BR112020017906A2 - Composição probiótica para uso em um aditivo alimentar - Google Patents
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Abstract
a presente invenção refere-se a um aditivo alimentar que compreende uma cultura bacteriana ou uma cultura bacteriana processada e um método para melhorar o desempenho zootécnico de animais. a cultura bacteriana compreende uma cepa bacteriana de ácido láctico isolada, em que essa cepa compreende uma sequência de rrna 16s que exibe pelo menos 95% de identidade de sequência com a seq id nº 1.
Description
[0001] A invenção refere-se a culturas bacterianas e seu uso como aditivos alimentar, preferencialmente na ração animal.
[0002] A fim de reduzir a ocorrência de organismos patogênicos na produção animal, os antibióticos são frequentemente adicionados em baixas doses. O problema do desenvolvimento de resistência de organismos patogênicos e a transferência de substâncias antibióticas para os alimentos para animais torna muito desejável a redução do uso de antibióticos tanto em animais quanto em humanos.
[0003] Certos microorganismos, por exemplo, diferentes bactérias do ácido láctico, têm um efeito favorável na flora gastrointestinal de animais, incluindo humanos. O consumo de um produto probiótico por um hospedeiro tem como objetivo afetar positivamente os processos metabólicos que ocorrem no trato gastrointestinal do hospedeiro e, portanto, reduzir distúrbios e aumentar a utilização de alimentos. Os microorganismos favoráveis reduzem os distúrbios de microorganismos patogênicos suprimindo os organismos indesejáveis de diferentes maneiras. Além disso, esses microorganismos frequentemente contribuem para a digestão dos alimentos por meio da fermentação, resultando em uma utilização mais eficaz dos nutrientes.
[0004] Os dois principais gêneros de microorganismos comumente associados à atividade probiótica incluem Lactobacillus sp. e Bifidobacteria sp. Os efeitos benéficos atribuídos aos probióticos incluem aumento da resistência a doenças infecciosas, sistemas imunológicos mais saudáveis, redução da síndrome do intestino irritável, redução da pressão sanguínea, redução do colesterol sérico, alergias mais leves e regressão de tumor. No entanto, as qualidades benéficas reivindicadas de cepas bacterianas específicas raramente são comprovadas.
[0005] O documento US2017202890 divulga uma cepa de lactobacilos que melhora a hiperuricemia, fígado gorduroso e doenças relacionadas ao estilo de vida. O documento US2017202890, entretanto, não é direcionado a um uso em rações ou gado. O mesmo vale para os documentos KR20060006342 e KR2013008443, que não divulgam um uso em rações.
[0006] Portanto, permanece uma necessidade na técnica de novas cepas de bactérias de ácido láctico que exibam atividades probióticas. Particularmente, há uma necessidade de mais cepas de bactérias de ácido láctico que tenham a capacidade comprovada de melhorar o desempenho zootécnico dos animais. Em segundo lugar, existe também a necessidade de uma composição que possa influenciar positivamente a flora gastrointestinal e/ou a histologia gastrointestinal de animais.
[0007] A presente invenção visa solucionar ao menos alguns dos problemas mencionados acima.
[0008] A invenção visa fornecer um método para melhorar o desempenho zootécnico de animais de acordo com a reivindicação
1. Mais em particular, a invenção fornece um aditivo alimentar que compreende uma cultura bacteriana ou uma cultura bacteriana processada, em que a dita cultura compreende uma cepa bacteriana de ácido láctico isolada, caracterizada pela cepa compreender uma sequência de rRNA 16S que exibe pelo menos 95% de identidade de sequência com a SEQ ID N° 1. Esta cepa é capaz de sobreviver e colonizar o trato gastrointestinal de um animal e tem propriedades probióticas que são benéficas para a saúde animal, resultando, entre outras, em uma diminuição da necessidade de tratamento com antibióticos em animais, um aumento no ganho de peso diário e uma diminuição na ingestão de alimentação diária, o que constitui sérias vantagens econômicas.
[0009] Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um aditivo alimentar de acordo com a reivindicação 10 e uma ração animal de acordo com a reivindicação 19.
[00010] Em um terceiro aspecto, a presente invenção fornece um uso de acordo com a reivindicação 21. Mais em particular, a invenção fornece um método para melhorar positivamente o desempenho zootécnico de animais, compreendendo a etapa de fornecer aos ditos animais um aditivo alimentar ou uma ração animal de acordo com a presente invenção.
[00011] Acredita-se que a administração da cepa probiótica melhore a flora gastrointestinal dos animais e, portanto, evita sua colonização por microorganismos prejudiciais. Portanto, a invenção ajuda ainda mais a prevenir a disseminação de patógenos entéricos resistentes a fármacos. Os efeitos positivos da cepa bacteriana no animal são ainda refletidos por um aumento no bem-estar animal, uma diminuição na incidência de doenças gastrointestinais e diminuição da taxa de mortalidade animal. Além disso, a cepa bacteriana de acordo com a invenção promove uma digestão eficiente e adsorção de nutrientes, proporcionando assim animais que requerem menos alimento.
[00012] A presente invenção refere-se a um aditivo alimentar inovador e uma ração animal inovadora compreendendo uma cultura bacteriana de ácido láctico probiótica ou uma cultura bacteriana de cultura bacteriana processada compreendendo uma novidade e seu uso para melhorar o desempenho zootécnico de animais.
[00013] A menos que definido de outra maneira, todos os termos usados para descrever a presente invenção, inclusive termos técnicos e científicos, têm o significado compreendido de modo geral por alguém versado na técnica à qual esta invenção pertence. Por meio de orientação adicional, definições de termos são incluídas para melhor apreciação dos ensinamentos da presente invenção.
[00014] Conforme utilizados no presente documento, os seguintes termos têm os seguintes significados.
[00015] Conforme usado neste documento, “um”, “uma”, “o” e “a” fazem referência tanto à forma singular quanto à forma plural, a menos que o contexto indique claramente o contrário. À guisa de exemplo, "um compartimento" refere-se a um ou mais de um compartimento.
[00016] "Cerca de", conforme usado neste documento em referência a um valor mensurável, tal como um parâmetro, uma quantidade, uma duração de tempo e semelhantes, visa abranger variações de +/- 20% ou menos, preferencialmente +/- 10% ou menos, mais preferencialmente +/- 5% ou menos, ainda mais preferencialmente +/- 1% ou menos, e mais preferencialmente ainda +/- 0,1% ou menos do valor especificado, uma vez que essas variações são apropriadas para se praticar a invenção divulgada. No entanto, deve ser entendido que o valor ao qual o modificador "cerca de" se refere também é especificamente divulgado.
[00017] "Compreender", "compreendendo”, "compreende" e "compreendido por", como aqui utilizado, são sinônimos de "incluir", "incluindo", "inclui" ou “conter", "contendo", "contém" e são inclusivos ou termos abertos que especificam a presença do que se segue, por exemplo, componente e não excluem ou impedem a presença de componentes, recursos, elementos, membros, etapas adicionais não recitados conhecidos na técnica ou divulgados no presente documento.
[00018] A recitação de intervalos numéricos por pontos finais inclui todos os números e frações incluídos dentro desse intervalo, bem como os finais recitados.
[00019] A expressão “% em peso”, “porcentagem em peso” ou “percentagem em peso”, aqui e ao longo do relatório, a menos que definido de outra forma, refere-se ao peso relativo do respectivo componente com base no peso total da formulação.
[00020] O termo "cultura", tal como aqui utilizado, refere-se a uma população de microorganismos que são propagados por ou em meios de vários tipos.
[00021] O termo “identidade de sequência”, conforme usado neste documento, se refere ao grau em que as sequências são idênticas em uma base de nucleotídeo por nucleotídeo ao longo de uma janela de comparação. Sendo assim, uma "porcentagem de identidade de sequência" é calculada comparando-se duas sequências idealmente alinhadas na janela de comparação, determinando-se o número de posições nas quais ocorre a base de ácido nucleico idêntica (por exemplo, A, T, C, G, I) em ambas as sequências para render o número de posições coincidentes, dividindo-se o número de posições coincidentes pelo número total de posições na janela de comparação (isto é, o tamanho da janela) e multiplicando-se o resultado por 100 para render a porcentagem de identidade de sequência. Uma lacuna, isto é, uma posição em um alinhamento onde um resíduo está presente em uma sequência, mas não na outra, é considerada uma posição com resíduos não idênticos. A determinação da porcentagem de identidade de sequência pode ser feita manualmente ou por meio de programas de computador disponíveis na técnica.
[00022] Em microbiologia, "sequência de rRNA 16S" refere-se à sequência derivada pela caracterização dos nucleotídeos que compreendem o(s) gene(s) de RNA ribossômico 16S.
[00023] O termo “probióticos”, conforme aqui utilizado, refere-se a microorganismos que, quando administrados em quantidades adequadas, concedem benefícios à saúde do hospedeiro.
[00024] Os termos "flora gastrointestinal", microbiota intestinal, microbiota gastrointestinal, microflora intestinal, microflora gastrointestinal, microbioma intestinal ou microbioma gastrointestinal referem-se à comunidade complexa de microorganismos que vivem no trato gastrointestinal de animais.
[00025] Uma "ração animal", conforme aqui utilizada, compreende os alimentos bem como a água potável e o ar inalado pelo animal em questão.
[00026] O termo "unidade formadora de colônia" (CFU) se refere a uma unidade que é usada para se estimar o número de bactérias, leveduras ou células fúngicas em uma amostra, que pode ser, por exemplo, uma cultura de células, um aditivo alimentar ou uma composição alimentar. Embora geralmente usado apenas quando se refere a bactérias viáveis, o termo unidade formadora de colônia ou CFU também será definido como uma única célula bacteriana não viável ou não cultivável, quando se refere a modalidades da presente invenção compostas por uma cultura bacteriana processada.
[00027] Uma "cultura bacteriana processada" inclui uma cultura de células bacterianas isolada tratada por concentração, secagem, liofilização, secagem em tambor, secagem por pulverização e semelhantes. Uma cultura bacteriana processada inclui células bacterianas não viáveis ou não cultiváveis, células rompidas e meio de cultura compreendendo essas células ou células rompidas. Além disso, um produto de rompimento bacteriano e um homogenato após a remoção de detritos por centrifugação após o rompimento bacteriano podem ser usados como a bactéria processada da presente invenção. Uma "cultura bacteriana processada" compreende pelo menos parte do DNA da célula bacteriana, permitindo, assim, a identificação da cepa bacteriana na cultura bacteriana processada.
[00028] O termo "isolado" significa que a cepa foi removida de seu ambiente natural. "Isolado", portanto, implica uma etapa de purificação. No entanto, "isolado" não reflete necessariamente a extensão em que o microorganismo foi purificado. As cepas do presente pedido são purificadas pelo menos 2x, pelo menos 5x, pelo menos 10x, pelo menos 50x ou pelo menos 100x a partir da matéria-prima da qual está isolada.
[00029] O termo "Taxa de conversão de alimentação" ou "FCR" descreve a eficiência com a qual os animais convertem o alimento na produção desejada. Para vacas leiteiras, por exemplo, a produção é leite, enquanto, para animais criados para carne (como vacas de corte, porcos, galinhas e peixes), a produção é carne, ou seja, a massa corporal ganha pelo animal, representada ou na massa final do animal ou na massa da produção embalada. FCR é a massa da entrada (alimentação) dividida pela de saída.
[00030] O termo "desempenho zootécnico" pode ser entendido como um ou mais parâmetros ligados ao animal que melhorou, e que são importantes para animais de fazenda, como gado, aves, porcos, cavalos, etc. Em particular, os parâmetros zootécnicos podem incluir peso (médio), aumento de peso diário (médio), consumo de alimento diário (médio), razão de conversão de alimento (média), etc. De acordo com o art. 6, Reg. EC 1831/2003, um aditivo alimentar zootécnico é definido como "qualquer aditivo usado para afetar favoravelmente o desempenho de animais em boa saúde ou usado para afetar favoravelmente o meio ambiente".
[00031] Em um primeiro aspecto, a invenção fornece um aditivo alimentar inovador que compreende uma cultura bacteriana ou uma cultura bacteriana processada, em que a dita cultura compreende uma cepa bacteriana de ácido láctico isolada, caracterizada pela cepa compreender uma sequência de rRNA 16S que exibe pelo menos 95% de identidade de sequência em relação à SEQ ID N° 1, preferencialmente 99%, mais preferencialmente 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID N° 1. Consequentemente, em um segundo aspecto, a invenção fornece uma ração animal inovadora compreendendo tal aditivo alimentar.
[00032] A invenção para tal fornece uma cepa bacteriana de ácido láctico com propriedades probióticas. Mais em particular, a invenção se refere a uma cultura bacteriana que compreende uma cepa bacteriana de ácido láctico isolada, caracterizada pela cepa compreender uma sequência de rRNA 16S que exibe pelo menos 95% de identidade de sequência em relação à SEQ ID N° 1, de preferência 99%, mais preferencialmente 100% de identidade de sequência em relação à SEQ ID N° 1. Esta cepa é segura para consumo animal, é capaz de sobreviver ao trânsito gástrico quando consumida e é fisiologicamente ativa no trato gastrointestinal. Em uma modalidade adicional da invenção, a cepa bacteriana de ácido láctico isolada é depositada como o depósito de patente nº LMG P-30455.
[00033] Os inventores descobriram que a cultura bacteriana, bem como a cultura bacteriana processada, têm efeitos positivos notáveis quando administradas a animais, e contribuem para uma melhoria inesperada no desempenho zootécnico desses animais. Sem a intenção de limitação pela teoria, acredita-se que as melhorias zootécnicas estejam relacionadas a uma melhoria da flora gastrointestinal que evita a colonização gastrointestinal por microorganismos prejudiciais, reduzindo assim a necessidade de tratamento com antibióticos em animais. Portanto, a invenção ajuda ainda mais a prevenir a disseminação de patógenos entéricos resistentes a fármacos. Os efeitos positivos da cepa bacteriana no animal são ainda refletidos por um aumento no bem-estar animal, uma diminuição na incidência de doenças gastrointestinais e uma diminuição na taxa de mortalidade animal. Além disso, pensa-se que a cepa bacteriana de acordo com a invenção promove uma digestão e adsorção de nutrientes eficientes, proporcionando assim animais que requerem menos alimento. Além disso, esses animais têm uma menor taxa de conversão alimentar ou FCR, que se reflete em um ganho de peso diário aprimorado e um menor consumo diário de ração, resultando em uma enorme vantagem econômica, pois a lucratividade do crescimento dos animais aumenta consideravelmente, enquanto o custo da alimentação diminui.
[00034] A cultura bacteriana que compreende a cepa da bactéria de ácido láctico pode ser combinada com outras cepas bacterianas. Portanto, em uma outra modalidade, o aditivo alimentar compreende ainda uma ou mais cepas bacterianas adicionais, tais como, mas não se limitando a, cepas de bactérias de ácido láctico que compreende uma sequência de rRNA 16S exibindo menos de 95% de identidade de sequência em relação à SEQ ID N° 1, cepas bacterianas pertencentes ao filo Firmicutes e cepas bacterianas pertencentes ao gênero Bacteroides, que constituem os principais grupos da população da flora gastrointestinal.
[00035] Como mencionado acima, o consumo da dita cepa bacteriana de ácido láctico resulta em benefícios notáveis para a saúde do hospedeiro. Sem a intenção de limitação pela teoria, acredita-se que esses benefícios estejam relacionados, pelo menos parcialmente, à capacidade da cepa de colonizar o trato gastrointestinal ou respiratório do hospedeiro, onde compete por nutrientes com outros micróbios, incluindo os patogênicos. Além disso, a melhora positiva do desempenho zootécnico dos animais pode ser causada pela capacidade da cepa em produzir substâncias ou metabólitos com atividade antimicrobiana e/ou antipatogênica contra uma ampla gama de patógenos. Além disso, a cepa inovadora tem uma influência positiva na digestão e absorção de nutrientes no trato gastrointestinal do hospedeiro.
[00036] Para se estimular ainda mais o efeito positivo da cepa bacteriana no trato gastrointestinal ou respiratório do hospedeiro, outros componentes que podem servir como substratos para essas bactérias podem ser incluídos no aditivo alimentar. Alternativamente, esses componentes podem ajudar a estabilizar a fase aquosa do aditivo alimentar quando a subsequente liofilização ou secagem por pulverização da mistura for desejada. Consequentemente, em uma modalidade da invenção, o aditivo alimentar compreende ainda um ou mais ingredientes selecionados a partir do grupo que consiste em carboidratos, proteínas, lipídios, água e combinações dos mesmos. Além disso, ingredientes que são conhecidos por promoverem ainda mais o crescimento e/ou saúde animal também podem ser fornecidos no aditivo alimentar. Esses ingredientes incluem, mas não estão limitados a vitaminas, enzimas, oligoelementos, eletrólitos, componentes do óleo essencial e resíduos de aminoácidos.
[00037] As bactérias do ácido láctico são conhecidas por sua capacidade de converter carboidratos em ácido láctico. Acredita-se que a fermentação contribui para o efeito probiótico da cepa da invenção quando consumida pelo hospedeiro. Em outra modalidade, os carboidratos presentes no aditivo alimentar são selecionados a partir do grupo que consiste em monossacarídeos, dissacarídeos, oligossacarídeos, polissacarídeos e combinações dos mesmos. Os carboidratos que podem ser usados de acordo com a presente invenção incluem, mas não estão limitados a trealose, maltose, sacarose, dextrose, lactose, inulina, ribose, maltodextrina, amido e semelhantes. Em uma outra modalidade preferida, os carboidratos presentes no aditivo alimentar são selecionados a partir do grupo que consiste em frutose, dextrose, lactose, inulina, maltose, amido e combinações dos mesmos. Os inventores descobriram que estes carboidratos são substratos especialmente adequados para fermentação pela cepa bacteriana de ácido láctico da invenção.
[00038] Além disso, o aditivo alimentar de acordo com a invenção também inclui polipeptídeos e pode ainda incluir proteínas e lipídeos. As proteínas adequadas para ser utilizadas no aditivo alimentar de acordo com a invenção incluem proteína de soro de leite, albumina de ovo, gelatina, proteínas do leite, proteínas do plasma sanguíneo, proteínas de soja, farinha de peixe e outras proteínas animais e vegetais. As proteínas servem, por um lado, como uma fonte de nutriente e nitrogênio para o animal, bem como para a cepa bacteriana de ácido láctico, e, por outro lado, podem ajudar a estabilizar a fase aquosa do aditivo alimentar antes da liofilização ou secagem por pulverização da mistura. Outra fonte de nitrogênio adequada para inclusão no aditivo alimentar da invenção inclui, mas não está limitada a peptonas, que são uma mistura solúvel em água de polipeptídeos e aminoácidos resultantes da hidrólise parcial de proteínas. Consequentemente, em outra modalidade da invenção, as proteínas presentes no aditivo alimentar são selecionadas a partir do grupo que consiste em proteínas do soro de leite, proteínas do leite, proteínas do plasma sanguíneo e suas combinações. Lipídios adequados incluem, mas não estão limitados a, óleo de soja, óleo de oliva, óleo de palmiste, óleo de amendoim, óleo de noz, óleo de canola, óleo de coco, óleo de peixe e semelhantes. Em outra modalidade adicional, os lipídios presentes no aditivo alimentar são selecionados a partir do grupo que consiste em óleo de soja, óleo de palmiste, óleo de coco, óleo de peixe e suas combinações. Estes lipídios contribuem como fontes de energia para o animal, bem como estabilizadores durante a fase aquosa do aditivo alimentar antes da liofilização ou secagem por pulverização.
[00039] Outros ingredientes adequados que podem ser incluídos no aditivo alimentar de acordo com a invenção incluem, mas não estão limitados a ácidos graxos, oligossacarídeos não fermentáveis, compostos biologicamente ativos derivados de plantas e suas combinações. Compostos biologicamente ativos derivados de plantas, como aqui utilizados, incluem compostos como polifenóis, saponinas, flavonoides, monoterpenos, sulfetos de alila, licopenos, carotenoides, poliacetilenos, silimarina, catequinas glicirrizina, antioxidantes e outros.
[00040] Em outra modalidade adicional da invenção, a cultura bacteriana ou cultura bacteriana processada está presente no aditivo alimentar em uma quantidade de pelo menos 10 7 células por grama, com base no peso total do aditivo alimentar, de preferência entre 10 7 e 109 células por grama, com base no peso total do aditivo alimentar. A quantidade de células bacterianas desejadas pode ser determinada com o uso de vários métodos conhecidos pelo versado na técnica. No caso em que a cultura bacteriana de ácido láctico foi incluída no aditivo alimentar como uma cultura de células viável, por exemplo, as células podem ser contadas diretamente usando-se uma câmara de contagem ou por plaqueamento em meio de crescimento e contagem das unidades formadoras de colônia (CFU). Alternativamente, vários métodos para contagem automática de células são conhecidos na técnica, que podem ser usados para se determinar a quantidade de células no aditivo alimentar de acordo com a presente invenção, incluindo, por exemplo, citometria de fluxo. No caso em que as células podem ter sido agitadas pelo processamento da cultura bacteriana antes da inclusão no aditivo alimentar, a contagem de células pode ser realizada com base na quantificação baseada em PCR da sequência específica de rRNA 16S correspondente à cepa presente no aditivo alimentar.
Métodos baseados em PCR são conhecidos pelos versados na técnica e incluem, entre outros, PCR em tempo real (RT-PCR) e PCR quantitativo (qPCR). Não é necessário dizer que outros métodos conhecidos na técnica adequados para a quantificação de culturas bacterianas ou culturas bacterianas processadas podem, da mesma forma, ser aplicados em combinação com a presente invenção.
[00041] A cultura bacteriana ou cultura bacteriana processada de acordo com a presente invenção é fornecida no aditivo alimentar como pó (uma cultura bacteriana de ácido láctico seca), como uma preparação líquida ou como uma pasta. Quando fornecidos como uma composição seca, os ingredientes do aditivo alimentar, incluindo a cultura bacteriana de ácido láctico, são liofilizados, secos ao ar, secos em tambor ou secos por pulverização usando- se métodos padrão conhecidos pelo versado na técnica. De preferência, a cepa bacteriana está presente no aditivo alimentar como um pó, um pélete, um grânulo, uma pasta ou um líquido. Em uma outra modalidade da invenção, a cultura bacteriana de ácido láctico ou cultura bacteriana processada é fornecida no aditivo alimentar como um pó seco por pulverização. A secagem por pulverização é um método de produção de um pó seco a partir de um líquido ou pasta fluida, secando-se rapidamente com um gás quente. De preferência, a cultura bacteriana de ácido láctico é misturada com um transportador adequado antes da secagem por pulverização. A secagem por pulverização é particularmente adequada para secar uma cultura bacteriana ou cultura bacteriana processada, pois pode ser usada não apenas para secar, mas também para encapsular simultaneamente as partículas da cultura em um transportador adequado. Alternativamente, a cultura bacteriana de ácido láctico ou cultura bacteriana processada também pode ser fornecida como um sólido ou pó seco no aditivo alimentar usando-se um secador por congelamento (liofilizador), um secador de tambor ou um secador de combustão pulsada.
[00042] Em outra modalidade adicional, o aditivo alimentar está na forma de uma preparação líquida ou uma preparação sólida,
tal como, entre outras, uma cápsula de gelatina cheia com uma composição de bactéria de ácido láctico seca. Alternativamente, o aditivo alimentar pode ser fornecido na alimentação na forma de uma preparação líquida, que é usada para revestir as partículas alimentares, por exemplo, entre outras, usando-se revestimento a vácuo de grânulos alimentares.
[00043] Em outra modalidade, o aditivo alimentar é fornecido diretamente ao animal na forma de um bolo alimentar tomado por via oral, tal como, mas não se limitando a, uma cápsula de gelatina, um comprimido prensado, uma cápsula de gel ou uma bebida líquida. Em outra modalidade, o aditivo alimentar de acordo com a presente invenção é fornecido ao animal através da adição do aditivo alimentar compreendendo a cultura bacteriana à ração animal, em que "ração animal", tal como aqui utilizado, compreende a ração, bem como a água potável do animal.
[00044] Em outra modalidade adicional, o aditivo alimentar é fornecido por meio de administração nasal e/ou inalação. Aerossóis para inalação podem ser gerados por nebulização do aditivo alimentar. Tal como aqui utilizado, o termo "aerossol" é utilizado no seu sentido convencional, referindo-se a partículas líquidas ou sólidas muito finas, transportadas por um gás propulsor sob pressão. O aditivo alimentar formulado para entrega ao trato respiratório pode ainda compreender um transportador farmaceuticamente aceitável. Essas formulações são geralmente soluções, por exemplo, soluções aquosas, soluções etanólicas, soluções aquosas/etanólicas, soluções salinas e suspensões coloidais. Qualquer método conhecido pelos versados na técnica que seja útil na geração de aerossóis pode ser usado na presente invenção. O aerossol de acordo com a invenção pode compreender ainda um transportador e/ou um propulsor de fluido. O aerossol pode estar na forma de uma solução, suspensão, emulsão, pó ou preparação semissólida. Os aerossóis empregados na presente invenção destinam-se à administração como partículas sólidas finas ou como névoas líquidas através do trato respiratório de um animal. Vários tipos de propulsores conhecidos pelos versados na técnica podem ser utilizados.
Exemplos de propulsores adequados incluem, entre outros, hidrocarbonetos ou outros gases adequados. O aditivo alimentar também pode ser fornecido por meio de administração nasal ou inalação usando-se um nebulizador, que é um instrumento que gera partículas líquidas muito finas de tamanho substancialmente uniforme em um gás. De preferência, um líquido contendo o aditivo alimentar é disperso como gotículas. A névoa resultante penetra no trato respiratório do animal com a inalação. Alternativamente, o aditivo alimentar pode ser administrado como um pó para inalação.
[00045] Em outra modalidade adicional da invenção, a cultura bacteriana de ácido láctico ou cultura bacteriana processada está presente na ração animal em uma quantidade de pelo menos 10 4 células por grama, com base no peso total da ração animal, de preferência entre 10 4 e 106 células por grama. O aditivo alimentar de acordo com a presente invenção está presente na ração animal como uma refeição, um pélete, uma pasta ou um líquido.
[00046] Os inventores descobriram que o consumo da cultura bacteriana ou cultura bacteriana processada da invenção por um animal resulta em uma melhoria inesperada da flora gastrointestinal, da histologia e/ou do desempenho zootécnico do animal hospedeiro. Portanto, e em um quarto aspecto, a invenção fornece um método para se melhorar positivamente a flora gastrointestinal, a histologia gastrointestinal e/ou o desempenho zootécnico de animais, compreendendo a etapa de se fornecer aos ditos animais um aditivo alimentar ou uma ração animal de acordo com a invenção, de preferência, o aditivo alimentar ou o alimento é administrado aos animais como um líquido ou como um pó. Essa melhoria promove uma digestão mais eficiente e um crescimento mais rápido dos animais. Além disso, o método da invenção resulta em animais mais saudáveis que são menos propensos a doenças gastrointestinais e, assim, mostram uma diminuição na taxa de mortalidade. Finalmente, o método da invenção também tem a vantagem de diminuir a necessidade de administração de antibióticos aos animais.
[00047] Como, em princípio, todos os animais são colonizados por cepas microbianas, o método descrito é adequado para todos os animais. No entanto, sabe-se que alguma especificidade ocorre na interação hospedeiro-bactéria. Portanto, em uma modalidade, os animais para os quais o método de acordo com a invenção é adequado são selecionados a partir do grupo que consiste em mamíferos, peixes, crustáceos e pássaros. Mamíferos para os quais o método é adequado incluem, mas não estão limitados a humanos, cavalos, burros, cães, gatos, cervos, coelhos, ovelhas, cabras, porcos e vacas, de preferência humanos, cavalos, cães, gatos, coelhos, ovelhas, porcos e vacas. As espécies de peixes para as quais o método da invenção é adequado incluem, mas não estão limitadas a peixes de água doce, como Salmonidae, peixes pertencentes à tripa de ciclídeo Tilapiini, geralmente conhecida como Tilapia, peixes pertencentes ao gênero Pangasius, bagre, carpa europeia, variedades de carpa Amur geralmente conhecidas como Koi, lúcio do norte e truta, mais preferencialmente Samonidae, Tilapia e Pangasius. Os crustáceos para os quais o método é adequado incluem, mas não estão limitados a camarões, caranguejos, lagostas e krill, de preferência camarões. As espécies de aves para as quais o método da invenção é adequado incluem, mas não se limitam a galinhas, perus, gansos e patos, de preferência galinhas e perus.
[00048] Sem a intenção de limitação pela teoria, pensa- se que fornecer o aditivo probiótico para rações a animais de acordo com a presente invenção resulta na fixação da bactéria probiótica à mucosa gastrointestinal ou respiratória, colonização do trato gastrointestinal ou respiratório e, assim, prevenção da fixação de microorganismos prejudiciais. O aumento positivo da flora gastrointestinal em um animal é refletido em conformidade por um aumento do número de bactérias benéficas no trato gastrointestinal em comparação com o número de bactérias prejudiciais. Mais especificamente, o método da invenção pode ser usado para aumentar a existência de cepas bacterianas benéficas no trato gastrointestinal (isto é, a flora gastrointestinal). Exemplos não limitativos de culturas bacterianas benéficas são cepas bacterianas pertencentes ao filo Firmicutes e cepas bacterianas pertencentes ao gênero de Bacteroides.
[00049] Pensa-se que o método da invenção resulta em uma flora gastrointestinal mais saudável e equilibrada, resultando eventualmente na melhoria do bem-estar animal. O aumento positivo da flora gastrointestinal de um animal é uma forma de combater bactérias patogênicas no trato gastrointestinal, pois as bactérias benéficas limitam o crescimento de bactérias nocivas. Portanto, pensa-se que o método de acordo com a invenção leva a uma redução significativa na necessidade por tratamento com antibióticos em animais. Isso contribui para prevenir ainda mais a disseminação de patógenos entéricos resistentes aos medicamentos.
[00050] A saúde do trato gastrointestinal pode ser avaliada com base nas propriedades histológicas do intestino grosso ou do intestino delgado. O intestino delgado é a parte do trato gastrointestinal entre o estômago e o intestino grosso, e é onde ocorre a maior parte da absorção final dos alimentos. O componente epitelial do intestino delgado é composto de vilosidades (projeções em forma de dedo) e criptas de Liberkuhn (criptas). A razão entre o comprimento das vilosidades e o comprimento das criptas é característica do estado de saúde do animal e encontra-se dentro de valores fixos que são conhecidos pelo versado na técnica. O aumento positivo da histologia gastrointestinal em um animal como resultado do método descrito pela presente invenção pode, assim, ser avaliado medindo-se a proporção do comprimento das vilosidades sobre o comprimento da cripta. A histologia gastrointestinal positivamente melhorada resultante do método da invenção leva a uma melhor adsorção de nutrientes no intestino. Portanto, o método de acordo com a invenção resulta em animais que precisam de menos alimento, portanto, um custo de alimentação menor concomitante pode ser alcançado.
[00051] Finalmente, o método de acordo com a invenção resulta em uma melhoria positiva no desempenho zootécnico dos animais em questão. Embora não haja intenção de limitação pela teoria, acredita-
se que a flora gastrointestinal positivamente melhorada e/ou a histologia gastrointestinal positivamente melhorada resulta em absorção de nutrientes e utilização de nutrientes mais eficientes no animal. Por fim, isso se reflete no desempenho zootécnico positivamente aprimorado do animal. Uma melhora no desempenho zootécnico de um animal se correlaciona a um aumento de ganho de peso diário e um menor consumo diário de ração, resultando em uma enorme vantagem econômica à medida que a lucratividade do crescimento dos animais aumenta consideravelmente.
[00052] Em uma modalidade do método, é fornecida ao animal uma única dose diária de aditivo alimentar que compreende a cultura bacteriana, de acordo com a presente invenção. Em outra modalidade do método, são fornecidas ao animal múltiplas doses diárias de aditivo alimentar que compreende a cultura bacteriana, de acordo com a presente invenção. A quantidade total consumida dependerá das necessidades individuais do animal e do peso e tamanho do animal. A dosagem preferida para qualquer aplicação pode ser facilmente determinada por titulação. A titulação é realizada por preparação de uma série de doses padrão de peso, cada uma contendo de cerca de 104 a 109 células bacterianas de ácido láctico por grama. Uma série de doses é administrada, começando-se com 0,5 grama e continuando-se até um ponto final lógico, determinado pelo tamanho do animal e a forma de dosagem. A dose apropriada é alcançada quando a quantidade mínima de composição de bactérias de ácido láctico necessária para atingir os resultados desejados é administrada. A dose apropriada também é conhecida pelosversados na técnica como uma "quantidade eficaz" das composições probióticas da presente invenção.
[00053] Finalmente, conforme descrito acima, alimentar um animal com a cepa bacteriana inovadora na forma de um aditivo alimentar ou de uma ração animal, como descrito acima, pode ser usada de forma eficiente para se melhorar positivamente o desempenho zootécnico dos animais. Portanto, em um quinto e último aspecto, a invenção fornece o uso de um aditivo alimentar ou de uma ração animal, conforme descrito acima, para se melhorar positivamente o desempenho zootécnico dos animais. Os parâmetros zootécnicos que são melhorados incluem a taxa de conversão alimentar, peso, aumento de peso diário, saúde geral do animal, consumo diário de alimento, etc.
[00054] Em uma modalidade, o dito aditivo alimentar serve como um intensificador de digestibilidade e/ou estabilizador ou intensificador da flora intestinal.
[00055] Em uma modalidade, o dito aditivo alimentar melhora o desempenho zootécnico de animais jovens, por exemplo, desde o nascimento até um estágio anterior à idade adulta, tais como leitões, bezerros ou frangos.
[00056] A invenção é ainda descrita pelos seguintes exemplos não limitativos, que visam ajudar a ilustrar a invenção, e não visam, nem devem ser interpretados de tal modo a limitar o âmbito da invenção.
[00057] A presente invenção será descrita em mais detalhes com referência aos exemplos, que não são limitativos.
EXEMPLOS EXEMPLO 1: DESEMPENHO ZOOTÉCNICO DE LEITÕES ALIMENTADOS COM UM ADITIVO ALIMENTAR, DE ACORDO COM UMA MODALIDADE DA INVENÇÃO.
[00058] O estudo incluiu um total de 45 leitões, com cerca de três semanas de idade e desmamados aos 21 dias. Esses animais foram divididos em três grupos, cada um contendo 15 leitões. Os leitões pertencentes ao "Grupo 1" foram alimentados diariamente com uma ração padrão para leitões. Os leitões pertencentes ao "Grupo 2" foram alimentados diariamente com uma ração padrão para leitões suplementada com 0,1% (com base no peso total da ração) de um aditivo alimentar compreendendo 10 7 células/grama (com base no peso total do aditivo) da cultura bacteriana de ácido láctico, de acordo com uma modalidade da invenção. Os leitões pertencentes ao "Grupo 3" foram alimentados diariamente com uma ração padrão para leitões suplementada com 0,1% (com base no peso total da ração) de um aditivo alimentar compreendendo 107 células/grama (com base no peso total do aditivo) da cultura bacteriana de ácido láctico processada de acordo com uma modalidade da invenção. Foi ainda fornecida aos leitões água potável ad libitum.
[00059] Deve ser observado que o termo "unidade formadora de colônia" (CFU), embora geralmente apenas usado quando se refere a bactérias viáveis, também é usado para descrever uma única célula bacteriana não viável, quando se refere a modalidades da presente invenção compostas de uma cultura bacteriana processada. A cultura bacteriana de ácido láctico processada deste exemplo inclui uma cultura de células bacterianas isolada, tratada por secagem por pulverização e compreende células bacterianas não viáveis, células rompidas e meio de cultura compreendendo essas células ou células rompidas.
[00060] Os animais foram separados por grupos e acondicionados em baias isoladas. O experimento foi realizado durante 6 semanas. As medições do peso corporal foram realizadas antes do início do ensaio, 2 semanas após e 4 semanas após o início do ensaio.
[00061] Os resultados do ensaio são mostrados na Tabela 1 em relação a leitões de 5 semanas de idade e na Tabela 2 em relação a leitões de 9 semanas de idade.
[00062] Como mostrado nas Tabelas 1 e 2, alimentar leitões com ração animal de acordo com uma modalidade da invenção resultou em uma melhora positiva no crescimento diário, sem a necessidade de uma maior ingestão diária de alimento. Consequentemente, a taxa de conversão alimentar (FCR) dos leitões foi inferior quando os leitões foram alimentados com uma ração de acordo com uma modalidade da invenção. Fornecer aos animais uma ração animal de acordo com uma modalidade da invenção não resultou apenas no aumento positivo no desempenho zootécnico dos animais, mas também em um aumento no bem-estar animal, como é ilustrado pela diminuição na mortalidade dos animais fornecidos com a ração animal, de acordo com uma modalidade da invenção. TABELA 1. DESEMPENHO ZOOTÉCNICO DE LEITÕES COM 5 SEMANAS DE IDADE. GRUPO 1 GRUPO 2 GRUPO 3 PESO INICIAL (kg) 5,63 5,34 5,50 PESO FINAL (kg) 8,13 7,88 8,08 CONSUMO DE RAÇÃO (g/dia) 254 252 245 CRESCIMENTO DIÁRIO (g/dia) 179 182 184 TAXA DE CONVERSÃO ALIMENTAR 1,42 1,39 1,33 (FCR) MORTALIDADE (%) 6,7 0,0 0,0 TABELA 2. DESEMPENHO ZOOTÉCNICO DE LEITÕES COM 9 SEMANAS DE IDADE. GRUPO 1 GRUPO 2 GRUPO 3 PESO INICIAL (kg) 5,63 5,34 5,50 PESO FINAL (kg) 22,53 22,90 22,85 CONSUMO DE RAÇÃO (g/dia) 542 551 545 CRESCIMENTO DIÁRIO (g/dia) 345 358 354 TAXA DE CONVERSÃO ALIMENTAR 1,57 1,54 1,54 (FCR) MORTALIDADE (%) 13,3 6,7 0,0
[00063] Supõe-se que a presente invenção não está restrita a qualquer forma de realização descrita anteriormente e que algumas modificações podem ser adicionadas ao exemplo apresentado sem reavaliação das reivindicações anexas. Por exemplo, a presente invenção foi descrita referindo-se a leitões, mas é nítido que a invenção pode ser aplicada a bezerros, por exemplo, ou a frangos.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS SEQ ID N° 1 gacgaacgct ggcggcatgc ctaatacatg caagtcgaac gagcttccgt tgaatgacgt 60 gcttgcactg atttcaacaa tgaagcgagt ggcgaactgg tgagtaacac gtgggraatc 120 tgcccagaag caggggataa cacttggaaa caggtgctaa taccgtataa caacaaaatc 180 cgcatggatt ttgtttgaaa ggtggcttcg gctatcactt ctggatgatc ccgcggcgta 240 ttagttagtt ggtgaggtaa aggcccacca agacgatgat acgtagccga cctgagaggg 300 taatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct acgggaggca gcagtaggga 360 atcttccaca atggacgaaa gtctgatgga gcaatgccgc gtgagtgaag aagggtttcg 420 gctcgtaaaa ctctgttgtt aaagaagaac acctttgaga gtaactgttc aagggttgac 480 ggtatttaac cagaaagcca cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg 540 gcaagcgttg tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca ggcggttttt taagtctgat 600 gtgaaagcct tcggcttaac cggagaagtg catcggaaac tgggagactt gagtgcagaa 660 gaggacagtg gaactccatg tgtagcggtg gaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt 720 ggcgaaggcg gctgtctagt ctgtaactga cgctgaggct cgaaagcatg ggtagcgaac 780 aggattagat accctggtag tccat 805
Claims (21)
1. Método para aumentar positivamente o desempenho zootécnico de animais e/ou a taxa de conversão alimentar caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de fornecer aos ditos animais um aditivo alimentar ou um alimento suplementado com o dito aditivo alimentar, em que o dito aditivo alimentar compreende uma cepa bacteriana de ácido láctico isolada, a dita cepa compreende uma sequência de rRNA 16S que exibe pelo menos 95% de identidade de sequência com a SEQ ID N° 1.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a dita cepa compreende uma sequência de rRNA 16S que exibe pelo menos 99% de identidade de sequência com a SEQ ID N° 1.
3. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita cepa compreende uma sequência de rRNA 16S que exibe 100% de identidade de sequência com a SEQ ID N° 1.
4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a cepa bacteriana de ácido láctico isolada é depositada como depósito de patentes nº LMG P-30455.
5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita cepa bacteriana ou cepa bacteriana processada da mesma está presente em uma quantidade de pelo menos 107 células por grama, com base no peso total do aditivo alimentar.
6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita cepa bacteriana ou cepa bacteriana processada está presente como um pó, um pélete, um grânulo, uma pasta ou um líquido.
7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita cepa bacteriana ou cepa bacteriana processada é fornecida no aditivo alimentar como um pó seco por pulverização.
8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o dito aditivo alimentar está na forma de uma preparação sólida ou uma preparação líquida.
9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que os ditos animais são selecionados a partir do grupo que consiste em mamíferos, peixes, crustáceos ou aves.
10. Aditivo alimentar caracterizado pelo fato de que compreende uma cultura bacteriana ou uma cultura bacteriana processada, em que a dita cultura compreende uma cepa bacteriana de ácido láctico isolada, em que a cepa é definida por compreender uma sequência de rRNA 16S que exibe pelo menos 95% de identidade de sequência com a SEQ ID N° 1.
11. Aditivo alimentar, de acordo com a reivindicação 10 anterior, caracterizado pelo fato de que a dita cepa compreende uma sequência de rRNA 16S que exibe pelo menos 99% de identidade de sequência com a SEQ ID N° 1.
12. Aditivo alimentar, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita cepa compreende uma sequência de rRNA 16S que exibe 100% de identidade de sequência com a SEQ ID N° 1.
13. Aditivo alimentar, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita cepa bacteriana de ácido láctico é depositada como depósito de patentes nº LMG P-30455.
14. Aditivo alimentar, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que compreende ainda um ou mais ingredientes selecionados a partir do grupo que consiste em carboidratos, proteínas, lipídios, água e combinações dos mesmos.
15. Aditivo alimentar, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a cepa ou uma cepa processada da mesma está presente em uma quantidade de pelo menos 10 7 células por grama, com base no peso total do aditivo alimentar.
16. Aditivo alimentar, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita cepa bacteriana ou cepa bacteriana processada da mesma está presente como um pó, um pélete, um grânulo, uma pasta ou um líquido.
17. Aditivo alimentar, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita cepa bacteriana ou cepa bacteriana processada é fornecida no aditivo alimentar como um pó seco por pulverização.
18. Aditivo alimentar, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que está na forma de uma preparação sólida ou uma preparação líquida.
19. Ração animal caracterizada pelo fato de que compreende um aditivo alimentar, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores.
20. Ração animal, de acordo com a reivindicação 19 anterior, caracterizado pelo fato de que a dita cepa bacteriana ou cepa bacteriana processada está presente no alimento em uma quantidade de pelo menos 104 células por grama, com base no peso total da ração animal.
21. Uso de um aditivo alimentar, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 a 18, ou uma ração animal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 19 a 20, caracterizado pelo fato de que é para melhorar positivamente o desempenho zootécnico de animais e/ou a taxa de conversão alimentar.
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