2-metóxi-4-[2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00193] A uma solução de 4-cloro-5-[2-metóxi-4-[2-(trifluorometil)fe- noxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidro- piridazin-3-ona (120 mg, 0,223 mmol, 1 equiv.) em DCM (5 mL, 78,650 mmol, 352,56 equiv.) foi adicionado TFA (254,36 mg, 2,231 mmol, 10,00 equiv.) a 25°C. A mistura resultante foi concentrada sob pressão redu- zida. O produto bruto (150 mg) foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições (Coluna: XBridge Shield RP18 OBD Coluna 30*150 mm, 5um; Fase móvel A:Água (10 mM NH4HCO3), Fase móvel B: ace- tonitrila; Taxa de fluxo : 60 mL / min; Gradiente: 20% B a 40% B em 7min; 220 nm; Rt: 6,63 min) para proporcionar 4-cloro-5-[2-metóxi-4-[2- (trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hi- dropiridazin-3-ona (24,1 mg, 23,81%) como um sólido branco. Exemplo 13. Síntese do Composto 108 limpo/100ºC/2h Composto 108 4-(3-bromo-2-clorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7- carboxilato de terc-butila

[00194] A uma solução agitada de 4-cloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(500 mg, 1,854 mmol, 1 equiv.) e 3-bromo-2-clorofenol (461,46 mg, 2,224 mmol, 1,20 equiv.) em DMF (10 mL) foi adicionado K2CO3 (512,38 mg, 3,707 mmol, 2 equiv.).A mistura resultante foi agitada durante 1 h a 70°C. A mistura foi purificada por cromatografia flash reversa com as seguintes condições: Coluna: (C18 espiral, 20-40 um, 330g; Fase móvel A: Água (5mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL/min; Gradiente: 20% B a 60% B em 55 min; 254 nm).As frações contendo o produto desejado foram recolhidas a 40% B e concentradas sob pressão reduzida. éto resultou em 4-(3-bromo-2-clorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-

carboxilato de terc-butila (300 mg, 36,72%) como um sólido esbranqui- çado. 4-(2-cloro-3-cianofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7- carboxilato de terc-butila

[00195] A uma solução agitada de 4-(3-bromo-2-clorofenoxi)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (450 mg, 1,021 mmol, 1 equiv.) e dicarbonitrila de zinco (143,87 mg, 1,225 mmol, 1,20 equiv.) em DMF (5 mL) foi adicionado Pd(PPh 3)4 (117,99 mg, 0,102 mmol, 0,1 equiv.).A mistura resultante foi agitada durante 2 horas a 120°C sob atmosfera de nitrogênio. O resíduo foi purificado por cromatografia flash reversa com as seguintes condições: Coluna: spne- rical C18, 20-40 um, 180 g; Fase móvel A: Água (5mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 45 mL / min; Gradiente: 10% B a 60% B em 55 min; 254 nm. As frações contendo o produto desejado foram recolhidas a 40% B e concentradas sob pressão reduzida. éto resultou em 4-(2-cloro-3-cianofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- dina-7-carboxilato de terc-butila (280 mg, 70,89%) como um amarelo claro sólido. 2-cloro-3-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-iloxi]benzonitrila

[00196] A uma solução agitada de 4-(2-cloro-3-cianofenoxi)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (100 mg, 0,259 mmol, 1 equiv.) em DCM (3 mL) foi adicionado TFA (1 mL). A mistura resultante foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente sob atmosfera de ar. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura foi basificada a pH 7 NH4HCO3 (aq.) saturado. A mistura foi purificada por cromatografia flash reversa com as seguintes condições: Coluna: spnerical C18, 20-40 um, 180 g; Fase móvel A: Água ((5mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 45 mL / min; Gradiente: 30% B a 60% B em 30 min; 254 nm). As frações con- tendo o produto desejado foram recolhidas a 45% B e concentradas sob pressão reduzida. éto resultou em 2-cloro-3-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-iloxi]benzonitrila (60 mg, 80,95%) como um óleo amarelo claro. 2-cloro-3-([7-[5-cloro-1-(oxan-2-il)-6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oxi)benzonitrila

[00197] A uma solução agitada de 4-(2-cloro-3-cianofenoxi)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (60 mg, 0,155 mmol, 1 equiv.) e 4,5-dicloro-2- (oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3- ona (38,63 mg, 0,155 mmol, 1,00 equiv.) em DIEA (40,09 mg, 0,310 mmol, 2 equiv).A mistura resultante foi agitada durante horas a 100°C sob atmosfera de ar. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (PE/EtOAc 1:1) para proporcionar 2-cloro-3-([7-[5-cloro-1-(oxan-2-il)-6-oxo-1,6-di- hidropiridazin-4-il]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oxi)benzoni- trila (50 mg, 64,56%) como um sólido amarelo claro. 2-cloro-3-[[7-(5-cloro-6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il)-5H,6H,7H,8H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oxi]benzonitrila

[00198] A uma solução agitada de 2-cloro-3-([7-[5-cloro-1-(oxan-2-il)- 6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]oxi)benzonitrila (50 mg, 0,100 mmol, 1 equiv.) em DCM (3 mL) foi adi- cionado TFA (1 mL).A mistura resultante foi agitada por 2 horas em tem- peratura ambiente. A mistura resultante foi concentrada sob pressão re- duzida. A mistura foi basificada a pH 7 NH4CO3 (aq.) saturado.O produto bruto foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições (Coluna: XBridge Prep OBD C18 Coluna 30×150 mm 5um; Fase móvel A: Água (10mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 60 mL / min; Gradiente: 20% B a 42% B em 8 min; 220 nm; Rt: 7,58 min) para proporcionar 2-cloro-3-[[7-(5-cloro-6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oxi]benzonitrila (14,5 mg, 34,88%) como um sólido esbranquiçado. Exemplo 14. Síntese do Composto 111 limpo/100ºC/2h Composto 111 4-[3-bromo-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]piri- midina-7-carboxilato de terc-butila

[00199] A uma mistura agitada de 4-cloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(180 mg, 0,667 mmol, 1 equiv.) e 3-bromo-2-(trifluorometil)fenol (241,25 mg, 1,001 mmol, 1,50 equiv.) em DMF (10 mL) foi adicionado Cs2CO3 (434,86 mg, 1,335 mmol, 2,00 equiv.) em porções a rt sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 0,5 hora a 70°C sob atmosfera de nitrogênio. A rea- ção foi monitorizada por LCMS. A mistura foi deixada esfriar até a rt. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura re- sultante foi extraída com EtOAc (3 x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão re- duzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash reversa com as seguintes condições (coluna, gel de sílica C18; fase móvel, acetonitrila em água, gradiente de 40% a 85% em 30 min; detector, UV 220 nm) para proporcionar 4-[3-bromo-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (150 mg, 47,39%) como um óleo amarelo. 4-[3-ciano-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- dina-7-carboxilato de terc-butila

[00200] A uma mistura agitada de 4-[3-bromo-2-(trifluorometil)fe- noxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

(150 mg, 0,316 mmol , 1 equiv.) e Zn(CN)2 (111,43 mg, 0,949 mmol, 3,00 equiv.) em DMF (8 mL) foi adicionado Pd (PPh3) 4 (36,55 mg, 0,032 mmol, 0,1 equiv.) em porções a rt sob atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação final foi irradiada com radiação de micro-ondas por 3 horas a 150°C. A reação foi monitorada por LCMS. O resíduo foi purificado por cromatografia flash reversa com as seguintes condições (coluna, gel de sílica C18; fase móvel, acetonitrila em água, gradiente de 40% a 95% em 30 min; detector, UV 220 nm) para proporcionar 4-[3-ciano-2-(triflu- orometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (70 mg, 52,65%) como um óleo amarelo. 3-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-iloxi]-2-(trifluorometil)ben- zonitrila

[00201] A uma solução agitada de 4-[3-ciano-2-(trifluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (70 mg) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (1 mL) gota a gota a rt. A mistura de reação foi agitada durante 2 horas a rt. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado a pH = 8 com NH4HCO3 (aq.) saturado. A mistura de resultante foi extraída com DCM (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão re- duzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash reversa com as seguintes condições (coluna, gel de sílica C18; fase móvel, acetonitrila em água, gradiente de 30% a 60% em 20 min; detector, UV 220 nm) para fornecer 3-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-iloxi]-2-(trifluoro- metil)benzonitrila (40 mg) como um óleo amarelo. 3-([7-[5-cloro-1-(oxan-2-il)-6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oxi)-2-(trifluorometil)benzo- nitrila

[00202] Em um frasco de fundo redondo de 25 mL foram adicionados

3-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-iloxi]-2-(trifluorometil)benzoni- trila (40 mg, 0,125 mmol, 1 equiv), 4,5-dicloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidro- piridazin-3-ona (62,22 mg, 0,250 mmol, 2,00 equiv.) e DIEA (48,42 mg, 0,375 mmol, 3,00 equiv.) a rt sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 16 horas a 90°C sob atmosfera de nitro- gênio. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (PE/EtOAc = 5/1) para pro- porcionar 3-([7-[5-cloro-1-(oxan-2-il)-6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oxi)-2-(trifluorometil)benzonitrila (50 mg, 75,12%) como um óleo amarelo. 3-[[7-(5-Cloro-6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il)-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-4-il]oxi]-2-(trifluorometil)benzonitrila

[00203] A uma solução agitada de 3-([7-[5-cloro-1-(oxan-2-il)-6-oxo- 1,6-di-hidropiridazin-4-il]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]oxi)-2- (trifluorometil)benzonitrila (50 mg) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (1 mL) gota a gota a rt. A mistura de reação foi agitada durante 2 horas a rt. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi concen- trada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado a pH = 8 com NH4HCO3 (aq.) saturado. A mistura de resultante foi extraída com DCM (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o fil- trado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições (Coluna: XBridge Prep OBD C18 Coluna 30×150 mm 5um; Fase móvel A: Água (10mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 60 mL / min; Gradiente: 25% B a 45% B em 8 min; 220 nm; Rt: 7,07 min) para proporcionar 3-[[7-(5- cloro-6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- din-4-il]oxi]-2-(trifluorometil)benzonitrila (10,8 mg) como um sólido branco. Exemplo de 15. Síntese dos Compostos 126 e 126a

EtOH/refluxo/6 h DIEA/limpo/90ºC/2 h Composto 126a Composto 126 N-[(1E)-1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etilideno]-4-metilbenzeno- 1-sulfonohidrazida

[00204] A uma solução agitada de 1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- nil]etan-1-ona (2 g, 9,702 mmol, 1 equiv.) em EtOH (40 mL) foi adicio- nado 4-metilbenzeno-1-sulfonohidrazida (1,81 g, 9,719 mmol, 1,00 equiv.) em porções a rt sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 6 horas a 90°C sob atmosfera de nitrogênio. A rea- ção foi monitorizada por LCMS. A mistura foi deixada esfriar até a rt. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM AcOH); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gra- diente: 5% - 5% B, 10 min, 45% B - 70% gradiente B em 20 min; Detec- tor: 220 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 60% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar N-[(1E)- 1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etilideno]-4-metilbenzeno-1-sulfonohi- drazida (2,5 g, 68,83%) como um sólido branco. 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etenil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00205] A uma mistura agitada de 4-cloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(750 mg, 2,781 mmol, 1 equiv.) e N-[(1E)-1-[4-fluoro-2- (trifluorometil)fenil]etilideno]-4-metilbenzeno-1- sulfonohidrazida (2081,80 mg, 5,561 mmol, 2,00 equiv.) em 1,4-dioxano (20 mL) foram adicionados Pd (acetonitrila)2Cl2 (72,14 mg, 0,278 mmol, 0,10 equiv.), Dppf (307,18 mg, 0,556 mmol, 0,2 equiv.) e t-BuOLi (489,71 mg, 6,117 mmol, 2,20 equiv.) em porções a rt sob atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação final foi irradiada com radiação de micro- ondas por 2 horas a 100°C. A reação foi monitorada por LCMS. A mis- tura foi deixada esfriar até rt. A mistura resultante foi filtrada, a torta de filtração foi lavada com EtOAc (2x50 mL). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20- 40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM AcOH); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 50% B - 90% gradiente B em 30 min; Detector: 220 nm. As frações con- tendo o produto desejado foram coletadas a 85% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- nil]etenil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-bu- tila (800 mg, 67,95%) como um óleo marrom. 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00206] A uma solução de 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etenil]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (150 mg) em 30 mL de MeOH foi adicionado Pd/C (10%, 30 mg) sob atmos- fera de nitrogênio em um frasco de fundo redondo de 100 mL. A mistura foi hidrogenada à temperatura ambiente C durante 4 horas sob atmos- fera de hidrogênio usando um frasco de hidrogênio, filtrada através de uma almofada de celite e concentrada sob pressão reduzida. éto resul- tou em 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-

d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (150 mg) como um óleo ama- relo. 4-[1-[4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina

[00207] A uma solução agitada de 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- nil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (150 mg) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (1 mL) gota a gota a rt. A mistura de reação foi agitada durante 2 horas a rt. A reação foi moni- torada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão re- duzida. O resíduo foi basificado a pH = 8 com NH4HCO3 (aq.) saturado. A mistura de resultante foi extraída com DCM (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 30 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pres- são reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 120 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM AcOH); Fase móvel B: acetoni- trila; Taxa de fluxo: 45 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 40% B - 58% gradiente B em 15 min; Detector: 254 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 53% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (100 mg) como um óleo amarelo. 4-cloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00208] Em um frasco de fundo redondo de 50 mL foram adicionados 4-[1-[4-fluoro-2- (trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- dina (100 mg , 0,307 mmol, 1 equiv), 4,5-dicloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hi- dropiridazin-3-ona (91,88 mg, 0,369 mmol, 1,20 equiv.) e DIEA (119,19 mg, 0,922 mmol, 3,00 equiv.) a rt sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 2 horas a 90°C sob atmosfera de nitrogê- nio. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura foi deixada resfriar até rt. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 120 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM AcOH); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 45 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 40% B - 60% gradiente B em 15 min; Detector: 220 nm. As frações contendo o pro- duto desejado foram coletadas a 53% B e concentradas sob pressão reduzida para produzir 4-cloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- nil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hi- dropiridazin-3-ona (120 mg, 72,57%) como um óleo amarelo. 4-cloro-5-[4-[(1S)-1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona e 4-cloro-5-[4-[(1R)-1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00209] A uma solução agitada de 4-cloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluo- rometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oxan-2-il)- 2,3-di-hidropiridazin-3-ona (200 mg) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (1 mL) gota a gota a rt. A mistura de reação foi agitada durante 4 horas a rt. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado a pH = 8 com NH4HCO3 (aq.) saturado. A mistura de resultante foi extraída com DCM (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Chiral-Prep-HPLC com as seguintes condições (coluna: XBridge Prep Phenyl OBD Coluna 19 × 150 mm 5um 13nm; Fase móvel A: Fase móvel B: Taxa de fluxo: 60 mL / min; Gradiente: 20% B a 37% B em 8 min; 220 nm; Rt: 7,97 min). Embora os dois éômeros fossem separados por esta técnica, a orientação absoluta não foi determinada. O composto designado como 4-cloro-5-[4-[(1S)-1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

(11,8 mg) foi obtido em 1,819 min como um sólido esbranquiçado. O composto designado como 4-cloro-5-[4-[(1R)-1-[4-fluoro-2-(trifluorome- til)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropirida- zin-3-ona (13,5 mg) foi obtido em 2,470 min como um sólido branco. Exemplo 16. Síntese do Composto 133 DIEA/limpo/100ºC/16 h DIEA/limpo/100ºC/2 h Composto 133 4-[metil[(3R,4R)-4-metilpiperidin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00210] Em um frasco de fundo redondo de 25 mL foram adicionados (3R,4R)-1-benzil-N,4-dimetilpiperidin-3-amina (2,43 g, 0,011 mmol, 1,50 equiv.) e 4-cloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(2 g, 0,007 mmol, 1 equiv.) à temperatura ambiente. À mistura foi adicionado DIEA (1,92 g, 0,015 mmol, 2,00 equiv.) a rt. A mistura foi agitada a 100°C durante 2 horas. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (PE/EtOAc 1:1) para proporcionar 4-[metil[(3R,4R)-4-metilpiperidin-3- il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-bu- tila (670 mg, 25,00%) como um sólido esbranquiçado. (3R, 4R)-1-Benzil-N,4-dimetil-N-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- din-4-il]piperidin-3-amina

[00211] A uma solução agitada de 4-[[(3R,4R)-1-benzil-4-metilpiperi- din-3-il](metil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (413 mg, 0,914 mmol, 1 equiv.) em DCM (10 mL) foi adici- onado ácido trifluoroacético (3 mL, 0,026 mmol, 6,00 equiv.) gota a gota a 0°C. A mistura foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. A reação foi monitorizada por LCMS. A solução foi concentrada sob pres- são reduzida. O produto bruto (362 mg) foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições (Coluna: Coluna XBridge Shield RP18 OBD, 5um, 19*150 mm; Fase Móvel A: Água (10mM NH4HCO3), Fase Móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL/min; Gradiente: 30% B a 80% B em 25 min; 220 nm; Rt: 21,65 min) para proporcionar (3R, 4R)-1-ben- zil-N,4-dimetil-N-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperidin-3- amina (250 mg, 77,77%) como óleo vermelho. 5-(4-[[(3R,4R)-1-Benzil-4-metilpiperidin-3-il](metil)amino]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-4-cloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di- hidropiridazin-3-ona

[00212] Em um frasco de fundo redondo de 25 mL foram adicionados (3R,4R)-1-benzil-N,4-dimetil-N-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperidin-3-amina (263 mg, 0,748 mmol, 1 equiv.) e 4,5-dicloro-2- (oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (186,38 mg, 0,748 mmol, 1,00 equiv.) à temperatura ambiente. À mistura foi adicionado DIEA (193,41 mg, 1,261 mmol, 2 equiv.) a rt. A mistura foi agitada durante 2 horas a 100°C. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM NH4HCO3); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 45% B - 95% B em 30 min; Detector: 254 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 85% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 5-(4-[[(3R,4R)-1-benzil-4-metilpiperidin-3-il](metil)amino]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-4-cloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hi- dropiridazin-3-ona (245 mg, 58,04 %) como um sólido esbranquiçado. 5-(4-[[(3R,4R)-1-Benzil-4-metilpiperidin-3-il](metil)amino]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-4-cloro-2,3-di-hidropirida- zin-3-ona

[00213] A uma solução agitada de 5-(4-[[(3R,4R)-1-benzil-4-metilpi- peridin-3-il](metil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-4- cloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (88 mg, 1 equiv.) em DCM (10 mL) foi adicionado ácido trifluoroacético (3 mL, 0,026 mmol, 6,00 equiv.) gota a gota a 0°C. A mistura foi agitada durante 2 horas à tem- peratura ambiente. A solução foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase mó- vel A: Água (mais 5 mM TFA); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 33% B - 95% gradiente B em 30 min; Detector: 254 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 90% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 5-(4-[[(3R,4R)-1-benzil-4-metilpiperidin-3-il](metil)amino]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-4-cloro-2,3-di-hidropiridazin-3- ona (33,5 mg, 44,74%) como um sólido esbranquiçado.

[00214] O composto 133a foi preparado pelos métodos e esquema descritos neste exemplo usando (3S,4S)-1-benzil-N,4-dimetilpiperidin- 3-amina no lugar de (3R,4R)-1-benzil-N,4-dimetilpiperidin-3-amina. Exemplo 17. Síntese do Composto 136 1,4-dioxano/110ºC/16 h DIEA/limpo/100ºC/2 h Composto 136 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00215] Uma mistura de 4-fluoro-2-(trifluorometil)anilina (6,64 g, 37,074 mmol, 2 equiv), 4-cloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7- carboxilato de terc-butila(5 g, 18,537 mmol, 1 equiv), Pd (AcO) 2 (0,83 g, 3,707 mmol, 0,2 equiv), XantPhos (4,29 g, 7,415 mmol, 0,4 equiv.) e Cs2CO3 (12,08 g, 37,074 mmol, 2 equiv.) em 1,4-dioxano (80 mL) foi agitado a 110°C durante 16 horas. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado para dar o produto em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE:EA (20:1 a 1:2) para proporcionar 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (5,6 g, 73,26%) como um sólido branco. óxi-4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-metóxi-2-oxoetil)amino]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00216] A uma mistura agitada de terc-butil 4-[[4-fluoro-2-(trifluoro- metil)fenil]amino]-5H, 6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato (3 g, 7,275 mmol, 1 equiv.) e 2-bromoacetato de metila (2,23 g, 14,578 mmol, 2,00 equiv.) em DMF (30 mL) foi adicionado Cs2CO3 (4,74 g, 14,548 mmol, 2,00 equiv.) em porções a rt sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 2 horas a rt. A reação foi moni- torada por LCMS. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (3 x 400 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2 x 200 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por croma- tografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM TFA); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 55% B - 85% gradiente B em 30 min; Detector: 220 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 79% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar óxi-4-[[4-fluoro- 2-(trifluorometil)fenil](2-metóxi-2-oxoetil)amino]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (500 mg, 14,19%) como um sólido amarelo. 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-hidroxietil)amino]-

5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00217] A uma solução agitada de óxi-4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- nil](2-metóxi-2-oxoetil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7- carboxilato de terc-butila (500 mg, 1,032 mmol, 1 equiv.) em THF (50 mL) foi adicionado LiAlH4 (78,34 mg, 2,064 mmol, 2,00 equiv.) em por- ções a -30°C sob atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi agi- tada durante 16 horas a rt. A reação foi monitorada por LCMS. A reação foi extinta pela adição de água (1 mL) a -30°C. Os sólidos precipitados foram coletados por filtração e lavados com MeOH (3x30 mL). A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por Prep- TLC (PE/EA = 1/1) para proporcionar 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- nil](2-hidroxietil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxi- lato de terc-butila (100 mg, 21,23%) como um óleo amarelo. 4-[1-[4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina

[00218] A uma solução agitada de 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- nil]etil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (150 mg) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (1 mL) gota a gota a rt. A mistura de reação foi agitada durante 2 horas a rt. A reação foi moni- torada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão re- duzida. O resíduo foi basificado a pH = 8 com NH4HCO3 (aq.) saturado. A mistura de resultante foi extraída com DCM (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 30 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pres- são reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 120 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM NH4HCO3); Fase móvel B: ace- tonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 40% B - 58% gradiente B em 15 min; Detector: 220 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 53% B e concentradas sob pres- são reduzida para proporcionar 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etil]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (100 mg) como um óleo amarelo. 4-Cloro-5-(4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-hidroxietil)amino]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropi- ridazin-3-ona

[00219] Em um frasco de fundo redondo de 50 mL foram adicionados 2-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]([5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il])amino]etan-1-ol (40 mg, 0,112 mmol, 1 equiv), 4,5-dicloro-2-(oxan-2- il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (55,92 mg, 0,224 mmol, 2,00 equiv.) e DIEA (43,53 mg, 0,337 mmol, 3,00 equiv.) a rt sob atmosfera de nitro- gênio. A mistura resultante foi agitada durante 2 horas a 90°C sob at- mosfera de nitrogênio. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura foi deixada resfriar até rt. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 120 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM NH4HCO3); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 45 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 40% B - 60% B gradiente em 15 min; Detector: 220 nm. As fra- ções contendo o produto desejado foram coletadas a 55% B e concen- tradas sob pressão reduzida para proporcionar 4-cloro-5-(4-[[4-fluoro-2- (trifluorometil)fenil](2-hidroxietil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- din-7-il)-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (50 mg, 78,28%) como um óleo amarelo. 4-Cloro-5-(4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-hidroxietil)amino]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00220] A uma solução agitada de 4-cloro-5-(4-[[4-fluoro-2-(trifluoro- metil)fenil](2-hidroxietil)amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)- 2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (50 mg) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (1 mL) gota a gota a rt. A mistura de reação foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. A reação foi monitorada por

LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado a pH = 8 com NH4HCO3 (aq.) saturado. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (2 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão re- duzida. O resíduo foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes con- dições (Coluna: XBridge Prep OBD C18 Coluna 30 × 150 mm 5um; Fase móvel A: indefinida, Fase móvel B: indefinida; Taxa de fluxo: 60 mL / min; Gradiente: 30% B a 45% B em 8 min; 220 nm; Rt: 7,6 min) para proporcionar 4-cloro-5-(4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](2-hidroxie- til)amino-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2,3-di-hidropiridazin- 3-ona (6,2 mg) como um sólido branco. Exemplo 18. Síntese do Composto 132

2. Comp 2 foi adicionado/50ºC/2 h DIEA/limpo/90ºC/2 h Composto 132 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciclopropil]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00221] A uma solução agitada de t-BuONa (226,97 mg, 2,362 mmol, 2,00 equiv.) em DMSO (20 mL) foi adicionado Me3SiI (472,57 mg, 2,362 mmol, 2,00 equiv.) em porções a 40°C sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 0,5 hora a 40°C sob atmosfera de nitrogênio. Em seguida, 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]etenil]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (500 mg, 1,181 mmol, 1 equiv.) em DMSO (5 mL) foi gota a gota a rt sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 1 hora a rt sob atmosfera de nitrogênio. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura foi deixada esfriar até rt. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM NH4HCO3); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 55% B - 80% B gradiente em 25 min; Detector: 220 nm. As frações contendo o produto desejado foram cole- tadas a 73% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciclopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (240 mg, 46,46%) como um óleo amarelo. 4-[1-[4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciclopropil]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina

[00222] A uma solução agitada de 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- nil]ciclopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (240 mg, 0.549, 1 equiv.) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (1 mL, 13,463 mmol, 24,54 equiv.) gota a gota a rt. A mistura de reação foi agitada durante 2 horas a rt. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado a pH = 8 com NH4HCO3 (aq.) saturado. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (2 x 100 mL). As camadas orgânicas combina- das foram lavadas com salmoura (1 x 100 mL), secas sobre Na2SO4ani- dro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 120 g; Fase mó- vel A: Água (mais 5 mM AcOH); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 45 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 33% B - 45% B gradi- ente em 20 min; Detector: 254 nm. As frações contendo o produto de- sejado foram coletadas a 40% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciclopropil]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (150 mg, 81,05%) como um óleo amarelo. 4-Cloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciclopropil]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropi- ridazin-3-ona

[00223] Em um frasco de fundo redondo de 50 mL foram adicionados 4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciclopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina (150 mg, 0,445 mmol, 1 equiv), 4,5-dicloro-2-(oxan-2-il)- 1,2,3,6-tetra-hidropiridazin-3-ona (134,00 mg, 0,534 mmol, 1,20 equiv.) e DIEA (172,42 mg, 1,334 mmol, 3,00 equiv.) a rt sob atmosfera de ni- trogênio. A mistura resultante foi agitada durante 2 horas a 90°C sob atmosfera de nitrogênio. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura foi deixada resfriar até rt. O resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20-40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM NH4HCO3); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% - 5% B, 10 min, 40% B - 60% B gradiente em 15 min; Detector: 220 nm. As fra- ções contendo o produto desejado foram coletadas a 54% B e concen- tradas sob pressão reduzida para produzir 4-cloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2- (trifluorometil)fenil]ciclopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)- 2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (200 mg, 81,78%) como um óleo amarelo. 4-Cloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciclopropil]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00224] A uma solução agitada de 4-cloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluo- rometil)fenil]ciclopropil]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-

(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (200 mg) em DCM (10 mL) foi adi- cionado TFA (2 mL) gota a gota a rt. A mistura de reação foi agitada durante 2 horas a rt. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura re- sultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado a pH = 8 com NH4HCO3 (aq.) saturado. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (2 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram la- vadas com salmoura (1 x 100 mL), secas sobre Na 2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições (Coluna: XBridge Prep OBD C18 Coluna 30 × 150 mm 5um; Fase móvel A: inde- finida, Fase móvel B: indefinida; Taxa de fluxo: 60 mL / min; Gradiente: 30% B a 55% B em 8 min; 220 nm; Rt: 7,232 min) para proporcionar 4- cloro-5-(4-[1-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]ciclopropil]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (39,2 mg) como um sólido esbranquiçado. Exemplo 19. Síntese do Composto 109 1,4-dioxano/H2O/100ºC/16 h limpo/100ºC/2 h Composto 109 4-(2-bromo-3-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7- carboxilato de terc-butila

[00225] A uma solução agitada de 4-cloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-

d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(500 mg, 1,854 mmol, 1 equiv.) e 2-bromo-3-fluorofenol (424,87 mg, 2,224 mmol, 1,20 equiv.) em DMF (10 mL) foi adicionado K2CO3 (512,38 mg, 3,707 mmol, 2 equiv.).A mis- tura resultante foi agitada durante 0,5 hora a 70°C. A mistura foi deixada resfriar até a temperatura ambiente. A reação foi extinta com água à temperatura ambiente. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (2 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com sal- moura (2 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cro- matografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EtOAc (5:1) para proporcionar 4-(2-bromo-3-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]piri- midina-7-carboxilato de terc-butila (500 mg, 63,58%) como um sólido branco. 4-(2-etenil-3-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7- carboxilato de terc-butila

[00226] A uma solução de 4-(2-bromo-3-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H- pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (500 mg, 1,178 mmol, 1 equiv.) e pentametil-1,3,2-dioxaborolano (334,72 mg, 2,357 mmol, 2,00 equiv.) em H2O (2 mL) e 1,4-dioxano (16 mL) foram adicionados K2CO3 (325,75 mg, 2,357 mmol, 2 equiv.) e Pd(PPh3)4 (68,09 mg, 0,059 mmol, 0,05 equiv). Após agitação durante a noite a 90°C sob uma at- mosfera de nitrogênio, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EtOAc (5:1) para proporcionar 4-(2-etenil-3-flu- orofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc- butila (250 mg, 57,12%) como um óleo amarelo. 4-(2-etil-3-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-car- boxilato de terc-butila

[00227] A uma solução agitada de 4-(2-etenil-3-fluorofenoxi)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (250 mg, 0,673 mmol, 1 equiv.) em MeOH (10 mL) foi adicionado Pd/C (100 mg, 0,940 mmol, 1,40 equiv).A mistura resultante foi agitada durante 2 horas a RT sob atmosfera de hidrogênio. A mistura resultante foi filtrada, o bolo do filtro foi lavado com MeOH (2x10 mL). O filtrado foi concen- trado sob pressão reduzida. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. éso resultou em 4-(2-etil-3-fluorofenoxi)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (210 mg, 0,08%) como um óleo preto. 4-(2-Etil-3-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina

[00228] A uma solução agitada de 4-(2-etil-3-fluorofenoxi)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (210 mg, 0,562 mmol, 1 equiv.) em DCM (3 mL) foi adicionado TFA (1 mL).A mistura resultante foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente sob atmosfera de ar. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura foi basificada a pH 8 NH4HCO3 (aq.) saturado.A mis- tura foi purificada por cromatografia flash reversa com as seguintes con- dições: Coluna: spnerical C18, 20-40 um, 180 g; Fase móvel A: Água (5mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 45 mL / min; Gradiente: 25% B a 60% B em 40 min; 254 nm).As frações contendo o produto desejado foram recolhidas a 40% B e concentradas sob pressão reduzida. éto resultou em 4-(2-etil-3-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina (120 mg, 78,07%) como um óleo amarelo claro. 4-Cloro-5-[4-(2-etil-3-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- din-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00229] A uma solução agitada de 4-(2-etil-3-fluorofenoxi)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina (120 mg, 0,439 mmol, 1 equiv.) e 4,5-dicloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (109,37 mg, 0,439 mmol, 1,00 equiv.) em DIEA (113,49 mg, 0,878 mmol, 2 equiv.).A mis- tura resultante foi agitada durante 2 horas a 100°C sob atmosfera de ar. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (PE/EtOAc 1:1) para proporcionar

4-cloro-5-[4-(2-etil-3-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7- il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (100 mg, 46,87%) como um sólido amarelo claro. 4-Cloro-5-[4-(2-etil-3-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimi- din-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00230] A uma solução agitada de 4-cloro-5-[4-(2-etil-3-fluorofenoxi)- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropirida- zin-3-ona (100 mg, 0,206 mmol, 1 equiv.) em DCM (3 mL) foi adicionado TFA (1 mL).A mistura resultante foi agitada por 2 horas em temperatura ambiente. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura foi basificada a pH 7 NH4HCO3 (aq.) saturado.O produto bruto foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições (Coluna: XBridge Prep OBD C18 Coluna 30 × 150 mm 5um; Fase móvel A: Água (10mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 60 mL / min; Gradiente: 30% B a 50% B em 8min; 220 nm; Rt: 7,27 min) para proporcionar 4-cloro-5-[4-(2-etil-3-fluorofenoxi)-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidin-7-il]-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (41,6 mg, 50,31%) como um sólido branco. Exemplo 20. Síntese do Composto 127 MeOH/refluxo/16 h 1,4-dioxano/90 ºC/1 h 1,4-dioxano/90 ºC/16 h 1,4-dioxano/MW/110 ºC/4 h Composto 127 3-(metilamino)piridina-4-carboxilato de metila

[00231] A uma solução agitada de ácido 3-(metilamino)piridina-4-car- boxílico (11 g, 72,296 mmol, 1 equiv.) em MeOH (500 mL, 12349,455 mmol, 170,82 equiv.) foi adicionado SOCl2 (43,01 g, 361,478 mmol, 5 equiv.) gota a gota a 0°C. A mistura resultante foi agitada durante 30 horas a 70°C. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura foi deixada resfriar até a temperatura ambiente. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila (50 mL). A mistura basificada a pH 8 com NaHCO3 saturado (aq.). A mistura resultante foi extraída com EtOAc (2 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 30 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão re- duzida para se obter 3-(metilamino)piridina-4-carboxilato de metila (9 g, em bruto) como um sólido amarelo. 3-(N-metilacetamido)piridina-4-carboxilato de metila

[00232] A uma solução agitada de 3-(metilamino)piridina-4-carboxi- lato de metila (9 g, 54,158 mmol, 1 equiv.) em DCM (100 mL) foram adicionados Piridina (21,42 g, 270,791 mmol, 5 equiv.) e cloreto de ace- tila (6,38 g, 81,237 mmol, 1,5 equiv.) gota a gota à temperatura ambi- ente. A mistura resultante foi agitada por 2 horas em temperatura ambi- ente. A reação foi monitorizada por LCMS. A solução foi basificada para pH 8 com NaHCO3 (aq.) saturado. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por flash de fase reversa com as seguintes condições (Coluna: C18 Coluna 330 g; Fase móvel A: Água (10 mM NH4HCO3), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 10% B a 30% B em 25 min; 254/220 nm) para proporcionar 3-(N-metilacetamido)piridina-4-carboxilato de metila (8g, 70,94%) como um líquido marrom. 4-hidróxi-1-metil-1,2-di-hidro-1,7-naftiridin-2-ona

[00233] A uma solução agitada de 3-(N-metilacetamido)piridina-4- carboxilato de metila (6 g, 28,816 mmol, 1 equiv.) em 1,4-dioxano seco

(100 mL) foi adicionado t-BuOK (6,47 g, 57,632 mmol, 2 equiv.) à tem- peratura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 1 hora a 90°C sob atmosfera de nitrogênio. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura foi deixada resfriar até a temperatura ambiente. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com DCM / MeOH (10:1) para proporcionar 4-hidróxi-1-metil-1,2-di-hidro-1,7-nafti- ridin-2-ona (4,5 g, 88,64%) como um sólido laranja. 4-Cloro-1-metil-1,2-di-hidro-1,7-naftiridin-2-ona

[00234] A uma solução agitada de 4-hidróxi-1-metil-1,2-di-hidro-1,7- naftiridin-2-ona (4,5 g, 25,543 mmol, 1 equiv.) em 1,4-dioxano seco (100 mL) foi adicionado POCl3 (3,92 g, 25,543 mmol, 1 equiv.) gota a gota à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada durante 16 horas a 90°C. A mistura foi deixada resfriar até a temperatura ambiente. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com DCM / MeOH (10:1) para proporcionar 4-cloro-1-metil-1,2-di-hidro-1,7-naftiri- din-2-ona (2 g, 40,23%) como um sólido vermelho. 4-[[4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-1-metil-1,2-di-hidro-1,7- naftiridin-2-ona

[00235] A uma solução agitada de 4-cloro-1-metil-1,2-di-hidro-1,7- naftiridin-2-ona (0,8 g, 4,111 mmol, 1 equiv.) em 1,4-dioxano seco (15 mL) foram adicionados Cs2CO3 (2,68 g, 8,221 mmol, 2 equiv.), 4-fluoro- 2-(trifluorometil)anilina (1,47 g, 8,221 mmol, 2,00 equiv), XantPhos (0,95 g, 1,644 mmol, 0,4 equiv.) e Pd (AcO)2 (0,18 g, 0,822 mmol, 0,2 equiv.) à temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura de rea- ção final foi irradiada com radiação de micro-ondas por 4 horas a 110°C. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 100 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração,

o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por flash de fase reversa com as seguintes condições (Coluna: C18 Co- luna 330 g; Fase Móvel A: Água (AcOH 10 mM), Fase Móvel B: aceto- nitrila; Taxa de fluxo: 50 mL / min; Gradiente: 20% B a 40% B em 40 min; 254/220 nm) para proporcionar 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- nil]amino]-1-metil-1,2-di-hidro-1,7-naftiridin-2-one (1,1 g, 79,34%) como um sólido esbranquiçado. 4-[[4-Fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-hexa- hidro-1,7-naftiridin-2-ona

[00236] A uma solução agitada de 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- nil]amino]-1-metil-1,2-di-hidro-1,7-naftiridin-2-ona (1 g, 2,965 mmol, 1 equiv.) em THF (20 mL) foi adicionado PtO2 (67,33 mg, 0,296 mmol, 0,10 equiv.) à temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. A mis- tura resultante foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogênio. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura resultante foi filtrada, o bolo do filtro foi lavado com EtOAc (3x20 mL). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por flash de fase reversa com as seguintes condições (Coluna: C18 Coluna 330 g; Fase Móvel A: Água (AcOH 10 mM), Fase Móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80mL / min; Gradiente: 5% B a 20% B em 40 min; 254/220 nm) As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 16% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 4-[[4-fluoro-2-(tri- fluorometil)fenil]amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-hexa-hidro-1,7-naftiridin-2- ona (750 mg, 74,11%) como um sólido esbranquiçado. 7-[5-cloro-1-(oxan-2-il)-6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il]-4-[[4-fluoro- 2- (trifluorometil)fenil]amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-hexa-hidro-1,7-naf- tiridin-2-ona

[00237] A uma mistura agitada de 4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- nil]amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-hexa-hidro-1,7-naftiridin-2-ona (750 mg,

2,197 mmol, 1 equiv.) e 4,5-dicloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3- ona (1,09 g, 4,395 mmol, 2 equiv.) foi adicionado DIPEA (568,00 mg, 4,395 mmol, 2 equiv.) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada durante 2 horas a 100°C. A reação foi monitorada por LCMS. O resíduo foi dissolvido em DMF (10 mL). A solução foi purificada por flash de fase reversa com as seguintes condições (Coluna: C18 Coluna 330 g; Fase móvel A: Água (FA 10 mM), Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 30% B a 50% B em 40 min; 254/220 nm). As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 44% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 7-[5-cloro-1- (oxan-2-il)-6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il]-4-[[4-fluoro-2-(trifluorome- til)fenil]amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-hexa-hidro-1,7-naftiridin-2-ona (1 g, 82,15%) como um óleo amarelo. 7-[5-Cloro-1-(oxan-2-il)-6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il]-4-[[4-flu- oro-2-(trifluorometil)fenil](metil)amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-hexa-hi- dro-1,7-naftiridin-2-ona

[00238] A uma solução agitada de 7-[5-cloro-1-(oxan-2-il)-6-oxo-1,6- di-hidropiridazin-4-il]-4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]amino]-1-metil- 1,2,5,6,7,8-hexa-hidro-1,7-naftiridin-2-ona (800 mg, 1,444 mmol, 1 equiv.) em DMF (20 mL) foram adicionados Cs 2CO3 (0,94 g, 2,888 mmol, 2 equiv.) e MeI (614,96 mg, 4,333 mmol, 3 equiv.) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 16 horas em temperatura ambiente. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura foi purificada por flash de fase reversa com as seguintes condições (Coluna: C18 Co- luna 120 g; Fase móvel A: Água (10 mM AcOH), Fase móvel B: aceto- nitrila; Taxa de fluxo: 60 mL / min; Gradiente: 40% B a 60% B em 40 min; 254/220 nm). As frações contendo o produto desejado foram cole- tadas a 49% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 7-[5-cloro-1-(oxan-2-il)-6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il]-4-[[4-fluoro-2-

(trifluorometil)fenil](metil)amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-hexa-hidro-1,7-naf- tiridin-2-ona (80 mg, 9,75%) como um óleo amarelo. 7-[5-Cloro-6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il)-4-[[4-fluoro-2- (trifluoro- metil)fenil](metil)amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-hexa-hidro-1,7-naftiri- din-2-ona

[00239] A uma solução agitada de 7-[5-cloro-1-(oxan-2-il)-6-oxo-1,6- di-hidropiridazin-4-il]-4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](metil)amino]-1- metil-1,2,5,6,7,8-hexa-hidro-1,7-naftiridin-2-ona (80 mg, 0,141 mmol, 1 equiv.) em DCM (4,5 mL) foi adicionado TFA (0,5 mL, 6,732 mmol, 31,07 equiv.) gota a gota à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agi- tada por 2 horas em temperatura ambiente. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi basificado para pH 8 com NaHCO3 (aq.) saturado. A solu- ção foi purificada por flash de fase reversa para proporcionar 7-(5-cloro- 6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-4-il)-4-[[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil](me- til)amino]-1-metil-1,2,5,6,7,8-hexa-hidro-1,7-naftiridin-2-ona (40 mg, 58,69%) como um sólido branco. Exemplo 21. Síntese dos Compostos 135 e 137 dioxano Separação quiral Composto 137 Composto 135

2-cloro-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi)-5,8-di-hidropirido[3,4- d]pirimidina-7(6H)-carboxilato de terc-butila

[00240] A uma solução de 2,4-dicloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]piri- midina-7-carboxilato de terc-butila(5 g, 16,44 mmol) em DMF (50 mL) foram adicionados 4 -fluoro-2- (trifluorometil)fenol (4,44 g, 24,66 mmol) e adicionado K2CO3 (3,41 g, 24,66 mmol) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada durante 1 hora a 70°C. Após resfriamento à temperatura ambiente. Foi realizada uma filtração e o filtrado foi con- centrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatogra- fia flash de fase reversa com as seguintes condições (Coluna: Spherical C18, 20 ~ 40 um, 330 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM NH4HCO3; Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 80 mL / min; Gradiente: 5% em 10 min, 35% B a 45% B em 10 min; Detector: 254 nm / 220 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a 44% B e con- centradas sob pressão reduzida para proporcionar 2-cloro-4-[4-fluoro-2- (trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(6,2 g, 85%) como um sólido branco. 4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi)-2-vinil-5,8-di-hidropirido[3,4- d]pirimidina-7(6H)-carboxilato de terc-butila.

[00241] A uma solução de 2-cloro-4-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]- 5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(500 mg , 1,12 mmol) em dioxano (10 mL) foram adicionados 2-etenil-4,4,5,5- tetrametil-1,3,2--dioxaborolano (344 mg, 2,23 mmol) e H2O (0,5 mL, 27,75 mmol) K2CO3 (309 mg, 2,23 mmol) e Pd(PPh3)4 (129 mg, 0,11 mmol). Após agitação durante 2 horas a 95°C sob uma atmosfera de nitrogênio, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-TLC, eluído com 17% de acetato de etila em éter de petróleo para proporcionar terc-butil 2-etenil-4-[4-fluoro- 2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxi- lato (490 mg, 99%) como um sólido amarelo claro.

2-(1,2-di-hidroxietil)-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi)-5,8-di-hi- dropirido[3,4-d]pirimidina-7(6H)-carboxilato de terc-butila.

[00242] A uma solução de 2-etenil-4- [4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- noxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-bu- tila(400 mg, 0,91 mmol) em DCM (20 mL) foram adicionados 4-hidróxi- 4-metilmorfolin-4-ium (323 mg, 2,73 mmol) e K2OsO4.2H2O (34 mg, 0,091 mmol) à temperatura ambiente. Após agitação durante 1 hora adi- cional, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20 ~ 40 um, 120 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM NH4HCO3; Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 45 mL / min; Gradiente: 5% B em 10 min, 45% B a 65% B em 15 min; Detector: 254 nm e 220 nm. As frações contendo o produto de- sejado foram coletadas a 64% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar terc-butil 2-(1,2-di-hidroxietil)-4-[4-fluoro-2-(trifluoro- metil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato (280 mg, 65%) como um sólido branco. 1-(4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi)-5,6,7,8-tetra-hidropirido[3,4- d]pirimidin-2-il)etano-1,2-diol.

[00243] A uma solução agitada de terc-butil 2-(1,2-di-hidroxietil)-4-[4- fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7- carboxilato (280 mg, 0,59 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 1 hora em temperatura ambiente. A mistura resultante foi concentrada sob vá- cuo. O resíduo foi dissolvido em DCM (50 mL) e lavado com NaHCO3 aquoso saturado (20 mL). a camada orgânica foi separada e seca sobre sulfato de sódio anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por Prep-TLC com 8% de metanol em diclorometano para proporcionar 1-[4-[4-fluoro-2-(trifluoro- metil)fenoxi]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]etano-1,2-diol (180 mg, 82%) como um sólido marrom. 4-cloro-5-(2-(1,2-di-hidroxietil)-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi)- 5,8-di-hidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-il)-2-(tetra-hidro-2H-piran- 2-il)piridazin-3(2H)-ona.

[00244] A uma solução agitada de 2-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]piri- midin-4-iloxi]benzaldeído (180 mg, 0,71 mmol) em DIEA (0,5 mL) foi adi- cionado 4,5- dicloro-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (176 mg, 0,71 mmol) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada du- rante 1 hora a 90°C. Após resfriamento à temperatura ambiente, a mis- tura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi pu- rificado por Prep-TLC, eluído com 8% de metanol em diclorometano para proporcionar 4-cloro-5-(2-(1,2-di-hidroxietil)-4-(4-fluoro-2- (trifluo- rometil)fenoxi)-5,8-di-hidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-il)-2-(tetra-hidro- 2H-piran-2-il)piridazin-3(2H)-ona (140 mg, 43%) como um sólido mar- rom. (S)-4-cloro-5-(2-(1,2-di-hidroxietil)-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- noxi)-5,8-di-hidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-il)piridazin-3(2H)-ona e (R)-4-cloro-5-(2-(1,2-di-hidroxietil)-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fe- noxi)-5,8-di-hidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-il)piridazin-3(2H)-ona

[00245] A uma solução de 4-cloro-5-[2-(1,2-di-hidroxietil)-4-[4-fluoro- 2-(trifluorometil)fenóxi-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-(oxan- 2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (150 mg, 0,27 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 1 hora em temperatura ambiente. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por croma- tografia flash de fase reversa com as seguintes condições: Coluna: Spherical C18, 20~40 um, 120 g; Fase móvel A: Água (mais 5 mM NH4HCO3); Fase móvel B: acetonitrila; Taxa de fluxo: 45 mL / min; Gra- diente: 5% B em 10 min, 45% B a 65% B em 15 min; Detector: 254 nm e 220 nm. As frações contendo o produto desejado foram coletadas a

64% B e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o pro- duto racêmico (130 mg) que foi separado por Prep-Quiral-HPLC com as seguintes condições: Coluna: XBridge Prep OBD C18 Coluna 30 × 150 mm, 5 um; Fase móvel A: Hexano, Fase móvel B: EtOH; Taxa de fluxo: 20 mL / min; Gradiente: 35% B em 10 min; Detector: 254/220 nm). Em- bora os dois éômeros fossem separados por esta técnica, a orientação absoluta não foi determinada. As frações contendo o produto desejado foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para proporcio- nar o produto: O composto designado como (S)-4-cloro-5-(2-(1,2-di-hi- droxietil)-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi)-5,8-di-hidropirido[3,4-d]piri- midin-7(6H)-il)piridazin-3(2H)-ona: tempo de retenção (4,97 min) (49,5 mg, 39%) como um sólido branco e o composto designado como (R)-4- cloro-5-(2-(1,2-di-hidroxietil)-4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenoxi)-5,8-di- hidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-il)piridazin-3(2H)-ona: tempo de reten- ção (8,05 min) (45,7 mg, 36%) como um sólido branco. Exemplo 22. Síntese do Composto 131 Composto 131 4-[[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pi- rimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00246] A uma mistura agitada de 4-cloro-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila(500 mg, 1,854 mmol, 1 equiv.) e 4-(trifluorometil)piridin-3-amina (601,03 mg, 3,707 mmol, 2,0 equiv.) em 1,4-dioxano (5 mL) foram adicionados Pd(AcO)2 (83,24 mg, 0,371 mmol, 0,2 equiv.) e Cs2CO3 (1207,95 mg, 3,707 mmol, 2,0 equiv.) e XantPhos

(429,04 mg, 0,741 mmol, 0,4 equiv.) à temperatura ambiente sob atmos- fera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada durante 2 h a 110 graus C sob atmosfera de nitrogênio. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura foi deixada resfriar até a temperatura ambiente. A mis- tura resultante foi filtrada, a torta de filtração foi lavada com DCM (3 x 2 mL). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. A mistura resul- tante foi concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purifi- cado por flash de fase reversa com as seguintes condições (Coluna: C18,120 g; Fase móvel A: Água / 0,05% NH4HCO3, Fase móvel B: ACN; Taxa de fluxo: 45 mL / min; Gradiente: 45% B a 65% B em 15 min; Detector, 254nm e 220 nm, o produto desejado foi coletado a 64% B) para proporcionar 4-[[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H- pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (600 mg, 81,86%) como um sólido branco. 4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4- d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila

[00247] A uma mistura agitada de 4-[[4-(trifluorometil)piridin-3- il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-bu- tila (1,32 g, 3,339 mmol, 1 equiv.) e Cs2CO3 (2,18 g, 6,677 mmol, 2,0 equiv.) em DMF (10 mL) foi adicionado CH3I (0,95 g, 6,677 mmol, 2,0 equiv.) a 0°C sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agi- tada durante 2 h à temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. A reação foi monitorizada por LCMS. O produto bruto foi purificado por flash de fase reversa com as seguintes condições (Coluna: C18,120 g; Fase móvel A: Água / 0,05% NH4HCO3, Fase móvel B: ACN; Taxa de fluxo: 45 mL / min; Gradiente: 45% B a 65% B em 15 min; Detector, 254nm e 220 nm, o produto desejado foi coletado a 64% B) para pro- porcionar 4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-butila (400 mg, 29,26%) como um sólido marrom.

N-metil-N-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-4-(trifluorome- til)piridin-3-amina

[00248] A uma solução agitada de 4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3- il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidina-7-carboxilato de terc-bu- tila (220 mg, 0,537 mmol, 1 equiv.) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL) à temperatura ambiente sob atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pres- são reduzida. A mistura foi basificada a pH 8 com NaHCO 3 (aq.). satu- rado. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O re- síduo foi purificado por Prep-TLC (DCM/MeOH 12:1) para proporcionar N-metil-N-[5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-4-(trifluorometil)piri- din-3-amina (130 mg, 78,22%) como um sólido marrom. 4-cloro-5-(4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H- pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00249] A uma solução agitada de N-metil-N-[5H,6H,7H,8H-pi- rido[3,4-d]pirimidin-4-il]-4-(trifluorometil)piridin-3-amina (130 mg, 0,420 mmol, 1 equiv.) em DIEA (0,5 mg) foi adicionado 4,5-dicloro-2-(oxan-2- il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (104,69 mg, 0,420 mmol, 1,0 equiv.) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada durante 1 h a 90°C. A reação foi monitorada por LCMS. A mistura foi deixada resfriar até a temperatura ambiente. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (DCM/MeOH 12:1) para proporcionar 4-cloro-5-(4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3- il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oxan-2-il)-2,3-di-hi- dropiridazin-3-ona (100 mg, 45,58%) como um sólido marrom. 4-cloro-5-(4-[metil[4-(trifluorometil)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H- pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona

[00250] A uma solução agitada de 4-cloro-5-(4-[metil[4-(trifluorome- til)piridin-3-il]amino]-5H,6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2-(oxan-2-

il)-2,3-di-hidropiridazin-3-ona (100 mg, 0,192 mmol, 1 equiv.) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. A reação foi monitorizada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada sob pres- são reduzida. A mistura foi basificada a pH 8 com NaHCO 3 (aq.). satu- rado. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O pro- duto bruto (100 mg) foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes con- dições (Coluna: XBridge Prep Phenyl OBD Coluna 19 × 150 mm 5um 13nm; Fase móvel A: água, 5 mM NH4HCO3, Fase móvel B: Acetonitrila; Taxa de fluxo: 60 mL / min; Gradiente: 35% B a 55% B em 8 min; 220 nm; Rt: 7,13 min) para proporcionar 4-cloro-5-(4-[metil[4-(trifluorome- til)piridin-3-il]amino]-5H, 6H,7H,8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-2,3-di-hi- dropiridazin-3-ona (52 mg, 61,99%) como um sólido branco. Exemplo 23. Síntese de Intermediários A. acetato de 2-(Difluorometil)-4-fluorofenila acetato de 4-fluoro-2-formilfenila

[00251] A uma solução de 5-fluoro-2-hidroxibenzaldeído (10 g, 71,371 mmol, 1 equiv.) em Piridina (100 mL, 1242,353 mmol, 17,41 equiv.) foi adicionado acetato de acetila (14,57 g, 0,143 mmol, 2 equiv.) a 25°C. A solução foi agitada a 25°C durante 30 min. A solução resul- tante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EA (100/1 a 20/1) para proporcionar acetato de 4-fluoro-2-formilfenila (12 g, 92,31%) como um óleo amarelo claro. acetato de 2-(Difluorometil)-4-fluorofenila

[00252] A uma solução de acetato de 4-fluoro-2-formilfenila (12 g, 65,880 mmol, 1 equiv.) em DCM (200 mL, 3146,009 mmol, 47,75 equiv.) foi adicionado DAST (21,24 g, 131,760 mmol, 2 equiv.) a 0°C. A solução foi agitada a 25°C durante 4 horas. A solução resultante foi extinta com água (100 mL). A mistura de resultante foi extraída com DCM (100 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aq. Saturado. (100 mL x 2) secos sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o fil- trado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EA (10/1 a 5/1) para proporcionar acetato de 2-(Difluorometil)-4-fluorofenila (10 g, 74,35%) como um óleo amarelo claro. B. 2-(Difluorometil)-4-fluorofenol 1-Bromo-2-(difluorometil)-4-fluorobenzeno

[00253] A uma solução agitada de 2-bromo-5-fluorobenzaldeído (10 g, 49,26 mmol, 1 equiv.) em DCM (60 mL) foi adicionado DAST (15,9 g, 98,52 mmol, 2 equiv.). A mistura resultante foi agitada durante 2 horas a -10°C. A reação foi extinta com água a -10°C. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (4 x 30 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2 x 40 mL), secas sobre Na2SO4anidro. Após filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resí- duo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EtOAc (6:1) para proprcionar 1-bromo-2-(difluorometil)-4-fluo- robenzeno (8 g, 72,18%) como um óleo amarelo claro. 2-[2-(Difluorometil)-4-fluorofenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxabo- rolano

[00254] A uma solução de 1-bromo-2-(difluorometil)-4-fluorobenzeno (31 g, 137,773 mmol, 1 equiv.) e BPD (52,48 g, 206,664 mmol, 1,50 equiv.) em 1,4-dioxano (300 mL, 3541,225 mmol, 25,70 equiv.) foram adicionados AcOK (27,04 g, 275,546 mmol, 2 equiv.) e Pd(dppf)Cl2●

CH2Cl2 (5,63 g, 6,889 mmol, 0,05 equiv.) a 25°C sob atmosfera de nitro- gênio. A mistura foi agitada a 90°C por 2 horas. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por croma- tografia em coluna de gel de sílica, eluído com PE/EA (10/1) para pro- porcionar 2-[2-(difluorometil)-4-fluorofenil]-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolano (30 g, 80,03%) como um óleo amarelo claro. A reação foi monitorizada por TLC. O petróleo bruto foi usado na próxima etapa di- retamente. 2-(Difluorometil)-4-fluorofenol

[00255] A uma solução de 2-[2-(difluorometil)-4-fluorofenil]-4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (50 g, 183,776 mmol, 1 equiv.) em MeOH (300 mL, 7409,673 mmol, 40,32 equiv.) e H2O (100 mL, 5550,837 mmol, 30,20 equiv.) foi adicionado H2O2 (30%) (50 mL, 2146,131 mmol, 11,68 equiv.) gota a gota a 0°C. A solução foi agitada a 25°C durante 3 horas. A solução resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com EA (500 mL). A camada orgânica foi lavada com 3 x 200 mL de NaCl saturado (aq.). As camadas orgânicas combinadas foram secas com Na2SO4anidro, concentradas sob pressão reduzida para se proporcionar 2-(difluorometil)-4-fluorofenol (25 g, 83,91%) como um óleo amarelo claro. Exemplo 24. Ensaio de atividade TRPC4

[00256] Células ICLN-1694 (HEK-TREx hTRPC4) que expressam TRPC4 foram geradas como segue. As células HekTrex-293 disponí- veis comercialmente foram semeadas em 0,7x106 células/poço em uma placa de 1x6 poços 24 horas antes da transfecção usando 2 mL de meio de crescimento celular sem antibióticos (1x DMEM/alta glicose (Hyclone #SH30022,02); 10% soro fetal bovino (Sigma) piruvato de sódio 2 mM, HEPES 10 mM). A sequência codificadora de TRPC4 otimizada para códons humanos foi clonada em pcDNA5/TO (Invitrogen; Cat No.

V103320) usando higromicina como o gene de resistência e o plasmí- deo (SEQ ID NO:1) propagado usando células T-Rex-293 (Invitrogen; Cat No. R71007) seguindo as instruções do fabricante. No dia 2, 2 µg de DNA de plasmídeo mais 6 µl de reagente Xtreme-GENE HP em Op- timem (200 µl de volume total) foram preparados e incubados por 15 min à temperatura ambiente. Esta solução de plasmídeo foi então sua- vemente sobreposta gota a gota em cada poço e a placa foi agitada suavemente para misturar o complexo com o meio durante aproximada- mente 30 segundos. As células transfectadas foram incubadas a 37°C numa incubadora de CO2 10% durante 24 horas. As células transfecta- das foram colhidas e transferidas para placas de 2 x 150 mm contendo meio de crescimento celular sem antibióticos a 37°C

[00257] No dia seguinte, a seleção foi iniciada para gerar um conjunto estável pela adição de meio de crescimento celular contendo 150 µg/mL de Higromicina e 5 µg/mL de Blasticidina e as células foram deixadas crescer. O meio com o agente de seleção foi trocado a cada 1-2 dias conforme necessário para remover as células mortas. Após 7 dias, a concentração de higromicina foi reduzida para 75 µg / mL e o cresci- mento das células foi deixado continuar.

[00258] Os clones individuais foram selecionados como segue. O conjunto estável foi diluído para 10 células / mL e semeado (100 µl/poço) em placas de 24 x 96 poços (~ 1 célula/poço) e deixado crescer por 7 dias em meio de crescimento celular. Foi adicionado meio fresco (100 µl) e as células deixadas crescer durante mais 1-2 semanas e depois armazenadas congeladas ou usadas imediatamente.

[00259] Os compostos foram preparados ou fornecidos como uma solução estoque 10 mM, geralmente usando DMSO como veículo. Cur- vas de resposta à dose de 10 pontos foram geradas usando o dispen- sador acústico Echo-550. As placas de fonte de composto foram feitas diluindo em série os estoques de compostos para criar soluções de 10 mM, 1 mM e 0,1 mM em DMSO em placas de LDV certificadas pelo Echo. O Echo então distribuiu em série 100% de soluções estoque de DMSO em placas de resposta à dose de origem para gerar um esquema de diluição de 4 vezes. 100% de DMSO foi adicionado às placas de resposta à dose pontilhada para trazer o volume final para 5 µl. 300nl da placa de reserva de resposta à dose foram então colocados em pla- cas de ensaio de pré-incubação e estimulação. 50 µl de tampão de pré- incubação e 100 µl de tampão de estimulação foram então adicionados às placas resultando numa faixa de concentração de teste de ensaio final de 30 µM a 0,0001 µM com uma concentração final de DMSO de 0,3%.

[00260] Células ICLN-1694 (HEK-TREx hTRPC4) foram semeadas em microplacas pretas revestidas com pdl de 384 poços e mantidas em meio de crescimento celular suplementado com 1 µg / mL de tetraciclina no dia anterior ao uso para experimentos. A expressão de TRPC4 foi induzida pela aplicação de 1 µg/mL de tetraciclina no momento do pla- queamento. O meio foi removido das placas e 10 µl de 4 µM de Fluo-4 AM (misturado com igual volume de Pluronic F-127) em EBSS (NaCl (142 mM), KCl (5,4 mM), glicose (10 mM), CaCl2 (1,8 mM), MgCl2 (0,8 mM), HEPES (10 mM), pH 7,4) é adicionado às células. As células foram incubadas à temperatura ambiente, protegidas da luz, durante 60-90 mi- nutos. Após o período de incubação, o corante foi removido e substitu- ído por 10 µl de EBSS. Placas de células, pré-incubação e estimulação foram carregadas no FLIPR-II e o ensaio foi iniciado. O FLIPR mediu uma linha de base de 10 segundos e, em seguida, adicionou 10 µl de compostos 2X (ou controles). As alterações na fluorescência foram mo- nitoradas por mais 5 minutos. Após uma pré-incubação de 5 minutos, 20 µl de 2X Englerin A (com 1X composto ou controles) foram adiciona- dos à placa de células. A concentração final de estimulação Engerlin A no ensaio foi de 100 nM. Após a adição de Englerin A, as alterações na fluorescência foram monitoradas por mais 5 minutos.

[00261] A modulação do composto da resposta de cálcio do TRPC4 foi determinada como segue. Após Englerin A, a fluorescência foi moni- torada por um período de 5 minutos. A resposta de fluorescência relativa máxima (menos a resposta de controle de 1 µM de um composto de controle interno conhecido por bloquear ao máximo a resposta de cálcio TRPC4, o "REF INHIB" na fórmula abaixo) foi capturada e exportada do FLIPR. O efeito do composto é calculado como % de inibição usando a seguinte fórmula: % 𝒊𝒏𝒊𝒃𝒊çã𝒐 𝑹𝑭𝑼 𝑨𝑮𝑬𝑵𝑻𝑬 𝑻𝑬𝑺𝑻𝑬 − 𝑴é𝒅𝒊𝒂 𝒅𝒆 𝑷𝒍𝒂𝒅𝒂 𝑹𝑭𝑼 𝑹𝑬𝑭 𝑰𝑵𝑯𝑰𝑩 = 𝒙𝟏𝟎𝟎 𝑴é𝒅𝒊𝒂 𝒅𝒆 𝑷𝒍𝒂𝒄𝒂 𝑹𝑭𝑼 𝑪𝑶𝑵𝑻𝑹𝑶𝑳𝑬 − 𝑴é𝒅𝒊𝒂 𝒅𝒆 𝑷𝒍𝒂𝒄𝒂 𝑹𝑭𝑼 𝑹𝑬𝑭 𝑰𝑵𝑯𝑰𝑩 em que "RFU" são as unidades fluorescentes relativas.

[00262] Os resultados desses ensaios são mostrados na Tabela 2, abaixo, em que “A” indica um IC50 menor ou igual a 50 nM; “B” um IC50 maior que 50 nM e menor ou igual a 500 nM; “C” um IC50 maior que 500 nM e menor que 1µM; “D” um IC50 de 1 µM ou superior; e “NT” indica que o composto não foi testado. Exemplo 25. Ensaio de Atividade TRPC5

[00263] As células ICLN-1633 (HEK-TREx hTRPC5) que expressam TRPC5 foram geradas como segue. As células HekTrex-293 disponí- veis comercialmente foram semeadas em 0,7x106 células/poço em uma placa de 1x6 poços 24 horas antes da transfecção usando 2 mL de meio de crescimento celular sem antibióticos (1x DMEM/alta glicose (Hyclone #SH30022,02); 10% soro fetal bovino (Sigma) piruvato de sódio 2 mM, HEPES 10 mM). A sequência de codificação TRPC5 humana (NM_012471 com uma mutação silenciosa de T478C) foi clonada em pcDNA5 / TO (Invitrogen; Cat No. V103320) usando higromicina como o gene de resistência e o plasmídeo (SEQ ID NO:2) propagado usando células T-Rex-293 (Invitrogen; Cat No. R71007) seguindo as instruções do fabricante. No dia 2, 2 µg de DNA de plasmídeo mais 6 µl de reagente Xtreme-GENE HP em Optimem (200 µl de volume total) foram prepara- dos e incubados por 15 min à temperatura ambiente. Esta solução de plasmídeo foi então suavemente sobreposta gota a gota em cada poço e a placa foi agitada suavemente para misturar o complexo com o meio durante aproximadamente 30 segundos. As células transfectadas foram incubadas a 37°C numa incubadora de CO2 10% durante 24 horas. As células transfectadas foram colhidas e transferidas para placas de 2 x 150 mm contendo meio de crescimento celular sem antibióticos a 37°C.

[00264] No dia seguinte, a seleção foi iniciada para gerar um conjunto estável pela adição de meio de crescimento celular contendo 150 µg/mL de Higromicina e 5 µg/mL de Blasticidina e as células foram deixadas crescer. O meio com o agente de seleção foi trocado a cada 1-2 dias conforme necessário para remover as células mortas. Após 7 dias, a concentração de higromicina foi reduzida para 75 µg / mL e o cresci- mento das células foi deixado continuar.

[00265] Os clones individuais foram selecionados como segue. O conjunto estável foi diluído para 10 células / mL e semeado (100 µl/poço) em placas de 24 x 96 poços (~ 1 célula/poço) e deixado crescer por 7 dias em meio de crescimento celular. Foi adicionado meio fresco (100 µl) e as células deixadas crescer durante mais 1-2 semanas e depois armazenadas congeladas ou usadas imediatamente.

[00266] Os compostos foram preparados ou fornecidos como uma solução estoque 10 mM, geralmente usando DMSO como veículo. Cur- vas de resposta à dose de 10 pontos foram geradas usando o dispen- sador acústico Echo-550. As placas de fonte de composto foram feitas diluindo em série os estoques de compostos para criar soluções de 10 mM, 1 mM e 0,1 mM em DMSO em placas de LDV certificadas pelo Echo. O Echo então distribuiu em série 100% de soluções estoque de DMSO em placas de resposta à dose de origem para gerar um esquema de diluição de 4 vezes. 100% de DMSO foi adicionado às placas de resposta à dose pontilhada para trazer o volume final para 5 µl. 300nl da placa de reserva de resposta à dose foram então colocados em pla- cas de ensaio de pré-incubação e estimulação. 50 µl de tampão de pré- incubação e 100 µl de tampão de estimulação foram então adicionados às placas resultando numa faixa de concentração de teste de ensaio final de 30 µM a 0,0001 µM com uma concentração final de DMSO de 0,3%.

[00267] As células humanas ICLN-1633 expressando foram plaque- adas em microplacas pretas revestidas com PDL de 384 poços e man- tidas em meio de crescimento TRPC5 no dia anterior ao uso para expe- rimentos. A expressão de TRPC5 foi induzida pela aplicação de 1 µg/mL de tetraciclina no momento do plaqueamento. O meio é removido das placas e 10 μl de 4 μM de Fluo-4 AM (misturado com igual volume de Pluronic F-127) em EBSS são adicionados às células. As células são incubadas à temperatura ambiente, protegidas da luz, durante 60-90 mi- nutos. Após o período de incubação, o corante é removido e substituído por 10 µl de EBSS. Placas de células, pré-incubação e estimulação são carregadas no FLIPR-II e o ensaio é iniciado. O FLIPR mede uma linha de base de 10 segundos e, em seguida, adiciona 10 μl de compostos 2X (ou controles). As alterações na fluorescência são monitoradas por mais 5 minutos. Após a pré-incubação de 5 minutos, 20 μl de 2X Riluzol (com 1X composto ou controles) são adicionados à placa de células. A concentração final de estimulação de Riluzol no ensaio é 30 μM. Após a adição de Riluzol, as alterações na fluorescência são monitoradas por mais 5 minutos.

[00268] A modulação do composto da resposta do cálcio TRPC5 foi determinada como segue. Após Englerin A, a fluorescência foi monito- rada por um período de 5 minutos. A resposta de fluorescência relativa máxima (menos a resposta de controle de 1 µM de um composto de controle interno conhecido por bloquear ao máximo a resposta de cálcio TRPC5, o "REF INHIB" na fórmula abaixo) foi capturada e exportada do FLIPR.

[00269] O efeito do composto é calculado como % de inibição usando a seguinte fórmula: 𝑹𝑭𝑼 𝑨𝑮𝑬𝑵𝑻𝑬 𝑻𝑬𝑺𝑻𝑬 − 𝑴é𝒅𝒊𝒂 𝑷𝒍𝒂𝒄𝒂 𝑹𝑭𝑼 𝑹𝑬𝑭 𝑰𝑵𝑯𝑰𝑩 % 𝒊𝒏𝒊𝒃𝒊çã𝒐 = 𝒙𝟏𝟎𝟎 𝑴é𝒅𝒊𝒂 𝑷𝒍𝒂𝒄𝒂 𝑹𝑭𝑼 𝑪𝑶𝑵𝑻𝑹𝑶𝑳𝑬 − 𝑴é𝒅𝒊𝒂 𝒅𝒆 𝑷𝒍𝒂𝒄𝒂 𝑹𝑭𝑼 𝑹𝑬𝑭 𝑰𝑵𝑯𝑰𝑩 em que "RFU" são as unidades fluorescentes relativas.

[00270] Os resultados desses ensaios são mostrados na Tabela 2, abaixo, em que “A” indica um IC50 menor ou igual a 50 nM; “B” um IC50 maior que 50 nM e menor ou igual a 500 nM; “C” um IC50 maior que 500 nM e menor que 1µM; “D” um IC50 de 1 µM ou superior; e “NT” indica que o composto não foi testado. Tabela 2. Atividades TRPC4 e TRPC5 de Compostos Exemplificati- vos Composto TRPC5 TRPC4 100 A A 101 A A 102 A A 103 A A 104 A A 105 A A 106 A B 107 A B 108 B C 109 A B 110 B A 111 B NT 112 A B 113 A B

Composto TRPC5 TRPC4 114 A A 115 B B 116 A A 117 A B 117a D NT 118 B B 119 A A 120 A A 121 A NT 122 A NT 123 B NT 124 A NT 125 A NT 126 A NT 126a B NT 127 B NT 128 A NT 129 A NT 130 A NT 131 A NT 132 B NT 133 B NT 133a C NT 134 A NT 135 A NT 136 A NT 137 A NT 138 B NT

Composto TRPC5 TRPC4 139 B NT 140 B NT

[00271] Os dados de 1H RMN e MS para compostos selecionados são fornecidos na tabela abaixo: Composto Estrutura RMN MS 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 8,57 (s, 100 1H), 8,04 (s, 1H), 7,79 (dd, J = 8,4, 3,0 Hz, 1H), 7,70 (s , 1H), 7,70 - 442 7,59 (m, 1H), 4,68 (s, 2H), 3,79 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,98 (s, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,63 (dd, J = 8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,51 - 7,40 (m, 2H), 101 390 7,36 (td, J = 7,4, 2,2 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 3,80 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,03 (t, J = 5,7 Hz, 2H).

1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) troca química 8,00 (s, 1H), 7,79 - 102 7,67 (m, 2H), 7,44 (dd, J = 13,1, 7,9 Hz, 2H), 4,51 (s, 2H), 3,87 (t, J 439 = 5,8 Hz, 2H), 2,93 (t, J = 5,6 Hz, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,71 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,65 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 103 406 7,46 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,13 (t, J = 54,3 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 3,79 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,03 (t, J = 5,7 Hz, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,97 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,66 (dd, J = 8,3, 3,0 Hz, 1H), 7,51 (dd , J = 8,9, 104 407 5,3 Hz, 1H), 7,42 - 7,24 (m, 1H), 4,67 (s, 2H), 3,80 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 3,02 (s, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,51 (ddd, J = 14,3, 10,8, 6,8 Hz, 3H), 7,13 (t, J = 105 424 53,9 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 3,79 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,03 (t, J = 5,8 Hz, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 8,61 (s, 106 1H), 8,03 (s, 1H), 7,95 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 442 7,41 (s, 1H), 4,69 (s, 2H), 3,80 (s, 2H), 2,98 (s, 2H).

Composto Estrutura RMN MS 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 8,91 (s, 107 1H), 8,79 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,92 (d, J = 425 5,0 Hz, 1H), 4,70 (s, 2H), 3,81 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,02 (s, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,99 (dd, J = 7,8, 1,5 Hz, 1H), 7,86 (dd , J = 8,3, 108 415 1,5 Hz, 1H), 7,69 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 4,69 (s, 2H), 3,81 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,08 - 3,01 (m, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,01 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,38 - 7,28 (m, 1H), 7,15 (t, J = 8,9 Hz , 1H), 7,06 109 402 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 3,80 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,03 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 2,48 (d , J = 7,4 Hz, 2H), 1,05 (t, J = 7,5 Hz, 3H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,98 (s, 1H), 8,02 (s, 110 1H), 7,88 - 7,75 (m, 2H), 7,59 - 7,48 (m, 2H), 4,60 (s, 2H) , 3,77 (t, J 454 = 5,7 Hz, 2H), 3,74 (s, 3H), 2,89 (t, J = 5,6 Hz, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,01 (s, 1H), 8,60 (s, 111 1H), 8,13 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 8,07 - 7,99 (m, 2H), 7,96 (d , J = 8,4 449 Hz, 1H), 4,70 (s, 2H), 3,81 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,01 (s, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,95 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,62 (dd, J = 8,5, 3,1 Hz, 1H), 7,45 (dd, J = 9,0, 5,3 Hz , 1H), 112 423 7,31 (td, J = 8,5, 2,9 Hz, 1H), 6,50 (s, 2H), 4,41 (s, 2H), 3,72 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 2,80 (s, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,95 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,58 (dd, J = 7,9, 1,5 Hz, 1H), 7,47 - 7,38 (m, 1H), 7,41 - 7,34 113 405 (m, 1H), 7,34 - 7,25 (m, 1H), 6,48 (s, 2H), 4,41 (s, 2H), 3,73 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,81 (d, J = 5,7 Hz, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,66 (dd, J = 8,4, 3,0 Hz, 1H), 7,51 (dd, J = 9,0, 5,3 Hz , 1H), 114 7,35 (td, J = 8,6, 3,0 Hz, 1H), 5,17 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 438 4,32 (d, J = 6,3 Hz, 2H), 3,80 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,00 (d, J = 6,4 Hz, 2H).

Composto Estrutura RMN MS 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,95 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,83 - 7,72 (m, 2H), 7,48 (dd, J = 18,0, 8,2 Hz, 2H), 6,82 (s, 1H), 115 483 4,54 (s, 1H), 4,44 (s, 2H), 3,73 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,33 (m, 4H), 2,78 (s, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,96 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,79 - 7,71 (m, 1H), 7,66 (td, J = 8,5, 3,0 Hz, 1H), 7,56 (dd, J = 116 457 9,2, 4,6 Hz, 1H), 6,54 (s, 2H), 4,41 (s, 2H), 3,72 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,76 (t, J = 5,7 Hz, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,04 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,67 (dd, J = 8,4, 2,5 Hz, 1H), 7,53 (dd , J = 9,2, 117* 5,3 Hz, 1H), 7,41 - 7,31 (m, 1H), 4,75 (d, J = 18,1 Hz, 1H), 4,62 - 4,34 422 (m, 2H), 3,23 (dd, J = 17,0, 6,0 Hz, 1H), 2,81 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 1,20 (d, J = 6,6 Hz, 3H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,04 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,67 (dd, J = 8,6, 2,5 Hz, 1H), 7,58 - 7,50 (m, 1H), 117a* 7,36 (dd, J = 9,9, 7,3 Hz, 1H), 4,76 (d, J = 18,1 Hz, 1H), 4,63 - 4,40 422 (m, 2H), 3,23 (dd, J = 17,3, 5,9 Hz, 1H), 2,81 (d, J = 17,0 Hz, 1H), 1,20 (d, J = 6,7 Hz, 3H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,96 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,66 (dd, J = 8,4, 3,0 Hz, 1H), 7,50 (dd , J = 9,0, 5,3 Hz, 1H), 7,35 (td, J = 8,5, 3,0 Hz, 1H), 5,06 (q, J = 6,7 Hz, 1H), 118 422 4,00 (dd, J = 14,1, 5,7 Hz, 1H) , 3,68 (ddd, J = 14,4, 11,1, 4,2 Hz, 1H), 3,06 (ddd, J = 17,1, 11,2, 6,0 Hz, 1H), 2,98 - 2,88 (m, 1H), 1,60 (d, J = 6,8 Hz , 3H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,98 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,66 (dd, J = 8,4, 3,0 Hz, 1H), 7,51 (dd, J = 9,1, 5,3 Hz , 1H), 119 7,35 (td, J = 8,5, 3,0 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 452 4,48 (p, J = 6,4 Hz, 1H), 3,80 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,99 (s, 2H), 1,22 (t, J = 6,4 Hz, 3H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,90 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,72 (dd, J = 8,6, 3,1 Hz, 1H), 7,63 (td, 120 441 J = 8,6, 3,1 Hz, 1H), 7,49 (dd, J = 9,1, 4,6 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,69 (s, 2H), 3,78 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,95 (t, J = 5,9 Hz, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,01 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,83 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 121 442 7,67 - 7,57 (m, 1H), 4,71 (s, 2H), 3,81 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,01 (s, 2H).

Composto Estrutura RMN MS 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,88 - 7,75 (m, 2H), 7,57 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,51 (t , J = 7,6 Hz, 122 468 1H), 5,07 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 4,50 (p, J = 6,2 Hz, 1H), 3,80 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,96 (s, 2H), 1,23 (d, J = 6,5 Hz, 3H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,88 - 7,75 (m, 2H), 7,57 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,51 (t , J = 7,7 Hz, 123 468 1H), 5,07 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 4,50 (p, J = 6,4 Hz, 1H), 3,80 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,96 (s, 2H), 1,23 (d, J = 6,6 Hz, 3H).

1H RMN (DMSO-d6) δ: 12,97 (br s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 124 7,15-7,24 (m, 2H), 7,05-7,12 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 3,78 (t, J = 5,7 388,3 Hz, 2H), 3,00 (s, 2H), 2,06 (s, 3H) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,81 - 7,74 (m, 1H), 7,74 - 7,60 (m, 2H), 5,19 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 125 472 4,67 (s, 2H), 4,34 (d, J = 6,3 Hz, 2H), 3,79 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,95 (s, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,98 (s, 1H), 9,02 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,63 (dd, J = 9,4, 2,6 Hz, 1H), 7,53 (p , J = 8,7 Hz, 126* 454 2H), 4,71 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 4,65 (s, 2H), 3,68 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,08 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 2,57 (s, 1H), 1,60 (d, J = 6,8 Hz, 3H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,97 (s, 1H), 9,02 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,63 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,60 - 7,49 (m , 2H), 4,72 126a* 454 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 4,65 (s, 2H), 3,68 (s, 2H), 3,08 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 2,58 (s, 1H), 1,60 (d, J = 6,8 Hz, 3H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,98 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,81 - 7,74 (m, 1H), 7,55 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,35 - 7,27 (m, 1H), 127 484 5,85 (s, 1H), 4,52 (s, 2H), 3,39 (s, 3H), 3,39 - 3,34 (m, 2H), 3,09 (s, 3H), 1,95 (s, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,01 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,88 - 7,75 (m, 2H), 7,56 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,51 (t , J = 7,7 Hz, 128 454 1H), 5,19 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 4,68 (s, 2H), 4,34 (d, J = 6,3 Hz, 2H), 3,80 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,96 (s, 2H).

Composto Estrutura RMN MS 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,78 (dd, J = 8,6, 2,9 Hz, 1H), 7,75 - 7,61 (m, 2H), 5,08 (d, J = 129* 486 5,3 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 4,50 (p, J = 6,5 Hz, 1H), 3,79 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,94 (d, J = 6,1 Hz , 2H), 1,23 (d, J = 6,5 Hz, 3H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,00 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,78 (dd, J = 8,6, 3,0 Hz, 1H), 7,67 (ddd, J = 19,1, 8,6, 3,8 Hz, 130* 486 2H), 5,08 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 4,50 (p, J = 6,5 Hz, 1H), 3,79 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,95 (s, 2H), 1,23 (d, J = 6,6 Hz, 3H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,07 (s, 1H), 8,89 - 131 8,79 (m, 2H), 8,59 (s, 1H), 7,94 - 7,84 (m, 2H), 4,53 (s, 2H) , 3,44 (d, 438 J = 11,0 Hz, 2H), 3,41 (s, 3H), 1,96 (t, J = 5,6 Hz, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,94 (s, 1H), 8,89 (s, 132 1H), 8,00 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,62 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 466 4,58 (s, 2H), 3,48 (s, 2H), 2,27 (s, 2H), 1,84 (s, 2H), 1,47 (s, 2H).

1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) troca química 8,34 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,33 (q, J = 7,8 Hz, 4H), 7,25 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 4,67 (d, J = 17,3 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 17,2 Hz, 2H), 3,97 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 133 480 3,55 (s, 2H), 3,47 (s, 1H), 3,39 (s, 3H), 2,94 (s, 1H), 2,81 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 2,74-2,53 (m, 3H), 2,35 (s, 1H), 2,15 (s, 1H), 1,76 (s, 2H), 1,01 (d, J = 7,0 Hz, 3H). 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) troca química 8,34 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,42 - 7,21 (m, 5H), 4,62 (q, J = 17,5 Hz, 3H), 3,97 (d , J = 13,3 133a Hz, 1H), 3,55 (s, 2H), 3,47 (s, 1H), 3,39 (s, 3H), 3,15 (s, 1H), 2,94 (s, 480 1H), 2,87 - 2,61 (m, 3H), 2,35 (s, 1H), 2,15 (s, 1H), 1,76 (s, 2H), 1,01 (d, J = 7,0 Hz, 3H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,01 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,58 - 7,49 (m, 3H), 7,27 -7,00 (m, 1H), 5,17 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 134 454 4,66 (s, 2H), 4,34 (d, J = 6,3 Hz, 2H), 3,79 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,99 (s, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,97 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,78 (dd, J = 8,5, 3,0 Hz, 1H), 7,75 - 7,61 (m, 2H), 5,12 (d, J = 135* 5,7 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 4,57 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,37 (q, J = 5,8 Hz, 502 1H), 3,79 (t, J = 5,7 Hz , 2H), 3,57 (dt, J = 11,2, 5,7 Hz, 1H), 3,46 (dt, J = 10,8, 6,1 Hz, 1H), 2,96 (t, J = 5,6 Hz, 2H).

1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) troca química 8,54 (s, 1H), 7,87 (s, 136 1H), 7,75 (s, 1H), 7,63 (dd, J = 8,8, 3,0 Hz, 1H), 7,54 (s , 1H), 4,57 485 (m, 3H), 3,88 (s, 2H), 3,51 (m, 3H), 2,05 (s, 1H), 1,98 (s, 1H).

Composto Estrutura RMN MS 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,94 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,78 (dd, J = 8,5, 3,0 Hz, 1H), 7,75 - 7,61 (m, 2H), 5,12 (d, J = 137* 5,7 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 4,57 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,37 (q, J = 5,7 Hz, 502 1H), 3,79 (t, J = 5,7 Hz , 2H), 3,57 (dt, J = 11,2, 5,7 Hz, 1H), 3,52 - 3,43 (m, 1H), 2,96 (t, J = 5,6 Hz, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 13,05 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,78 (dd, J = 8,5, 3,1 Hz, 1H), 7,70 (td, J = 8,5, 3,2 Hz , 1H), 138 472 7,57 (dd, J = 9,1, 4,6 Hz, 1H), 4,65 (s, 2H), 3,66 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,38 (s, 3H), 2,74 (t, J = 5,4 Hz, 2H).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,84 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,79 (dd, J = 8,6, 2,9 Hz, 1H), 7,68 (dtd, J = 18,8, 9,0, 3,8 Hz, 139 472 2H), 4,60 (s, 2H), 3,77 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 3,75 (s, 3H), 2,88 (t, J = 5,7 Hz, 2H) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) troca química 12,97 (s, 1H), 8,30 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,83 (dd, J = 8,5, 3,2 Hz, 1H), 7,68 (td, 140 441 J = 8,6, 3,1 Hz, 1H), 7,50 (dd, J = 9,1, 4,5 Hz, 1H), 6,58 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,69 (s, 2H), 3,77 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,98 (t, J = 5,8 Hz, 2H).

*Composto é um éômero puro separado de seu éômero oposto por HPLC da mistura racêmica correspondente. A orientação absoluta não foi determinada e, portanto, a designação da orientação específica em torno de um centro quiral é arbitrária. Exemplo 26. Efeito do composto 100 na lesão glomerular induzida por aminonucleosídeo de puromicina (PAN) em ratos Objetivo:

[00272] O objetivo deste estudo é avaliar os efeitos dependentes da dose do composto 100 na lesão renal glomerular induzida por PAN, con- forme indexado pela albuminúria. Métodos:

[00273] Oitenta (80) ratos Sprague-Dawley machos pesando aproxi- madamente 125-150 g e com aproximadamente 5-6 semanas de idade foram adquiridos da Charles River. Eles foram alimentados com uma dieta ração padrão (Harlan 8640), mantidos em condições padrão e dei- xados em aclimatação por pelo menos 5 dias antes do início do estudo.

[00274] No D-2, os ratos foram colocados em grupos de tratamento de peso equivalente e foram colocados, individualmente, em gaiolas metabólicas para o equilíbrio do estudo.

[00275] Uma linha de base de urina de 24 horas (Dia 0) foi coletada seguida por uma coleta de sangue de linha de base por punção venosa da cauda consciente. Os ratos foram então administrados com veículo ou artigo de teste.

[00276] Duas (2) horas após a administração do veículo ou agente de teste no Dia 0, os ratos receberam uma administração de (5 ml / kg, sc) veículo (solução salina estéril) ou aminonucleosídeo de puromicina (PAN; agente de desafio; 75 mg / kg) dissolvido em veículo.

[00277] Os volumes de urina de 24 horas intermitentes (Dias 4, 7 e 10) foram determinados e as amostras (4 amostras / animal / ponto no tempo; 0,5 ml / amostra) foram obtidas. Além disso, amostras de sangue intermitentes (Dias 4, 7 e 10) foram coletadas por punção venosa da cauda consciente 2 horas ± 1 minuto após a dose de AM.

[00278] Imediatamente após a última coleta de sangue, os ratos fo- ram anestesiados com éoflurano, os tecidos coletados e os animais sa- crificados. Os pesos e índices finais dos rins foram obtidos.

[00279] As amostras de urina foram imediatamente congeladas em N2 líquido e armazenadas a -80°C até serem analisadas.

[00280] As amostras de sangue total coletadas no K3EDTA proces- sadas de forma adequada para a produção de plasma para medições de PK. Resultados:

[00281] Como mostrado na Figura 1, o tratamento com o composto 100 a 30 mg / kg uma vez- (QD) ou duas vezes- (BID) ao dia resultou na redução da excreção de albumina urinária após lesão com PAN. Re- duções significativas foram observadas em 7 e 10 dias com a dosagem BID e em 10 dias com a dosagem QD do composto 100. A mizoribina, o composto de controle positivo, também foi eficaz na redução da albu- minúria. Conclusão:

[00282] O composto 100 é eficaz na redução da albuminúria no mo- delo PAN de lesão glomerular em ratos. Exemplo 27. Composto 100 é eficaz no modelo de rato transgênico AT1R de FSGS

[00283] O modelo de rato transgênico AT1R de FSGS é caracteri- zado pela expressão específica de podócito de AT1R humano. Demons- trou-se que os homens têm patologia substancialmente pior em compa- ração com as mulheres. A eficácia dos inibidores TRPC5 no modelo AT1R foi demonstrada com um composto de ferramenta. Ver Zhou et al., Science (2017), vol. 358 (6368), 1332-1336.

[00284] No presente estudo, a fisiopatologia em ratos transgênicos AT1R foi acelerada com nefrectomia unilateral (UniNX) e infusão de An- gII com minibomba. O composto 100 foi administrado por via oral uma vez ao dia a 3 mg / kg ou 10 mg / kg, e a razão de creatinina proteica na urina foi determinada em -1, 0, 1, 2 e 3 semanas de tratamento. A Figura 2 mostra a proporção de creatinina proteica na urina ao longo do estudo para ratos tratados com o composto 100 ou aqueles tratados com veí- culo. UniNX, início de AngII, e início de composto 100 ocorreram nos pontos de tempo indicados. A Figura 3 mostra os mesmos dados apre- sentados como % da linha de base.

[00285] Os resultados mostram que o composto 100 é eficaz no mo- delo de rato transgênico AT1R de FSGS.

INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA

[00286] Todas as patentes dos EUA e os pedidos de patente publi- cados nos EUA e PCT citados neste documento são incorporados por meio deste por referência.

EQUIVALENTES

[00287] O relatório descritivo escrito anterior é suficiente para permi- tir que um versado na técnica pratique a invenção. A presente invenção não deve ser limitada no escopo pelos exemplos fornecidos, uma vez que os exemplos se destinam a uma única ilustração de um aspecto da invenção e outras modalidades funcionalmente equivalentes estão den- tro do escopo da invenção. Várias modificações da invenção além da- quelas mostradas e descritas neste documento se tornarão evidentes para aqueles versados na técnica a partir da descrição anterior e esta- rão dentro do escopo das reivindicações anexas. As vantagens e obje- tivos da invenção não são necessariamente abrangidos por cada moda- lidade da invenção. SEQ ID NO: 1 Sequência de plasmídeo TRPC4 A sequência de DNA do plasmídeo TRPC4 usado no Exem- plo 24 está incluída abaixo. Os ácidos nucleicos sublinhados represen- tam aqueles que codificam TRPC4 humano. GACGGATCGGGAGATCTCCCGATCCCCTATGGTGCACTCTCAG- TACAATCTGCTCTGATG-

CCGCATAGTTAAGCCAGTATCTGCTCCCTGCTTGTGTGTTGGAGG TCGCTGAGTAGTGCGCGAGCAAAATTTAAGCTACAACAAGG- CAAGGCTTGACCGACAATTG- CATGAAGAATCTGCTTAGGGTTAGGCGTTTTGCGCTGCTTCGCGA TGTACGGGCCAGATATACGCGTTGACATTGATTATTGACTAGTTA- TTAATAGTAATCAAT- TACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTAC ATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGAC- CCCCGCCCATTGACGTCAA- TAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTG ACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAG- TACATCAAGTGTATCATA- TGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCG CCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTAC- TTGGCAGTACATCTACGTA- TTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCA ATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAG- TCTCCACCCCATTGACGTCAA- TGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGT CGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTG- TACGGTGGGAGGTCTATA- TAAGCAGAGCTCTCCCTATCAGTGATAGAGATCTCCCTATCAGTG ATAGAGATCGTCGACGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCG- CCTGGAGACGCCATCCACG- CTGTTTTGACCTCCATAGAAGACACCGGGACCGATCCAGCCTCCG GACTCTAGCGTTTAAACTTAAGCTTGGTACCGAGCTCGGATCCG- CCACCATGGCCCAGTTC- TACTATAAGAGAAACGTGAATGCCCCTTACCGCGACAGAATCCCC CTGAGAATCGTGAGGGCAGAGTCCGAGCTGAG- CCCATCCGAGAAGGCCTACCTGAACGCCG- TGGAGAAGGGCGACTATGCCAGCGTGAAGAAGTCCCTGGAGGAG GCCGAGATCTACTTTAAGATCAACATCAATTG- CATCGATCCTCTGGGCAGAACCGCCCTG- CTGATCGCCATCGAGAACGAGAATCTGGAGCTGATCGAGCTGCT GCTGAGCTTCAACGTGTATGTGGGCGATGCCCTGCTGCACG- CCATCAGGAAGGAGGTGGTGG- GAGCAGTGGAGCTGCTGCTGAATCACAAGAAGCCAAGCGGAGAG AAGCAGGTGCCACCTATCCTGCTGGACAAGCAGTTCTCCGAGTT- TACCCCAGATATCACAC- CCATCATCCTGGCCGCCCACACCAACAATTACGAGATCATCAAGC TGCTGGTGCAGAAGGGCGTGTCCGTGCCTCGCCCACACGAGG- TGCGGTGCAACTGCGTGGAG- TGCGTGAGCTCCTCTGACGTGGATTCTCTGAGGCACAGCCGGAG CCGGCTGAACATCTATAAGGCCCTGGCCTCCCCATCTCTGATCG- CCCTGAGCTCCGAGGAC- CCCTTCCTGACCGCCTTTCAGCTGTCTTGGGAGCTGCAGGAGCTG AGCAAGGTGGAGAACGAGTTTAAGAGCGAGTACGAGGAGCTG- TCCAGACAGTGCAAGCAGTT- CGCCAAGGACCTGCTGGATCAGACACGCTCTAGCCGGGAGCTGG AGATCATCCTGAACTATAGGGACGATAATTCTCTGATCGAGGAG- CAGAGCGGAAACGAC- CTGGCACGCCTGAAGCTGGCCATCAAGTACCGGCAGAAGGAGTT CGTGGCCCAGCCTAATTGTCAGCAGCTGCTGGCCTCCCGCTGG- TATGATGAGTTTCCAGGA- TGGCGGAGAAGGCACTGGGCAGTGAAGATGGTGACCTGCTTCAT CATCGGCCTGCTGTTCCCCGTGTTCAGCGTGTGCTACCTGATCG- CCCCTAAGTCTCCAC- TGGGCCTGTTTATCCGGAAGCCTTTCATCAAGTTTATCTGCCACAC CGCCAGCTATCTGACATTCCTGTTTCTGCTGCTGCTGGCCTCCCA- GCACATCGACAGA- TCTGATCTGAACAGGCAGGGCCCACCCCCTACCATCGTGGAGTG GATGATCCTGCCATGGGTGCTGGGCTTCATCTGGGGCGAGAT- CAAGCAGATGTGGGACGG- CGGCCTGCAGGACTACATCCACGATTGGTGGAACCTGATGGATTT TGTGATGAATTCCCTGTACCTGGCCACAATCTCTCTGAAGATCG- TGGCCTTCGTGAAGTATA- GCGCCCTGAATCCCAGAGAGTCCTGGGACATGTGGCACCCTACC CTGGTGGCAGAGGCCCTGTTCGCAATCGCCAACATCTTTT- CCTCTCTGCGCCTGATCAG- CCTGTTTACAGCCAATTCCCACCTGGGACCACTGCAGATCTCCCT GGGACGGATGCTGCTGGATATCCTGAAGTTCCTGTTTATCTACTG- CCTGGTGCTGCTGG- CCTTCGCCAACGGCCTGAATCAGCTGTACTTCTACTATGAGGAGA CCAAGGGCCTGACATGCAAGGGCATCCGCTGTGAGAAGCAGAA- CAATGCCTTCAGCACCCTG- TTCGAGACACTGCAGTCTCTGTTCTGGAGCATCTTTGGCCTGATC AACCTGTACGTGACCAATGTGAAGGCCCAGCACGAGTTCACA- GAGTTTGTGGGCGCCAC- CATGTTCGGCACATACAACGTGATCTCTCTGGTGGTGCTGCTGAA TATGCTGATCGCCATGATGAACAATAGCTATCAGCTGATCGCCGA- CCACGCCGATATCGAG- TGGAAGTTCGCCCGGACCAAGCTGTGGATGTCCTACTTTGAGGAG GGCGGCACCCTGCCCACACCTTTCAACG- TGATCCCATCCCCCAAGTCTCTGTGGTATCTGAT- CAAGTGGATCTGGACACACCTGTGCAAGAAGAAGATGCGCCGGA AGCCTGAGAGCTTTGGCACCATCGGCGTGCGCACACAGCACA- GAAGGGCAGCAGACAACCTG- CGCCGGCACCACCAGTACCAGGAAGTGATGCGCAATCTGGTGAA GCGGTATGTGGCCGCCATGATCAGGGACGCAAAGACCGAGGA- GGGACTGACAGAGGAGAAC- TTCAAGGAGCTGAAGCAGGATATCAGCTCCTTCAGATTTGAGGTG CTGGGCCTGCTGAGGGGCAGCAAGCTGTCCACCATCCAGTCCG- CCAACGCCTCTAAGGAGTC- TAGCAATTCTGCCGACAGCGATGAGAAGAGCGACTCCGAGGGCA ACTCTAAGGATAAGAAGAAGAACTTCAGCCTGTTTGACCTGACCA- CACTGATCCACCCACG- CAGCGCCGCAATCGCATCCGAGCGGCACAACATCTCCAATGGCT CTGCCCTGGTGGTGCAGGAGCCACCAAGAGAGAAGCAGAGGA- AGGTGAACTTTGTGACAGA- TATCAAGAATTTCGGCCTGTTTCACAGAAGGAGCAAGCAGAACGC CGCCGAGCAGAACGCCAATCAGATCTTCTCTGTGAGCGAGGAGG- TGGCAAGACAGCAGGCAG- CAGGACCACTGGAGAGGAATATCCAGCTGGAGAGCCGGGGACTG GCAAGCAGGGGCGACCTGTCCATCCCAGGACTGTCTGAGCAG- TGCGTGCTGGTGGACCACA- GGGAGCGGAACACCGATACACTGGGACTGCAAGTGGGCAAGCG GGTGTGCCCTTTCAAGAGCGAGAAGGTCGTGGTGGAGGACAC- CGTGCCCATCATCCCTAAG- GAGAAGCACGCCAAGGAGGAGGATTCCTCTATCGACTACGATCTG AATCTGCCAGACACCGTGACACACGAGGATTATGTGACCA- CAAGGCTGTGAGCGGCCGCTC- TAGAGGGCCCGTTTAAACCCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTC TAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTT- CCTTGACCCTGGAAGGTG- CCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCA TTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGG- CAGGACAGCAAGGGGGAG- GATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTC TATGGCTTCTGAGGCGGAAAGAACCAGCTGGGGCTCTAGGGGG- TATCCCCACGCGCCCTG- TAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGC GTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCG- CTTTCTTCCCTTCCTTT- CTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGG GCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGAC- CCCAAAAAACTTGAT- TAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTT TTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGAC- TCTTGTTCCAAACTGGAA- CAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATT TTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAA- CAAAAATTTAACGCGAATTA- ATTCTGTGGAATGTGTGTCAGTTAGGGTGTGGAAAGTCCCCAGGC TCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCA- GCAACCAGGTGTGGA- AAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCA TCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCG- CCCATCCCGCCCCTAACTCCG- CCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTA TTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCTGCCTCTGAGCTATTCCA- GAAGTAGTGAGGAGG- CTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTCCCGGGAGCTTG TATATCCATTTTCGGATCTGATCAGCACGTGATGAAAAAG- CCTGAACTCACCGCGACGTCTG- TCGAGAAGTTTCTGATCGAAAAGTTCGACAGCGTCTCCGACCTGA TGCAGCTCTCGGAGGGCGAAGAATCTCGTGCTTTCAGCTT- CGATGTAGGAGGGCGTGGATA- TGTCCTGCGGGTAAATAGCTGCGCCGATGGTTTCTACAAAGATCG TTATGTTTATCGGCACTTTGCATCGGCCGCGCTCCCGATTCCGGA- AGTGCTTGACATTGGG- GAATTCAGCGAGAGCCTGACCTATTGCATCTCCCGCCGTGCACAG GGTGTCACGTTGCAAGACCTGCCTGAAACCGAACTGCCCGCTG- TTCTGCAGCCGGTCGCGGA- GGCCATGGATGCGATCGCTGCGGCCGATCTTAGCCAGACGAGCG GGTTCGGCCCATTCGGACCGCAAGGAATCGGTCAATACACTACA- TGGCGTGATTTCATATG- CGCGATTGCTGATCCCCATGTGTATCACTGGCAAACTGTGATGGA CGACACCGTCAGTGCGTCCGTCGCGCAGGCTCTCGATGAG- CTGATGCTTTGGGCCGAGGAC- TGCCCCGAAGTCCGGCACCTCGTGCACGCGGATTTCGGCTCCAA CAATGTCCTGACGGACAATGGCCGCATAACAGCGGTCATTGAC- TGGAGCGAGGCGATGTT- CGGGGATTCCCAATACGAGGTCGCCAACATCTTCTTCTGGAGGCC GTGGTTGGCTTGTATGGAGCAGCAGACGCGCTACTTCGAGCGGA- GGCATCCGGAGCTTGCAG- GATCGCCGCGGCTCCGGGCGTATATGCTCCGCATTGGTCTTGAC CAACTCTATCAGAGCTTGGTTGACGGCAATTTCGATGATGCAG- CTTGGGCGCAGGGTCGATG- CGACGCAATCGTCCGATCCGGAGCCGGGACTGTCGGGCGTACAC AAATCGCCCGCAGAAGCGCGGCCGTCTGGACCGATGGCTGTG- TAGAAGTACTCGCCGATAG- TGGAAACCGACGCCCCAGCACTCGTCCGAGGGCAAAGGAATAGC ACGTGCTACGAGATTTCGATTCCACCGCCGCCTTCTATGAAAGG- TTGGGCTTCGGAATCG- TTTTCCGGGACGCCGGCTGGATGATCCTCCAGCGCGGGGATCTC ATGCTGGAGTTCTTCGCCCACCCCAACTTGTTTATTGCAGCTTA- TAATGGTTACAAATAAAG- CAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATT CTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTG- TATACCGTCGACCTC- TAGCTAGAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTG AAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAG- CATAAAGTGTAAAG- CCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGC GCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTG- CATTAATGAATCGG- CCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCG CTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGG- CGAGCGGTATCAGCTCAC- TCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCA GGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCG- TAAAAAGGCCGCGTTG- CTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAA AATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTA- TAAAGATACCAGGCGTTT- CCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCC GCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGG- CGCTTTCTCATAGCT- CACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGC TGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCG- CCTTATCCGGTAACTATCG- TCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGC AGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTG- CTACAGAGTTCTTGAAG- TGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATC TGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAG- CTCTTGATCCGGCAAA- CAAACCACCGCTGGTAGCGGTTGGTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAG ATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTT- CTACGGGGTCTGACG- CTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGAT TATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAG- TTTTAAATCAATC- TAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAA TCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCA- TAGTTGCCTGAC- TCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTG GCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGG- CTCCAGATTTATCAGCAA- TAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCA ACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGC- TAGAGTAAGTAGTTCG- CCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATC GTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGG- TTCCCAACGATCAAGG- CGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCC TTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTA- TCACTCATGGTTATGG- CAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTT TTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTG- TATGCGGCGACCGAG- TTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAG CAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGG- CGAAAACTCTCAAGGATCT- TACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCA ACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAG- CAAAAACAGGAAGG- CAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGA ATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGG- TTATTGTCTCATGAG- CGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTT

CCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGACGTC SEQ ID NO: 2 Sequência de plasmídeo TRPC5 A sequência de DNA do plasmídeo TRPC5 usado no Exem- plo 25 está incluída abaixo. Os ácidos nucleicos sublinhados represen- tam aqueles que codificam TRPC5 humano.

GACGGATCGGGAGATCTCCCGATCCCCTATGGTGCACTCTCAG- TACAATCTGCTCTGATG- CCGCATAGTTAAGCCAGTATCTGCTCCCTGCTTGTGTGTTGGAGG TCGCTGAGTAGTGCGCGAGCAAAATTTAAGCTACAACAAGG- CAAGGCTTGACCGACAATTG- CATGAAGAATCTGCTTAGGGTTAGGCGTTTTGCGCTGCTTCGCGA TGTACGGGCCAGATATACGCGTTGACATTGATTATTGACTAGTTA- TTAATAGTAATCAAT- TACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTAC ATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGAC- CCCCGCCCATTGACGTCAA- TAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTG ACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAG- TACATCAAGTGTATCATA- TGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCG CCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTAC- TTGGCAGTACATCTACGTA- TTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCA ATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAG- TCTCCACCCCATTGACGTCAA- TGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGT CGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTG- TACGGTGGGAGGTCTATA- TAAGCAGAGCTCTCCCTATCAGTGATAGAGATCTCCCTATCAGTG ATAGAGATCGTCGACGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCG- CCTGGAGACGCCATCCACG- CTGTTTTGACCTCCATAGAAGACACCGGGACCGATCCAGCCTCCG GACTCTAGCGTTTAAACTTAAGCCCAAGCTGGCTAGACCG- CCATGGCCCAACTGTACTA- CAAAAAGGTCAACTACTCACCGTACAGAGACCGCATCCCCCTGCA AATTGTGAGGGCTGAGACAGAGCTCTCTGCAGAGGAGAAGG- CCTTCCTCAATGCTGTGGA- GAAGGGGGACTATGCCACTGTGAAGCAGGCCCTTCAGGAGGCTG AGATCTACTATAATGTTAACATCAACTGCATGGACCCCTTGGG- CCGGAGTGCCCTGCT- CATTGCCATTGAGAACGAGAACCTGGAGATCATGGAGCTACTGCT GAACCACAGCGTGTATGTGGGTGATGCATTGCTCTATGCCATA- CGCAAGGAAGTGGTGGGCG- CTGTGGAGCTTCTGCTCAGCTACAGGCGGCCCAGCGGAGAGAAG CAGGTCCCCACTCTGATGATGGACACGCAGTTCTCTGAATTCACA- CCGGACATCACTCCCAT- CATGCTGGCTGCCCACACCAACAACTACGAAATCATCAAACTGCT TGTCCAAAAACGGGTCACTATCCCACGGCCCCACCAGATCCG- CTGCAACTGTGTGGAGTGTG- TGTCTAGTTCAGAGGTAGACAGCCTGCGCCACTCTCGCTCCCGAC TGAACATCTATAAGGCTCTGGCAAGCCCCTCACTCATTGCCTTAT- CAAGTGAGGAC- CCCATCCTAACTGCCTTCCGTCTGGGCTGGGAGCTCAAGGAGCT CAGCAAGGTGGAGAATGAGTTCAAGGCCGAGTATGAGGAG- CTCTCTCAGCAGTGCAAG- CTCTTTGCCAAAGACCTGCTGGACCAAGCTCGGAGCTCCAGGGA ACTGGAGATCATCCTCAACCATCGAGATGACCACAGTGAAGAG- CTTGACCCTCAGAAGTAC- CATGACCTGGCCAAGTTGAAGGTGGCAATCAAATACCACCAGAAA GAGTTTGTTGCTCAGCCCAACTGCCAACAGTTGCTTGCCACCCTG- TGGTATGATGGCTT- CCCTGGATGGCGGCGGAAACACTGGGTAGTCAAGCTTCTAACCT GCATGACCATTGGGTTCCTGTTTCCCATGCTGTCTATAGCCTAC- CTGATCTCACCCAGGAG- CAACCTTGGGCTGTTCATCAAGAAACCCTTTATCAAGTTTATCTGC CACACAGCATCCTATTTGACCTTCCTCTTTATGCTTCTCCTGGCTT- CTCAGCACATTGTCAG- GACAGACCTTCATGTACAGGGGCCTCCCCCAACTGTCGTGGAATG GATGATATTGCCTTGGGTTCTAGGTTTCATTTGGGGTGAGAT- TAAGGAAATGTGGGATGGTG- GATTTACTGAATACATCCATGACTGGTGGAACCTGATGGATTTTGC AATGAACTCCCTCTACCTGGCAACTATTTCCCTGAAGATTGTGG- CCTATGTCAAGTATAA- TGGTTCTCGTCCAAGGGAGGAATGGGAAATGTGGCACCCGACTC TGATTGCGGAAGCACTCTTCGCAATATCCAACATTTTAAGTTCG- TTGCGTCTCATATCCCTG- TTCACAGCCAACTCCCACTTAGGACCTCTGCAGATCTCTTTGGGA CGCATGCTGCTTGATATCCTCAAATTCCTCTTTATCTACTGCCTGG- TACTACTAGCTTTTG- CCAATGGACTGAACCAGCTTTACTTCTATTATGAAACCAGAGCTAT CGATGAGCCTAACAACTGCAAGGGGATCCGATGTGAGAAACA- GAACAATGCCTTCTCCACG- CTCTTTGAGACTCTTCAGTCACTCTTCTGGTCTGTATTTGGCCTTT TAAATCTATATGTCACCAATGTGAAAGCCAGACACGAATTCAC- CGAGTTTGTAGGAGCTAC- CATGTTTGGAACATACAATGTCATCTCCCTGGTAGTGCTGCTGAAC ATGCTGATTGCTATGATGAACAACTCCTATCAGCTTATTGCCGAT- CATGCTGATATCGAGTG- GAAGTTTGCAAGGACGAAGCTCTGGATGAGTTACTTTGATGAAGG TGGCACCTTGCCACCTCCTTTCAACATCATCCCCAGCCCCAAGT- CATTTCTATACCTTGG- TAACTGGTTCAACAACACCTTCTGCCCCAAAAGAGACCCTGACGG TAGACGGAGAAGGCGCAACTTGAGAAGTTTCACAGAACGCAATG- CTGACAGCCTGATACAAA- ATCAACATTATCAGGAAGTTATCAGGAATTTAGTCAAAAGATATGT GGCTGCTATGATAAGAAATTCCAAAACACATGAGGGACTTACA- GAAGAAAATTTTAAGGAAT- TAAAGCAAGACATCTCCAGCTTTCGGTATGAAGTGCTTGACCTCTT GGGAAATAGAAAACATCCAAGGAGCTTTTCCACTAGCAGCAC- TGAACTGTCTCAGAGAGA- CGATAATAATGATGGCAGTGGTGGGGCTCGGGCCAAATCCAAGA GTGTCTCTTTTAATTTAGGCTGCAAGAAAAAGACTTGCCATGGG- CCACCTCTCATCAGAAC- CATGCCAAGGTCCAGTGGTGCCCAAGGAAAGTCAAAAGCTGAGT CATCAAGCAAACGCTCCTTCATGGGTCCTTCTCTCAAGAAAC- TGGGTCTCCTATTCTCCAAA- TTTAATGGTCATATGTCTGAACCCAGTTCAGAGCCAATGTACACAA TTTCTGATGGAATTGTTCAGCAGCACTGTATGTGGCAGGACATCA- GATATTCTCAGATGGA- GAAAGGGAAAGCAGAGGCCTGTTCTCAAAGTGAAATTAACCTCAG TGAGGTAGAATTAGGTGAAGTCCAGGGCGCTGCTCAGAGCAG- TGAATGCCCTCTAGCCTGTT- CCAGCTCTCTTCACTGTGCATCCAGCATCTGCTCCTCAAATTCTAA ACTTTTAGACTCCTCAGAGGATGTATTTGAAACTTGGGGAGAGG- CTTGTGACTTGCTCATG- CACAAATGGGGTGATGGACAGGAAGAACAAGTTACAACTCGCCTC TAATGACTCGAGTCTAGAGGGCCCGTTTAAACCCGCTGATCAG- CCTCGACTGTGCCTTCTAG- TTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGAC CCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGA- AATTGCATCGCATTG- TCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGG ACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATG- CTGGGGATGCGGTGGGCTCTA- TGGCTTCTGAGGCGGAAAGAACCAGCTGGGGCTCTAGGGGGTAT CCCCACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGG- TGGTTACGCGCAGCGTGAC- CGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTT CCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTC- TAAATCGGGGGCTCCCTT- TAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAAC TTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATA- GACGGTTTTTCG- CCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTC CAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATT- TATAAGGGATTTTG- CCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAAT TTAACGCGAATTAATTCTGTGGAATGTGTGTCAGTTAGGGTGTG- GAAAGTCCCCAGG- CTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTC AGCAACCAGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCA- GAAGTATGCAAAGCATG- CATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCC ATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCG- CCCCATGGCTGACTAATTTTTTT- TATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCTGCCTCTGAGCTATTCCA GAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTG- CAAAAAGCTCCCGGGAGCTTGTA- TATCCATTTTCGGATCTGATCAGCACGTGATGAAAAAGCCTGAACT CACCGCGACGTCTGTCGAGAAGTTTCTGATCGAAAAGTTCGACA- GCGTCTCCGACCTGATG- CAGCTCTCGGAGGGCGAAGAATCTCGTGCTTTCAGCTTCGATGTA GGAGGGCGTGGATATGTCCTGCGGGTAAATAGCTGCG- CCGATGGTTTCTACAAAGATCGTTA- TGTTTATCGGCACTTTGCATCGGCCGCGCTCCCGATTCCGGAAGT GCTTGACATTGGGGAATTCAGCGAGAGCCTGACCTATTG- CATCTCCCGCCGTGCACAGGGTG- TCACGTTGCAAGACCTGCCTGAAACCGAACTGCCCGCTGTTCTGC AGCCGGTCGCGGAGGCCATGGATGCGATCGCTGCGGCCGATCT- TAGCCAGACGAGCGGGTT- CGGCCCATTCGGACCGCAAGGAATCGGTCAATACACTACATGGC GTGATTTCATATGCGCGATTGCTGATCCCCATGTGTATCACTGG- CAAACTGTGATGGACGA- CACCGTCAGTGCGTCCGTCGCGCAGGCTCTCGATGAGCTGATGC TTTGGGCCGAGGACTGCCCCGAAGTCCGGCACCTCGTGCACG- CGGATTTCGGCTCCAACAA- TGTCCTGACGGACAATGGCCGCATAACAGCGGTCATTGACTGGA GCGAGGCGATGTTCGGGGATTCCCAATACGAGGTCGCCAACA- TCTTCTTCTGGAGGCCGTGG- TTGGCTTGTATGGAGCAGCAGACGCGCTACTTCGAGCGGAGGCA TCCGGAGCTTGCAGGATCGCCGCGGCTCCGGGCGTATATG- CTCCGCATTGGTCTTGACCAAC- TCTATCAGAGCTTGGTTGACGGCAATTTCGATGATGCAGCTTGGG CGCAGGGTCGATGCGACGCAATCGTCCGATCCGGAGCCGGGAC- TGTCGGGCGTACACAAA- TCGCCCGCAGAAGCGCGGCCGTCTGGACCGATGGCTGTGTAGAA GTACTCGCCGATAGTGGAAACCGACGCCCCAGCACTCG- TCCGAGGGCAAAGGAATAGCACG- TGCTACGAGATTTCGATTCCACCGCCGCCTTCTATGAAAGGTTGG GCTTCGGAATCGTTTTCCGGGACGCCGGCTGGATGATCCTCCAG- CGCGGGGATCTCATGCTG- GAGTTCTTCGCCCACCCCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTT ACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAG- CATTTTTTTCACTGCATTCTAG- TTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGTATAC CGTCGACCTCTAGCTAGAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTG- TTTCCTGTGTGAAATTGT- TATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAG TGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAA- TTGCGTTGCGCTCACTG- CCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGA ATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCG- CTCTTCCGCTTCCTCGCTCAC- TGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAG CTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGA- TAACGCAGGAAAGAACATG- TGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGC GTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCAT- CACAAAAATCGACGCT- CAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAG GCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGAC- CCTGCCGCTTACCGGATA- CCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAG CTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCG- CTCCAAGCTGGGCTGTGTG- CACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAA CTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCAC- TGGCAGCAGCCACTGG- TAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTT CTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTA- TTTGGTATCTGCGCTCTG- CTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCC GGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTTGGTTTTTTGTTTGCAAG- CAGCAGATTACGCGCA- GAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTC TGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGT- CATGAGATTATCAAAAAGGA- TCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATC TAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAA- TCAGTGAGGCACCTA- TCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCC CGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGG- CCCCAGTGCTGCAATGATAC- CGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACC AGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTT- TATCCGCCTCCATCCAGTC- TATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAAT AGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGT- CACGCTCGTCGTTTGGTA- TGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACAT GATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGG- TCCTCCGATCGTTGTCAGAAG- TAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCA TAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGAC- TGGTGAGTACTCAAC- CAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTG CCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTT- TAAAAGTGCTCATCATTG- GAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGT TGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTT- CAGCATCTTTTACTTT- CACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCG CAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATAC- TCTTCCTTTTTCAATAT- TATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATAT TTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACA- TTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGACGTC

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a se- guinte fórmula estrutural I: (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que: “---” é uma ligação simples ou dupla X1 é CH ou N; quando “---” é uma ligação dupla, X2 é CH ou N; quando “---” é uma ligação simples, X2 é N(CH3), quando X1 é CH, X2 é N ou N(CH3); Y é -O-, -N(CH3)-, -N(CH2CH2OH)-, ciclopropan-1,1-di-ila, ou -CH(CH3)-; Q é 2-trifluorometil-4-fluorofenila, 2-difluorometil-4-fluorofe- nila, 2-trifluorometilfenila, 2-metil-4-fluorofenila, 2-cloro-4-fluorofenila, 2- clorofenila, 1-(benzil)-4-metilpiperidin-3-ila, 4-trifluorometilpiridin-3-ila, 2-trifluorometil-6-fluorofenila, 2-trifluorometil-3-cianofenila, 2-etil-3-fluo- rofenila, 2-cloro-3-cianofenila, 2-trifluorometil- 5-fluorofenila ou 2-difluo- rometilfenila; R3 é hidrogênio, -CH2OH, -CH(OH)-CH2OH, -NH2, - CH(OH)CH3, -OCH3, ou -NH-(CH2)2OH; e quando “---” é uma ligação dupla, R4 está ausente; e quando “---” é uma ligação dupla, R3 e R4 são tomados jun- tos para formar = O; e cada um de R5 e R6 é independentemente hidrogênio ou - CH3, desde que se X1 for N, X2 é N, Y é -O- ou -N(CH3)-, e Q é 2-trifluorome- tilfenila, então pelo menos um de R3, R5, e R6 não é hidrogênio.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é representado pela seguinte fórmula estrutural II: (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que: R1 é cloro, -CF3, -CHF2, ou -CH3; R2 é hidrogênio ou fluoro; e R3 é hidrogênio, -NH2, -CH2OH, ou CH(OH)-CH2OH.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que quando R1 é -CHF2, R2 não é hidrogênio.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir de qualquer um dos seguintes compostos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: Composto Estrutura 100 101 102

Composto Estrutura

103

104

105

106

107

108

109

110

Composto Estrutura

111

112

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115

116

117

Composto Estrutura

117a

118

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120

121

122

123

Composto Estrutura

124

125

126

126a

127

128

129

130

Composto Estrutura

131

132

133

133a

134

135

136

137

Composto Estrutura 138 139 140

5. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir de qualquer um dos seguintes compostos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: Composto Estrutura 100 101 102 104

Composto Estrutura

105

112

113

114

116

124

125

Composto Estrutura 128 134 135 137

6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir de qualquer um dos seguintes compostos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: Composto Estrutura 100 101

Composto Estrutura

102

104

105

114

116

124

125

128

Composto Estrutura 134 135 137

7. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivin- dicações 1 a 6; e um transportador farmaceuticamente aceitável.

8. Método para tratar ou reduzir o risco de desenvolver uma doença ou condição selecionada de doença renal, hipertensão arterial pulmonar, ansiedade, depressão, câncer, retinopatia diabética ou dor, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou da composição farmacêutica, como definida na reivindicação 7.

9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é doença renal selecionada de Glomeruloesclerose Focal Segmental (FSGS), Nefropatia diabética, sín- drome de Alport, doença renal hipertensiva, síndrome nefrótica, sín- drome nefrótica resistente a esteroides, doença de alteração mínima, nefropatia membranosa, nefropatia membranosa idiopática, glomerulo- nefrite membranoproliferativa (MPGN), MPGN mediada por imunocom- plexos, MPGN mediada por complemento, nefrite lúpica, glomerulone- frite pós-infecciosa, doença da membrana basal fina, glomerulonefrite proliferativa mesangial, amiloidose (primária), nefropatia c1q, GN rapi- damente progressiva, doença anti-GBM, glomerulonefrite C3, nefroes- clerose hipertensiva ou nefropatia por IgA.

10. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a doença renal é uma doença renal proteinúrica.

11. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a doença renal é microalbuminúria ou doença renal macroalbuminúria.

12. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição a ser tratada é hipertensão arte- rial pulmonar.

13. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição a ser tratada é dor selecionada de dor neuropática e dor visceral.

14. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é câncer selecionado de carci- noma de mama quimiorresistente, câncer de mama resistente à adria- micina, câncer colorretal quimiorresistente, meduloblastoma e angiogê- nese tumoral.

15. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é FSGS relacionada ao trans- plante, síndrome nefrótica relacionada ao transplante, proteinúria rela- cionada ao transplante, doença hepática colestática, doença renal poli- cística, doença renal policística autossômica dominante (ADPKD), obe- sidade, resistência à insulina, Diabetes tipo II, pré-diabetes, síndrome metabólica, doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD) ou este- ato-hepatite não alcoólica (NASH).

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 15, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um ser humano.