BR112020018360A2 - Composições para uso no equilíbrio do microbioma - Google Patents

Composições para uso no equilíbrio do microbioma Download PDF

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Abstract

A divulgação geralmente fornece um método para equilibrar o microbioma e/ou melhorar a absorção de nutrientes, tratar a inflamação intestinal e/ou equilibrar o nível de Firmicutes e Bacteroidetes no intestino de um indivíduo em necessidade do mesmo, o método compreendendo o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição compreendendo um nutriente em combinação com uma composição probiótica compreendendo (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada.

Description

COMPOSIÇÕES PARA USO NO EQUILÍBRIO DO MICROBIOMA REFERÊNCIA CRUZADA PARA PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido reivindica o benefício e a prioridade do Pedido de Patente Provisório U.S. Nº 62/693.226, depositado em 2 de julho de 2018; e Pedido Internacional N PCT/US2018/021794, depositado em 9 de março de 2018, cujas divulgações completas são incorporadas nesse documento por referência.
CAMPO DA INVENÇÃO
[002] A presente invenção se refere geralmente a um método para equilibrar o microbioma e/ou melhorar a absorção de nutrientes (por exemplo, proteína, vitamina, mineral e cofator) em um indivíduo. A presente invenção também se refere a um método para tratar a inflamação intestinal e/ou equilibrar o nível de Firmicutes e Bacteroidetes no intestino de um indivíduo em necessidade do mesmo.
ANTECEDENTES
[003] Os biofilmes são formados quando os microrganismos unicelulares vivem juntos e formam uma comunidade que é protegida por uma matriz de exopolissacarídeo (EPS). Essa matriz de EPS tipicamente é um conglomerado de proteínas, polissacarídeos e DNA extracelular. Microrganismos associados a biofilme diferem de seus homólogos planctônicos (livremente suspensos). Acredita-se que as células formadoras de biofilme coagregam umas às outras para formar grupos coordenados afixados a uma superfície biótica ou abiótica, as células são rodeadas por uma matriz de EPS protetora, comunicam-se eficazmente por meio de sensoriamento de quórum e têm baixa atividade metabólica que limita impacto de antimicrobianos convencionais (agentes antifúngicos e antibacterianos) agindo contra células que metabolizam ativamente ou células em fase estacionária.
[004] Microrganismos, incluindo bactérias, fungos e arqueias formam biofilmes. Para um determinado indivíduo (por exemplo, um humano), muitos microrganismos (denominados microbiota) existem em ou dentro de várias regiões do referido indivíduo, por exemplo, o intestino, a pele, a vagina, o trato respiratório e a boca. Há uma ligação inextricável entre a microbiota gastrointestinal de um indivíduo hospedeiro e a digestão, a imunidade e o metabolismo. A microbiota gastrointestinal é importante para a biossíntese de vitaminas e metabólitos e digestão de macromoléculas complexas, tais como os polissacarídeos. A microbiota gastrointestinal, sob condições normais, auxilia na prevenção da colonização de microrganismos patogênicos e na manutenção da integridade e função da barreira intestinal, além de apoiar o sistema imunológico.
[005] No entanto, biofilmes indesejáveis ou desequilibrados podem estar envolvidos em uma porcentagem significativa de infecções microbianas humanas (Potera, C. (1999) SCIENCE 283:1837-8). Foi proposto que quatro critérios definem a etiologia do biofilme durante uma infecção: se as bactérias ou os fungos patogênica(o)s são associada(o)s à superfície ou aderentes a um substrato; se as bactérias estão em agrupamentos, encerrados em uma matriz de constituintes bacterianos, fúngicos ou do hospedeiro; se a infecção é localizada; e se a infecção é resistente a terapias antibióticas e antifúngicas, apesar da sensibilidade antimicrobiana dos organismos planctônicos constituintes (Parsek, MR & Singh, PK (2003) ANN REV. MICROBIOL. 57: 677-701; Ghannoum, M., et al. (2015) MICROBIAL BIOFILMS. Segunda Ed., Am. Soc. for Microbiology).
[006] Acredita-se que as infecções baseadas em biofilme estão envolvidas na etiologia da cárie dentária, doença periodontal, infecções das vias aéreas na fibrose cística (FC), endocardite de válvula nativa, prostatite bacteriana crônica, otite média e infecções vaginais. Microrganismos de biofilme também podem estar envolvidos em infecções relacionadas a implantes, nas quais populações microbianas aderentes (incluindo bactérias e fungos) se formam nas superfícies de cateteres, válvulas cardíacas protéticas, substituições de articulações e outros dispositivos (Donlan, R. M. (2001) EMERG. INFECT. DIS. 7:277- 81; Chandra, J. e Ghannoum M.A. (2004) Fungal Biofilms., Cap. 3. Em: Microbial Biofilms. O’Toole G e Ghannoum MA (Editores)).
[007] O trato intestinal fornece um reservatório para muitos fungos e bactérias de biofilme resistentes a antibióticos, incluindo espécies de Candida, espécies de Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, e espécies de Acinetobacter (Donskey, CJ (2004) CLIN. INFECT. DIS. 39: 219-26). Embora os pulmões tenham sido tradicionalmente considerados um dos principais locais de infecção por P. aeruginosa entre pacientes criticamente enfermos, um número significativo dessas infecções surge como resultado da contaminação direta das vias aéreas pela flora gastrointestinal ou por disseminação hematogênica dos intestinos para o parênquima pulmonar. Métodos eficazes para a(o) inibição, redução e/ou tratamento de P. aeruginosa teriam um impacto significativo para essa condição.
[008] Com relação aos biofilmes no intestino, acredita-se agora que bactérias e fungos podem existir, por exemplo, como biofilmes no epitélio do cólon, dentro da camada de muco que o cobre, e em partículas de alimentos no lúmen (MacFarlane, S. & MacFarlane, G. T. (2006) APPL. ENVIRON. MICROBIOL. 72:6204-11; Probert, H. M. & Gibson, G. R. (2002) CURR. ISSUES INTEST. MICROBIOL. 3:23-7). Os biofilmes no trato GI povoados pelo menos com bactérias patogênicas formam um filme filamentoso denso envolto em uma matriz de exopolissacarídeo (EPS). Esses biofilmes são impenetráveis aos antimicrobianos e às células imunes do hospedeiro e são difíceis de tratar. Por exemplo, biofilmes que são envoltos em matriz de EPS foram implicados com doenças, tal como a doença de Crohn (CD) (Hoarau G, et al., Bacteriome and Mycobiome Interactions Underscore Microbial Dysbiosis, in Familial Crohn’s Disease. Bio, 2016). As tentativas de tratar doenças ou distúrbios do trato gastrointestinal com probióticos convencionais tiveram sucesso limitado.
[009] Apesar dos avanços feitos até agora, há necessidade de composições e métodos melhorados para romper biofilmes e tratar doenças e distúrbios associados a biofilmes.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0010] A presente invenção é baseada, em parte, na verificação de que uma composição ou forma de dosagem compreendendo bactérias e fungos não patogênicos melhora a absorção de nutrientes (por exemplo, proteína, vitamina, mineral e cofator) por células epiteliais intestinais de mamíferos (por exemplo, humano). Também é fornecida nesse documento a verificação de que é possível romper biofilmes compreendendo, por exemplo, bactérias patogênicas e/ou fungos patogênicos, em um indivíduo pela administração ao indivíduo de uma composição ou uma forma de dosagem compreendendo bactérias e fungos não patogênicos, que quando administrada restaura o microbioma natural e/ou facilita um microbioma mais equilibrado no indivíduo. A presente invenção se refere geralmente a composições e métodos para promover uma flora microbiana equilibrada e saudável em um mamífero.
[0011] Em um aspecto, a invenção fornece um método para melhorar a absorção de nutrientes em um indivíduo, o método compreendendo o consumo pelo, ou administração ao, indivíduo de uma composição probiótica que compreende (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada, e (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada. Em certas modalidades, o indivíduo consome uma composição (por exemplo, alimento ou bebida) que compreende o nutriente simultaneamente, antes ou após o consumo ou a administração da composição probiótica.
[0012] Em outro aspecto, a invenção fornece um método para melhorar a absorção de nutrientes em um indivíduo, o método compreendendo o consumo pelo, ou administração ao, indivíduo de uma composição que compreende um nutriente em combinação com uma composição probiótica que compreende (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada. A combinação não requer que o nutriente e a composição probiótica estejam presentes em uma composição única. Em certas modalidades, a composição que compreende um nutriente compreende o nutriente e a composição probiótica.
[0013] Em certas modalidades, o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo da composição que compreende um nutriente é contemporâneo(a) ao consumo ou à administração da composição probiótica. Em certas modalidades, o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo da composição que compreende um nutriente é subsequente ou anterior ao consumo ou à administração da composição probiótica.
[0014] Qualquer nutriente é contemplado nessa invenção. Em certas modalidades, o nutriente é uma proteína. A proteína pode ser selecionada de proteína de soro de leite, proteína de soja, proteína de leite, proteína de ovo, proteína de músculo animal, proteína de peixe, proteína de arroz integral, proteína de ervilha, proteína de cânhamo, proteína de oxicoco e proteína de alcachofra. Em certas modalidades, a proteína é caseína. Em certas modalidades, a proteína é um hidrolisado de proteína. Em certas modalidades, a proteína é compreendida por uma fonte alimentar natural. Em certas modalidades, a proteína é uma proteína isolada e/ou purificada.
[0015] O indivíduo pode ser um mamífero (por exemplo, humano, um animal de companhia (por exemplo, cachorro, gato ou coelho) ou um animal de pecuária (por exemplo, vaca, ovelha, porco, cabra, cavalo, burro e mula, búfalo, boi ou camelo)). Em certas modalidades, o indivíduo é um indivíduo saudável. Em outras modalidades, a composição probiótica compreende adicionalmente uma enzima, por exemplo, uma enzima capaz de romper um biofilme que pode bloquear ou de outra forma retardar a absorção de nutrientes. A inclusão de tal enzima é particularmente útil se o indivíduo tiver um biofilme de bactérias e/ou fungos patogênica(o)s.
[0016] Em certas modalidades, a composição probiótica compreende pelo menos duas cepas bacterianas não patogênicas diferentes. Em certas modalidades, a composição probiótica compreende três diferentes cepas bacterianas não patogênicas. Em certas modalidades, a cepa bacteriana não patogênica é selecionada de: Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium breve, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium bifidum, e Lactobacillus reuteri. Em certas modalidades, a cepa bacteriana não patogênica é selecionada de: Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, e Lactobacillus acidophilus RP 32. Em certas modalidades, a composição probiótica compreende Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, e Lactobacillus acidophilus RP 32. Em certas modalidades, a cepa fúngica não patogênica é selecionada de: Saccharomyces boulardii, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomycetes sp HZ178, Saccharomyces bayanus, Pichia burtonii, Pichia jadinii, Pichia kudriavzevii, Pichia onychis, Pichia sp., e Picoa juniper. Em certas modalidades, a cepa fúngica não patogênica é Saccharomyces boulardii SB 48.
[0017] Em certas modalidades, a composição probiótica compreende adicionalmente uma enzima capaz de romper um biofilme em um indivíduo. Em certas modalidades, a enzima é selecionada do grupo que consiste em amilase, celulase, hemicelulase, lisozima, pectinase, DNase I, Serratia peptidase ou Serratiopeptidase, complexo hemicelulase/pectinase, -1,3-glucanase, protease ácida, protease alcalina, glucoamilase, endoglucanase, xilanase, lipase, lisozima, complexo de protease/peptidase, dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), quitosanase, bromelaína, papaína, kiWi protease actinidi, uma protease derivada de planta e fitase. Em certas modalidades, a enzima é uma amilase selecionada do grupo que consiste em amilase de Bacillus stearothermophilus, amilase de Bacillus amyloliquefaciens, amilase de Bacillus subtilis, amilase de Bacillus licheniformi, amilase de Aspergillus niger e amilase de Aspergillus oryzae. Em certas modalidades, a composição probiótica compreende de cerca de 100 a cerca de 5.000 unidades SKB de amilase, de cerca de 200 a cerca de 4.000 unidades SKB de amilase, de cerca de 300 a cerca de 2.000 unidades SKB de amilase, ou de cerca de 400 a cerca de 1.000 unidades SKB de amilase. Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 500 unidades SKB de amilase.
[0018] Em certas modalidades, a composição probiótica compreende cerca de 50, cerca de 40, cerca de 30, cerca de 20 bilhões, cerca de 10 bilhões, cerca de 1 bilhão, cerca de 500 milhões, cerca de 100 milhões, cerca de 50 milhões ou cerca de 10 milhões unidades formadoras de colônias das cepas bacterianas não patogênicas e cepas fúngicas não patogênicas. Em certas modalidades, a composição probiótica compreende cerca de 30 bilhões de unidades formadoras de colônias das cepas bacterianas não patogênicas e cepas fúngicas não patogênicas. Em certas modalidades, a composição probiótica compreende cerca de 15 bilhões de unidades formadoras de colônia de Bifidobacterium breve, cerca de 10 bilhões de unidades formadoras de colônia de Lactobacillus rhamnosus, cerca de 3,5 bilhões de unidades formadoras de colônia de Saccharomyces boulardii, cerca de 1,5 bilhão de unidades formadoras de colônia de Lactobacillus acidophilus e 500 SKP de Amilase. Em certas modalidades, a composição probiótica compreende uma mistura (combinação) de uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas isoladas e viáveis e uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicas isoladas e viáveis está na forma de um pó. Em certas modalidades, a composição probiótica compreende um pó de uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas isoladas e viáveis e uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicas isoladas e viáveis que é revestido com revestimento funcional (por exemplo, revestido com um revestimento de liberação controlada) ou um revestimento não funcional (por exemplo, revestimento estético). Em certas modalidades, a composição probiótica está em uma forma de dosagem oral. Em certas modalidades, a forma de dosagem oral é uma cápsula, por exemplo, uma cápsula que opcionalmente é revestida com um revestimento funcional ou não funcional.
[0019] Em certas modalidades, a composição probiótica é formulada como uma combinação em pó de uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas isoladas e viáveis e uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicas isoladas e viáveis que são capazes de romper biofilmes ou prevenir a formação de biofilmes compreendendo bactérias patogênicas e/ou fungos patogênicos, ou melhoram a absorção de nutrientes (por exemplo, proteínas, aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos, vitaminas, minerais e cofatores), onde a combinação em pó é opcionalmente revestida, por exemplo, revestida com um revestimento funcional, tal como um revestimento de liberação controlada. Além disso, em certas modalidades, a combinação em pó de uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas isoladas e viáveis e uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicas isoladas e viáveis é liofilizada ou seca por pulverização. Em certas modalidades, a combinação liofilizada ou seca por pulverização opcionalmente revestida de uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas isoladas e viáveis e uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicas isoladas e viáveis é adicionalmente combinada com uma enzima (por exemplo, amilase) capaz de romper um biofilme. Os microrganismos dentro do biofilme que são rompidos pela composição podem compreender qualquer tipo de microrganismo patogênico, por exemplo, bactérias (por exemplo, bactérias Gram-positivas e bactérias Gram- negativas), fungos (por exemplo, levedura e bolor), arqueias e protozoários.
[0020] O método pode ser usado para romper um biofilme em uma região pré-selecionada, por exemplo, trato gastrointestinal, trato urinário, trato reprodutivo, trato respiratório superior, trato respiratório inferior, trato biliar, boca, olho, nariz, ouvido ou pele, do indivíduo. O método compreende a administração ao indivíduo dessa composição, após o qual a administração rompe um biofilme no indivíduo. Em certas modalidades, o biofilme compreende uma ou mais de bactérias e fungos, incluindo (i) Candida tropicalis e Escherichia coli (E. coli), (ii) Candida tropicalis e Serratia marcescens, ou (iii) Candida tropicalis, Escherichia coli e Serratia marcescens. Em certas modalidades, o biofilme compreende (i) Candida albicans e Escherichia coli, (ii) Candida albicans e Serratia marcescens, ou (iii) Candida albicans, Escherichia coli, e Serratia marcescens.
[0021] A enzima na composição ou forma de dosagem rompe os polissacarídeos da matriz extracelular (EPSs) presentes no biofilme, tornando os organismos patogênicos mais abertos ao desafio pelas cepas bacterianas e fúngicas não patogênicas nas formas de dosagem. Em certas modalidades, após a administração da composição, as cepas bacterianas não patogênicas (i) deslocam as bactérias patogênicas no biofilme, (ii) interferem na fixação da(o)s bactérias ou fungos patogênica(o)s a um substrato do biofilme, (iii) deslocar a(o)s bactérias/fungos patogênica(o)s de uma matriz polimérica extracelular presente no biofilme, (iv) prevenir a filamentação dos fungos patogênicos no biofilme, ou (v) uma combinação de qualquer um dos anteriores. Em certas modalidades, a administração da composição permite a restauração do microbioma natural da região no indivíduo e reduz o crescimento e/ou desenvolvimento de bactérias patogênicas e/ou fungos patogênicos.
[0022] Em um aspecto, a presente invenção fornece um produto alimentício assado que compreende uma composição probiótica que compreende (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e viável, e (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada e viável. As cepas fúngicas e bacterianas não patogênicas mantêm a viabilidade após o processo de assar. O produto alimentício assado pode ser um produto rico em proteínas, por exemplo, compreendendo pelo menos 25%, 50%, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes ou cerca de 5 vezes mais proteína por unidade de peso do que a média de produtos alimentícios assados desse tipo. A composição probiótica pode incluir uma ou mais das composições ou formas de dosagem descritas nesse documento.
[0023] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um produto de bebida que compreende uma composição probiótica que compreende (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e viável e (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada e viável. A bebida pode ser uma bebida rica em proteínas, por exemplo, compreendendo pelo menos 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% ou 10% de proteína. A composição probiótica pode incluir uma ou mais das composições ou formas de dosagem descritas nesse documento.
[0024] Em outro aspecto, a invenção fornece um método para identificar um indivíduo adequado para receber essa composição ou forma de dosagem. O método compreende: (a) quantificar o número ou a densidade de organismos de (i) pelo menos uma cepa bacteriana não patogênica e/ou (ii) pelo menos uma cepa fúngica não patogênica presente em uma amostra de tecido ou fluido corporal colhida de a região do indivíduo de teste; e (b) comparar os níveis de abundância ou o número de organismos quantificados na amostra contra o número ou a densidade de organismos correspondentes presentes em um tamanho de amostra correspondente de uma região correspondente de um indivíduo saudável. Quando o número ou a densidade de organismos na amostra do indivíduo de teste é menor que o número ou a densidade de organismos presentes na região correspondente do indivíduo saudável, o indivíduo de teste é adequado para receber a composição ou forma de dosagem.
[0025] Em um aspecto, a presente invenção fornece uma composição para uso no tratamento de inflamação intestinal e/ou disbiose intestinal em um indivíduo em necessidade da mesma, a composição compreendendo (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e viável; (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada e viável; (iii) pelo menos uma enzima digestiva; e (iv) um ingrediente nutricional.
[0026] Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma composição para uso no equilíbrio dos níveis de Firmicutes e Bacteroidetes no intestino de um indivíduo em necessidade da mesma, a composição compreendendo (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e viável; (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada e viável; (iii) pelo menos uma enzima digestiva; e (iv) um ingrediente nutricional.
[0027] A presente invenção fornece quatro misturas de super greens diferentes: uma é útil no(a) tratamento ou redução da inflamação intestinal e/ou disbiose em um indivíduo com alto nível de Proteobacteria e baixo nível de Candida em relação a um indivíduo sem inflamação intestinal e/ou disbiose; outro é útil no(a) tratamento ou redução da inflamação intestinal e/ou disbiose em um indivíduo com altos níveis de Proteobacteria e Candida em relação a um indivíduo sem inflamação intestinal e/ou disbiose; e duas combinações de super greens adicionais podem ser usadas para equilibrar os níveis de Firmicutes e Bacteroidetes no intestino de um indivíduo em necessidade das mesmas, e condições associadas, tais como obesidade e distúrbio do sono.
[0028] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método para melhorar uma condição associada com a formação de biofilme aberrante no intestino de um indivíduo em necessidade do mesmo, o método compreendendo o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição probiótica que compreende (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um método para melhorar uma condição associada à formação de biofilme aberrante no intestino de um indivíduo em necessidade do mesmo, o método compreendendo o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição compreendendo (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e viável; (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada e viável; e (iii) pelo menos uma enzima digestiva. Em certas modalidades, a composição compreende adicionalmente um ingrediente nutricional.
[0029] Em certas modalidades, a condição é um(a) doença ou distúrbio do trato gastrointestinal, por exemplo, hiperamonemia, colite por Clostridium difficile, encefalopatia hepática associada à cirrose, doença inflamatória do intestino, doença de Crohn, colite ulcerativa e/ou doença do intestino irritável. Em certas modalidades, a doença ou o distúrbio do trato gastrointestinal é um(a) doença ou distúrbio do cólon. Em certas modalidades, a doença ou o distúrbio do cólon está associado a uma resposta inflamatória.
[0030] Outras características e vantagens da invenção serão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada e reivindicações.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0031] Nos desenhos, caracteres de referência semelhantes geralmente se referem às mesmas peças ao longo das diferentes vistas. Além disso, os desenhos não estão necessariamente em escala, em vez disso, a ênfase geralmente é colocada na ilustração dos princípios da presente divulgação. Na descrição a seguir, várias modalidades da presente divulgação são descritas com referência aos seguintes desenhos, nos quais: as FIGURAS 1A - 1B são fotografias que mostram os efeitos de uma formulação probiótica no biofilme de C. tropicalis onde a FIGURA 1A (ampliação de 1.000x) e a FIGURA 1B (ampliação de 3.250x) mostram que as bactérias probióticas se agrupam e evitam a hifenização fúngica.
[0032] As FIGURAS 2A - 2B são fotografias que mostram os efeitos de cepas probióticas em biofilmes de espécies mistas formados por organismos patogênicos, onde a FIGURA 2A (ampliação de 500x) e a FIGURA 2B (ampliação de 1.000x) mostram que a hifenização fúngica é significativamente reduzida no biofilme de espécies mistas após ser tratado com as cepas probióticas, em comparação com o controle de biofilme de espécies mistas.
[0033] A FIGURA 3 é uma representação esquemática de um sistema Pontuação de Equilíbrio de Biohm (“BBS”). Uma pontuação acumulativa de 8 para todos os organismos (por exemplo, em uma determinada amostra os organismos bacterianos e fúngicos testados estão presentes em níveis mais elevados do que na amostra de controle, portanto, cada um recebe uma pontuação de “1”) identifica o indivíduo como tendo um microbioma “equilibrado”. Da mesma forma, uma pontuação de 7 identifica o indivíduo como tendo um microbioma equilibrado. Em contraste, uma pontuação de 4-6 identifica o indivíduo como tendo um microbioma que está no limite entre o microbioma equilibrado e desequilibrado, e uma pontuação de 0-3 identifica o indivíduo como tendo um microbioma “desequilibrado”, e um bom candidato para receber a composição da invenção.
[0034] A FIGURA 4 é uma série de gráficos de caixa mostrando perfis de abundância relativa de seis filos bacterianos analisados em uma coorte de alimentação lenta (SFC). Para cada filo, os níveis de bactérias foram analisados antes e após a administração de uma cápsula compreendendo uma composição da presente invenção. O perfil pré- e pós-administração foi comparado com os perfis dos indivíduos do Projeto do Microbioma Humano Normal (NHMPS). Níveis de significância estatística: *<0,01, **<0,001, ***<0.
[0035] A FIGURA 5 é uma série de gráficos de caixa que mostram perfis de abundância relativa de três filos de fungos analisados na SFC. Para cada filo, os níveis de fungos foram analisados antes e depois de receber uma cápsula contendo a composição probiótica descrita nesse documento, denominada cápsula de BIOHM, e comparados com o perfil do NHMPS. Níveis de significância estatística: *<0,01, **<0,001, ***<0.
[0036] A FIGURA 6 mostra os gráficos de caixa que mostram um perfil de abundância relativa do gênero Candida em indivíduos analisados na SFC. Os níveis do gênero Candida foram analisados antes e depois do consumo da cápsula de BIOHM e comparados com o perfil de controles saudáveis. Níveis de significância estatística: *<0,01, **<0,001, ***<0.
[0037] A FIGURA 7 mostra os gráficos de caixa que mostram uma abundância relativa das espécies de Candida albicans em indivíduos analisados no SFC. Os níveis de Candida albicans foram analisados antes e após a administração da cápsula de BIOHM, e comparados com o perfil de controles saudáveis. Níveis de significância estatística: *<0,01, **<0,001, ***<0.
[0038] A FIGURA 8 é um gráfico que mostra a espessura dos biofilmes formados por C. albicans (CA), C. tropicalis (CT) ou Trichosporon (TC) sozinho e a espessura dos biofilmes de espécies mistas formados por C. albicans, E. coli e S. marcescens (CAES), e C. tropicalis, E. coli e S. marcescens (CTES).
[0039] A FIGURA 9 é um gráfico que mostra o efeito do filtrado probiótico na fase de adesão (prevenção) de biofilmes de C. albicans formados isoladamente e com espécies mistas. A espessura (µm) de biofilmes formados por espécie isolada de C. albicans (CA) e por espécies mistas de C. albicans, E. coli e S. marcescens (CAES) é significativamente reduzida quando tratada com o filtrado probiótico, em comparação com os respectivos controles não tratados (*p≤0,05).
[0040] A FIGURA 10 é um gráfico que mostra o efeito do filtrado probiótico na fase de adesão (prevenção) de biofilmes de C. tropicalis formados de espécie isolada (CT) e de espécies mistas. A espessura (µm) dos biofilmes formados pela espécie isolada de C. tropicalis (CT) e pelas espécies mistas de C. tropicalis, E. coli e S. marcescens (CTES) são significativamente reduzidas quando tratadas com o filtrado probiótico, em comparação com os respectivos controles não tratados (*p≤0,05).
[0041] A FIGURA 11 é um gráfico que mostra o efeito do filtrado probiótico na fase madura (tratamento) de biofilmes de C. albicans formados de espécie isolada e de espécies mistas. A espessura (µm) de biofilmes formados por espécie isolada de C. albicans (CA) e por espécies mistas de C. albicans, E. coli e S. marcescens (CAES) é significativamente reduzida quando tratada com o filtrado probiótico, em comparação com os respectivos controles não tratados (*p≤0,05).
[0042] A FIGURA 12 é um gráfico que mostra o efeito do filtrado probiótico na fase madura (tratamento) de biofilmes de espécie isolada de C. tropicalis (CT) e de espécies mistas. A espessura (µm) de biofilmes formados por espécie isolada de C. tropicalis (CT) e de espécies mistas de biofilmes de C. tropicalis, E. coli e S. marcescens (CTES) é significativamente reduzida quando tratada com o filtrado probiótico em comparação com os respectivos controles não tratados (*p≤0,05).
[0043] As FIGURAS 13A-13D são micrografias eletrônicas de varredura (SEM) mostrando o efeito do filtrado probiótico na fase de adesão (prevenção) de biofilmes de C. albicans de espécie isolada e de espécies mistas. A FIGURA 13A mostra um biofilme de C. albicans de espécie única não tratada. A FIGURA 13B mostra um biofilme de C. albicans de espécie única tratado com o filtrado probiótico. A FIGURA 13C mostra um biofilme de espécies mistas não tratadas de C. albicans, E. coli e S. marcescens (CAES). A FIGURA 13D mostra um biofilme de CAES de espécies mistas tratado com o filtrado probiótico.
[0044] As FIGURAS 14A-14D são micrografias eletrônicas de varredura (SEMs) que mostram o efeito do filtrado probiótico na fase de adesão (prevenção) de biofilmes de espécie isolada de C. tropicalis e de espécies mistas. A FIGURA 14A mostra um biofilme de espécie isolada de C. tropicalis não tratado. A FIGURA 14B mostra uma única espécie de biofilme de C. tropicalis tratado com o filtrado probiótico. A FIGURA 14C mostra um biofilme de espécies mistas não tratadas de C. tropicalis, E. coli e S. marcescens (CTES). A FIGURA 14D mostra um biofilme de espécies mistas de CTES tratado com o filtrado probiótico.
[0045] A FIGURA 15 é um gráfico que mostra o efeito do filtrado probiótico na germinação de C. albicans, por exemplo, uma redução significativa na porcentagem de formação de tubo germinativo de C. albicans após 30 a 120 minutos de exposição ao filtrado probiótico em comparação com o controle não tratado (*p≤0,05).
[0046] A FIGURA 16 é um gráfico que mostra o efeito do filtrado probiótico na germinação de C. tropicalis, por exemplo, uma redução significativa na porcentagem de formação de tubo germinativo de C. tropicalis após 30 a 90 minutos de exposição ao filtrado probiótico em comparação com o controle não tratado (*p≤0,05).
[0047] A FIGURA 17 é uma representação esquemática de um método de filtro transwell, que é um modelo in vitro para avaliar a absorção de nutrientes.
[0048] A FIGURA 18 é um gráfico que mostra o efeito do filtrado probiótico BIOHM na absorção de vitamina C.
[0049] A FIGURA 19 é um gráfico que mostra o efeito do filtrado probiótico BIOHM na absorção de proteína de caseína.
[0050] A FIGURA 20 é um gráfico de barras que mostra os números (em unidades formadoras de colônias logarítmicas (CFU)/g de pão) de bactérias aeróbias, bactérias anaeróbicas e leveduras isoladas de um pão assado.
[0051] A FIGURA 21 é uma representação esquemática de um processo de exemplo para preparar uma composição probiótica descrita nesse documento.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0052] A presente invenção é baseada, em parte, na verificação de que uma composição ou uma forma de dosagem compreendendo bactérias e fungos não patogênicos melhora a absorção de nutrientes (por exemplo, proteína e/ou vitamina) por células epiteliais intestinais de mamíferos (por exemplo, humanos). Também é fornecida nesse documento a verificação de que é possível prevenir ou romper biofilmes compreendendo bactérias e/ou fungos patogênica(o)s e, opcionalmente, arqueias e/ou protozoários, em um indivíduo pela administração ao indivíduo de uma composição ou forma de dosagem compreendendo bactérias não patogênicas e fungos não patogênicos isolados e viáveis, que quando administrados promovem um microbioma mais equilibrado e/ou promovem a restauração do microbioma natural do indivíduo. A menos que o contexto indique o contrário, os termos composição e forma de dosagem podem ser usados indistintamente nesse documento, onde uma forma de dosagem é uma composição e vice-versa. Por exemplo, está contemplado que a composição consumida por, ou administrada a, um indivíduo pode ser consumida ou administrada como uma forma de dosagem, por exemplo, como uma unidade (por exemplo, uma colher) da composição. De forma similar, entende-se que uma forma de dosagem pode, por exemplo, compreender uma composição descrita nesse documento. Por exemplo, uma forma de dosagem pode compreender, por exemplo, uma composição na forma de um pó descrito nesse documento, ou, por exemplo, uma cápsula que contém essa composição.
[0053] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição que compreende (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e viável e (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada e viável, que pode estar na forma de uma mistura. A composição compreende: (i) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas fúngicas não patogênicas isoladas que são viáveis em uma região pré-selecionada do indivíduo, e (ii) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas bacterianas não patogênicas isoladas que são viáveis na região do indivíduo.
[0054] Em outro aspecto, a invenção fornece uma composição que compreende (i) uma enzima, (ii) uma cepa fúngica não patogênica e (iii) uma cepa bacteriana não patogênica. Por exemplo, a composição compreende: (i) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de enzimas capazes de romper um biofilme em uma região pré-selecionada de um indivíduo, (ii) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas fúngicas não patogênicas que são viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo, e (iii) uma ou mais (por exemplo, 1 , 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas bacterianas não patogênicas que são viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo.
[0055] Em outro aspecto, a invenção fornece uma composição capaz de romper um biofilme compreendendo bactérias patogênicas e/ou fungos patogênicos dispostos dentro de uma região pré-selecionada de um indivíduo. A composição compreende (i) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de enzimas capazes de romper o biofilme, (ii) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas fúngicas não patogênicas que são viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo, e (iii) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas bacterianas não patogênicas que são viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo.
[0056] Em outro aspecto, a invenção fornece uma forma de dosagem capaz de romper um biofilme compreendendo bactérias patogênicas e/ou fungos patogênicos dispostos dentro de uma região pré-selecionada de um indivíduo. A forma de dosagem compreende uma composição que compreende (i) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de enzimas capazes de romper o biofilme, (ii) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas fúngicas não patogênicas que são viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo, e (iii) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas bacterianas não patogênicas que são viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo. I. BIOFILMES
[0057] A composição ou formas de dosagem da invenção podem ser usadas para romper e/ou substituir um biofilme presente em uma região pré-selecionada de um indivíduo, que pode incluir, por exemplo, o trato gastrointestinal, trato urinário, órgãos reprodutivos (por exemplo, testículos, pênis, uretra, ovários, vagina ou útero), trato respiratório superior (incluindo o nariz), trato respiratório inferior (por exemplo, pulmão), trato biliar, boca, olho, nariz, ouvido ou pele.
[0058] Os microrganismos de exemplo dispostos dentro do biofilme que podem ser tornados suscetíveis ao rompimento pela composição da forma de dosagem da invenção incluem, mas não estão limitados a, espécies do filo Firmicutes, filo Ascomycota e filo Zygomycota, por exemplo, Enterococcus spp., incluindo Enterococcus faecalis, Escherichia spp., incluindo Escherichia coli; Chlamydia spp., incluindo Chlamydia pneumonia e Chlamydia trachomatis, Salmonella spp., incluindo Salmonella typhi e Salmonella typhimurium, Pseudomonas spp., incluindo Pseudomonas aeruginosa e Pseudomonas anaerobius, Staphylococcus spp., incluindo Staphylococcus aureus, Staphylococcus capitus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Listeria spp., incluindo Listeria monocytogenes, Helicobacter spp., incluindo Helicobacter pylori, Campylobacter spp., incluindo Campylobacter jejuni, Yersinia spp., incluindo Yersinia pestis, Vibrio spp., incluindo Vibrio cholera, Haemophilus spp. incluindo Haemophilus aphrophilus e Haemophilus influenza, Mycobacterium spp. incluindo Mycobacterium leprae, Mycobacterium tuberculosis, Burkholderia spp., incluindo Burkholderia cepacia, Mycoplasma spp., incluindo Mycoplasma pneumoniae, Klebsiella spp. incluindo Klebsiella pneumoniae, Enterobacter spp. incluindo Enterobacter cloacae, Candida spp., incluindo Candida albicans, Candida dubliniensis, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida glabrata, Candida krusei, Candida Auris e Aspergillus spp., incluindo Aspergillus clavatus, Aspergillus flavus, Aspergillus terreus, e Aspergillus fumigatus. Biofilmes do trato gastrointestinal
[0059] Em certas modalidades, a composição ou as formas de dosagem descritas nesse documento podem ser usadas para romper um biofilme compreendendo, por exemplo, bactérias patogênicas e fungos dentro do trato gastrointestinal (GI)
(por exemplo, esôfago, estômago, intestino superior e/ou intestino delgado) de um indivíduo. Em certas modalidades, a região pré-selecionada compreende o duodeno, o jejuno e/ou o íleo do trato GI superior, enquanto em outras modalidades, a região pré-selecionada compreende o apêndice, o cólon proximal e/ou reto do trato GI inferior.
[0060] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem descrita nesse documento é usada para romper um biofilme disposto dentro do trato GI de um indivíduo com uma abundância relativa elevada de espécies bacterianas patogênicas, tais como, E. coli, Serratia marcescens e Ruminococcus gnavus no biofilme disposto dentro do trato GI do indivíduo quando comparado aos níveis tipicamente encontrados em indivíduos saudáveis. Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem descrita nesse documento compreende cepas bacterianas não patogênicas para romper ou substituir um biofilme contendo duas espécies bacterianas patogênicas. Por exemplo, o biofilme direcionado para rompimento ou substituição pode conter E. coli e uma Bacteroides spp. (por exemplo, Bacteroides coprophilus, Bacteroides eggerthii, Bacteroides ovatus, Bacteroides fragilis, Bacteroides plebeius, ou Bacteroides uniformis).
[0061] Em certas modalidades, a abundância do fungo patogênico Candida tropicalis em um biofilme disposto dentro do trato GI de um indivíduo é elevada quando comparada aos níveis tipicamente encontrados em indivíduos saudáveis. Em certas modalidades, os biofilmes dentro do trato GI contendo C. tropicalis ou C. Albicans combinados com E. coli e/ou S. marcescens são enriquecidos em hifas fúngicas, uma forma de crescimento associada a condições patogênicas. A filamentação fúngica às vezes pode ser um fator de virulência usado pela Candida para danificar os tecidos do hospedeiro e para desencadear uma resposta imune específica do hospedeiro. Em certas modalidades, a forma de dosagem da invenção é usada para romper um biofilme disposto dentro do trato GI de um indivíduo com uma abundância relativa elevada de espécies bacterianas, tais como espécies do filo Firmicutes. Em certas modalidades, a forma de dosagem da invenção é usada para romper um biofilme disposto dentro do trato GI de um indivíduo com uma abundância relativa elevada de espécies de fungos, tais como espécies do filo Ascomycota e espécies do filo Zygomycota e espécies do filo Basidiomycota.
[0062] As bactérias dentro do biofilme existem em contato íntimo com o fungo, mas podem diferir em suas interações específicas com o fungo. Em certas modalidades, as bactérias patogênicas (por exemplo, E. coli) podem ser fundidas às células fúngicas dentro do biofilme. Alternativamente ou além disso, as bactérias patogênicas e fungos patogênicos dispostos dentro do biofilme podem formar uma “placa digestiva”, onde as bactérias e os fungos são protegidos de fármacos antimicrobianas e do sistema imunológico do hospedeiro. Entende-se que a placa digestiva pode romper o microbioma normal ou saudável do trato GI e causar ou de outra forma estar associada a um(a) doença ou distúrbio GI (por exemplo, hiperamonemia, colite por Clostridium difficile, encefalopatia hepática associada a cirrose, doença inflamatória intestinal, doença de Crohn, colite ulcerativa e/ou doença do intestino irritável).
[0063] Em certas modalidades, os biofilmes são formados por pelo menos duas ou três cepas diferentes de organismos, incluindo, sem limitação, C. tropicalis, E. coli, e S. marcescens. Por exemplo, o biofilme do trato GI pode compreender: (i) Candida tropicalis e Escherichia coli, (ii) Candida tropicalis e Serratia marcescens, ou (iii) Candida tropicalis, Escherichia coli e Serratia marcescens. Em certas modalidades, as células de S. marcescens podem produzir fímbrias de diâmetro de cerca de 3 nm a cerca de 18 nm e comprimento ou de cerca de 34 nm a cerca de 480 nm de comprimento, o que pode mediar a fixação com C. tropicalis. Sob certas modalidades, cepas de S. marcescens interagem com C. tropicalis e E. coli por meio dessas fímbrias.
[0064] Em certas modalidades, o biofilme no trato GI compreende C. tropicalis ou C. albicans que interage com uma série de especificações diferentes, incluindo 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou mais espécies de bactérias, incluindo E. coli e/ou S. marcescens, Alkalimonas amylolytica, Aquamonas haywardensis, Enterobacter hormaechei, Enterobacter ludwigii, Enterobacter pyrinus, Erwinia chrysanthemi, Erwinia dispersa, Erwinia soli, Erwinia toletana, Escherichia coli, Pantoea agglomerans, Profftia tarda, e Serratia marcescens.
[0065] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem descrita nesse documento pode ser usada para romper um biofilme no qual a abundância de uma espécie de fungo, por exemplo, C. tropicalis ou C. albicans, é aumentada significativamente, por exemplo, em biofilmes dispostos dentro do trato GI de indivíduos com doença de Crohn (CD) quando comparados a indivíduos sem CD. Em certas modalidades, o aumento na abundância de C. tropicalis ou C. albicans pode ser associado positivamente com ASCA (direcionado contra resíduos de α-1,3-manosídeo terminais), um biomarcador conhecido de CD. ASCA são anticorpos direcionados contra um di- ou tri--1-2 manosídeos ligados com uma α-1,3 manose na extremidade não redutora. Em certas modalidades, o aumento na abundância de C. tropicalis ou C. albicans no trato GI de um indivíduo pode ser determinado medindo a detecção aumentada de ASCA em uma amostra biológica obtida do indivíduo. Como resultado, um indivíduo de teste adequado para tratamento com uma forma de dosagem da invenção é identificado pela detecção de ASCA, além de pontuar a Pontuação de Equilíbrio de Biohm do indivíduo.
[0066] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem descrita nesse documento pode ser usada para romper um biofilme em que os níveis de E. coli, S. marcescens, Cronobacter sakazakii e Ruminococcus gnavus são significativamente aumentados no trato GI do indivíduo, por exemplo, de um indivíduo que sofre ou foi diagnosticado com sintomas de CD. Biofilme do trato urinário
[0067] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem descrita nessa invenção pode ser usada para romper um biofilme compreendendo, por exemplo, bactérias patogênicas e fungos patogênicos dispostos dentro do trato urinário de um indivíduo. O biofilme pode compreender bactérias e fungos patogênicos. Patógenos bacterianos de exemplo incluem, sem limitação, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter sp., Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, etc.) e enterococci (especialmente Enterococcus faecalis), Staphylococcus epidermidis, e
Streptococcus agalactiae. Os patógenos fúngicos incluem, sem limitação, C. tropicalis, C. glabrata, C. albicans, C. parapsilosis, C. krusei, Candida kefyr, Candida fabianii, Candida lusitaniae, Candida dubliniensis, Candida auris, e Aspergillus. Biofilme do Trato Reprodutivo
[0068] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem descrita nessa invenção pode ser usada para romper um biofilme compreendendo, por exemplo, bactérias patogênicas e fungos patogênicos dispostos dentro do trato reprodutivo de um indivíduo. O biofilme pode compreender bactérias patogênicas e fungos selecionados de um ou mais de Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Escherichia coli, Actinomyces israelii, N. Gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, T. pallidum, T. vaginalis, Candida albicans, Candida glabrata, e C. tropicalis. Biofilmes orais
[0069] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem descrita nessa invenção pode ser usada para romper um biofilme compreendendo, por exemplo, uma bactéria patogênica e um fungo patogênico dispostos dentro da cavidade oral. Em certas modalidades, a região pré-selecionada pode ser a boca. Bactérias patogênicas podem incluir, por exemplo, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus mutans, Porphyromonas spp., Campylobacter spp., T. forsythia, Treponema denticola, e A. actinomycetemcomitans, Streptococcus oralis, Streptococcus mitis, Streptococcus anginosu, Rothia, Actinomyces, Lactobacilli spp., Bifidobacterium spp., e Fusobacterium spp. Os fungos patogênicos podem incluir, por exemplo, Candida albicans, Candida glabrata e Candida dubliniensis.
[0070] Os biofilmes podem estar presentes em diferentes localizações da cavidade oral, onde diferentes condições ambientais contribuem para que diferentes bactérias e fungos patogênicos estejam presentes em biofilmes dispostos em diferentes localizações. Por exemplo, a placa supragengival (placa dentária) pode compreender vários tipos de biofilmes, incluindo biofilmes formados na superfície dos dentes acima da fenda gengival (o local mais alto onde a gengiva encontra o dente). Outros locais para microbiotas orais variadas incluem o sulco subgengival (placa subgengival), a língua, as superfícies mucosas (células bucais e o assoalho da boca) e próteses e obturações dentárias.
[0071] Alguns estímulos ambientais ou temporais podem afetar negativamente a composição da microbiota de um indivíduo, estimulando o crescimento excessivo de microrganismos patogênicos, resultando na infecção e na doença. As doenças periodontais, tais como gengivite crônica e periodontite, resultam do aumento da complexidade e do volume dos biofilmes localizados na fenda gengival. Esses biofilmes geralmente compreendem anaeróbios facultativos Gram-positivos, por exemplo; Streptococcus anginosus e A. naeslundii, mas na ausência de higiene adequada, a porcentagem de espécies Gram-negativas, por exemplo, Porphyromonas spp., Campylobacter spp., T. forsythia, Treponema denticola, e A. actinomycetemcomitans, nos biofilmes aumenta, contribuindo para a inflamação periodontal.
[0072] Outro exemplo do papel dos biofilmes patogênicos nas doenças orais inclui a cárie dentária, que envolve a placa cariogênica (um tipo de biofilme), e muitas vezes resulta na desmineralização do tecido duro do dente. As placas cariogênicas compreendem várias espécies microbianas diferentes, incluindo S. mutans e outros estreptococos de baixo pH, tais como, Streptococcus oralis, Streptococcus mitis, e, Streptococcus anginosu, Rothia, Actinomyces, Lactobacilli spp., Bifidobacterium spp., Candida albicans, e C. glabrata. As placas cariogênicas ocorrem quando as populações normalmente baixas de espécies bacterianas acidogênicas e acidúricas, anteriormente em equilíbrio com o ambiente oral e outras espécies de placas, aumentam após a exposição a carboidratos de alta frequência. O metabolismo dos carboidratos por essa microbiota resulta na acidificação da placa (pH <5), desmineralização do esmalte e da dentina induzida por ácido e eventual cavitação. Biofilme de olho
[0073] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem descrita nessa invenção podem ser usadas para romper um biofilme compreendendo, por exemplo, bactérias patogênicas e fungos patogênicos dispostos dentro do olho de um indivíduo. O biofilme pode compreender bactérias patogênicas selecionadas de Pseudomonas aeruginosa, S. marcescens e Staphylococcus aureus. O biofilme pode compreender fungos patogênicos selecionados de Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Asperigullus, e Candida albicans (ver Szczotka-Flynn, L.B. et al. (2009) CORNEA 28:918–926). Biofilme na pele
[0074] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem descrita nessa invenção pode ser usada para romper um biofilme compreendendo, por exemplo, bactérias patogênicas e fungos patogênicos associados à pele de um indivíduo. O biofilme pode compreender bactérias patogênicas selecionadas a partir de Citrobacter freundii Staphylococcus simulans, Staphylococcus, Enterococcus, Serratia, Pseudomonas, Finegoldia, Corynebacterium, Anaerococcus, Bacteroides, Serratia, Staphylococcus aureus, Finegoldia magna, Corynebacterium striatum, Anaerococcus vaginalis, Bacteroides vulgatus, Serratia marcescens, Prevotella sp., Peptoniphilus harei, Peptoniphilus ivorii, Pseudomonas sp., Pseudomonas sp., Anaerococcus sp., Streptococcus agalactiae, Klebsiella sp., Prevotella sp., Enterococcus sp., Peptoniphilus sp., Corynebacterium tuberculostearicum, Peptostreptococcus sp., Corynebacterium tuberculostearicum, Peptostreptococcus sp., Clostridium cellobioparum, e Staphylococcus capitis. O biofilme pode compreender fungos patogênicos selecionados de Candida albicans, Candida glabrata, C. tropicalis, Candida dubliniensis, Candida orthopsilosis, Candida boleticola, Candida smithsonii, Candida xylopsoci, Trichosporon ovoides, Rhodosporidium diobovatum, Rhodosporidium kratochvilovae, Trichosporon spp., Wallemia spp., Rodotorula spp., Rodotorula vanillica, Rodotorula nothofagi, e Schizophyllum commune. Biofilme no nariz/Trato Respiratório
[0075] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem descrita nessa invenção pode ser usada para romper um biofilme compreendendo, por exemplo, bactérias patogênicas e fungos patogênicos dispostos dentro do nariz/trato respiratório de um indivíduo. O biofilme pode compreender bactérias patogênicas selecionadas de Streptococcus pneumonia, Haemophilus influenza, Moraxella catarrhalis, P. aeruginosa, S. aureus, Escherichia coli, e Klebsiella spp. O biofilme pode compreender fungos patogênicos selecionados de Candida spp., Aspergillus, Cryptococcus, e Pneumocystis spp. Biofilme no ouvido
[0076] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem descrita nessa invenção pode ser usada para romper um biofilme compreendendo, por exemplo, bactérias patogênicas e fungos patogênicos dispostos dentro do ouvido de um indivíduo. O biofilme pode compreender bactérias patogênicas selecionadas de Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Haemophilus influenza, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus resistente a meticilina, Fusobacterium necrophorum, Moraxella catarrhalis, e Kerstersia gyiorum. O biofilme pode compreender fungos patogênicos selecionados de Aspergillus flavus, A. fumigatus, A. nidulans, A. niger, C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, e C. parapsilosis. II. FORMA DE DOSAGEM E COMPOSIÇÃO
[0077] A invenção fornece composições ou formas de dosagem que podem prevenir e/ou romper o biofilme em regiões pré-selecionadas de indivíduos, por exemplo, degradando a matriz de EPS e permitindo que organismos não patogênicos (por exemplo, bactérias e fungos não patogênicos) substituir organismos patogênicos presentes naquela região.
[0078] Em certas modalidades, a composição é formulada como uma combinação em pó de uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas isoladas e viáveis e uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicas isoladas e viáveis que são capazes de romper um biofilme ou prevenir a formação de biofilme compreendendo bactérias e/ou fungos patogênica(o)s que, opcionalmente, é revestida com um revestimento funcional (por exemplo, revestimento de liberação controlada) ou um revestimento não funcional (por exemplo, revestimento estético). Em certas modalidades, a combinação em pó de uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas isoladas e viáveis e uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicas isoladas e viáveis é liofilizada ou seca por pulverização. Em certas modalidades, a mistura liofilizada ou seca por pulverização de uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas isoladas e viáveis e uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicas isoladas e viáveis é adicionalmente combinada com uma enzima (por exemplo, amilase).
[0079] Em certas modalidades, a composição da presente invenção compreende (i) uma ou mais de enzimas capazes de romper um biofilme em uma região pré-selecionada do indivíduo, (ii) uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicos que são viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo, e (iii) uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas que são viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo. Em certas modalidades, a composição compreende (i) uma ou mais de enzimas capazes de romper o biofilme na região alvo (por exemplo, trato gastrointestinal, trato urinário, trato reprodutivo, trato respiratório superior, trato respiratório inferior, trato biliar, boca, olhos, nariz, orelha ou pele) de um indivíduo, (ii) uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicas que são viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo, e (iii) uma ou mais de cepas não patogênicas cepas bacterianas que são viáveis sendo viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo. O indivíduo pode ser um mamífero (por exemplo, humano, um animal de companhia (por exemplo, cão, gato ou coelho) ou animal de pecuária (por exemplo, vaca, ovelha, porco, cabra, cavalo, burro e mula, búfalo, boi ou camelo)).
[0080] Em certas modalidades, a forma de dosagem da presente invenção compreende uma composição que compreende (i) uma ou mais de enzimas capazes de romper um biofilme em uma região pré-selecionada do indivíduo, (ii) uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicas que são viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo, e (iii) uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas que são viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo. Em certas modalidades, a forma de dosagem compreende uma composição que compreende (i) uma ou mais de enzimas capazes de romper o biofilme na região alvo (por exemplo, trato gastrointestinal, trato urinário, trato reprodutivo, trato respiratório superior, trato respiratório inferior, trato biliar, boca, olho, nariz, ouvido ou pele) de um indivíduo, (ii) uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicas que são viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo, e (iii) uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas que são viáveis sendo viáveis (por exemplo, com ou sem replicação) na região do indivíduo. O indivíduo pode ser um mamífero (por exemplo, humano, um animal de companhia (por exemplo, cão, gato ou coelho) ou animal de pecuária (por exemplo, vaca, ovelha, porco, cabra, cavalo, burro e mula, búfalo, boi ou camelo)). (i) Bactérias não patogênicas
[0081] A composição ou forma de dosagem compreende uma ou mais (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais) de diferentes cepas bacterianas não patogênicas capazes de serem viáveis ou replicarem em um região pré-selecionada (por exemplo, trato gastrointestinal, trato urinário, trato reprodutivo, trato respiratório superior, trato respiratório inferior, trato biliar, boca, olho, ouvido ou pele) de um indivíduo.
[0082] Em certas modalidades, cepas bacterianas de exemplo a serem incluídas na composição ou na forma de dosagem da presente invenção podem compreender cepas bacterianas de qualquer uma ou mais das seguintes espécies bacterianas: Agrococcus jenensis, Alistipes indistinctus, Alistipes massiliensis, Alkalibacterium iburiense, Anoxybacillus kestanbolensis, Bacillus cereus, Bacillus clausii, Bacillus Coagulans, Bacteroides coprophilus, Bacteroides eggerthii, Bacteroides ovatus, Bacteroides fragilis, Bacteroides plebeius, Bacteroides uniformis, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium pseudolongum, Blautia obeum, Blautia producta, Candidatus azobacteroides, Candidatus portiere, Candidatus Portiera, Clostridium celatum, Clostridium hiranonis, Clostridium neonatale, Clostridium perfringens, Clostridium tyrobutyricum, Collinsella aerofaciens, Collinsella stercoris, Coprococcus eutactus, Corynebacterium stationis, Desulfosporosinus meridiei, Desulfovibrio D168, Dorea formicigenerans, Eggerthella lenta, Erwinia oleae, Faecalibacterium prausnitzii, Lactobacillus agilis, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus ruminis, Lactobacillus salivarius,
Lactobacillus zeae, Listeria weihenstephanensis, Paenibacillus mucilaginosus, Parabacteroides distasonis, Pediococcus acidilactici, Peptostreptococcus anaerobius, Prevotella copri, Prevotella melaninogenica, Prevotella stercorea, Propionibacterium acnes, Pseudoramibacter eubacterium, Roseburia faecis, Rothia dentocariosa, Rothia mucilaginosa, Ruminococcus bromii, Ruminococcus callidus, Ruminococcus flavefaciens, Ruminococcus lavefaciens, Ruminococcus gnavus, Ruminococcus torques, Salinibacillus aidingensis, Staphylococcus sciuri, Streptococcus anginosus, Streptococcus sobrinus, Tissierella soehngenia, Veillonella dispar, e Veillonella parvula.
[0083] Em certas modalidades, uma ou mais das cepas bacterianas listadas na TABELA 1 abaixo estão incluídas na composição ou forma de dosagem da presente invenção. TABELA 1 Bifidobacterium adolescentis Bacillus clausii Bifidobacterium animalis Agrococcus jenensis Bifidobacterium pseudolongum Propionibacterium acnes Pseudoramibacter eubacterium Bacteroides uniformis Faecalibacterium prausnitzii Bacteroides eggerthii Dorea formicigenerans Alistipes massiliensis Blautia producta Collinsella aerofaciens Bacillus cereus Candidatus Portiera Eggerthella lenta Coprococcus eutactus Ruminococcus bromii Collinsellas tercoris Bifidobacterium longum Prevotella melaninogenica Veillonella dispar Clostridium tyrobutyricum Parabacteroides distasonis Ruminococcus gnavus Ruminococcus callidus Anoxybacillus kestanbolensis Salinibacillus aidingensis Ruminococcus flavefaciens Staphylococcus sciuri Lactobacillus rhamnosus Desulfosporosinus meridiei Bifidobacterium breve Lactobacillus zeae Lactobacillus acidophilus Roseburia faecis Bifidobacterium bifidum Clostridium perfringens Lactobacillus reuteri
Veillonella parvula
[0084] Em certas modalidades, uma ou mais das cepas bacterianas listadas na TABELA 2 abaixo estão incluídas na composição ou forma de dosagem da presente invenção. TABELA 2 Bifidobacterium adolescentis Eggerthella lenta Bifidobacterium animalis Veillonella dispar Bifidobacterium pseudolongum Lactobacillus zeae Pseudoramibacter eubacterium Lactobacillus rhamnosus Faecalibacterium prausnitzii Bifidobacterium breve Dorea formicigenerans Lactobacillus acidophilus Blautia producta Bifidobacterium bifidum Bacillus cereus Lactobacillus reuteri
[0085] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma, duas ou três das cepas bacterianas diferentes (por exemplo, cepas listadas na TABELA 1 ou 2) ou uma, duas ou três de Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus reuteri, e Lactobacillus acidophilus) capaz de se replicar na região do mamífero.
[0086] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende cepas bacterianas não patogênicas para romper um biofilme contendo um ou mais de C. tropicalis, E. coli e/ou S. marcescens no trato GI. Por exemplo, o biofilme do trato GI pode compreender: (i) Candida tropicalis e Escherichia coli, (ii) Candida tropicalis e Serratia marcescens, ou (iii) Candida tropicalis, Escherichia coli, e Serratia marcescens. Em certas modalidades, o biofilme, além ou alternativamente a Candida tropicalis, pode compreender: (i) Candida albicans e Escherichia coli, (ii) Candida albicans e Serratia marcescens, ou (iii) Candida albicans, Escherichia coli, e Serratia marcescens.
[0087] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende cepas bacterianas não patogênicas para romper ou substituir um biofilme contendo duas espécies bacterianas. Por exemplo, o biofilme pode conter E. coli e um Bacteroides spp. (por exemplo, Bacteroides coprophilus, Bacteroides eggerthii, Bacteroides ovatus, Bacteroides fragilis, Bacteroides plebeius, ou Bacteroides uniformis).
[0088] Em certas modalidades, as cepas bacterianas não patogênicas incluídas na composição ou as formas de dosagem da presente invenção podem compreender uma combinação de quaisquer dois de Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, e Lactobacillus acidophilus RP
32. Em certas modalidades, as cepas bacterianas não patogênicas incluídas na composição ou forma de dosagem podem compreender uma combinação de Lactobacillus rhamnosus LB 20 e Bifidobacterium breve S 46. Em certas modalidades, as cepas bacterianas não patogênicas incluídas na composição ou forma de dosagem podem compreender uma combinação de Lactobacillus rhamnosus LB 20 e Lactobacillus acidophilus RP 32. Em certas modalidades, as cepas bacterianas não patogênicas incluídas na composição ou forma de dosagem podem compreender uma combinação de Bifidobacterium breve S 46 e Lactobacillus acidophilus RP 32. Em certas modalidades, as cepas bacterianas patogênicas incluídas na composição ou forma de dosagem da presente invenção pode compreender uma combinação de Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46 e Lactobacillus acidophilus RP 32.
[0089] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da invenção compreende de cerca de 10 bilhões a cerca de 40 bilhões, por exemplo, de cerca de 15 bilhões a cerca de 40 bilhões, de cerca de 20 bilhões a cerca de 40 bilhões, de cerca de 10 bilhões a cerca de 30 bilhões, de cerca de 15 bilhões a cerca de 30 bilhões, de cerca de 20 bilhões a cerca de 30 bilhões de unidades formadoras de colônias da(s) cepa(s) bacteriana(s) não patogênica(s). (ii) Fungos Não Patogênicos
[0090] A composição ou forma de dosagem também compreende uma ou mais (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais) de diferentes cepas fúngicas não patogênicas capazes de se replicar em uma região pré-selecionada (por exemplo, trato gastrointestinal, trato urinário, trato reprodutivo, trato respiratório superior, trato respiratório inferior, trato biliar, boca, olho, ouvido ou pele) de um indivíduo.
[0091] Em certas modalidades, cepas fúngicas exemplares a serem incluídas na composição ou forma de dosagem da presente invenção podem compreender qualquer uma ou mais das seguintes espécies de fungos: Albatrellus syringae, Alternaria alli, Alternaria daturicola, Ambispora granatensis, Amyloathelia crassiuscula, Amylomyces rouxii, espécies de Ascomycota, Ascosphaera apis, Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus oryzae, Aspergillus sp, Aspergillus terreus, Aspergillus versicolor, Bettsia alvei, Botryosphaeria mamane, Botryotinia fuckeliana, Candida arabinofermentans, Candida ernobii, Candida ethanolica, Candida glabrata, Candida humilis, Candida intermedia, Candida parapsilosis, Candida piceae, Candida quercitrusa, Candida tartarivorans, Candida temnochilae, Candida zemplinina, Candida zeylanoides, Chamonixia caespitosa, Cladonia polystomata, Cladosporium cladosporioides, Cladosporium halotolerans, Cladosporium sp
JP67, Cladosporium sphaerospermum, Clavicorona taxophila, Clavispora lusitaniae, Craterellus sp, Dactylellina phymatopaga, Debaryomyces hansenii, Debaryomyces marasmus, Debaryomyces sp, Debaryomyces subglobosus, Dipodascus australiensis, Ectomycorrhizal, Emericella nidulans, Epulorhiza sp, Eremascus fertilis, Eremothecium gossypii, Eupenicillium cinnamopurpureum, Eurotium amstelodami, Eurotium cristatum, Exophiala dermatitidis, Filobasidiella neoformans, Fonsecaea monophora, Fusarium solani, Fusarium dimerum, Fusarium oxysporum, Fusarium sp, Galactomyces geotrichum, Galactomyces sp, Geomyces sp, Geotrichum cucujoidarum, Geotrichum sp, Glomus mosseae, Hanseniaspora sp, Helicobasidium longisporum, Helicostylum pulchrum, Hyphodontia flavipora, Hypochnicium cystidiatum, Inocybe sp, Kazachstania africana, Kazachstania unispora, Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces yarrowii, Kodamaea ohmeri, Leptosphaeria biglobosa, Leptosphaerulina chartarum, Leucoagaricus sp, Lewia infectoria, Lichtheimia ramose, Macrophomina phaseolina, Monacrosporium coelobrochum, Mucor circinelloides, Mucor flavus, Mucor fuscus, Mucor sp, Myrothecium sp, Myxozyma melibiosi, Neocallimastix frontalis, Neocallimastix sp, Omphalotus nidiformis, Ophiocordyceps filiformis, Ophiocordyceps sinensis, Penicillium carneum, Penicillium chrysogenum, Penicillium concentricum, Penicillium crustosum, Penicillium digitatum, Penicillium granulatum, Penicillium griseofulvum, Penicillium griseoroseum, Penicillium polonicum, Penicillium psychrosexualis, Penicillium pulvillorum, Penicillium roqueforti, Penicillium sclerotigenum, Penicillium sp, Penicillium spinulosum, Penicillium verrucosum,
Pezizomycetes sp genotipo 323, Phaeophyscia exornatula, Phialocephala lagerbergii, Phlebia radiata, Phlebia sp, Phomopsis sp, Physcia stellaris, Physoderma maydis, Pichia burtonii, Pichia jadinii, Pichia kudriavzevii, Pichia onychis, Pichia sp, Picoa juniperi, Pilaira cesatii, Pilaira sp, Pirella circinans, Preussia sp, Reddellomyces donkii, Rhizomucor pusillus, Rhizopus oryzae, Rhodosporidium kratochvilovae, Rhodosporidium sp, Rhodotorula sp, Rinodina milvina, Saccharomyces bayanus, Saccharomyces bulderi, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces mikatae, Saccharomyces sp, Saccharomycetes sp, Scleroderma sp, Sclerotinia sp, Scutellospora nodose, Sebacinales sp, Sporopachydermia sp, Stenocarpella maydis, Thamnidium elegans, Torulaspora delbrueckii, Trichosporon chiarellii, Tuber oligospermum, Umbelopsis isabellina, Wallemia sebi, Wallemia sp, e Zygoascus meyerae.
[0092] Em certas modalidades, uma ou mais das cepas fúngicas listadas na TABELA 3 abaixo podem ser incluídas na composição ou forma de dosagem da presente invenção. TABELA 3 Saccharomycetes sp HZ178 Pilaira sp Pi 3 Mucor fuscus Fungal endophyte sp M24 3281 Saccharomyces bayanus Candida temnochilae Glomus mosseae Cladosporium cladosporioides Myxozyma cf melibiosi UWO Galactomyces sp 3S 28C Phaeophyscia exornatula Exophiala dermatitidis Sporopachydermia sp 91 1101 Rhizomucor pusillus Pichia kudriavzevii Fungal sp K4 Saccharomyces sp AS 23317 Rhizopus oryzae Galactomyces sp SCDF17 Aspergillus fumigatus Debaryomyces hansenii var Saccharomyces cerevisiae hansenii Aspergillus oryzae Dipodascus australiensis
Candida arabinofermentans Saccharomyces mikatae
[0093] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem pode compreender uma cepa fúngica não patogênica selecionada de Saccharomyces boulardii, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomycetes sp HZ178, Saccharomyces bayanus, cepas pertencentes ao gênero Pichia (por exemplo, incluindo, mas limitado a, Pichia burtonii, Pichia jadinii, Pichia kudriavzevii, Pichia onychis, e Pichia juniper).
[0094] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma composição que compreende uma cepa fúngica não patogênica para romper um biofilme contendo C. tropicalis. Por exemplo, o biofilme do trato GI pode compreender: (i) Candida tropicalis e Escherichia coli, (ii) Candida tropicalis e Serratia marcescens, ou (iii) Candida tropicalis, Escherichia coli e Serratia marcescens. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma composição que compreende uma cepa fúngica não patogênica para romper um biofilme contendo C. albicans. Em certas modalidades, o biofilme pode compreender: (i) Candida albicans e Escherichia coli, (ii) Candida albicans e Serratia marcescens, ou (iii) Candida albicans, Escherichia coli e Serratia marcescens.
[0095] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da invenção compreende uma ou mais de cepas fúngicas listadas na TABELA 3. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da invenção compreende uma ou mais de cepas fúngicas listadas na TABELA 3 e uma ou mais das cepas bacterianas listadas na TABELA 1 ou TABELA 2.
[0096] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma composição que compreende uma cepa fúngica não patogênica Saccharomyces boulardii SB 48. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da invenção compreende uma cepa fúngica não patogênica Saccharomyces boulardii SB 48 e uma ou mais das cepas bacterianas listadas na TABELA 1 ou TABELA 2.
[0097] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da invenção compreende de cerca de 1 bilhão a cerca de 10 bilhões, por exemplo, de cerca de 2 bilhões a cerca de 8 bilhões, de cerca de 3 bilhões a cerca de 6 milhões de unidades formadoras de colônias das cepas fúngicas patogênicas.
[0098] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da invenção compreende uma espécie fúngica não patogênica Saccharomyces boulardii e espécies bacterianas não patogênicas de um ou mais de Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium breve, e Lactobacillus acidophilus. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma espécie fúngica não patogênica Saccharomyces boulardii e espécies bacterianas não patogênicas Lactobacillus rhamnosus e Bifidobacterium breve. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma espécie fúngica não patogênica Saccharomyces boulardii e espécies bacterianas não patogênicas Lactobacillus rhamnosus e Lactobacillus acidophilus. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma espécie fúngica não patogênica Saccharomyces boulardii e espécies bacterianas não patogênicas Bifidobacterium breve e Lactobacillus acidophilus. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma espécie fúngica não patogênica Saccharomyces boulardii e as espécies bacterianas não patogênicas Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium breve, e Lactobacillus acidophilus.
[0099] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da invenção compreende uma cepa fúngica não patogênica Saccharomyces boulardii SB 48 e cepas bacterianas não patogênicas de um ou mais de Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46 e Lactobacillus acidophilus RP 32. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma cepa fúngica não patogênica Saccharomyces boulardii SB 48 e cepas bacterianas não patogênicas Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma cepa fúngica não patogênica Saccharomyces boulardii SB 48 e cepas bacterianas não patogênicas Lactobacillus rhamnosus LB 20 e Lactobacillus acidophilus RP 32. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma cepa fúngica não patogênica Saccharomyces boulardii SB 48 e cepas bacterianas não patogênicas Bifidobacterium breve S 46 e Lactobacillus acidophilus RP 32. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma cepa fúngica não patogênica Saccharomyces boulardii SB 48 e as cepas bacterianas não patogênicas Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46 e Lactobacillus acidophilus RP 32.
[00100] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da invenção compreende cerca de 15 bilhões de unidades formadoras de colônia de Bifidobacterium breve, cerca de 10 bilhões de unidades formadoras de colônia de Lactobacillus rhamnosus, cerca de 3,5 bilhões de unidades formadoras de colônia de Saccharomyces boulardii e cerca de
1,5 bilhões de unidades formadoras de colônias de Lactobacillus acidophilus. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem, uma vez administrada a um indivíduo, libera cerca de 30 bilhões de culturas vivas de bactérias não patogênicas e fungos não patogênicos dentro de uma região pré-selecionada (por exemplo, o trato GI) do indivíduo. (iii) Enzimas
[00101] Além de bactérias e fungos não patogênicos, a composição ou forma de dosagem compreende adicionalmente uma enzima capaz de romper o biofilme. Por exemplo, a enzima, de preferência, digere ou de outra forma rompe/decompõe a matriz de EPS do biofilme.
[00102] A enzima pode ser selecionada de amilase, celulase, hemicelulase, lisozima, pectinase, DNase I, Serratia peptidase, Serratiopeptidase, complexo de hemicelulase/pectinase, -1,3-glucanase, protease ácida, protease alcalina, glucoamilase, endoglucanase, xilanase, lipase, lisozima, complexo de protease/peptidase, dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), quitosanase, bromelaína, papaína, kiWi protease actinidi, uma protease derivada de planta, fitase, zimolase e nuclease. A enzima pode ser escolhida dependendo do tipo de biofilme e dos microrganismos dispostos no mesmo. Por exemplo, uma enzima amilase pode ser usada para degradar ou de outra forma romper os componentes de carboidratos do biofilme, e uma nucleasse, tal como a DNase I, pode ser usada para digerir ou de outra forma romper o DNA no biofilme.
[00103] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende duas ou mais (por exemplo, 2, 3, 4, 5 ou mais) de diferentes enzimas selecionadas de amilase, celulase, hemicelulase, lisozima, pectinase, DNase I, Serratia peptidase, Serratiopeptidase, complexo de hemicelulase/pectinase, -1,3-glucanase, protease ácida, protease alcalina, glucoamilase, endoglucanase, xilanase, lipase, lisozima, complexo de protease/peptidase, dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), quitosanase, bromelaína, papaína , kiWi protease actinidi, uma protease derivada de planta, fitase, zimolase e nuclease.
[00104] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem descrita acima compreende uma amilase selecionada de amilase de Bacillus stearothermophilus, amilase de Bacillus amyloliquefaciens, amilase de Bacillus subtilis, amilase de Bacillus licheniformi, amilase de Aspergillus niger, e amilase de Aspergillus oryzae.
[00105] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma amilase, por exemplo, de cerca de 100 a cerca de 5.000 unidades SKB de amilase, de cerca de 200 a cerca de 4.000 unidades SKB de amilase, de cerca de 300 a cerca de 2.000 unidades SKB de amilase ou de cerca de 400 a cerca de 1.000 unidades SKB de amilase. Uma unidade SKB ou Sandstedt, Kneen e Blish refere-se à quantidade de amilase para catalisar 1 µmol de substrato por minuto. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma celulose, por exemplo, e compreende de cerca de 100 a cerca de 300 unidades CU (unidade de celulase) por unidade de composição ou forma de dosagem, por exemplo, cerca de 200 CU. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende um complexo de hemicelulose/pectinase e compreende de cerca de 60 a cerca de 100 unidades HSU
(Unidades Específicas de Hemicelulose) por unidade de composição ou forma de dosagem, por exemplo, cerca de 80 HSU. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma -gluconase e compreende de cerca de 6 a cerca de 10 BGU (Unidade de Beta Glucanase), unidades por unidade de composição ou forma de dosagem, por exemplo, cerca de 8 BGU. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende uma protease ácida, e compreende de cerca de 15 a cerca de 25 unidades de SAP (Fosfatase Alcalina de Camarão) por unidade de composição ou forma de dosagem, por exemplo, cerca de 20 unidades de SAP. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende protease alcalina, e compreende de cerca de 15 a cerca de 25 unidades HUT (unidade de Hemoglobina na Base da Tirosina) por unidade de composição ou forma de dosagem, por exemplo, cerca de 20 unidades HUT.
[00106] Em certas modalidades, a quantidade total de celulase administrada, por exemplo, pela administração de uma ou mais de unidades da composição ou forma de dosagem, pode(m) variar de cerca de 1 a cerca de 10.000 CU, a quantidade total de complexo de hemicelulase/pectinase administrado, por exemplo, pela administração de uma ou mais de unidades da composição ou forma de dosagem, pode(m) variar de cerca de 1 a cerca de 8.000 HSU, a quantidade total de - gluconase, por exemplo, pela administração de uma ou mais de unidades de dosagem, pode(m) variar de cerca de 1 a cerca de
1.000 BGU, a quantidade total de protease ácida, por exemplo, pela administração de uma ou mais de unidades de dosagem, pode(m) variar de cerca de 1 a cerca de 10.000 SAP, e a quantidade total de protease alcalina, por exemplo, pela administração de uma ou mais de unidades de dosagem, pode(m) variar de cerca de 1 a cerca de 40.000 HUT.
[00107] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende cerca de 500 unidades SKB de amilase, selecionada de α-Amilase, uma endo-hidrolase que catalisa a hidrólise de ligações α-1,4-glicosídicas internas no amido para produzir produtos como glicose e maltose, -Amilase, uma enzima exo-hidrolase que hidrolisa as ligações α-1,4- glucano para produzir unidades sucessivas de maltose, e - Amilase, que cliva as ligações α-1,6-glicosídicas, além de clivar o últimas ligações α-1,4-glicosídicas para produzir glicose, ou uma combinação das mesmas. (iv) Composições de Exemplo
[00108] Composições de exemplo ou formas de dosagem da presente invenção são descritas na Tabela 4. A composição da presente invenção pode incluir bactérias (B. breve, L. acidophilus, L. rhamnosus), fungos (S. boulardii) e uma enzima (por exemplo, amilase), e pode ser usada como um probiótico que quebra a placa digestiva e atinge o equilíbrio intestinal total. A composição probiótica pode ser distribuída na forma de pó compreendendo uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas isoladas e viáveis e uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicas isoladas e viáveis que são opcionalmente revestidas com um revestimento funcional, que é opcionalmente adicionalmente combinado com uma enzima, e contido em uma cápsula. Em certas modalidades, 30-50 de tais cápsulas (por exemplo, 42 cápsulas) podem ser consumidas ao longo de um período de 2-8 semanas (por exemplo, 6 semanas). Por exemplo, uma cápsula pode ser consumida por dia, com ou sem o consumo simultâneo de alimentos. A composição probiótica, de preferência, não contém um alérgeno, ingrediente artificial ou adoçante e/ou pode ser armazenada em temperatura ambiente, sem refrigeração.
[00109] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem da presente invenção compreende bactérias não patogênicas (B. breve, L. acidophilus, L. rhamnosus), fungos não patogênicos (S. boulardii) e uma enzima (por exemplo, amilase) e pode ser usada como um probiótico pediátrico/infantil para quebrar a placa digestiva e atingir o equilíbrio intestinal total. O probiótico pediátrico opcionalmente pode compreender adicionalmente carbonato de cálcio, um álcool de açúcar (por exemplo, xilitol), um álcool graxo (por exemplo, álcool cetílico), um ácido orgânico fraco (por exemplo, ácido cítrico), aroma natural, um adoçante (por exemplo, fruta dos monges). A composição probiótica pediátrica pode ser fornecida na forma em pó contida em um comprimido mastigável. Em certas modalidades, 30-50 de tais comprimidos (por exemplo, 42 comprimidos) podem ser consumidos ao longo de um período de 2-8 semanas (por exemplo, 6 semanas). Por exemplo, um comprimido pode ser consumido por dia, com ou sem o consumo simultâneo de alimentos. A composição probiótica pediátrica pode ser adoçada naturalmente, por exemplo, com fruta dos monges e, de preferência, não contém um alérgeno, ingrediente artificial ou adoçante e/ou pode ser armazenada em temperatura ambiente, sem refrigeração.
[00110] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem da presente invenção compreende bactérias não patogênicas (B. breve, L. acidophilus e L. rhamnosus), fungos não patogênicos (por exemplo, S. boulardii), uma enzima (por exemplo, amilase) e vitaminas (por exemplo, vitamina C), e podem ser usados como uma formulação para imunidade especialmente projetada para suportar o desempenho imunológico ideal. A formulação para imunidade combina o poder dos probióticos com vitaminas para fornecer suporte de imunidade de dupla ação, para quebrar a placa digestiva e atingir o equilíbrio intestinal total. A formulação para imunidade pode ser administrada na forma de pó contido em uma cápsula. Em certas modalidades, 30-50 de tais cápsulas (por exemplo, 42 cápsulas) podem ser consumidas ao longo de um período de 2-8 semanas (por exemplo, 6 semanas). Por exemplo, uma cápsula pode ser consumida por dia, com ou sem ingestão alimentar simultânea. A formulação para imunidade, de preferência, não contém quaisquer ingredientes artificiais ou adoçantes, e pode ser armazenada em temperatura ambiente, sem refrigeração.
[00111] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem da presente invenção compreende bactérias não patogênicas (B. breve, L. acidophilus, L. rhamnosus), fungos não patogênicos (S. boulardii) e um ou mais digestivos enzimas (por exemplo, amilase, bromelaína, celulose, lipase, papaína) e é usado como super greens orgânicos. O super green orgânico pode ser uma formulação projetada que combina frutas, vegetais e extratos de ervas com probióticos, prebióticos e enzimas para quebrar a placa digestiva e atingir o equilíbrio intestinal total. Dependendo das circunstâncias, a composição de super green orgânica pode compreender adicionalmente extrato de planta orgânica (por exemplo, espirulina, grama de cevada, folha de alfafa, grama de trigo, chlorella, dulce, folha de espinafre, brócolis
(planta inteira), folha de salsa, folha de couve, raiz de Echinacea angustifolia, raiz de alcaçuz, semente de cardo de leite, raiz de Ginseng siberiano, raiz de beterraba, cinórrodo, açaí (fruto), folha de chá verde, folha de framboesa, mirtilo (fruto), Fruto de Goji, mirtilo (fruta), raiz de ginseng indiano, raiz de rhodiola, cogumelo reishi, raiz de maca peruana, pólen de abelha, folha de urtiga, ginko biloba (extrato de folha 4:1), geleia real (concentrado 3x), semente de uva (extrato 2:1) e fibra (por exemplo, lecitina de girassol, maçã (fruto), farelo de arroz integral, Inulina). A formulação super green orgânica pode ser administrada na forma de pó. Em certas modalidades, o produto pode ser consumido por um indivíduo por até um mês (por exemplo, 30 dias), ou ciclos repetidos de um mês. Em cada ciclo, um único tamanho de porção (por exemplo, 1 colher) pode ser consumido por dia. A formulação super green orgânica é, de preferência, adoçada naturalmente, por exemplo, com fruta dos monges, não contém um ingrediente artificial ou adoçante, é livre de alérgenos e pode ser armazenada em temperatura ambiente, sem refrigeração. Combinação de Super greens 1
[00112] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem da presente invenção (por exemplo, combinação de super greens 1) compreende bactérias não patogênicas (por exemplo, B. breve, L. acidophilus e L. rhamnosus), fungos não patogênicos (por exemplo, S. boulardii), uma ou mais de enzimas digestivas (por exemplo, amilase, lipase, bromelaína, papaína, celulase ou protease), e um ingrediente nutricional selecionado de um ou mais de: um prebiótico (por exemplo, Inulina), peptídeos de colágeno,
alcaçuz deglicirrizinado (DGL), raiz de marshmallow, vitamina A (por exemplo, forma retinila) e vitamina D3. Em certas modalidades, o ingrediente nutricional compreende Inulina, peptídeos de colágeno, DGL, raiz de marshmallow, forma retinila de vitamina A e vitamina D3.
[00113] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da presente invenção (por exemplo, combinação de super greens 1) compreende cerca de 20 a cerca de 30 bilhões (por exemplo, cerca de 20, cerca de 21, cerca de 22, cerca de 23, cerca de 24, cerca de 25, cerca de 26, cerca de 27, cerca de 28, cerca de 29 ou cerca de 30 bilhões) de CFUs de cepas bacterianas não patogênicas e fúngicas não patogênicas. Em certas modalidades, a combinação de super greens 1 compreende cerca de 25 bilhões de CFUs de cepas bacterianas e fúngicas não patogênicas.
[00114] Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg de um prebiótico (por exemplo, cerca de 100 mg, cerca de 250 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 650 mg, cerca de 700 mg, cerca de 750 mg , cerca de 800 mg, cerca de 850 mg, cerca de 900 mg, cerca de 950 mg, cerca de 1.000 mg, cerca de 1.100 mg, cerca de 1.150 mg, cerca de 1.200 mg, cerca de
1.250 mg, cerca de 1.300 mg, cerca de 1.350 mg, cerca de
1.400 mg, cerca de 1.450 mg, cerca de 1.500 mg, cerca de
1.550 mg, cerca de 1.600 mg, cerca de 1.650 mg, cerca de
1.700 mg, cerca de 1.750 mg, cerca de 1.800 mg, cerca de
1.850 mg, cerca de 1.900 mg, cerca de 1.950 mg ou cerca de
2.000 mg). Em certas modalidades, a combinação de super greens 1 compreende cerca de 1.000 mg de prebiótico (por exemplo, Inulina).
[00115] Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 1.000 mg a cerca de 20.000 mg de peptídeos de colágeno (por exemplo, cerca de 1.000 mg, cerca de 5.000 mg, cerca de 10.000 mg, cerca de 15.000 mg ou cerca de 20.000 mg). Em certas modalidades, a combinação de super greens 1 compreende cerca de 10.000 mg de peptídeos de colágeno. Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 100 mg a cerca de 1.000 mg de DGL (por exemplo, cerca de 100 mg, cerca de 250 mg, cerca de 500 mg, cerca de 750 mg ou cerca de 1.000 mg). Em certas modalidades, a combinação de super greens 1 compreende cerca de 500 mg de DGL.
[00116] Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 100 mg a cerca de 1.000 mg de raiz de marshmallow (por exemplo, cerca de 100 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg ou cerca de 1.000 mg). Em certas modalidades, a combinação de super greens 1 compreende cerca de 200 mg de raiz de marshmallow.
[00117] Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 1.000 IU a cerca de 10.000 IU de vitamina A (por exemplo, cerca de 1.000 IU, cerca de 2.000 IU, cerca de 3.000 IU, cerca de 4.000 IU, cerca de 5.000 IU, cerca de
6.000 IU, cerca de 7.000 IU, cerca de 8.000 IU, cerca de
9.000 IU ou cerca de 10.000 IU). Em certas modalidades, a combinação de super greens 1 compreende cerca de 7.000 UI de vitamina A (por exemplo, forma de retinila). Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 500 IU a cerca de 1.500 IU de vitamina D3 (por exemplo, cerca de 500 IU,
cerca de 750 IU, cerca de 1.000 IU, cerca de 1.250 IU ou cerca de 1.500 IU). Em certas modalidades, a combinação de super greens 1 compreende cerca de 1.000 IU de vitamina D3.
[00118] Em certas modalidades, a combinação de super greens 1 compreendendo um ou mais de ingredientes nutricionais selecionados de Inulina, peptídeos de colágeno, DGL, raiz de marshmallow e vitaminas pode suportar a cicatrização da mucosa no intestino e o nível de Proteobacteria saudável, que pode ajudar no intestino saúde de um indivíduo em necessidade dos mesmos. A abundância relativa de Proteobacteria em indivíduos saudáveis compreende tipicamente até cerca de 10% de todos os outros filos presentes no intestino. Em certas modalidades, a combinação de super greens 1 compreendendo peptídeos de colágeno, DGL, raiz de marshmallow e vitaminas pode suportar a cicatrização da mucosa no intestino e o nível de Proteobacteria saudável. Combinação de super greens 2
[00119] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem da presente invenção (por exemplo, combinação de super greens 2) compreende bactérias não patogênicas (por exemplo, B. breve, L. acidophilus e L. rhamnosus), fungos não patogênicos (por exemplo, S. boulardii), uma ou mais de enzimas digestivas (por exemplo, amilase, lipase, bromelaína, papaína, celulase ou protease) e um ingrediente nutricional (por exemplo, um prebiótico (por exemplo, Inulina)). Em certas modalidades, o ingrediente nutricional compreende Inulina.
[00120] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da presente invenção (por exemplo, combinação de super greens 2) compreende cerca de 10 a cerca de 20 bilhões (por exemplo, cerca de 10, cerca de 11, cerca de 12, cerca de 13, cerca de 14, cerca de 15, cerca de 16, cerca de 17, cerca de 18, cerca de 19 ou cerca de 20 bilhões) de CFUs de cepas bacterianas não patogênicas e fúngicas não patogênicas. Em certas modalidades, a combinação de super greens 2 compreende cerca de 15 bilhões de CFUs de cepas bacterianas e fúngicas não patogênicas.
[00121] Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg de um prebiótico (por exemplo, cerca de 100 mg, cerca de 250 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 650 mg, cerca de 700 mg, cerca de 750 mg , cerca de 800 mg, cerca de 850 mg, cerca de 900 mg, cerca de 950 mg, cerca de 1.000 mg, cerca de 1.100 mg, cerca de 1.150 mg, cerca de 1.200 mg, cerca de
1.250 mg, cerca de 1.300 mg, cerca de 1.350 mg, cerca de
1.400 mg, cerca de 1.450 mg, cerca de 1.500 mg, cerca de
1.550 mg, cerca de 1.600 mg, cerca de 1.650 mg, cerca de
1.700 mg, cerca de 1.750 mg, cerca de 1.800 mg, cerca de
1.850 mg, cerca de 1.900 mg, cerca de 1.950 mg ou cerca de
2.000 mg).
[00122] Em certas modalidades, a combinação de super greens 2 compreende cerca de 1.000 mg de prebiótico (por exemplo, Inulina). A combinação de super greens 2 que compreende o ingrediente nutricional Inulina pode ajudar a manter um equilíbrio bem cultivado nos níveis de Firmicutes e Bacteroidetes em um indivíduo em necessidade da mesma. A abundância relativa de Firmicutes e Bacteroidetes em indivíduos saudáveis tipicamente compreende até cerca de 38% e 71%, respectivamente, de todos os outros filos presentes no intestino. Combinação de super greens 3
[00123] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem da presente invenção (por exemplo, combinação de super greens 3) compreende bactérias não patogênicas (por exemplo, B. breve e L. rhamnosus), fungos não patogênicos (por exemplo, S. boulardii), uma ou mais de enzimas digestivas (por exemplo, amilase, lipase, bromelaína, papaína, celulase ou protease), e um ingrediente nutricional selecionado de um ou mais de: um prebiótico (por exemplo, Inulina) e uma proteína vegetal (por exemplo, proteína de ervilha). Em certas modalidades, o ingrediente nutricional compreende Inulina e proteína de ervilha.
[00124] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da presente invenção (por exemplo, combinação de super greens 3) compreende cerca de 15 a cerca de 25 bilhões (por exemplo, cerca de 15, cerca de 16, cerca de 17, cerca de 18, cerca de 19, cerca de 20, cerca de 21, cerca de 22, cerca de 23, cerca de 24 ou cerca de 25) de CFUs de cepas bacterianas não patogênicas e fúngicas não patogênicas. Em certas modalidades, a combinação de super greens 3 compreende cerca de 20 bilhões de CFUs de cepas bacterianas e fúngicas não patogênicas.
[00125] Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 100 mg a cerca de 2.000 mg de um prebiótico (por exemplo, cerca de 100 mg, cerca de 250 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 650 mg, cerca de 700 mg, cerca de 750 mg, cerca de 800 mg, cerca de 850 mg, cerca de 900 mg, cerca de 950 mg, cerca de 1.000 mg, cerca de 1.100 mg, cerca de 1.150 mg, cerca de 1.200 mg, cerca de
1.250 mg, cerca de 1.300 mg, cerca de 1.350 mg, cerca de
1.400 mg, cerca de 1.450 mg, cerca de 1.500 mg, cerca de
1.550 mg, cerca de 1.600 mg, cerca de 1.650 mg, cerca de
1.700 mg, cerca de 1.750 mg, cerca de 1.800 mg, cerca de
1.850 mg, cerca de 1.900 mg, cerca de 1.950 mg ou cerca de
2.000 mg). Em certas modalidades, a combinação de super greens 3 compreende cerca de 1.000 mg de prebiótico (por exemplo, Inulina).
[00126] Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 1.000 mg a cerca de 20.000 mg de uma proteína à base de planta (por exemplo, cerca de 1.000 mg, cerca de 5.000 mg, cerca de 10.000 mg, cerca de 15.000 mg ou cerca de 20.000 mg). Em certas modalidades, a combinação de super greens 3 compreende cerca de 10.000 mg de proteína à base de plantas (por exemplo, proteína de ervilha).
[00127] A combinação de super greens 3 compreendendo um ou mais de ingredientes nutricionais selecionados de Inulina e proteína de ervilha pode suportar e melhorar os níveis de Bifidobacteria, Lactobacillus, Bacteroidetes e Firmicutes (por exemplo, proteína vegetal pode melhorar os níveis de Firmicutes e Bacteroidetes) em um indivíduo em necessidade da mesma. A abundância relativa de Firmicutes e Bacteroidetes em indivíduos saudáveis tipicamente compreende até cerca de 38% e 71%, respectivamente, de todos os outros filos presentes no intestino. Em certas modalidades, a combinação de super greens 3 compreendendo Inulina e proteína de ervilha pode suportar e melhorar os níveis de Bifidobacteria, Lactobacillus, Bacteroidetes e Firmicutes em um indivíduo em necessidade da mesma. Combinação de super greens 4
[00128] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem da presente invenção (por exemplo, combinação de super greens 4) compreende bactérias não patogênicas (por exemplo, B. breve, L. acidophilus e L. rhamnosus), fungos não patogênicos (por exemplo, S. boulardii), uma ou mais de enzimas digestivas (por exemplo, amilase, lipase, bromelaína, papaína, celulase ou protease) e um ingrediente nutricional selecionado de um ou mais de: extrato de semente de uva, gengibre, vitamina A (por exemplo, forma retinila), vitamina C e vitamina D3. Em certas modalidades, o ingrediente nutricional compreende extrato de semente de uva, gengibre, forma retinila de vitamina A, vitamina C e vitamina D3.
[00129] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da presente invenção (por exemplo, combinação de super greens 4) compreende cerca de 25 a cerca de 35 bilhões (por exemplo, cerca de 25, cerca de 26, cerca de 27, cerca de 28, cerca de 29, cerca de 30, cerca de 31, cerca de 32, cerca de 33, cerca de 34 ou cerca de 35) de CFUs de cepas bacterianas não patogênicas e fúngicas não patogênicas. Em certas modalidades, a combinação de super greens 4 compreende cerca de 30 bilhões de CFUs de cepas bacterianas e fúngicas não patogênicas.
[00130] Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 10 mg a cerca de 200 mg de extrato de semente de uva (por exemplo, cerca de 10 mg, cerca de 50 mg, cerca de 100 mg, cerca de 150 mg ou cerca de 200 mg). Em certas modalidades, a combinação de super greens 4 compreende cerca de 100 mg de extrato de semente de uva.
[00131] Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 100 mg a cerca de 1.000 mg de gengibre (por exemplo, cerca de 100 mg, cerca de 250 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 650 mg, cerca de 700 mg, cerca de 750 mg, cerca de 800 mg, cerca de 850 mg, cerca de 900 mg, cerca de 950 mg ou cerca de 1.000 mg). Em certas modalidades, a combinação de super greens 4 compreende cerca de 750 mg de gengibre.
[00132] Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 1.000 IU a cerca de 10.000 IU de vitamina A (por exemplo, cerca de 1.000 IU, cerca de 2.000 IU, cerca de 3.000 IU, cerca de 4.000 IU, cerca de 5.000 IU, cerca de
6.000 IU, cerca de 7.000 IU , cerca de 8.000 IU, cerca de
9.000 IU ou cerca de 10.000 IU). Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 2.000 IU de vitamina A (por exemplo, forma de retinila). Em certas modalidades, a combinação de super greens 4 compreende cerca de 100 mg a cerca de 1.000 mg de vitamina C (por exemplo, cerca de 100 mg, cerca de 250 mg, cerca de 500 mg, cerca de 750 mg ou cerca de 1.000 mg). Em certas modalidades, a combinação de super greens 4 compreende cerca de 250 mg de vitamina C. Em certas modalidades, a composição compreende cerca de 500 IU a cerca de 1.500 IU de vitamina D3 (por exemplo, cerca de 500 IU, cerca de 750 IU, cerca de 1.000 IU, cerca de 1.250 IU, ou cerca de 1.500 IU). Em certas modalidades, a combinação de super greens 4 compreende cerca de 1.000 IU de vitamina D3.
[00133] A combinação de super greens 4 compreendendo um ou mais de ingredientes nutricionais selecionados de extrato de semente de uva, gengibre e vitaminas ajuda a manter um equilíbrio nos níveis de Proteobacteria e
Firmicutes em um indivíduo com níveis elevados de Candida. Em certas modalidades, a combinação de super greens 4 que compreende extrato de semente de uva, gengibre e vitaminas ajuda a manter um equilíbrio nos níveis de Proteobacteria e Firmicutes em um indivíduo com níveis elevados de Candida. Por exemplo, a abundância relativa de Proteobacteria e Candida em indivíduos saudáveis tipicamente compreende até cerca de 10% e 5%, respectivamente, de todos os outros filos presentes no intestino. Ingredientes adicionais de Combinação de super greens 1, 2, 3 e/ou 4
[00134] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem da presente invenção (por exemplo, combinação de super greens 1, 2, 3 e/ou 4) compreende adicionalmente um ou mais dos seguintes ingredientes, incluindo espirulina, chlorella, dulce, grama de cevada, concentrado de suco de alfafa, grama de trigo, folha de espinafre, folha de couve, raiz de beterraba, cinórrodo, fruto de açaí, fruto de framboesa, fruto de mirtilo, fruto de goji, extrato de fruto de mirtilo, extrato de folha de chá verde, ginkgo biloba, raiz de Echinacea purpurea, extrato de raiz de alcaçuz, extrato de cardo de leite, raiz de urtiga comum, geleia real, extrato de semente de uva, pólen de abelha, raiz de maca peruana, cogumelo reishi, raiz de rhodiola, raiz de ginseng indiano e/ou fibra (por exemplo, lecitina de girassol, fibra de maçã, farelo de arroz integral). Em certas modalidades, uma composição da presente invenção (por exemplo, supercombinações 1, 2, 3 e/ou 4) pode ser aromatizada usando estévia ou fruta dos monges, ou outro aroma natural (por exemplo, aroma natural de mirtilo).
[00135] Em certas modalidades, uma composição ou forma de dosagem da presente invenção (por exemplo, combinação de super greens 1, 2, 3 e/ou 4) pode compreender adicionalmente multivitaminas e/ou minerais. Composições de exemplo são apresentadas na Tabela 4. TABELA 4 Composição Propriedades Ingredientes  Combina bactérias boas e fungos Probiótico de bons  Bactérias (B.
 Aborda o equilíbrio intestinal Exemplo breve, L. acidophilus, L. total  Quebra a placa digestiva rhamnosus)  Sobrevive ao ácido do estômago  Fungos (S.  Sem refrigeração necessária  Sem ingredientes artificiais ou boulardii) adoçantes  Enzima (Amilase)  Sem alérgenos  Combina bactérias boas e fungos Probiótico bons  Bactérias (B.
 Aborda o equilíbrio intestinal Pediátrico de breve, L. acidophilus, L. total Exemplo  Quebra a placa digestiva rhamnosus)  Sem refrigeração necessária  Fungos (S.  Naturalmente adoçado  Sem ingredientes artificiais ou boulardii) adoçantes  Enzima (Amilase)  Sem alérgenos  Aditivos: Carbonato de Cálcio, Xilitol, Álcool cetílico, Ácido cítrico, Sabor Natural, Fruta dos Monges  Combina Probiótico com vitamina C Estimulador para suporte de imunidade de dupla ação  150 mg de  Combina bactérias boas e fungos Imunológico vitamina C em cada bons de Exemplo  Aborda o equilíbrio intestinal cápsula total  Bactérias (B.  Quebra a placa digestiva  Sobrevive ao ácido do estômago breve, L. acidophilus, L.
 Sem refrigeração necessária rhamnosus)  Sem ingredientes artificiais ou adoçantes  Fungos (S.
 Sem alérgenos boulardii)  Enzima (Amilase)  Extratos de planta orgânica Super green  Bactérias (B.  Fibra prebiótica Orgânico de  Combina bactérias boas e fungos breve, L. acidophilus, L. bons Exemplo  Aborda o equilíbrio intestinal rhamnosus) total  Fungos (S.  Quebra a placa digestiva  Sem refrigeração necessária boulardii)  Sem ingredientes artificiais ou  Combinação de adoçantes  Naturalmente adoçado Enzimas Digestivas:  Sem alérgenos (Amilase, Bromelaína, Celulase, Lipase, Papaína, Protease)  Combinação de super greens: (Espirulina, Gramínea Cevada, Folha de Alfafa, Grama de Trigo, Chlorella, Dulce, Folha de Espinafre, Brócolis (Planta Inteira ), Folha de Salsa, Folha de Couve, Raiz de Echinacea angustifolia, Raiz de Alcaçuz, Semente de Cardo de Leite, Raiz de Ginseng Siberiano, Raiz de beterraba, Cinórrodo, Açaí (Fruto), Folha de
Chá Verde, Folha de
Framboesa, Mirtilo
(Fruto), Fruto de Goji,
Mirtilo (Fruto), Raiz de
Ginseng Indiano, Raiz de
Rhodiola, Cogumelo
Reishi, Raiz de maca peruana, Pólen de Abelha,
Folha de Urtiga comum,
Ginko biloba (Extrato de
Folha 4:1), Geleia Real
(Concentrado em 3x),
Semente de Uva (Extrato
2:1)
 Combinação de
Fibras: (Lecitina de
Girassol, Maçã (Fruto),
Farelo de Arroz Integral,
Inulina)  Suporta o nível de Proteobacteria Combinação de saudável  Combinação de super greens 1 super greens BIOHM  Suporta a cicatrização da mucosa
(Espirulina, Chlorella,
Dulce, Gramínea Cevada,
Concentrado de Suco de alfafa, Grama de Trigo,
Folha de Espinafre, Folha de Couve, Raiz de beterraba, Cinórrodo,
Fruto de Açaí, Fruto de
Framboesa, Fruto de
Mirtilo, Fruto de Goji, Extrato de Fruto de Mirtilo, Extrato de Folha de Chá Verde, Ginkgo biloba, Raiz de Flor roxa cônica, Extrato de Raiz de Alcaçuz, Extrato de Cardo de Leite, Raiz de urtiga comum, Geleia Real, Extrato de Semente de Uva, Pólen de Abelha, Raiz de maca peruana, Cogumelo Reishi, Raiz de Rhodiola, Raiz de Ginseng Indiano)  Bactérias (B.
breve, L. acidophilus, L.
rhamnosus)  Fungos (S.
boulardii)  Prebiótico (Inulina)  Peptídeos de colágeno  Alcaçuz deglicirrizinado (DGL)  Raiz de Marshmallow  Forma retinila de vitamina A
 Vitamina D3 Combinação de  Suporta o equilíbrio intestinal  BIOHM Combinação super greens 2 saudável de super greens  Bactérias (B.
breve, L. acidophilus, L.
rhamnosus)  Fungos (S.
boulardii)  Prebiótico (Inulina) Combinação de  Proteína à base de planta melhora  BIOHM Combinação super greens 3 os níveis de Firmicutes e Bacteroidetes de super greens  Bactérias (B.
breve, L. rhamnosus)  Fungos (S.
boulardii)  Prebiótico (Inulina)  proteína à base de planta (proteína de ervilha) Combinação de  Mantém o equilíbrio de  Combinação de super greens 4 Proteobacteria e Firmicutes em um super greens BIOHM indivíduo com nível elevado de Candida  Bactérias (B.
breve, L. acidophilus, L.
rhamnosus)  Fungos (S.
boulardii)  Extrato de Semente de Uva
 Gengibre  Forma retinila de vitamina A  Vitamina C  Vitamina D3
[00136] As composições ou formas de dosagem da invenção descritas nesse documento podem ser administradas ou consumidas individualmente ou em combinação. Por exemplo, uma composição ou forma de dosagem da presente invenção que inclui bactérias não patogênicas (B. breve, L. acidophilus e L. rhamnosus), fungos não patogênicos (S. boulardii) e uma enzima (por exemplo, amilase) pode ser administrada ou consumida individualmente como tal, ou pode ser coadministrada ou consumida simultaneamente com outros nutrientes ou suplementos. (v) Processo de Fabricação
[00137] Em certas modalidades, uma composição da presente invenção pode ser fabricada de acordo com o seguinte processo: cada uma de cepas fúngicas não patogênicas (por exemplo, S. boulardii) e bacterianas não patogênicas (por exemplo, B. breve, L. acidophilus e L. rhamnosus), disponíveis na American Type Culture Collection (ATCC), é cultivada separadamente em um fermentador de pequena escala. Para cada cepa, uma amostra de cultura é então usada para inocular um fermentador de produção em larga escala correspondente. As cepas fúngicas e bacterianas cultivadas são colhidas via filtração e/ou centrifugação e podem então ser secas, por exemplo, liofilizadas. Os organismos secos podem então ser revestidos, por exemplo, revestidos por pulverização com um polímero tal como hidroxilpropilmetilcelulose (HPMC). As cepas revestidas, por exemplo, cepas revestidas com HPMC, podem então ser submetidas à secagem adicional, tal como secagem a baixa temperatura (por exemplo, temperatura ambiente). As cepas resultantes são então misturadas nas concentrações apropriadas para a formulação específica que está sendo fabricada. Nesse estágio de combinação, se desejado, outros ingredientes específicos para a formulação (por exemplo, amilase seca) podem ser adicionados. Se desejado, a composição combinada pode então ser encapsulada, que pode então ser acondicionada em um recipiente apropriadamente rotulado. Um processo de fabricação de exemplo é representado na FIGURA 21. (vi) Formulação
[00138] As composições e formas de dosagem descritas nesse documento podem ser usadas para romper um biofilme presente em uma variedade de regiões dentro do corpo de um indivíduo, por exemplo, o trato GI, trato urinário, trato reprodutivo, trato respiratório superior (nariz), trato respiratório inferior (por exemplo, pulmão), trato biliar, boca, olhos, nariz, ouvido ou pele. O meio pelo qual a composição ou forma de dosagem é administrada a um indivíduo pode depender da região em que o biofilme está localizado, e do desejo de administração local e/ou sistêmica. Como tal, a composição ou forma de dosagem pode ser formulada para uso em uma variedade de sistemas de distribuição de fármacos.
[00139] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende um pó, por exemplo, um pó revestido, compreendendo cerca de 10 milhões - cerca de 50 bilhões de unidades formadoras de colônia (CFU) de cepa(s) fúngica(s)
não patogênica(s) isolada(s) e cepa(s) bacterianas não patogênica(s) isolada(s). Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da presente invenção compreende cerca de 10 milhões - cerca de 40 bilhões, cerca de 10 milhões - cerca de 30 bilhões, cerca de 10 milhões - cerca de 20 bilhões, cerca de 10 milhões - cerca de 10 bilhões, cerca de 10 milhões - cerca de 5 bilhões, cerca de 10 milhões - cerca de 1 bilhão, cerca de 10 milhões - cerca de 500 milhões, cerca de 10 milhões - cerca de 100 milhões, cerca de 10 milhões - cerca de 50 milhões de CFU de cepa(s) fúngica(s) não patogênica(s) e cepa(s) bacteriana(s) não patogênica(s). Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da presente invenção compreende cerca de 20 milhões - 50 bilhões, cerca de 50 milhões - 50 bilhões, cerca de 100 milhões - cerca de 50 bilhões, cerca de 200 milhões - cerca de 50 bilhões, cerca de 500 milhões - cerca de 50 bilhões, cerca de 1 bilhão - cerca de 50 bilhões, cerca de 5 bilhões - cerca de 50 bilhões, cerca de 10 bilhões - cerca de 50 bilhões, cerca de 20 bilhões - cerca de 50 bilhões, cerca de 30 bilhões - cerca de 50 bilhões, ou cerca de 40 bilhões - cerca de 50 bilhões de CFU de cepa(s) fúngica(s) não patogênica(s) e cepa(s) bacteriana(s) não patogênica(s). Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem pode compreender adicionalmente uma enzima (por exemplo, amilase, celulase, hemicelulase, lisozima, pectinase, DNase I, Serratia peptidase, Serratiopeptidase, complexo de hemicelulase/pectinase, -1,3-glucanase, protease ácida, protease alcalina, glucoamilase, endoglucanase, xilanase, lipase, lisozima, complexo de protease/peptidase, dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), quitosanase, bromelaína, papaína,
kiWi protease actinidi, uma protease derivada de planta, fitase, zimolase e nuclease).
[00140] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende cerca de 50 bilhões, cerca de 40 bilhões, cerca de 30 bilhões, cerca de 20 bilhões, cerca de 10 bilhões, cerca de 1 bilhão, cerca de 500 milhões, cerca de 100 milhões, cerca de 50 milhões, ou cerca de 10 milhões de CFU de cepas fúngicas não patogênicas e cepas bacterianas não patogênicas. Em certas modalidades, uma cápsula compreende cerca de 30 bilhões de unidades formadoras de colônia de cepa(s) fúngica(s) não patogênica(s) e cepa(s) bacteriana(s) não patogênica(s) e uma enzima. Em certas modalidades, uma cápsula compreende cerca de 15 bilhões de unidades formadoras de colônia de Bifidobacterium breve, cerca de 1,5 bilhão de unidades formadoras de colônia de Lactobacillus acidophilus, cerca de 10 bilhões de unidades formadoras de colônia de Lactobacillus rhamnosus, cerca de 3,5 bilhões de Saccharomyces boulardii e cerca de 500 unidades SKB de amilase. Em certas modalidades, uma dose baixa de 10 milhões de CFU é eficaz para uso como um probiótico ou uma composição como estabelecido(a) na TABELA
5. Forma de dosagem oral
[00141] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem pode ser consumida oralmente pelo indivíduo. Em certas modalidades, a composição é consumida como um pó ou produto contendo o pó. Em outras modalidades, a composição pode estar na forma de uma forma de dosagem oral, por exemplo, onde a composição está incluída, por exemplo, dentro de uma cápsula, hóstia, pílula, comprimido, pastilha, pó,
grânulo ou como uma solução ou uma suspensão em um líquido aquoso ou não aquoso, ou como uma emulsão líquida de óleo- em-água ou água-em-óleo, ou como um elixir ou xarope, ou como pastilhas, cada uma contendo o número necessário de unidades formadoras de colônia do bactérias não patogênicas e fungos não patogênicos e, opcionalmente, a quantidade apropriada de enzima.
[00142] Em certas modalidades, a composição é disposta em uma cápsula ou em um comprimido. Em certas modalidades, a composição é formulada como um comprimido. Em certas modalidades, a cápsula é uma cápsula de celulose vegetal. Em certas modalidades, a forma de dosagem, por exemplo, cápsula ou comprimido, é revestida com um revestimento, por exemplo, um revestimento estético não funcional ou um revestimento funcional, por exemplo, um revestimento de liberação controlada. A cápsula ou o comprimido pode ser formulada(o) de modo a proporcionar uma liberação lenta ou controlada dos ingredientes dispostos na(o) mesma(o).
[00143] Em certas modalidades, uma forma de dosagem contém uma composição que compreende (i) uma enzima capaz de romper o biofilme, (ii) uma cepa fúngica não patogênica capaz de se replicar na região do indivíduo, e (iii) uma cepa bacteriana não patogênica capaz de se replicar na região do indivíduo que é formulada como um pó e encapsulada em uma cápsula.
[00144] Em um probiótico de exemplo, uma cápsula compreende uma combinação de probióticos contendo os ingredientes apresentados na TABELA 5, onde, por exemplo, o pó contendo os organismos pode ser opcionalmente revestido com um revestimento funcional ou não funcional, e/ou a cápsula pode ser revestida com um revestimento funcional ou não funcional. TABELA 5 Combinação de probióticos (Cápsula de Tamanho 1) Ingrediente CFU/cap SKB/cap mg/cap Lactobacillus 10 bilhões 90 rhamnosus Bifidobacterium breve 15 bilhões 75 Saccharomyces 3,5 145 boulardii bilhões Lactobacillus 1,5 145 acidophilus bilhões Amilase 500 175 Total 30 bilhões 500 630
[00145] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende aditivos, tais como, carbonato de cálcio, xilitol, álcool cetílico, ácido cítrico, aroma natural, fruta dos monges. Em certas modalidades, a composição compreende aditivos, tais como, casca de cáscara sagrada, casca de psílio, folha de sene, semente de linhaça, folha de aloe vera, raiz de alcaçuz, óleo de triglicerídeo de cadeia média (MCT). Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende aditivos, tal como fibra dietética, por exemplo, Inulina (fruto-oligossacarídeos FOS) e pectina de maçã. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende aditivos, tais como, uma combinação de espirulina, grama de cevada, folha de alfafa, grama de trigo, chlorella, dulce, folha de espinafre, brócolis, folha de salsa, folha de couve, raiz de Flor roxa cônica, raiz de alcaçuz, semente de cardo de leite, raiz de Ginseng Siberiano, raiz de beterraba, cinórrodo, açaí (fruto), folha de chá verde, folha de framboesa, mirtilo
(fruto), fruto de goji, mirtilo (fruto), raiz de Ginseng Indiano, raiz de rhodiola, cogumelo reishi, raiz de maca peruana, pólen de abelha, folha de urtiga comum, ginko biloba (extrato de folha), geleia real (concentrado 3x), semente de uva. Em certas modalidades, a composição compreende adicionalmente uma vitamina, tal como vitamina C. Revestimentos
[00146] Dependendo do modo de dispensação ou da região a ser tratada, a composição ou forma de dosagem da presente invenção pode ser preparada como uma mistura em pó de organismos onde o pó pode ser revestido com um revestimento não funcional (por exemplo, revestimento estético) ou um revestimento funcional (por exemplo, revestimento de liberação controlada para modular a liberação dos organismos em, por exemplo, uma maneira dependente do tempo e/ou pH). De forma similar, a composição ou forma de dosagem pode ser uma cápsula contendo uma combinação em pó de organismos, onde a cápsula é revestida com um revestimento não funcional (por exemplo, revestimento estético) ou um revestimento funcional (por exemplo, um revestimento de liberação controlada para modular a liberação dos organismos, por exemplo, de uma maneira dependente do tempo e/ou pH). Em certas modalidades, o revestimento de liberação controlada é hidroxipropilmetilcelulose (HPMC).
[00147] Os revestimentos de liberação controlada podem facilitar a liberação contínua, liberação gradual, liberação prolongada e/ou liberação programada (por exemplo, liberação dependente do pH) dos microrganismos nas composições ou nas formas de dosagem divulgadas nesse documento.
[00148] Revestimentos de liberação controlada de exemplo podem ser selecionados do grupo que consiste em acetato succinato, um derivado de polivinila (por exemplo, álcool polivinílico, acetato de polivinila, ftalato de acetato de polivinila, um copolímero de acetato de vinila e vinil pirrolidona, um copolímero de acetato de vinila e ácido crotônico, polivinilpirrolidona), óxido de polietileno, ácido poliacrílico, polissacarídeos (por exemplo, amido modificado, amido reticulado com alto teor de amilose, hidroxipropilamido, celulose e derivados de celulose (por exemplo, celulose microcristalina, carboximetiletilcelulose, acetato de celulose, metilcelulose, metil-hidroxietilcelulose, etilcelulose, hidroxipropilcelulose, hidroxietilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, ftalato de celulose, acetato de celulose, ftalato de acetato de celulose, propionato de acetato de celulose, succinato de acetato de celulose, butirato de acetato de celulose, trimelitato de acetato de celulose, etil-hidroxietilcelulose, carboximetilcelulose ou metilcarboximetilcelulose), poloxâmero, povidona, ácido algínico, alginato de sódio, polietilenoglicol, alginato de polietilenoglicol, gomas (por exemplo, goma xantana), polimetacrilatos (incluindo, por exemplo, um copolímero de ácido metacrílico e metilmetacrilato, e um copolímero de ácido metacrílico e acrilato de etila), um copolímero de ácido metacrílico e acrilato de etila, um copolímero de polimetil vinil éter e anidrido de ácido malônico, um copolímero de polimetil vinil éter e ácido malônico ou etil- , isopropil-, n-butilésteres do mesmo, zeína, e misturas dos anteriores.
[00149] Outros exemplos de polímeros de revestimento de filme de liberação controlada incluem, mas não estão limitados a, etilcelulose (por exemplo, AQUACOAT®, SURELEASE®), metil-hidroxipropilcelulose (por exemplo, PHARMACOAT®), polímeros acrílicos, polivinilacetatos, cloretos de polivinila, succinato de acetato de hidroxipropilmetilcelulose (por exemplo, AQOAT) e ftalato de acetato de polivinila (por exemplo, SURETERIC).
[00150] Em certas modalidades, o revestimento pode ser um revestimento entérico. Os revestimentos entéricos podem ser usados para criar uma barreira que controla a região ao longo do trato GI onde o(s) ingrediente(s) ativo(s) é(são) liberado(s) e absorvido(s). Os revestimentos entéricos podem incluir, por exemplo, um polímero que se desintegra em taxas diferentes de acordo com o pH. Os revestimentos entéricos podem incluir, por exemplo, ftalato de acetato de celulose, trimelitato de acetato de celulose, copolímeros de acrilato de metila e ácido metacrílico, succinato de acetato de celulose, hidroximetilcelulose, ftalato de hidroxilpropilmetilcelulose, copolímeros de metacrilato de metila e ácido metacrílico, copolímeros de acrilato de etila e ácido metacrílico, copolímeros de ácido metacrílico tipo C, acetato de polivinila-ftalato, ftalato de acetato de celulose, ftalato de acetato de polivinila, carboximetiletilcelulose, ácido metacrílico/ésteres metílicos de ácido metacrílico copolimerizados, tais como, por exemplo, materiais conhecidos sob o nome comercial EUDRAGIT® L12.5, L100 ou EUDRAGIT® S12.5, S100 ou compostos similares usados para obter revestimentos entéricos. As dispersões ou redispersões de polímero coloidal aquosas também podem ser aplicadas, por exemplo, EUDRAGIT® L 30D-55, EUDRAGIT® L100-55, EUDRAGIT® S100, preparação EUDRAGIT® 4110D (Rohm Pharma); AQUATERIC®, AQUACOAT® CPD 30 (FMC); KOLLICOAT MAE® 30D e 30DP (BASF); EASTACRYL® 30D (Eastman Chemical).
[00151] Em certas modalidades, o revestimento entérico compreende um copolímero aniônico, catiônico ou neutro com base em ácido metacrílico, ésteres metacrílicos/acrílicos ou seus derivados. Os polímeros catiônicos frequentemente são usados para mascarar o sabor e para alcançar alta biodisponibilidade de ingredientes ativos por sua baixa solubilidade na cavidade oral (pH 5,8 - 7,4) e alta solubilidade no estômago (pH 1 - 3,5), respectivamente. Os polímeros aniônicos têm maior solubilidade em água em pH básico do que em pH ácido e são usados para proteger os ingredientes ativos da degradação ácida no estômago e/ou da digestão enzimática no intestino.
[00152] Em certas modalidades, o revestimento entérico compreende um copolímero de acrilato de etila-ácido metacrílico. Os revestimentos entéricos disponíveis comercialmente incluem Opadry® AMB, copolímeros de acrilato de etila-ácido metacrílico (por exemplo, ACRYL-EZE®), copolímero de metacrilato de dimetilaminoetila-metacrilato de butila-metacrilato de metila (2:1:1) ou copolímeros de poli(ácido metacrílico-metacrilato de co-metila) e copolímeros de poli(ácido metacrílico-co-metil-metacrilato) (por exemplo, EUDRAGIT®). Em certas modalidades, o revestimento entérico pode compreender de cerca de 0,1% a cerca de 10%, de cerca de 1% a cerca de 10%, de cerca de 5%
a cerca de 10%, de cerca de 5% a cerca de 20%, de cerca de 8% a cerca de 15%, de cerca de 8% a cerca de 18%, de cerca de 10% a cerca de 12%, ou de cerca de 12% a cerca de 16%, da forma de dosagem (por exemplo, cápsula, comprimido ou pellet) em peso.
[00153] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da presente invenção preparada como uma mistura em pó de uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas isoladas e viáveis e uma ou mais de cepas fúngicas não patogênicas isoladas e viáveis, que podem ser revestidas entéricas, ou como uma cápsula contendo uma mistura em pó, onde a cápsula é revestida entérica, para dispensação ao intestino superior. Em certas modalidades, as cepas bacterianas e fúngicas da presente invenção são misturadas em uma combinação para preparar uma composição em pó, que é então revestida entericamente com um copolímero catiônico. Por exemplo, a mistura em pó das cepas bacterianas não patogênicas e fúngicas não patogênicas da presente invenção pode ser revestida com um polímero catiônico compreendendo metacrilato de dimetilaminoetila, metacrilato de butila e metacrilato de metila a uma razão de 2:1:1 EUDRAGIT® E 100); um copolímero catiônico baseado em metacrilato de dimetilaminoetila, metacrilato de butila e metacrilato de metila em uma razão de 2:1:1 (EUDRAGIT® EPO); um copolímero catiônico com base em metacrilato de dimetilaminoetila, metacrilato de butila e metacrilato de metila a uma razão de 2:1:1 (EUDRAGIT® E 12, 5), um copolímero aniônico com base em ácido metacrílico e acrilato de etila (EUDRAGIT® L 100- 55 (ACRYL-EZE®)) ou um equivalente dos mesmos.
[00154] Em certas modalidades, as cepas bacterianas e fúngicas da presente invenção são misturadas em uma combinação para preparar uma composição em pó, que é então revestida entericamente com um copolímero aniônico. Por exemplo, a combinação em pó das cepas bacterianas e fúngicas da presente invenção pode ser revestida com um copolímero aniônico compreendendo ácido metacrílico e metacrilato de metila (por exemplo, EUDRAGIT® L 100, EUDRAGIT® S 100, EUDRAGIT® L/S (25/Proporção 75, 50/50 ou 75/25)), ou um copolímero aniônico compreendendo ácido metacrílico e acrilato de etila (EUDRAGIT® L 100-55 (ACRYL-EZE®)). Exemplos adicionais, mas não limitativos, dos revestimentos para dispensação no cólon incluem EUDRAGIT® L 100-55, EUDRAGIT® L 30 D-55, PlasACRYL® HTP 20, EUDRAGIT® L 12,5, EUDRAGIT® FS 100, EUDRAGIT® FS 30 D, e PlasACRYL® T20.
[00155] Em certas modalidades, as cepas bacterianas e fúngicas da presente invenção são misturadas em uma combinação para preparar granulados ou pellets, que são revestidos entericamente.
[00156] Em certas modalidades, a combinação em pó das cepas bacterianas e fúngicas da presente invenção pode ser revestida entericamente para dispensação controlada por tempo em todo o trato GI para aumentar o efeito terapêutico. Por exemplo, a composição ou forma de dosagem pode ser revestida com EUDRAGIT® RL 100, EUDRAGIT® RL PO, EUDRAGIT® RL 30 D, EUDRAGIT® RL 12,5, EUDRAGIT® RS 100, EUDRAGIT® RS PO, EUDRAGIT® RS 30 D, EUDRAGIT® RS 12,5, EUDRAGIT® NE 30 D, EUDRAGIT® NE 40 D, e/ou EUDRAGIT® NM 30 D.
[00157] Um método de exemplo de produção de uma forma de dosagem oral compreende selecionar as cepas bacterianas e fúngicas não patogênicas apropriadas a serem combinadas na forma de dosagem, cultivando os organismos em um fermentador, individualmente ou em combinação, dependendo das condições de crescimento. Uma vez que a quantidade apropriada de biomassa foi criada, as células podem ser colhidas via filtração e/ou centrifugação. Se um ou mais dos organismos é(são) cultivado(s) individualmente, os organismos podem então ser combinados nas quantidades apropriadas para resultar na composição ou forma de dosagem apropriada, que pode então ser seca, por exemplo, via liofilização ou secagem por pulverização. Alternativamente, os organismos, uma vez colhidos, podem ser secos, por exemplo, por meio de liofilização ou secagem por pulverização e, em seguida, a biomassa seca apropriada de cada organismo pode ser combinada nas quantidades apropriadas para resultar na composição ou forma de dosagem apropriada. Em certas modalidades, a biomassa seca é preparada na forma de pó, e é revestida com um revestimento funcional, por exemplo, um revestimento de liberação controlada (por exemplo, hidroxipropilmetilcelulose). A enzima pode ser adicionada à biomassa durante uma ou mais de cada uma das etapas anteriores, por exemplo, antes ou depois da biomassa ter sido seca. Em certas modalidades, a enzima pode ser adicionada à biomassa preparada como um pó, por exemplo, antes ou após o revestimento da biomassa em pó quando um revestimento é desejado. A biomassa resultante (por exemplo, pó revestido) pode então ser acondicionada em cápsulas e acondicionada em um recipiente. Forma De Dosagem Tópica
[00158] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem pode ser formulada para dispensação tópica, por exemplo, tais como, um(a) líquido, emulsão, suspensão, pomada, creme, gel, loção ou pó. Em certas modalidades, após a aplicação na pele de um indivíduo, a composição ou forma de dosagem pode formar um adesivo. Dependendo da concentração de organismos não patogênicos e do dispositivo de dispensação particular, a composição ou forma de dosagem pode ser formulada para dispensar de cerca de 1,0 mL/5 cm2 a 1,0 mL/50 cm2, ou de cerca de 1,0 mL/5 cm2 a 50 mL/50 cm2, ou de cerca de 1,0 mL/5 cm2 a cerca de 100 mL/50 cm2.
[00159] A forma de dosagem tópica também pode incluir um carreador farmaceuticamente aceitável. Os carreadores adequados que podem ser úteis em formulações tópicas incluem, mas não estão limitados a, solubilizantes, tais como, C2-C8, álcoois de cadeia linear e ramificada, dióis e trióis, hidratantes e umectantes, tais como, glicerina, aminoácidos e derivados de aminoácidos, poliaminoácidos e derivados, ácidos carboxílicos de pirrolidona e seus sais e derivados, tensoativos, tais como, lauril sulfato de sódio, monolaurato de sorbitano, emulsionantes, tais como, álcool cetílico, álcool estearílico, espessantes, tais como, metil celulose, etil celulose, hidroximetilcelulose, hidroxipropilcelulose, polivinilpirolidona, álcool polivinílico e polímeros acrílicos.
[00160] A composição ou forma de dosagem pode ser aplicada à pele por qualquer meio conhecido na técnica incluindo, por exemplo, por um aerossol, spray, embalagem de bomba, pincel, estopa ou outro aplicador. Em certas modalidades, o aplicador pode fornecer uma dose medida fixa ou variável, tais como um aerossol dosimetrado, ou uma bomba dosimetrada manual. Em certas modalidades, os ingredientes ativos podem ser dispensados por um dispensador de volume unitário com ou sem um roll-on ou outro tipo de aplicador. Em certas modalidades, os ingredientes ativos são aplicados à pele do indivíduo cobrindo uma área superficial de dispensação de cerca de 10 a cerca de 800 cm2, de cerca de 10 a cerca de 400 cm2, ou de cerca de 10 a cerca de 200 cm2.
[00161] As pomadas são preparações semissólidas que tipicamente são baseadas em vaselina ou outros derivados de petróleo. Tal como acontece com outros carreadores ou veículos, uma base de pomada deve ser inerte, estável, não irritante e não sensibilizante.
[00162] Os cremes são líquidos viscosos ou emulsões semissólidas, seja de óleo em água ou água em óleo. Tipicamente, as bases de creme são laváveis com água e contêm uma fase oleosa, um emulsionante e uma fase aquosa. A fase oleosa, também chamada de fase “interna”, geralmente compreende vaselina e um álcool graxo, tais como álcool cetílico ou estearílico. A fase aquosa usualmente, embora não necessariamente, excede a fase oleosa em volume e geralmente contém um umectante. O emulsificante em uma formulação de creme é geralmente um tensoativo não iônico, aniônico, catiônico ou anfotérico.
[00163] Os géis são sistemas semissólidos do tipo suspensão. Os géis monofásicos contêm macromoléculas orgânicas distribuídas de maneira substancialmente uniforme por todo o líquido carreadores, que é tipicamente aquoso, mas também contém um álcool e, opcionalmente, um óleo. Em certas modalidades, os agentes geleificantes compreendem polímeros de ácido acrílico reticulados, tais como carbômeros, por exemplo, carboxipolialquilenos que podem ser obtidos comercialmente (CARBOPOL). Polímeros hidrofílicos, tais como, óxidos de polietileno, copolímeros de polioxietileno-polioxipropileno e álcool polivinílico; polímeros celulósicos, tais como, hidroxipropilcelulose, hidroxietilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, ftalato de hidroxipropilmetilcelulose e metilcelulose; gomas, tais como, goma de tragacanto e xantana; alginato de sódio; e gelatina também podem ser incluídas. A fim de preparar um gel uniforme, agentes de dispersão, tal como álcool ou glicerina, podem ser adicionados, ou o agente de geleificação pode ser dispersado por trituração, mistura mecânica ou agitação, ou combinações dos mesmos.
[00164] Vários aditivos, conhecidos pelos habilitados na técnica, podem ser incluídos nas formas de dosagem tópicas. Por exemplo, solventes, incluindo quantidades relativamente pequenas de álcool (por exemplo, igual ou abaixo de 10%) podem ser usados para solubilizar certos componentes. Em certas modalidades, a formulação pode incluir um intensificador adequado, por exemplo, éteres, tais como, éter monoetílico de dietilenoglicol (disponível comercialmente como TRANSCUTOL) e éter monometílico de dietilenoglicol; tensoativos, tais como, laurato de sódio, laurilssulfato de sódio, brometo de cetiltrimetilamônio, cloreto de benzalcônio, Poloxâmero (231, 182, 184), TWEEN (20, 40, 60, 80) e lecitina; álcoois, tais como, etanol, propanol, octanol, álcool benzílico e semelhantes; polietilenoglicol e ésteres dos mesmos, tais como, monolaurato de polietilenoglicol (PEGML); amidas e outros compostos nitrogenados, tais como, ureia, dimetilacetamida (DMA), dimetilformamida (DMF), 2-pirrolidona, 1-metil-2-
pirrolidona, etanolamina, dietanolamina e trietanolamina; terpenos; alcanonas; e ácidos orgânicos, tais como, ácido cítrico e ácido succínico. Formas de dosagem por Spray e inalação
[00165] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem pode ser formulada para administração nasal na forma de um spray nasal e solução para inalação, e suspensão, que é administrada, por exemplo, por inalação pelo nariz. A dose pode ser dispensada na cavidade nasal por meio de uma bomba de spray ou como gotas nasais para efeitos locais e/ou sistêmicos.
[00166] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem pode ser uma solução e/ou suspensão de inalação para dispensação ao trato respiratório superior e inferior (por exemplo, orofaringe, pulmões) por inalação oral para efeitos locais e/ou sistêmicos e pode ser usada com um nebulizador especificado. (III) DOSE
[00167] O tamanho da dose dispensada ou consumida dependerá, entre outras coisas, do tamanho e da idade do indivíduo, da indicação ou condição a ser tratada e do modo de dispensação da composição ou forma de dosagem. Em certas modalidades, por exemplo, a composição oral ou as formas de dosagem podem compreender de cerca de 1 mg a cerca de 1.000 mg ou 50 mg a cerca de 1.000 mg dos ingredientes ativos (por exemplo, a bactéria não patogênica, o fungo não patogênico e/ou a enzima). Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem pode compreender de cerca de 1 mg a cerca de 900 mg, cerca de 1 mg a cerca de 800 mg, cerca de 1 mg a cerca de 700 mg, cerca de 1 mg a cerca de 600 mg, cerca de 1 mg a cerca de 500 mg, cerca de 1 mg a cerca de 400 mg, cerca de 1 mg a cerca de 300 mg, cerca de 1 mg a cerca de 200 mg, cerca de 1 mg a cerca de 100 mg, cerca de 1 mg a cerca de 500 mg, cerca de 10 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 20 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 30 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 40 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 50 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 100 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 200 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 300 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 400 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 500 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 600 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 700 mg a cerca de 1000 mg, cerca de 800 mg a cerca de 1000 mg, ou cerca de 900 mg a cerca de 1000 mg dos ingredientes ativos (por exemplo, a bactéria não patogênica, o fungo não patogênico e/ou a enzima).
[00168] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem pode compreender de cerca de 100 mg a cerca de 200 mg, de cerca de 200 mg a cerca de 300 mg, de cerca de 300 mg a cerca de 400 mg, de cerca de 400 mg a cerca de 500 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 600 mg, de cerca de 600 mg a cerca de 700 mg, de cerca de 700 mg a cerca de 800 mg, de cerca de 800 a cerca de 900 mg, ou de cerca de 900 a cerca de 1000 mg dos ingredientes ativos. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem pode compreender cerca de 700 mg dos ingredientes ativos.
[00169] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende cerca de 50, 40, 30 ou 20 bilhões de unidades formadoras de colônias das cepas bacterianas não patogênicas e cepas fúngicas não patogênicos. Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende cerca de 30 bilhões de unidades formadoras de colônias das cepas bacterianas não patogênicas e cepa(s) fúngica(s) não patogênica(s).
[00170] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem da invenção compreende de cerca de 10 bilhões a cerca de 40 bilhões, por exemplo, de cerca de 15 bilhões a cerca de 40 bilhões, de cerca de 20 bilhões a cerca de 40 bilhões, de cerca de 10 bilhões a cerca de 30 bilhões, de cerca de 15 bilhões a cerca de 30 bilhões, de cerca de 20 bilhões a cerca de 30 bilhões de unidades formadoras de colônias da(s) cepa(s) bacteriana(s) não patogênica(s). Alternativamente, ou além disso, a composição ou forma de dosagem da invenção compreende de cerca de 1 bilhão a cerca de 10 bilhões, por exemplo, de cerca de 2 bilhões a cerca de 8 bilhões, de cerca de 3 bilhões a cerca de 6 milhões de unidades formadoras de colônias do cepa(s) fúngica(s) patogênica(s).
[00171] Em certas modalidades, a composição ou forma de dosagem compreende cerca de 15 bilhões de unidades formadoras de colônia de Bifidobacterium breve, cerca de 10 bilhões de unidades formadoras de colônia de Lactobacillus rhamnosus, cerca de 3,5 bilhões de unidades formadoras de colônia de Saccharomyces boulardii e cerca de 1,5 bilhão de unidades formadoras de colônia de Lactobacillus acidophilus.
[00172] A composição ou as formas de dosagem (uma ou várias unidades (por exemplo 2, 3, 4 ou 5 unidades, por exemplo, cápsulas ou comprimidos) pode(m) ser administrada(s) uma, duas ou três vezes ao dia durante o período de tratamento, por exemplo, até que o biofilme de interesse tenha sido rompido, impedido de se formar e/ou o microbioma normal do indivíduo tenha sido restaurado, o que poderia levar, por exemplo, uma semana, duas semanas, um mês, dois meses ou três meses e um ano. Em certas modalidades, uma cápsula, tal como uma cápsula com revestimento entérico, que compreende cerca de 30 bilhões de unidades formadoras de colônias de cepa(s) fúngica(s) não patogênica(s) e cepa(s) bacteriana(s) não patogênica(s) e uma enzima, é administrada uma vez, duas ou três vezes ao dia durante o período de tratamento, por exemplo, até que o biofilme de interesse tenha sido rompido e/ou o microbioma normal do indivíduo tenha sido restaurado, o que pode levar, por exemplo, uma semana, duas semanas, um mês, dois meses, ou três meses e um ano. Em certas modalidades, uma cápsula, tal como uma cápsula com revestimento entérico, que compreende cerca de 30 bilhões de unidades formadoras de colônia de cepa(s) fúngica(s) não patogênica(s) e cepa(s) bacteriana(s) não patogênica(s) e uma enzima é administrada uma vez por dia. Em certas modalidades, a cápsula, tal como a cápsula com revestimento entérico, administrada uma vez por dia compreende cerca de 15 bilhões de unidades formadoras de colônia de Bifidobacterium breve, cerca de 1,5 bilhão de unidades formadoras de colônia de Lactobacillus acidophilus, cerca de 10 bilhões de unidades formadoras de colônia de Lactobacillus rhamnosus, cerca de 3,5 bilhões de Saccharomyces boulardii e cerca de 500 unidades SKB de amilase. (IV) PRODUTOS DE ALIMENTOS COZIDOS
[00173] Além disso, a invenção fornece produtos alimentícios cozidos, por exemplo, assados que contêm qualquer uma das composições probióticas da invenção descritas nesse documento. Produtos alimentícios assados de exemplo podem incluir, mas não estão limitados a: pães, pães doces, bagels, bolos, biscoitos, bolachas, panquecas, muffins, biscoitos, tortas, brownies, caçarolas, pudins ou tortilha.
[00174] Em certas modalidades, o produto alimentício assado compreende uma composição probiótica que compreende (i) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas fúngicas não patogênicas, (ii) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas bacterianas não patogênicas e (iii) uma enzima opcional. Em certas modalidades, o produto alimentício assado compreende uma composição probiótica que compreende (i) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas fúngicas não patogênicas, (ii) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas bacterianas não patogênicas e (iii) uma enzima.
[00175] Em certas modalidades, as bactérias não patogênicas incluídas na composição probiótica contida nos produtos alimentícios assados podem incluir Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus e Bifidobacterium breve, e os fungos não patogênicos podem incluir Saccharomyces boulardii e Saccharomyces cerevisiae.
[00176] Em certas modalidades, a enzima incluída na composição probiótica contida nos produtos alimentícios assados pode incluir amilase, celulase, hemicelulase, lisozima, pectinase, DNase I, Serratia peptidase ou Serratiopeptidase, complexo de hemicelulase/pectinase, - 1,3-glucanase, protease ácida, protease alcalina, glucoamilase, endoglucanase, xilanase, lipase, lisozima, complexo de protease/peptidase, dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), quitosanase, bromelaína, papaína, kiWi protease actinidi, uma protease derivada de planta, e fitase.
[00177] Em uma modalidade específica, o produto alimentício assado contém uma composição probiótica que compreende Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, Lactobacillus acidophilus RP 32 e Saccharomyces boulardii SB 48. Em uma modalidade específica, o produto alimentício assado contém uma composição probiótica compreendendo Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, Lactobacillus acidophilus RP 32, Saccharomyces boulardii SB 48 e amilase.
[00178] Surpreendentemente, verificou-se que o processo de assar para a produção de um produto assado não compromete materialmente a viabilidade ou eficácia da composição probiótica contida no mesmo. Por exemplo, as cepas microbianas (cepas fúngicas não patogênicas e bacterianas não patogênicas) e/ou uma enzima incluída na composição probiótica contida no produto alimentício assado sobrevivem a temperaturas de assar de até 450 F (232,2 C) (por exemplo, 200, 250, 300, 350, 400 ou 450 F (93,3; 121,1; 148,8; 176,7; 204,4; 232,2 C) por até 90 minutos (por exemplo, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ou 90 minutos). Como resultado, os produtos alimentícios assados completos contêm composições probióticas com cepas microbianas viáveis (cepas fúngicas e bacterianas não patogênicas) e, opcionalmente, uma enzima.
[00179] Verificou-se surpreendentemente que a composição probiótica melhora a absorção de proteínas na presença ou na ausência de biofilme. Assim, é contemplado que o produto alimentício cozido é rico em proteínas, por exemplo, compreendendo pelo menos 25%, 50%, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes ou cerca de 5 vezes mais proteína por unidade de peso do que a média de produtos alimentícios assados do tipo, para consumo por indivíduos com biofilme, bem como por indivíduos saudáveis. Em certas modalidades, o produto alimentício cozido compreende uma proteína selecionada de proteína de soro de leite, proteína de soja, proteína de leite, proteína de ovo, proteína de músculo animal, proteína de peixe, proteína de arroz integral, proteína de ervilha, proteína de cânhamo, proteína de oxicoco e proteína de alcachofra. Em certas modalidades, o produto alimentício cozido compreende uma proteína do leite, opcionalmente em que a proteína do leite é caseína. Em certas modalidades, a proteína é uma proteína natural. Em certas modalidades, a proteína é um hidrolisado de proteína (por exemplo, um hidrolisado parcial de uma proteína natural). A proteína pode ser compreendida em uma fonte de alimento natural (por exemplo, em leite ou produto lácteo, soja, ovo, músculo animal, peixe, arroz integral ou ervilha) usada na preparação do produto alimentício cozido. Alternativamente, a proteína pode ser isolada e/ou purificada de uma fonte de alimento natural e adicionada ao produto alimentício cozido.
[00180] O produto alimentício cozido pode ser produzido cozinhando um ou mais de ingredientes alimentícios com uma composição probiótica. Consequentemente, a invenção também fornece kits de preparação de alimentos que compreendem um ou mais de ingredientes alimentícios e a composição probiótica divulgada nesse documento. Os ingredientes alimentícios e a composição probiótica podem ser acondicionados separadamente ou em uma composição mista. Se acondicionado separadamente, o kit de preparação de alimentos pode compreender adicionalmente uma folha de instruções, em uma forma impressa ou eletrônica, para misturar a composição probiótica com os ingredientes alimentícios antes ou após o cozimento. (V) PRODUTOS DE BEBIDA
[00181] A invenção também fornece bebidas que contêm qualquer uma das composições probióticas da invenção descritas nesse documento. Bebidas de exemplo podem incluir, mas não estão limitadas a: shakes de proteína, smoothies de proteína, bebidas nutricionais e bebidas esportivas.
[00182] Em certas modalidades, o produto de bebida compreende uma composição probiótica que compreende (i) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas fúngicas não patogênicas e (ii) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas bacterianas não patogênicas. Em certas modalidades, o produto de bebida compreende uma composição probiótica que compreende (i) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas fúngicas não patogênicas, (ii) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas bacterianas não patogênicas e (iii) uma enzima.
[00183] Em certas modalidades, as bactérias não patogênicas incluídas na composição probiótica contida nos produtos de bebida podem incluir Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus e Bifidobacterium, e os fungos não patogênicos podem incluir Saccharomyces boulardii e Saccharomyces cerevisiae.
[00184] Em certas modalidades, a enzima incluída na composição probiótica contida nos produtos de bebida pode incluir amilase, celulase, hemicelulase, lisozima, pectinase, DNase I, Serratia peptidase ou Serratiopeptidase,
complexo de hemicelulase/pectinase, -1,3-glucanase, protease ácida, protease alcalina, glucoamilase, endoglucanase, xilanase, lipase, lisozima, complexo de protease/peptidase, dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), quitosanase, bromelaína, papaína, kiWi protease actinidi, uma protease derivada de planta e fitase. Tal enzima é particularmente útil para romper um biofilme, e o produto de bebida que compreende a enzima é adequado para consumo por um indivíduo que tem um biofilme de bactérias e/ou fungos patogênica(o)s.
[00185] Em uma modalidade específica, o produto de bebida contém uma composição probiótica que compreende Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, Lactobacillus acidophilus RP 32 e Saccharomyces boulardii SB
48. Em uma modalidade específica, o produto de bebida contém uma composição probiótica que compreende Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, Lactobacillus acidophilus RP 32, Saccharomyces boulardii SB 48 e amilase.
[00186] Verificou-se surpreendentemente que a composição probiótica melhora a absorção de proteínas na presença ou na ausência de biofilme. Assim, é contemplado que a composição pode ser adicionada a uma bebida rica em proteínas, por exemplo, compreendendo pelo menos 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% ou 10% de proteína, para consumo por indivíduos com biofilme, bem como por indivíduos saudáveis. Em certas modalidades, o produto de bebida compreende uma proteína selecionada de proteína de soro de leite, proteína de soja, proteína de leite, proteína de ovo, proteína de músculo animal, proteína de peixe, proteína de arroz integral, proteína de ervilha, proteína de cânhamo, proteína de oxicoco e proteína de alcachofra. Em certas modalidades, o produto de bebida compreende uma proteína do leite, opcionalmente em que a proteína do leite é caseína. Em certas modalidades, a proteína é uma proteína natural. Em certas modalidades, a proteína é um hidrolisado de proteína (por exemplo, um hidrolisado parcial de uma proteína natural). A proteína pode ser compreendida em uma fonte de alimento natural (por exemplo, no leite ou produto lácteo, soja, ovo, músculo animal, peixe, arroz integral ou ervilha) usada na preparação do produto de bebida. Alternativamente, a proteína pode ser isolada e/ou purificada de uma fonte alimentar natural e adicionada ao produto de bebida. Em certas modalidades, a bebida produzida compreende adicionalmente um nutriente selecionado do grupo que consiste em um carboidrato (por exemplo, glicose, frutose, sacarose, maltose ou maltodextrina), um eletrólito (por exemplo, sódio, cloreto, potássio, cálcio ou magnésio), uma vitamina (por exemplo, vitamina B3, vitamina B6, vitamina B12, vitamina C, vitamina D, vitamina E), um antioxidante (por exemplo, suco de romã, suco de frutos vermelhos, chá, cafeína), citrulina e carnitina.
[00187] O produto de bebida pode ser produzido misturando um ou mais de ingredientes de bebida com uma composição probiótica. Consequentemente, a invenção também fornece kits de preparação de bebidas compreendendo um ou mais de ingredientes de bebida e da composição probiótica divulgada nesse documento. Os ingredientes da bebida e a composição probiótica podem ser acondicionados separadamente ou em uma composição mista. Se acondicionado separadamente, o kit de preparação de bebida pode compreender adicionalmente uma folha de instruções, em uma forma impressa ou eletrônica, para misturar a composição probiótica com os ingredientes da bebida. (VI) MÉTODOS PARA ROMPER UM BIOFILME E TRATAMENTO
[00188] Além disso, a invenção fornece um método para romper um biofilme ou prevenir a formação de um biofilme que compreende bactérias patogênicas e fungos patogênicos dispostos dentro de uma região pré-selecionada de um indivíduo em necessidade de tratamento. O método compreende a administração ao indivíduo de uma ou múltiplas unidade(s) (por exemplo, cápsulas ou comprimidos) de composições ou formas de dosagem descritas nesse documento, desse modo para romper o biofilme. Em certas modalidades, o biofilme é disposto no trato gastrointestinal, trato urinário, trato reprodutivo, trato respiratório superior (por exemplo, nariz), trato respiratório inferior (por exemplo, pulmão), trato biliar, boca, olho, nariz, ouvido ou pele. O indivíduo pode ser um mamífero (por exemplo, humano, um animal de companhia (por exemplo, cão, gato ou coelho) ou animal de criação (por exemplo, vaca, ovelha, porco, cabra, cavalo, burro e mula, búfalo, bois ou camelo)).
[00189] Dependendo das circunstâncias, as cepas bacterianas não patogênicas na composição ou forma de dosagem podem (i) deslocar as bactérias patogênicas no biofilme, (ii) interferir na fixação da(o) bactéria/fungo patogênica(o) a um substrato do biofilme, (iii) deslocar a(o) bactéria/fungo patogênica(o) de uma matriz polimérica extracelular presente no biofilme, (iv) prevenir a filamentação do fungo patogênico no biofilme, (v) uma combinação de qualquer um dos anteriores, (vi) inibir o fatores de virulência das bactérias e os fungos patogênica(o)s (por exemplo, germinação, aderência, etc.).
[00190] Sob certas circunstâncias, a administração da composição ou forma de dosagem ao indivíduo mantém o equilíbrio total do microbioma intestinal do indivíduo (incluindo o micobiome e/ou bacterioma do indivíduo), sem causar placa digestiva prejudicial, suportando assim a saúde digestiva ideal do indivíduo.
[00191] Em certas modalidades, a administração da composição ou forma de dosagem ao indivíduo trata um desequilíbrio no microbioma do indivíduo (por exemplo, permite a restauração do microbioma natural em uma região do indivíduo) ou trata um distúrbio, tais como, hiperamonemia, Colite por Clostridium difficile, encefalopatia hepática associada à cirrose, doença inflamatória do intestino, doença de Crohn, colite ulcerativa, diarreia e/ou doença do intestino irritável. Em certas modalidades, a administração da composição ou forma de dosagem ao indivíduo trata distúrbios ou sintomas digestivos, por exemplo, azia/GERD, IBD e IBS, inchaço, diarreia, gases, dor de estômago e/ou cólicas estomacais.
[00192] Como usado nesse documento, os termos “tratar”, “tratando” ou “tratamento” e outros equivalentes gramaticais, como usados nesse documento, incluem o alívio, a redução, a melhoria ou a prevenção de uma doença, uma condição ou sintomas, prevenção de sintomas adicionais, melhorar ou prevenir as causas subjacentes dos sintomas, inibir a doença ou condição, por exemplo, deter o desenvolvimento da doença ou condição, aliviar a doença ou condição, causar regressão da doença ou condição, aliviar uma condição causada pela doença ou condição, ou parar os sintomas da doença ou condição, e pretendem incluir profilaxia.
[00193] Como usado nesse documento, os termos, “indivíduo”, “paciente”, “indivíduo em necessidade do mesmo” e “paciente em necessidade do mesmo” são usados indistintamente nesse documento e referem-se a um organismo vivo, incluindo animais e humanos, sofrendo de, ou propenso a, uma doença ou condição, que pode ser tratada pelos métodos e composições fornecidos nesse documento. O indivíduo pode ser um animal humano ou não humano. (VII) MELHORIA DA ABSORÇÃO DE NUTRIENTES EM UM INDIVÍDUO
[00194] A invenção fornece métodos e composições para melhorar a absorção de nutrientes (por exemplo, proteínas, aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos, vitaminas, minerais e cofatores) em um indivíduo. A presente divulgação prevê que uma composição probiótica pode melhorar a absorção de proteínas de uma maneira independente de biofilme. Consequentemente, em certas modalidades, o indivíduo é saudável ou não é conhecido ou suspeito de ter um biofilme no revestimento interno gastrointestinal. A composição probiótica divulgada nesse documento também pode ser usada para tratar um indivíduo que é diagnosticado com um(a) doença ou distúrbio do trato gastrointestinal (por exemplo, hiperamonemia, colite por Clostridium difficile, encefalopatia hepática associada à cirrose, doença inflamatória intestinal, doença de Crohn, colite ulcerativa e/ou doença do intestino irritável), mas não foi testada para biofilme no revestimento interno gastrointestinal.
[00195] Além disso, a invenção fornece métodos e composições para melhorar a absorção de nutrientes em um indivíduo, em que o indivíduo tem um biofilme. Organismos patogênicos, tais como, Candida tropicalis, Candida albicans, Escherichia coli e Serratia marcescens podem trabalhar juntos para formar um biofilme robusto no revestimento interno gastrointestinal de um indivíduo. Ao formar uma camada sobre o revestimento intestinal, esses biofilmes eliminam nutrientes (por exemplo, açúcares) para alimentar seu próprio crescimento e podem impedir a absorção de nutrientes através do revestimento interno gastrointestinal e, subsequentemente, podem reduzir a disponibilidade de nutrientes. Consequentemente, a invenção fornece métodos e composições para melhorar a absorção de nutrientes em um indivíduo, por consumo ou administração de uma composição probiótica que leva à ruptura ou eliminação de biofilmes no revestimento gastrointestinal do indivíduo.
[00196] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos e composições para melhorar a absorção de nutrientes em um indivíduo divulgado nesse documento, a melhoria na absorção de nutrientes em um indivíduo inclui melhorar a absorção de nutrientes, tais como, mas não se limitando a, vitaminas (por exemplo, vitaminas A, B, C, D, E, K), proteínas, aminoácidos incluindo, mas não se limitando a, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptofano e valina; colágeno, minerais, incluindo, mas não limitados a, cálcio, cromo, cobre, potássio, ferro, sódio, manganês, magnésio, molibdênio, zinco, fósforo, enxofre e cloreto; e carboidratos incluídos, mas não limitados a, açúcares; e cofatores (por exemplo, íons metálicos e cofatores orgânicos
(por exemplo, trifosfato de adenosina (ATP), coenzima A (CoA, SCoA, CoASH), dinucleotídeo de flavina adenina (FAD) e dinucleotídeo de adenina e nicotinamida (NAD+))).
[00197] Em certas modalidades, o nutriente é uma proteína. A proteína pode ser compreendida em um(a) alimento ou bebida rico(a) em proteínas (ver, por exemplo, as subseções “Produtos Alimentícios Cozidos” e “Produtos de Bebidas” supra). Em certas modalidades, a proteína é selecionada de proteína de soro de leite, proteína de soja, proteína de leite, proteína de ovo, proteína de músculo animal, proteína de peixe, proteína de arroz integral, proteína de ervilha, proteína de cânhamo, proteína de oxicoco e proteína de alcachofra. Em certas modalidades, o produto alimentício cozido compreende uma proteína do leite, opcionalmente em que a proteína do leite é caseína. Em certas modalidades, a proteína é uma proteína natural. Em certas modalidades, a proteína é um hidrolisado de proteína (por exemplo, um hidrolisado parcial de uma proteína natural). A proteína pode ser compreendida em uma fonte de alimento natural (por exemplo, no(a) leite ou produto lácteo, soja, ovo, músculo animal, peixe, arroz integral ou ervilha) cozida ou de outra forma processada para consumo. Alternativamente, a proteína pode ser isolada e/ou purificada de uma fonte de alimento natural e adicionada a um produto alimentício ou de bebida para consumo.
[00198] Em certas modalidades, a melhoria na absorção de nutrientes (por exemplo, proteínas, aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos, vitaminas, minerais e cofatores) em um indivíduo compreende o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição probiótica compreendendo (i) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas fúngicas não patogênicas e (ii) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas bacterianas não patogênicas. Em certas modalidades, o método compreende o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição probiótica que compreende (i) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas fúngicas não patogênicas, (ii) uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) de cepas bacterianas não patogênicas e (iii) uma enzima.
[00199] Em certas modalidades, as bactérias não patogênicas incluídas na composição probiótica podem incluir Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus e Bifidobacterium breve, e os fungos não patogênicos podem incluir Saccharomyces boulardii e Saccharomyces cerevisiae.
[00200] Em certas modalidades, a enzima incluída na composição probiótica pode incluir um ou mais de: amilase, celulase, hemicelulase, lisozima, pectinase, DNase I, Serratia peptidase ou Serratiopeptidase, complexo de hemicelulase/pectinase, -1,3-glucanase, protease ácida, protease alcalina, glucoamilase, endoglucanase, xilanase, lipase, lisozima, complexo de protease/peptidase, dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), quitosanase, bromelaína, papaína, kiWi protease actinidi, uma protease derivada de planta e fitase.
[00201] Em uma modalidade específica, a melhoria na absorção de nutrientes em um indivíduo compreende o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição probiótica compreendendo Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium S 46, Lactobacillus acidophilus RP 32 e Saccharomyces boulardii breve SB 48. Em uma modalidade específica, a melhoria na absorção de nutrientes em um indivíduo compreende o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição probiótica que compreende Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, Lactobacillus acidophilus RP 32, Saccharomyces boulardii SB 48 e amilase.
[00202] Em certas modalidades, o indivíduo consome a composição probiótica simultaneamente com o consumo do nutriente (por exemplo, proteínas, aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos, vitaminas, minerais e cofatores). Em certas modalidades, o indivíduo consome a composição probiótica antes (por exemplo, dentro de 1, 2, 3 ou 4 horas antes) ou após (por exemplo, dentro de 30 minutos ou 1 hora após) o consumo do nutriente (por exemplo, proteínas, aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos, vitaminas, minerais e cofatores) (por exemplo, pelo menos 10, 15, 20, 25 ou 30 gramas de proteína em uma porção). Em certas modalidades, o nutriente é uma proteína, opcionalmente em que pelo menos 10, 15, 20, 25 ou 30 gramas de proteína são consumidos em uma porção.
[00203] Em certas modalidades, a composição probiótica e o nutriente (por exemplo, proteínas, aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos, vitaminas, minerais e cofatores) são compreendidos em uma composição única (por exemplo, produto alimentício ou de bebida). Por exemplo, a composição probiótica pode ser adicionada ao alimento ou à bebida rico(a) em nutrientes (por exemplo, rico(a) em proteínas) pelo fabricante. Alternativamente, a composição probiótica e uma composição que compreende o nutriente (por exemplo, proteínas, aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos, vitaminas, minerais e cofatores) podem ser acondicionados separadamente, e um usuário é instruído a misturar essas embalagens, opcionalmente dentro 1 hora, dentro de 4 horas, dentro de 1 dia, dentro de 1 semana ou dentro de 1 mês antes do consumo.
[00204] Também são contemplados nesse documento métodos e composições para melhorar a absorção de nutrientes (por exemplo, proteínas, aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos, vitaminas, minerais e cofatores) em um indivíduo, em que um usuário é instruído a consumir a composição probiótica contemporânea, anterior (por exemplo, dentro de 1, 2, 3 ou 4 horas antes), ou subsequente (por exemplo, dentro de 30 minutos ou 1 hora após) ao consumo do nutriente (por exemplo, proteínas, aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos, vitaminas, minerais e cofatores), em que a composição probiótica não é misturada com uma composição que compreende o nutriente (por exemplo, proteínas, aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos, vitaminas, minerais e cofatores) antes do consumo. Em uma modalidade específica, a composição probiótica e a composição que compreende o nutriente (por exemplo, proteínas, aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos, vitaminas, minerais e cofatores) não são fornecidas pelo mesmo fabricante ou distribuidor.
[00205] Em algumas modalidades, o indivíduo consome, ou é administrado com, a composição probiótica por 2-8 semanas (por exemplo, 6 semanas), em que a composição probiótica é dispensada como um pó com revestimento entérico compreendendo uma ou mais cepas bacterianas não patogênicas isoladas e viáveis e cepas fúngicas não patogênicas isoladas e viáveis contidas em uma cápsula. Em algumas modalidades, o indivíduo consome, ou é administrado com, a composição probiótica por até 7 dias ou ciclos repetidos de 7 dias. Em algumas modalidades, o indivíduo consome, ou é administrado com, a composição probiótica por até um mês ou ciclos repetidos de um mês. (VIII) MÉTODO DE ADEQUAÇÃO DE TESTE DE UM INDIVÍDUO PARA
TRATAMENTO
[00206] A invenção também fornece um método para identificar um indivíduo de teste adequado para o tratamento com uma composição ou forma de dosagem descrita nessa invenção. O método compreende: (a) quantificar o número ou a densidade e/ou a abundância de organismos de (i) pelo menos uma cepa bacteriana não patogênica e (ii) pelo menos uma cepa fúngica não patogênica presente em uma amostra de tecido ou fluido corporal colhido da região do assunto de teste; e (b) comparar o número ou a densidade de organismos quantificados na amostra com o número ou a densidade de organismos correspondentes presentes em um tamanho de amostra correspondente de uma região correspondente de um indivíduo saudável. Quando o número ou nível de organismos na amostra do indivíduo de teste é menor do que o número ou nível de organismos presentes na região correspondente do indivíduo saudável, o indivíduo de teste é adequado para tratamento com a forma de dosagem.
[00207] Em certas modalidades, as bactérias não patogênicas que são quantificadas podem incluir Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus e Bifidobacterium breve e/ou os fungos não patogênicos que são quantificados podem incluir Saccharomyces boulardii e
Saccharomyces cerevisiae.
[00208] Nos casos em que o número ou a densidade de um dos organismos na amostra do indivíduo de teste é menor do que o número ou a densidade do organismo correspondente presente na região correspondente do indivíduo saudável, uma pontuação de “0” (zero) é atribuída. Por outro lado, nos casos em que o número ou a densidade de um dos organismos na amostra do indivíduo de teste é igual ou maior que o número ou a densidade do organismo correspondente presente na região correspondente do indivíduo saudável, uma pontuação de “1” É atribuída. Uma pontuação acumulativa de 8 para todos os organismos (isto é, em uma determinada amostra todos os organismos bacterianos e fúngicos testados são maiores que na amostra de controle, portanto, cada um recebe uma pontuação de “1”) identifica o indivíduo como tendo um microbioma “equilibrado” (FIGURA 3). Da mesma forma, uma pontuação de 7 identifica o indivíduo como tendo um microbioma equilibrado (FIGURA 3). Em contraste, uma pontuação de 4-6 identifica o indivíduo como tendo um microbioma que está no limite entre o microbioma equilibrado e desequilibrado, e uma pontuação de 0-3 identifica o indivíduo como tendo um microbioma “desequilibrado” (FIGURA 3).
[00209] Quando a pontuação do indivíduo de teste é 0- 3, então o indivíduo de teste é identificado como candidato adequado para o tratamento, rompendo um biofilme compreendendo bactérias patogênicas e fungos patogênicos com uma forma de dosagem que compreende uma composição de uma ou mais de cepas bacterianas não patogênicas, uma enzima e uma cepa fúngica não patogênica. Quando a pontuação do indivíduo de teste é 4-6, então o indivíduo de teste é identificado como adequado para o tratamento após monitoramento adicional por 2-6 semanas. Quando a pontuação do indivíduo de teste é de 7 a 8, o indivíduo de teste é identificado como sendo saudável, onde o indivíduo não precisa de tratamento com uma forma de dosagem descrita nessa invenção. (IX) MÉTODOS DE TRATAMENTO DA INFLAMAÇÃO INTESTINAL
[00210] A invenção fornece um método de tratamento da inflamação intestinal em um indivíduo em necessidade com altos níveis de Proteobacteria e baixos níveis de Candida em relação a um indivíduo sem inflamação intestinal, que é alcançado por consumo ou por administração ao indivíduo da combinação de super greens 1 a invenção. A combinação de super greens 1 pode suportar o nível de Proteobacteria saudável, que pode tratar a disbiose intestinal (por exemplo, as fibras prebióticas podem melhorar o nível de Proteobacteria; os peptídeos de colágeno podem suportar a saúde intestinal e/ou a barreira mucosa; a vitamina A pode suportar a cura da mucosa no intestino).
[00211] A invenção também fornece um método de tratamento da inflamação intestinal em um indivíduo com níveis elevados de Proteobacteria e Candida em relação a um indivíduo sem inflamação intestinal, que é alcançado pelo consumo pelo, ou pela administração ao, indivíduo da combinação de super greens 4 da invenção. (X) MÉTODOS DE EQUILÍBRIO DA RAZÃO DOS NÍVEIS DE
FIRMICUTES E BACTEROIDETES
[00212] Em certas modalidades, a invenção também fornece um método para equilibrar o microbioma de um indivíduo, ajustando a razão dos níveis de Firmicutes e
Bacteroidetes. Um desequilíbrio na razão de Firmicutes para Bacteroidetes devido ao aumento dos níveis de Firmicutes foi associado à obesidade. Em certas modalidades, a razão dos níveis de Firmicutes e Bacteroidetes é equilibrada pelo consumo ou pela administração da combinação de super greens 2 da presente invenção ao indivíduo.
[00213] Em certas modalidades, a invenção também fornece um método para equilibrar o microbioma em uma população com nível elevado de Firmicutes em relação a indivíduos com níveis normais de Firmicutes. Em certas modalidades de exemplo, a abundância relativa de Firmicutes em indivíduos saudáveis é de até cerca de 38% da microbiota intestinal humana. Em certas modalidades, os sintomas de um indivíduo com nível elevado de Firmicutes incluem sono desordenado, como no caso de jet-lag e obesidade. Em certas modalidades, a combinação de super greens 3 é consumida por, ou administrada a, um indivíduo para reduzir o nível elevado de Firmicutes no intestino do indivíduo. (XI) DEFINIÇÕES
[00214] As seguintes definições são incluídas com a finalidade de compreender o presente relatório descritivo e para construir as reivindicações de patentes anexas.
[00215] Ao longo da descrição, onde as composições são descritas como tendo, incluindo ou compreendendo componentes específicos, ou onde os processos e métodos são descritos como tendo, incluindo ou compreendendo etapas específicas, é contemplado que, adicionalmente, existem composições de presente invenção que consiste essencialmente em, ou consistem em, os componentes recitados, e que existem processos e métodos de acordo com a presente invenção que consistem essencialmente em, ou consistem em, etapas de processamento recitadas.
[00216] No pedido, onde um elemento ou componente é dito estar incluído e/ou selecionado de uma lista de elementos ou componentes recitados, deve ser entendido que o elemento ou componente pode ser qualquer um dos elementos ou componentes recitados, ou o elemento ou componente pode ser selecionado de um grupo que consiste em dois ou mais dos elementos ou componentes recitados.
[00217] Além disso, deve ser entendido que os elementos e/ou as características de uma composição ou método descrita(o) nesse documento podem ser combinado(a)s de uma variedade de maneiras sem se afastar do espírito e do escopo da presente invenção, seja explícito ou implícito nesse documento. Por exemplo, quando é feita referência a uma composição particular, essa composição pode ser usada nas várias modalidades dessas composições da presente invenção e/ou nos métodos da presente invenção, a menos que seja entendido de outra forma a partir do contexto. Em outras palavras, dentro desse pedido, as modalidades foram descritas e representadas de uma forma que permite que um pedido claro e conciso seja escrito e desenhado, mas pretende-se e será apreciado que as modalidades podem ser combinadas ou separadas de várias maneiras, sem se separar do presentes ensinamentos e invenção(ões). Por exemplo, será apreciado que todos os recursos descritos e representados nesse documento podem ser aplicáveis a todos os aspectos da(s) invenção(ões) descrita(s) e representada(s) nesse documento.
[00218] Deve ser entendido que a expressão “pelo menos um de” inclui individualmente cada um dos objetos recitados após a expressão e as várias combinações de dois ou mais dos objetos recitados, a menos que seja entendido de outra forma a partir do contexto e uso. A expressão “e/ou” em conexão com três ou mais objetos recitados deve ser entendida como tendo o mesmo significado, a menos que seja entendido de outra forma a partir do contexto.
[00219] O uso do termo “inclui”, “incluem”, “incluindo”, “têm”, “tem”, “tendo”, “contêm”, “contém” ou “contendo”, incluindo equivalentes gramaticais dos mesmos, deve ser entendido geralmente como aberto e não limitante, por exemplo, não excluindo elementos ou etapas adicionais não recitado(a)s, a menos que de outra forma especificamente declarado ou entendido a partir do contexto.
[00220] Quando o uso do termo “cerca de” é anterior a um valor quantitativo, a presente invenção também inclui o próprio valor quantitativo específico, a menos que especificamente indicado de outra forma. Como usado nesse documento, o termo “cerca de” se refere a uma variação de ± 10% do valor nominal, a menos que indicado ou inferido de outra forma.
[00221] Quando um peso molecular é fornecido e não um valor absoluto, por exemplo, de um polímero, então o peso molecular deve ser entendido como um peso molecular médio, a menos que indicado de outra forma ou entendido a partir do contexto.
[00222] Deve ser entendido que a ordem das etapas ou a ordem para a realização de certas ações é imaterial, desde que a presente invenção permaneça operável. Além disso, duas ou mais etapas ou ações podem ser realizadas simultaneamente.
[00223] Em vários lugares no presente relatório descritivo, componentes ou características dos mesmos são divulgados em grupos ou em faixas. Pretende-se especificamente que a descrição inclua cada uma das subcombinações individuais dos membros de tais grupos e faixas. A título de outros exemplos, um número inteiro na faixa de 1 a 20 destina-se especificamente a divulgar individualmente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 e 20.
[00224] O uso de todo e qualquer exemplo, ou linguagem exemplar nesse documento, por exemplo, “tal como” ou “incluindo”, destina-se meramente a ilustrar melhor a presente invenção e não representa uma limitação no escopo da invenção, a menos que reivindicado. Nenhuma linguagem na especificação deve ser interpretada como indicando qualquer elemento não reivindicado como essencial para a prática da presente invenção.
[00225] Em geral, as composições que especificam uma porcentagem são em peso, a menos que especificado de outra forma.
[00226] O termo “proteína” refere-se a uma molécula que compreende uma cadeia de peptídeo que compreende pelo menos 2 resíduos de aminoácidos, ou um complexo que compreende duas ou mais dessas moléculas. A cadeia de peptídeo pode ser ramificada ou não, linear ou cíclica e pode ser modificada por acetilação, amidação, aminoetilação, biotinilação, carbamilação, carbonilação, citrulinação, desamidação, desiminação, eliminilação, glicosilação, lipidação, metilação, peguilação, fosforilação, sumoilação, ou combinações dos mesmos. Uma proteína pode compreender adicionalmente um ou mais de grupos não peptídicos ligados covalentemente ou não covalentemente.
[00227] Como usado nesse documento, o termo “ingrediente nutricional” refere-se a um ou mais ingrediente(s) adicionado(s) a uma composição de combinação de super greens (por exemplo, combinação de super greens 1- 4) da presente invenção, que pode ser um ingrediente natural sem efeito fisiológico adverso conhecido em um humano, ou conhecido por ser benéfico ou necessário para a fisiologia e a saúde ideais de um humano. Por exemplo, o ingrediente nutricional adicionado à combinação de super greens 1-4 pode ser qualquer um ou mais de um prebiótico (por exemplo, inulina), peptídeos de colágeno, alcaçuz deglicirrizinado (DGL), raiz de marshmallow, vitaminas (incluindo, mas não se limitando a, vitamina A (por exemplo, forma retinila), vitamina D3 e vitamina C, ou uma combinação dos mesmos), minerais, espirulina, chlorella, dulce, grama de cevada, concentrado de suco de alfafa, grama de trigo, folha de espinafre, folha de couve, raiz de beterraba, cinórrodo, fruto de açaí, fruto de framboesa, fruto de mirtilo, fruto de goji, extrato de fruto de mirtilo, extrato de folha de chá verde, ginkgo biloba, raiz de Echinacea purpurea, extrato de raiz de alcaçuz, extrato de cardo de leite, raiz de urtiga comum, geleia real, extrato de semente de uva, pólen de abelha, raiz de maca peruana, cogumelo reishi, raiz de rhodiola, raiz de Ginseng Indiano e fibra (por exemplo, lecitina de girassol, fibra de maçã ou farelo de arroz integral).
[00228] A prática da invenção será mais completamente entendida a partir dos exemplos anteriores, que são apresentados nesse documento apenas para fins ilustrativos e não devem ser interpretados como limitando a invenção de qualquer forma.
EXEMPLOS
[00229] Os seguintes exemplos são meramente ilustrativos e não se destinam a limitar o escopo ou o conteúdo da invenção de qualquer forma. EXEMPLO 1 - Inibição da Filamentação de Candida Tropicalis em Biofilmes Maduros por Cepas Bacterianas e Fúngicas Probióticas
[00230] Nesse exemplo, uma composição compreendendo quatro cepas microbianas não patogênicas (três cepas bacterianas e fúngicas), incluindo Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium breve e Saccharomyces boulardii (“as cepas probióticas”) foi usada para romper (tratar) um biofilme de espécies mistas formado pelos microrganismos patogênicos Candida tropicalis, Escherichia coli e Serratia marcescens.
[00231] As cepas probióticas Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus e Saccharomyces boulardii com número de células iniciais de aproximadamente 106 CFUs por cepa foram cultivadas em base de nitrogênio de levedura (YNB) e caldo de infusão de cérebro e coração (BHI) (razão do caldo YNB e BHI foi 1:1) em tubo cônico estéril de 50 mL e incubado a 37 °C por 24 horas. B. breve com número inicial de células de aproximadamente 106 CFUs foi cultivado em condições anaeróbicas em caldo YNB e BHI (razão do caldo YNB e BHI foi de 1:1) em um tubo cônico estéril de 50 mL e incubado a 37 °C por 24 horas. Após 24 horas de crescimento celular, as duas culturas foram misturadas e, em seguida, centrifugadas suavemente a 1.500g por 5 minutos para reter algumas das cepas probióticas no sobrenadante. O sobrenadante contendo as cepas probióticas foi então decantado do tubo e armazenado a -20 °C até o uso.
[00232] Os biofilmes foram formados em discos de elastômero de silício (SE). Inóculos únicos (C. tropicalis sozinho) e mistos de espécies (C. tropicalis, E. coli e S. marcescens) foram adicionados a placas de 12 poços contendo discos SE que haviam sido previamente embebidos em soro fetal bovino (FBS) por 24 horas, e pode aderir à superfície durante 90 minutos. Após a fase de adesão, os discos foram enxaguados duas vezes com solução salina tamponada com fosfato (PBS) para remover quaisquer células não aderidas e, em seguida, colocados em uma nova placa de 12 poços contendo 4 mL de meio YNB/BHI a uma concentração de 1:1. As placas foram então incubadas a 37 °C por 24 horas para permitir a maturação do biofilme. Após a fase de maturação, os biofilmes foram removidos e cuidadosamente enxaguados com PBS, e colocados em uma nova placa de 12 poços contendo o probiótico contendo o sobrenadante e incubados a 37 °C por mais 24 horas.
[00233] Em seguida, os discos foram enxaguados com PBS estéril e colocados em glutaraldeído a 2% por 24 horas a 4 °C. Após a fixação, os discos foram preparados para microscopia eletrônica de varredura (MEV). Resumidamente, os discos fixos foram enxaguados em cacodilato de sódio 0,1 M 3 vezes durante 10 minutos cada. Os discos foram então colocados em tetróxido de ósmio a 1% durante 1 hora a 4 °C. Após a fixação secundária em tetróxido de ósmio, os discos foram enxaguados novamente em cacodilato de sódio 0,1 M 3 vezes por 10 minutos cada, e colocados em acetato de uranila durante a noite a 4 °C. Os discos foram removidos e enxaguados duas vezes em água estéril por 5 minutos cada antes de passar por um processo de desidratação gradual de etanol usando 25, 50, 75, 95 e 100% de etanol. Depois de secas ao ar, as amostras foram colocadas em um dessecador por 48 horas para completar o processo de desidratação. As amostras desidratadas foram revestidas por pulverização catódica com paládio por 60 segundos e visualizadas com o microscópio eletrônico de varredura Nova NanoLab 200 FEG- SEM/FIB em modo de alto vácuo.
[00234] O tratamento dos biofilmes com as cepas probióticas levou a uma redução na capacidade da Candida de formar filamentos (um fator de virulência bem conhecido das espécies de Candida) tanto em biofilmes de uma única espécie (FIGURAS 1A e 1B) quanto em biofilmes de espécies mistas triplas (FIGURAS 2A e 2B). Os dados demonstraram que, ao inibir a filamentação fúngica, as cepas probióticas (Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium breve, Saccharomyces boulardii) são capazes de reduzir a virulência de Candida e, portanto, impedi-la de invadir a mucosa epitelial. EXEMPLO 2 - Ruptura de um Biofilme Compreendendo Organismos Patogênicos com uma Composição Compreendendo Cepas Bacterianas e Fúngicas não Patogênicas e uma Enzima
[00235] Nesse exemplo, uma composição de quatro cepas microbianas não patogênicas, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium breve, Saccharomyces boulardii (“as cepas probióticas”) e uma enzima é usada para romper um biofilme formado por microrganismos patogênicos Candida tropicalis, Escherichia coli, e Serratia marcescens.
[00236] As cepas probióticas são cultivadas como descrito no Exemplo 1. As cepas probióticas são coletadas do sobrenadante ou dos pellets celulares obtidos após a centrifugação. Uma enzima (por exemplo, amilase) é adicionada ao pellet e a composição contendo a enzima resultante é armazenada a -20 °C até o uso. As amilases adicionadas à composição podem ser Bacillus slearolhermophilus amylase, Bacillus amyloliquefaciens amylase, Bacillus subtilis amylase, Bacillus licheniformis amylase, Aspergillus niger amylase, e/ou Aspergillus oryzae amylase.
[00237] Os biofilmes são criados como descrito no Exemplo 1. Após a formação do biofilme, os discos são enxaguados duas vezes com PBS para remover quaisquer células não aderidas e, em seguida, colocados em uma nova placa de 12 poços contendo 4 mL da composição de enzima probiótica. As placas são então incubadas a 37 °C por 24 horas, depois os biofilmes são removidos e cuidadosamente enxaguados com PBS, e colocados em glutaraldeído a 2% por 24 horas a 4 °C. Após a fixação, os discos são preparados para microscopia eletrônica de varredura (SEM), como descrito no Exemplo 1.
[00238] É contemplado que a adição da composição compreendendo as cepas bacterianas e fúngicas não patogênicas e uma enzima ao biofilme de espécies mistas será eficaz na inibição do crescimento do biofilme em comparação com o biofilme de controle não tratado que produz um biofilme muito grande, placa densa, com extensa rede de hifas. EXEMPLO 3 - Método de Identificação de um Indivíduo de Teste Adequado para Tratamento
[00239] Esse exemplo descreve um método para identificar se um indivíduo de teste é adequado para tratamento com uma forma de dosagem descrita nessa invenção.
[00240] o número ou a densidade das cepas bacterianas não patogênicas e das cepas fúngicas não patogênicas são medidos e quantificados a partir da amostra cultivada. Exemplos de bactérias não patogênicas que são quantificadas incluem Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus e Bifidobacterium breve. Exemplos de fungos não patogênicos que são quantificados incluem Saccharomyces boulardii e Saccharomyces cerevisiae.
[00241] o número ou a densidade de microrganismos não patogênicos quantificados na amostra do indivíduo candidato é então comparado com o número ou a densidade de organismos correspondentes em um tamanho de amostra correspondente de uma região correspondente de um indivíduo saudável. Nos casos em que o número ou a densidade de um dos organismos na amostra do indivíduo de teste é menor que o número ou a densidade do organismo correspondente presente na região correspondente do indivíduo saudável, uma pontuação de “0” (zero) é atribuído. Por outro lado, nos casos em que o número ou a densidade de um dos organismos na amostra do indivíduo de teste é igual ou maior que o número ou densidade do organismo correspondente presente na região correspondente do indivíduo saudável, uma pontuação de “1” é atribuída. Uma pontuação acumulativa de 8 para todos os organismos (isto é, em uma determinada amostra todos os organismos bacterianos e fúngicos testados são maiores do que na amostra de controle, portanto, cada um recebe uma pontuação de “1”) identifica o indivíduo como tendo um microbioma
“equilibrado” (FIGURA 3). Da mesma forma, uma pontuação de 7 identifica o indivíduo como tendo um microbioma equilibrado (FIGURA 3). Em contraste, uma pontuação de 4-6 identifica o indivíduo como tendo um microbioma que está no limite entre o microbioma equilibrado e desequilibrado, e uma pontuação de 0-3 identifica o indivíduo como tendo um microbioma “desequilibrado” (FIGURA 3).
[00242] Quando a pontuação do indivíduo de teste é 0- 3, então o indivíduo de teste é identificado como candidato adequado para o tratamento, rompendo um biofilme compreendendo bactérias patogênicas e fungos patogênicos com uma forma de dosagem compreendendo uma composição de um ou mais de cepas bacterianas não patogênicas, uma enzima e uma cepa fúngica não patogênica. Quando a pontuação do indivíduo de teste é 4-6, então o indivíduo de teste é identificado como adequado para o tratamento após monitoramento adicional por mais 2-6 semanas. Quando a pontuação do indivíduo de teste é de 7-8, o indivíduo de teste é identificado como sendo saudável, não adequado para tratamento com as composições descritas nesse documento. EXEMPLO 4 - Efeitos do Consumo de Probióticos no Bacterioma e Micobiome
[00243] Nesse exemplo, uma coorte de alimentação lenta (SFC) recebeu cápsulas probióticas, referidas nesse documento como cápsulas BIOHM, e o efeito sobre os perfis de bacterioma e micobiome dos indivíduos da coorte foi analisado. A cápsula BIOHM para administração uma vez ao dia compreende pó revestido de hidroxipropilmetilcelulose (HPMC) que contém cerca de 15 bilhões de unidades formadoras de colônia de Bifidobacterium breve, cerca de 1,5 bilhões de unidades formadoras de colônia de Lactobacillus acidophilus, cerca de 10 bilhões de unidades formadoras de colônia de Lactobacillus rhamnosus e cerca de 3,5 bilhões de Saccharomyces boulardii, e misturada com cerca de 500 unidades SKB de amilase.
[00244] As amostras fecais foram coletadas de uma coorte de alimentação lenta (SFC) (n = 21) antes (linha de base) e depois de receber uma cápsula de BIOHM por dia durante quatro semanas. As amostras coletadas foram analisadas quanto aos níveis de suas comunidades bacterianas usando a plataforma de sequenciamento Ion- Torrent (Thermo Fisher). Os dados pré- e pós-BIOHM foram analisados para cada amostra e comparados com os dados correspondentes dos indivíduos do Projeto do Microbioma Humano Normal (NHMPS) (ver Human Microbiome Project Consortium (2012) NATURE 486: 207-14). Os perfis de abundância do bacterioma e do micobiome foram gerados e importados para Partek Discovery Suite (v6.11) para análise de componente principal (PCA). Os níveis de significância estatística foram calculados comparando as mudanças entre os grupos pelo Teste t para um(a) determinada(o) espécie ou filo. Um valor-p <0,05 foi considerado significativo. Bacterioma
[00245] Antes do tratamento, como mostrado na FIGURA 4, os indivíduos na SFC tinham níveis significativamente mais baixos de Bacteroidetes (tanto pré- quanto pós-BIOHM) em comparação com o NHMPS. O nível do filo Firmicutes foi maior na referência em indivíduos na SFC em comparação com os NHMPS. Os indivíduos na SFC tinham níveis significativamente mais elevados do filo Proteobacteria (tanto pré quanto pós-BIOHM) em comparação com os NHMPS. Os filos Actinobacteria, Tenericutes e Verrucomicrobia foram detectados em baixa abundância em todos os indivíduos, independentemente da época de coleta.
[00246] Pós-tratamento, os indivíduos na SFC, após a administração da cápsula BIOHM exibiram uma redução na abundância do filo Firmicutes, onde o nível nas amostras pós-BIOHM espelhava o do NHPMS. No entanto, nenhuma mudança significativa entre o pré e o pós-tratamento foi observada nos outros filos bacterianos. Micobiome
[00247] Antes do tratamento, como mostrado na FIGURA 5, os indivíduos na SFC tinham níveis significativamente mais baixos do filo Ascomycota na referência em comparação com o NHMPS. Os níveis do filo Zygomycota de SFC foram maiores na referência em comparação com o NHMPS. Nenhuma diferença significativa no Basidiomycota foi observada nos indivíduos na SFC em comparação com o NHMPS, e nenhuma diferença estatisticamente significativa no Basidiomycota foi detectada entre antes e depois das amostras administradas com BIOHM e o NHMPS.
[00248] Pós-tratamento, os indivíduos na SFC, após a administração da cápsula BIOHM, exibiram um aumento nos níveis de Ascomycota. Além disso, a abundância desse filo aumentou para se igualar ao NHMPS (p> 0,05). Além disso, uma redução no nível de Zygomycota foi observada após a administração da cápsula de BIOHM (p <0,01). A abundância deste filo diminuiu para coincidir com os do NHMPS (p> 0,05). EXEMPLO 5 – Modificação de Espécies de Candida e Candida albicans após Consumo de Probióticos
[00249] Nesse exemplo, a coorte de alimentação lenta (SFC) do Exemplo 4, que consumiu as cápsulas probióticas, foi analisada para determinar o efeito do tratamento na Candida spp. e Candida albicans nos níveis dos indivíduos da coorte. Perfis de abundância foram gerados e importados para Partek Discovery Suite (v6.11) para análise de componente principal (PCA).
[00250] Antes do tratamento, como mostrado na FIGURA 6 e FIGURA 7, na referência os níveis de gênero Candida e espécies de Candida albicans nos indivíduos na SFC foram significativamente maiores em comparação com o NHMPS (p <0,019 e <0,0001, respectivamente).
[00251] Após o tratamento, os indivíduos na SFC, após a administração da cápsula probiótica, exibiram uma redução significativa de ambos Candida spp. e Candida albicans (p <0,01 e <0,0001, respectivamente). Os resultados descritos nos Exemplos 4 e 5 demonstram (i) uma redução na abundância do filo bacteriano Firmicutes espelha aquele do NHMPS, (ii) um aumento nos níveis de Ascomycota que coincidem com os de NHMPS, (iii) uma redução nos níveis de Zygomycota que coincidir com os do NHMPS, e (iv) uma redução significativa na abundância de Candida spp. e C. albicans. Juntos, os resultados mostram que o uso da terapia probiótica modifica a microbiota fúngica e bacteriana intestinal. EXEMPLO 6 - Prevenção e Tratamento de Biofilmes de Espécies Únicas e Mistas por Cepas Bacterianas e Fúngicas Probióticas
[00252] Nesse exemplo, uma composição contendo quatro cepas microbianas não patogênicas (três cepas bacterianas e uma cepa fúngica incluindo Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium breve, e Saccharomyces boulardii (“as cepas probióticas”)) foram usadas para tratar biofilmes formados pelos microrganismos patogênicos Candida tropicalis ou Candida albicans, cultivados isoladamente e como biofilmes de espécies mistas com Escherichia coli e Serratia marcescens.
[00253] As cepas probióticas Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus e Saccharomyces boulardii foram cultivadas em base de nitrogênio de levedura (YNB) e caldo de infusão de cérebro e coração (BHI) (razão de caldo YNB e BHI era de 1:1) em um tubo cônico de 50 mL estéril e incubado a 37 °C por 24 horas. B. breve foi cultivado sob condições anaeróbicas em caldo YNB e BHI (a razão do caldo YNB e BHI foi de 1:1) em um tubo cônico estéril de 50 mL e incubado a 37 °C por 24 horas. Após 24 horas de crescimento celular, as culturas foram então centrifugadas a 3.000 g durante 5 minutos. Os sobrenadantes da cultura probiótica foram então decantados e esterilizados por filtração usando filtros de 0,22 mícrons. O filtrado resultante foi armazenado a -20 °C até o uso.
[00254] Os biofilmes foram formados em discos de elastômero de silício (SE). C. albicans, C. tropicalis, ou Trichosporon sozinho, ou misturado com inóculos de E. coli e S. marcescens, foram adicionados a placas de 12 poços contendo discos SE que haviam sido previamente embebidos em soro fetal bovino (FBS) por 24 horas, e pode aderir à superfície dos discos SE por 90 minutos.
[00255] Para análise da prevenção da formação de biofilme, após a fase de adesão, os discos foram enxaguados duas vezes com solução salina tamponada com fosfato (PBS) para remover quaisquer células não aderidas e, em seguida, colocadas em uma nova placa de 12 poços contendo 4 mL de filtrado probiótico. As placas foram então incubadas a 37 °C por 24 horas para permitir a maturação do biofilme.
[00256] Para analisar o tratamento de biofilmes maduros, após a fase de adesão acima, alguns discos de biofilme foram transferidos para meio YNB + BHI e deixados amadurecer por 24 horas a 37 °C. Após a fase de maturação, os biofilmes foram removidos e enxaguados com PBS, e colocados em uma nova placa de 12 poços contendo 4 mL de filtrado probiótico e foram então incubados a 37 °C por 24 horas.
[00257] Após o tratamento dos biofilmes, os discos foram tingidos com os corantes, conjugado Concanavalina Alexa fluor 488 e FUN-1. Os discos foram então observados em microscópio confocal a laser de varredura (CSLM). Discos separados foram fixados e preparados para microscopia eletrônica de varredura (SEM) seguindo o protocolo descrito no Exemplo 1. Os discos foram visualizados com o microscópio eletrônico de varredura Helios NanoLab 650 em modo de alto vácuo.
[00258] Para analisar os efeitos na germinação de Candida, células de Candida albicans ou Candida tropicalis foram inoculadas em meio YNB por 18-20 horas e lavadas três vezes com solução salina tamponada de Hank (HBSS). As células foram contadas e diluídas para obter 5 x 105 células/ml. O filtrado probiótico foi então adicionado à concentração acima de células em tubos cônicos. As células sem filtrado probiótico foram usadas como controles não tratados. Os tubos cônicos foram incubados a 37 °C por 3 horas. No tempo zero, e em intervalos de 30 minutos, os tubos foram removidos e agitados em vórtice. A suspensão celular (10 μl) foi transferida em cada ponto de tempo e as células foram contadas em um hemacitômetro. As células totais e apenas as células geminadas (definidas como um comprimento do tubo germinativo maior ou igual ao diâmetro de um blastosporo) foram contadas. O ensaio foi rompido após 3 horas e a porcentagem de células germinadas (células germinadas pelo número total de células) foi calculada para cada ponto de tempo. Microscópio confocal a laser de varredura foi usado para observar as células em cada ponto de tempo. Todas os experimentos foram feitos em triplicata.
[00259] As análises estatísticas para todos os dados foram realizadas usando o software GraphPad Prism 6. Os grupos tratados com probióticos foram comparados aos grupos de controle não tratados usando testes t não pareados. Um valor de p ≤0,05 foi considerado significativo.
[00260] Resultados: Para estudar a interação entre biofilmes de C. tropicalis, E. coli e S. marcescens (CTES) ou C. albicans, E. coli e biofilmes de S. marcescens (CAES), e para determinar se a interação foi específica, os biofilmes formados pelo fungo de controle, Trichosporon, foram analisados. Ao contrário de CAES ou CTES, que formaram biofilmes robustos e mostraram um aumento significativo na espessura do biofilme (p≤0,05) em comparação com C. albicans ou C. tropicalis sozinho, os biofilmes TCES (Trichosporon, E. coli e S. marcescens) não apresentaram diferença na espessura do biofilme em comparação com Trichosporon sozinho (FIGURA 8). A falta de diferença observada na espessura do biofilme sugeriu que a interação entre C. tropicalis, E. coli e S. marcescens (CTES) ou C. albicans, E. coli e S. marcescens (CAES) pode ser C. tropicalis ou C. albicans específico. Assim, C. albicans e C. tropicalis parecem formar biofilmes robustos quando misturados com E. coli e S. marcescens em comparação com Trichosporon.
[00261] Quando observado sob CSLM, espécies únicas de C. albicans e espécies triplas mistas (CAES) cultivadas na presença do filtrado probiótico demonstraram matriz de biofilme reduzida tanto para a fase de adesão quanto para a fase madura. Além disso, a espessura de biofilmes de espécie única e de espécies triplas misturadas (CAES) de C. albicans expostos ao filtrado probiótico foi significativamente reduzida em comparação com controles não tratados para adesão e fase madura, respectivamente (FIGURAS 9 e 11; p≤0,05).
[00262] Quando observado sob CSLM, espécie única e espécies triplas misturadas (CTES) de C. tropicalis cultivadas na presença do filtrado probiótico demonstraram crescimento de biofilme reduzido com matriz extracelular diminuída tanto para a fase de adesão quanto para a fase madura. Além disso, a espessura de biofilmes de espécie única e de espécies triplas misturadas (CTES) de C. tropicalis expostos ao filtrado probiótico foi significativamente reduzida em comparação com controles não tratados para adesão e fase madura, respectivamente (FIGURAS 10 e 12; p≤0,05).
[00263] Quando observado em SEM, micrografias confirmaram que, em contraste com os controles não tratados (FIGURAS 13A e 13C), espécie única e espécies triplas mistas de C. albicans (CAES) cultivados na presença do filtrado probiótico demonstraram crescimento de biofilme reduzido com células quebradas/deformadas para a fase de adesão (FIGURAS 13B e 13D).
[00264] Quando observadas em SEM, as micrografias confirmaram que, em contraste com os controles não tratados (FIGURAS 14A e 14C), biofilmes de espécie única e de espécies triplas mistas (CTES) de C. tropicalis cultivados na presença do filtrado probiótico demonstraram crescimento de biofilme reduzido para a fase de adesão (FIGURAS 14B e 14D).
[00265] Ao analisar os efeitos do filtrado probiótico no processo de germinação, as imagens de CSLM mostraram que C. albicans ou C. tropicalis não tratados formaram hifas robustas enquanto a exposição ao filtrado probiótico resultou em tubos germinativos atrofiados de C. albicans ou C. tropicalis. Houve uma redução significativa na porcentagem de formação de tubo germinativo após uma exposição de 30 minutos ao filtrado probiótico para C. albicans e C. tropicalis em comparação com seus respectivos controles (FIGURAS 15 e 16; p≤0,05). O filtrado probiótico teve um efeito significativo na porcentagem de germinação de C. albicans até 120 minutos (FIGURA 15) e na porcentagem de germinação de C. tropicalis até 90 minutos (FIGURA 16) em comparação com o controle.
[00266] Em conjunto, os dados demonstram que os probióticos testados (S. boulardii, L. acidophilus, B. breve e L. rhamnosus) reduziram o crescimento do biofilme para as fases de adesão (prevenção) e maturação (tratamento) para C. albicans e C. tropicalis cultivados como uma única espécie ou como espécie mista combinada com E. coli e S. marcescens. O filtrado probiótico inibiu a germinação de Candida com tubos germinativos atrofiados que não se desenvolveram em hifas maduras para C. albicans e C. tropicalis. EXEMPLO 7 - Efeitos do Tratamento Probiótico na Absorção de Nutrientes
[00267] Nesse exemplo, um modelo de inserto de filtro foi usado para determinar o efeito do tratamento probiótico sobre a absorção de nutrientes. O probiótico referido como BIOHM (uma composição de quatro cepas microbianas não patogênicas, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium breve, Saccharomyces boulardii e uma enzima) foi encontrado para romper um biofilme de espécies mistas.
[00268] Como representado na FIGURA 17, uma linha celular epitelial intestinal (Caco-2) foi semeada no lado apical de um filtro transwell a uma concentração de 1,5x105 células/ml e foi deixada formar uma monocamada confluente por 10 dias. Em seguida, um biofilme de espécies mistas incluindo Candida tropicalis, Escherichia coli e Serratia marcescens foi permitido formar no topo da monocamada de células epiteliais intestinais. Nutrientes (por exemplo, glicose, dextrano) foram então adicionados ao meio dentro do transwell.
[00269] Para testar o efeito do filtrado probiótico BIOHM na absorção de vitamina C das células epiteliais intestinais, filtrado probiótico BIOHM e meio de crescimento normal contendo vitamina C foram adicionados à câmara apical e incubados por 6 horas. Os poços de controle acabaram de receber meio de crescimento normal contendo vitamina C. Em seguida, uma alíquota da câmara basal da inserção do filtro foi removida e ensaiada para a quantidade de vitamina C que foi absorvida através da monocamada epitelial intestinal usando um kit de ensaio de ácido L-ascórbico (Abnova). Todos os testes foram realizados em quadruplicado. Um teste t não pareado foi usado para comparar amostras tratadas e não tratadas. Um valor de p <0,05 foi considerado significativo.
[00270] Como mostrado na FIGURA 18, o tratamento de biofilmes de espécies mistas formadas na monocamada de células Caco-2 com filtrado probiótico BIOHM resultou em maior transferência (absorção) de vitamina C em comparação com controles não tratados (média ± SE: 440,8 µM/ml ± 92,22 µM/ml e 187,3 µM/ml ± 54,55 µM/ml para biofilmes tratados e não tratados probióticos BIOHM, respectivamente, valor p = 0,055).
[00271] Para testar o efeito do filtrado probiótico BIOHM na absorção de proteínas das células epiteliais intestinais, filtrado probiótico BIOHM e meio de crescimento normal contendo proteína caseína foram adicionados à câmara apical e incubados por 6 horas. Os poços de controle receberam meio de crescimento normal contendo proteína caseína. O mesmo meio de crescimento, com ou sem filtrado probiótico BIOHM, foi adicionado às câmaras apicais de poços adicionais nos quais nenhum biofilme se formou no topo da monocamada de células epiteliais intestinais. Em seguida, uma alíquota da câmara basal do inserto do filtro foi removida e ensaiada para a quantidade de proteína caseína que foi absorvida através da monocamada epitelial intestinal usando um ensaio fluorométrico (Qubit). Uma ANOVA de sentido único com um teste post-hoc de Tukey foi usada para comparar as amostras tratadas e não tratadas. Um valor p <0,05 foi considerado significativo.
[00272] Como mostrado na FIGURA 19 e na TABELA 6, o tratamento de biofilmes de espécies mistas formados na monocamada de células Caco-2 com filtrado probiótico BIOHM resultou em maior transferência (absorção) de proteína de caseína em comparação com controles não tratados (valor p = 0,0008). Adicionalmente, o tratamento da monocamada de células Caco-2 sem biofilme com filtrado BIOHM resultou em maior transferência (absorção) de proteína de caseína em comparação com controles não tratados (valor p <0,0001). TABELA 6 Condição de crescimento Quantidade Média de Valor P de BIOHM em Proteína de Caseína Comparação com o Absorvida (µg/mL) ± SE Controle Não Tratado Controle Não Tratado + 24,2 ± 0,5 - caseína Tratado com BIOHM + 46,6 ± 1,0 <0,0001 caseína Controle Não Tratado + 26,9 ± 2,9 - biofilme + caseína Tratado com BIOHM + 42,4 ± 3,5 0,0008 biofilme + caseína EXEMPLO 8 - Método de Preparação de Itens Assados Compreendendo Uma Composição Probiótica
[00273] Nesse exemplo, uma composição que compreende quatro cepas microbianas não patogênicas, incluindo Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium breve e Saccharomyces boulardii, e a enzima amilase (em conjunto referidas como “o probiótico”) foi adicionada a uma mistura de pão para determinar se as cepas microbianas probióticas permaneceriam viáveis após o assar.
[00274] Um pedaço de pão foi preparado como a seguir: 484 mg do probiótico contendo as quantidades relativas de organismos e enzimas conforme estabelecido na Tabela 5 foram adicionados a 454 g de uma mistura de pão disponível comercialmente. A mistura de pão e probióticos foi então colocada em uma tigela de mistura e combinada com a quantidade sugerida de água. A combinação foi bem misturada até a mistura ficar homogênea. A mistura foi despejada em uma forma de pão levemente revestida com óleo e foi deixada por 15-30 minutos em um local quente antes de assar. A mistura de pão foi então assada em um forno a 350F por 45- 50 minutos. Depois de assado, o pão foi deixado esfriar.
[00275] A fim de testar a viabilidade das cepas microbianas probióticas no pão assado, três amostras de núcleo foram retiradas do pão usando um furador de rolha. A fim de eliminar qualquer contaminação bacteriana externa, a camada superior do pão foi removida e as amostras de núcleo de 10 mm foram testadas. Cada amostra foi então pesada e homogeneizada em 16 mL de solução salina tamponada com fosfato (PBS) usando um Stomacher no alto ajuste por 2 minutos. Diluições seriadas de dez vezes de cada homogeneizado foram feitas e então divididas em placas em diferentes placas de Petri. As culturas bacterianas foram cultivadas em ágar de Infusão de Cérebro e Coração em condições aeróbias e anaeróbias, enquanto as culturas de leveduras foram cultivadas em Ágar Batata Dextrose. Após incubação a 35 ºC por 48 horas, o número de unidades formadoras de colônias (CFU) foi contado.
[00276] Como mostrado na FIGURA 20, as bactérias aeróbias, bactérias anaeróbias e leveduras demonstraram log CFUs/g ± DP médio de 9,33 ± 0,1, 9,37 ± 0,1 e 5,0 ± 0,12, respectivamente. No total, um CFU em log médio de 23,7/g (equivalente a 4,6 bilhões de CFUs/núcleo) foi recuperado do pão. Os resultados demonstram que as manchas microbianas no probiótico sobreviveram ao cozimento a 350F. EXEMPLO 9- Redução no Nível Elevado de Proteobacteria em um indivíduo com Inflamação Intestinal e/ou Disbiose Intestinal
[00277] Nesse exemplo, a combinação de super greens 1, como descrito na Tabela 7, é administrada a, ou consumida por, um indivíduo com alto nível de Proteobacteria, que se acredita estar associada à disbiose e inflamação intestinal. De acordo com Mandal et al. (2015, MICROBIAL ECOLOGY IN HEALTH & DISEASE 26: 27663), a abundância ou o nível de um filo específico (por exemplo, Proteobacteria) em um indivíduo é calculada(o) em relação à abundância de diferentes filos presentes nesse indivíduo. A abundância relativa média de um filo é calculada na população saudável para determinar o nível normal presente em tais indivíduos. A este respeito, a abundância relativa de Proteobacteria em indivíduos saudáveis compreende tipicamente até 10% de todos os outros filos presentes no intestino. TABELA 7 Combinação de super greens 1 (porção de exemplo) BIOHM Combinação de 8g super greens (ver Tabela 4) Ingrediente CFU/ dose mg/dose IU/dose Probióticos 25 bilhões 511 N/A Inulina 1.000 Peptídeos de colágeno 10.000 Alcaçuz 500 deglicirrizinado Raiz de Marshmallow 200 Vitamina A (forma 7.000 retinila) Vitamina D3 1.000 EXEMPLO 10 - Razão equilibrada de Firmicutes e
Bacteroidetes
[00278] Nesse exemplo, a combinação de super greens 2, como descrito na Tabela 8, é administrada a, ou consumida por, um indivíduo para nutrir um equilíbrio bem cultivado entre Firmicutes e Bacteroidetes aumentando Bifidobacteria e Lactobacillus. Uma abundância relativa de cerca de 1,8 vezes mais Bacteroidetes do que Firmicutes na microbiota intestinal humana constitui um equilíbrio bem cultivado. TABELA 8 Combinação de super greens 2 (porção de exemplo) Combinação de super 8g greens BIOHM (ver Tabela 4) Ingrediente CFU/dose mg/dose Probióticos 15 bilhões 315 Inulina 1.000 EXEMPLO 11- Redução no Nível Elevado de Firmicutes em Relação aos Níveis Normais
[00279] Nesse exemplo, a combinação de super greens 3, como descrito na Tabela 9, é administrada a, ou consumida por, um indivíduo com alto nível de Firmicutes, que se acredita estar associado a distúrbios do sono. Por exemplo, a abundância relativa de Firmicutes em indivíduos saudáveis normalmente compreende até cerca de 38% de todos os outros filos presentes no intestino, e uma abundância relativa maior que 38% de todos os outros filos constitui um nível alto. Um suplemento de proteína à base de plantas (por exemplo, proteína de ervilha) é adicionado para suportar o aumento de Bacteroidetes e moderar o nível de Firmicutes. TABELA 9 Combinação de super greens 3 (porção de exemplo)
Combinação de super 8g greens BIOHM (ver Tabela 4) Ingrediente CFU/dose mg/dose Probióticos 20 bilhões 416 Inulina 1,000 Proteína de Ervilha 10,000 EXEMPLO 12- Redução no Nível Elevado de Candida em Relação aos Níveis Normais
[00280] Nesse exemplo, a combinação de super greens 4, como descrito na Tabela 10, é administrada a, ou consumida por, um indivíduo com níveis elevados de Proteobacteria e Candida, que se acredita estarem associados a disbiose intestinal e inflamação. A abundância relativa dos níveis de Proteobacteria e Candida em indivíduos saudáveis tipicamente compreende até cerca de 10% e 5%, respectivamente, de todos os outros filos presentes no intestino. Vitaminas e minerais listados na Tabela 11 e/ou combinação de frutas e vegetais listada na Tabela 12 podem ser combinados com combinação de super greens 4 (ver Tabela 10) para administração a, ou consumo por, um indivíduo com níveis elevados de Proteobacteria e Candida. TABELA 10 Combinação de super greens 4 (porção de exemplo) Combinação de super 8g greens BIOHM (ver Tabela 4) Ingrediente CFU/dose mg/dose IU/dose Probióticos 30 bilhões 630 N/A Extrato de Semente 100 de Uva Gengibre 750 Vitamina A (forma 2.000 retinila) Vitamina C 250 5.000 Vitamina D3 1.000
TABELA 11 Vitaminas e Minerais (porção de exemplo) Ingrediente Quantidade Unidade Vitamina A (beta caroteno & palmitato de 6.000 IU retinila) Vitamina C (bagas de acerola) 100 mg Vitamina D3 (como colecalciferol de 1.000 IU planta de Líquen) Vitamina E (tocoferois misturados) 50 IU Vitamina K (mistura de K1 & K2) 1.000 µg Tiamina 4 mg Riboflavina 4 mg Niacina 20 mg Vitamina B6 (Piridoxina HCl/Piridoxal-5- 10 mg fosfato) Folato (L-5-metiltetra-hidrofolato) 400 µg Vitamina B12 (metilcobalamina e 30 µg hidroxocobalamina) Biotina 300 µg Ácido Pantotênico 20 µg Cálcio (citrato) 750-1.000 µg Ferro (bisglicinato) 5 mg Iodo (kelp orgânica) 100 µg Magnésio (glicinato) 500 µg Zinco (carnosina ou quelato de 10 mg aminoácido) Selênio (natural e sem levedura) 100 µg Cobre 1,5 mg Manganês 2 mg Cromo 120 µg Molibdênio 75 µg Potássio (natural) 50 mg TABELA 12 Combinação de Frutas e Vegetais Maçã Beterraba Brócolis Cenoura Espinafre Tomate Morango Amarena Amora Pimentão verde Couve-de-bruxelas Mirtilo Gengibre Alho Cebola Framboesa Salsa Couve-flor Repolho roxa Couve de folhas Pepino Aipo Aspargo
INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA
[00281] A divulgação completa de cada uma das patentes e documentos científicos referidos nesse documento é incorporada por referência nesse documento para todos os fins.
EQUIVALENTES
[00282] A invenção pode ser realizada em outras formas específicas sem se afastar do espírito ou das características essenciais da mesma. As modalidades anteriores devem, portanto, ser consideradas em todos os aspectos ilustrativas em vez de limitantes da invenção descrita nessa invenção. O escopo da invenção é, portanto, indicado pelas reivindicações anexas em vez da descrição anterior, e todas as alterações que vêm dentro do significado e faixa de equivalência das reivindicações se destinam a ser abrangidas nesse documento.

Claims (90)

REIVINDICAÇÕES
1. Método para melhorar a absorção de nutrientes em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição probiótica que compreende (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada.
2. Método para melhorar a absorção de nutrientes em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição que compreende um nutriente em combinação com uma composição probiótica que compreende (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o nutriente é uma proteína.
4. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o nutriente é uma vitamina.
5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 4, caracterizado pelo fato de que o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo da composição é contemporâneo(a) ao consumo ou à administração da composição probiótica.
6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 4, caracterizado pelo fato de que o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo da composição é subsequente ou anterior ao consumo ou à administração da composição probiótica.
7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 5, caracterizado pelo fato de que a composição que compreende um nutriente compreende o nutriente e a composição probiótica.
8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 6, caracterizado pelo fato de que a composição que compreende um nutriente não compreende a composição probiótica.
9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a composição probiótica é liofilizada ou seca por pulverização.
10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 e 9, caracterizado pelo fato de que a composição probiótica compreende adicionalmente uma enzima capaz de romper um biofilme em um indivíduo.
11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a enzima é selecionada do grupo que consiste em amilase, celulase, hemicelulase, lisozima, pectinase, DNase I, Serratia peptidase ou Serratiopeptidase, complexo de hemicelulase/pectinase, β- 1,3-glucanase, protease ácida, protease alcalina, glucoamilase, endoglucanase, xilanase, lipase, lisozima, complexo de protease/peptidase, dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), quitosanase, bromelaína, papaína, protease de kiWi actinidi, uma protease derivada de planta e fitase.
12. Método, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, caracterizado pelo fato de que a enzima é uma amilase selecionada do grupo que consiste em amilase de Bacillus stearothermophilus, amilase de Bacillus amyloliquefaciens, amilase de Bacillus subtilis, amilase de Bacillus licheniformi, amilase de Aspergillus niger, e amilase de Aspergillus oryzae.
13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
1-7 e 9-12, caracterizado pelo fato de que a composição probiótica compreende de cerca de 100 a cerca de 5.000 unidades SKB de amilase, de cerca de 200 a cerca de 4.000 unidades SKB de amilase, de cerca de 300 a cerca de 2.000 unidades SKB de amilase, ou de cerca de 400 a cerca de 1.000 unidades SKB de amilase.
14. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a composição compreende cerca de 500 unidades SKB de amilase.
15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 e 9 a 14, caracterizado pelo fato de que a composição probiótica compreende pelo menos duas cepas bacterianas não patogênicas diferentes.
16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 e 9 a 14, caracterizado pelo fato de que a composição probiótica compreende três diferentes cepas bacterianas não patogênicas.
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7 e 9-16, caracterizado pelo fato de que a cepa bacteriana não patogênica é selecionada de Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium breve, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium bifidum, e Lactobacillus reuteri.
18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7 e 9-17, caracterizado pelo fato de que a cepa bacteriana não patogênica é selecionada de Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, e Lactobacillus acidophilus RP 32.
19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que compreende Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, e Lactobacillus acidophilus RP 32.
20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7 e 9-19, caracterizado pelo fato de que a cepa fúngica não patogênica é selecionada de Saccharomyces boulardii, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomycetes sp HZ178, Saccharomyces bayanus, Pichia burtonii, Pichia jadinii, Pichia kudriavzevii, Pichia onychis, Pichia sp., e Picoa juniper.
21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a cepa fúngica não patogênica é Saccharomyces boulardii SB 48.
22. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 e 9 a 21, caracterizado pelo fato de que a composição probiótica é formulada como um granulado, pellet ou pó.
23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 e 9 a 22, caracterizado pelo fato de que a composição probiótica compreende de cerca de 10 bilhões a cerca de 40 bilhões, de cerca de 15 bilhões a cerca de 40 bilhões, de cerca de 20 bilhões a cerca de 40 bilhões, de cerca de 10 bilhões a cerca de 30 bilhões, de cerca de 15 bilhões a cerca de 30 bilhões, de cerca de 20 bilhões a cerca de 30 bilhões de unidades formadoras de colônias da(s) cepa(s) bacteriana(s) não patogênica(s).
24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 e 9 a 23, caracterizado pelo fato de que a composição probiótica compreende de cerca de 1 bilhão a cerca de 10 bilhões, de cerca de 2 bilhões a cerca de 8 bilhões, de cerca de 3 bilhões a cerca de 6 bilhões de colônias unidades formadoras da(s) cepa(s) fúngica(s) não patogênica(s).
25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
1 a 7 e 9 a 24, caracterizado pelo fato de que a composição probiótica compreende cerca de 15 bilhões de unidades formadoras de colônia de Bifidobacterium breve, cerca de 10 bilhões de unidades formadoras de colônia de Lactobacillus rhamnosus, cerca de 3,5 bilhões de unidades formadoras de colônia de Saccharomyces boulardii, e cerca de 1,5 bilhão de unidades formadoras de colônias de Lactobacillus acidophilus.
26. Produto alimentício assado, caracterizado pelo fato de que compreende pelo menos 25% mais proteína por unidade de peso do que a média de produtos alimentícios assados da espécie, e uma composição probiótica compreendendo (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e (ii) uma cepa de bactéria não patogênica isolada.
27. Produto alimentício assado, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que a composição probiótica compreende adicionalmente uma enzima selecionada de amilase, celulase, hemicelulase, lisozima, pectinase, DNase I, Serratia peptidase ou Serratiopeptidase, complexo de hemicelulase/pectinase, β-1,3-glucanase, protease ácida, protease alcalina, glucoamilase, endoglucanase, xilanase, lipase, lisozima, complexo de protease/peptidase, dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), quitosanase, bromelaína, papaína, protease de kiwi actinidi, uma protease derivada de planta e fitase.
28. Produto de bebida, caracterizado pelo fato de que que compreende um nutriente e uma composição probiótica que compreende (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada.
29. Produto de bebida, de acordo com a reivindicação 28,
caracterizada pelo fato de que o nutriente é uma proteína.
30. Produto de bebida, de acordo com a reivindicação 28, caracterizada pelo fato de que o nutriente é uma vitamina.
31. Produto de bebida, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28-30, caracterizado pelo fato de que a composição probiótica compreende adicionalmente uma enzima selecionada de amilase, celulase, hemicelulase, lisozima, pectinase, DNase I, Serratia peptidase ou Serratiopeptidase, complexo de hemicelulase/pectinase, β-1,3-glucanase, protease ácida, protease alcalina, glucoamilase, endoglucanase, xilanase, lipase, lisozima, complexo de protease/peptidase, dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), quitosanase, bromelaína, papaína, protease de kiwi actinidi, uma protease derivada de uma planta e fitase.
32. Produto de bebida, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28, 29 ou 31, caracterizado pelo fato de que o produto de bebida compreende pelo menos 5% de proteína.
33. Produto alimentício assado, de acordo com a reivindicação 26 ou 27, ou produto de bebida, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28-32, caracterizado pelo fato de que a composição probiótica compreende pelo menos duas cepas bacterianas não patogênicas diferentes.
34. Produto alimentício assado, de acordo com a reivindicação 26 ou 27, ou produto de bebida, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28-32, caracterizado pelo fato de que a composição probiótica compreende três cepas bacterianas não patogênicas diferentes.
35. Produto alimentício assado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 26-27 ou 33-34, ou produto de bebida, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28-32 ou 33-
34, caracterizado pelo fato de que a cepa bacteriana não patogênica é selecionada de Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium breve, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium bifidum, e Lactobacillus reuteri.
36. Produto alimentício assado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 26-27 ou 33-35, ou produto de bebida, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28-32 ou 33- 35, caracterizado pelo fato de que a cepa bacteriana não patogênica é selecionada de Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, e Lactobacillus acidophilus RP
32.
37. Produto alimentício assado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 26-27 ou 33-36, ou produto de bebida, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28-32 ou 33- 36, caracterizado pelo fato de que a cepa fúngica não patogênica é selecionada do grupo que consiste em Saccharomyces boulardii, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomycetes sp HZ178, Saccharomyces bayanus, Pichia burtonii, Pichia jadinii, Pichia kudriavzevii, Pichia onychis, Pichia sp., e Picoa juniper.
38. Produto alimentício assado, de acordo com a reivindicação 37, ou produto de bebida, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que a cepa fúngica não patogênica é Saccharomyces boulardii SB 48.
39. Método, de acordo com a reivindicação 3, produto alimentício assado, de acordo com a reivindicação 26, ou produto de bebida, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que a proteína é selecionada de proteína de soro de leite, proteína de soja, proteína de leite, proteína de ovo, proteína de músculo animal, proteína de peixe, proteína de arroz integral, proteína de ervilha, proteína de cânhamo, proteína de arando e proteína de alcachofra.
40. Método, de acordo com a reivindicação 39, produto alimentício assado, de acordo com a reivindicação 39 ou produto de bebida, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que a proteína do leite é caseína.
41. Método, de acordo com a reivindicação 39 ou 40, produto alimentício assado, de acordo com a reivindicação 39 ou 40, ou produto de bebida, de acordo com a reivindicação 39 ou 40, caracterizado pelo fato de que a proteína é um hidrolisado de proteína.
42. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 39 a 41, produto alimentício assado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 39 a 41, ou produto de bebida, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 39 a 41, caracterizado pelo fato de que a proteína é proteína isolada e/ou purificada.
43. Composição para uso na melhoria da absorção de nutrientes em um indivíduo, a composição caracterizada pelo fato de que compreende (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e viável e (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada e viável.
44. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 43, caracterizada pelo fato de que a composição é liofilizada ou seca por pulverização
45. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 44, caracterizada pelo fato de que a composição compreende pelo menos duas cepas bacterianas não patogênicas diferentes.
46. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 45, caracterizada pelo fato de que a composição compreende três diferentes cepas bacterianas não patogênicas.
47. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 46, caracterizada pelo fato de que a cepa bacteriana não patogênica é selecionada de Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium breve, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium bifidum, e Lactobacillus reuteri.
48. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 47, caracterizada pelo fato de que a cepa bacteriana não patogênica é selecionada de Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, e Lactobacillus acidophilus RP 32.
49. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 48, caracterizada pelo fato de que compreende Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, e Lactobacillus acidophilus RP 32.
50. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 49, caracterizada pelo fato de que a cepa fúngica não patogênica é selecionada de Saccharomyces boulardii, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomycetes sp HZ178, Saccharomyces bayanus, Pichia burtonii, Pichia jadinii, Pichia kudriavzevii, Pichia onychis, Pichia sp., e Picoa juniper.
51. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 50, caracterizada pelo fato de que a cepa fúngica não patogênica é Saccharomyces boulardii SB 48.
52. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 51, caracterizada pelo fato de que a composição compreende adicionalmente uma enzima capaz de romper um biofilme em um indivíduo.
53. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 52, caracterizada pelo fato de que a enzima é selecionada do grupo que consiste em amilase, celulase, hemicelulase, lisozima, pectinase, DNase I, Serratia peptidase ou Serratiopeptidase, complexo de hemicelulase/pectinase, β- 1,3-glucanase, protease ácida, protease alcalina, glucoamilase, endoglucanase, xilanase, lipase, lisozima, complexo de protease/peptidase, dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), quitosanase, bromelaína, papaína, protease de kiWi actinidi, uma protease derivada de planta e fitase.
54. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 53, caracterizada pelo fato de que a enzima é uma amilase selecionada do grupo que consiste em amilase de Bacillus stearothermophilus, amilase de Bacillus amyloliquefaciens, amilase de Bacillus subtilis, amilase de Bacillus licheniformi, amilase de Aspergillus niger, e amilase de Aspergillus oryzae.
55. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 54, caracterizada pelo fato de que a composição compreende de cerca de 100 a cerca de 5.000 unidades SKB de amilase, de cerca de 200 a cerca de 4.000 unidades SKB de amilase, de cerca de 300 a cerca de 2.000 unidades SKB de amilase, ou de cerca de 400 a cerca de 1.000 unidades SKB de amilase.
56. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 55, caracterizada pelo fato de que a composição compreende cerca de 500 unidades SKB de amilase.
57. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 56, caracterizada pelo fato de que a composição é disposta em uma cápsula.
58. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 57, caracterizada pelo fato de que a composição está em uma forma de dosagem oral.
59. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 58, caracterizada pelo fato de que a composição é formulada como um granulado, pellet ou pó.
60. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 51, caracterizada pelo fato de que a composição é formulada como um pó revestido e, opcionalmente, em que a composição formulada como um pó revestido é adicionalmente combinada com uma enzima capaz de romper um biofilme.
61. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 60, caracterizada pelo fato de que o pó é revestido com hidroxipropil metilcelulose.
62. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 57 a 61, caracterizada pelo fato de que a cápsula compreende de cerca de 50 mg a cerca de 1.000 mg da composição.
63. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 62, caracterizada pelo fato de que a cápsula compreende cerca de 700 mg da composição.
64. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 63, caracterizada pelo fato de que a composição compreende de cerca de 10 bilhões a cerca de 40 bilhões, de cerca de 15 bilhões a cerca de 40 bilhões, de cerca de 20 bilhões a cerca de 40 bilhões, de cerca de 10 bilhões a cerca de 30 bilhões, de cerca de 15 bilhões a cerca de 30 bilhões, de cerca de 20 bilhões a cerca de 30 bilhões de unidades formadoras de colônias da(s) cepa(s) bacteriana(s) não patogênica(s).
65. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 64, caracterizada pelo fato de que a composição compreende de cerca de 1 bilhão a cerca de 10 bilhões, de cerca de 2 bilhões a cerca de 8 bilhões, de cerca de 3 bilhões a cerca de 6 bilhões de unidades formadoras de colônias da(s) cepa(s) fúngica(s) não patogênica(s).
66. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 65, caracterizada pelo fato de que a composição compreende cerca de 15 bilhões de unidades formadoras de colônia de Bifidobacterium breve, cerca de 10 bilhões de unidades formadoras de colônia de Lactobacillus rhamnosus, cerca de 3,5 bilhões de unidades formadoras de colônia de Saccharomyces boulardii, e cerca de 1,5 bilhões de unidades formadoras de colônias de Lactobacillus acidophilus.
67. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 66, caracterizada pelo fato de que o nutriente é uma proteína.
68. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 67, caracterizada pelo fato de que a proteína é selecionada de proteína de soro de leite, proteína de soja, proteína de leite, proteína de ovo, proteína de músculo animal, proteína de peixe, proteína de arroz integral, proteína de ervilha, proteína de cânhamo, proteína de arando e proteína de alcachofra.
69. Composição para uso no tratamento de inflamação intestinal e/ou disbiose intestinal em um indivíduo em necessidade da mesma, a composição caracterizada pelo fato de que compreende (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e viável; (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada e viável; (iii) pelo menos uma enzima digestiva; e (iv) um ingrediente nutricional.
70. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 69, caracterizada pelo fato de que o ingrediente nutricional é selecionado de inulina, peptídeos de colágeno, alcaçuz deglicirrizinado (DGL), raiz de marshmallow, extrato de semente de uva, gengibre, uma vitamina e qualquer combinação dos mesmos.
71. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 69 e 70, caracterizada pelo fato de que a cepa bacteriana não patogênica é selecionada de Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, e Lactobacillus acidophilus RP 32.
72. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 69 a 71, caracterizada pelo fato de que a cepa fúngica não patogênica é selecionada de Saccharomyces boulardii, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomycetes sp HZ178, Saccharomyces bayanus, Pichia burtonii, Pichia jadinii, Pichia kudriavzevii, Pichia onychis, Pichia sp., e Picoa juniper.
73. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 72, caracterizada pelo fato de que a cepa fúngica não patogênica é Saccharomyces boulardii SB 48.
74. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 69 a 73, caracterizada pelo fato de que a enzima é selecionada de amilase, celulase, hemicelulase,
lisozima, pectinase, DNase I, Serratia peptidase ou Serratiopeptidase, complexo de hemicelulase/pectinase, β- 1,3-glucanase, protease ácida, protease alcalina, glucoamilase, endoglucanase, xilanase, lipase, lisozima, complexo de protease/peptidase, dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), quitosanase, bromelaína, papaína, protease de kiWi actinidi, uma protease derivada de planta e fitase.
75. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 70 a 74, caracterizada pelo fato de que a vitamina é selecionada de vitamina A, vitamina C e vitamina D3.
76. Composição, para uso no equilíbrio dos níveis de Firmicutes e Bacteroidetes no intestino de um indivíduo em necessidade da mesma, a composição caracterizada pelo fato de compreender (i) uma cepa fúngica não patogênica isolada e viável; (ii) uma cepa bacteriana não patogênica isolada e viável; (iii) pelo menos uma enzima digestiva; e (iv) um ingrediente nutricional.
77. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 76, caracterizada pelo fato de que o ingrediente nutricional é selecionado de inulina, proteína de ervilha, uma vitamina e qualquer combinação dos mesmos.
78. Composição para uso, de acordo com as reivindicações 76 e 77, caracterizada pelo fato de que a cepa bacteriana não patogênica é selecionada de Lactobacillus rhamnosus LB 20, Bifidobacterium breve S 46, e Lactobacillus acidophilus RP 32.
79. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 76 a 78, caracterizada pelo fato de que a cepa fúngica não patogênica é selecionada de Saccharomyces boulardii, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomycetes sp HZ178, Saccharomyces bayanus, Pichia burtonii, Pichia jadinii, Pichia kudriavzevii, Pichia onychis, Pichia sp., e Picoa juniper.
80. Composição para uso, de acordo com a reivindicação 79, caracterizada pelo fato de que a cepa fúngica não patogênica é Saccharomyces boulardii SB 48.
81. Composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 76 a 80, caracterizada pelo fato de que a enzima é selecionada de amilase, celulase, hemicelulase, lisozima, pectinase, DNase I, Serratia peptidase ou Serratiopeptidase, complexo de hemicelulase/pectinase, β- 1,3-glucanase, protease ácida, protease alcalina, glucoamilase, endoglucanase, xilanase, lipase, lisozima, complexo de protease/peptidase, dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), quitosanase, bromelaína, papaína, protease de kiwi actinidi, uma protease derivada de planta, e fitase.
82. Método de tratamento da inflamação intestinal em um indivíduo em necessidade, o método caracterizado pelo fato de que compreende o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição coforme definida em qualquer uma das reivindicações 69-75; em que o indivíduo tem alto nível de Proteobacteria e baixo nível de Candida em relação a um indivíduo sem inflamação intestinal.
83. Método de tratamento da inflamação intestinal em um indivíduo em necessidade, o método caracterizado pelo fato de que compreende o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 69-75; em que o indivíduo tem altos níveis de Proteobacteria e Candida em relação a um indivíduo sem inflamação intestinal.
84. Método para equilibrar o nível de Firmicutes e Bacteroidetes no intestino de um indivíduo em necessidade, o método caracterizado pelo fato de que compreende o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 76-81; em que o indivíduo tem um desequilíbrio na razão de Firmicutes e Bacteroidetes com base no nível elevado de Firmicutes em relação a um indivíduo com nível de Firmicutes saudável ou normal.
85. Método para equilibrar o nível de Firmicutes e Bacteroidetes no intestino de um indivíduo em necessidade, o método caracterizado pelo fato de que compreende o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 76-81; em que o indivíduo tem um nível elevado de Firmicutes em relação a um indivíduo com nível de Firmicutes saudável ou normal.
86. Método para melhorar uma condição associada à formação de biofilme aberrante no intestino de um indivíduo em necessidade, o método caracterizado pelo fato de que compreende o consumo pelo, ou a administração ao, indivíduo de uma composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 43 a 81.
87. Método, de acordo com a reivindicação 86, caracterizado pelo fato de que a condição é uma doença ou um distúrbio do trato gastrointestinal.
88. Método, de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que a doença ou o distúrbio do trato gastrointestinal é selecionada(o) de hiperamonemia,
colite por Clostridium difficile, encefalopatia hepática associada a cirrose, doença inflamatória do intestino, doença de Crohn, colite ulcerativa e doença do intestino irritável.
89. Método, de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que a doença ou o distúrbio do trato gastrointestinal é uma doença ou um distúrbio do cólon.
90. Método, de acordo com a reivindicação 89, caracterizado pelo fato de que a doença ou o distúrbio do cólon é associada(o) a uma resposta inflamatória.
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