BR112020003632A2

BR112020003632A2 - método de tratamento de um indivíduo que sofre ou corre risco de desenvolver ahus

Info

Publication number: BR112020003632A2
Application number: BR112020003632-3A
Authority: BR
Inventors: Gregory A. Demopulos; Kenneth M. Ferguson; William Joseph Lambert; John Steven Whitaker
Original assignee: Omeros Corporation
Priority date: 2017-08-25
Filing date: 2018-08-21
Publication date: 2020-10-27
Also published as: KR20200037863A; MX2020002077A; EP3672994A1; WO2019040453A1; MA49960A; AU2018322032A1; RU2020111574A3; CA3072913A1; CL2020000397A1; CN111278863A; TW201925224A; JP2020531523A; RU2020111574A; US20190062455A1; EP3672994A4; IL272673A

Abstract

  A presente invenção refere-se a métodos terapêuticos de utilização de formulações estáveis de anticorpos inibidores de MASP-2, de alta concentração e baixa viscosidade, e kits compreendendo as formulações para o tratamento de indivíduos que sofrem de síndrome hemolítica urêmica atípica (aHUS).

Description

USO DE UMA QUANTIDADE EFICAZ DE UM ANTICORPO ANTI MASP-2 OU FRAGMENTO DE LIGAÇÃO AO ANTÍGENO DO MESMO

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção refere-se a formulações estáveis, de alta concentração e baixa viscosidade de anticorpos inibidores de MASP-2, kits compreendendo as formulações e métodos terapêuticos utilizando as formulações e kits para inibir os efeitos adversos da ativação do complemento dependente de MASP-2.

DECLARAÇÃO EM RELAÇÃO À LISTAGEM DE SEQUÊNCIA

[002] A listagem de sequências associada a este pedido é provida em formato de texto em vez de uma cópia em papel e é aqui incorporada por referência no relatório descritivo. O nome do arquivo de teste que contém a listagem de sequências é MP 1 0262 PCT SequenceListing 20180814 ST25.txt. O arquivo de texto tem 17 KB; foi criado em 14 de agosto de 2018 e está sendo enviado via EFS- Web com o depósito do relatório descritivo.

FUNDAMENTOS

[003] A terapia à base de anticorpos é geralmente administrada regularmente e geralmente requer dosagens de muitos mg/kg por injeção. Uma forma preferida de entrega para o tratamento de condições crônicas é a administração ambulatorial de anticorpos monoclonais em altas doses (vários mg por kg) por injeção subcutânea (SC) (Stockwin e Holmes, Expert Opin Biol Ther 3:1133-1152 (2003); Shire et al., J Pharm Sci 93:1390-1402 (2004)). Formulações farmacêuticas altamente concentradas de um anticorpo terapêutico são desejáveis porque permitem administração de menor volume e/ou menos administrações, o que consequentemente significa menos desconforto para o paciente. Além disso, esses volumes mais baixos permitem o empacotamento das doses terapêuticas de um anticorpo monoclonal em seringas pré-cheias individuais de dose única para autoadministração. À entrega por SC via seringa pré-cheia ou tecnologia de autoinjetor permite a administração domiciliar e melhora a conformidade do paciente com a administração do fármaco.

[004] No entanto, o desenvolvimento de uma formulação com alta concentração de proteínas apresenta desafios relacionados à estabilidade física e química da proteína, bem como dificuldades com a fabricação, armazenamento e entrega da formulação da proteína (ver, por exemplo, Wang et al, J of Pharm Sci vol 96(1):1-26, (2007)) Um desafio no desenvolvimento de formulações de alta concentração de proteína é a viscosidade da solução dependente da concentração. A uma dada concentração de proteína, a viscosidade varia dramaticamente em função da formulação. Em particular, sabe-se que os anticorpos monoclonais exibem perfis de concentração-viscosidade peculiares e diversificados que revelam um aumento exponencial acentuado na viscosidade da solução com o aumento da concentração de anticorpos monoclonais (ver, por exemplo, Connolly BD et al., Biophysical Journal vol 103: 69-78, (2012)). Outro desafio com formulações líquidas com alta concentração de anticorpos monoclonais é a estabilidade física das proteínas (Alford et al., J. Pharm Sci 97:3005-3021 (2008); Salinas et al., J Pharm Sci 99:82-93 (2010); Sukumar et al., Pharm Res 21:1087-1093 (2004)). Portanto, a alta viscosidade das formulações farmacêuticas de anticorpos monoclonais em altas concentrações juntamente com o potencial para diminuição da estabilidade pode impedir seu desenvolvimento como produtos adequados para entrega subcutânea e/ou intravenosa.

[005] O sistema complemento desempenha um papel na resposta inflamatória e é ativado como resultado de dano tecidual ou infecção microbiana. A ativação do complemento deve ser rigorosamente regulada para garantir o direcionamento seletivo dos microrganismos invasores e evitar danos autoinfligidos (Ricklin et al, Nat. Immunol. 11:785-797, 2010).

Atualmente, é amplamente aceito que o sistema complemento pode ser ativado através de três vias distintas: a via clássica, a via da lectina e a via alternativa. A via clássica é usualmente desencadeada por um complexo composto por anticorpos hospedeiros ligados a uma partícula estranha (isto é, um antígeno) e geralmente requer exposição prévia a um antígeno para a geração de uma resposta de anticorpo específica. Como a ativação da via clássica depende de uma resposta imune adaptativa prévia pelo hospedeiro, a via clássica é parte do sistema imune adquirido. Em contraste, tanto a via de lectina quanto a alternativa são independentes da imunidade adaptativa e fazem parte do sistema imune inato.

[006] Foi demonstrado que a serina protease associada à lectina de ligação à manana-2 (MASP-2) é necessária para a função da via da lectina, uma das principais vias de ativação do complemento (Vorup-Jensen et al., J. Immunol 165:2093-2100, 2000; Ambrus et al., J Immunol. 170:1374-1382, 2003; Schwaeble et al., PNAS 108:7523-7528, 2011). Significativamente, a inibição da MASP-2 não parece interferir com a via de ativação do complemento clássico dependente de anticorpos, que é um componente crítico da resposta imune adquirida à infecção. Conforme descrito na Patente dos EUA Nº 9.011.860 (atribuída à Omeros Corporation), que é aqui incorporada por referência, OMS646, foi gerado um anticorpo monoclonal completamente humano visando a MASP-2 humana que se liga à MASP-2 humana com alta afinidade e bloqueia a atividade do complemento da via de lectina e, portanto, é útil para tratar várias doenças e distúrbios associados à via de complemento de lectina.

[007] Como descrito adicionalmente na Patente dos EUA *

7.919.094, Patente dos EUA Nº 8.840.893, Patente dos EUA Nº 8.652.477, Patente dos EUA Nº 8.951.522, Patente dos EUA Nº 9.011.860; Patente dos EUA Nº 9.644.035, Publicação de Pedido de Patente dos EUA Nºs US2013/0344073, US2013/0266560, US 2015/0166675; US2017/0189525; e

Pedidos de Patente dos EUA copendentes Nºs 15/476,154, 15/347,434, 15/470,647, 62/315,857, 62/275,025 e 62/527,926 (cada um dos quais é atribuído à Omeros Corporation, cessionária do presente pedido, cada um dos quais é aqui incorporado por referência), a ativação do complemento dependente de MASP-2 tem sido implicada como contribuindo para a patogênese de vários estados patológicos agudos e crônicos. Portanto, existe a necessidade de uma formulação estável, de alta concentração e baixa viscosidade de um anticorpo monoclonal de MASP-2 que seja adequado para administração parentérica (por exemplo, subcutânea), para tratamento de indivíduos que sofrem de doenças e distúrbios associados à via do complemento de MASP-2.

SUMÁRIO

[008] Em um aspecto, a presente descrição provê uma formulação farmacêutica estável adequada para administração parentérica em um indivíluo — mamífero, “compreendendo: (a) uma solução aquosa compreendendo um sistema tampão com um pH de 5,0 a 7,0; e (b) um anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo que se liga especificamente à MASP-2 humana em uma concentração de cerca de 50 mg/mL a cerca de 250 mg/mL, em que o dito anticorpo ou fragmento do mesmo compreende (1) uma região variável de cadeia pesada compreendendo CDR-H1, CDR-H2 e CDR- H3 da SEQ ID NO:2 e (11) uma região variável de cadeia leve compreendendo CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 da SEQ ID NO:3 ou uma variante da mesma compreendendo uma região variável de cadeia pesada com pelo menos 95% de identidade à SEQ ID NO: 2 e uma região variável de cadeia pesada com pelo menos 95% de identidade à SEQ ID NO:3; em que a formulação tem uma viscosidade entre 2 e 50 centipoise (cP) e em que a formulação é estável quando armazenada entre 2ºC e 8ºC por pelo menos um mês. Em algumas modalidades, a concentração do anticorpo na formulação é de cerca de 150 mg/mL a cerca de 200 mg/mL. Em algumas modalidades, a viscosidade da formulação é menor que 25 cP. Em algumas modalidades, o sistema de tamponamento compreende histidina. Em algumas modalidades, o sistema de tamponamento compreende citrato. Em algumas modalidades, a formulação compreende adicionalmente um excipiente, como um agente modificador de tonicidade, em uma quantidade suficiente para que a formulação seja hipertônica. Em algumas modalidades, a formulação compreende adicionalmente um tensoativo. Em algumas modalidades, a formulação compreende adicionalmente uma enzima hialuronidase em uma quantidade eficaz para aumentar a dispersão e/ou absorção do anticorpo após administração subcutânea.

[009] Em outro aspecto, a formulação está contida num dispositivo de administração subcutânea, tal como uma seringa pré-cheia.

[0010] Em outro aspecto, a presente descrição provê um Kkit que compreende um recipiente pré-cheio contendo a formulação.

[0011] Em outro aspecto, a presente descrição provê uma composição farmacêutica para uso no tratamento de um paciente que sofre ou corre risco de desenvolver uma doença ou condição dependente de MASP-2, em que a composição é uma forma de dosagem estéril e de uso único compreendendo de cerca de 350 mg a cerca de 400 mg (isto é, 350 mg, 360 mg, 370 mg, 380 mg, 390 mg ou 400 mg) de anticorpo inibidor de MASP-2, em que a composição compreende cerca de 1,8 mL a cerca de 2,2 mL (isto é, 1,8 mL, 1,9 mL, 2,0 mL, 2,1 mL ou 2,2 mL) de uma formulação de anticorpo de 185 mg/mL, tal como aqui descrito, em que o dito anticorpo ou fragmento do mesmo compreende (1) uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:2 e (11) uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:3; e em que a formulação é estável quando armazenada entre 2ºC e 8ºC por pelo menos seis meses. Em algumas modalidades, a doença ou condição dependente de MASP-2 é selecionada a partir do grupo que consiste em aHUS, HSCT-TMA, IgAN e nefrite lúpica (LN).

[0012] Em outro aspecto, a presente descrição provê um método de tratamento de um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio passível de tratamento com um anticorpo inibidor de MASP-2 compreendendo a administração da formulação compreendendo um anticorpo MASP-2, conforme descrito aqui.

[0013] Em outro aspecto, a presente descrição provê um método de tratamento de um indivíduo que sofre ou corre risco de desenvolver aHUS, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-MASP-2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:2 e (ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:3; em que o método compreende um ciclo de administração compreendendo uma fase de indução e uma fase de manutenção, em que: (a) a fase de indução compreende um período de uma semana, em que o anticorpo anti-MASP-2, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, é administrado a uma dose de cerca de 370 mg no dia 1 e no dia4; e (b) a fase de manutenção compreende um período de pelo menos 26 semanas, começando no dia 1 do período de indução, em que o anticorpo anti-MASP-2, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, é administrado em uma dose diária de cerca de 150 mg.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0014] Os aspectos precedentes e muitas das vantagens da presente invenção serão mais prontamente reconhecidas à medida que a mesma se torne melhor compreendida por referência à seguinte descrição detalhada, quando considerados em conjunto com os desenhos anexos, em que:

A FIGURA 1A ilustra graficamente a quantidade de deposição do complexo de ataque à membrana (MAC) dependente da via da lectina na presença de diferentes quantidades de anticorpo monoclonal humano de MASP-2 (OMS646), demonstrando que OMS646 inibe a deposição de MAC mediada por lectina com um valor de ICs9 de aproximadamente 1 nM, como descrito no Exemplo 1;

A FIGURA 1B ilustra graficamente a quantidade de deposição de MAC dependente da via clássica na presença de diferentes quantidades de anticorpo monoclonal MASP-2 humano (OMS646), demonstrando que o OMS646 não inibe a deposição de MAC mediada pela via clássica, como descrito no Exemplo 1;

A FIGURA 1C ilustra graficamente a quantidade de deposição de MAC dependente da via alternativa na presença de anticorpo monoclonal MASP-2 humano (OMS646), demonstrando que o OMS646 não inibe a deposição de MAC mediada pela via alternativa, como descrito no Exemplo 1;

A FIGURA 2A ilustra graficamente os resultados da análise de dispersão de luz dinâmica (DLS) para o rastreamento de excipientes da formulação OMS646, mostrando o diâmetro geral das partículas observado para formulações contendo vários excipientes candidatos, como descrito no Exemplo 2;

A FIGURA 2B ilustra graficamente os resultados para a análise DLS para a triagem de excipientes da formulação OMS646, mostrando a polidispersividade geral observada para formulações contendo vários excipientes candidatos, como descrito no Exemplo 2;

A FIGURA 3 ilustra graficamente os resultados da análise de viscosidade de uma faixa de concentrações de OMS646 em várias formulações, medidas em pH 5,0 e pH 6,0, conforme descrito no Exemplo 2;

A FIGURA 4 ilustra graficamente a porcentagem de recuperação de proteínas após a troca de tampão para o estudo de solubilidade/viscosidade de OMS646 com várias formulações candidatas, como descrito no Exemplo 2; A FIGURA 5 ilustra graficamente a viscosidade (conforme determinado pelo ajuste exponencial dos dados de viscosidade) versus a concentração de proteína para o estudo de solubilidade/viscosidade de OMS646 com várias formulações candidatas, como descrito no Exemplo 2; A FIGURA 6 ilustra graficamente os dados de viscosidade normalizada com a concentração de proteína para o estudo de viscosidade com várias formulações de OMS64candidatas, como descrito no Exemplo 2; A FIGURA 7A ilustra graficamente a carga média (Ibf) de três formulações de OMS646 candidatas em um estudo de seringabilidade usando agulhas de 27 GA (1,25”), 25GA (1”) e 25GA de paredes finas (1”) como descrito no Exemplo 3; e A FIGURA 7B ilustra graficamente a carga máxima (Ibf) de três formulações de OMS646 candidatas em um estudo de seringabilidade usando agulhas de 27 GA (1,25), 25GA (17) e 25GA de paredes finas (1”), conforme descrito no Exemplo 3.

DESCRIÇÃO DA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS SEQ ID NO: 1 proteína de MASP-2 humana (madura) SEQ ID NO:2: Polipeptídeo da região variável de cadeia pesada (VH) de OMS646 SEQ ID NO:3: Polipeptídeo da região variável de cadeia leve (VL) de OMS646 SEQ ID NO:4: Polipeptídeo de comprimento total de cadeia pesada mutada por IgG4 de cadeia pesada de OMS646 SEQ ID NO:5: Polipeptídeo de comprimento total de cadeia leve de OMS646 SEQ ID NO:6: DNA que codifica o polipeptídeo de cadeia pesada de comprimento total de OMS646

SEQ ID NO:7: DNA que codifica o polipeptídeo de cadeia leve de comprimento total de OMS646.

DESCRIÇÃO DETALHADA

1. DEFINIÇÕES

[0015] A menos que especificamente definido aqui, todos os termos aqui utilizados têm o mesmo significado que seria entendido pelos especialistas na técnica da presente invenção. As seguintes definições são providas a fim de prover clareza com relação aos termos como são usados no relatório descritivo e nas reivindicações para descrever a presente invenção.

[0016] Técnicas padrão podem ser usadas para DNA recombinante, síntese de oligonucleotídeos e cultura e transformação de tecidos (por exemplo, eletroporação, lipofecção). As reações enzimáticas e técnicas de purificação podem ser realizadas de acordo com as especificações do fabricante ou como comumente realizado na técnica ou conforme descrito aqui. Estas e outras técnicas e procedimentos relacionados podem ser geralmente executados de acordo com métodos convencionais bem conhecidos na técnica e conforme descrito em várias referências gerais e mais específicas que são citadas e discutidas ao longo do presente relatório descritivo. Ver, por exemplo, Sambrook er al., 2001, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 3º ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (Greene Publ. Assoc. Inc. & John Wiley & Sons, Inc., NY, NY); Current Protocols in Immunology (Edited by: John E. Coligan, Ada M. Kruisbeek, David H. Margulies, Ethan M. Shevach, Warren Strober 2001 John Wiley & Sons, NY, NY); ou outras publicações relevantes do Protocolo Atual e outras referências semelhantes. A menos que definições específicas sejam providas, a nomenclatura utilizada em conexão com e os procedimentos e técnicas de laboratório de biologia molecular, química analítica, química orgânica sintética e química medicinal e farmacêutica aqui descritas são aquelas bem conhecidas e comumente usadas na técnica. Técnicas padrão podem ser usadas para tecnologia recombinante, síntese molecular biológica, microbiológica, química, análises químicas, preparação farmacêutica, formulação e entrega e tratamento de pacientes.

[0017] O termo “formulação farmacêutica” refere-se a uma preparação que é de forma a permitir que a atividade biológica do agente ativo (por exemplo, anticorpo inibidor de MASP-2) seja eficaz para O tratamento e que não contém componentes adicionais que sejam inaceitavelmente tóxicos a um indivíduo no qual a formulação seria administrada. Tais formulações são estéreis. Em uma modalidade, a formulação farmacêutica é adequada para administração parentérica, como administração subcutânea.

[0018] O termo “MASP-2” refere-se à serina protease-2 associada à lectina de ligação à manana. A proteína MASP-2 humana (madura) é apresentada como SEQ ID NC: 1.

[0019] O termo “ativação do complemento dependente de MASP2” compreende a ativação dependente de MASP2 da via da lectina, que ocorre em condições fisiológicas (isto é, na presença de Ca**), levando à formação da via da lectina C3 convertase C4b2a e após a acumulação do produto de clivagem de C3 C3b subsequentemente à C5 convertase C4b2a(C3b)n.

[0020] O termo “via da lectina” refere-se à ativação do complemento que ocorre através da ligação específica de proteínas de ligação a carboidratos séricas e não séricas incluindo lectina de ligação à manana (MBL), CL-11 e ficolinas (H-ficolina, M-ficolina ou L-ficolina).

[0021] O termo “via clássica” refere-se à ativação do complemento que é desencadeada por um anticorpo ligado a uma partícula estranha e requer a ligação da molécula de reconhecimento C1lq.

[0022] O termo “anticorpo inibidor de MASP-2” refere-se a um anticorpo, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga à

MASP? e inibe efetivamente a ativação do complemento dependente da MASP?2 (por exemplo, OMS646). Os anticorpos inibidores de MASP-2 úteis no método da invenção podem reduzir a ativação do complemento dependente de MASP-2 em mais de 20%, em mais de 30% ou em mais de 40% ou em mais de 50% ou em mais de 60 % ou em mais de 70% ou em mais de 80% ou em mais de 90% ou em mais de 95%.

[0023] O termo “anticorpo monoclonal de OMS646” refere-se a um anticorpo monoclonal compreendendo CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 da sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada apresentada na SEQ ID NO:2 e compreendendo CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 da sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve apresentada na SEQ ID NO:3. Este anticorpo particular é um exemplo de um anticorpo inibidor de MASP-2 que se liga especificamente à MASP-2 e inibe a ativação do complemento dependente de MASP-2.

[0024] Um “anticorpo monoclonal” refere-se a uma população de anticorpos homogêneos em que o anticorpo monoclonal é constituído por aminoácidos (de ocorrência natural e de ocorrência não natural) que estão envolvidos na ligação seletiva de um epítopo. Os anticorpos monoclonais são altamente específicos para o antígeno alvo. O termo “anticorpo monoclonal” engloba não apenas anticorpos monoclonais intactos e anticorpos monoclonais de comprimento total, mas também fragmentos dos mesmos (tais como Fab, Fab', F(ab')z, Fv), cadeia única (scFv), variantes dos mesmos, proteínas de fusão compreendendo uma porção de ligação ao antígeno, anticorpos monoclonais humanizados, anticorpos monoclonais quiméricos e qualquer outra configuração modificada da molécula de imunoglobulina que compreende um fragmento de ligação ao antígeno (sítio de reconhecimento de epítopo) da especificidade requerida e a capacidade de se ligar a um epítopo. Não se pretende limitar no que diz respeito à fonte do anticorpo ou à maneira em que é feito (por exemplo, por hibridoma, seleção de fago, expressão recombinante, animais transgênicos, etc.). O termo inclui imunoglobulinas completas bem como os fragmentos, etc. descritos acima sob a definição de “anticorpo”.

[0025] O termo “fragmento de anticorpo” refere-se a uma porção derivada de ou relacionada com um anticorpo de comprimento total, tal como, por exemplo, um anticorpo inibidor de MASP-2, incluindo geralmente incluindo a ligação ao antígeno ou a região variável da mesma. Exemplos ilustrativos de fragmentos de anticorpo incluem fragmentos de Fab, Fab”, F(ab),, F(ab')>, fragmentos scFv, diacorpos, anticorpos lineares, moléculas de anticorpo de cadeia única e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpo.

[0026] Como usado aqui, um fragmento de anticorpo “Fv de cadeia única” ou “scFv” compreendendo os domínios VH e VL de um anticorpo, em que esses domínios estão presentes em uma cadeia de polipeptídeo simples. Geralmente, o polipeptídeo de Fv compreende adicionalmente um ligante de polipeptídeo entre os domínios VH e VL que permite que o scFv forme a estrutura desejada para ligação aos antígenos.

[0027] O termo “região CDR” ou “CDR” pretende indicar as regiões hipervariáveis das cadeias pesada e leve da imunoglobulina, conforme definido por Kabat et al., 1991 (Kabat, EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5º edição e edições posteriores. Um anticorpo contém tipicamente 3 CDRs de cadeia pesada e 3 CDRs de cadeia leve. O termo CDR ou CDRs é usado aqui para indicar, de acordo com o caso, uma dessas regiões, ou várias, ou até mesmo o todo, dessas regiões que contêm a maioria dos resíduos de aminoácidos responsáveis pela ligação por afinidade do anticorpo para o antígeno do epítopo que ele reconhece.

[0028] O termo “ligação específica” refere-se à capacidade de um anticorpo se ligar preferencialmente a um analito particular que está presente em uma mistura homogênea de diferentes analitos. Em certas modalidades,

uma interação de ligação específica discriminará entre analitos desejáveis e indesejáveis em uma amostra, em algumas modalidades mais do que cerca de a 100 vezes ou mais (por exemplo, mais do que cerca de 1000 ou 10.000 vezes). Em certas modalidades, a afinidade entre um agente de captura e analito quando eles são especificamente ligados em um complexo agente de captura/analito é caracterizada por um KD (constante de dissociação) inferior a cerca de 100 nM, ou inferior a cerca de 50 nM, ou inferior a cerca de 25 nM, ou inferior a cerca de 10 nM, ou inferior a cerca de 5 nM, ou inferior a cerca de 1 nM.

[0029] O termo “anticorpo isolado” refere-se a um anticorpo que foi identificado e separado e/ou recuperado e/ou purificado a partir de um componente de seu ambiente natural ou sistema de expressão da cultura de células. Em modalidades preferidas, o anticorpo será purificado (1) para mais de 95% em peso de anticorpo e mais preferencialmente para mais de 99% em peso; conforme determinado por um método adequado para medir a concentração de proteínas, como, por exemplo, o método de Lowry ou absorbância em OD280, (2) até um grau suficiente para obter pelo menos 15 resíduos da sequência de aminoácidos N-terminal ou interna usando de um sequenciador de taça giratória; ou (3) à homogeneidade por SDS-PAGE sob condições redutoras ou não redutoras usando azul de Coomassie ou, preferencialmente, coloração de prata. Tipicamente, um anticorpo isolado para uso nas formulações aqui descritas será preparado por pelo menos uma etapa de purificação.

[0030] Como usado aqui, os resíduos de aminoácidos são abreviados da seguinte forma: alanina (Ala; A), asparagina (Asn; N), ácido aspártico (Asp; D), arginina (Arg; R), cisteína (Cys; O), ácido glutâmico (Glu; E), glutamina (Gln; Q), glicina (Gly; G), histidina (Hush), isoleucina (Ilia), leucina (Lull), lisina (Lys; K), metionina (Met; M), fenilalanina (Phe; FP), prolina (Pro; P) , serina (Ser; S), treonina (Thr; T), triptofano (Trp; W),

tirosina (Tir; Y) e valina (Val; V).

[0031] No sentido mais amplo, os aminoácidos que ocorrem naturalmente podem ser divididos em grupos baseados nas características químicas da cadeia lateral dos respectivos aminoácidos. Por aminoácido “hidrofóbico” entende-se Ile, Leu, Met, Phe, Trp, Tyr, Val, Ala, Cys ou Pro. Por aminoácido “hidrofílico” entende-se Gly, Asn, Gln, Ser, Thr, Asp, Glu, Lys, Arg ou His. Este agrupamento de aminoácidos pode ser adicionalmente subclassificado como se segue. Por aminoácidos “hidrofílios não carregados” entende-se Ser, Thr, Asn ou Gln. Por aminoácido “ácido” entende-se Glu ou Asp. Por aminoácido “básico” entende-se Lys, Arg ou His.

[0032] Como aqui utilizado, o termo “substituição de aminoácidos conservativa” é ilustrado por uma substituição entre aminoácidos dentro de cada um dos seguintes grupos: (1) glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina, (2) fenilalanina, tirosina e triptofano, (3) serina e treonina, (4) aspartato e glutamato, (5) glutamina e asparagina e (6) lisina, arginina e histidina.

[0033] Como aqui utilizado, “um indivíduo” inclui todos os mamíferos, incluindo sem limitação humanos, primatas não humanos, cães, gatos, cavalos, ovelhas, cabras, vacas, coelhos, porcos e roedores.

[0034] O termo “farmaceuticamente aceitável” com relação a um excipiente em uma formulação farmacêutica significa que o excipiente é adequado para administração a um indivíduo humano.

[0035] O termo “administração subcutânea” refere-se à administração de uma formulação sob todas as camadas da pele de um indivíduo.

[0036] O termo “tampão” refere-se a uma solução tamponada que resiste a mudanças no pH pela ação de seus componentes conjugados ácido- base. O tampão desta invenção possui um pH na faixa de cerca de 4 a cerca de 8; preferencialmente de cerca de 5 a cerca de 7; e mais preferencialmente tem um pH na faixa de cerca de 5,5 a cerca de 6,5. Exemplos de tampões que controlarão o pH nessa faixa incluem acetato (por exemplo, acetato de sódio), succinato (como succinato de sódio), gluconato, histidina, citrato e outros tampões de ácidos orgânicos. Um “agente de tamponamento” é um composto usado para produzir soluções tamponadas.

[0037] O termo “histidina” inclui especificamente L-histidina, a menos que especificado de outra forma.

[0038] O termo “isotônico” refere-se a uma formulação que tem essencialmente a mesma pressão osmótica que o sangue humano. Às formulações isotônicas geralmente terão uma pressão osmótica de cerca de 250 a cerca de 350 mOsmol/KgH,O. A isotonicidade pode ser medida usando um osmômetro de pressão de vapor ou depressão de ponto de congelamento, por exemplo.

[0039] O termo “hipertônico” refere-se a uma formulação com uma pressão osmótica acima da humana (ou seja, maior que 350 mOsm/KgH,O).

[0040] O termo “agente modificador de tonicidade” refere-se a um agente farmaceuticamente aceitável adequado para prover uma formulação isotônica ou, em algumas modalidades, uma formulação hipertônica.

[0041] O termo “estéril” refere-se a um produto farmacêutico que é asséptico ou livre de bactérias viáveis, fungos ou outros microrganismos, que pode ser alcançado por qualquer meio adequado, como, por exemplo, uma formulação que foi processada e enchida assepticamente ou filtrada através de membranas de filtração estéreis, antes ou após a preparação da formulação e enchida.

[0042] O termo “formulação estável” refere-se à manutenção do nível inicial de pureza de uma formulação durante um período de tempo. Em outras palavras, se uma formulação for pelo menos 95% pura, como pelo menos 96% pura, pelo menos 97% pura, pelo menos 98% pura ou pelo menos 99% pura em relação a uma determinada espécie de anticorpo (por exemplo, anticorpo inibidor de MASP-2) no tempo 0, a estabilidade é uma medida de quão bem e por quanto tempo a formulação retém substancialmente esse nível de pureza (por exemplo, sem formação de outras espécies, como porções fragmentadas (LMW) ou agregados das espécies puras (HMW)). Uma formulação é estável se o nível de pureza não diminuir substancialmente quando armazenada a aproximadamente 2-8ºC durante um determinado período de tempo, como pelo menos 6 meses, pelo menos 9 meses, pelo menos 12 meses ou pelo menos 24 meses. Por “não diminuir substancialmente”, significa que o nível de pureza da formulação varia em menos de 5%, como em menos de 4%, ou em menos de 3%, ou em menos de 2% ou em menos de | % por período de tempo (por exemplo, mais de 6 meses, mais de 9 meses ou mais de 12 meses ou mais de 24 meses). Em uma modalidade, uma formulação estável é estável a uma temperatura de 2-8ºC por um período de pelo menos seis meses. Em uma modalidade preferida, uma formulação estável é estável a uma temperatura de 2-8ºC por um período de pelo menos um ano, ou por um período de pelo menos dois anos. Em uma modalidade, a formulação é estável se o anticorpo inibidor de MASP-2 permanecer pelo menos 95% monomérico durante o armazenamento de 2ºC a 8ºC por pelo menos um mês, ou por pelo menos seis meses ou por pelo menos 12 meses, conforme determinado pela SEC-HPLC.

[0043] O termo “conservante” refere-se a um composto que pode ser incluído em uma formulação para reduzir essencialmente o crescimento ou a contaminação bacteriana. Exemplos não limitantes de conservantes em potencial incluem cloreto de octadecildimetilbenzilamônio, cloreto de hexametônio, cloreto de benzalcônio (uma mistura de cloretos de alquilbenzildimetilamônio nos quais os grupos alquila são compostos de cadeia longa) e cloreto de benzetônio. Outros tipos de conservantes incluem álcoois aromáticos como fenol, álcool butílico e benzílico, alquil parabenos como metil ou propil parabeno, catecol, resorcinol, ciclo-hexanol, 3-pentanol e m-cresol.

[0044] O termo “excipiente” refere-se a uma substância inerte em uma formulação que confere uma propriedade física benéfica a uma formulação como aumento da estabilidade da proteína e/ou diminuição da viscosidade. Exemplos de excipientes adequados incluem, entre outros, proteínas (por exemplo, albumina sérica), aminoácidos (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico, lisina arginina, glicina e histidina), sacarídeos (por exemplo, glicose, sacarose, maltose e trealose), polióis (por exemplo, manitol e sorbitol), ácidos graxos e fosfolipídios (por exemplo, alquilsulfonatos e caprilatos).

[0045] O termo “substancialmente livre” significa que nenhuma substância está presente ou apenas quantidades de traços mínimas da substância estão presentes que não têm nenhum impacto substancial nas propriedades da composição. Se for feita referência a nenhuma quantidade de uma substância, ela deverá ser entendida como “nenhuma quantidade detectável”.

[0046] O termo “viscosidade” refere-se à medida da resistência de um fluido que está sendo deformado por tensão de cisalhamento ou esforço de tração; pode ser avaliado usando um viscosímetro (por exemplo, um viscosímetro de esfera rolante) ou reômetro. A menos que indicado de outra forma, a medição da viscosidade (centipoise, cP) é a cerca de 25ºC com uma taxa de cisalhamento na faixa de 100.000 a 250.000 1/s.

[0047] O termo “administração parentérica” refere-se a uma via de administração diferente dos intestinos e inclui a injeção de uma forma de dosagem no corpo por uma seringa ou outro dispositivo mecânico, como uma bomba de infusão. As vias parentéricas podem incluir vias de administração intravenosa, intramuscular, subcutânea e intraperitoneal. A injeção subcutânea é uma via de administração preferida.

[0048] O termo “tratamento” refere-se ao tratamento terapêutico e/ou medidas profiláticas ou preventivas. Aqueles que precisam de tratamento incluem os indivíduos que já têm a doença e aqueles em que a doença deve ser prevenida. Portanto, o paciente a ser tratado aqui pode ter sido diagnosticado como portador da doença ou pode estar predisposto ou suscetível à doença.

[0049] O termo “quantidade efetiva” refere-se a uma quantidade de uma substância que provê o efeito desejado. No caso de uma substância farmacêutica, é a quantidade de ingrediente ativo eficaz para tratar uma doença no paciente. No caso de um ingrediente de formulação, por exemplo, uma enzima hialuronidase, uma quantidade eficaz é a quantidade necessária para aumentar a dispersão e a absorção do anticorpo inibidor de MASP-2 coadministrado, de maneira que o anticorpo inibidor de MASP-2 possa agir de maneira terapeuticamente eficaz, conforme descrito acima.

[0050] Como aqui utilizado, o termo “cerca de” como aqui utilizado pretende especificar que o valor específico provido pode variar até certo ponto, tal como uma variação na faixa de + 10%, preferencialmente + 5%, mais preferencialmente + 2% estão incluídos no valor fornecido. Por exemplo, a frase “uma formulação farmacêutica com cerca de 200 mg/mL de anticorpo inibidor de MASP-2” é entendida como significando que a formulação pode ter de 180 mg/mL a 220 mg/mL de anticorpo inibidor de MASP-2 (por exemplo, OMS646). Onde as faixas são declaradas, os pontos finais são incluídos dentro da faixa, a menos que indicado de outra forma ou de outra forma evidente no contexto.

[0051] Tal como aqui utilizado aqui, as formas singulares “um”, “uma” e “a/0” incluem aspectos plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Assim, por exemplo, a referência a “um excipiente” inclui uma pluralidade de tais excipientes e seus equivalentes conhecidos pelos peritos na técnica, a referência a “um agente” inclui um agente, bem como dois ou mais agentes; a referência a “um anticorpo” inclui uma pluralidade de tais anticorpos e a referência a “uma região estrutural” inclui referência a uma ou mais regiões estruturais e seus equivalentes conhecidos dos especialistas na técnica, e assim por diante.

[0052] Cada modalidade neste relatório descritivo deveria ser aplicada, mutatis mutandis, a qualquer outra modalidade, a menos que especificamente indicado de outro modo. Está contemplado que qualquer modalidade discutida neste relatório descritivo pode ser implementada em relação a qualquer método, kit, reagente ou composição da invenção, e vice- versa. Além disso, as composições da invenção podem ser utilizadas para alcançar métodos da invenção. II. Visão geral da invenção

[0053] A presente descrição provê formulações farmacêuticas de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta viscosidade, de alta concentração e estáveis, adequadas para administração parentérica (por exemplo, administração subcutânea) e também adequadas para diluição antes da administração — intravenosa. — Formulações — farmacêuticas — altamente concentradas de anticorpo terapêutico são desejáveis porque permitem administração de menor volume e/ou menos administrações, o que consequentemente significa menos desconforto para o paciente. Além disso, esses volumes mais baixos permitem o empacotamento das doses terapêuticas de anticorpo inibidor de MASP-2 em frascos ou seringas pré-cheias individuais de dose única para autoadministração. As formulações de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição compreendem uma solução aquosa compreendendo um sistema tampão com um pH de 4,0 a 8,0, mais preferencialmente tendo um pH de cerca de 5,0 a cerca de 7,0 e um anticorpo monoclonal inibidor de MASP-2 (por exemplo, OMS646) ou seu fragmento de ligação ao antígeno a uma concentração de cerca de 50 mg/mL a cerca de 250 mg/mL. Em modalidades preferidas, o anticorpo inibidor de MASP-2 (por exemplo, OMSG646) está presente nas formulações de alta concentração adequadas para administração subcutânea a uma concentração de cerca de 100 mg/mL a cerca de 250 mg/mL. Em modalidades particulares, o anticorpo inibidor de MASP-2 (por exemplo, OMS646) está presente nas formulações de alta concentração em uma concentração de cerca de 150 mg/mL a cerca de 200 mg/mL, como cerca de 175 mg/mL a cerca de 195 mg/mL, como cerca de 185 mg/mL.

[0054] Em várias modalidades, as formulações farmacêuticas compreendem adicionalmente, além de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e sistema tampão, um ou mais excipientes, como um agente modificador de tonicidade (por exemplo, um aminoácido com uma cadeia lateral carregada) e opcionalmente um tensoativo não iônico. Em algumas modalidades, as formulações farmacêuticas de acordo com esta descrição compreendem adicionalmente uma enzima hialuronidase.

[0055] Uma vantagem significativa das formulações farmacêuticas altamente concentradas do anticorpo inibidor de MASP-2 da presente invenção é sua baixa viscosidade em altas concentrações de proteína. Como é do conhecimento dos especialistas na técnica, a alta viscosidade das formulações farmacêuticas de anticorpos monoclonais em concentrações > 100 mg/mL pode impedir seu desenvolvimento como produtos adequados para entrega subcutânea e/ou intravenosa. Portanto, as formulações farmacêuticas com viscosidade mais baixa são altamente desejáveis devido à sua facilidade de fabricação, tais como, sem limitação, processamento, filtragem e enchimento. Como descrito nos Exemplos 2 e 3 aqui, as formulações da presente descrição compreendendo de 100 mg/mL a 200 mg/mL de anticorpo inibidor de MASP-2 OMS646 têm viscosidade surpreendentemente baixa, como uma viscosidade menor que cerca de 50 cP, como entre 2 cP e 50 cP, como entre 2 cP e 40 cP, como entre 2 cP e 30 cP, ou entre 2 cP e 25 cP, ou entre 2 cP e 25 cP, ou entre 2 cP e 20 cP ou entre 2 cPel1l8cP.

[0056] Além disso, as formulações farmacêuticas de anticorpo inibidor de MASP-2 altamente concentradas e de baixa viscosidade da presente invenção permitem que as formulações farmacêuticas sejam administradas por meio de seringas e agulhas padrão, dispositivos autoinjetores e dispositivos de microinfusão conhecidos na técnica. Como descrito no Exemplo 3, determinou-se que a alta concentração e baixa viscosidade das formulações farmacêuticas de anticorpo inibidor de MASP-2, como aqui descritas, possui capacidade de seringabilidade e injetabilidade adequadas para administração subcutânea. A seringabilidade e a injetabilidade são parâmetros-chave de desempenho do produto de uma formulação farmacêutica destinada a qualquer administração parentérica, por exemplo, intramuscular ou subcutânea e permitem a administração de tais formulações por injeção intramuscular ou subcutânea por meio de agulhas de pequeno diâmetro normalmente usadas para tais injeções, como, por exemplo, agulhas 29GA regular ou de paredes finas, 27GA (1,25”) regular ou de paredes finas ou 25GA (1”) regular ou de paredes finas. Em alguns casos, a baixa viscosidade das formulações farmacêuticas de anticorpo inibidor de MASP-2, conforme descrito aqui, permite a administração de um volume injetado aceitável (por exemplo, 1-3 cc), enquanto entrega uma quantidade eficaz do anticorpo inibidor de MASP-2 OMS646 em um injeção única em um único local de injeção.

[0057] Uma vantagem adicional significativa das formulações da presente descrição é que as formulações de alta concentração e baixa viscosidade do anticorpo inibidor de MASP-2 (ou seja, >100 mg/mL a 200 mg/mL) são estáveis quando armazenadas de 2ºC a 8ºC por pelo menos 30 dias, até pelo menos 9 meses ou até pelo menos 12 meses ou mais, conforme descrito nos estudos de estabilidade nos Exemplos 2 e 4.

[0058] A presente descrição também provê um processo para a preparação das formulações de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade, recipientes incluindo as ditas formulações,

kits terapêuticos compreendendo as formulações; e métodos terapêuticos de uso de tal formulação, recipientes e kits para o tratamento de um indivíduo que sofre de, ou em risco de desenvolver uma doença ou condição associada à ativação do complemento dependente de MASP-2.

Anticorpo Inibidor de MASP-2

[0059] Como detalhado aqui, a presente invenção é projetada para formulações “compreendendo anticorpos monoclonais que se ligam especificamente à MASP-2 e inibem a ativação do complemento dependente de MASP-2 e seus fragmentos de ligação ao antígeno. Em certas modalidades, um anticorpo inibidor de MASP-2 ou um fragmento de ligação a antígeno para uso nas formulações reivindicadas é um anticorpo inibidor de MASP-2 referido como “OMS646”, conforme descrito em WO2012/15148]1 (aqui incorporado aqui por referência) que compreende um polipeptídeo de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:2 e um polipeptídeo de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:3. Como descrito em WO2012/151481 e descrito no Exemplo 1, OMS646 se liga especificamente à MASP-2 humana com alta afinidade e tem a capacidade de bloquear a atividade do complemento da via da lectina. Em certas circunstâncias, um anticorpo inibidor de MASP-2 ou um fragmento de ligação a um antígeno do mesmo para uso em formulações reivindicadas é um anticorpo inibidor de MASP-2 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo (i) CDR-H1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de 31-35 da SEQ ID NO: 2, (1) CDR-H2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de 50-65 da SEQ ID NO: 2 e it) CDR-H3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de 95-107 da SEQ ID NO: 2; e (b) uma região variável da cadeia leve compreendendo: 1) CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos de 24-34 da SEQ ID NO: 3, ii) CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos de 50 a 56 da SEQ ID NO: 3 e iti) CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos de

89-97 da SEQ ID NO:3. Em algumas modalidades, o anticorpo inibidor de MASP-2 para uso nas formulações reivindicadas compreende uma variante de OMS646 compreendendo uma região variável de cadeia pesada com pelo menos 95% de identidade à SEQ ID NO:2 e compreendendo uma região variável de cadeia leve com pelo menos 95% de identidade à SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, o anticorpo inibidor de MASP-2 para uso nas formulações —reivindicadas compreende uma variante de OMS646 compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 95% de identidade à SEQ ID NO: 2, em que o resíduo 31 é um R, o resíduo 32 é um G, o resíduo 33 é um K, o resíduo 34 é um M, o resíduo 35 é um G, resíduo 36 é um V, resíduo 37 é um S, resíduo 37 é um S, resíduo 50 é um L, resíduo 5léum A, resíduo 52 é um H, resíduo 53 é um [, resíduo 54 é um F, resíduo 55éumS, resíduo 56 é um S, resíduo 57 é um D, resíduo 57 é um D, resíduo 58 é um E, resíduo 59 é um K, resíduo 60 é um S, resíduo 61 é um Y, resíduo 62 é um R, resíduo 63 é um T, resíduo 64 é um S, resíduo 65 é um L, resíduo 66 é um K, resíduo 67 é um S, resíduo 95 é um Y, resíduo 96 é um Y, resíduo 97 é um C, resíduo 98 é um A, resíduo 99 é um R, resíduo 100 é um LI, o resíduo 101 é um R, o resíduo 102 é um R ou A, resíduo 103 é um G, resíduo 104 é um G, resíduo 105 é um 1, resíduo 106 é um D e resíduo 107 é um Y; e b) uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos possuindo pelo menos 95% de identidade à SEQ ID NO:3, em que o resíduo 23 é um S, resíduo 24 é um G, resíduo 25 é um E ou D, resíduo 26 é um K, resíduo 27 é um L, resíduo 28 é um G, resíduo 29 é um D, resíduo é um K, resíduo 31 é um Y ou F, resíduo 32 é um A, resíduo 33 é um Y, resíduo 33 é um Y, resíduo 49 é Q, resíduo 50 é um D, resíduo 51 é um K ou N, resíduo 52 é um Q ou K, resíduo 53 é um R, resíduo 54 é um P, resíduo 55 é um P, resíduo 55 é um S, resíduo 56 é um G, resíduo 88 é um Q, resíduo 89 é um A, resíduo 90 é um W, resíduo 91 é um D, resíduo 92 é um S, resíduo 93 éumS, resíduo 93 é um S, resíduo 94 é um T, resíduo 95 é um A, resíduo 95 é um A, resíduo 96 é um V e o resíduo 97 é um F.

[0060] Em algumas modalidades, o anticorpo monoclonal inibidor de MASP-2 (por exemplo, OMS646 ou uma variante do mesmo) para uso nas formulações reivindicadas é um anticorpo monoclonal de comprimento total. Em algumas modalidades, o anticorpo inibidor monoclonal de MASP-2 é um anticorpo de I2G4 humano de comprimento total. Em algumas modalidades, o IgG4 compreende uma mutação pontual na região de dobradiça para melhorar a estabilidade do anticorpo.

[0061] Em algumas modalidades, o anticorpo inibidor de MASP-2 (por exemplo, OMS646 ou uma variante do mesmo) é composto de regiões variáveis de origem humana fundidas às regiões constantes da cadeia pesada e cadeia leve lambda de IZG4 humana, em que a cadeia pesada compreende uma mutação pontual na região de dobradiça (por exemplo, em que a molécula de IgG4 compreende uma mutação S228P) para melhorar a estabilidade do anticorpo. Em algumas modalidades, o anticorpo inibidor de MASP-2 é um tetrâmero que consiste em duas cadeias pesadas idênticas com a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:4 e duas cadeias leves idênticas com a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:5.

[0062] Em algumas modalidades, a concentração do anticorpo inibidor de MASP-2 na formulação é de cerca de 100 mg/mL a cerca de 250 mg/mL, como cerca de 150 mg/ml a cerca de 220 mg/mL, como cerca de 175 mg/mL a cerca de 200 mg/mL, ou cerca de 175 mg/mL a cerca de 195 mg/mL. Em certas modalidades, o anticorpo inibidor de MASP-2 está presente na formulação em uma concentração de cerca de 175 mg/ml a cerca de 195 mg/ml, como cerca de 180 mg/ml a cerca de 190 mg/ml, como cerca de 175 mg/mL, como cerca de 180 mg/mL, cerca de 181 mg/mL, cerca de 182 mg/mL, cerca de 183 mg/mL, cerca de 184 mg/mL, cerca de 185 mg/mL, cerca de 186 mg/mL, cerca de 187 mg/mL, cerca de 188 mg/mL, cerca de 189 mg/mL ou tal como cerca de 190 mg/mL.

[0063] Em algumas modalidades, pequenas variações nas sequências de aminoácidos dos anticorpos inibidores de MASP-2 ou seus fragmentos são contempladas como abrangidas pelas formulações reivindicadas, desde que as variações na sequência de aminoácidos mantenham pelo menos 90%, pelo menos 95% , pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência aos anticorpos inibidores de MASP-2 ou seus fragmentos de ligação ao antígeno descritos aqui (ou seja, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência à SEQ ID NO:2 e/ou pelo menos pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência à SEQ ID NO: 3) e retenham a capacidade de inibir a ativação do complemento dependente de MASP-2.

[0064] Como será reconhecido, os anticorpos inibidores de MASP-2 ou seus fragmentos de ligação ao antígeno que são formulados no contexto da presente descrição podem ser produzidos usando técnicas bem conhecidas na técnica (por exemplo, tecnologias recombinantes, tecnologias de exibição de fagos, tecnologias sintéticas ou combinações de tais tecnologias ou outras tecnologias prontamente conhecidas na técnica). Os métodos para produzir e purificar anticorpos e fragmentos de ligação a antígeno são bem conhecidos na técnica e podem ser encontrados, por exemplo, em Harlow e Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, Capítulos 5-8 e 15.

[0065] Por exemplo, os anticorpos inibidores de MASP-2, como OMS646, podem ser expressos em uma linha celular de mamífero adequada. As sequências que codificam a região variável da cadeia pesada e a região variável da cadeia leve de um anticorpo específico de interesse, como OMS646 (por exemplo, SEQ ID NO: 6 e SEQ ID NO: 7) podem ser usadas para transformar uma célula hospedeira de mamífero adequada. Métodos para introdução de polinucleotídeos heterólogos em células de mamíferos são bem conhecidos na técnica e incluem transfecção mediada por dextrano, precipitação de fosfato de cálcio, transfecção mediada por polibreno, fusão de protoplastos, “eletroporação, encapsulação dos polinucleotídeo(s) em lipossomas, e microinjeção direta do DNA nos núcleos.

[0066] As linhas celulares de mamíferos disponíveis como hospedeiros para expressão são bem conhecidas na técnica e incluem muitas linhas de células imortalizadas disponíveis na American Type Culture Collection (ATCC), incluindo, entre outras, células de ovário de hamster chinês (CHO), células HeLa, células de rim de hamster bebê (BNK), células renais de macaco (COS), células de carcinoma hepatocelular humano (por exemplo, HepG2), células epiteliais de rim humano 293 (HEK293) e várias outras linhas de células.

[0067] Após a fase de produção de proteínas do processo de cultura de células, os anticorpos inibidores de MASP-2 são recuperados do meio de cultura de células usando técnicas compreendidas por um especialista na técnica. Em particular, em algumas modalidades, os polipeptídeos de cadeia pesada e leve do anticorpo inibidor de MASP-2 são recuperados do meio de cultura como polipeptídeos segregados.

[0068] Os anticorpos inibidores de MASP-2 podem ser purificados usando, por exemplo, cromatografia de hidroxiapatita, eletroforese em gel, diálise e cromatografia de afinidade e qualquer combinação de técnicas de purificação conhecidas ou ainda a serem descobertas, incluindo, mas não se limitando à cromatografia de proteína A, fracionamento em um coluna de troca iônica, precipitação de etanol, HPLC de fase reversa, cromatografia em sílica, cromatografia em heparina SEPHAROSETO, uma cromatografia em resina de troca aniônica ou catiônica (como uma coluna de ácido poliaspártico), cromatofocagem, SDS-PAGE e precipitação com sulfato de amônio. O método de purificação pode também compreender etapas adicionais que desativam e/ou removem vírus e/ou retrovírus que podem estar potencialmente presentes no meio de cultura de células das linhas celulares de mamíferos. Um número significativo de etapas de depuração viral está disponível, incluindo, entre outros, o tratamento com agentes caotrópicos, como ureia ou guanidina, detergentes, etapas adicionais de ultrafiltração/diafiltração, separação convencional, como cromatografia de troca iônica ou exclusão por tamanho, extremos de pH, calor , proteases, solventes orgânicos ou qualquer combinação dos mesmos.

[0069] Os anticorpos inibidores de MASP-2 purificados normalmente requerem concentração e uma troca por tampões antes do armazenamento ou processamento adicional. Como um exemplo não limitativo, um sistema de filtração de fluxo tangencial (TFF) pode ser usado para concentrar e trocar o tampão de eluição da coluna de purificação anterior com o tampão final desejado pela substância do fármaco.

[0070] O anticorpo inibidor monoclonal de MASP-2 que aqui é formulado é preferencialmente essencialmente puro e desejavelmente essencialmente homogêneo (isto é, livre de proteínas contaminantes, etc.). Anticorpo “essencialmente puro” significa uma composição compreendendo pelo menos 90% em peso do anticorpo, com base no peso total da composição, preferencialmente pelo menos 95% em peso. Anticorpo “essencialmente homogêneo” significa uma composição compreendendo pelo menos cerca de 99% em peso do anticorpo, com base no peso total da composição. Soluções aquosas

[0071] A formulação de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição compreende uma solução aquosa compreendendo um sistema tampão com um pH de 4,0 a 8,0 (por exemplo, tendo um pH de cerca de 5,0 a cerca de 7,0 ou com um pH de cerca de 5,5 a cerca de 6,5) e um anticorpo inibidor de MASP-2 (por exemplo, OMS646 ou uma variante do mesmo) ou fragmento de ligação a antígeno em uma concentração de cerca de 50 mg/mL a cerca de 250 mg/mL (por exemplo, de cerca de 100 mg/mL a cerca de 250 mg/mL). A solução aquosa para uso nas formulações da presente descrição é aquela que é farmaceuticamente aceitável (segura e não tóxica para administração a um humano) e é útil para a preparação de uma formulação líquida. Em algumas modalidades, a solução aquosa é água, como água estéril para injeção (WFD), que é uma preparação de água destilada estéril e sem solutos. Alternativamente, outras soluções aquosas que são adequadas para administração terapêutica e que não afetariam adversamente a estabilidade da formulação podem ser utilizadas, como água deionizada. Outras soluções aquosas adequadas incluem água bacteriostática para injeção (BWFID), solução salina estéril, solução de Ringer ou outras soluções aquosas semelhantes usadas para soluções farmacêuticas.

Sistemas de tamponamento

[0072] A formulação de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição é ajustada para um pH de 4,0 a 8,0, preferencialmente de pH 5,0 a 7,0. O pH desejado é adequadamente mantido pelo uso de um sistema tampão. Em algumas modalidades, o sistema tampão compreende pelo menos um agente tampão farmaceuticamente aceitável com uma constante de dissociação ácida dentro de 2 unidades de pH do pH da formulação. O sistema tampão utilizado nas formulações de acordo com a presente invenção tem um pH na faixa de cerca de 4,0 a cerca de 8,0. Vários agentes tampão são conhecidos do especialista na técnica. Exemplos de agentes tamponantes que controlarão o pH nessa faixa incluem acetato, succinato, gluconato, histidina, citrato e outros tampões de ácidos orgânicos. Em algumas modalidades, o agente tampão é selecionado a partir do grupo que consiste em succinato, histidina e citrato. Em algumas

29 /116 modalidades, as formulações farmacêuticas compreendem um sistema tampão com um agente tampão em uma concentração de 1 a 50 mM, como 10 a 40 mM, ou 10 a 30 mM ou 20 a 30 mM, ou cerca de 20 MM.

[0073] Em algumas modalidades, o agente tampão é um tampão de histidina. Um “tampão de histidina” é um tampão que compreende o aminoácido histidina. Exemplos de tampões de histidina incluem histidina ou quaisquer sais de histidina, incluindo cloridrato de histidina, acetato de histidina, fosfato de histidina e sulfato de histidina, incluindo combinações de qualquer um desses sais com ou sem histidina. Em uma modalidade, o sistema de tamponamento compreende tampão de cloridrato de histidina (L- Histidina/HCL). Esse tampão de cloridrato de histidina pode ser preparado por titulação de L-histidina (base livre, sólido) com ácido clorídrico diluído ou usando a mistura apropriada de histidina e cloridrato de histidina. Em algumas modalidades, o pH do tampão L-Histidina/HCI é de cerca de 5,0 a cerca de 7,0, tal como cerca de 5,5 a cerca de 6,0, por exemplo, cerca de 5,8 ou cerca de 5,9.

[0074] Em algumas modalidades, o agente tampão é um tampão de citrato. Esse tampão de citrato pode ser preparado titulando o ácido cítrico, o sal monossódico do ácido cítrico e/ou o sal dissódico do ácido cítrico com solução diluída de hidróxido de sódio até o pH apropriado ou usando a mistura apropriada de ácido cítrico e o(s) sal(s) para atingir esse mesmo pH. Em outra modalidade, o tampão citrato pode ser preparado por titulação de uma solução de citrato trissódico com solução diluída de ácido clorídrico até o pH apropriado. Nesse caso, a força iônica pode ser um pouco maior do que começando com ácido cítrico devido à geração de fons adicionais de sódio e cloreto na solução. Em certas modalidades, o pH do tampão de citrato é de cerca de 5,0 a cerca de 7,0, tal como cerca de 5,5 a cerca de 6,0, por exemplo, cerca de 5,8 ou cerca de 5,9. Em algumas modalidades, o agente tampão é um tampão de succinato. Em certas modalidades, o pH do tampão de succinato é de cerca de 5,5 a cerca de 6,0, por exemplo, cerca de 5,8 ou cerca de 5,9.

[0075] Em algumas modalidades, o agente tampão é um tampão de citrato de sódio, em que o citrato de sódio está presente na formulação a uma concentração de cerca de 10 mM a cerca de 50 mM, como de cerca de 10 mM a cerca de 25 mM, como cerca de 20 mM. Em algumas modalidades, o agente tampão é um tampão de L-histidina, em que a L-histidina está presente na formulação em uma concentração de cerca de 10 mM a cerca de 50 mM, como de cerca de 10 mM a cerca de 25 mM, como cerca de 20 mM . Em algumas modalidades, a formulação compreende cerca de 20 mM de citrato de sódio e tem um pH de cerca de 5,0 a cerca de 7,0. Em algumas modalidades, a formulação compreende cerca de 20 mM de L-histidina e tem um pH de cerca de 5,0 a cerca de 7,0. Excipientes

[0076] Em algumas modalidades, a formulação de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição compreende adicionalmente pelo menos um excipiente. Exemplos de excipientes adequados incluem, entre outros, proteínas (por exemplo, albumina sérica), aminoácidos (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico, , lisina arginina, glicina e histidina), sacarídeos (por exemplo, glicose, sacarose, maltose e trealose), polióis (por exemplo, manitol e sorbitol), ácidos graxos e fosfolipídios (por exemplo, alquilsulfonatos e caprilatos).

[0077] Em algumas modalidades, a formulação compreende um excipiente selecionado a partir do grupo que consiste em um aminoácido com uma cadeia lateral carregada, um açúcar ou outro poliol e um sal. Em algumas modalidades, a formulação compreende um açúcar ou outro poliol, como, por exemplo, sacarose, trealose, manitol ou sorbitol. Em algumas modalidades, a formulação compreende um sal, como, por exemplo, NaCl ou um sal de um aminoácido.

[0078] Em algumas modalidades, a formulação compreende um excipiente que é um agente modificador de tonicidade. Em algumas modalidades, o agente de modificação da tonicidade é incluído na formulação em uma concentração adequada para prover uma formulação isotônica. Em algumas modalidades, o agente de modificação da tonicidade é incluído na formulação em uma concentração adequada para prover uma formulação hipertônica. Em algumas modalidades, o agente modificador de tonicidade para uso na formulação é selecionado a partir do grupo que consiste em um aminoácido com uma cadeia lateral carregada, um açúcar ou outro poliol e um sal. Em algumas modalidades, o agente modificador de tonicidade é um aminoácido com uma cadeia lateral carregada (isto é, uma cadeia lateral carregada negativamente ou uma cadeia lateral carregada positivamente) a uma concentração de cerca de 50 mM a cerca de 300 mM. Em algumas modalidades, o agente modificador da tonicidade é um aminoácido com uma cadeia lateral carregada negativamente, como o glutamato. Em algumas modalidades, a formulação compreende glutamato a uma concentração de cerca de 50 mM a cerca de 300 mM. Em algumas modalidades, o agente modificador da tonicidade é um aminoácido com uma cadeia lateral carregada positivamente, como a arginina. Em algumas modalidades, a formulação compreende arginina (por exemplo, cloridrato de arginina), a uma concentração de cerca de 50 mM a cerca de 300 mM, como de cerca de 150 mM a cerca de 225 mM.

[0079] Preferencialmente, as formulações farmacêuticas como aqui descritas são hipertônicas (isto é, têm uma pressão osmótica mais alta que o sangue humano). Como aqui descrito, foi inesperadamente observado que a hipertonicidade levou a uma viscosidade reduzida da amostra, o que foi alcançado, por exemplo, com aumentos modestos na concentração de arginina. Como descrito no Exemplo 2, foi inesperadamente observado que baixas viscosidades foram alcançadas (por exemplo, menos de 25 cP) com as formulações de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração de histidina/arginina e histidina/arginina compreendendo uma concentração de arginina de 200 mM ou maior na ausência de CaCl2. Por conseguinte, em algumas modalidades, a formulação compreende arginina (por exemplo, cloridrato de arginina) a um nível hipertônico de cerca de 200 mM a cerca de 300 mM.

[0080] Como descrito adicionalmente no Exemplo 2, também foi observado que as formulações que incluíam cátions divalentes (CaCl; ou MgCl;) tinham material de alto peso molecular elevado em comparação com formulações que não incluíam aditivos de CaCl, ou MgCl,. Por conseguinte, em uma modalidade, a formulação de anticorpo de inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição é substancialmente livre de um aditivo de CaCl.. Em uma modalidade, a formulação de anticorpo de inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição é substancialmente livre de um aditivo de MgCLb.

[0081] Como descrito adicionalmente no Exemplo 2, foi determinado para as formulações de anticorpo de MASP-2 de alta concentração que a inclusão de sacarose estava associada à polidispersividade elevada em todos os sistemas de tamponamento testados. Por conseguinte, em uma modalidade, a formulação de anticorpo de inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição é substancialmente livre de sacarose.

[0082] Como descrito no Exemplo 2, foi também determinado para as formulações de anticorpo de MASP-2 de alta concentração que a inclusão de sorbitol estava associada à polidispersividade elevada em todos os sistemas de tamponamento testados. Por conseguinte, em uma modalidade, a formulação de anticorpo de inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição é substancialmente livre de sorbitol. Tensoativos

[0083] Opcionalmente, em algumas modalidades, a formulação de anticorpo de inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente — descrição — compreende — adicionalmente um tensoativo farmaceuticamente aceitável.

Exemplos não limitativos de tensoativos farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem ésteres de ácidos graxos de polioxietilenossorbitano (por exemplo, Tween), polietileno-polipropileno glicóis, estearatos de polioxietileno, éteres alquílicos de polioxietileno (por exemplo, éter monolauríio de polioxietileno),) éteres de alquilfenilpolioxietileno — (por “exemplo, Triton-X) copolímero de polioxietileno-polioxipropileno (por exemplo, Poloxâmero e Plurônico) e dodecilsulfato de sódio (SDS). Em certas modalidades, o tensoativo farmaceuticamente aceitável é um polioxietilenosorbitano-éster de ácido graxo (polissorbato), como o polissorbato 20 (vendido sob a marca comercial Tween 20TM) e o polissorbato 80 (vendido sob a marca comercial Tween 80TM). Em algumas modalidades, a formulação de anticorpo de inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição compreende um tensoativo não iônico.

O tensoativo não iônico pode ser um polissorbato (por exemplo, selecionado a partir do grupo de polissorbato 20, polissorbato 80 e copolímero de polietileno-polipropileno). Em algumas modalidades, a concentração do tensoativo é de cerca de 0,001 a 0,1% (p/v), ou 0,005% a 0,1% (p/v), ou 0,01 a 0,1% (p/v) ou 0,01 a 0,08% ( p/v), ou 0,025 a 0,075% (p/v), ou mais particularmente cerca de 0,01% (p/v), cerca de 0,02% (p/v), cerca de 0,04% (p/v) ou cerca de 0,04% (p/v) ou cerca de 0,06% (p/v), ou cerca de 0,08% (p/v), ou cerca de 0,10% (p/v). Em algumas modalidades, a formulação compreende um tensoativo não iônico (por exemplo, polissorbato 80) a uma concentração de cerca de 0,001 a 0,1% (p/v), ou 0,005% a 0,1% (p/v), ou 0,01 a 0,1 % (p/v) ou 0,01 a 0,08% (p/v), ou 0,025 a 0,075% (p/v), ou mais particularmente cerca de 0,01% (p/v), cerca de 0,02% (p/v), cerca de 0,04% (p/v), ou cerca de 0,06% (p/v), ou cerca de

0,08% (p/v), ou cerca de 0,10% (p/v). Como descrito no Exemplo 2, foi inesperadamente observado que a inclusão do tensoativo não iônico polissorbato 80 (PS-80) levou a uma redução adicional na viscosidade, além de preservar a recuperação de proteínas, permitindo assim uma alta concentração de anticorpo OMS646, mantendo uma baixa viscosidade adequada para uso em um dispositivo de injeção, como um autoinjetor. Estabilizantes

[0084] Opcionalmente, em algumas modalidades, a formulação de anticorpo de inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição compreende adicionalmente um estabilizante. O estabilizante (usado como sinônimo do termo “agente estabilizante” aqui) pode ser um carboidrato ou sacarídeo ou açúcar admitido pelas autoridades reguladoras como um aditivo ou excipiente adequado em formulações farmacêuticas, por exemplo, trealose ou sacarose. À concentração típica do estabilizante é de 15 a 250 mM, ou 150 a 250 mM, ou cerca de 210 mM. As formulações podem conter um estabilizante secundário, como metionina, por exemplo, em uma concentração de 5 a 25 mM ou em uma concentração de 5 a mM (por exemplo, metionina em uma concentração de cerca de 5 mM, cerca de 10 mM ou cerca de 15 MM). Conservantes

[0085] Opcionalmente, em algumas modalidades, a formulação de anticorpo de inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição compreende adicionalmente um conservante (por exemplo, um agente antimicrobiano). Agentes antimicrobianos são geralmente necessários para produtos parentéricos destinados a dosagens múltiplas. Do mesmo modo, os conservantes são adicionados às formulações farmacêuticas embaladas assepticamente em frascos de dose única, se o(s) ingrediente(s) ativo(s) não tiver(em) propriedades bactericidas ou bacteriostáticas ou estiver promovendo o crescimento. Alguns conservantes típicos usados são álcool benzílico (0,9% a 1,5%), metilparabeno (0,18% a 0,2%), propilparabeno (0,02%), cloreto de benzalcônio (0,01% a 0,02%) e timerosal (0,001% a 0,01%).

Seringabilidade

[0086] À via de administração subcutânea requer injeções usando dispositivos de injeção, como seringas, autoinjetores, bombas vestíveis ou outros dispositivos, o que restringe a formulação do produto em relação ao volume de injeção e viscosidade da solução. Além disso, a formulação do produto deve ser adequada para uso em um dispositivo de injeção no que diz respeito à força da injeção e ao tempo necessário para a administração da injeção. “Seringabilidade”, como usado aqui, refere-se à capacidade de um produto terapêutico injetável passar facilmente através de uma agulha hipodérmica na transferência de um frasco antes de uma injeção. “Injetabilidade”, como aqui utilizado, refere-se ao desempenho da formulação durante a injeção (ver, por exemplo, Cilurzo F, Selmin F, Minghetti P, et al. Injectability — Evaluationh An Open Issue. AAPS PharmsSciTech. 2011;12(2):604-609). A seringabilidade inclui fatores como facilidade de retirada, tendências de entupimento e formação de espuma e precisão das medições de dose. A injetabilidade inclui pressão ou força necessária para injeção, uniformidade de fluxo e está livre de entupimento (isto é, nenhum bloqueio da agulha da seringa). A seringabilidade e a injetabilidade podem ser afetadas pela geometria da agulha, ou seja, diâmetro interno, comprimento, forma da abertura, bem como o acabamento da superfície da seringa, especialmente em dispositivos de autoinjeção, como canetas e autoinjetores (por exemplo, equipados com agulhas de 29-31 GA) e em seringas pré-cheias para dosagem subcutânea (por exemplo, equipadas com agulhas de 24-27 GA). A força de injeção (ou força de deslizamento) é um fator complexo influenciado pela viscosidade da solução, o tamanho da agulha (isto é, calibre de agulha) e a tensão superficial do recipiente/fechamento. Agulhas menores,

por exemplo, > calibre, proveem menos sensação de dor aos pacientes. Overcashier e colaboradores estabeleceram uma relação viscosidade-força de deslizamento em função do calibre da agulha com base na Equação de Hagen- Poiseuille (Overcashier et al., Am Pharm Rev 9 (6): 77-83 (2006). Por exemplo, com uma agulha de paredes finas de calibre 27, a viscosidade do líquido deve ser mantida igual ou inferior a 20 cP para não exceder a força de deslizamento de 25 Newton (N).

[0087] Em certas modalidades, as formulações farmacêuticas da invenção são caracterizadas por ter uma força de deslizamento de injeção de cerca de 25N ou menos quando injetadas através de uma agulha de 27GA (1,25”) à temperatura ambiente.

[0088] Em certas modalidades, as formulações farmacêuticas da invenção são caracterizadas por ter uma força de deslizamento de injeção de cerca de 20N ou menos quando injetadas através de uma agulha de 25GA (1”) à temperatura ambiente.

[0089] Como exemplificado no Exemplo 3, as formulações de anticorpo de inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade (por exemplo, OMS646) da presente descrição têm surpreendentemente boa capacidade de seringabilidade e injetabilidade. As formulações de anticorpo de inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade, conforme descritas aqui, permitem a administração de tais formulações por injeção intramuscular ou subcutânea por meio de agulhas de pequeno diâmetro normalmente usadas para tais injeções, por exemplo, agulhas de 27G (1,25), 27G de paredes finas, 25G de paredes finas (1º) ou 25G (1º). Em alguns casos, a baixa viscosidade das formulações farmacêuticas de anticorpo inibidor de MASP-2, conforme descrito aqui, permite a administração de um volume injetado tolerável (por exemplo, 1-3 cc), enquanto provê uma quantidade eficaz do anticorpo inibidor de MASP-2 em uma injeção única em um único local de injeção.

Estabilidade

[0090] Para qualquer um dos anteriores, deve-se notar que o anticorpo inibidor de MASP-2 ou seu fragmento de ligação ao antígeno na formulação mantém a capacidade de inibir a ativação do complemento dependente de MASP-2. Por exemplo, o anticorpo inibidor de MASP-2 mantém a capacidade de se ligar à MASP-2 e inibir a atividade da via da lectina como descrito no Exemplo 1 ou outro ensaio da via da lectina, por exemplo, como descrito em WO2012/151481. Além dos ensaios de potência, vários ensaios físico-químicos podem ser usados para avaliar a estabilidade, incluindo focalização isoelétrica, eletroforese em gel de poliacrilamida, cromatografia de exclusão por tamanho e avaliação de partículas visíveis e subvisíveis.

[0091] Em certas modalidades, as formulações da presente descrição exibem estabilidade em uma faixa de temperatura de -20ºC a 8ºC por pelo menos 30 dias, até pelo menos 9 meses ou mais, ou até pelo menos 12 meses ou mais, como descrito nos estudos de estabilidade nos Exemplos 2 e 4. Adicionalmente ou alternativamente, em certas modalidades, as formulações são estáveis à temperatura de -20ºC a 8ºC, como de 2ºC a 8ºC por pelo menos 6 meses, pelo menos 1 ano ou pelo menos 2 anos ou mais. Em certas modalidades, a estabilidade pode ser avaliada, por exemplo, pela manutenção de um nível de pureza ao longo do tempo. Por exemplo, em certas modalidades, as formulações da presente descrição têm menos de 5% de redução, como menos de 4% de redução, como menos de 3% de redução, como menos de 2%, como menos de 1% de redução em pureza por mês, 6 meses, 9 meses ou | ano quando armazenada a 2ºC a 8ºC, conforme determinado por cromatografia de exclusão por tamanho (SEC), que monitora a presença ou ausência de fragmentos (LMW) e/ou espécies agregadas (HEMW).

[0092] Em certas modalidades, as formulações da presente descrição promovem níveis baixos a indetectáveis de agregação e/ou fragmentação e mantêm a potência após o armazenamento por um período definido. Descritas de outra maneira, as formulações aqui descritas são capazes de manter a integridade estrutural do anticorpo inibidor de MASP-2 OMS646 presente em altas concentrações em uma solução, por exemplo, em concentrações superiores a 150 mg/mL ou superiores a 175 mg/mL, ou de pelo menos 185 mg/mL, de modo que o anticorpo inibidor de MASP-2 possa permanecer predominantemente monomérico (isto é, pelo menos 95% ou mais) após armazenamento de um período definido a aproximadamente 2ºC a 8ºC. Preferencialmente, não mais que 5%, não mais que 4%, não mais que 3%, não mais que 2%, não mais que 1% e mais preferencialmente não mais que 0,5% do anticorpo forma fragmento (LMW) ou agregado (HMW), medidos por SEC após armazenamento de um período definido a aproximadamente 2ºC a 8ºC.

[0093] Como exemplificado no Exemplo 4 aqui descrito, os inventores fornecem formulações adequadas para manter um anticorpo inibidor de MASP-2, OMS646, a cerca de 185 mg/ml na forma predominantemente monomérica por pelo menos 12 meses a cerca de 2ºC a 8ºC.

Modificador de permeabilidade no tecido

[0094] Em outra modalidade, as formulações de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição compreendem adicionalmente um modificador de permeabilidade do tecido que aumenta a absorção ou dispersão do anticorpo inibidor de MASP-2 após administração parentérica (por exemplo, injeção subcutânea). Em algumas modalidades, o modificador de permeabilidade do tecido é uma enzima hialuronidase que atua como um modificador da permeabilidade do tecido e aumenta a dispersão e absorção do anticorpo inibidor de MASP-2 injetado. Um modificador de permeabilidade de tecido particularmente útil é a hialuronidase (por exemplo, uma hialuronidase humana recombinante). As hialuronidases funcionam como modificadores da permeabilidade do tecido, quebrando temporariamente a barreira de hialuronano para abrir o acesso aos vasos linfáticos e capilares, permitindo que fármacos e fluidos injetáveis sejam absorvidos rapidamente na circulação sistêmica. O hialuronano se restaura naturalmente e a barreira é completamente restaurada, por exemplo, dentro de 48 horas. A adição de hialuronidase nas formulações farmacêuticas injetáveis aumenta a biodisponibilidade do anticorpo inibidor de MASP-2 após administração parentérica, particularmente administração subcutânea. Também permite maiores volumes no local de injeção (ou seja, maiores que 1 mL) com menos dor e desconforto, e minimiza a incidência de reações no local de injeção (por exemplo, aplaina a protuberância no local de injeção).

[0095] Em algumas modalidades, a formulação de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade (por exemplo, OMS646) da presente descrição compreende de cerca de 100 U/mL a cerca de 20.000 U/mL de uma enzima hialuronidase. A concentração real da enzima hialuronidase depende do tipo de enzima hialuronidase usada na preparação das formulações de anticorpo inibidor de MASP-2 da presente invenção. Uma quantidade eficaz da hialuronidase pode ser determinada pelo perito na técnica. Ela deve ser provida em quantidade suficiente para que seja possível um aumento na dispersão e absorção do anticorpo inibidor de MASP-2 coadministrado ou administrado sequencialmente. A quantidade mínima da enzima hialuronidase é superior a 100 U/mL. Mais particularmente, a quantidade eficaz da enzima hialuronidase é de cerca de 150 U/mL a cerca de

20.000 U/mL, em que a dita quantidade corresponde a cerca de 0,01 mg a 0,16 mg de proteína com base em uma atividade específica assumida de

100.000 U/mg. Em algumas modalidades, as formulações farmacêuticas compreendem hialuronidase em concentração de cerca de 1.000 a cerca de

20.000 U/ml, como cerca de 1.000 a cerca de 16.000 U/ml. Alternativamente, a concentração da hialuronidase é de cerca de 1.500 a cerca de 12.000 U/mL,

40 /116 ou mais particularmente de cerca de 2.000 U/mL a cerca de 12.000 U/mL. As quantidades aqui especificadas correspondem à quantidade de hialuronidase adicionada inicialmente à formulação farmacêutica Em algumas modalidades, a razão (p/p) da hialuronidase para o anticorpo inibidor de MASP-2 está na faixa de 1:1.000 a 1:8.000, ou na faixa de 1:4.000 a 1:6.000 ou na faixa de cerca de 1:4.000 a 1:5000.

[0096] A hialuronidase pode estar presente como um componente da formulação de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição, ou pode ser provida como uma solução separada em um kit de peças. Assim, em uma modalidade, o anticorpo inibidor de MASP-2 é coformulado com uma hialuronidase. Em outra modalidade, o anticorpo inibidor de MASP-2 e a hialuronidase são formulados — separadamente e misturados imediatamente antes da administração subcutânea. Em ainda outra modalidade, o anticorpo inibidor de MASP-2 e a hialuronidase são formulados e administrados separadamente, por exemplo, a hialuronidase é administrada como uma injeção separada diretamente antes ou após a administração da formulação compreendendo o anticorpo inibidor de MASP-2. Em alguns casos, a hialuronidase é administrada por via subcutânea cerca de 5 segundos a cerca de 30 minutos antes da injeção da formulação farmacêutica compreendendo o anticorpo inibidor de MASP-2 da presente descrição na mesma área do local de injeção. Em certas modalidades, a formulação farmacêutica do anticorpo inibidor de MASP-2 e da solução de hialuronidase são incluídas em câmaras separadas de um dispositivo farmacêutico que automatiza a entrega, simultaneamente (por exemplo, usando uma seringa de corpo duplo) ou sequencialmente. Recipientes pré-cheios

[0097] Em um aspecto adicional da presente descrição, a formulação de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade, como aqui descrito, está contida em um recipiente selado pré-cheio em uma quantidade suficiente para administração a um indivíduo mamífero. Assim, uma quantidade suficiente de composição de fármaco formulada de acordo com a presente descrição, que é igual ou apenas um pouco mais (isto é, excesso não superior a 25%, como excesso não superior a 10%) do que a quantidade de anticorpo inibidor de MASP-2 desejado para ser administrado a um indivíduo mamífero está contido em um recipiente pré-cheio que facilita a distribuição da formulação de anticorpo para administração parentérica (isto é, injeção ou infusão). Em algumas modalidades, o recipiente pré-cheio compreende pelo menos uma forma de dosagem unitária farmacêutica do anticorpo inibidor de MASP-2.

[0098] Por exemplo, uma quantidade de uso único desejada de formulação de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade pode ser embalada em um recipiente pré-cheio, como, por exemplo, um frasco de vidro fechado com uma rolha ou outro fecho que inclui um septo através do qual uma agulha hipodérmica pode ser inserida para retirar a formulação ou pode ser embalada em uma seringa pré-cheia ou em outro recipiente pré-cheio adequado para injeção (por exemplo, injeção subcutânea) ou infusão. Exemplos de tais recipientes incluem, sem limitação, frascos, seringas, ampolas, garrafas, cartuchos e bolsas. Preferencialmente, os recipientes são cada seringa pré-cheia de uso único, que pode ser adequadamente formada de vidro ou de um material polimérico, como polímeros de olefina cíclica ou acrilonitrila-butadieno-estireno (ABS), policarbonato (PC), polioximetileno (POM), poliestireno (PS), tereftalato de polibutileno (PBT), polipropileno (PP), polietileno (PE), poliamida (PA), elastômero termoplástico (TPE) e suas combinações. Os corpos de tais seringas são operados com um êmbolo de elastômero que pode ser impulsionado ao longo do corpo para ejetar o conteúdo líquido através de uma agulha conectada a ele. Em algumas modalidades da invenção, cada seringa inclui uma agulha fixada nela.

[0099] Em algumas modalidades, a formulação de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade, conforme aqui descrito, está contida em um recipiente pré-cheio selecionado a partir do grupo que consiste em: uma seringa (por exemplo, uma seringa de corpo único ou duplo), uma injetor de caneta, um frasco vedado (por exemplo, um frasco de câmara dupla), um autoinjetor, um cassete e um dispositivo de bomba (por exemplo, uma bomba do tipo patch conectado ao corpo, uma bomba presa ao corpo ou uma bomba osmótica). Para entrega subcutânea, a formulação pode estar contida em um dispositivo pré-cheio adequado para entrega subcutânea, como, por exemplo, uma seringa pré-cheia, autoinjetor, dispositivo de injeção (por exemplo, o dispositivo INJECT-EASE"Y ou GENJECT'M), injetor de caneta (como o GENPEN'M) ou outro dispositivo adequado para administração subcutânea.

[00100] As formulações da presente descrição podem ser preparadas como formas de dosagem unitárias em um recipiente pré-cheio, o que pode ser particularmente adequado para autoadministração. Por exemplo, uma dosagem unitária por frasco, cartucho ou outro recipiente pré-cheio (por exemplo, seringa pré-cheia ou caneta descartável) pode conter cerca de 0,1 mL, 0,2 mL, 0,3 mL, 0,4 mL, 0,5 mL, 0,6 mL, 0,7 mL , 0,8 mL, 0,9 mL, 1 mL, 1,1 mL, 1,2 mL, 1,3 mL, 1,4 mL, 1,5 mL, 1,6 mL, 1,7 mL, 1,8 mL, 1,9 mL, 2,0 mL, 2,1 mL, 2,2 mL, 2,3 mL, 24 mL, 2,5 mL, 2,6 mL, 2,7 mL, 2,8 mL, 2,9 mL, 3,0 mL, 3,5 mL, 4,0 mL, 4,5 mL, 5,0 mL, 5,5 mL, 6,0 mL, 6,5 mL, 7,0 mL, 7,5 mL, 8,0 mL, 8,5 mL, 9,0 mL, 9,5 mL ou cerca de 10,0 mL ou mais de volume da formulação de alta concentração contendo várias concentrações de anticorpo inibidor de MASP-2 (por exemplo, OMS646) variando de cerca de 100 mg/mL a cerca de 250 mg/mL, cerca de 150 mg/mL a cerca de 200 mg/mL, cerca de 175 mg/mL a cerca de 200 mg/mL, como cerca de 185 mg/mL, resultando em uma dose unitária total de OMS646 por recipiente, variando de cerca de 20 mg a cerca de 1000 mg ou superior.

[00101] Em algumas modalidades, a formulação da presente descrição é preparada como uma forma de dosagem unitária em um recipiente pré- cheio, como um frasco ou seringa, em uma dosagem unitária de cerca de 350 mg a 400 mg, como cerca de 350 mg, cerca de 360 mg, cerca de 370 mg, cerca de 380 mg, cerca de 390 mg ou cerca de 400 mg.

[00102] Em algumas modalidades, as formulações da presente descrição são preparadas como formas de dosagem unitárias em uma seringa pré-cheia com um volume de 0,1 mL a 3,0 mL, como cerca de 0,1 mL, 0,2 mL, 0,3 mL, 0,4 mL, 0,5 mL 0,6 mL, 0,7 mL, 0,8 mL, 0,9 mL, 1 mL, 1,1 mL, 1,2 mL, 1,3 mL, 1,4 mL, 1,5 mL, 1,6 mL, 1,7 mL, 1,8 mL, 1,9 mL, 2,0 mL, 2,1 mL, 2,2 mL, 2,3 mL, 2,4 mL, 2,5 mL, 2,6 mL, 2,7 mL, 2,8 mL, 2,9 mL ou cerca de 3,0 mL compreendendo de cerca de 20 mg a 750 mg do anticorpo inibidor de MASP-2 (por exemplo, OMS646). Como aqui descrito, as formulações estáveis preparadas como dosagens unitárias podem ser administradas diretamente a um indivíduo (por exemplo, por injeção subcutânea) ou, alternativamente, são preparadas para serem adequadas para diluição antes da administração intravenosa.

[00103] As formulações da presente descrição podem ser esterilizadas por vários métodos de esterilização adequados para formulações de anticorpos, tais como filtração estéril. Em certas modalidades, a formulação de anticorpo é esterilizada por filtro, por exemplo, com um filtro pré- esterilizado de 0,2 mícron. As formulações esterilizadas da presente descrição podem ser administradas a um indivíduo para prevenir, tratar ou melhorar uma doença ou distúrbio associado à ativação do complemento dependente de MASP-2.

[00104] Em um aspecto relacionado, a presente descrição provê um método de fabricação de um artigo de fabricação que compreende o enchimento de um recipiente com uma formulação de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração da presente descrição.

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[00105] Em uma modalidade, a presente descrição provê uma composição farmacêutica para uso no tratamento de um paciente que sofre ou corre risco de desenvolver uma doença ou condição dependente de MASP-2, em que a composição é uma forma de dosagem estéril e de uso único compreendendo de cerca de 350 mg a cerca de 400 mg (isto é, 350 mg, 360 mg, 370 mg, 380 mg, 390 mg ou 400 mg) de anticorpo inibidor de MASP-2, em que a composição compreende cerca de 1,8 mL a cerca de 2,2 mL (isto é, 1,8 mL, 1,9 mL, 2,0 mL, 2,1 mL ou 2,2 mL) de uma formulação de anticorpo de 185 mg/mL, tal como aqui descrito, em que o dito anticorpo ou fragmento do mesmo compreende (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:2 e (1) uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:3; e em que a formulação é estável quando armazenada entre 2ºC e 8ºC por pelo menos seis meses. Em algumas modalidades, a doença ou condição dependente de MASP-2 é selecionada a partir do grupo que consiste em aHUS, HSCT-TMA, IgAN e nefrite lúpica (LN). Kits compreendendo formulações de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade

[00106] A presente descrição também apresenta kits terapêuticos compreendendo pelo menos um recipiente, incluindo a formulação de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade, como aqui descrito.

[00107] Em algumas modalidades, a presente descrição provê um kit compreendendo (i) um recipiente compreendendo qualquer uma das formulações compreendendo anticorpo inibidor de MASP-2 aqui descrito; e (11) um meio adequado para entregar a formulação a um paciente em necessidade da mesma. Em algumas modalidades de qualquer um dos kits aqui descritos, os meios são adequados para a entrega subcutânea da formulação ao paciente.

[00108] Vários tipos de recipientes são adequados para a contenção de formulações farmacêuticas de anticorpo inibidor de MASP-2 incluídas nos kits da presente invenção. Em certas modalidades dos kits da presente invenção, o recipiente é uma seringa pré-cheia (por exemplo, uma seringa de corpo único ou corpo duplo) ou um frasco vedado pré-cheio.

[00109] Em algumas modalidades, o recipiente compreendendo uma formulação compreendendo anticorpo inibidor de MASP-2 é um recipiente pré-cheio selecionado a partir do grupo que consiste em: uma seringa (por exemplo, uma seringa de corpo único ou duplo), uma injetor de caneta, um frasco vedado (por exemplo, frascos de câmara dupla), um autoinjetor, um cassete e um dispositivo de bomba (por exemplo, uma bomba do tipo patch conectado ao corpo ou uma bomba presa ao corpo ou uma bomba osmótica). Para entrega subcutânea, a formulação pode estar contida em um dispositivo pré-cheio adequado para entrega subcutânea, como, por exemplo, uma seringa pré-cheia, autoinjetor, dispositivo de injeção (por exemplo, o dispositivo INJECT-EASE"Y e GENJECT'Y), injetor de caneta (como o GENPEN"M) ou outro dispositivo adequado para administração subcutânea.

[00110] Além de um recipiente pré-cheio com uma dose única da formulação farmacêutica, o kit da presente invenção também pode incluir um recipiente externo no qual esse recipiente pré-cheio é colocado. Por exemplo, o recipiente externo pode incluir uma bandeja de plástico ou papelão na qual são formadas cavidades que recebem o recipiente pré-cheio e o imobilizam durante o transporte e o manuseio antes do uso. Em algumas modalidades, o recipiente externo é adequadamente opaco e atua para proteger o recipiente pré-cheio da luz para evitar a degradação induzida pela luz dos componentes da formulação farmacêutica. Por exemplo, a bandeja de plástico ou papelão que recebe o recipiente pré-cheio pode ser adicionalmente embalada dentro de uma caixa de papelão que fornece proteção contra luz. O kit da presente

46 /116 invenção também pode incluir um conjunto de instruções para administração e uso das formulações de anticorpos inibidores de MASP-2 de acordo com a presente invenção, que podem ser impressas no recipiente externo ou impressas em uma folha de papel que está contida dentro do recipiente externo.

[00111] Em algumas modalidades, os kits compreendem um segundo recipiente (por exemplo, uma seringa pré-cheia) contendo uma dose eficaz de uma hialuronidase.

[00112] O kit pode incluir também outros materiais desejáveis do ponto de vista comercial e do usuário, incluindo agulhas, seringas, bulas e similares. Formulações exemplificativas

[00113] Como descrito acima, as formulações de anticorpo inibidor de MASP-2 estável, de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição incluem anticorpo inibidor de MASP-2 uma concentração de 50 mg/mL a 250 mg/mL em uma solução aquosa compreendendo um agente de tamponamento com um pH de 4,0 a 8,0.

[00114] O sistema tampão, tal como histidina, citrato ou succinato, é adequadamente incluído a uma concentração de cerca de 10 mM a cerca de 50 mM, e preferencialmente a cerca de 20 mM. Em algumas modalidades preferidas, a formulação compreende adicionalmente um aminoácido com uma cadeia lateral carregada a uma concentração de 50 mM a 300 mM. Em algumas modalidades, a formulação compreende um aminoácido com uma cadeia lateral carregada positivamente, como a arginina, a uma concentração de 50 mM a 300 mM. Em algumas modalidades preferidas, a formulação compreende adicionalmente um tensoativo não iônico, como o polissorbato 80, em uma quantidade de 0,001% (p/v) a 0,1% (p/v), como cerca de 0,05% (p/v) a cerca de 0,1% (p/v). Em algumas modalidades, a formulação compreende adicionalmente uma enzima hialuronidase em uma quantidade

47 / 116 eficaz para aumentar a dispersão e/ou absorção do anticorpo inibidor de MASP-2 após administração subcutânea.

[00115] Em algumas modalidades, as formulações de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição compreendem, consistem em ou consistem essencialmente em uma das seguintes composições: a) 100 a 200 mg/mL de anticorpo inibidor de MASP-2; 10 a 50 mM de um tampão de histidina a um pH de cerca de 5,0 a cerca de 7,0; arginina 100 mM a 225 mM, e opcionalmente 100 a 20.000 U/mL de uma hialuronidase.

b) 100 a 200 mg/mL de anticorpo inibidor de MASP-2; 10 a 50 mM de um tampão de histidina a um pH de cerca de 5,0 a cerca de 7,0; arginina 100 mM a 225 mM, cerca de 0,01% a 0,08% (p/v) de um tensoativo não iônico; e opcionalmente 100 a 20.000 U/mL de uma hialuronidase.

c) 100 a 200 mg/mL de anticorpo inibidor de MASP-2; 10 a 50 mM de um tampão de citrato a um pH de cerca de 5,0 a cerca de 7,0; arginina 100 mM a 225 mM; e opcionalmente 100 a 20.000 U/mL de uma hialuronidase.

d) 100 a 200 mg/mL de anticorpo inibidor de MASP-2; 10 a 50 mM de um tampão de citrato a um pH de cerca de 5,0 a cerca de 7,0; arginina 100 mM a 225 mM, cerca de 0,01% a 0,08% (p/v) de um tensoativo não iônico; e opcionalmente 100 a 20.000 U/mL de uma hialuronidase.

e) 100 a 200 mg/mL de anticorpo inibidor de MASP-2; 10 a 50 mM de um tampão de succinato a um pH de cerca de 5,0 a cerca de 7,0; arginina 100 mM a 225 mM, e opcionalmente 100 a 20.000 U/mL de uma hialuronidase.

£) 100 a 200 mg/mL de anticorpo inibidor de MASP-2; 10 a 50 mM de um tampão de succinato a um pH de cerca de 5,0 a cerca de 7,0; arginina 100 mM a 225 mM, cerca de 0,01% a 0,08% (p/v) de um tensoativo

48 /116 não iônico; e opcionalmente 100 a 20.000 U/mL de uma hialuronidase.

[00116] Em certas modalidades, as formulações de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade da presente descrição compreendem, consistem em ou consistem essencialmente em uma das seguintes composições: g) 185 + 18,5 mg/mL de anticorpo inibidor de MASP-2; Tampão de citrato 20 + 2 mM a um pH de cerca de 5,8; arginina 200 + 20 mM e, opcionalmente, 100 a 20.000 U/mL de uma hialuronidase.

h) 185 + 18,5 mg/mL de anticorpo inibidor de MASP-2; tampão de citrato 20 + 2 mM a um pH de cerca de 5,8; arginina 200 + 20 mM, cerca de 0,01% (p/v) de polissorbato 80 e opcionalmente 100 a 20.000 U/mL de uma hialuronidase.

i) 185 + 18,5 mg/mL de anticorpo inibidor de MASP-2; tampão de histidina 20 + 2 mM a um pH de cerca de 5,9, arginina 200 + 20 mM e, opcionalmente, 100 a 20.000 U/mL de uma hialuronidase.

3) 185 + 18,5 mg/mL de anticorpo inibidor de MASP-2; tampão de histidina 20 + 2 mM a um pH de cerca de 5,9, arginina 200 + 20 mM, cerca de 0,01% de polissorbato 80 e opcionalmente 100 a 20.000 U/mL de uma hialuronidase. Métodos de produção de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade

[00117] Em outro aspecto, a presente descrição provê um método para produzir uma formulação compreendendo 100 mg/mL ou mais de um anticorpo inibidor de MASP-2, o método compreendendo: (a) prover uma primeira formulação farmacêutica compreendendo OMS646 purificado, a primeira formulação farmacêutica tendo uma primeira formulação e compreendendo não mais que 50 mg/mL da proteína OMS646; (b) submeter a primeira formulação farmacêutica à filtração para assim produzir uma segunda formulação farmacêutica, em que a segunda formulação farmacêutica

49 / 116 tem uma segunda formulação como resultado da filtração; e (c) concentrar a segunda formulação farmacêutica para produzir uma solução de anticorpo concentrado compreendendo 100 mg/mL ou mais de OMS646. A solução a granel formulada é tipicamente ajustada a uma concentração fixa de proteína, para que o volume de enchimento desejado possa ser mantido constante. O processo de fabricação de fármacos líquidos envolve tipicamente a mistura do anticorpo inibidor de MASP-2 com o sistema de tamponamento, excipientes e tensoativo opcional, seguido de filtração asséptica e enchimento de frascos (ou outro recipiente, como seringas) e vedação (por exemplo, rolha, tampa ou semelhante). TABELA 1: Formulação Exemplificativo 1 'omponente (USP) adicionado lágua para injeção (Concentração TABELA 2: Formulação Exemplificativo 2 'omponente (USP) adicionado à| gua para injeção oncentração Métodos de tratamento

[00118] Em outro aspecto, a presente descrição provê um método de tratamento de um paciente que sofre ou corre risco de desenvolver uma doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 compreendendo a administração de uma formulação de alta concentração e baixa viscosidade, compreendendo um anticorpo inibidor de MASP-2 (por exemplo, OMS646), conforme descrito aqui.

[00119] Como descrito na Patente dos EUA Nº 7.919.094, Patente dos EUA Nº 8.840.893, Patente dos EUA Nº 8.652.477, Patente dos EUA Nº

8.951.522, Patente dos EUA Nº 9.011.860; Patente dos EUA Nº 9.644.035,

Publicação de Pedido de Patente dos EUA Nºs US2013/0344073, US2013/0266560, US 2015/0166675; US2017/0137537, US2017/0189525 e Pedidos de Patente dos EUA copendentes Nºs 15/476,154, 15/347,434, 15/470,647, 62/315,857, 62/275,025 e 62/527,926 (cada um dos quais é atribuído à Omeros Corporation, cessionária do presente pedido, cada um dos quais é aqui incorporado por referência), a ativação do complemento dependente de MASP-2 tem sido implicada como contribuindo para a patogênese de vários estados patológicos agudos e crônicos. Por exemplo, conforme descrito na Patente dos EUA Nº8.951.522, a função primária do sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, é proteger o hospedeiro contra agentes infecciosos; no entanto, a ativação inadequada ou excessiva do sistema complemento pode levar a doenças graves, como microangiopatias trombóticas (TMAs, incluindo aHUS, TTP e HUS) nas quais danos endoteliais, bem como trombos ricos em fibrina e plaquetas na microvasculatura levam a danos nos órgãos. A via da lectina desempenha um papel dominante na ativação do complemento em situações de estresse ou lesão das células endoteliais, e impede a ativação de MASP-2 e a via da lectina interrompe a sequência de reações enzimáticas que levam à formação do complexo de ataque à membrana, a ativação plaquetária e recrutamento de leucócitos. Como descrito na Patente dos EUA Nº 8.652.477, além do início da via da lectina, a MASP-2 também pode ativar o sistema de coagulação e é capaz de clivar a protrombina em trombina.

[00120] Como descrito no Exemplo 1 e Patente dos EUA Nº

9.011.860, OMS646 é um inibidor potente da ativação do complemento dependente de lectina. Este anticorpo não mostra ligação significativa (pelo menos 5.000 vezes menor afinidade) às outras serinas proteases Clr, Cls, MASP-1 e MASP-3 da via do complemento, e não inibe a ativação do complemento dependente da via clássica.

[00121] Por conseguinte, em algumas modalidades, o método compreende a administração a um paciente que sofre ou apresenta risco de desenvolver uma doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2, uma quantidade de quaisquer formulações de anticorpo inibidor de MASP-2 de alta concentração e baixa viscosidade aqui descritas em uma quantidade suficiente para inibir a ativação do complemento dependente de MASP-2 no dito mamífero para assim tratar a doença ou distúrbio. Em algumas modalidades, os métodos podem ser realizados usando qualquer um dos kits ou recipientes pré-cheios (por exemplo, seringas ou frascos pré- cheios) aqui descritos. Em algumas modalidades, o método pode compreender adicionalmente, antes da administração da formulação ao paciente, determinar que oO paciente está sofrendo da doença ou distúrbio associado ao complemento de lectina. Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente a administração de um modificador de permeabilidade no tecido (por exemplo, hialuronidase) que aumenta a absorção ou dispersão do anticorpo inibidor de MASP-2 após administração parentérica. O modificador de permeabilidade no tecido pode ser coadministrado com a formulação de anticorpo inibidor de MASP-2 ou administrado sequencialmente (por exemplo, dentro de 5 minutos após a administração da formulação de anticorpo inibidor de MASP-2 no ou próximo ao mesmo local de injeção).

[00122] Em algumas modalidades, o método compreende injetar em um indivíduo em necessidade da mesma uma primeira seringa pré-cheia contendo uma formulação de alta concentração e baixa viscosidade compreendendo anticorpo inibidor de MASP-2 (por exemplo, OMS646) para inibir a ativação do complemento dependente de MASP-2. Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente a injeção no indivíduo de uma segunda seringa pré-cheia contendo um modificador de permeabilidade no tecido, em que a injeção está no ou próximo ao local da injeção com o anticorpo inibidor de MASP-2.

[00123] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é uma microangiopatia trombótica (TMA) incluindo púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), TTP refratária, síndrome de Upshaw-Schulman (USS), síndrome hemolítica urêmica (HUS),síndrome hemolítica atípica (aHUS), síndrome hemolítica atípica não dependente do fator H, aHUS secundária a uma infecção, aHUS resistente à terapia plasmática, uma TMA secundária ao câncer, uma TMA secundária à quimioterapia, uma TMA secundária ao transplante ou uma TMA associada ao transplante de células-tronco hematopoiéticas.

[00124] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é uma condição renal, incluindo, mas não se limitando a, glomerulonefrite mesangioproliferativa, glomerulonefrite membranosa, glomerulonefrite =membranoproliferativa (glomerulonefrite mesangiocapilar), glomerulonefrite pós-infecção aguda (glomerulonefrite pós- estreptococcal), glomerulopatia C3, glomerulonefrite crioglobulinêmica, glomerulonefrite crescêntica pauci-imune necrosante, nefrite lúpica, nefrite de púrpura de Henoch-Schonlein e nefropatia por IZA.

[00125] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é fibrose renal (por exemplo, fibrose túbulo-intersticial) e/ou proteinúria em um indivíduo que sofre ou corre risco de desenvolver doença renal crônica, insuficiência renal crônica, doença glomerular (por exemplo, glomerulosclerose segmentar focal), um distúrbio do complexo imune (por exemplo, nefropatia por IgA, nefropatia membranosa), nefrite lúpica, síndrome nefrótica, nefropatia diabética, dano tubulointerstitial e glomeruloneptrite (por exemplo, glomerulopatia C3), mas não limitado à síndrome nefrótica, pré-eclâmpsia, eclâmpsia, lesões tóxicas dos rins, amiloidose, doenças vasculares do colágeno (por exemplo, lúpus eritematoso sistêmico), desidratação, doenças glomerulares (por exemplo, glomerulonefrite membranosa, glomerulonefrite membranosa, glomerulonefrite segmentar focal, glomerulopatia C3, doença de alteração mínima, nefrose lipoide), exercício extenuante, estresse, proteinúria ortostática benigna (postural), glomerulosclerose segmentar focal, nefropatia por IgA (doença de Berger), nefropatia por IgM, glomerulonefrite membranoproliferativa, nefropatia membranosa, doença de alteração mínima, sarcoidose, síndrome de Alport, diabetes mellitus (nefropatia diabética) toxicidade induzida por fármacos (por exemplo, AINEs, nicotina, penicilamina, carbonato de lítio, ouro e outros metais pesados, inibidores da ECA, antibióticos (por exemplo, adriamicina) ou opiáceos (por exemplo, heroína) ou outras nefrotoxinas); doença de Fabry, infecções (por exemplo, HIV, sífilis, hepatite A, B ou C, infecção pós-estreptocócica, esquistossomose urinária); aminoacidúria, síndrome de Fanconi, nefrosclerose hipertensiva, nefrite intersticial, doença falciforme, hemoglobinúria, mieloma múltiplo, mioglobinúria, rejeição de órgãos (por exemplo, rejeição de transplante renal), febre hemorrágica do ebola, síndrome unha-patela, febre mediterrânea familiar, síndrome HELLP, lúpus eritematoso sistêmico, granulomatose de Wegener, artrite reumatoide, doença de armazenamento do glicogênio tipo 1, síndrome de Goodpasture, púrpura de Henoch-Schônlein, infecção do trato urinário que se espalhou para os rins, síndrome de Sjógren e glomeruloneptrite pós-infecção.

[00126] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é uma reação inflamatória resultante do transplante de tecidos ou órgãos sólidos, incluindo, entre outros, alotransplante ou xenotransplante de órgãos inteiros (por exemplo, rim, coração, fígado, pâncreas, pulmão, córnea e similares) ou enxertos de tecidos (por exemplo, válvulas, tendões, medula óssea e similares).

[00127] Em algumas modalidades, o distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é uma lesão de isquemia-reperfusão (IR), incluindo, entre outros, I/R do miocárdio, I/R gastrointestinal, I/R renal e I/R após um reparo de aneurisma da aorta, I/R associado a circulação extracorpórea, I/R cerebral, acidente vascular cerebral, transplante de órgão ou religação de membros ou dedos cortados ou traumatizados; revascularização “para transplantes e/ou replantes e ressuscitação hemodinâmica após procedimentos de choque e/ou cirúrgicos.

[00128] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é uma complicação associada ao diabetes não obeso (diabetes tipo 1 ou diabetes mellitus dependente de insulina) e/ou complicações associadas ao diabetes tipo 1 ou tipo 2 (aparecimento na fase adulta) incluindo, mas não se limitando a, angiopatia diabética, neuropatia diabética, retinopatia diabética ou edema macular diabético.

[00129] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é uma doença ou distúrbio cardiovascular, incluindo, entre outros, nefrite de púrpura de Henoch-Schonlein, vasculite associada ao lúpus eritematoso sistêmico, vasculite associada à artrite reumatoide (também chamada artrite reumatoide maligna), vasculite do complexo imune e doença de Takayasu; cardiomiopatia dilatada; angiopatia diabética; doença de Kawasaki (arterite); embolia gasosa venosa (VGE); e inibição da reestenose após a colocação do stent, aterectomia rotacional e/ou angioplastia coronária transluminal percutânea (PTCA).

[00130] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é um distúrbio inflamatório gastrointestinal, incluindo, entre outros, pancreatite, diverticulite e distúrbios intestinais, incluindo doença de Crohn, colite ulcerativa, síndrome do intestino irritável e doença inflamatória intestinal (IBD).

[00131] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é um distúrbio pulmonar, incluindo, mas não limitado à, síndrome do desconforto respiratório agudo, lesão pulmonar aguda relacionada à transfusão, lesão pulmonar aguda de isquemia/reperfusão, “doença pulmonar obstrutiva crônicay asma, granulomatose de Wegener, doença da anti-membrana basal glomerular (doença de Goodpasture), síndrome de aspiração de mecônio, pneumonia por aspiração, síndrome de bronquiolite obliterante, fibrose pulmonar idiopática, lesão pulmonar aguda secundária à queimadura, edema pulmonar não cardiogênico, depressão respiratória relacionada à transfusão e enfisema.

[00132] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento — dependente de MASP-2 é uma reação inflamatória desencadeada por exposição extracorpórea e o método compreende o tratamento de um indivíduo submetido a um procedimento de circulação extracorpórea incluindo, mas não limitado a, hemodiálise, plasmaférese, leucoferese, oxigenação por membrana extracorpórea (ECMO), precipitação de LDL na oxigenação por membrana extracorpórea induzida por heparina (HELP) e circulação extracorpórea (CPB).

[00133] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é artrite inflamatória ou não- inflamatória e outros distúrbios osteomusculares, incluindo mas não limitados a osteoartrite, artrite reumatoide, artrite reumatoide juvenil, gota, artropatia neuropática, artrite psoriática, espondilite anquilosante ou outras espondiloartropatias e artropatias cristalinas, distrofia muscular e lúpus eritematoso sistêmico (LES).

[00134] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é um distúrbio de pele, incluindo, mas não limitado a, psoríase, dermatoses bolhosas autoimunes, espongiose eosinofílica, penfigoide bolhoso, epidermólise bolhosa adquirida, dermatite atópica, herpes gestacional e outros distúrbios da pele e para o tratamento de queimaduras térmicas e químicas, incluindo vazamento capilar causado pelas mesmas.

[00135] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é um distúrbio ou lesão do sistema nervoso periférico (PNS) e/ou sistema nervoso central (CNS) incluindo, mas não limitado a, esclerose múltipla (MS), miastenia gravis (MG), doença de Huntington (HD), esclerose lateral amiotrófica (ALS), síndrome de Guillain Barre, reperfusão após acidente vascular cerebral, discos degenerativos, trauma cerebral, doença de Parkinson (PD), doença de Alzheimer (AD), síndrome de Miller-Fisher, cerebral trauma e/ou hemorragia, lesão cerebral traumática, desmielinização e meningite.

[00136] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é sepse ou uma condição resultante de sepse, incluindo, sem limitação, sepse grave, choque séptico, síndrome do desconforto respiratório agudo resultante de sepse, anemia hemolítica, síndrome da resposta inflamatória sistêmica ou choque hemorrágico.

[00137] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é um distúrbio urogenital incluindo, mas não limitado a, doença da bexiga dolorosa, doença da bexiga sensorial, cistite bacteriana crônica e cistite intersticial, infertilidade masculina e feminina, disfunção placentária e aborto espontâneo e pré-eclâmpsia.

[00138] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é uma reação inflamatória em um indivíduo sendo tratado com quimioterapêuticos e/ou radioterapia, incluindo, sem limitação, o tratamento de condições cancerígenas.

[00139] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é um câncer dependente de angiogênese, incluindo, mas não limitado a, tumor(es) sólido(s), tumor(es) transmitido(s) pelo sangue, tumores carcinoides de alto risco e metástases de tumor.

[00140] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é um tumor benigno dependente de angiogênese, incluindo mas não limitado a, hemangiomas, neuromas acústicos, neurofibromas, tracomas, tumores carcinoides e granulomas piogênicos.

[00141] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é um distúrbio endócrino incluindo, mas não limitado a, tireoidite de Hashimoto, estresse, ansiedade e outros distúrbios hormonais em potencial que envolvem liberação regulada de prolactina, crescimento ou fator de crescimento semelhante à insulina, e adrenocorticotrofina da hipófise.

[00142] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é uma doença ou distúrbio oftálmico incluindo, mas não limitado a, degeneração macular relacionada à idade, glaucoma e endoftalmite.

[00143] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é uma doença ou condição angiogênica ocular que inclui, entre outros, degeneração macular relacionada à idade, uveíte, melanoma ocular, neovascularização da córnea, pterígio primário, queratite estromal do HSV, Linfangiogênese corneana induzida por HSV-1, retinopatia diabética proliferativa, edema macular diabético, retinopatia da prematuridade, oclusão de veias retinianas, rejeição de enxerto de córnea, glaucoma neovascular, hemorragia vítrea secundária à retinopatia diabética proliferativa, neuromielite óptica e rubeose.

[00144] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é coagulação intravascular disseminada (DIC) ou outro distúrbio da coagulação mediado por complemento, incluindo DIC secundária à sepse, trauma grave, incluindo trauma neurológico (por exemplo, traumatismo craniano agudo, consulte Kumura et al, Acta Neurochirurgica 85: 23-28 (1987), infecção (bacteriana, viral, fúngica, parasitária), câncer, complicações obstétricas, doença hepática, reação tóxica grave (por exemplo, mordida de cobra, picada de inseto, reação transfusional), choque, acidente vascular cerebral, rejeição de transplante, aneurisma vascular, insuficiência hepática, tratamento de câncer por quimioterapia ou radioterapia, queimadura ou exposição acidental à radiação.

[00145] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é selecionado a partir do grupo que consiste em síndrome de radiação aguda, doença de depósito denso, doença de Degos, doença antifosfolípide catastrófica (CAPS), doença de Behçet, crioglobulinemia; hemoglobinúria paroxística noturna (“PNH”) e doença por aglutininas a frio.

[00146] Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio associado ao complemento dependente de MASP-2 é selecionado a partir do grupo que consiste em aHUS, HSCT-TMA, IgAN e Nefrite Lúpica (LN). Síndrome hemolítica urêmica atípica (SHUS)

[00147] A síndrome hemolítica urêmica atípica (aHUS) faz parte de um grupo de condições denominadas “Microangiopatias trombóticas”. Na forma atípica da HUS (aHUS), a doença está associada à regulação defeituosa do complemento e pode ser esporádica ou familiar. Os casos familiares de aHUS estão associados a mutações nos genes que codificam para ativação do complemento ou proteínas reguladoras do complemento, incluindo o fator H do complemento, fator 1, fator B, cofator da membrana CD46, bem como a proteína 1 relacionada ao fator H do complemento (CFHRI) e a proteína 3 relacionada ao fator H do complemento (CFHR3). (Zipfel, P.F., et al., PloS Genetics 3(3):e41 (2007)). A característica unificadora desse conjunto diversificado de mutações genéticas associadas ao aHUS é uma predisposição para a ativação aprimorada do complemento nas superfícies celulares ou teciduais. Um indivíduo é um risco para o desenvolvimento de aHUS no aparecimento de pelo menos um ou mais sintomas indicativos de aHUS (por exemplo, presença de anemia, trombocitopenia e/ou insuficiência renal) e/ou

59 /116 presença de microangiopatia trombótica em uma biópsia obtida do indivíduo. A determinação de se um indivíduo está em risco de desenvolver aHUS compreende determinar se o indivíduo tem uma predisposição genética para o desenvolvimento de aHUS, o que pode ser realizado pela avaliação de informações genéticas (por exemplo, de um banco de dados que contém o genótipo do indivíduo) ou pela realização de pelo menos um teste de triagem genética no indivíduo para determinar a presença ou ausência de um marcador genético associado à aHUS (ou seja, determinar a presença ou ausência de uma mutação genética associada à aHUS nos genes que codificam o fator H do complemento (CFH), fator I (CFI), fator B (CFB), cofator de membrana CD46, C3, proteína 1 relacionada ao fator H do complemento (CFHR1) ou THBD (que codifica a trombomodulina da proteína anticoagulante) ou proteína 3 relacionada ao fator H do complemento (CFHR3) ou proteína 4 relacionada ao fator H do complemento (CFHR4) via sequenciamento do genoma ou análise específica do gene (por exemplo, análise de PCR) e/ou determinar se o indivíduo tem um histórico familiar de aHUS. Os métodos de triagem genética para a presença ou ausência de uma mutação genética associada à aHUS estão bem estabelecidos, por exemplo, ver Noris M et al. “Atypical Hemolytic-Uremic Syndrome,” 2007 Nov 16 [atualizado em 10 de março de 2011]. Em: Pagon RA, Bird TD, Dolan CR, et al., editores. GeneReviews"YM, Seattle (WA): University of Washington, Seattle.

[00148] Conforme descrito em US2015/0166675, em um modelo experimental ex vivo humano de microangiopatia trombótica (TMA), o OMS646 inibiu a ativação do complemento e a formação de trombos em células endoteliais microvasculares expostas a amostras de soro de pacientes com aHUS, tanto na fase aguda quanto em remissão. Conforme descrito em US2017/0137537, dados obtidos em um ensaio clínico de Fase 2 aberto (administração iv de 2-4 mg kg de anticorpo inibidor de MASP-2 OMS646 uma vez por semana, durante 4 semanas consecutivas), o tratamento com

OMS646 mostrou eficácia em pacientes com SHUS. A contagem de plaquetas nos três pacientes com aHUS nas coortes de dose média e alta (duas na dose média e uma na coorte de alta dose) retornou ao normal, com um aumento médio estatisticamente significativo em relação ao valor basal de aproximadamente 68.000 plaquetas/mL (p = 0,0055). TMA associada ao transplante de células-tronco hematopoiéticas (HSCT- TMA)

[00149] A TMA associada ao transplante de células-tronco hematopoiéticas (HSCT-TMA) é uma complicação com risco de vida que é desencadeada por lesão endotelial. O rim é o órgão mais afetado, embora a HSCT-TMA possa ser uma doença multissistêêmica que também envolve os pulmões, intestinos, coração e cérebro. A ocorrência de TMA leve está associada a insuficiência renal a longo prazo. O desenvolvimento de TMA pós-alogênica associada à HSCT difere em frequência com base em condicionamento e critérios de diagnóstico variados e regimes de profilaxia da doença do enxerto contra hospedeiro, com os inibidores da calcineurina sendo os fármacos mais frequentes implicados (Ho VT et al., Biol Blood Marrow Transplant, 11(8):571-5, 2005).

[00150] Conforme descrito no US2017/0137537, em um ensaio clínico de Fase 2 (administração iv de 4 mg/kg de anticorpo inibidor de MASP-2 OMS646 uma vez por semana, durante 4 a 8 semanas consecutivas), o tratamento com OMS646 melhorou os marcadores de TMA em pacientes que sofrem de HSCT- TMA, incluindo uma melhora estatisticamente significativa nos níveis de LDH e haptoglobina. Os pacientes com HSCT-TMA tratados com OMS646 representam alguns dos mais difíceis de tratar, demonstrando assim evidências clínicas de um efeito terapêutico do OMS646 em pacientes com HSCT-TMA. Nefropatia por imunoglobulina A (IZAN)

[00151] A nefropatia por imunoglobulina A (IZAN) é uma doença renal autoimune que resulta em inflamação intrarrenal e lesão renal. A IZAN é a doença glomerular primária mais comum em todo o mundo. Com uma incidência anual de aproximadamente 2,5 por 100.000, estima-se que 1 em 1400 pessoas nos EUA desenvolverá IZAN. Cerca de 40% dos pacientes com IZgAN desenvolverão doença renal terminal (ESRD). Os pacientes tipicamente apresentam hematúria microscópica com proteinúria leve a moderada e níveis variáveis de insuficiência renal (Wyatt RJ. et al, N Engl J Med 368(25):2402-14, 2013). Marcadores clínicos como função renal comprometida, hipertensão sustentada e proteinúria pesada (acima de 1 g por dia) estão associados a um prognóstico ruim (Goto M et al., Nephrol Dial Transplant 24(10):3068-74, 2009; Berthoux F. et al., 7 Am Soc Nephrol 22(4):752-61, 2011). A proteinúria é o fator prognóstico mais forte, independente de outros fatores de risco em vários grandes estudos observacionais e estudos prospectivos (Coppo R. et al., J Nephrol 18(5):503- 12, 2005; Reich H. N,, et al., J Am Soc Nephrol 18(12):3177-83, 2007). Estima-se que 15-20% dos pacientes atinjam a ERSD dentro de 10 anos após o início da doença se não forem tratados (D' Amico G., Am J Kidney Dis 36 (2): 227-37, 2000). A característica diagnóstica da IZAN é a predominância de depósitos de IgA, isolados ou com IgG, IWZGM ou ambos, no mesângio glomerular.

[00152] Conforme descrito em US2017/0189525, em um ensaio renal de fase 2 aberto (administração iv de 4 mg/kg de anticorpo inibidor de MASP-2 OMS646 uma vez por semana, durante 12 semanas consecutivas), pacientes com nefropatia por IgA tratados com OMS646 demonstraram uma diminuição clinicamente significativa e estatisticamente significativa nas razões de albumina para creatinina na urina (uACRs) ao longo do ensaio e redução nos níveis de proteína na urina em 24 horas, desde o nível basal até o final do tratamento.

Nefrite Lúpica (LN)

[00153] Uma das principais complicações do lúpus eritematoso sistêmico (LES) é a nefrite, também conhecida como nefrite lúpica, classificada como uma forma secundária de glomerulonefrite. Até 60% dos adultos com SLE têm algum tipo de envolvimento renal mais tarde no curso da doença (Koda-Kimble et al, Koda-Kimble e Young'ss Applied Therapeutics: the clinical use of drugs, 10º Ed, Lippincott Williams & Wilkins: páginas 792-9, 2012), com uma prevalência de 20 a 70 por 100.000 pessoas nos EUA. A nefrite lúpica geralmente se apresenta em pacientes com outros sintomas de SLE ativo, incluindo fadiga, febre, erupção cutânea, artrite, serosite ou doença do sistema nervoso central (Pisetsky D.S. et al., Med Clin North Am 81(1):113-28, 1997). Alguns pacientes têm nefrite lúpica assintomática; no entanto, durante o acompanhamento regular, anormalidades laboratoriais, como níveis séricos elevados de creatinina, baixos níveis de albumina ou proteína ou sedimento urinário sugerem nefrite lúpica ativa.

[00154] Conforme descrito no Pedido de Patente dos EUA Nº 15/470.647, em um ensaio renal de Fase 2 aberto (administração iv de 4 mg/kg de anticorpo inibidor de MASP-2 OMS646 uma vez por semana, durante 12 semanas consecutivas), 4 de 5 pacientes com nefrite lúpica (LN) que foi tratada com um anticorpo anti-MASP-2 demonstrou uma diminuição clinicamente significativa nos níveis de proteína na urina de 24 horas, do nível basal até o final do tratamento. Administração

[00155] As formulações de anticorpo inibidor de MASP-2 de baixa concentração e alta viscosidade aqui descritas podem ser administradas a um indivíduo necessitado de tratamento usando métodos conhecidos na técnica, tais como injeções ou infusões únicas ou múltiplas durante um período de tempo de uma maneira adequada, por exemplo, injeção ou infusão por via subcutânea, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular. Como aqui descrito, as formulações parentéricas podem ser preparadas na forma de unidade de dosagem para facilitar a administração e uniformidade da dosagem. Como aqui utilizado, o termo “forma de dosagem unitária” refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para o indivíduo a ser tratado; cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com a solução aquosa farmacêutica selecionada.

[00156] Para a prevenção ou tratamento da doença, a dosagem apropriada do anticorpo inibidor do MASP-2 dependerá do tipo de doença a ser tratada, da gravidade e do curso da doença. O anticorpo é adequadamente administrado ao paciente de uma vez ou durante uma série de tratamentos. Dependendo do tipo e gravidade da doença, o anticorpo inibidor do MASP-2 pode ser administrado em uma dose fixa ou em uma dose de miligrama por quilograma (mg/kg) Dosagens exemplificativas do anticorpo inibidor de MASP-2 contido nas formulações aqui descritas incluem, por exemplo, cerca de 0,05 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, como cerca de 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg ou 20 mg/kg que podem ser administrados diariamente, duas vezes por semana, uma vez por semana, duas vezes por semana ou por mês.

[00157] Dosagens fixas exemplificativas do anticorpo inibidor de MASP-2, como as formulações descritas aqui incluem, por exemplo, cerca de mg a cerca de 1000 mg, como cerca de 50 mg a cerca de 750 mg, como cerca de 100 mg a cerca de 500 mg, como cerca de 200 mg a cerca de 400 mg, como cerca de 200 mg, cerca de 225 mg, cerca de 250 mg, cerca de 275 mpg, cerca de 300 mg, cerca de 325 mg, cerca de 350 mg, cerca de 375 mg ou cerca de 400 mg que podem ser administrado diariamente, duas vezes por semana, uma vez por semana, duas vezes por semana ou mensalmente.

[00158] No que diz respeito ao volume de entrega das formulações, a

64 /116 concentração do anticorpo em uma formulação usada para uma aplicação terapêutica é determinada com base no fornecimento do anticorpo em uma dosagem e volume que é tolerado pelo, e de valor terapêutico para o, paciente. Para que uma formulação terapêutica de anticorpo seja administrada por injeção, a concentração de anticorpos dependerá do volume de injeção (geralmente de 0,5 mL a 3 mL). As terapias baseadas em anticorpos podem exigir dosagens de vários mg/kg por dia, por semana, por mês ou por vários meses. Por conseguinte, Se um anticorpo inibidor de MASP-2 for provido a 1 mg/kg a 5 mg/kg (por exemplo, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg ou 5 mg/kg) de peso corporal do paciente e um paciente médio pesa 75 kg, então 75 mg a 375 mg do anticorpo precisarão receber um volume de injeção de 0,5 a 3,0 mL. Alternativamente, a formulação é fornecida em uma concentração adequada para entrega em mais de um local de injeção por tratamento.

[00159] Em uma modalidade preferida em que a concentração do anticorpo OMS646 na formulação é de cerca de 185 mg/mL, para uma dosagem de 1 mg/kg a 5 mg/kg de peso corporal do paciente (assumindo 75 kg), a formulação seria entregue por via subcutânea em cerca de 0,40 mL a cerca de 2,0 mL de volume de injeção.

[00160] Como descrito aqui, as formulações da presente descrição são adequadas para administração por dosagem intravenosa (i.v.) e subcutânea (s.c.).

[00161] Dependendo do tipo e gravidade da doença, o anticorpo inibidor de MASP-2 pode ser administrado por via intravenosa em uma dose fixa ou em uma dose de miligrama por quilograma (mg/kg). Dosagens exemplificativas do anticorpo inibidor de MASP-2 contido nas formulações descritas aqui podem ser entregues por via intravenosa diluindo uma quantidade apropriada da formulação de alta concentração aqui descrita com um diluente farmaceuticamente aceitável antes da administração, de modo que o anticorpo inibidor de MASP-2 seja administrado a um indivíduo humano em uma dosagem de, por exemplo, cerca de 0,05 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, como cerca de 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg ou 20 mg/kg que podem ser administrados diariamente, duas vezes por semana, uma vez por semana, duas vezes por semana ou mensalmente.

[00162] O anticorpo inibidor de MASP-2 também pode ser entregue por via intravenosa em uma dosagem fixa, diluindo uma quantidade apropriada da formulação de alta concentração aqui descrita com um diluente farmaceuticamente aceitável antes da administração, de modo que o anticorpo inibidor de MASP-2 seja administrado a um indivíduo humano em uma dosagem de cerca de 10 mg a cerca de 1000 mg, como cerca de 50 mg a cerca de 750 mg, como cerca de 100 mg a cerca de 500 mg, como cerca de 200 mg a cerca de 400 mg, tal como cerca de 200 mg, cerca de 225 mg, cerca de 250 mg, cerca de 275 mg, cerca de 300 mg, como cerca de 300 mg a cerca de 400 mg, como cerca de 310 mg, cerca de 320 mg, cerca de 325 mg, cerca de 330 mg, cerca de 330 mg, cerca de 340 mg, cerca de 350 mg, cerca de 360 mg, cerca de 370 mg, cerca de 375 mg, cerca de 380 mg, cerca de 390 mg ou cerca de 400 mg que podem ser administrados diariamente, duas vezes por semana, uma vez por semana, duas vezes por semana ou mensalmente.

[00163] Em algumas modalidades, a formulação compreendendo o anticorpo inibidor de MASP-2 é diluída em um diluente farmaceuticamente aceitável antes da administração sistêmica (por exemplo, intravenosa). Diluentes exemplificativos que podem ser utilizados incluem água para injeção, dextrose a 5%, solução salina a 0,9%, solução de Ringers e outros diluentes aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, adequados para administração intravenosa. Embora de modo algum pretenda ser limitativo, as dosagens exemplificativas de um anticorpo inibidor de MASP-2 a serem administradas por via intravenosa para tratar um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio do complemento dependente de MASP-2 incluem, por exemplo, cerca de 0,05 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, como cerca de 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg kg, mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg ou 20 mg/kg que podem ser administrados diariamente, duas vezes por semana, uma vez por semana, duas vezes por semana ou mensalmente. Dosagens fixas exemplificativas do anticorpo inibidor de MASP-2 a serem entregues por via intravenosa para tratar um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio do complemento dependente de MASP-2 incluem, por exemplo, cerca de 10 mg a cerca de 1000 mg, como cerca de 50 mg a cerca de 750 mg, como cerca de 100 mg a cerca de 500 mg, como cerca de 200 mg a cerca de 400 mg, como cerca de 200 mg, cerca de 225 mg, cerca de 250 mg, cerca de 275 mg, cerca de 300 mg, cerca de 325 mg, cerca de 350 mg, cerca de 375 mg ou cerca de 400 mg que podem ser administrado diariamente, duas vezes por semana, uma vez por semana, duas vezes por semana ou mensalmente.

[00164] Em algumas modalidades, a formulação é diluída em um diluente farmaceuticamente aceitável e administrada a um indivíduo em necessidade da mesma com uma dose de carga iv (por exemplo, cerca de 300 mg a cerca de 750 mg, como cerca de 400 mg a cerca de 750 mg, como cerca de 300 mg a cerca de 500 mg, como cerca de 300 mg a cerca de 400 mg, como cerca de 300 mg, cerca de 310 mg, cerca de 320 mg, cerca de 330 mg, cerca de 340 mg, cerca de 350 mg, cerca de 360 mg, cerca de 370 mg, cerca de 380 mg, cerca de 390 mg ou cerca de 400 mg), seguidos por uma ou mais injeções subcutâneas da formulação com uma dosagem de 1 mg/kg a 5 mg/kg de peso corporal, ou uma dose fixa de cerca de 100 mg a cerca de 400 mg, como cerca de 100 mg, cerca de 150 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 250 mg, cerca de 300 mg, cerca de 350 mg ou cerca de 400 mg. Por exemplo, uma a dose de carga iv inicial pode ser a via de administração preferida em casos específicos, como quando um paciente está no hospital ou em uma clínica e sofre de uma condição aguda (por exemplo, aHUS) que requer uma dose de carga inicial seguida de manutenção de manutenção com injeção subcutânea da formulação. Exemplos

[00165] A invenção é ilustrada adicionalmente nos seguintes exemplos que não devem ser interpretados como adicionalmente limitativos. Todas as citações da literatura são expressamente incorporadas por referência. EXEMPLO 1

[00166] Este exemplo demonstra que OMS646, um anticorpo monoclonal direcionado à MASP-2 humana, se liga à MASP-2 humana com alta afinidade e bloqueia a atividade do complemento da via da lectina. Fundamentos

[00167] Um anticorpo monoclonal totalmente humano direcionado à MASP-2 humana (apresentado como SEQ ID NO: 1), referido como “OMSG646”, foi gerado como descrito em WO2012/151481, que é aqui incorporado por referência. O anticorpo monoclonal OMS646 compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) definida como SEQ ID NO: 2 e uma região variável de cadeia leve definida como SEQ ID NO:3. OMS646 é composto por regiões variáveis de origem humana fundidas às regiões constantes de cadeia leve lambda e de cadeia pesada de IZG4 humana e é secretado como um tetrâmero glicosilado ligado ao dissulfeto, que consiste em duas cadeias pesadas idênticas (com a sequência de aminoácidos apresentada como 4) e duas cadeias leves lambda idênticas (com a sequência de aminoácidos apresentada como SEQ ID NO: 5). O resíduo de asparagina (N) na posição 295 da cadeia pesada (SEQ ID NO:4) é glicosilado e é indicado em texto em negrito e sublinhado. Região Variável de Cadeia Pesada

[00168] A seguir é apresentada a sequência da região variável de cadeia pesada (VH) para OMS646. As CDRs de Kabat (31-35 (H1), 50-65 (H2) e 95-107 (H3)) estão em negrito; e as CDRs de Chothia (26-32 (H1), 52- 56 (H2) e 95-101 (H3)) estão sublinhadas. Região variável de cadeia pesada (VH) de OMS646 (SEQ ID NO:2)

QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSRGKMGVSW IRQPPGKALEWLAHIFSSDEKSY RTSLKSRLTISKDTSKNQVVLTMTN

MDPVDTATYYCARIRRGGIDYWGQGTLVTVSS Região Variável de Cadeia Leve

[00169] A sequência da região variável de cadeia leve (VL) é apresentada abaixo para OMS646. As CDRs de Kabat (24-34 (L1); 50-56 (L2) e 89-97 (L3) estão sublinhadas. Essas regiões são as mesmas, numeradas pelo sistema Kabat ou Chothia. Região variável de cadeia leve (VL) de OMS646 (SEQ ID NO:3)

QPVLTQPPSLSVSPGQTASITCSGEKLGDKYAYWYQQ KPGQSPVLVMYQDKQRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEAD

YYCQAWDSSTAVFGGGTKLTVL Polipeptídeo de comprimento total de cadeia pesada mutada por IgG4 de cadeia pesada de OMS646 (445 aa) (SEQ ID NO:4

QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSRGKMGVSWI RQPPGKALEWLAHIFSSDEKSYRTSLKSRLTISKDTSKNQVVLTMTNM DPVDTATYYCARIRRGGIDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRS TSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPE FLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHODWLNGKEYKCKVSNK GLPSSIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNV

FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Polipeptídeo de comprimento total de cadeia leve de OMS646 (212 aa) (SEQ

69 /116 ID NO:5

QPVLTQPPSLSVSPGQTASITCSGEKLGDKYAYWYQQK PGQSPVLVMYQDKQRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGIQAMDEADY YCQAWDSSTAVFGGGTKLTVLGQPKAAPS VTLFPPSSEELQANKATL VCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLS LTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS

[00170] Conforme descrito em WO2012/151481, o OMS646 se liga à MASP-2 e inibe seletivamente a via da lectina e não inibe substancialmente a via clássica (ou seja, inibe a via da lectina enquanto deixa intacta a via do complemento clássico) e também exibe pelo menos uma ou mais das seguintes características: o dito anticorpo liga a MASP-2 humano com um KD de 10 nM ou menos, o dito anticorpo liga a um epítopo no domínio CCP] de MASP-2, o dito anticorpo inibe a deposição de C3b em um ensaio in vitro em soro humano a 1% em um ICs, de 10 nM ou menos, o dito anticorpo inibe a deposição de C3b em soro humano a 90% com um ICs,9 de 30 nM ou menos, em que o anticorpo é um fragmento de anticorpo selecionado a partir do grupo que consiste em Fv, Fab, Fab', F(ab)2 e F(ab')2, em que o anticorpo é uma molécula de cadeia única, em que o dito anticorpo é uma molécula de IgG2, em que o dito anticorpo é uma molécula de IgG1, em que o dito anticorpo é uma molécula de IZG4, em que a molécula de IZG4 compreende uma mutação de S228P.

[00171] Como descrito em WO2012/151481, determinou-se que OMS646 se ligava avidamente à MASP-2 humana (SEQ ID NO: 1) com seletividade de > 5000 vezes quando comparado com C1ls, Clr, MASP-1 ou MASP-3. Como mostrado neste exemplo, o OMS646 se liga especificamente à MASP-2 humana com alta afinidade e tem a capacidade de bloquear a atividade do complemento da via da lectina.

[00172] Como mostrado acima, OMS646 compreende (a) uma região variável de cadeia pesada compreendendo (i) CDR-H1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de 31-35 da SEQ ID NO: 2, (1) CDR-H2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de 50-65 da SEQ ID NO: 2 e iii) CDR-H3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de 95-107 da SEQ ID NO: 2; e (b) uma região variável da cadeia leve compreendendo: 1) CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos de 24-34 da SEQ ID NO: 3, ii) CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos de 50 a 56 da SEQ ID NO: 3 e 111) CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos de 89-97 da SEQ ID NO:3.

[00173] Como descrito adicionalmente em WO2012/151481, uma variante de OMS646, possuindo uma região variável de cadeia pesada com pelo menos 95% de identidade à SEQ ID NO:2 e uma região variável de cadeia leve com pelo menos 95% de identidade à SEQ ID NO:3 demonstrou ter atividade funcional semelhante ao OMS646. A variante de OMS646 descrita em WO2012/151481 compreende a) uma região variável de cadeia pesada compreendendo: SEQ ID NO:2 ou uma variante da mesma compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 95% de identidade à SEQ ID NO:2, em que o resíduo 31 é um R, o resíduo 32 é um G, o resíduo 33 é um K, o resíduo 34 é um M, o resíduo 35 é um G, resíduo 36 é um V, resíduo 37 é um S, resíduo 37 é um S, resíduo 50 é um L, resíduo 5léumA, resíduo 52 é um H, resíduo 53 é um [, resíduo 54 é um F, resíduo 55éumS, resíduo 56 é um S, resíduo 57 é um D, resíduo 57 é um D, resíduo 58 é um E, resíduo 59 é um K, resíduo 60 é um S, resíduo 61 é um Y, resíduo 62 é um R, resíduo 63 é um T, resíduo 64 é um S, resíduo 65 é um L, resíduo 66 é um K, resíduo 67 é um S, resíduo 95 é um Y, resíduo 96 é um Y, resíduo 97 é um C, resíduo 98 é um A, resíduo 99 é um R, resíduo 100 é um L, o resíduo 101 é um R, o resíduo 102 é um R ou A, resíduo 103 é um G, resíduo 104 é um G, resíduo 105 é um 1, resíduo 106 é um D e resíduo 107 é um Y; e b) uma região variável de cadeia leve compreendendo: SEQ ID NO:3 ou uma variante da mesma compreendendo uma sequência de aminoácidos possuindo pelo menos 95% de identidade à SEQ ID NO:3, em que o resíduo 23 é um S, resíduo 24 é um G, resíduo 25 é um E ou D, resíduo 26 é um K, resíduo 27 é um L, resíduo 28 é um G, resíduo 29 é um D, resíduo 30 é um K, resíduo 31 é um Y ou F, resíduo 32 é um A, resíduo 33 é um Y, resíduo 33 é um Y, resíduo 49 é Q, resíduo 50 é um D, resíduo 51 é um K ou N, resíduo 52 é um Q ou K, resíduo 53 é um R, resíduo 54 é um P, resíduo 55 é um P, resíduo 55 éumS, resíduo 56 é um G, resíduo 88 é um Q, resíduo 89 é um A, resíduo 90 é um W, resíduo 91 é um D, resíduo 92 é um S, resíduo 93 é um S, resíduo 93 éum SS, resíduo 94 é um T, resíduo 95 é um A, resíduo 95 é um A, resíduo 96 é um V e o resíduo 97 é um F.

1. OMS646 bloqueia especificamente a ativação dependente de lectina dos componentes do complemento terminal Métodos:

[00174] O efeito do OMS646 na deposição do complexo de ataque à membrana (MAC) foi analisado usando condições específicas de via para a via da lectina, a via clássica e a via alternativa. Para esse fim, o kit de triagem de complemento Wieslab Comp300 (Wieslab, Lund, Suécia) foi usado seguindo as instruções do fabricante. Resultados:

[00175] A FIGURA 1A ilustra graficamente a quantidade de deposição de MAC dependente da via da lectina na presença de diferentes quantidades de anticorpo inibidor de MASP-2 humano (OMS646). A FIGURA 1B ilustra graficamente a quantidade de deposição de MAC dependente da via clássica na presença de anticorpo inibidor de MASP-2 humano (OMS646). À FIGURA 1C ilustra graficamente a quantidade de deposição de MAC dependente da via alternativa na presença de diferentes quantidades de anticorpo inibidor de MASP-2 humano (OMS646). Como mostrado na FIGURA 1A, OMSG646 bloqueia a ativação da deposição de MAC mediada pela via da lectina com um valor de IC50 de aproximadamente 1 nM. No

T2/116 entanto, OMS646 não teve efeito na deposição de MAC gerada a partir da ativação mediada pela via clássica (FIGURA 1B) ou da ativação mediada pela via alternativa (FIGURA 1C). EXEMPLO 2 Estudos de Pré-Formulação de OMS646 Antecedentes/Fundamentação:

[00176] A composição de uma formulação de proteína de viscosidade reduzida é determinada pela consideração de vários fatores, incluindo, mas não se limitando a: natureza da proteína, concentração da proteína, faixa de pH desejada, temperatura em que a formulação da proteína deve ser armazenada, o período de tempo durante o qual a formulação de proteína deve ser armazenada e como a formulação deve ser administrada a um paciente. Para que uma formulação terapêutica de viscosidade reduzida seja administrada por injeção, a concentração da proteína depende do volume de injeção (geralmente de 1,0 mL a 2,25 mL). Se uma proteína deve ser provida a 2 a 4 mg/kg de peso corporal de um paciente e um paciente médio pesa 75 kg, 150 mg-300 mg da proteína precisarão ser entregues em um volume de injeção de 1,0 a 1,62 mL. A viscosidade é idealmente mantida abaixo de cerca de 25 cP para garantir um produto terapêutico subcutâneo capaz de ser dispensado a partir de, ou inserido em, uma seringa. Em algumas modalidades, a viscosidade é mantida abaixo de cerca de 20 cP para permitir a entrega do produto terapêutico com um dispositivo de injeção e também para permitir vários tipos de bioprocessamento, como a filtração de fluxo tangencial.

[00177] O objetivo principal desses estudos foi identificar os componentes da formulação que resultariam em estabilidade química, física e estrutural ideal do anticorpo OMS646 na formulação líquida, resultando em uma formulação estável com uma viscosidade inferior a 25 cP, como menos de 20 cP, com uma alta concentração de OMS646 (100 mg/mL ou mais)

adequado para injeção subcutânea em um indivíduo humano. Métodos analíticos:

[00178] Para testar várias combinações de tampão e excipiente, uma preparação purificada de anticorpo OMS646 (102 mg/mL em acetato de sódio mM, 50 mg/mL de sorbitol, pH 5,0) foi diluída para -1 mg/mL nas soluções de formulação selecionadas e volumes de 4 mL foram colocados em concentradores pré-rinsados com o tampão apropriado. Cada unidade foi centrifugada para - 1 mL a 3200 x g. Esse processo foi repetido por um total de três rodadas de troca de tampão.

[00179] A aparência da formulação foi avaliada usando uma lâmpada de observação Eisai Machinery, modelo MIH-DX, contra a água, usando fundos brancos e pretos. Cada amostra da formulação foi testada quanto à cor, clareza (opalescência) e presença de material particulado.

[00180] O teor de proteínas das formulações de OMS646 foi determinado usando um coeficiente de extinção de 149 mL/mg*cm. A medição da absorbância a 280 nm com correção da absorbância a 320 nm foi realizada usando UVettes descartáveis e um comprimento de trajeto de 0,2 cm. As amostras foram preparadas em duplicata por diluição com solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco 1x (DPBS) até uma concentração final de -2 mg/mL. Para amostras de alta concentração, as soluções limpas foram primeiro diluídas 1:1 em tampão de formulação e depois diluídas para —- 2 mg/mL em DPBS 1x. Calculou-se a média das medições duplicadas para cada amostra e o desvio padrão relativo percentual (RSD) foi calculado. Para quaisquer amostras duplicadas com RSD >5%, um conjunto de diluição adicional foi preparado e medido.

[00181] A concentração de proteína foi calculada da seguinte forma: A280 corrigido = A280 - A320 Concentração de proteína (mg/mL) = (A280 corrigido * fator de diluição)/ 1,49 mL/mg*cm

[00182] Para avaliar a turbidez/dispersão de luz da amostra, 100 uL de amostra não diluída foram medidos a 320 nm em uma UVette descartável usando um caminho de trajeto de 1 cm. Para cada amostra, o espectrofotômetro foi lido com o branco com a solução de troca de tampão apropriada sem a proteína presente. Após a medição, as amostras foram recuperadas e utilizadas para análise de pH. Para normalizar as medições de turbidez para a concentração da amostra, o A320 também foi dividido pela concentração em mg/mL e o valor resultante em mAU*mL/mg foi relatado.

[00183] As medições de pH de todas as formulações e soluções foram realizadas à temperatura ambiente usando um SevenMulti Meter calibrado (Mettler Toledo) com um eletrodo de compensação de temperatura automático.

[00184] A estabilidade térmica das formulações de OMS646 foi monitorada por calorimetria diferencial de varredura (DSC). Os dados de temperatura de fusão (Tm) para o mAb foram coletados usando um MicroCal Capillary DSC. As amostras de proteína foram diluídas para uma concentração final de - 2 mg/ml na solução de troca de tampão apropriada. À avaliação das amostras por DSC foi realizada por varredura de 20-110ºC a 1ºC/minuto ou 2ºC/minuto. O termostato de pré-varredura foi ajustado para minutos, o termostato de pós-varredura para O minutos e o termostato de pós-ciclo definido para 25ºC. Para a análise dos dados de Tm, subtraiu-se uma varredura tampão-tampão da varredura amostra-tampão e o termograma foi então normalizado para a concentração de proteína (molar) usando uma estimativa de peso molecular de 150 kDa. Uma linha de base progressiva foi gerada e subtraída dos dados para facilitar a determinação da Tm. As temperaturas de fusão foram determinadas usando a função pick peaks (selecionar picos) do software científico Origin& associado.

[00185] A dispersão dinâmica da luz (DLS) mede as flutuações dependentes do tempo na intensidade da luz dispersa das partículas de uma amostra, onde a equação de Stokes Einstein é usada para calcular o raio hidrodinâmico da(s) partícula(s) em solução. Os experimentos com DLS para formulações de OMS646 foram realizados com amostras não diluídas duplicadas (30 - 40 uL) usando um instrumento leitor de placas II DynaProTM (Wyatt). Foram realizadas 10 varreduras individuais a 25ºC, com um tempo de aquisição de 5 segundos. A viscosidade foi ajustada à da solução salina tamponada com fosfato, 1,019 cP. As plotagens de distribuição de intensidade resultantes foram comparadas para avaliar os efeitos de vários componentes da formulação no tamanho médio de partícula por intensidade (diâmetro geral), um parâmetro global de largura de distribuição de tamanho (porcentagem geral de polidispersividade ou % de Pd), o diâmetro médio de pico do monômero de OMS646 (diâmetro do pico 2) e o parâmetro de largura desse pico (pico 2% de Pd). A porcentagem de polidispersividade (geral ou Pico 2) é um parâmetro de largura que reflete a heterogeneidade detectada no gráfico de distribuição de intensidade, em que % de Pd <20% é indicativo de uma solução quase monodispersa e/ou de conformação de espécies.

[00186] A estabilidade contra a desnaturação química foi avaliada usando o Sistema de Desnaturação Química Isotérmica AVIA (Modelo 2304), que testa a estabilidade química sob condições ambientais de maneira automatizada, gerando um gradiente desnaturante misturando volumes constantes de proteína formulada com tampão de formulação e tampão de formulação contendo ureia. Resumidamente, a proteína formulada foi diluída para 0,33 mg/mL em tampão de formulação. Para uma dada formulação, também foi preparado um segundo tampão de formulação contendo 10M de ureia. Devido a problemas de solubilidade, foram preparadas soluções de ureia 9M para formulações contendo sacarose e sorbitol. Após um tempo de incubação uniforme (- 30 minutos), a fluorescência intrínseca da proteína (isto é, fluorescência do triptofano) é medida para cada ponto de dados, em que o desdobramento químico da proteína resulta na exposição de triptofanos enterrados ao solvente com um desvio vermelho associado na fluorescência sinal. Para cada formulação, foram obtidos dados para um total de 24 concentrações de ureia (0-9,0 M para estoques de 10 M de ureia e 0-8,1 M para estoques de 9 M de ureia), e a razão Abs350/Abs330 foi usada para subtração da linha de base de alterações de fluorescência de fundo, e mínimos quadrados não linear ajustado aos dados de transição de desdobramento foi empregado usando um modelo de 2 ou 3 estados.

[00187] A viscosidade das formulações foi determinada usando um viscosímetro de esfera rolante ou um reômetro. Todas as medidas de viscosidade foram realizadas a 25ºC com uma taxa de cisalhamento na faixa de 0,5 s' a 1000 s!. As medidas da esfera rolante foram realizadas usando um viscosímetro Anton Paar AMVn. Para medições de viscosidade de esfera rolante, o tempo que uma esfera de ouro leva para percorrer uma distância em um capilar enchido com a amostra é medido após inclinar o capilar para um ângulo predefinido (80 graus). Os capilares foram inclinados um total de três vezes e os resultados foram calculados para determinar a viscosidade dinâmica final, um valor que não depende da densidade da amostra. Para medições de esferas rolantes, o capilar foi primeiramente limpo com água deionizada e metanol. A calibração do instrumento/capilar foi confirmada pela medição dos padrões de viscosidade Brookfield de 10 cP, 50cP e/ou 100 cP. O capilar foi limpo novamente com água deionizada e metanol antes e entre cada medição da amostra.

[00188] As medições de viscosidade baseadas em reômetro foram realizadas usando um reômetro DV-III programável ultra que foi calibrado com o fluido padrão de viscosidade de brookfield nº 10 e nº 50. 0,5 mL de cada amostra foram medidos em várias velocidades do fuso (taxas de cisalhamento). Amostras exibindo leituras de viscosidade (cP) com <10% de RSD para todas as taxas de cisalhamento foram consideradas newtonianas nessa faixa, enquanto amostras com viscosidade dependente da taxa de cisalhamento foram consideradas não newtonianas.

[00189] As medições de densidade foram realizadas usando um densitômetro Anton Paar DMA 4500M. Resumidamente, o instrumento foi lavado com água deionizada várias vezes seguida de metanol. O instrumento foi calibrado para o ar e a água antes de medir a densidade da água como amostra. O instrumento foi novamente lavado com água e metanol e uma única medição de amostra foi realizada em -175 mg/mL de material agregado de várias formulações. O valor relatado foi usado como uma aproximação de densidade razoável para formulações de OMS646 de alta concentração para serem usadas em medições de conteúdo gravimétrico.

[00190] As medidas de osmolalidade foram realizadas usando um osmômetro de depressão no ponto de congelamento (Osmômetro Multi- Osmette, Precision Systems modelo 2430), que mede a diminuição no ponto de congelamento de uma solução à medida que a concentração de soluto aumenta.

[00191] Um sistema de contagem de partículas líquidas (Hach Modelo 9703, Modelo de sensor: HRLD-150) foi utilizado para determinar o tamanho e a abundância de partículas em amostras de formulações de OMS646. Os dados da amostra foram obtidos usando uma única extração de 500 uL da amostra (200 uL de volume tara). Resumidamente, o instrumento foi aquecido por — 30 minutos e a seringa (1 mL) e o sistema foram lavados com água deionizada por pelo menos 10 ciclos antes do uso. À adequação do ambiente foi testada mostrando que 25 mL de água deionizada não continham mais do que 25 partículas com tamanho > 10 um. A adequação do sistema foi confirmada através da análise de uma única extração de 500 uL de padrões de 2,5, 10 e 15 uM usando tamanhos de canal apropriados. Se as contagens cumulativas/mL detectadas estiverem dentro das especificações fornecidas para o padrão, então o sistema será considerado adequado para o teste da amostra. Antes da primeira medição da amostra, o sistema foi lavado uma vez com solução salina tamponada com fosfato 1x (PBS) para garantir que as amostras não precipitassem em contato com água deionizada. As amostras foram analisadas usando uma única extração de 500 uL, e contagens cumulativas/mL para canais de 2 um, 5 um, 10 um e 25 um foram determinadas para o número inteiro mais próximo.

[00192] A cromatografia de exclusão por tamanho (SEC) foi usada para avaliar a quantidade de agregados e produtos de degradação presentes nas formulações de OMS646. Resumidamente, um sistema Agilent 1100 HPLC foi equipado com uma coluna SEC G3000SWxl (Tosoh, 7,8 x 300 mm, tamanho de partícula de 5 um). As amostras da formulação OMS646 foram diluídas para 2,5 mg/mL na fase móvel de SEC (fosfato de potássio 140 mM, cloreto de potássio 75 mM, pH 7,0) e 20 uL da amostra foram injetados na coluna de HPLC. O sistema foi executado usando uma vazão de 0,4 mL/min, e a proteína eluída foi detectada por absorção a 280 nm (largura de banda 4 nm) sem correção de referência. Para avaliar a adequação do sistema, em todas as amostras foi realizado procedimento de cromatografia por faixas por injeções de branco da fase móvel e de padrão da filtração em gel e o material de referência foi injetado em duplicata no início da sequência. Foram determinadas as porcentagens de abundância para espécies de alto peso molecular (HMW) e de baixo peso molecular (LMW) total e individual, além da porcentagem de monômero e área total do pico integrado.

[00193] A análise por eletroforese em gel capilar SDS reduzido (SDS- CE) foi realizada com um sistema de eletroforese capilar Beckman Coulter PA 800 Plus e módulo de detecção PDA, usando um Kit de Análise SDS- MW. As amostras e a referência foram primeiro diluídas para 1,0 mg/mL em tampão de amostra de SDS-MW. A 95 uL desta solução de trabalho foram adicionados 5 uL de B-mercaptoetanol e 2 uL de Padrão Interno (10 kDa). Todas as amostras foram centrifugadas a 300 x g por | minuto, aquecidas a 70 + 2ºC por - 10 minutos e transferidas para um frasco de PCR e mantidas a

25ºC até a análise. As separações foram realizadas aplicando 15 kV (polaridade reversa) através do capilar por 30 minutos e aplicando uma pressão de 137,89 KPa (20,0 psi) na entrada e na saída. Os dados foram adquiridos a 220 nm com uma taxa de coleta de 4 Hz. A referência (OMS646 não processada) foi injetada duas vezes no início de cada sequência. Percentual de LC, HC e IgG foram relatados.

[00194] As análises de eletroforese em gel capilar SDS não reduzido foram realizadas como descrito para CE-SDS reduzido, com exceção de que a iodoacetamida 250 mM recém-preparada foi usada no lugar do agente redutor e as separações foram realizadas por 35 minutos. Área total do eletroferograma e % de IgG foram relatados.

[00195] Uma preparação purificada de anticorpo OMS646 (102 mg/mL) foi gerada usando métodos recombinantes como descrito em WO?2012/151481, que é aqui incorporado aqui por referência. Resumidamente descrito, o anticorpo OMS646 foi gerado em células CHO contendo construtos de expressão que codificam os polipeptídeos de cadeia pesada e de cadeia leve de OMS646 e purificado usando técnicas padrão.

1. Comparação de sistemas de tamponamento candidatos: Métodos:

[00196] Nos estudos de pré-formulação, a estabilidade do anticorpo inibidor de MASP-2 OMS646 foi avaliada inicialmente contra um painel de tampões candidatos, incluindo aqueles comumente usados na formulação de anticorpos terapêuticos (citrato, histidina, fosfato), além de mais tampões não convencionais (acetato, succinato) para cobrir uma ampla faixa de pH (pH 4,0 - pH 8,0). Para este estudo, a proteína foi trocada em tampões de succinato 20 mM (pH 4,0, 5,0 e 5,5), acetato (pH 4,0, 5,0 e 5,5), citrato (pH 5,0, 6,0 e 7,0), histidina (pH 6,0 e 7,0) e fosfato (pH 6,0, 7,0 e 8,0) usando concentradores Amicon Ultra-4 (10 kxDa MWCO). Uma preparação purificada de anticorpo OMS646 (102 mg/mL em acetato de sódio 20 mM, 50 mg/mL de sorbitol, pH

5,0) foi diluída para -1 mg/mL em cada uma das soluções de formulação e volumes de 4,0 mL foram colocados em concentradores pré-rinsados com o tampão apropriado. Cada unidade foi centrifugada para - 1 mL a 3200 x g. Esse processo foi repetido por um total de três rodadas de troca de tampão. Durante a rodada final de concentração, a proteína foi superconcentrada para <1 mL. O volume aproximado e o tempo de centrifugação de cada solução foram registrados após cada ciclo.

[00197] Resultados: No geral, os dados gerados para os cinco tipos de tampão foram comparáveis em relação à taxa de troca de tampão, recuperação do teor de proteínas, calorimetria diferencial de varredura (DSC), dispersão dinâmica da luz (DLS) e estabilidade química (dados não mostrados). O acetato, o citrato e a histidina foram selecionados para avaliação posterior com base nas propriedades térmicas e conformacionais ideias aparentes gerais do OMSG646 na faixa de pH de 5,5 a 6,0. O acetato foi selecionado sobre o succinato a pH 5,5 devido principalmente à estabilidade térmica superior, enquanto a histidina e o citrato foram selecionados sobre o fosfato a pH 6,0 com base nos dados da DLS.

2. Triagem do excipiente

[00198] A estabilidade do OMS646 foi avaliada na presença de vários excipientes com propriedades estabilizadoras de anticorpos relatadas, usando sistemas de tamponamento identificados durante a triagem de tampão de linha de base (acetato 20 mM, pH 5,5; citrato, pH 6,0 e histidina, pH 6,0). Para este estudo, o OMS646 foi submetido à troca de tampão em cada tampão candidato contendo NaCl 150 mM, sorbitol 250 mM, sacarose 250 mM, L- arginina 150 mM, L-arginina 150 mM, L-glutamato 150 mM ou L-prolina 250 mM usando Amicon Ultra-4 (10 kKDa MWCO). A preparação da amostra foi realizada como descrito na comparação do sistema tampão, em que a concentração de proteína alvo era de 2,0 mg/mL. Resultados:

[00199] No que diz respeito às recuperações de proteínas, as recuperações estimadas de proteínas variaram de -72-106%, o que representou uma melhora modesta sobre as recuperações na ausência de excipiente. O tampão histidina parecia ser preferido para a maioria dos excipientes, e acetato e citrato mostraram resultados mistos.

[00200] Com relação à DSC, observou-se que o tampão citrato resultou em estabilização térmica do OMS646 para todos os excipientes testados. À FIGURA 2A ilustra graficamente os resultados da análise de dispersão de luz dinâmica (DLS) para o rastreamento de excipientes da formulação OMS646, mostrando o diâmetro geral das partículas observado para formulações contendo vários excipientes candidatos. A FIGURA 2B ilustra graficamente os resultados para a análise DLS para a triagem de excipientes da formulação OMS646, mostrando a polidispersividade geral observada para formulações contendo vários excipientes candidatos. Como mostrado nas FIGURAS 2A e 2B, em relação à DLS, a maioria das formulações produziu resultados comparáveis. No entanto, para todos os sistemas de tamponamento, a sacarose foi associada à polidispersividade elevada e aos maiores diâmetros gerais e monoméricos. Após a sacarose, o sorbitol foi o menos preferido pela DLS, mostrando tamanhos médios maiores e polidispersividade aumentada. As restantes formulações foram geralmente comparáveis por DLS com diâmetros de monômeros de 10-12 nm (ver FIGURA 2A) e polidispersividade <20% indicando populações monodispersas (ver FIGURA 2B). Com relação à estabilidade contra a desnaturação química, avaliada pelo Sistema de Desnaturação Química Isotérmica AVIA, foi observada claramente uma tendência de tampão/pH em que as formulações de acetato de pH 5,5 desnaturaram em concentrações de ureia -0,5 M inferior às formulações de citrato e histidina a pH 6,0 para todos os excipientes testados. Citrato e histidina foram comparáveis para todos os excipientes.

[00201] Em resumo, os dados apoiaram o citrato a aproximadamente um pH de 6,0 como a combinação tampão/pH ideal, que foi levada adiante em estudos de triagem de solubilidade. Dado os dados ruins de DLS observados com todos os tipos de tampão, a sacarose foi excluída de uma análise mais aprofundada.

3. Triagem de solubilidade/viscosidade Primeiro estudo de viscosidade: Métodos:

[00202] Para estabelecer condições para a máxima solubilidade do OMS646, foram utilizados citrato 20 mM (pH 5,0 e 6,0) e succinato 20 mM (pH 4,0) na presença de várias combinações isotônicas de NaCl, sorbitol, arginina, glutamato e prolina. O OMS646 foi submetido à troca de tampão usando unidades de concentrador Amicon 15 em vários ciclos e no ciclo final o volume de cada solução foi reduzido para -1 mL. As taxas de troca de tampão para todas as formulações e ciclos de troca foram registradas e analisadas. Após a troca de tampão, os teores de proteínas foram medidos, a porcentagem de recuperação foi calculada e as amostras foram armazenadas durante a noite a 5ºC. Durante o armazenamento, observou-se que a formulação de succinato/glutamato precipitou e não foi mais avaliada. As formulações remanescentes foram adicionadas às unidades de concentrador Amicon 4 e concentradas até que uma concentração alvo de -200 mg/mL fosse atingida, ou até que a centrifugação não resultasse mais em redução de volume e/ou a viscosidade da amostra (via manipulação da amostra) fosse considerada incontrolável. Resultados:

[00203] Com relação às taxas de troca de tampão, as taxas de troca mais altas foram claramente observadas nas amostras de pH 4,0, com succinato/sorbitol mostrando as taxas de troca mais rápidas em geral. As taxas de troca em pH 5,0 e 6,0 eram comparáveis, onde formações contendo apenas excipientes de aminoácidos carregados apresentaram taxas mais altas do que outras formulações. A taxa de troca mais lenta foi observada para a formulação de citrato/sorbitol em pH 6,0. Esta formulação foi a amostra isolada com pH > 5,0 e um componente de excipiente não carregado. Sob a suposição de que a taxa de troca é um indicador alternativo para a autoassociação de OMS646, parece que as espécies carregadas são importantes para mitigar esse comportamento a um pH mais neutro. Com relação à DLS, todas as formulações de alta concentração apresentaram diâmetros gerais comparáveis de -12nm, com exceção do succinato/arginina pH 4,0, que mostrou uma distribuição de tamanho geral elevada a >18 nM.

[00204] As amostras submetidas à troca de tampão foram concentradas até as soluções se tornarem fisicamente inviáveis devido à alta viscosidade. Foram atingidas concentrações máximas em excesso de 225 mg/mL para ambas as formulações de pH 4,0. Para formulações com valores de pH mais altos, as concentrações máximas de proteína de OMS646 variaram de 160,5 a 207,6 mg/mL. A viscosidade para a maioria das formulações foi avaliada usando um viscosímetro de esfera rolante com uma taxa de cisalhamento entre 0,5 s' e 1000 s', como descrito acima. A FIGURA 3 ilustra graficamente os resultados da análise de viscosidade para a triagem de solubilidade de OMS646 em uma faixa de concentrações de proteínas em várias formulações, conforme medido em pH 5,0 e pH 6,0. Como mostrado na FIGURA 3, quando plotado contra a concentração de proteína, foi observado um aumento exponencial na viscosidade sobre as formulações, com a maior viscosidade registrada para citrato/arginina/glutamato pH 5,0 (161,1 cP para uma solução de 196,6 mg/mL). A pH 6,0 e uma concentração de proteína de OMS646 comparável, a formulação de citrato/sorbitol mostrou viscosidade consideravelmente mais alta do que a formulação de sorbitol/glutamato ou prolina/glutamato. A formulação de citrato/arginina/glutamato de pH 6,0 (95,3 mg/mL) exibiu aproximadamente metade da viscosidade (5,8 versus 9,3 cP) da amostra de citrato/NaCl de pH 6,0 (87,5 mg/mL) com maior teor de

84 /116 proteína, sugerindo uma importância de aminoácidos carregados sobre excipientes iônicos.

[00205] É importante notar que, para uma dada concentração (isto é, 125 mg/mL), a viscosidade varia drasticamente em função da formulação. À viscosidade é idealmente mantida abaixo —-25 cP para garantir um produto terapêutico subcutâneo capaz de ser dispensado a partir de, ou inserido em, uma seringa. Em algumas modalidades da formulação de OMS646, a viscosidade é mantida abaixo de cerca de 20 cP para permitir a entrega do produto terapêutico com um dispositivo de injeção e também para permitir vários tipos de bioprocessamento, como a filtração de fluxo tangencial. Segundo estudo de viscosidade

[00206] Em um esforço para reduzir a viscosidade da formulação de OMS646 e, assim, maximizar a concentração de OMS646 em uma dada formulação, um estudo adicional foi realizado. Com base nos resultados iniciais, foram selecionadas as formulações com maior probabilidade de produzir uma formulação de viscosidade reduzida em alta concentração, a saber: succinato/sorbitol de pH 4,0 e formulações citrato contendo glutamato e arginina a pH 6,0. Com base em estudos anteriores, os aminoácidos carregados foram associados a várias propriedades benéficas a pH neutro, incluindo aumento da taxa de troca de tampão, aumento da recuperação do processamento da amostra e viscosidade reduzida. O impacto de aminoácidos com uma cadeia lateral carregada positivamente (por exemplo, arginina) ou aminoácidos com uma cadeia lateral carregada negativamente (por exemplo, glutamato) foi avaliado em uma faixa de concentrações (50 mM a 150 mM) para medir a carga do excipiente e concentração na viscosidade. Finalmente, o CaCl; foi utilizado como um aditivo em soluções de citrato/glutamato isotônicas e hipertônicas devido às suas propriedades potenciais de redução da viscosidade, como descrito na Patente dos EUA Nº 7.390.786.

[00207] As amostras foram submetidas à troca de tampão e concentradas como descrito acima. Após a troca de tampão, o teor de proteínas de todas as formulações foi calculado. A exceção foi a formulação contendo glutamato 50 mM e CaCl, 50 mM, que precipitou após a troca de tampão e não foi mais avaliada. Provavelmente, isso se deve em parte à solubilidade limitada de citrato e cátions divalentes, como o Ca*. Resultados:

[00208] A FIGURA 4 ilustra graficamente a porcentagem de recuperação de proteínas após a troca de tampão para o estudo de solubilidade/viscosidade de OMS646 com várias formulações candidatas. Como mostrado na FIGURA 4, foi observada uma tendência para aumentar a recuperação com o aumento da concentração de arginina, em que a formulação de arginina 150 mM mostrou a maior recuperação de proteína em 85%. As recuperações para as demais formulações foram comparáveis e variaram de 64 a 75%. As amostras foram então concentradas como descrito acima até que se tornassem manualmente inviáveis. Todas as formulações foram avaliadas quanto à viscosidade como descrito acima e os resultados são mostrados abaixo na TABELA 3. TABELA 3: Resumo dos dados de viscosidade dos estudos de pré- formulação Amostra |Tampão [Excipiente aditivo b IConc. Viscosidade mg/mL) KcP) 100 cP padrão (97,2 cP reivindicação) Fo bb | 50 cP padrão (49,2 reivindicação) BI Succinato 20 mM Sorbitol250mM — | E boas 1096 2 kimao20mM — arginina 150mM | bo 82 63 —— lCitrato20mM — arginina 100mM =) bo h7o8 hos 54 —kirato20mM JargininaS0mM | po 583 f4o01 65 irao 20mM — fGlwtamato 150mM | ko hfsos 6 Citrato 20mM — ÍGlutamato 100 mM | bo os 4,6 567 — kitato20mM —fGlutamatoSOmM | ko 0527 370 Es —— kCitrato20mM — lGlutamato 150mM CachkSomM lo —— Pons

[00209] Como mostrado acima na TABELA 3, as viscosidades para todas as formulações foram >70 cP e, apesar da ampla faixa de concentrações finais, foram observadas tendências claras. A partir desses dados preliminares, ficou evidente que o aumento da concentração de arginina ou glutamato levou a uma viscosidade reduzida. A viscosidade da formulação de succinato/sorbitol parecia comparável às formulações de aminoácidos 150 mM. A inclusão de CaCl; mostrou uma redução na viscosidade, onde a viscosidade para esta formulação foi comparável a amostras com 10% menor de teor de proteína.

[00210] Quatro formulações (S1, S2, S5 e S8 mostradas na Tabela 3) foram selecionadas para uma análise de viscosidade mais detalhada, onde as amostras limpas recuperadas foram diluídas incrementalmente em tampão de formulação de 25 mg/mL A FIGURA 5 ilustra graficamente a viscosidade (conforme determinado pelo ajuste exponencial dos dados de viscosidade) versus a concentração de proteína para o estudo de solubilidade/viscosidade de OMS646 com várias formulações candidatas. O ajuste exponencial dos dados de viscosidade foi determinado de acordo com os métodos descritos em Connolly B. et al., Biophysical Journal vol 103: 69-78, 2012. Como mostrado na FIGURA 5, as formulações de glutamato e arginina 150 mM mostraram curvas quase idênticas que exibiram a maior viscosidade por unidade de concentração - uma viscosidade de 25 cP igual a -150 mg/mL de OMS646. À formulação de succinato e sorbitol teve um desempenho um pouco melhor, com 25 cP correspondendo a um teor de OMS646 estimado de -160 mg/mL. A menor viscosidade geral foi observada na formulação contendo CaCl,, onde o teor estimado em 25 cP foi de -175 mg/mL. O resultado mais intrigante desta análise foi que a formulação hipertônica, incluindo glutamato 150 mM e CaCl,; 50 mM, reduziu drasticamente a viscosidade da amostra. Dado o desejo da formulação líquida de concentração mais alta possível, a aplicação de cátions divalentes e hipertonicidade na redução da viscosidade foi levada adiante para um estudo de viscosidade adicional. Terceiro estudo de viscosidade

[00211] Com base nos resultados dos estudos de viscosidade inicial descritos acima, foi realizado um estudo adicional para determinar se as

87 /116 propriedades de redução de viscosidade aparente de CaCl, estavam relacionadas ao Ca?** divalente ou hipertonicidade. Uma mudança no excipiente predominante de glutamato para arginina foi realizada devido às melhores taxas de troca de tampão observadas para formações contendo arginina. A incorporação de histidina foi realizada devido ao potencial de quelação de Ca?** pelo citrato, o que poderia levar à precipitação. Um subconjunto de amostras também avaliou o impacto do pH e do tensoativo na viscosidade da amostra, bem como o impacto do CaCl, e da hipertonicidade na formulação de succinato/sorbitol de pH 4,0. As amostras foram submetidas à troca de tampão e concentradas como descrito nos estudos de viscosidade anteriores. A viscosidade para todas as formulações foi medida usando um instrumento de esfera rolante como descrito acima. Os dados de viscosidade foram normalizados para uma concentração de proteína de amostra de 170 mg/mL. Isto foi realizado calculando primeiro uma viscosidade teórica a partir do teor de proteína medido usando a regressão exponencial para dados de viscosidade de viscosidade/solubilidade previamente calculados a partir da formulação de citrato/arginina de pH 6,0 (y=0,0917º0036!*) A viscosidade normalizada foi calculada multiplicando a viscosidade teórica para citrato/arginina pH 6,0 a 170 mg/ml (424 cP) pela viscosidade medida/viscosidade teórica (consulte a Tabela 4, nota de rodapé b). As viscosidades normalizadas resultantes revelam tendências muito mais claras, suavizando a variabilidade associada à concentração (consulte a TABELA 4 e FIGURA 6).

TABELA 4. Resumo dos dados de viscosidade para formulações de OMS646 (170 mg/mL)

EEE dao i — pç Viscosi- Norm. — dade — hprox.a 170 mg/ml for- — Tampão/pH Excipiente [Aditivo >” [dade lédias Teórica (cP)" ulação: cP) mg/mL) |(cP)* PE TERES e Er mM 112,5mM bsmM

112,5mM P5mM |% 150 mM 150mM —bsmM P ua fp pt 200 mM 225 mM Eae EEE 112,5mM P5mM 6B o iArginina — caCk h,o5 BIO f1700 fo4 Bill , 150 mM 150mM —P5mM —) Esse EE MM 50 mM

ESSES AAA 112,5mM P5mM 112,5mM P5mM 6 nu “uq nÁrginina — [CaCh B41 h6e71 B82 B7,9 Doors me po E , 150 mM pau Ef E 200 mM

EE EEE E 225 mM Tea EEE 150mM —50mM sms E EEE 150 mM Succinato loz. Domo AM 50 mM |% Coorso SN E E , mM 150 mM se EEE *A viscosidade teórica foi calculada usando a regressão para curva de viscosidade citrato/arginina de pH 6,0 do teor medido (y=0,0917º0.0361x) PViscosidade teórica de 170 mg/mL de citrato/arginina de pH 6,0 (42,4 cP)* (viscosidade medida/viscosidade teórica)

[00212] A FIGURA 6 ilustra graficamente os dados de viscosidade normalizada com a concentração para o estudo de viscosidade com várias formulações de OMS646 candidatas, com base nos dados da TABELA 4. Como mostrado na FIGURA 6 e TABELA 4, para formulações de citrato e histidina, o exame do conjunto de dados normalizados mostra claramente que a hipertonicidade leva a uma viscosidade reduzida da amostra, em que a maioria do impacto é observada com apenas aumentos modestos na

89 /116 concentração de arginina. Por exemplo, a viscosidade normalizada da formulação 12 (histidina 20 mM com arginina 150 mM) é 57,7 cP, em comparação com viscosidades de 22,3 e 22,0 cP para formulações de histidina contendo arginina 200 e 225 mM, respectivamente. Uma tendência semelhante foi observada para formulações de citrato/arginina. Não houve benefício óbvio da inclusão de CaCl.. Em vez disso, foi surpreendente descobrir que, na ausência de CaCl,, baixas viscosidades (por exemplo, menos de 25 cP) foram alcançadas com as formulações de citrato/arginina e histidina/arginina com uma concentração de arginina de 200 mM ou maior. À inclusão de 0,05% de PS-80 resultou em redução substancial da viscosidade em duas das três formulações avaliadas em pH > 5,0. Finalmente, as viscosidades a pH 5,0 pareciam um pouco menores do que as formulações comparáveis em pH 6,0.

[00213] Em vista dos resultados obtidos nos estudos de viscosidade, a arginina hipertônica, a presença ou ausência de cátions divalentes e as formulações de succinato/sorbitol de pH 4,0 foram levadas adiante em estudos de triagem de tensoativos para avaliar adicionalmente o impacto na conformação e estabilidade física química do OMS646.

4. Triagem de tensoativos

[00214] O impacto do tensoativo na estabilidade do OMS646 foi avaliado usando formulações candidatas identificadas em estudos anteriores aqui descritos. Para estudos de triagem de tensoativos, seis formulações foram analisadas da seguinte forma: citrato 20 mM, arginina 200 mM em pH 5,0 citrato 20 mM, arginina 200 mM em pH 6,0; succinato 20 mM, sorbitol 250 mM em pH 4,0; histidina 20 mM, arginina 200 mM em pH 6,0; histidina 20 mM, arginina 75 MM/CaCl; 50 mM em pH 6,0; histidina 20 mM, arginina 75 MM/CaCl,; 50 mM em pH 6,0.

[00215] Cada uma das seis formulações mostradas acima foi avaliada sem tensoativo ou na presença de 0,01% de PS-80 para um total de doze condições de formulação únicas. Para cada formulação, OMS646 foi trocado em soluções de troca de tampão (sem PS-80), concentrado, o teor foi medido e as amostras foram normalizadas para 175 mg/mL de proteína. Cada formulação foi então dividida e o PS-80 foi adicionado às amostras apropriadas para uma concentração final de 0,01% (p/v).

[00216] As amostras formuladas foram submetidas a estresse mecânico por agitação e realização de ciclos de congelamento/descongelamento. Para ambos os tipos de estresse, 0,5 mL da amostra foi transferido para quatro frascos de vidro de borossilicato tipo 1 (2,0 mL) e selado com rolhas FluroTecO&. Para estresse por agitação, as amostras foram colocadas em um agitador de microplacas a 600 rpm por —60 horas à temperatura ambiente. As amostras de controle de agitação foram mantidas próximas ao agitador durante o estresse por agitação. Para realizar ciclos de congelamento/descongelamento, as amostras foram congeladas a -80ºC por >60 minutos e depois descongeladas à temperatura ambiente, por um total de ciclos de congelamento e descongelamento. Após o estresse, as amostras foram armazenadas de 2 a 8ºC até a análise. A amostra restante foi mantida entre 2 e 8ºC como controle não estressado. Aparência, medições de A280, DLS e SEC foram realizadas para avaliar o impacto do tensoativo na agregação e estabilidade do OMS646. Resultados:

[00217] Após o estresse das seis formulações de OMS646, nenhuma amostra mostrou evidência de material particulado relacionado ao produto. O teor de proteína foi essencialmente constante para todas as amostras de uma dada formulação. A análise dos dados de DLS para amostras de congelamento/descongelamento e agitação revelou apenas diferenças sutis entre formulações e tipos de estresse, sem tendências gerais claras observadas em relação à inclusão do PS-80. A única exceção foi a formulação de succinato/sorbitol de pH 4,0, na qual a inclusão do PS-80 levou a uma polidispersividade geral alta (isto é, multimodal) para amostras de congelamento/descongelamento e controle a 5ºC. Esta formulação ácida também mostrou evidência de agregação/autoassociação por DLS na ausência de PS-80 após agitação.

[00218] A análise dos dados de SEC foi realizada para avaliar quaisquer produtos de agregação e/ou degradação que surgissem durante o estresse da amostra. Os resultados estão resumidos nas TABELAS 5A-5D. TABELA 5A: Resumo dos dados de SEC para triagem de tensoativos das formulações de OMS646 (2-8ºC) Formulação Tampão Excipiente — Aditivo pH /PS-80 HMW totalMonômero MW I%) médio édio total (9%) (9%) médio |%) (Amostra de referência não processada média 3,7 b63 — p | h kitrato —20Arginina 200 E bo hbs3 E BM mm por Bi 69 E itrato — 20/Arginina 200) E B2 bs F | E hM M por B3 br [E | istidina 20/Arginina 200) sort B3 hbs7 Fr || EB M por Ba be E P —— uceinato 20fSorbitol 250 po M col B2 Bb —Histidina 20Arginint 75CaCk 5060 | —=B3 —bs7 PF | M ! 0.01 BA pbe6 FF || istidina 20Arginina 7550mM of Ba hbs6 | | mM MgCl boi Bs bs | TABELA 5B: Resumo dos dados de SEC para triagem de tensoativos das formulações de OMS646 (congelamento/descongelamento) [Formulação!Tampão — Excipiente JAditivo pH PS-80 [HMW totalMonômero — MW %) — médio médio total 1%) 16) médio (9%) Amostra de referência não processada média B7 p6,3 E 1 itrato — 20/Arginina 200 p.o E Bl P6,9 EF b M mM bol B2 D6,8 E itrato — 20/Arginina 200) sort B3 bs7 F || E hM mM por B3 pe7 Ft istidina 20/Arginina 200 sort B3 bs7 F || BM O M por sa be E P — uceinato 20fSorbitol 250) po B mM col B2 pbe6 b2 | bb ——Histidina 20Arginint 75CaCk 5060 | Ba —bs6 | | M mM mM boi Ba bs | nu Histidina 20Arginina 7550mM |60 | BS pP6,6 EFE RP PM mM MgCh bor Bs bs | | TABELA 5C: Resumo dos dados de SEC para triagem de tensoativos das formulações de OMS646 (25ºC) Formula [Tampão — EExcipiente [Aditivo pH PS80 HMW totalMonômero LMW total ção (%) — médio médio — médio o Jo) o Amostra de referência não processada média B7 b63 “E 1 itrato — 20/Arginina 200 Ko Ss O O PR mM mM por B2 bs8 FF | 6 itrato — 20/Arginina 200f o E BB br FE | : mM mM 01 Ba bs6 FE Histidina 20Arginina 200- o E BB br FE | 6 mM mM por Ba bs | || uccinato 20Sorbitol 250 o B mM mM por B3 b — Histidina 20Arginina 75CaCk 5060 | Ba ——bs6 | | ho — mM mM mM por B5 bs FF || 1 — Aistidina 20Arginina 7550mM fo | Bs bs | | RP PM mM MgCl pbor B5 bs FE | TABELA 5D: Resumo dos dados de SEC para triagem de tensoativos das formulações de OMS646 (agitação) 'ormula (Tampão xcipiente JAditivo pH |PS80HMW totalMonômero LMW total ção %) — médio nédio édio (%) |%) 1%) |Amostra de referência não processada média B7 b63 “EF lh Jitrato 20Arginina 200 o E Bbk bo EF M ol B2 ps8 FF | itrato — 20/Arginina 200) so EF B3 bs7 tr | EB | M por Ba pbe6 FE | istidina 20/Arginina 200) so EF B3 bs7 tr | E M Dor Ba TR ? — Suceinato 20Sorbitol 250 p BO M por B3 bb —Aistidina 20Arginina 75CaCL — 506 ho À h 0.01 Bs pes FE | istidina 20Arginina 7550mM bo | Ba bs | | 2 mM gClo boi B6 bs F

[00219] Como mostrado acima nas TABELAS 5A-5D, no geral, os dados de SEC indicam que a molécula de OMS646 é geralmente insensível à inclusão de PS-80 e ao estresse por congelamento/descongelamento (TABELA 5B) e agitação (TABELA 5D), independentemente do tensoativo. Observou-se que as formulações de OMS646 com pior desempenho foram aquelas que continham aditivos catiônicos divalentes (CaCl,; e MgCl)), em que o material de alto peso molecular (HMW) para essas amostras foi claramente elevado em relação a outras amostras e foram observados os níveis mais baixos de monômero.

5. Análise de estabilidade sob condições estressadas e não estressadas por 28 dias

[00220] Após limitar as combinações potenciais de tampão, excipiente e tampão através dos estudos de pré-formulação descritos acima, os tampões de citrato e histidina foram formulados usando arginina 200 mM no intervalo de pH 5,5 - 6,5 em altas concentrações de 175 mg/mL e 200 mg/mL de OMS646 para identificar a formulação mais adequada sob condições estressadas (40ºC) e não estressadas (5ºC). A arginina foi incluída em um nível hipertônico (200 mM) devido às propriedades de redução da viscosidade nessa concentração elevada. Com base na otimização numérica estatística dos dados de pré-formulação, a formulação de OMS646 mais adequada foi determinada como sendo 20 mM de citrato e 200 mM de arginina. Um painel de amostras também foi preparado para avaliar o impacto de 0,01% de PS-80 nas formulações de citrato e histidina.

[00221] A troca de tampão foi realizada como descrito acima, as amostras foram concentradas e diluídas para atingir as concentrações alvo de 175 ou 200 mg/mL de OMS646. Durante esta normalização final, o PS-80 foi adicionado a 0,01% para as formulações apropriadas. As formulações foram filtradas estéreis usando concentradores estéreis Millipore Ultrafree-CL GV 0,22 uM. Um frasco de cada formulação foi colocado a 5ºC e um a 40ºC por um período de 28 dias de incubação. As amostras foram analisadas a To e por 28 dias em relação à concentração, aparência, turbidez, osmolalidade, pH, DLS, DSC e viscosidade. Após 28 dias de incubação, observou-se que as formulações de succinato/sorbitol de OMS646 de 175 e 200 mg/mL armazenadas a 40ºC desenvolveram consistência semelhante a gel e, portanto, não foram analisadas. Resultados:

[00222] Com relação à análise de estabilidade, os valores de pH permaneceram estáveis ao longo da duração do estudo, independentemente da formulação e condição de armazenamento. Após 28 dias, as análises de SEC e SDS-CE indicaram aumentos substanciais no teor de LMW para as formulações ácidas de pH 5,0 e pH 4,0, eliminando essas formulações de uma consideração mais aprofundada. Para o citrato/arginina e histidina/arginina de pH 6,0 formulados com 0,01% de PS-80, a maioria das respostas foi quase indistinguível das amostras livres de tensoativos associados. SEC, no entanto, mostrou reduções no teor de HMW de 0,2% - 0,6% em relação às formulações de homólogos livres de tensoativo. Juntamente com as propriedades aparentes de redução da viscosidade do tensoativo, o polissorbato-80 (PS-80) foi escolhido para ser incluído em estudos de formulação mais aprofundados.

[00223] A concentração e viscosidade de um total de 10 formulações foram testadas após 28 dias a 5ºC. Os resultados representativos são mostrados na TABELA 6. TABELA 6. Viscosidade das formulações após 28 dias a 5ºC. Amostra (Formulação Concentração |Visco- 28 dias a 5ºCsidade (mg/mL) cP) 1 itrato 20 mM, arginina 200 mM, pH 6,0, 175 mg/ml del53,4 10,6 OMS646 P Tistidina 20 mM, arginina 200 mM, pH 6,0, 175 mg/mL dell51,3 12,7 MS646 B itrato 20 mM, arginina 200 mM, pH 6,0, 200 mg/ml defizo,5 b7,4 MS646 a |Histidina 20 mM, arginina 200 mM, pH 6,0, 200 mg/mL dell84,2 18,1 OMS646 6 itrato 20 mM, arginina 200 mM, 0,01% de PS-80, pH 6,0, 159,2 OMS646 de 175 mg/mL |Histidina 20 mM, arginina 200 mM, 0,01% PS-80, pH 6,0, 175/156,0 17,8 Img/mL de OMS646 7 itrato 20 mM, arginina 200 mM, pH 5,0, 175 mg/mL dei43,2 b,8 MS646 B |Histidina 20 mM, arginina 200 mM, pH 5,0, 200 mg/mL def182,4 15,9 OMS646 bp uccinato 20 mM, sorbitol 250 mM, pH 4,0, 175 mg/ml del150,6 14,5 OMS646 jo — Succinato 20 MM, sorbitol 250 mM, pH 4,0, 200 mg/mL 184,3

[00224] Como mostrado acima na Tabela 6, as formulações de concentração mais alta exibiram viscosidades mais altas. De considerável interesse foi a observação de que a inclusão do PS-80 levou à redução da viscosidade para as formulações de citrato (10,6 versus 9,0 cP) e histidina (12,7 versus 7,8 cP), além de preservar a recuperação de proteínas. Tais reduções na viscosidade após a inclusão do PS-80 são benéficas, permitindo uma maior concentração de OMS646, mantendo uma baixa viscosidade considerada capaz de ser dispensada a partir de, ou inserido em, uma seringa em um ambiente clínico e também adequada para uso em um autoinjetor e outros dispositivos de injeção. Sumário dos resultados

[00225] O objetivo principal desses estudos foi identificar componentes da formulação que resultassem em estabilidade química, física e estrutural ideal do anticorpo OMS646 de alta concentração em formulações líquidas. Além disso, vários estudos específicos de viscosidade foram realizados com o objetivo de obter uma formulação final com a concentração máxima de anticorpo OMS646 que pudesse ser viavelmente entregue por administração subcutânea.

[00226] Vários tipos de tampões, condições de pH, excipientes e concentrações de tensoativos foram avaliados de maneira iterativa ao longo dos estudos direcionados à avaliação de estudos de sistemas de tampão, excipientes, solubilidade, viscosidade e triagem de tensoativos. O estudo inicial de avaliação de tampão de linha de base testou cinco tipos diferentes de tampão (acetato, citrato, succinato, histidina e fosfato) na faixa de pH 4,0 - 8,0. A análise por DSC, DLS e o sistema de desnaturação química AVIA indicaram que condições mais ácidas e básicas eram menos adequadas para a estabilidade do anticorpo OMS646. Com base nos resultados, os sistemas de tampão de acetato, citrato e histidina foram selecionados para avaliação posterior.

[00227] A triagem de excipientes avaliou o efeito de NaCl, L-arginina, L-glutamato, L-prolina, sacarose e sorbitol na estabilidade do anticorpo

96 / 116 OMS646 em cada um dos três sistemas tampão escolhidos. O citrato (pH 6,0) foi levado adiante isoladamente para outros estudos para maximizar o espaço do projeto para avaliação adicional do excipiente. Apenas a sacarose foi eliminada como um excipiente potencial devido a dados de dispersão de luz insuficientes. A triagem de solubilidade avaliou a capacidade de formulações de citrato (pH 5,0 e pH 6,0) contendo combinações isotônicas de NaCl, sorbitol, arginina, glutamato e prolina para suportar altas concentrações de solução de anticorpo de OMS646. Todas as formulações foram concentradas em excesso de 150 mg/mL de OMS646 sem evidência de agregação. As formulações de succinato/arginina e succinato/glutamato, no entanto, mostraram evidências de precipitação/agregação após armazenamento a curto prazo e não foram mais avaliadas. A análise biofísica das formulações de citrato mostrou apenas pequenas diferenças entre os excipientes a pH 6,0 e apenas uma redução modesta do teor de HMW nas formulações de homólogos de pH 5,0.

[00228] Dados interessantes vieram de medições de viscosidade deste subconjunto de amostras, o que sugeriu que citrato/glutamato e succinato/sorbitol deram as viscosidades mais baixas. Dadas as estabilidades biofísicas semelhantes observadas entre os excipientes e a importância de obter uma formulação com o máximo teor de OMS646, foram realizados estudos adicionais de viscosidade. Esses estudos de viscosidade identificaram cátions divalentes e/ou hipertonicidade modesta como um fator significativo na redução da viscosidade das formulações de anticorpo OMS646 a um pH mais neutro. Tanto o citrato (pH 5,0 e 6,0) quanto a histidina (pH 6,0) foram avaliados na presença de arginina 200 mM. A histidina pH 6,0 também foi avaliada na presença de arginina 75 mM e CaCl; 50 mM ou MgCl; 50 mM. Finalmente, o succinato/sorbitol em pH 4,0 foi testado. Todas as combinações de tampão/excipiente foram testadas na ausência ou na presença de 0,01% de PS-80 para determinar se o tensoativo promoveu a estabilidade do anticorpo

OMS646 sob condições de agitação e estresse por congelamento/descongelamento. Todas as formulações pareceram estáveis contra os estresses ambientais aplicados, independentemente do tensoativo. Uma observação marcante foi o aumento no teor de HMWO de MS646 observado pela SEC para formulações contendo cátions divalentes. Portanto, CaCl; e MgCl, foram eliminados de uma consideração mais aprofundada como excipientes. O succinato/sorbitol também mostrou pureza reduzida do anticorpo OMS646, o que foi atribuído principalmente a um aparente aumento nas impurezas de LMW. Embora as diferenças entre a formulação que contém e não contém 0,01% de PS-80 sejam pequenas, as amostras que contêm tensoativo parecem mostrar um teor de HMW (- 0,1%) modestamente aumentado em relação aos seus homólogos livres de tensoativo. EXEMPLO 3

[00229] Este exemplo descreve um estudo no qual três formulações candidatas de OMS646 de baixa viscosidade, altamente concentradas, identificadas com base nos estudos de pré-formulação descritos no Exemplo 2, foram comparadas em relação à seringabilidade. Antecedentes/Fundamentação:

[00230] O tempo e a força necessários para uma injeção manual (ou o tempo necessário para uma injeção usando um autoinjetor) são importantes e podem afetar a facilidade de uso do produto pelo usuário final e, portanto, a conformidade. A força necessária para a injeção de uma solução a uma dada taxa de injeção através de uma agulha de calibre e comprimento predeterminados é referida como “seringabilidade' (ver, por exemplo, Burckbuchler, V.; et al., Eur. J. Pharm. Biopharm. 76 (3), 351-356, 2010). No que diz respeito à seringabilidade para administração a um indivíduo humano, geralmente não se deseja exceder uma força de 25N (embora existam formulações comercializadas mais viscosas que essa). Uma agulha 27GA ou

98 /116 uma agulha 27GA de paredes finas são geralmente consideradas agulhas padrão para injeção subcutânea de anticorpos monoclonais. A agulha 27GA de paredes finas tem um ID aproximadamente igual a uma agulha 25GA (números G menores são diâmetros maiores).

[00231] O estudo a seguir foi realizado para determinar a seringabilidade de três formulações de OMS646 candidatas de baixa viscosidade e alta concentração. Métodos:

[00232] Com base nos estudos de pré-formulação descritos no Exemplo 2, as três seguintes formulações candidatas de OMS646 de alta concentração foram selecionadas e estudadas posteriormente, como mostrado na TABELA 7. Neste exemplo, as formulações foram preparadas usando cloridrato de arginina, polissorbato 80, se indicado, e citrato trissódico ou histidina, com o pH sendo ajustado para cerca de 5,8 a 6,0 usando ácido clorídrico. TABELA 7: Formulações de OMS646 candidatas de alta concentração proteína 1 Citrato 20 mM, arginina 200 mM, 185 mg/mL 187,1 10,01% de PS-80, pH 5,8 istidina 20 MM, Arginina 200 mM 185 mg/mL 188,2 10,01% de PS-80, pH 5,9 Osmolalidade e viscosidade de formulações candidatas de OMS646

[00233] A osmolalidade e viscosidade das três formulações candidatas geradas como mostrado na TABELA 7 foram determinadas usando métodos descritos no Exemplo 2. O comportamento do fluido da formulação foi considerado não-newtoniano se testado o % RSD for > 10 sobre as taxas de cisalhamento testadas. Os resultados são mostrados na Tabela 8. TABELA 8. Osmolalidade e Viscosidade Formulação [Tampão/Excipientes/Tensoativo/Conc. — JOsmolali- [Viscosidade [Fluido pH dade (cP) |Comporta- ImOsm/kg) ento ICitrato 20 mM, arginina 200 mM, [185 mg/mL 473 16,1 INewtoniano)| 10,01% de PS-80, pH 5,8

99 /116

M p.01% de PS-80, pH 5,9 pH 5,8

2. Seringabilidade das formulações de OMS646 candidatas Métodos:

[00234] A análise de seringabilidade das três formulações de OMS646 foi realizada com relação à carga média e carga máxima usando agulhas 27 GA (1,25), 25GA (1º) e 25GA de paredes finas (1º). As repetições em triplicata de cada formulação foram cada uma injetada uma vez. Calculou-se as médias dos resultados para as amostras de seringabilidade das repetições triplas. Resultados:

[00235] As três formulações mostradas na TABELA 7 (contendo OMS646 a 185 mg/mL) foram avaliadas quanto à sua seringabilidade usando agulhas 27GA (1,25”), 25GA de paredes finas (1º) e 25GA (1º). Os resultados relatados são a média de repetições em triplicata. Os resultados são mostrados na Tabela 9 e são ilustrados graficamente nas FIGURAS 7A e 7B. A FIGURA 7A ilustra graficamente a carga média (Ibf) de três formulações de OMS646 candidatas usando as agulhas de 27GA, 25GA e 25GA de paredes finas. A FIGURA 7B ilustra graficamente a carga máxima (Ibf) de três formulações de OMS646 candidatas usando agulhas de 27GA, 25GA e 25GA de paredes finas. TABELA 9. Seringabilidade das formulações de OMS646 candidatas de alta concentração Formulação — Condição ICarga Média JCarga Máx [Carga Carga Máx (Ab) (apo) lédia IN) IN) finas) pGA hs hs boos p157 | b BSGA ha ho Bmw B85 | SGA (de paredes — [1,26 1,32 5.60 5,80 gua ms RR inas)

[00236] Como descrito acima, no que diz respeito à seringabilidade para administração a um indivíduo humano, geralmente não se deseja exceder uma força de 25N. Como mostrado acima na TABELA 9, todas as três formulações de OMS646 candidatas de alta concentração têm seringabilidade aceitável (isto é, uma força que não excede 25N) quando injetadas através de uma seringa 25GA ou 25GA de paredesfinas. A formulação nº 2 também possui seringabilidade aceitável quando injetada através de uma agulha 27G. A adição de PS-80 a 0,01% causou uma melhoria inesperada na seringabilidade. Análise de SEC das formulações de OMS646 candidatas após a injeção

[00237] A cromatografia de exclusão por tamanho (SEC) foi usada para avaliar a quantidade de agregados e produtos de degradação presentes nas três formulações OMS646 candidatas pós-injeção. Resumidamente, um sistema Agilent 1100 HPLC foi equipado com uma coluna SEC G3000SWxI (Tosoh, 7,8 x 300 mm, tamanho de partícula de 5 um). As amostras de OMS646 foram diluídas para 2,5 mg/mL na fase móvel de SEC (fosfato de potássio 140 mM, cloreto de potássio 75 mM, pH 7,0) e 20 uL da amostra foram injetados na coluna de HPLC. O sistema foi executado usando uma vazão de 0,4 mL/min, e a proteína eluída foi detectada por absorção a 280 nm (largura de banda 4 nm) sem correção de referência. Para avaliar a adequação do sistema, em todas as amostras foi realizado procedimento de cromatografia por faixas por injeções de branco da fase móvel e de padrão da filtração em gel e o material de referência foi injetado em duplicata no início da sequência. Foram reportadas as porcentagens de abundância para espécies de alto peso molecular (HMW) e de baixo peso molecular (LMW) total e individual, além da porcentagem de monômero e área total do pico integrado. Resultados:

[00238] Os resultados da análise de SEC das formulações de OMS646 candidatas de alta concentração pós-injeção são mostrados na Tabela 10. TABELA 10. Análise de SEC das formulações de OMS646 de alta concentração pós-injeção [Formulação — [Condição | 'ontrole | p7 GA n ps GA | PSGA (de paredesb6,4 BA ,2 finas) ontrole | 27 GA P 25 GA | 'ontrole p7 GA 6 bs GA (de paredesb6,3 B,5 2 finas)

[00239] Esses resultados mostram pouca ou nenhuma alteração na pureza pela SEC após a expulsão pela agulha.

[00240] Resumo dos Resultados: Os resultados da análise de seringabilidade demonstram que todas as três formulações de OMS646 candidatas de alta concentração têm seringabilidade aceitável quando testadas usando agulhas adequadas para administração subcutânea e há pouca ou nenhuma alteração na pureza do OMS646 após a expulsão pela agulha. A adição de PS-80 a 0,01% forneceu uma melhora inesperada na seringabilidade da formulação contendo citrato de arginina. EXEMPLO 4

[00241] Este exemplo descreve um estudo que foi realizado para avaliar a estabilidade de formulações de anticorpo OMS646 candidatas de alta concentração e baixa viscosidade durante o armazenamento a longo prazo. Métodos:

[00242] Este estudo foi realizado para avaliar a estabilidade de formulações de anticorpo OMS646 de alta concentração para injeção subcutânea após armazenamento a longo prazo.

[00243] Duas formulações candidatas foram avaliadas da seguinte forma: citrato 20 mM, arginina 200 mM, PS-80 a 0,01%, pH 5,8 (185 mg/mL de OMS646) histidina 20 mM, arginina 200 mM, 0,01% PS-80, pH 5,9, 185 mg/mL de OMS646)

[00244] As amostras foram preenchidas em frascos para tubos de vidro Schott USP tipo I de 13 mm e 2mL (West Pharmaceuticals), com um enchimento de amostra de 1,0OmL, selados com rolhas Fluorotec de 13mm (West Pharmaceuticals) e tampados com tampas de alumínio 13FO com botões (West Pharmaceuticals ou equivalente). Os frascos de amostras foram armazenados em câmaras “reach-inº de estabilidade de temperatura controlada a -75 + 10ºC, -20 + 5ºC, 5 + 3ºC, 25 + 2ºC/60 + 5% UR, e 40 + 2ºC/75 + 5S%UR. Uma meta de pelo menos 40 frascos de amostra por formulação foi armazenada para o presente estudo. As amostras armazenadas como líquido foram armazenadas em orientação invertida, enquanto as amostras congeladas foram armazenadas na vertical. O número necessário de frascos foi retirado nos momentos de avaliação e condições associados e as amostras foram caracterizadas pelos seguintes métodos: Aparência por Inspeção Visual, Teor de Proteína por A280, Osmolalidade, SEC-HPLC, pH e MASP-2 ELISA. Os dados exemplificativos de SEC-HPLC estão resumidos na TABELA 11 e mostram que o anticorpo OMS646 manteve sua integridade após armazenamento a 5ºC por 6, 9 e 12 meses. Os dados do ELISA confirmaram que o anticorpo preservou a sua funcionalidade após armazenamento a 5ºC por 6, 9 e 12 meses.

[00245] Resultados: Os resultados deste estudo estão resumidos na Tabela 11 abaixo. TABELA 11. Estabilidade das formulações, conforme analisado pela SEC 9%) (monômero) ouso Ro Ni be EA

LD mM Na bg bs FP pec —b7 ba FP 1 mês ºC b7 73 BSCIGOMHUR — bo 7,1 IOMS646 de 185 mg/mL 20ºC PE) 7,1 Histidina 20 mN |2 meses ºC B,3 6,7 Arginina 200mM PSCIGOOMUR —B3 6,7 Polissorbato 80 0,01% 20ºC b,8 7,1 0,1 pH 5,9 B meses — b5ºC Bo 96,9 0,1 BSCIGOOMUR — BI 6,1 0,8 poe —àhàhg bs |- 6meses = BC ho bg EF pscsom UR bo ———bso FP

[00246] Conforme mostrado na Tabela 11, pouca ou nenhuma alteração na pureza foi observada nas amostras armazenadas até 9 meses a - 20ºC ou armazenadas a 5ºC até 12 meses, a temperatura de armazenamento pretendida. A pureza das amostras armazenadas a 25ºC também foi mantida por 2 meses, no entanto, pequenas alterações na pureza a 25ºC foram observadas ao longo de 9 meses de armazenamento. EXEMPLO 5

[00247] Uma formulação exemplificativa contendo o anticorpo inibidor de MASP-2 OMS646 a pH 5,8 foi preparada combinando OMS646 (185 mg/mL) com citrato (20 mM), arginina (200 mM) e polissorbato 80 (0,01%). O citrato de sódio di-hidratado (4,89 mg/mL) e o ácido cítrico mono-hidratado (0,71 mg/mL) foram utilizados para preparar o tampão de citrato, com ácido clorídrico e/ou hidróxido de sódio usado para ajustar o pH conforme necessário.

[00248] A viscosidade desta formulação foi medida com um viscosímetro capilar e os resultados são mostrados na Tabela 12. Há uma ligeira diminuição da viscosidade em taxas de cisalhamento mais altas, com todos os valores abaixo de 13 cP. TABELA 12: Viscosidade de uma formulação exemplificativa de OMS646 medida em diferentes taxas de cisalhamento itrato 20 MM Arginina 200mM 5,0 11000 11,0 PH 5,8

[00249] Foi determinado que as dosagens em indivíduos humanos de formulação de OMS646 de 185 mg/mL exemplificativa descrita neste exemplo (por injeção subcutânea e administração intravenosa após diluição) resultou em altos e sustentados graus de inibição da via da lectina. EXEMPLO 6

[00250] Este exemplo descreve um estudo clínico para avaliar a eficácia de OMS646 em indivíduos que sofrem de aHUS. Antecedentes/Fundamentação

[00251] A síndrome hemolítica urêmica atípica (SHUS) é uma doença rara e potencialmente fatal que, se não tratada, resulta em doença renal terminal em 50% dos pacientes dentro de um ano após o diagnóstico (Loirat C. et al., Orphanet J Rare Dis 6:60, 2011). A desregulação do sistema complemento está no centro da patogênese de aHUS, e anormalidades genéticas nos genes do complemento foram identificadas em aproximadamente 50% de todos os pacientes com aHUS. Certas variantes mutantes dos genes que codificam o fator H do complemento, fator 1, fator B e C3 foram identificadas como principais fatores de risco; esses alelos levam ao aumento da atividade do complemento. Pensa-se que certos fatores precipitantes são necessários para desencadear a aHUS, como infecção, doenças malignas, uso de fármacos nocivos ao endotélio, transplante e gravidez. Muitos desses fatores precipitantes estão ligados à ativação, estresse ou lesão das células endoteliais.

[00252] Como aqui descrito, o OMS646 inibe a via de lectina humana, mas não tem efeito significativo nas vias de complemento clássicas ou alternativas. Conforme descrito em US2015/0166675, em um modelo experimental ex vivo humano de microangiopatia trombótica (TMA), o OMS646 inibiu a ativação do complemento e a formação de trombos em células endoteliais microvasculares expostas a amostras de soro de pacientes com aHUS, tanto na fase aguda quanto em remissão. Conforme descrito em US2017/0137537, dados obtidos em um ensaio clínico de Fase 2 aberto (administração iv de 2-4 mg kg de anticorpo inibidor de MASP-2 OMS646 uma vez por semana, durante 4 semanas consecutivas), o tratamento com OMS646 mostrou eficácia em pacientes com SHUS. A contagem de plaquetas nos três pacientes com aHUS nas coortes de dose média e alta (duas na dose média e uma na coorte de alta dose) retornou ao normal, com um aumento médio estatisticamente significativo em relação ao valor basal de aproximadamente 68.000 plaquetas/mL (p = 0,0055).

[00253] O estudo descrito neste exemplo é realizado para avaliar a eficácia do OMS646 em pacientes com aHUS.

Medições de desfecho: Medidas primárias de desfecho:

[00254] O efeito do OMS646 em pacientes com aHUS, medido pela contagem de plaquetas, muda da linha de base (período: 26 semanas).

Medidas secundárias de desfecho:

[00255] Resposta de TMA (período: 26 semanas), em que a resposta completa de TMA é definida como normalização da contagem de plaquetas, normalização da LDH sérica e diminuição de >25% na creatinina sérica em pelo menos 2 medidas consecutivas durante pelo menos 4 semanas consecutivas, com o período inicial de 26 semanas.

[00256] Status sem eventos de TMA (período: 26 semanas), definida como nenhuma redução > 25% na contagem de plaquetas da linha de base, nenhuma troca de plasma ou infusão de plasma e nenhum início de nova diálise por pelo menos 12 semanas consecutivas, dentro do período inicial de 26 semanas.

[00257] Aumento da taxa estimada de filtração glomerular (TFGe) (período: 26 semanas), definido como um aumento superior a 15 mL/min/1,73 m? na TFGe calculada pela equação da MDRD!.

[00258] Normalização hematológica (período: 26 semanas), definida como normalização da contagem de plaquetas e normalização da LDH sérica por 2 medições consecutivas durante pelo menos 4 semanas consecutivas, dentro do período inicial de 26 semanas.

[00259] Remissão de TMA (período: 26 semanas), definida como contagem de plaquetas maior ou igual a 150.000/uL por pelo menos 2 semanas consecutivas, dentro do período inicial de 26 semanas.

[00260] Alteração da linha de base na creatinina sérica (período: 26 semanas).

[00261] Alteração da linha de base na LDH sérica (período: 26 semanas).

[00262] Alteração da linha de base na haptoglobina (período: 26 semanas).

[00263] 'Equação MDRD: eGFR (mL/min/1,73M?) = 175 x (SCr)'VS x (Idade) x (0,742 se for fêmea) x (1,212 se for afro-americano). Nota: SCr = A medida da creatinina sérica deve ser mg/dL.

Elegibilidade

[00264] Indivíduos com aHUS resistente à terapia plasmática e aHUS responsiva à terapia plasmática serão elegíveis. Os indivíduos são considerados resistentes à terapia plasmática se tiverem trombocitopenia na triagem, apesar de terem recebido anteriormente pelo menos 4 tratamentos de terapia plasmática (infusão plasmática de troca plasmática) em 7 dias sem resolução da trombocitopenia. Os indivíduos são considerados responsivos à terapia plasmática se tiverem um histórico documentado de necessidade de terapia plasmática para evitar a exacerbação de aHUS, incluindo documentação de uma diminuição na contagem de plaquetas e um aumento na LDH quando a frequência da terapia plasmática tiver diminuído (incluindo a descontinuação da terapia plasmática).

[00265] Qualquer indivíduo que tenha recebido eculizumabe dentro de 3 meses após a triagem do primeiro tratamento com OMS646 deve passar por pelo menos uma troca de plasma entre a descontinuação do eculizumabe e o primeiro tratamento com OMS646.

Critérios de inclusão:

[00266] Capaz em fornecer consentimento informado, ou se for menor de idade, ter pelo menos um dos pais ou responsável legal para fornecer consentimento informado com o consentimento por escrito do indivíduo.

[00267] São pelo menos 12 anos na triagem (Visita 1).

[00268] Ter um diagnóstico clínico da síndrome hemolítica urêmica atípica primária (SHUa), com atividade de ADAMTS13 superior a 5% no plasma.

[00269] Os pacientes com aHUS resistentes à terapia plasmática devem ter uma contagem de plaquetas na triagem menor que 150.000/uL, evidência de hemólise microangiopática e creatinina sérica maior que o limite superior do normal.

[00270] Os pacientes com aHUS responsiva à terapia plasmática devem ter um histórico documentado de necessidade de terapia plasmática para evitar a exacerbação da aHUS e receberam terapia plasmática pelo menos uma vez a cada 2 semanas em uma frequência inalterada por pelo menos 8 semanas antes da primeira dose de OMS646.

Critérios de Exclusão:

[00271] Ter STEC-HUS, um teste de Coombs positivo direto, histórico de transplante de células-tronco hematopoiéticas e/ou HUS de um fármaco identificado.

[00272] Histórico de HUS relacionada à deficiência de vitamina B12, lúpus eritematoso sistêmico e/ou síndrome antifosfolípide.

[00273] Câncer ativo ou histórico de câncer (exceto câncer de pele não melanoma) dentro de 5 anos após a triagem.

[00274] Estar em hemodiálise ou diálise peritoneal há mais de ou igual a 12 semanas.

[00275] Ter uma infecção bacteriana ou fúngica sistêmica ativa que exija terapia antimicrobiana sistêmica (é permitida a terapia antimicrobiana profilática administrada como padrão de tratamento).

[00276] Frequência cardíaca basal em repouso inferior a 45 batimentos por minuto ou superior a 115 batimentos por minuto.

[00277] QTCF basal superior a 470 milissegundos.

[00278] Ter hipertensão maligna (pressão arterial diastólica superior a 120 mm Hg com hemorragias bilaterais ou exsudatos algodonosos no exame fundoscópico).

[00279] Ter um prognóstico ruim com uma expectativa de vida inferior a três meses, na opinião do Investigador.

[00280] Estar grávida ou amamentando.

[00281] Ter recebido tratamento com um fármaco ou dispositivo sob investigação dentro de quatro semanas antes da triagem.

[00282] Ter testes de função hepática anormais definidos como ALT ou AST > cinco vezes o ULN.

[00283] Ter infecção pelo HIV.

[00284] Histórico de cirrose hepática. Delineamento do Estudo:

[00285] Este é um estudo multicêntrico de Fase 3 do OMS646 em adultos e adolescentes com aHUS. O estudo aberto, não controlado, avaliará o efeito do OMS646 em indivíduos com aHUS resistente à terapia plasmática e aHUS responsiva à terapia plasmática. Este estudo possui quatro períodos: Triagem, Indução de “Tratamento, Manutenção de Tratamento e Acompanhamento. A inclusão aproximada é de 80 indivíduos. Uma análise provisória será realizada após 40 indivíduos completarem 26 semanas de tratamento.

[00286] Triagem: a visita de triagem é a Visita 1. Na triagem, as medidas laboratoriais incluem contagem de plaquetas, LDH, creatinina, haptoglobina, ALT, AST e contagem de esquistócitos. Indução de tratamento:

[00287] A primeira visita de tratamento é a Visita 2. Os indivíduos resistentes à terapia plasmática e responsivos à terapia plasmática serão submetidos a procedimentos diferentes durante o período de indução do tratamento. Os indivíduos responsivos à terapia plasmática continuarão a receber terapia plasmática durante o Período de Indução de Tratamento com doses suplementares de OMS646 administradas simultaneamente com a terapia plasmática para permitir que os indivíduos obtenham concentrações plasmáticas constantes de OMS646. A Visita 1 e a Visita 2 podem ser combinadas para indivíduos resistentes à terapia plasmática.

[00288] Durante o período de indução do tratamento, os indivíduos receberão OMS646 370 mg IV nos dias 1 e 4. A partir do dia da primeira dose (dia 1), os indivíduos também iniciarão o tratamento com OMS646 150 mg SC uma vez ao dia.

[00289] Para dosagem IV usando a formulação de 185 mg/mL, 2 mL de produto de fármaco OMS646 (185 mg/mL OMS646, pH 5,8, citrato (20 mM), arginina (200 mM) e polissorbato 80 (0,01%) fornecidos em um frasco de vidro de 2 mL de uso único contendo um volume nominal de 2 mL de solução) serão retirados de 1 frasco usando seringas de polipropileno para preparação da dose. A dose de OMS646 será adicionada a uma bolsa de infusão de cloreto de polivinila ou poliolefina contendo 50 mL de dextrose a 5% para injeção ou solução salina normal e misturada por inversão suave. À bolsa de infusão é mantida à temperatura ambiente até estar pronta para administração e deve ser administrada dentro de 4 horas após a preparação. O fármaco do estudo diluído deve ser administrado por infusão por um período de 30 minutos.

[00290] Para dosagem SC, é utilizada a formulação de 185 mg/mL (185 mg/mL de OMS646, pH 5,8, citrato (20 mM), arginina (200 mM) e polissorbato 80 (0,01%)). A dose SC será preparada retirando 0,8 mL de 1 frasco de OMS646 em uma seringa de polipropileno de 1 mL. A agulha será trocada por uma agulha 27G de paredes finas para injeção SC. A injeção SC deve ser realizada dentro de 30 minutos após a injeção da dose na seringa. Período de Manutenção do Tratamento

[00291] Após a conclusão da dosagem IV durante o Período de Indução de Tratamento, os indivíduos entrarão no Período de Manutenção do Tratamento. Durante esse período, os indivíduos continuarão a receber OMS646 150 mg SC uma vez ao dia. Este regime de dosagem continuará durante todo o período de tratamento.

[00292] Para indivíduos responsivos à terapia plasmática, no momento da última dose IV do período de indução do tratamento, a frequência da terapia plasmática será reduzida em um tratamento de terapia plasmática por semana (descontinuado para indivíduos recebendo terapia plasmática com frequência de < uma vez por semana) até a terapia plasmática ser descontinuada.

[00293] A critério do Investigador, o OMS646 370 mg IV administrado uma vez a cada 3 dias e/ou terapia plasmática pode ser reiniciado para quaisquer indivíduos responsivos à terapia plasmática ou indivíduos resistentes à terapia plasmática que apresentem uma reincidência de TMA. As injeções do OMS646 SC devem continuar durante esse período.

[00294] O tempo total dos períodos de indução do tratamento e manutenção do tratamento é de dois anos. Período de acompanhamento:

[00295] Após a conclusão do período de manutenção do tratamento ou a descontinuação precoce, os indivíduos serão submetidos a duas visitas de acompanhamento. Os indivíduos que concluírem o Período de Manutenção do Tratamento podem ser elegíveis para continuar o tratamento sob uma futura alteração do protocolo ou com acesso expandido (uso compassivo).

[00296] De acordo com o exposto, em um aspecto, a invenção provê um método de tratamento de um indivíduo que sofre ou corre risco de desenvolver aHUS, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-MASP-2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, “compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:2 e (1) uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:3; em que o método compreende um ciclo de administração compreendendo uma fase de indução e uma fase de manutenção, em que: (a) a fase de indução compreende um período de uma semana, em que o anticorpo anti-MASP-2, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, é administrado a uma dose de cerca de 370 mg no dia 1 e nodia4;e (b) a fase de manutenção compreende um período de pelo menos 26 semanas, começando no dia 1 do período de indução, em que o anticorpo anti-MASP-2, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, é administrado em uma dose diária de cerca de 150 mg.

[00297] Em uma modalidade, o anticorpo anti-MASP-2 é administrado por via intravenosa durante o período de indução. Em uma modalidade, o anticorpo anti-MASP-2 é administrado por via subcutânea durante o período de manutenção. Em uma modalidade, a fase de manutenção compreende ou consiste em 26 semanas. Em uma modalidade, o período de manutenção dura mais de 26 semanas (6 meses), como pelo menos 39 semanas (9 meses) ou pelo menos 52 semanas (12 meses) ou pelo menos 78 semanas (18 meses) ou pelo menos 104 semanas (24 meses). Em uma modalidade, o período de manutenção dura de pelo menos 6 meses a 2 anos.

[00298] Em uma modalidade, o anticorpo anti-MASP-2, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, é administrado por via intravenosa ao indivíduo durante o período de indução a uma dose de cerca de 370 mg no Dia | e no Dia 4; em que a composição intravenosa compreendendo o anticorpo anti-MASP-2 é gerada pela combinação de uma quantidade apropriada de uma formulação de alta concentração aqui descrita. Em uma modalidade, o anticorpo anti-MASP-2, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, é administrado por via subcutânea ao indivíduo durante o período de manutenção a uma dosagem diária de cerca de 150 mg da formulação de alta concentração compreendendo o anticorpo anti-MASP-2.

[00299] Em uma modalidade, o método compreende a administração subcutânea a um indivíduo que sofre de aHUS, uma dose diária de cerca de 150 mg por um período de tempo de pelo menos 26 semanas, uma formulação farmacêutica estável adequada para administração parentética a um indivíduo mamífero, compreendendo: (a) uma solução aquosa compreendendo um sistema tampão com um pH de 5,0 a 7,0; e (b) um anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo que se liga especificamente à MASP-2 humana em uma concentração de cerca de 50 mg/mL a cerca de 250 mg/mL, em que o dito anticorpo ou fragmento do mesmo compreende (1) uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:2 e (ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:3; em que a formulação tem uma viscosidade entre 2 e 50 centipoise (cP) e em que a formulação é estável quando armazenada entre 2ºC e 8ºC por pelo menos um mês.

[00300] Em uma modalidade, o método compreende a administração subcutânea a um indivíduo que sofre de aHUS, uma dose diária de cerca de 150 mg por um período de tempo de pelo menos 26 semanas, uma formulação farmacêutica estável compreendendo 185 mg/mL de OMS646, pH 5,8, citrato (20 mM), arginina (200 mM) e polissorbato 80 (0,01%)). Em algumas modalidades, a dose SC é preparada retirando 0,8 mL de 1 frasco de OMS646 em uma seringa de polipropileno de 1 mL. Em algumas modalidades, a agulha é trocada por uma agulha 27G de paredes finas para injeção SC.

[00301] Em uma modalidade, o método compreende o tratamento de um indivíduo que sofre de aHUS responsiva à terapia plasmática. Em uma modalidade, o método compreende o tratamento de um indivíduo que sofre de aHUS resistente à terapia plasmática.

[00302] Em uma modalidade o método compreende um método de tratamento de um indivíduo que sofre ou corre risco de desenvolver aHUS, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-MASP-2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:2 e (11) uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:3; em que o método compreende uma fase de manutenção, em que a fase de manutenção compreende um período de pelo menos 26 semanas, em que o anticorpo anti-MASP-2, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, é administrado s.c. Em uma dose diária de cerca de 150 mg.

[00303] Embora a modalidade preferida da invenção tenha sido ilustrada e descrita, será reconhecido que podem ser feitas várias alterações nas formulações e métodos descritos sem sair do espírito e escopo da invenção. Pretende-se, portanto, que o escopo da carta-patente aqui concedida seja limitado apenas pelas definições das reivindicações anexas.

[00304] De acordo com o precedente, a invenção apresenta as seguintes modalidades.

[00305] 1. Um método de tratamento de um indivíduo que sofre ou corre risco de desenvolver aHUS compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-MASP-2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:2 e (11) uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:3; em que o método compreende um ciclo de administração compreendendo uma fase de indução e uma fase de manutenção, em que: (a) a fase de indução compreende um período de uma semana, em que o anticorpo anti-MASP-2, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, é administrado a uma dose de cerca de 370 mg no dia 1 e nodia4; e (b) a fase de manutenção compreende um período de pelo menos 26 semanas, começando no dia 1 do período de indução, em que o anticorpo anti-MASP-2, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, é administrado em uma dose diária de cerca de 150 mg.

[00306] 2. O método do parágrafo 1, em que o anticorpo anti-MASP-2 é administrado por via intravenosa em uma solução adequada para administração intravenosa durante o período de indução.

[00307] 3. O método do parágrafo 1, em que o anticorpo anti-MASP-2 é administrado por via subcutânea durante o período de manutenção.

[00308] 4. O método de qualquer um dos parágrafos 1-3, em que a fase de manutenção compreende ou consiste em 26 semanas.

[00309] 5. O método de qualquer um dos parágrafos 1-3, em que o período de manutenção dura mais de 26 semanas (6 meses), como pelo menos 39 semanas (9 meses) ou pelo menos 52 semanas (12 meses) ou pelo menos

78 semanas (18 meses) ou pelo menos 104 semanas (24 meses).

[00310] 6. O método de qualquer um dos parágrafos 1-3, em que o período de manutenção dura de pelo menos 6 meses a 2 anos.

[00311] 7. O método do parágrafo 2, em que o anticorpo anti-MASP-2, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, é administrado por via intravenosa ao indivíduo durante o período de indução a uma dose de cerca de 370 mg no Dia 1 e no Dia 4.

[00312] 8. O método de qualquer um dos parágrafos 1-7, em que o método compreende o tratamento de um indivíduo que sofre de aHUS responsiva à terapia plasmática.

[00313] 9. O método de qualquer um dos parágrafos 1-7, em que o método compreende o tratamento de um indivíduo que sofre de aHUS resistente à terapia plasmática.

[00314] 10. O método do parágrafo 3, em que o método compreende a administração subcutânea a um indivíduo que sofre de aHUS, uma dose diária de cerca de 150 mg por um período de tempo de pelo menos 26 semanas, uma formulação farmacêutica estável adequada para administração parentética a um indivíduo mamífero, compreendendo: (a) uma solução aquosa compreendendo um sistema tampão com um pH de 5,0 a 7,0; e (b) um anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo que se liga especificamente à MASP-2 humana em uma concentração de cerca de 50 mg/mL a cerca de 250 mg/mL; em que a formulação tem uma viscosidade entre 2 e 50 centipoise (cP) e em que a formulação é estável quando armazenada entre 2ºC e 8ºC por pelo menos um mês.

[00315] 11. O método do parágrafo 3, em que o método compreende a administração subcutânea a um indivíduo que sofre de aHUS, uma dose diária de cerca de 150 mg por um período de tempo de pelo menos 26 semanas, uma formulação farmacêutica estável compreendendo 185 mg/mL do anticorpo monoclonal, pH 5,8, citrato (20 mM), arginina (200 mM) e polissorbato 80

(0,01%)).

[00316] 12. O método do parágrafo 3, em que a administração por SC é via injeção.

[00317] 13. O método do parágrafo 12, em que a injeção é realizada com uma seringa com uma agulha 27G de paredes finas.

[00318] 14. O método do parágrafo 2, em que a solução intravenosa que compreende o anticorpo anti-MASP-2 é gerada pela combinação de uma quantidade — apropriada! de uma formulação farmacêutica estável compreendendo 185 mg/mL do anticorpo monoclonal, pH 5,8, citrato (20 mM), arginina (200 mM) e polissorbato 80 (0,01%)) com um diluente farmaceuticamente aceitável antes da administração.

[00319] 15. O método do parágrafo 10, em que a formulação compreende: polissorbato 80 a uma concentração de cerca de 0,01 a cerca de 0,08% p/v; cloridrato de L-arginina a uma concentração de cerca de 150 MM a cerca de 200 mM; citrato de sódio a uma concentração de cerca de 10 mM à cerca de 50 mM; e cerca de 150 mg/mL a cerca de 200 mg/mL do anticorpo.

[00320] Embora a modalidade preferida da invenção tenha sido ilustrada e descrita, será reconhecido que podem ser feitas várias alterações sem sair do espírito e escopo da invenção.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-MASP- 2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:2 e (il) uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO:3, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de um medicamento para uso em um método de tratamento de um indivíduo que sofre ou corre risco de desenvolver aHUS, em que o método compreende um ciclo de administração compreendendo uma fase de indução e uma fase de manutenção, em que: (c) a fase de indução compreende um período de uma semana, em que o anticorpo anti-MASP-2, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, é administrado a uma dose de cerca de 370 mg no dia 1 e nodia4; e (d) a fase de manutenção compreende um período de pelo menos 26 semanas, começando no dia 1 do período de indução, em que o anticorpo anti-MASP-2, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, é administrado em uma dose diária de cerca de 150 mg.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-MASP-2 é administrado por via intravenosa em uma solução adequada para administração intravenosa durante o período de indução.

3. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-MASP-2 é administrado por via subcutânea durante o período de manutenção.

4. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a fase de manutenção compreende ou consiste em 26 semanas.

5. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o período de manutenção dura mais de 26 semanas (6 meses), como pelo menos 39 semanas (9 meses) ou pelo menos 52 semanas (12 meses) ou pelo menos 78 semanas (18 meses) ou pelo menos 104 semanas (24 meses).

6. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o período de manutenção dura de pelo menos 6 meses a 2 anos.

7. Uso de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-MASP-2, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, é administrado por via intravenosa ao indivíduo durante o período de indução a uma dose de cerca de 370 mg no Dia | e no Dia 4.

8. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o método compreende o tratamento de um indivíduo que sofre de aHUS responsiva à terapia plasmática.

9. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o método compreende o tratamento de um indivíduo que sofre de aHUS resistente à terapia plasmática.

10. Uso de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o método compreende a administração subcutânea a um indivíduo que sofre de aHUS, uma dose diária de cerca de 150 mg por um período de tempo de pelo menos 26 semanas, uma formulação farmacêutica estável adequada para administração parentética a um indivíduo mamífero, compreendendo: (a) uma solução aquosa compreendendo um sistema tampão com um pH de 5,0 a 7,0; e (b) um anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo que se liga especificamente à MASP-2 humana em uma concentração de cerca de 50 mg/mL a cerca de 250 mg/mL; em que a formulação tem uma viscosidade entre 2 e 50 centipoise (cP) e em que a formulação é estável quando armazenada entre 2ºC e 8ºC por pelo menos um mês.

11. Uso de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o método compreende a administração subcutânea a um indivíduo que sofre de aHUS, uma dose diária de cerca de 150 mg por um período de tempo de pelo menos 26 semanas, uma formulação farmacêutica estável compreendendo 185 mg/mL do anticorpo monoclonal, pH 5,8, citrato (20 mM), arginina (200 mM) e polissorbato 80 (0,01%)).

12. Uso de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a administração por SC é via injeção.

13. Uso de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que a injeção é realizada com uma seringa com uma agulha 27G de paredes finas.

14. Uso de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a solução intravenosa que compreende o anticorpo anti-MASP-2 é gerada pela combinação de uma quantidade apropriada de uma formulação farmacêutica estável compreendendo 185 mg/mL do anticorpo monoclonal, PH 5,8, citrato (20 mM), arginina (200 mM) e polissorbato 80 (0,01%)) com um diluente farmaceuticamente aceitável antes da administração.

15. Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a formulação compreende: (a) polissorbato 80 a uma concentração de cerca de 0,01 a cerca de 0,08% p/v; (b) cloridrato de L-arginina a uma concentração de cerca de 150 mM a cerca de 200 mM; (c) citrato de sódio a uma concentração de cerca de 10 MM a cerca de 50 mM; e (d) cerca de 150 mg/mL a cerca de 200 mg/mL do anticorpo.