BR112019026803A2 - anti-bcma heavy chain antibodies only - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a anticorpos apenas de cadeia pesada Anti-BCMA (UniAb) e composições reveladas, juntamente com métodos para fabricar tais anticorpos, composições, que incluem composições farmacêuticas, que compreendem tais anticorpos e seu uso para tratar distúrbios de célula B caracterizados pela expressão de BCMA.The present invention relates to anti-BCMA (UniAb) heavy chain antibodies and disclosed compositions, together with methods for making such antibodies, compositions, which include pharmaceutical compositions, which comprise such antibodies and their use to treat B cell disorders characterized by BCMA expression.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTICORPOS APENAS DE CADEIA PESADA ANTI-BCMA".Invention Patent Descriptive Report for "ANTI-BCMA HEAVY CHAIN ANTIBODIES ONLY".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOSCROSS REFERENCE TO RELATED ORDERS

[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade da data de depósito do Pedido de Patente Provisório nº de Série U.S. 62/522.295, depositado em 20 de junho de 2017, cuja revelação está incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade.[001] This application claims priority benefit from the filing date of Provisional Patent Application Serial No. U.S. 62 / 522,295, filed on June 20, 2017, the disclosure of which is hereby incorporated by reference in its entirety for reference.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIASSEQUENCE LISTING

[002] O presente pedido contém uma Listagem de Sequências que foi apresentada eletronicamente em formato ASCII e está incorporada ao presente documento em sua totalidade a título de referência. A dita cópia ASCII, criada em 24 de agosto de 2018, é nomeada TNO-0003- WO_SL.txt e tem 47,761 bytes de tamanho.[002] The present application contains a List of Sequences that was submitted electronically in ASCII format and is incorporated into this document in its entirety for reference. Said ASCII copy, created on August 24, 2018, is named TNO-0003- WO_SL.txt and is 47,761 bytes in size.

CAMPO DA INVENÇÃOFIELD OF THE INVENTION

[003] A presente invenção se refere a anticorpos apenas de cadeia pesada anti-BCMA (UniAb). A invenção se refere, adicionalmente, a métodos para fabricar tais anticorpos, composições, que incluem composições farmacêuticas, que compreendem tais anticorpos, e seu uso para tratar um distúrbio de célula B caracterizado pela expressão de BCMA.[003] The present invention relates to anti-BCMA heavy chain antibodies only (UniAb). The invention further relates to methods for making such antibodies, compositions, which include pharmaceutical compositions, which comprise such antibodies, and their use to treat a B cell disorder characterized by BCMA expression.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO ANTÍGENO DE MATURAÇÃO DE CÉLULA B (BCMA)BACKGROUND OF THE B-CELL MATURATION ANTIGEN (BCMA)

[004] BCMA, também conhecido como membro de superfamília de fator de necrose de tumor 17 (TNFRSF17) (UniProt Q02223), é um receptor de superfície celular exclusivamente expresso em células plasmáticas e plasmablastos. BCMA é um receptor para dois ligantes na superfamília de fator de necrose de tumor (TNF): APRIL (um ligante de indução de proliferação, também conhecido como TNFSF13; TALL- 2 e TRDL-1; o ligante de alta afinidade para BCMA) e fator de ativação de B célula (BAFF) (também conhecido como BLyS; TALL-1; THANK;[004] BCMA, also known as a tumor necrosis factor superfamily member 17 (TNFRSF17) (UniProt Q02223), is a cell surface receptor exclusively expressed on plasma cells and plasmablasts. BCMA is a receptor for two ligands in the tumor necrosis factor (TNF) superfamily: APRIL (a proliferation-inducing ligand, also known as TNFSF13; TALL-2 and TRDL-1; the high affinity ligand for BCMA) and B cell activation factor (BAFF) (also known as BLyS; TALL-1; THANK;

zTNF4; TNFSF20; e D8Ertd387e; o ligante de baixa afinidade para BCMA). APRIL e BAFF são fatores de crescimento que se ligam ao BCMA e promovem sobrevivência de células plasmáticas. BCMA também é altamente expresso em células plasmáticas malignas em mieloma múltiplo (MM) humano. Anticorpos que se ligam ao BCMA são descritos, por exemplo, em Gras et al., 1995, Int. Immunol. 7:1093-1106, WO200124811 e WO200124812. Anticorpos anti-BCMA que reagem de forma cruzada com TACI são descritos no documento nº WO2002/066516. Anticorpos biespecíficos contra BCMA e CD3 são descritos, por exemplo, no documento nº U.S. 2013/0156769 A1 e U.S. 2015/0376287 A1. Um conjugado de anticorpo MMAE ou MMAF anti- BCMA foi relatado para induzir seletivamente a morte de células de mieloma múltiplo (Tai et al., Blood 2014, 123(20): 3128-38). Ali et al., Blood 2016, 128(13):1688-700, relatou que num ensaio clínico (nº NCT02215967) células T de receptor de antígeno quimérico (CAR) que alvejam BCMA resultaram na remissão de mieloma múltiplo em pacientes humanos.zTNF4; TNFSF20; and D8Ertd387e; the low affinity binder for BCMA). APRIL and BAFF are growth factors that bind to BCMA and promote the survival of plasma cells. BCMA is also highly expressed in malignant plasma cells in human multiple myeloma (MM). Antibodies that bind to BCMA are described, for example, in Gras et al., 1995, Int. Immunol. 7: 1093-1106, WO200124811 and WO200124812. Anti-BCMA antibodies that cross-react with TACI are described in WO2002 / 066516. Bispecific antibodies against BCMA and CD3 are described, for example, in U.S. No. 2013/0156769 A1 and U.S. 2015/0376287 A1. An anti-BCMA MMAE or MMAF antibody conjugate has been reported to selectively induce the death of multiple myeloma cells (Tai et al., Blood 2014, 123 (20): 3128-38). Ali et al., Blood 2016, 128 (13): 1688-700, reported that in a clinical trial (No. NCT02215967) chimeric antigen receptor (CAR) cells targeting BCMA resulted in remission of multiple myeloma in human patients.

ANTICORPOS APENAS DE CADEIA PESADAHEAVY CHAIN ANTIBODIES ONLY

[005] Num anticorpo de IgG convencional, a associação da cadeia pesada e cadeia leve ocorre devido, em parte, a uma interação hidrofóbica entre a região constante de cadeia leve e o domínio constante de CH1 da cadeia pesada. Há resíduos adicionais nas regiões de estrutura 2 (FR2) e estrutura 4 (FR4) de cadeia pesada que também contribuem para esta interação hidrofóbica entre as cadeias pesada e leve.[005] In a conventional IgG antibody, the association of the heavy chain and light chain occurs due, in part, to a hydrophobic interaction between the light chain constant region and the CH1 constant domain of the heavy chain. There are additional residues in the regions of structure 2 (FR2) and structure 4 (FR4) of heavy chain that also contribute to this hydrophobic interaction between heavy and light chains.

[006] Sabe-se, no entanto, que os soros de camelídeos (subclasse Tylopoda que inclui camelos, dromedários e lhamas) contêm um tipo principal de anticorpos compostos apenas por cadeias H pareadas (anticorpos somente de cadeia pesada ou UniAbs). Os UniAbs de Camelidae (Camelus dromedarius, Camelus bactrianus, Lama glama,[006] It is known, however, that the sera of camelids (subclass Tylopoda which includes camels, dromedaries and llamas) contain a major type of antibodies composed only of paired H chains (only heavy chain antibodies or UniAbs). The Camelidae UniAbs (Camelus dromedarius, Camelus bactrianus, Lama glama,

Lama guanaco, Lama alpaca e Lama vicugna) têm uma estrutura única consistindo num único domínio variável (VHH), uma região de dobradiça e dois domínios constantes (CH2 e CH3), que são altamente homólogos aos domínios CH2 e CH3 dos anticorpos clássicos. Estes UniAbs não possuem o primeiro domínio da região constante (CH1) que está presente no genoma, mas é separado durante o processamento do mRNA. A ausência do domínio CH1 explica a ausência da cadeia leve nos UniAbs, uma vez que este domínio é o local de ancoragem para o domínio constante da cadeia leve. Tais UniAbs evoluíram naturalmente para conferir especificidade de ligação ao antígeno e alta afinidade por três CDRs de anticorpos convencionais ou fragmentos dos mesmos (Muyldermans, 2001; J Biotechnol 74:277–302; Revets et al., 2005; Expert Opin Biol Ther 5:111–124). Os peixes cartilaginosos, como tubarões, também desenvolveram um tipo distinto de imunoglobulina, designada como IgNAR, que é desprovida das cadeias polipeptídicas leves e é composta inteiramente por cadeias pesadas. As moléculas IgNAR podem ser manipuladas por engenharia molecular para produzir o domínio variável de um único polipeptídeo de cadeia pesada (vNARs) (Nuttall et al. Eur. J. Biochem. 270, 3543-3554 (2003); Nuttall et al. Function and Bioinformatics 55, 187-197 (2004); Dooley et al., Molecular Immunology 40, 25-33 (2003)).Guanaco lama, Lama alpaca and Lama vicugna) have a unique structure consisting of a single variable domain (VHH), a hinge region and two constant domains (CH2 and CH3), which are highly homologous to the CH2 and CH3 domains of classical antibodies. These UniAbs do not have the first constant region domain (CH1) that is present in the genome, but it is separated during mRNA processing. The absence of the CH1 domain explains the absence of the light chain in UniAbs, since this domain is the anchorage site for the constant domain of the light chain. Such UniAbs evolved naturally to confer specificity of antigen binding and high affinity for three CDRs of conventional antibodies or fragments thereof (Muyldermans, 2001; J Biotechnol 74: 277–302; Revets et al., 2005; Expert Opin Biol Ther 5: 111–124). Cartilaginous fish, like sharks, have also developed a distinct type of immunoglobulin, called IgNAR, which lacks light polypeptide chains and is composed entirely of heavy chains. IgNAR molecules can be engineered by molecular engineering to produce the variable domain of a single heavy chain polypeptide (vNARs) (Nuttall et al. Eur. J. Biochem. 270, 3543-3554 (2003); Nuttall et al. Function and Bioinformatics 55, 187-197 (2004); Dooley et al., Molecular Immunology 40, 25-33 (2003)).

[007] A capacidade dos anticorpos apenas de cadeia pesada, desprovidos de cadeia leve, para se ligarem ao antígeno foi estabelecida na década de 1960 (Jaton et al. (1968) Biochemistry, 7, 4185-4195). A imunoglobulina de cadeia pesada fisicamente separada da cadeia leve reteve 80% da atividade de ligação ao antígeno em relação ao anticorpo tetramérico. Sitia et al. (1990) Cell, 60, 781-790 demonstraram que a remoção do domínio CH1 de um gene de camundongo μ rearranjado resulta na produção de um anticorpo apenas de cadeia pesada, desprovido de cadeia leve, em cultura de células de mamífero. Os anticorpos produzidos retiveram a especificidade de ligação a VH e as funções efetoras.[007] The ability of only heavy chain antibodies, devoid of light chain, to bind to the antigen was established in the 1960s (Jaton et al. (1968) Biochemistry, 7, 4185-4195). The heavy chain immunoglobulin physically separated from the light chain retained 80% of the antigen-binding activity in relation to the tetrameric antibody. Sitia et al. (1990) Cell, 60, 781-790 demonstrated that removal of the CH1 domain from a rearranged μ mouse gene results in the production of a heavy chain-only antibody, devoid of a light chain, in mammalian cell culture. The antibodies produced retained VH binding specificity and effector functions.

[008] Os anticorpos de cadeia pesada com alta especificidade e afinidade podem ser gerados contra uma variedade de antígenos através da imunização (van der Linden, R. H., et al. Biochim. Biophys. Acta. 1431, 37-46 (1999)) e a porção VHH pode ser prontamente clonada e expressa em levedura (Frenken, L. G. J., et al. J. Biotechnol. 78, 11-21 (2000)). Seus níveis de expressão, solubilidade e estabilidade são significativamente maiores que aqueles dos fragmentos clássicos F(ab) ou Fv (Ghahroudi, M. A. et al. FEBS Lett. 414, 521-526 (1997)).[008] Heavy chain antibodies with high specificity and affinity can be generated against a variety of antigens through immunization (van der Linden, RH, et al. Biochim. Biophys. Acta. 1431, 37-46 (1999)) and the VHH portion can be readily cloned and expressed in yeast (Frenken, LGJ, et al. J. Biotechnol. 78, 11-21 (2000)). Its levels of expression, solubility and stability are significantly higher than those of the classic F (ab) or Fv fragments (Ghahroudi, M. A. et al. FEBS Lett. 414, 521-526 (1997)).

[009] Os camundongos em que o locus de cadeia leve (L) λ (lambda) e/ou os loci de cadeia L λ e κ (kappa) foram funcionalmente silenciados e os anticorpos produzidos por tais camundongos são descritos nos documentos de Patente nº 7.541.513 e 8.367.888. Produção recombinante de anticorpos apenas de cadeia pesada em camundongos e ratos foi relatada, por exemplo, no documento nº WO2006008548; na Publicação de Pedido de Patente nº U.S. 20100122358; Nguyen et al., 2003, Immunology; 109(1), 93-101; Brüggemann et al., Crit. Rev. Immunol.; 2006, 26(5):377-90; e Zou et al., 2007, J Exp Med; 204(13): 3271-3283. A produção de ratos knockout via microinjeções de embriões de nucleases de dedo de zinco é descrita em Geurts et al., 2009, Science, 325(5939):433. Os anticorpos apenas de cadeia pesada solúveis e roedores transgênicos que compreendem um locus de cadeia pesada heterólogo que produz tais anticorpos são descritos nos documentos de Patente nº U.S. 8.883.150 e 9.365.655. As estruturas CAR-T que compreendem anticorpos de domínio único como domínios de ligação (alvejamento) são descritas, por exemplo, em Iri-Sofla et al., 2011, Experimental Cell Research 317:2630-2641 e Jamnani et al., 2014, Biochim Biophys Acta, 1840:378-386.[009] Mice in which the light chain (L) λ (lambda) locus and / or the L λ and κ (kappa) chain loci have been functionally silenced and the antibodies produced by such mice are described in Patent documents no. 7,541,513 and 8,367,888. Recombinant production of only heavy chain antibodies in mice and rats has been reported, for example, in WO2006008548; in U.S. Patent Application Publication No. 20100122358; Nguyen et al., 2003, Immunology; 109 (1), 93-101; Brüggemann et al., Crit. Rev. Immunol .; 2006, 26 (5): 377-90; and Zou et al., 2007, J Exp Med; 204 (13): 3271-3283. The production of knockout mice via microinjections of zinc finger nuclease embryos is described in Geurts et al., 2009, Science, 325 (5939): 433. Soluble heavy chain antibodies and transgenic rodents that comprise a heterologous heavy chain locus that produces such antibodies are described in U.S. Patent Documents 8,883,150 and 9,365,655. CAR-T structures that comprise single domain antibodies as binding (targeting) domains are described, for example, in Iri-Sofla et al., 2011, Experimental Cell Research 317: 2630-2641 and Jamnani et al., 2014, Biochim Biophys Acta, 1840: 378-386.

SUMÁRIO DA INVENÇÃOSUMMARY OF THE INVENTION

[010] A presente invenção refere-se a anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga ao Antígeno de Maturação de Célula B (BCMA) humano.[010] The present invention relates to heavy chain only antibody that binds to human B Cell Maturation Antigen (BCMA).

[011] Num aspecto, a invenção refere-se a um anticorpo anti- BCMA apenas de cadeia pesada que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende:[011] In one aspect, the invention relates to a heavy chain anti-BCMA only antibody comprising a heavy chain variable region comprising:

[012] (a) uma CDR1 que tem duas ou menos substituições em qualquer uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 1 a 7; e/ou[012] (a) a CDR1 that has two or less substitutions in any of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1 to 7; and / or

[013] (b) uma CDR2 que tem duas ou menos substituições em qualquer uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 8 a 11; e/ou[013] (b) a CDR2 that has two or less substitutions in any of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8 to 11; and / or

[014] (c) uma CDR3 que tem duas ou menos substituições em qualquer uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 12 a 15.[014] (c) a CDR3 that has two or less substitutions in any of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 12 to 15.

[015] Numa modalidade, as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 estão presentes numa estrutura humana.[015] In one embodiment, the sequences of CDR1, CDR2 and CDR3 are present in a human structure.

[016] Numa outra modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada compreende adicionalmente uma sequência de região constante de cadeia pesada na ausência de uma sequência CH1.[016] In another embodiment, the heavy chain only antibody further comprises a heavy chain constant region sequence in the absence of a CH1 sequence.

[017] Em ainda outra modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada compreende:[017] In yet another embodiment, the heavy chain only antibody comprises:

[018] (a) uma sequência de CDR1 selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1 a 7; e/ou[018] (a) a sequence of CDR1 selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 7; and / or

[019] (b) uma sequência de CDR2 selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 8 a 11; e/ou[019] (b) a CDR2 sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 8 to 11; and / or

[020] (c) uma sequência de CDR3 selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 12 a 15.[020] (c) a CDR3 sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 12 to 15.

[021] Numa modalidade adicional, o anticorpo apenas de cadeia pesada compreende:[021] In an additional embodiment, the heavy chain only antibody comprises:

[022] (a) uma sequência de CDR1 selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1 a 7; e[022] (a) a sequence of CDR1 selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 7; and

[023] (b) uma sequência de CDR2 selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 8 a 11; e[023] (b) a CDR2 sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 8 to 11; and

[024] (c) uma sequência de CDR3 selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 12 a 15.[024] (c) a CDR3 sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 12 to 15.

[025] Numa modalidade ainda adicional, o anticorpo apenas de cadeia pesada compreende[025] In a still further embodiment, the heavy chain only antibody comprises

[026] (i) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 12; ou[026] (i) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 12; or

[027] (ii) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 14; ou[027] (ii) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 14; or

[028] (iii) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 2, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 9 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 13; ou[028] (iii) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 2, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 9 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 13; or

[029] (iv) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 15.[029] (iv) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 15.

[030] Numa modalidade diferente, o anticorpo apenas de cadeia pesada compreende uma região variável de cadeia pesada que tem pelo menos 95% de identidade de sequência com qualquer uma das sequências de SEQ ID NOs: 16 a 50.[030] In a different embodiment, the heavy chain only antibody comprises a heavy chain variable region that has at least 95% sequence identity with any of the sequences of SEQ ID NOs: 16 to 50.

[031] Numa outra modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada compreende uma sequência de região variável de cadeia pesada selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 16 a 50.[031] In another embodiment, the heavy chain only antibody comprises a heavy chain variable region sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 16 to 50.

[032] Numa modalidade adicional, o anticorpo apenas de cadeia pesada compreende uma sequência de região variável de cadeia pesada selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 16, 17, 18, 30, 34 e 38.[032] In an additional embodiment, the heavy chain only antibody comprises a heavy chain variable region sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 16, 17, 18, 30, 34 and 38.

[033] A invenção refere-se adicionalmente a um anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga ao Antígeno de Maturação de Célula B (BCMA) humano que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma variável de cadeia pesada que compreende[033] The invention further relates to a heavy chain only antibody that binds to the human B-Cell Maturation Antigen (BCMA) comprising a heavy chain variable region comprising a heavy chain variable comprising

[034] (a) uma sequência de CDR1 da Fórmula[034] (a) a CDR1 sequence of Formula

[035] G F T X1 X2 X3 X4 X5 (SEQ ID NO: 51)[035] G F T X1 X2 X3 X4 X5 (SEQ ID NO: 51)

[036] onde[036] where

[037] X1 é V, I ou F;[037] X1 is V, I or F;

[038] X2 é S ou T;[038] X2 is S or T;

[039] X3 é S ou N;[039] X3 is Y or N;

[040] X4 é Y ou S;[040] X4 is Y or S;

[041] X5 é G ou A;[041] X5 is G or A;

[042] (b) uma sequência de CDR2 da Fórmula[042] (b) a CDR2 sequence of Formula

[043] I X6 G X7 X8 X9 X10 T (SEQ ID NO: 52)[043] I X6 G X7 X8 X9 X10 T (SEQ ID NO: 52)

[044] onde[044] where

[045] X6 é R ou S;[045] X6 is R or S;

[046] X7 é S ou D;[046] X7 is S or D;

[047] X8 é D, G, ou S;[047] X8 is D, G, or S;

[048] X9 é G ou D;[048] X9 is G or D;

[049] X10 é S, T ou N; e[049] X10 is S, T or N; and

[050] (c) uma sequência de CDR3 da fórmula[050] (c) a CDR3 sequence of the formula

[051] A K Q G X11 N D G P F D X12 (SEQ ID NO: 53)[051] A K Q G X11 N D G P F D X12 (SEQ ID NO: 53)

[052] onde[052] where

[053] X11 é G ou E;[053] X11 is G or E;

[054] X12 é Y ou H.[054] X12 is Y or H.

[055] A invenção refere-se adicionalmente a um anticorpo anti- BCMA apenas de cadeia pesada que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 numa estrutura VH humana, em que as sequências de CDR compreendem duas ou menos substituições numa sequência de CDR selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 1 a 15.[055] The invention additionally relates to a heavy chain anti-BCMA only antibody comprising a variable region of heavy chain comprising sequences of CDR1, CDR2 and CDR3 in a human VH structure, wherein the CDR sequences comprise two or fewer substitutions in a CDR sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 15.

[056] Numa modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 numa estrutura VH humana, em que as sequências de CDR são selecionadas do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 1 a 15.[056] In one embodiment, the heavy chain only antibody comprises a heavy chain variable region comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences in a human VH structure, where the CDR sequences are selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 15.

[057] Numa outra modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga ao Antígeno de Maturação de Célula B (BCMA) humano compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende[057] In another embodiment, the heavy chain-only antibody that binds to human B-Cell Maturation Antigen (BCMA) comprises a heavy chain variable region that comprises

[058] (i) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 12; ou[058] (i) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 12; or

[059] (ii) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 14; ou[059] (ii) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 14; or

[060] (iii) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 2, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 9 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 13; ou[060] (iii) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 2, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 9 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 13; or

[061] (iv) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 15,[061] (iv) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 15,

[062] numa estrutura de VH humana.[062] in a human VH structure.

[063] Em todas as modalidades, o anticorpo apenas de cadeia pesada pode ser multiespecífico, como biespecífico.[063] In all embodiments, the heavy chain only antibody can be multispecific, as is bispecific.

[064] Em certas modalidades, o anticorpo anti-BCMA apenas de cadeia pesada biespecífico tem afinidade de ligação a duas proteínas de BCMA diferentes, ou a dois epítopos diferentes na mesma proteína de BCMA.[064] In certain embodiments, the bispecific heavy chain anti-BCMA antibody only has binding affinity to two different BCMA proteins, or to two different epitopes on the same BCMA protein.

[065] Noutras modalidades, o anticorpo anti-BCMA apenas de cadeia pesada biespecífico tem afinidade de ligação a uma célula efetora, como um antígeno de célula T.[065] In other embodiments, the bispecific heavy chain anti-BCMA antibody only has affinity for binding to an effector cell, such as a T cell antigen.

[066] Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-BCMA apenas de cadeia pesada biespecífico tem afinidade de ligação a CD3.[066] In additional embodiments, the bispecific heavy chain anti-BCMA antibody only has CD3 binding affinity.

[067] Em diversas modalidades, o anticorpo anti-BCMA multi ou biespecífico pode ser num formato CAR-T.[067] In several embodiments, the multi- or bispecific anti-BCMA antibody can be in a CAR-T format.

[068] Noutro aspecto, a invenção se refere a uma composição farmacêutica que compreende um anticorpo apenas de cadeia pesada, conforme descrito acima no presente documento.[068] In another aspect, the invention relates to a pharmaceutical composition that comprises a heavy chain only antibody, as described above in this document.

[069] Em ainda outro aspecto, a invenção refere-se a um método para o tratamento de um distúrbio de célula B caracterizado pela expressão de BCMA, em que o método compreende administrar a um sujeito com tal distúrbio um anticorpo ou uma composição farmacêutica conforme descrito acima no presente documento.[069] In yet another aspect, the invention relates to a method for the treatment of a B cell disorder characterized by the expression of BCMA, wherein the method comprises administering to an individual with such a disorder an antibody or a pharmaceutical composition as described above in this document.

[070] Em algumas modalidades, o distúrbio de célula B pode ser, por exemplo, mieloma múltiplo ou lúpus eritematoso sistêmico.[070] In some embodiments, the B-cell disorder may be, for example, multiple myeloma or systemic lupus erythematosus.

[071] Num aspecto adicional, a invenção refere-se a um polinucleotídeo que codifica um anticorpo anti-BCMA conforme descrito no presente documento.[071] In a further aspect, the invention relates to a polynucleotide that encodes an anti-BCMA antibody as described herein.

[072] Em ainda outro aspecto, a invenção refere-se a um vetor que compreende um polinucleotídeo que codifica um anticorpo anti-BCMA conforme descrito no presente documento.[072] In yet another aspect, the invention relates to a vector that comprises a polynucleotide that encodes an anti-BCMA antibody as described herein.

[073] A invenção refere-se adicionalmente a uma célula que compreende um vetor que compreende um polinucleotídeo que codifica um anticorpo anti-BCMA conforme descrito no presente documento.[073] The invention further relates to a cell that comprises a vector that comprises a polynucleotide that encodes an anti-BCMA antibody as described herein.

[074] A invenção refere-se também a um método para produzir um anticorpo, conforme descrito no presente documento, em que o método compreende cultivar uma célula (por exemplo, uma célula hospedeira) que compreende um polinucleotídeo que codifica um anticorpo anti-[074] The invention also relates to a method for producing an antibody, as described herein, wherein the method comprises culturing a cell (for example, a host cell) that comprises a polynucleotide that encodes an anti-

BCMA conforme descrito no presente documento, sob condições permissivas para a expressão da proteína, e isolar o anticorpo das células e/ou do meio de cultura celular. Numa modalidade, o método compreende imunizar um animal UniRat com BCMA e identificar sequências de anticorpo de cadeia pesada de ligação ao BCMA.BCMA as described in this document, under permissive conditions for protein expression, and isolating the antibody from cells and / or cell culture medium. In one embodiment, the method comprises immunizing a UniRat animal with BCMA and identifying BCMA-binding heavy chain antibody sequences.

[075] Estes e outros aspectos serão adicionalmente explicados no restante da revelação, incluindo os Exemplos.[075] These and other aspects will be further explained in the rest of the disclosure, including the Examples.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURASBRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

[076] A Figura 1 mostra as sequências de aminoácidos de CDR1, CDR2 e CDR3 de 35 anticorpos anti-BCMA apenas de cadeia pesada da invenção.[076] Figure 1 shows the amino acid sequences of CDR1, CDR2 and CDR3 of 35 anti-BCMA heavy chain antibodies of the invention only.

[077] A Figura 2 mostra as sequências de região variável de cadeia pesada de 35 anticorpos anti-BCMA apenas de cadeia pesada da invenção.[077] Figure 2 shows the heavy chain variable region sequences of 35 anti-BCMA heavy chain antibodies of the invention.

[078] A Figura 3 mostra a ligação de proteína de BCMA e linhagens de células que expressam BCMA. A Coluna 1 indica a ID de clone do anticorpo apenas de cadeia pesada (UniAb) testado. A Coluna 2 indica a concentração de UniAb expresso no sobrenadante. A Coluna 3 indica o sinal de base de desdobramento de ELISA da ligação de proteína de BCMA humana. A Coluna 4 indica o sinal de base de desdobramento de ELISA da ligação de proteína de IgG1κ humana. A Coluna 5 indica o sinal de base de desdobramento de ELISA da ligação de proteína lambda humana. A Coluna 6 indica o sinal de base de desdobramento de ELISA da ligação de proteína de albumina sérica humana. A Coluna 7 indica o sinal de base de desdobramento de ELISA da ligação de proteína de baculovírus. A Coluna 8 indica a porcentagem de bloqueio da proteína de ligante April à proteína de BCMA. A Coluna 9 indica a intensidade fluorescente média da ligação de célula a células RPMI-8226 que expressam BCMA sobre a superfície celular. A Coluna 10 indica a intensidade fluorescente média da ligação de célula a células[078] Figure 3 shows the binding of BCMA protein and cell lines expressing BCMA. Column 1 indicates the clone ID of the tested heavy chain only (UniAb) antibody. Column 2 indicates the concentration of UniAb expressed in the supernatant. Column 3 indicates the base ELISA splice signal from the human BCMA protein binding. Column 4 indicates the ELISA baseline signal of the human IgG1κ protein binding. Column 5 indicates the basic ELISA splice signal of human lambda protein binding. Column 6 indicates the basic ELISA splice signal of human serum albumin protein binding. Column 7 indicates the baseline ELISA splice signal of the baculovirus protein binding. Column 8 indicates the percentage of April ligand protein blocking to BCMA protein. Column 9 indicates the average fluorescent intensity of the cell binding to RPMI-8226 cells that express BCMA on the cell surface. Column 10 indicates the average fluorescent intensity of cell-to-cell binding

NCI-H929 que expressam BCMA sobre a superfície celular. A Coluna 11 indica a intensidade fluorescente média da ligação de célula a células HDLM2 que não expressam BCMA sobre a superfície celular.NCI-H929 that express BCMA on the cell surface. Column 11 indicates the average fluorescent intensity of cell binding to HDLM2 cells that do not express BCMA on the cell surface.

[079] A Figura 4 mostra a afinidade de ligação de anticorpo apenas de cadeia pesada anti-BCMA 308902 nas formas monovalente e bivalente, conforme medido por Interferometria BioLayer, usando um instrumento Octet QK384 (Fortebio Inc., Menlo Park, CA) no modo cinético. A afinidade de ligação (Kd) da forma monovalente foi de 779 pM e a Kd da forma bivalente foi de 53 pM.[079] Figure 4 shows the binding affinity of anti-BCMA 308902 heavy chain antibody in monovalent and divalent forms, as measured by BioLayer Interferometry, using an Octet QK384 instrument (Fortebio Inc., Menlo Park, CA) in mode kinetic. The binding affinity (Kd) of the monovalent form was 779 pM and the Kd of the bivalent form was 53 pM.

[080] A Figura 5 é uma ilustração gráfica de um construto de CAR- T de scFv, um construto de CAR-T de VH humano monoespecífico e um construto de CAR-T de VH humano biespecífico.[080] Figure 5 is a graphic illustration of a scFv CAR-T construct, a monospecific human VH CAR-T construct and a bispecific human VH CAR-T construct.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES PREFERENCIAISDETAILED DESCRIPTION OF PREFERENTIAL MODALITIES

[081] A prática da presente invenção vai empregar, a menos que indicado o contrário, as técnicas convencionais de biologia molecular (incluindo técnicas de recombinação), microbiologia, biologia celular, bioquímica e imunologia, as quais encontram-se dentro do estado da técnica. Tais técnicas são descritas por completo na literatura, tal como, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", segunda edição (Sambrook et al., 1989); "Oligonucleotide Synthesis" (M. J. Gait, ed., 1984); "Animal Cell Culture" (R. I. Freshney, ed., 1987); "Methods in Enzymology" (Academic Press, Inc.); "Current Protocols in Molecular Biology" (F. M. Ausubel et al., eds., 1987, e atualizações periódicas); "PCR: The Polymerase Chain Reaction", (Mullis et al., ed., 1994); "A Practical Guide to Molecular Cloning" (Perbal Bernard V., 1988); "Phage Display: A Laboratory Manual" (Barbas et al., 2001); Harlow, Lane e Harlow, Using Antibodies: A Laboratory Manual: Portable Protocol No. I, Cold Spring Harbor Laboratory (1998); e Harlow e Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory; (1988).[081] The practice of the present invention will employ, unless otherwise indicated, conventional techniques of molecular biology (including recombination techniques), microbiology, cell biology, biochemistry and immunology, which are within the state of the art. . Such techniques are described in full in the literature, such as, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", second edition (Sambrook et al., 1989); "Oligonucleotide Synthesis" (M. J. Gait, ed., 1984); "Animal Cell Culture" (R. I. Freshney, ed., 1987); "Methods in Enzymology" (Academic Press, Inc.); "Current Protocols in Molecular Biology" (F. M. Ausubel et al., Eds., 1987, and periodic updates); "PCR: The Polymerase Chain Reaction", (Mullis et al., Ed., 1994); "A Practical Guide to Molecular Cloning" (Perbal Bernard V., 1988); "Phage Display: A Laboratory Manual" (Barbas et al., 2001); Harlow, Lane and Harlow, Using Antibodies: A Laboratory Manual: Portable Protocol No. I, Cold Spring Harbor Laboratory (1998); and Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory; (1988).

[082] Em que uma faixa de valores é fornecida, é compreendido que cada valor interveniente, ao décimo da unidade do limite inferior, a menos que o contexto dite claramente de outra forma, entre os limites superior e inferior desta faixa e qualquer outro valor declarado ou interveniente nesta faixa declarada é abrangido pela invenção. Os limites superior e inferior destas faixas menores poderem independentemente ser incluídos nas faixas menores também é abrangido pela invenção, sujeito a qualquer limite especificamente excluído na faixa indicada. Nos casos em que a faixa mencionada inclui um ou ambos os limites, as faixas que excluem um ou ambos destes limites incluídos também estão incluídas na invenção.[082] Where a range of values is provided, it is understood that each intervening value, to the tenth of the unit of the lower limit, unless the context clearly dictates otherwise, between the upper and lower limits of this range and any other value declared or intervening in this declared range is covered by the invention. The upper and lower limits of these smaller ranges can independently be included in the smaller ranges is also covered by the invention, subject to any limit specifically excluded in the indicated range. In cases where the mentioned range includes one or both of the limits, the ranges that exclude one or both of these included limits are also included in the invention.

[083] Exceto onde indicado em contrário, os resíduos de anticorpos no presente documento são numerados de acordo com o sistema de numeração de Kabat (por exemplo, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).[083] Unless otherwise indicated, antibody residues in this document are numbered according to the Kabat numbering system (eg, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).

[084] Na seguinte descrição, inúmeros detalhes específicos são apresentados para fornecer uma compreensão mais completa da presente invenção. No entanto, ficará evidente para aqueles versados na técnica que a presente invenção pode ser praticada sem um ou mais destes detalhes específicos. Em outros casos, características bem conhecidas e procedimentos bem conhecidos por aqueles versados na técnica não foram descritos a fim de não obscurecer a invenção.[084] In the following description, numerous specific details are presented to provide a more complete understanding of the present invention. However, it will be apparent to those skilled in the art that the present invention can be practiced without one or more of these specific details. In other cases, well-known features and procedures well known to those skilled in the art have not been described in order not to obscure the invention.

[085] Todas referências citadas ao longo da divulgação, incluindo pedidos de patente e publicações, estão incorporadas ao presente documento a título de referência em sua totalidade. I. DEFINIÇÕES[085] All references cited throughout the disclosure, including patent applications and publications, are hereby incorporated by reference in their entirety for reference. I. DEFINITIONS

[086] O termo "compreender" significa que os elementos citados são necessários na composição/método/kit, mas outros elementos podem ser incluídos para formar a composição/método/kit etc. dentro do escopo da reivindicação.[086] The term "understand" means that the elements cited are necessary in the composition / method / kit, but other elements can be included to form the composition / method / kit etc. within the scope of the claim.

[087] O termo "consistir essencialmente em" significa uma limitação do escopo da composição ou método descrito aos materiais ou etapas especificadas que não afetam substancialmente a característica (ou características) básica e nova da presente invenção.[087] The term "consist essentially of" means a limitation of the scope of the composition or method described to the specified materials or steps that do not substantially affect the basic and novel characteristic (or characteristics) of the present invention.

[088] O termo "consistir em" significa a exclusão da composição, método ou kit de qualquer elemento, etapa ou ingrediente não especificado na reivindicação.[088] The term "consist of" means the exclusion of the composition, method or kit of any element, step or ingredient not specified in the claim.

[089] O termo "anticorpo monoclonal", como usado neste documento, se refere a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, isto é, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos exceto pelas mutações de ocorrência natural possíveis podem estar presentes em quantidades menores. Os anticorpos monoclonais são altamente específicos, sendo diretamente contra a um sítio antigênico único. Adicionalmente, em contraste com as preparações de anticorpo (policlonal) convencionais que tipicamente incluem diferentes anticorpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal é dirigido contra um único determinante no antígeno.[089] The term "monoclonal antibody", as used herein, refers to an antibody obtained from a population of substantially homogeneous antibodies, that is, the individual antibodies that comprise the population are identical except for possible naturally occurring mutations may be present in smaller quantities. Monoclonal antibodies are highly specific, being directly against a single antigenic site. In addition, in contrast to conventional (polyclonal) antibody preparations that typically include different antibodies directed against different determinants (epitopes), each monoclonal antibody is directed against a single determinant in the antigen.

[090] Os termos "anticorpo apenas de cadeia pesada", "anticorpo de cadeia pesada" e "UniAb" são usados intercambiavelmente e se referem, no sentido mais amplo, a anticorpos desprovidos da cadeia leve de um anticorpo convencional. Uma vez que os UniAbs homodiméricos são desprovidos de uma cadeia leve e, desta forma, um domínio VL, o antígeno é reconhecido por um único domínio, isto é, o domínio variável da cadeia pesada de um anticorpo de cadeia pesada (VH). O termo inclui especificamente, sem limitação, anticorpos homodiméricos que compreendem o domínio de ligação ao antígeno VH e os domínios constantes CH2 e CH3, na ausência do domínio CH1; variantes funcionais (ligação ao antígeno) de tais anticorpos, variantes[090] The terms "heavy chain antibody only", "heavy chain antibody" and "UniAb" are used interchangeably and refer, in the broadest sense, to antibodies devoid of the light chain of a conventional antibody. Since homodimeric UniAbs are devoid of a light chain and thus a VL domain, the antigen is recognized by a single domain, that is, the heavy chain variable domain of a heavy chain antibody (VH). The term specifically includes, without limitation, homodimeric antibodies comprising the VH antigen binding domain and the constant domains CH2 and CH3, in the absence of the CH1 domain; functional variants (antigen binding) of such antibodies, variants

VH solúveis, Ig-NAR que compreende um homodímero de um domínio variável (V-NAR) e cinco domínios constantes do tipo C (C-NAR) e fragmentos funcionais dos mesmos; e anticorpos solúveis de domínio único (sUniDabs). Numa modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada é composto do domínio de ligação ao antígeno de região variável composto da estrutura 1, CDR1, estrutura 2, CDR2, estrutura 3, CDR3, e estrutura 4. Numa modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada é composto de um domínio de ligação ao antígeno, pelo menos parte de uma região de dobradiça e domínios CH2 e CH3. Numa outra modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada é composto de um domínio de ligação ao antígeno, pelo menos parte de uma região de dobradiça e um domínio CH2. Numa modalidade adicional, o anticorpo apenas de cadeia pesada é composto de um domínio de ligação ao antígeno, pelo menos parte de uma região de dobradiça e um domínio CH3. Os anticorpos apenas de cadeia pesada em que o domínio CH2 e/ou CH3 estão truncados também estão incluídos no presente documento.Soluble VH, Ig-NAR comprising a variable domain homodimer (V-NAR) and five type C constant domains (C-NAR) and functional fragments thereof; and soluble single domain antibodies (sUniDabs). In one embodiment, the heavy chain only antibody is composed of the variable region antigen binding domain composed of structure 1, CDR1, structure 2, CDR2, structure 3, CDR3, and structure 4. In one embodiment, the heavy chain only antibody it is composed of an antigen binding domain, at least part of a hinge region and CH2 and CH3 domains. In another embodiment, the heavy chain only antibody is composed of an antigen binding domain, at least part of a hinge region and a CH2 domain. In a further embodiment, the heavy chain only antibody is composed of an antigen binding domain, at least part of a hinge region and a CH3 domain. Heavy chain-only antibodies in which the CH2 and / or CH3 domain are truncated are also included herein.

Numa modalidade adicional, a cadeia pesada é composta de um domínio de ligação ao antígeno e pelo menos um domínio CH (CH1, CH2, CH3 ou CH4), mas nenhuma região de dobradiça.In an additional embodiment, the heavy chain is composed of an antigen-binding domain and at least one CH domain (CH1, CH2, CH3 or CH4), but no hinge region.

O anticorpo apenas de cadeia pesada pode ser sob a forma de um dímero, em que duas cadeias pesadas são ligadas umas às outras por dissulfeto de outro modo, covalentemente ou não covalentemente.The heavy chain only antibody can be in the form of a dimer, wherein two heavy chains are linked to each other by disulfide in another way, covalently or non-covalently.

O anticorpo apenas da cadeia pesada pode pertencer à subclasse de IgG, mas os anticorpos que pertencem a outras subclasses, como a subclasse IgM, IgA, IgD e IgE, também estão incluídos no presente documento.The antibody only of the heavy chain may belong to the IgG subclass, but antibodies that belong to other subclasses, such as the IgM, IgA, IgD and IgE subclass, are also included in this document.

Numa modalidade particular, o anticorpo de cadeia pesada é do subtipo IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4, em particular, subtipo IgG1. Numa modalidade, os anticorpos apenas de cadeia pesada no presente documento são usados como um domínio de ligação (alvejamento) de um receptor de antígeno quimérico (CAR).In a particular embodiment, the heavy chain antibody is of the IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4 subtype, in particular, IgG1 subtype. In one embodiment, the heavy chain only antibodies in this document are used as a binding (targeting) domain for a chimeric antigen receptor (CAR).

[091] O termo "BCMA", conforme usado no presente documento, se refere ao antígeno de maturação de célula B humana, também conhecido como BCMA, CD269 e TNFRSF17 (UniProt Q02223), que é um membro da superfamília de receptor de necrose de tumor que é preferencialmente expresso em células plasmáticas diferenciadas. O domínio extracelular de BCMA humano consiste, de acordo com UniProt, em aminoácidos 1 a 54 (ou 5 a 51).[091] The term "BCMA", as used herein, refers to the human B cell maturation antigen, also known as BCMA, CD269 and TNFRSF17 (UniProt Q02223), which is a member of the necrosis receptor superfamily tumor that is preferably expressed in differentiated plasma cells. The extracellular domain of human BCMA consists, according to UniProt, of amino acids 1 to 54 (or 5 to 51).

[092] Os termos "anticorpo apenas de cadeia pesada anti-BCMA" e "anticorpo apenas de cadeia pesada BCMA" são usados no presente documento para se referir a um anticorpo apenas de cadeia pesada, conforme definido acima no presente documento, que se liga imunoespecificamente ao BCMA.[092] The terms "anti-BCMA heavy chain antibody only" and "BCMA heavy chain antibody only" are used herein to refer to a heavy chain only antibody, as defined above in this document, which binds immunospecifically to BCMA.

[093] O termo "variável", como usado em conexão com anticorpos, se refere ao fato de que certas porções dos domínios variáveis de anticorpo se diferem extensivamente em sequência entre anticorpos e são usadas na ligação e especificidade de cada anticorpo particular para seu antígeno particular. No entanto, a variabilidade não está distribuída uniformemente pelos domínios variáveis de anticorpos. A mesma está concentrada em três segmentos chamados regiões hipervariáveis tanto nos domínios variáveis de cadeia leve como de cadeia pesada. As porções mais altamente conservadas de domínios variáveis são chamadas regiões de estrutura (FRs). Os domínios variáveis de cadeias leves e pesadas nativas compreendem, cada um, quatro FRs, que adotam amplamente uma configuração β-folha, conectada por três regiões hipervariáveis, que formam alças que conectam, e em alguns casos, formam parte da estrutura de β-folha. As regiões hipervariáveis em cada cadeia são mantidas juntas nas proximidades das FR e, com as regiões hipervariáveis da outra cadeia, contribuem para a formação do sítio de ligação ao antígeno de anticorpos (ver Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª edição, Public[093] The term "variable", as used in connection with antibodies, refers to the fact that certain portions of the variable antibody domains differ extensively in sequence between antibodies and are used in the binding and specificity of each particular antibody to its antigen private. However, the variability is not evenly distributed across the variable domains of antibodies. It is concentrated in three segments called hypervariable regions in both light and heavy chain variable domains. The most highly conserved portions of variable domains are called structure regions (FRs). The variable domains of native light and heavy chains each comprise four FRs, which widely adopt a β-leaf configuration, connected by three hypervariable regions, which form loops that connect, and in some cases, form part of the structure of β- leaf. The hypervariable regions in each chain are kept together in the vicinity of the FR and, with the hypervariable regions in the other chain, contribute to the formation of the antibody antigen binding site (see Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th edition, Public

Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Os domínios constantes não estão envolvidos diretamente na ligação de um anticorpo a um antígeno, mas exibem diversas funções efetoras, como a participação do anticorpo na citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC).Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). The constant domains are not directly involved in the binding of an antibody to an antigen, but exhibit several effector functions, such as the participation of the antibody in antibody-dependent cell cytotoxicity (ADCC).

[094] O termo "região hipervariável", quando usado no presente documento, se refere aos resíduos de aminoácido de um anticorpo que são responsáveis pela ligação ao antígeno. A região hipervariável geralmente compreende resíduos de aminoácidos de uma "região determinante de complementaridade" ou "CDR" (por exemplo, resíduos 31-35 (H1), 50-65 (H2) e 95-102 (H3) no domínio variável de cadeia pesada; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª edição, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) e/ou aqueles resíduos de uma "alça hipervariável", resíduos 26-32 (H1), 53-55 (H2) e 96-101 (H3) no domínio variável de cadeia pesada; Chothia e Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987). Os resíduos de "região de estrutura" ou "FR" são aqueles resíduos de domínio variável além dos resíduos de região hipervariável conforme definido no presente documento.[094] The term "hypervariable region", when used in this document, refers to the amino acid residues of an antibody that are responsible for binding to the antigen. The hypervariable region generally comprises amino acid residues from a "complementarity determining region" or "CDR" (for example, residues 31-35 (H1), 50-65 (H2) and 95-102 (H3) in the chain variable domain Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th edition, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) and / or those residues from a "hypervariable loop", residues 26-32 (H1), 53-55 (H2) and 96-101 (H3) in the heavy chain variable domain; Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987). "Structure region" or "FR" residues are residues of variable domain in addition to residues of hypervariable region as defined in this document.

[095] As designações de CDR exemplificativas são mostradas no presente documento, no entanto, um versado na técnica entenderá que várias definições das CDRs estão comumente em uso, incluindo a definição de Kabat (ver "Zhao et al. A germline knowledge based computational approach for determining antibody complementarity determining regions". Mol Immunol. 2010;47:694–700), que é com base na variabilidade de sequência e é mais comumente usada. A definição de Chothia é com base na localização das regiões de alça estruturais (Chothia et al. "Conformations of immunoglobulin hypervariable regions". Nature. 1989; 342:877-883. As definições de CDR alternativas de interesse incluem, sem limitação, aquelas divulgadas por Honegger,[095] Exemplary CDR designations are shown in this document, however, one skilled in the art will understand that several definitions of CDRs are commonly in use, including the Kabat definition (see "Zhao et al. A germline knowledge based computational approach for determining antibody complementarity determining regions ". Mol Immunol. 2010; 47: 694–700), which is based on sequence variability and is most commonly used. Chothia's definition is based on the location of structural loop regions (Chothia et al. "Conformations of immunoglobulin hypervariable regions". Nature. 1989; 342: 877-883. Alternative CDR definitions of interest include, without limitation, those released by Honegger,

"Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool". J Mol Biol. 2001;309:657–670; Ofran et al. "Automated identification of complementarity determining regions (CDRs) reveals peculiar characteristics of CDRs and B cell epitopes". J Immunol. 2008;181:6230–6235; Almagro "Identification of differences in the specificity-determining residues of antibodies that recognize antigens of different size: implications for the rational design of antibody repertoires". J Mol Recognit. 2004;17:132–143; e Padlanet al. "Identification of specificity-determining residues in antibodies". Faseb J. 1995;9:133–139., cada uma destas está especificamente incorporada a título de referência no presente documento."Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool". J Mol Biol. 2001; 309: 657–670; Ofran et al. "Automated identification of complementarity determining regions (CDRs) reveals peculiar characteristics of CDRs and B cell epitopes". J Immunol. 2008; 181: 6230–6235; Almagro "Identification of differences in the specificity-determining residues of antibodies that recognize antigens of different size: implications for the rational design of antibody repertoires". J Mol Recognit. 2004; 17: 132–143; and Padlanet al. "Identification of specificity-determining residues in antibodies". Faseb J. 1995; 9: 133–139., Each of which is specifically incorporated by reference in this document.

[096] O termo "2 (duas) ou menos substituições" numa sequência de aminoácidos é usado no presente documento de modo a significar 2 (duas), 1 (uma) ou 0 (zero) substituições na sequência de aminoácidos de referência.[096] The term "2 (two) or less substitutions" in an amino acid sequence is used herein to mean 2 (two), 1 (one) or 0 (zero) substitutions in the reference amino acid sequence.

[097] A "porcentagem (%) de identidade de sequência de aminoácidos" no que diz respeito a uma sequência de polipeptídeos de referência é definida como a porcentagem de resíduos de aminoácidos numa sequência candidata que são idênticos aos resíduos de aminoácidos na sequência de polipeptídeos de referência, após alinhamento das sequências e introdução de intervalos, se necessário, para se alcançar a máxima identidade de percentagem de sequência, e não considerando quaisquer substituições conservativas como parte da identidade de sequência. O alinhamento para propósitos de determinação da porcentagem de identidade de sequência de aminoácidos pode ser alcançado de vários modos que estão dentro da habilidade na técnica, por exemplo, usando um software de computador comercialmente disponível tal como o software BLAST, BLAST-2, ALIGN ou Megalign (DNASTAR). Aqueles versados na técnica podem determinar os parâmetros apropriados para alinhar as sequências,[097] The "percentage (%) of amino acid sequence identity" with respect to a reference polypeptide sequence is defined as the percentage of amino acid residues in a candidate sequence that are identical to the amino acid residues in the polypeptide sequence reference, after alignment of the sequences and insertion of intervals, if necessary, to achieve maximum sequence percent identity, and not considering any conservative substitutions as part of the sequence identity. Alignment for purposes of determining the percentage of amino acid sequence identity can be achieved in a number of ways that are within the skill of the art, for example, using commercially available computer software such as BLAST, BLAST-2, ALIGN or Megalign (DNASTAR). Those skilled in the art can determine the appropriate parameters for aligning the sequences,

incluindo quaisquer algoritmos necessários para alcançar o alinhamento máximo ao longo do comprimento total das sequências sendo comparadas. Para os propósitos no presente documento, entretanto, a % de valores de identidade de sequência de aminoácidos é gerada com o uso do programa de computador de comparação de sequências ALIGN-2.including any algorithms needed to achieve maximum alignment over the total length of the strings being compared. For the purposes of this document, however, the% amino acid sequence identity values are generated using the ALIGN-2 sequence comparison computer program.

[098] Um anticorpo "isolado" é um que foi identificado e separado e/ou recuperado de um componente de seu ambiente natural. Os componentes contaminantes de seu ambiente natural são materiais que interfeririam nos usos de diagnóstico ou terapêuticos para o anticorpo, e podem incluir enzimas, hormônios e outros solutos proteicos ou não proteicos. Em modalidades preferenciais, o anticorpo será purificado (1) a mais de 95% em peso do anticorpo, conforme determinado pelo método de Lowry e, mais preferencialmente, mais de 99% em peso, (2) a um grau suficiente para obter pelo menos 15 resíduos de sequência de aminoácidos N-terminal ou interna através do uso de um sequenciador de copo giratório ou (3) à homogeneidade por SDS-PAGE sob condições de redução ou não redução usando corante Coomassie azul ou, preferencialmente, prata. O anticorpo isolado inclui o anticorpo in situ dentro de células recombinantes, visto que pelo menos um componente do ambiente natural do anticorpo não estará presente. Normalmente, no entanto, o anticorpo isolado será preparado por pelo menos uma etapa de purificação.[098] An "isolated" antibody is one that has been identified and separated and / or recovered from a component of its natural environment. The contaminating components of its natural environment are materials that would interfere with the diagnostic or therapeutic uses for the antibody, and may include enzymes, hormones and other protein or non-protein solutes. In preferred embodiments, the antibody will be purified (1) to more than 95% by weight of the antibody, as determined by the Lowry method and, more preferably, more than 99% by weight, (2) to a degree sufficient to obtain at least 15 residues of N-terminal or internal amino acid sequence through the use of a rotating cup sequencer or (3) homogeneity by SDS-PAGE under conditions of reduction or non-reduction using Coomassie dye blue or, preferably, silver. The isolated antibody includes the antibody in situ within recombinant cells, since at least one component of the antibody's natural environment will not be present. Usually, however, the isolated antibody will be prepared by at least one purification step.

[099] Os anticorpos da invenção incluem anticorpos multiespecíficos. Os anticorpos multiespecíficos têm mais de uma especificidade de ligação. O termo "multiespecífico" inclui especificamente "biespecífico" e "triespecífico", bem como afinidades de ligação específica independentes de ordem superior, como especificidade poliepitópica de ordem superior, bem como anticorpos tetravalentes e fragmentos de anticorpos. Os anticorpos[099] The antibodies of the invention include multispecific antibodies. Multispecific antibodies have more than one binding specificity. The term "multispecific" specifically includes "bispecific" and "triespecific", as well as independent higher-order specific binding affinities, such as higher-order polyepitopic specificity, as well as tetravalent antibodies and antibody fragments. Antibodies

"multiespecíficos" incluem especificamente anticorpos que compreendem uma combinação de diferentes entidades de ligação, bem como anticorpos que compreendem mais do que uma da mesma entidade de ligação. Os termos "anticorpo multiespecífico", "anticorpo apenas de cadeia única multiespecífico" e "UniAb multiespecífico" são usados no presente documento no sentido mais amplo e abrangem todos os anticorpos com mais de uma especificidade de ligação."multispecific" specifically include antibodies that comprise a combination of different binding entities, as well as antibodies that comprise more than one of the same binding entity. The terms "multispecific antibody", "multispecific single chain antibody only" and "multispecific UniAb" are used herein in the broadest sense and encompass all antibodies with more than one binding specificity.

[0100] O termo "valente", tal como utilizado neste documento, refere-se a um número especificado de sítio de ligação numa molécula de anticorpo.[0100] The term "brave", as used in this document, refers to a specified number of binding sites on an antibody molecule.

[0101] Um anticorpo "multivalente" tem dois ou mais sítios de ligação. Desta forma, os termos "bivalente", "trivalente" e "tetravalente" se referem à presença de dois sítios de ligação, três sítios de ligação e quatro sítios de ligação, respectivamente. Desta forma, um anticorpo biespecífico de acordo com a invenção é pelo menos bivalente e pode ser trivalente, tetravalente ou de outro modo multivalente.[0101] A "multivalent" antibody has two or more binding sites. Thus, the terms "bivalent", "trivalent" and "tetravalent" refer to the presence of two binding sites, three binding sites and four binding sites, respectively. In this way, a bispecific antibody according to the invention is at least bivalent and can be trivalent, tetravalent or otherwise multivalent.

[0102] Uma grande variedade de métodos e configurações proteicas é conhecida e usada para a preparação de anticorpos monoclonais biespecíficos (BsMAB), anticorpos triespecíficos e similares.[0102] A wide variety of protein methods and configurations are known and used for the preparation of bispecific monoclonal antibodies (BsMAB), triespecific antibodies and the like.

[0103] O termo "molécula semelhante a anticorpo biespecífico de três cadeias" ou "TCA" é usado no presente documento para se referir a moléculas semelhantes a anticorpo que compreendem, consistem essencialmente em ou consistem em três subunidades polipeptídicas, duas das quais compreendem, consistem essencialmente em, ou consistem numa cadeia pesada e uma cadeia leve de um anticorpo monoclonal, ou fragmentos funcionais de ligação ao antígeno de tais cadeias de anticorpo, que compreendem uma região de ligação ao antígeno e pelo menos um domínio CH. Este par de cadeia pesada/cadeia leve tem especificidade de ligação para um primeiro antígeno. A terceira subunidade polipeptídica compreende, consiste essencialmente em ou consiste num anticorpo apenas de cadeia pesada que compreende uma porção Fc que compreende domínios CH2 e/ou CH3 e/ou CH4, na ausência de um domínio CH1, e um domínio de ligação ao antígeno que se liga a um epítopo de um segundo antígeno ou um epítopo diferente do primeiro antígeno, em que tal domínio de ligação é derivado de ou tem identidade de sequência com a região variável de uma cadeia pesada ou leve de anticorpo. Partes de tal região variável podem ser codificadas por segmentos de gene VH e/ou VL, segmentos de gene D e JH, ou segmentos de gene JL. A região variável pode ser codificada por segmentos de VHDJH, VLDJH, VHJL ou VLJL rearranjados. Uma proteína TCA usa um anticorpo apenas de cadeia pesada conforme definido acima no presente documento.[0103] The term "bispecific three-chain antibody-like molecule" or "TCA" is used herein to refer to antibody-like molecules that comprise, essentially consist of or consist of three polypeptide subunits, two of which comprise, they essentially consist of, or consist of, a heavy chain and a light chain of a monoclonal antibody, or antigen-binding fragments of such antibody chains, which comprise an antigen-binding region and at least one CH domain. This heavy chain / light chain pair has binding specificity for a first antigen. The third polypeptide subunit comprises, consists essentially of or consists of a heavy chain only antibody comprising an Fc portion comprising CH2 and / or CH3 and / or CH4 domains, in the absence of a CH1 domain, and an antigen binding domain that binds to an epitope of a second antigen or an epitope other than the first antigen, wherein such a binding domain is derived from or has sequence identity with the variable region of an antibody heavy or light chain. Parts of such a variable region can be encoded by VH and / or VL gene segments, D and JH gene segments, or JL gene segments. The variable region can be coded by rearranged VHDJH, VLDJH, VHJL or VLJL segments. A TCA protein uses a heavy chain only antibody as defined above in this document.

[0104] O termo "receptor de antígeno quimérico" ou "CAR" é usado no presente documento no sentido mais amplo para se referir a um receptor modificado geneticamente, que enxerta uma especificidade de ligação desejada (por exemplo, a região de ligação ao antígeno de um anticorpo monoclonal ou outro ligando) e domínios de sinalização intracelular e de espalhamento de membrana. Tipicamente, o receptor é usado para enxertar a especificidade de um anticorpo monoclonal numa célula T para criar um receptor de antígeno quimérico (CAR). (J Natl Cancer Inst, 2015; 108(7):dvj439; e Jackson et al., Nature Reviews Clinical Oncology, 2016; 13:370–383.) Construtos de CAR-T monoespecíficos e biespecíficos representativos que compreendem um domínio de ligação extracelular de VH humano são mostrados na Figura 5, em comparação com um construto de CAR-T de scFv.[0104] The term "chimeric antigen receptor" or "CAR" is used in this document in the broadest sense to refer to a genetically modified receptor that grafts a desired binding specificity (for example, the antigen binding region monoclonal antibody or other ligand) and intracellular signaling and membrane spreading domains. Typically, the receptor is used to engraft the specificity of a monoclonal antibody into a T cell to create a chimeric antigen (CAR) receptor. (J Natl Cancer Inst, 2015; 108 (7): dvj439; and Jackson et al., Nature Reviews Clinical Oncology, 2016; 13: 370–383.) Representative monospecific and bispecific CAR-T constructs that comprise a binding domain extracellular human VH are shown in Figure 5, compared to a scFv CAR-T construct.

[0105] Por "idiotipo humano" se entende um epítopo de sequência polipeptídica presente num anticorpo humano na região variável de cadeia pesada e/ou leve da imunoglobulina. O termo "idiotipo humano", tal como utilizado neste documento, inclui sequências de ocorrência natural de um anticorpo humano, bem como sequências sintéticas substancialmente idênticas ao polipeptídeo encontrado em anticorpos humanos de ocorrência natural. Por "substancialmente" se entende que o grau de identidade da sequência de aminoácidos é de pelo menos cerca de 85% a 95%. Preferencialmente, o grau de identidade da sequência de aminoácidos é superior a 90%, mais preferencialmente, superior a 95%.[0105] By "human idiotype" is meant an epitope of polypeptide sequence present in a human antibody in the variable region of heavy and / or light chain immunoglobulin. The term "human idiotype", as used herein, includes naturally occurring sequences from a human antibody, as well as synthetic sequences substantially identical to the polypeptide found in naturally occurring human antibodies. By "substantially" is meant that the degree of identity of the amino acid sequence is at least about 85% to 95%. Preferably, the degree of identity of the amino acid sequence is greater than 90%, more preferably, greater than 95%.

[0106] Por "anticorpo quimérico" ou "imunoglobulina quimérica" entende-se uma molécula de imunoglobulina compreendendo sequências de aminoácidos de pelo menos dois loci de Ig diferentes, por exemplo, um anticorpo transgênico compreendendo uma porção codificada por um locus de Ig humana e uma porção codificada por um locus de Ig de rato. Os anticorpos quiméricos incluem anticorpos transgênicos com regiões Fc não humanas ou regiões Fc artificiais, e idiotipos humanos. Tais imunoglobulinas podem ser isoladas dos animais da invenção que foram modificados geneticamente para produzir tais anticorpos quiméricos.[0106] By "chimeric antibody" or "chimeric immunoglobulin" is meant an immunoglobulin molecule comprising amino acid sequences from at least two different Ig loci, for example, a transgenic antibody comprising a portion encoded by a human Ig locus and a portion encoded by a mouse Ig locus. Chimeric antibodies include transgenic antibodies with non-human Fc regions or artificial Fc regions, and human idiotypes. Such immunoglobulins can be isolated from animals of the invention that have been genetically modified to produce such chimeric antibodies.

[0107] As "funções efetoras" de anticorpo se referem àquelas atividades biológicas atribuíveis à região Fc (uma região Fc de sequência nativa ou região Fc variante de sequência de aminoácidos) de um anticorpo. Os exemplos de funções efetoras de anticorpo incluem a ligação de C1q, a citotoxicidade dependente de complemento; a ligação de receptor de Fc; a citotoxicidade mediata por célula dependente de anticorpo (ADCC); a fagocitose; a regulação descendente de receptores de superfície celular (por exemplo, receptor de célula B; BCR), etc.[0107] Antibody "effector functions" refer to those biological activities attributable to the Fc region (a native sequence Fc region or amino acid sequence variant Fc region) of an antibody. Examples of antibody effector functions include C1q binding, complement-dependent cytotoxicity; binding of Fc receptor; antibody-dependent cell mediated cytotoxicity (ADCC); phagocytosis; downward regulation of cell surface receptors (eg B cell receptor; BCR), etc.

[0108] "Citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo" e "ADCC" se referem a uma reação mediada por células na qual células citotóxicas não específicas que expressam receptores Fc (FcRs) (por exemplo, células Exterminadoras Naturais (NK), neutrófilos e macrófagos) reconhecem anticorpo ligado numa célula-alvo e subsequentemente causam lise da célula-alvo. As células primárias para mediar ADCC, células NK, expressam FcγRIII apenas, enquanto monócitos expressam FcγRI, FcγRII e FcγRIII. A expressão de FcR em células hematopoiéticas está resumida na Tabela 3 na página 464 de Ravetch e Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991). Para avaliar a atividade de ADCC de uma molécula de interesse, pode ser realizado um ensaio ADCC in vitro, como aquele descrito na patente US n°[0108] "Antibody dependent cell-mediated cytotoxicity" and "ADCC" refer to a cell-mediated reaction in which non-specific cytotoxic cells that express Fc receptors (FcRs) (eg, Natural Exterminating cells (NK), neutrophils and macrophages) recognize antibody bound to a target cell and subsequently cause lysis of the target cell. The primary cells to mediate ADCC, NK cells, express FcγRIII only, while monocytes express FcγRI, FcγRII and FcγRIII. FcR expression in hematopoietic cells is summarized in Table 3 on page 464 by Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9: 457-92 (1991). To assess the ADCC activity of a molecule of interest, an in vitro ADCC assay, such as that described in US patent no.

5.500.362 ou 5.821.337. As células efetoras úteis para tais ensaios incluem células mononucleares de sangue periférico (PBMC) e células exterminadoras naturais (NK). Alternativa ou adicionalmente, a atividade de ADCC da molécula de interesse pode ser avaliada in vivo, por exemplo, num modelo animal, tal como aquele divulgado em Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998).5,500,362 or 5,821,337. Effector cells useful for such assays include peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and natural killer cells (NK). Alternatively or additionally, the ADCC activity of the molecule of interest can be assessed in vivo, for example, in an animal model, such as that disclosed in Clynes et al. PNAS (USA) 95: 652-656 (1998).

[0109] "Células efetoras humanas" são leucócitos que expressam um ou mais FcRs e realizam funções efetoras. Preferencialmente, as células expressam pelo menos FcγRIII e realizam a função efetora de ADCC. Os exemplos de leucócitos humanos que mediam ADCC incluem células mononucleares de sangue periférico (PBMC), células exterminadoras naturais (NK), monócitos, células T citotóxicas e neutrófilos; com células PBMCs e NK sendo preferenciais. As células efetoras podem ser isoladas a partir de uma fonte nativa das mesmas, por exemplo, de sangue ou PBMCs, conforme descrito no presente documento.[0109] "Human effector cells" are leukocytes that express one or more FcRs and perform effector functions. Preferably, the cells express at least FcγRIII and perform the ADCC effector function. Examples of human leukocytes that mediate ADCC include peripheral blood mononuclear cells (PBMC), natural killer cells (NK), monocytes, cytotoxic T cells and neutrophils; with PBMCs and NK cells being preferred. Effector cells can be isolated from a native source, for example, from blood or PBMCs, as described in this document.

[0110] "Citotoxicidade dependente de complemento" ou "CDC" se refere à capacidade de uma molécula para lisar um alvo na presença de complemento. A via de ativação de complemento é iniciada pela ligação do primeiro componente do sistema complemento (C1q) a uma molécula (por exemplo, um anticorpo) complexada com um antígeno cognato. Para avaliar a ativação de complemento, pode ser realizado um ensaio de CDC, e.g. conforme descrito em Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996), pode ser realizado.[0110] "Complement-dependent cytotoxicity" or "CDC" refers to the ability of a molecule to lyse a target in the presence of complement. The complement activation pathway is initiated by binding the first component of the complement system (C1q) to a molecule (for example, an antibody) complexed with a cognate antigen. To assess complement activation, a CDC assay can be performed, e.g. as described in Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996), can be performed.

[0111] "Afinidade de ligação" se refere, de modo geral, à intensidade do total de soma de interações não covalentes entre um único sítio de ligação de uma molécula (por exemplo, um anticorpo) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). A não ser que indicado de outro modo, conforme usado no presente documento, "afinidade de ligação" se refere à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação a 1:1 entre membros de um par de ligação (por exemplo, anticorpo e antígeno). A afinidade de uma molécula X para seu parceiro Y pode geralmente ser representada pela constante de dissociação (Kd). Afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica. Os anticorpos de baixa afinidade geralmente se ligam ao antígeno lentamente e tendem a se dissociar prontamente, enquanto que os anticorpos de alta afinidade geralmente se ligam ao antígeno mais rapidamente e tendem a permanecer ligados.[0111] "Binding affinity" refers, in general, to the intensity of the total sum of non-covalent interactions between a single binding site of a molecule (for example, an antibody) and its binding partner (for example, an antigen). Unless otherwise indicated, as used herein, "binding affinity" refers to the intrinsic binding affinity that reflects a 1: 1 interaction between members of a binding pair (for example, antibody and antigen) . The affinity of a molecule X for its partner Y can generally be represented by the dissociation constant (Kd). Affinity can be measured by common methods known in the art. Low-affinity antibodies generally bind to the antigen slowly and tend to dissociate readily, while high-affinity antibodies generally bind to the antigen more quickly and tend to remain bound.

[0112] Como usado neste documento, a "Kd" ou "valor de Kd" se refere a uma constante de dissociação determinada por Interferometria BioLayer, usando um instrumento Octet QK384 (Fortebio Inc., Menlo Park, CA) no modo cinético. Por exemplo, os sensores Fc anticamundongo são carregados com antígeno fundido a Fc de camundongo e, então, mergulhados em poços contendo anticorpos para medir as taxas de associação dependentes de concentração (kon). As taxas de dissociação do anticorpo (koff) são medidas na etapa final, em que os sensores são mergulhados em poços contendo apenas tampão. A Kd é a razão de koff/kon. (Para mais detalhes ver Concepcion, J, et al., Comb Chem High Throughput Screen, 12(8), 791- 800, 2009).[0112] As used in this document, the "Kd" or "Kd value" refers to a dissociation constant determined by BioLayer Interferometry, using an Octet QK384 instrument (Fortebio Inc., Menlo Park, CA) in kinetic mode. For example, anti-mouse Fc sensors are loaded with antigen fused to mouse Fc and then immersed in wells containing antibodies to measure concentration-dependent association (kon) rates. The antibody dissociation rates (koff) are measured in the final step, in which the sensors are immersed in wells containing only buffer. Kd is the koff / kon ratio. (For more details see Concepcion, J, et al., Comb Chem High Throughput Screen, 12 (8), 791- 800, 2009).

[0113] Um "epítopo" é o sítio sobre a superfície de uma molécula de antígeno ao qual uma única molécula de anticorpo se liga. Geralmente,[0113] An "epitope" is the site on the surface of an antigen molecule to which a single antibody molecule binds. Usually,

um antígeno tem vários ou muitos epítopos diferentes e reage com muitos anticorpos diferentes. O termo inclui especificamente epítopos lineares e epítopos conformacionais.an antigen has several or many different epitopes and reacts with many different antibodies. The term specifically includes linear epitopes and conformational epitopes.

[0114] "Mapeamento de epítopo" é o processo de identificar os sítios de ligação ou epítopos de anticorpos em seus antígenos-alvo. Os epítopos de anticorpo podem ser epítopos lineares ou epítopos conformacionais. Os epítopos lineares são formados por uma sequência contínua de aminoácidos numa proteína. Os epítopos conformacionais são formados por aminoácidos que são descontínuos na sequência proteica, mas que são reunidos após o enovelamento da proteína em sua estrutura tridimensional.[0114] "Epitope mapping" is the process of identifying antibody binding sites or epitopes on their target antigens. The antibody epitopes can be linear epitopes or conformational epitopes. Linear epitopes are formed by a continuous sequence of amino acids in a protein. Conformational epitopes are formed by amino acids that are discontinuous in the protein sequence, but that are brought together after the protein folds into its three-dimensional structure.

[0115] "Especificidade poliepitópica" se refere à capacidade de se ligar especificamente a dois ou mais epítopos diferentes no mesmo alvo ou em alvo (ou alvos) diferente (ou diferentes).[0115] "Poliepitopic specificity" refers to the ability to specifically bind to two or more different epitopes on the same target or on a different (or different) target (or targets).

[0116] Um anticorpo liga "essencialmente o mesmo epítopo" como um anticorpo de referência, quando os dois anticorpos reconhecem epítopos idênticos ou sobreponíveis estereoquimicamente. Os métodos mais amplamente utilizados e rápidos para determinar se dois epítopos se ligam a epítopos idênticos ou estereotipados são ensaios de competição, que podem ser configurados em todos os diferentes formatos, usando antígeno marcado ou anticorpo marcado. Normalmente, o antígeno é imobilizado numa placa de 96 poços e a capacidade de anticorpos não marcados para bloquear a ligação de anticorpos marcados é medida usando marcadores radioativos ou enzimáticos.[0116] An antibody binds "essentially the same epitope" as a reference antibody, when the two antibodies recognize stereochemically identical or overlapping epitopes. The most widely used and fastest methods for determining whether two epitopes bind to identical or stereotyped epitopes are competition assays, which can be configured in all different formats, using either labeled antigen or labeled antibody. Normally, the antigen is immobilized on a 96-well plate and the ability of unlabeled antibodies to block binding of labeled antibodies is measured using radioactive or enzymatic labels.

[0117] Os termos "tratamento", "tratar" e similares são usados no presente documento para significar, de modo geral, obter um efeito farmacológico e/ou fisiológico desejado. O efeito pode ser profilático em termos de prevenir completa ou parcialmente uma doença ou sintoma da mesma e/ou pode ser terapêutico em termos de cura parcial ou completa para uma doença e/ou efeito adverso atribuível à doença. "Tratamento", como usado no presente documento, abrange qualquer tratamento de uma doença num mamífero e inclui: (a) a prevenção da ocorrência da doença num sujeito que pode estar predisposto à doença, mas ainda não foi diagnosticado como tendo a mesma; (b) inibição da doença, isto é, impedindo seu desenvolvimento; ou (c) alívio da doença, isto é, provocando a regressão da doença. O agente terapêutico pode ser administrado antes, durante ou após o início da doença ou lesão. O tratamento de doença em curso, em que o tratamento estabiliza ou reduz os sistemas clínicos indesejáveis do paciente é de interesse particular. Tal tratamento é desejavelmente realizado antes da perda completa de função nos tecidos afetados. A terapia em questão pode ser administrada durante o estágio sintomático da doença e, em alguns casos, após o estágio sintomático da doença.[0117] The terms "treatment", "treat" and the like are used in this document to generally mean achieving a desired pharmacological and / or physiological effect. The effect can be prophylactic in terms of preventing a disease or symptom of it completely or partially and / or it can be therapeutic in terms of partial or complete cure for a disease and / or adverse effect attributable to the disease. "Treatment", as used herein, covers any treatment of a disease in a mammal and includes: (a) preventing the occurrence of the disease in a subject who may be predisposed to the disease, but has not yet been diagnosed as having the same; (b) inhibiting the disease, that is, preventing its development; or (c) relieving the disease, that is, causing the disease to regress. The therapeutic agent can be administered before, during or after the onset of the disease or injury. The treatment of ongoing disease, in which treatment stabilizes or reduces the patient's undesirable clinical systems is of particular interest. Such treatment is desirably carried out before the complete loss of function in the affected tissues. The therapy in question can be administered during the symptomatic stage of the disease and, in some cases, after the symptomatic stage of the disease.

[0118] Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" se destina a uma quantidade de agente ativo que é necessário para conferir benefício terapêutico para um sujeito. Por exemplo, uma "quantidade terapeuticamente eficaz" é uma quantidade que induz, melhora ou de outro modo causa uma melhoria nos sintomas patológicos, progressão da doença ou condições fisiológicas associadas a uma doença ou que melhora a resistência a um distúrbio.[0118] A "therapeutically effective amount" is for an amount of active agent that is necessary to confer a therapeutic benefit to a subject. For example, a "therapeutically effective amount" is an amount that induces, improves or otherwise causes an improvement in pathological symptoms, disease progression or physiological conditions associated with a disease or that improves resistance to a disorder.

[0119] Os termos "sujeito", "indivíduo" e "paciente" são usados intercambiavelmente no presente documento para se referir a um mamífero que é avaliado acerca do tratamento e/ou que é tratado. Numa modalidade, o mamífero é um ser humano. Os termos "sujeito", "indivíduo" e "paciente" abrangem, sem limitação, indivíduos que têm câncer, indivíduos com doenças autoimunes, com infecções por patógenos e similares. Os sujeitos podem ser humanos, mas também incluem outros mamíferos, particularmente aqueles mamíferos úteis como modelos de laboratório para doenças humanas, por exemplo,[0119] The terms "subject", "individual" and "patient" are used interchangeably in this document to refer to a mammal that is evaluated about treatment and / or that is treated. In one embodiment, the mammal is a human being. The terms "subject", "individual" and "patient" include, without limitation, individuals who have cancer, individuals with autoimmune diseases, with infections by pathogens and the like. Subjects may be human, but also include other mammals, particularly those mammals useful as laboratory models for human diseases, for example,

camundongo, rato, etc.mouse, rat, etc.

[0120] O termo "CD3" se refere ao complexo de múltiplas subunidades de proteína CD3 humana. O complexo de múltiplas subunidades de proteína CD3 é composto por 6 cadeias polipeptídicas distintivas. Essas incluem uma cadeia de CD3γ (SwissProt P09693), uma cadeia de CD3δ (SwissProtP04234), duas cadeias de CD3ε (SwissProt P07766) e um homodímero de cadeia CD3ζ (SwissProt 20963), e que está associado à cadeia α e β de receptor de célula T. O termo "CD3" inclui qualquer variante, isoforma e homólogo de espécie de CD3 que é naturalmente expresso pelas células (que incluem células T) ou pode ser expresso em células transfectadas com genes ou cDNA que codifica estes polipeptídeos, a menos que seja observado.[0120] The term "CD3" refers to the complex of multiple subunits of human CD3 protein. The complex of multiple CD3 protein subunits is composed of 6 distinctive polypeptide chains. These include a CD3γ chain (SwissProt P09693), a CD3δ chain (SwissProtP04234), two CD3ε chains (SwissProt P07766) and a CD3ζ chain homodimer (SwissProt 20963), which is associated with the α and β receptor chain T cell. The term "CD3" includes any variant, isoform and homologous CD3 species that is naturally expressed by cells (which include T cells) or can be expressed in cells transfected with genes or cDNA that encodes these polypeptides, unless be observed.

[0121] Um "anticorpo BCMA x CD3" é um anticorpo apenas de cadeia pesada multiespecífico, tal como um anticorpo apenas de cadeia pesada biespecífico, que compreende duas regiões de ligação ao antígeno diferentes, uma delas se liga especificamente ao antígeno BCMA e uma delas se liga especificamente ao CD3.[0121] A "BCMA x CD3 antibody" is a multispecific heavy chain only antibody, such as a bispecific heavy chain only antibody, which comprises two different antigen binding regions, one of which specifically binds to the BCMA antigen and one of them specifically binds to CD3.

[0122] O termo "formulação farmacêutica" se refere a uma preparação que está em tal forma para permitir que a atividade biológica do ingrediente ativo seja eficaz e que não contém nenhum componente adicional que seja inaceitavelmente tóxico a um indivíduo ao qual a formulação seria administrada. Tais formulações são estéreis. Excipientes "farmaceuticamente aceitáveis" (veículos, aditivos) são aqueles que podem ser razoavelmente administrados a um indivíduo mamífero para fornecer uma dose eficaz do ingrediente ativo empregado.[0122] The term "pharmaceutical formulation" refers to a preparation that is in such a form to allow the biological activity of the active ingredient to be effective and that it does not contain any additional components that are unacceptably toxic to an individual to whom the formulation would be administered . Such formulations are sterile. "Pharmaceutically acceptable" excipients (vehicles, additives) are those that can be reasonably administered to an individual mammal to provide an effective dose of the active ingredient employed.

[0123] Uma formulação "estéril" é asséptica ou livre ou essencialmente livre de todos os micro-organismos vivos e seus esporos. Uma formulação "congelada" é uma numa temperatura abaixo de 0°C.[0123] A "sterile" formulation is aseptic or free or essentially free of all living microorganisms and their spores. A "frozen" formulation is one at a temperature below 0 ° C.

[0124] Uma formulação "estável" é uma na qual a proteína na mesma retém, essencialmente, sua estabilidade física e/ou estabilidade química e/ou atividade biológica mediante armazenamento.[0124] A "stable" formulation is one in which the protein essentially retains its physical stability and / or chemical stability and / or biological activity upon storage.

Preferencialmente, a formulação retém, essencialmente, sua estabilidade física e química, bem como sua atividade biológica mediante armazenamento.Preferably, the formulation essentially retains its physical and chemical stability, as well as its biological activity upon storage.

O período de armazenamento é geralmente selecionado com base na vida útil desejada da formulação.The storage period is usually selected based on the desired life of the formulation.

Várias técnicas analíticas para medir estabilidade de proteína estão disponíveis na arte e são revisados em Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301. Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) e Jones.Various analytical techniques for measuring protein stability are available in the art and are reviewed in Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301. Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) and Jones.

A.THE.

Adv.Adv.

Drug Delivery Rev. 10: 29-90) (1993), por exemplo.Drug Delivery Rev. 10: 29-90) (1993), for example.

Estabilidade pode ser medida numa temperatura selecionada por um período de tempo selecionado.Stability can be measured at a selected temperature for a selected period of time.

Estabilidade pode ser avaliada qualitativa e/ou quantitativamente numa variedade de maneiras diferentes, que incluem avaliação de formação de agregado (por exemplo, com o uso de cromatografia de exclusão de tamanho, medindo-se turbidez e/ou através de inspeção visual); avaliando-se heterogeneidade de carga com o uso de cromatografia de troca catiônica, focalização isoelétrica capilar de imagem (icIEF) ou eletroforese de zona capilar; análise de sequência amino-terminal ou carboxi-terminal; análise espectrométrica de massa; análise de SDS- PAGE para comparar anticorpo reduzido e intacto; análise de mapa peptídico (por exemplo, tríptico ou LYS-C); avaliando-se a atividade biológica ou função de ligação ao antígeno do anticorpo; etc.Stability can be assessed qualitatively and / or quantitatively in a variety of different ways, which include assessment of aggregate formation (for example, using size exclusion chromatography, measuring turbidity and / or through visual inspection); evaluating charge heterogeneity using cation exchange chromatography, capillary isoelectric image focusing (icIEF) or capillary zone electrophoresis; amino-terminal or carboxy-terminal sequence analysis; mass spectrometric analysis; analysis of SDS-PAGE to compare reduced and intact antibody; peptide map analysis (for example, triptych or LYS-C); evaluating the biological activity or antigen-binding function of the antibody; etc.

Instabilidade pode envolver qualquer um ou mais dentre: agregação, desamidação (por exemplo, desamidação de Asn), oxidação (por exemplo, oxidação de Met), isomerização (por exemplo, isomerização de Asp), clipagem/hidrólise/fragmentação (por exemplo, fragmentação de região de dobradiça), formação de succinimida, cisteínas não pareadas, extensão de N-terminal, processamento de C-terminal,Instability can involve any one or more of: aggregation, deamidation (eg Asn deamidation), oxidation (eg Met oxidation), isomerization (eg Asp isomerization), clipping / hydrolysis / fragmentation (eg hinge region fragmentation), succinimide formation, unpaired cysteines, N-terminal extension, C-terminal processing,

diferenças de glicosilação, etc. II. DESCRIÇÃO DETALHADA ANTICORPOS ANTI-BCMAdifferences in glycosylation, etc. II. DETAILED DESCRIPTION ANTI-BCMA ANTIBODIES

[0125] A presente invenção fornece uma família de anticorpos apenas de cadeia pesada estritamente relacionados que se ligam a BCMA humano. Os anticorpos desta família compreendem um conjunto de sequências de CDR conforme definido no presente documento e mostrado na Figura 1, e são exemplificados pelas sequências de região variável de cadeia pesada (VH) fornecidas de SEQ ID NOs 16 a 50 apresentadas na Figura 2. As famílias de anticorpos fornecem vários benefícios que contribuem para utilidade como agente (ou agentes) clinicamente terapêutico. Os anticorpos incluem membros com uma faixa de afinidades de ligação, permitindo a seleção de uma sequência específica com uma afinidade de ligação desejada.[0125] The present invention provides a family of strictly related heavy chain antibodies only that bind to human BCMA. The antibodies in this family comprise a set of CDR sequences as defined in this document and shown in Figure 1, and are exemplified by the heavy chain variable region (VH) sequences provided from SEQ ID NOs 16 to 50 shown in Figure 2. antibody families provide several benefits that contribute to usefulness as a clinically therapeutic agent (or agents). Antibodies include members with a range of binding affinities, allowing selection of a specific sequence with a desired binding affinity.

[0126] Um anticorpo adequado pode ser selecionado daqueles fornecidos no presente documento para desenvolvimento e uso terapêutico ou outro, incluindo, sem limitação, o uso como um anticorpo biespecífico ou triespecífico, ou parte de uma estrutura CAR-T, por exemplo, conforme mostrado na Figura 5.[0126] A suitable antibody can be selected from those provided in this document for development and therapeutic or other use, including, without limitation, use as a bispecific or triespecific antibody, or part of a CAR-T structure, for example, as shown in Figure 5.

[0127] A determinação da afinidade para uma proteína candidata pode ser realizada usando métodos conhecidos na técnica, como medições Biacore. Os membros da família de anticorpos podem ter uma afinidade para BCMA com uma Kd de cerca de 10-6 a cerca de 10-11, incluindo, sem limitação: de cerca de 10-6 a cerca de 10-10; de cerca de 10-6 a cerca de 10-9; de cerca de 10-6 a cerca de 10-8; de cerca de 10-8 a cerca de 10-11; de cerca de 10-8 a cerca de 10-10; de cerca de 10-8 a cerca de 10-9; de cerca de 10-9 a cerca de 10-11; de cerca de 10-9 a cerca de 10-10; ou qualquer valor dentro destas faixas. A seleção de afinidade pode ser confirmada com uma avaliação biológica para modular, por exemplo, o bloqueio, uma atividade biológica de BCMA, incluindo ensaios in vitro, modelos pré-clínicos e ensaios clínicos, bem como a avaliação de toxicidade potencial.[0127] Determination of affinity for a candidate protein can be performed using methods known in the art, such as Biacore measurements. Members of the antibody family may have an affinity for BCMA with a Kd of about 10-6 to about 10-11, including, without limitation: from about 10-6 to about 10-10; from about 10-6 to about 10-9; from about 10-6 to about 10-8; from about 10-8 to about 10-11; from about 10-8 to about 10-10; from about 10-8 to about 10-9; from about 10-9 to about 10-11; from about 10-9 to about 10-10; or any value within these ranges. The affinity selection can be confirmed with a biological assessment to modulate, for example, blockage, a BCMA biological activity, including in vitro assays, preclinical models and clinical assays, as well as the assessment of potential toxicity.

[0128] Membros da família de anticorpo no presente documento não são reativos de forma cruzada com a proteína de BCMA de macaco Cynomolgus, porém, podem ser modificados geneticamente para fornecer reatividade cruzada com a proteína de BCMA de macaco Cynomolgus, ou com o BCMA de qualquer outra espécie animal, se for desejado.[0128] Members of the antibody family in this document are not cross-reactive with the monkey BCMA protein Cynomolgus, however, they can be genetically modified to provide cross-reactivity with the monkey BCMA protein Cynomolgus, or with the BCMA of any other animal species, if desired.

[0129] A família de anticorpos específicos de BCMA no presente documento compreende um domínio VH, que compreende sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 numa estrutura VH humana. As sequências de CDR podem estar situadas, como um exemplo, na região em torno dos resíduos de aminoácidos 26-35; 53-59; e 98-117 para CDR1, CDR2 e CDR3, respectivamente, das sequências de região variável exemplificativas fornecidas apresentadas na SEQ ID NOs: 16 a 50. Será entendido por um versado na técnica que as sequências de CDR podem estar em posição diferente se for selecionada uma sequência de estrutura diferente, embora geralmente a ordem das sequências permaneça a mesma.[0129] The family of BCMA-specific antibodies in this document comprises a VH domain, which comprises sequences of CDR1, CDR2 and CDR3 in a human VH structure. The CDR sequences can be located, as an example, in the region around the amino acid residues 26-35; 53-59; and 98-117 for CDR1, CDR2 and CDR3, respectively, of the exemplary variable region sequences provided presented in SEQ ID NOs: 16 to 50. It will be understood by one skilled in the art that CDR sequences may be in a different position if selected a sequence of different structure, although the order of the sequences generally remains the same.

[0130] As sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 dos anticorpos anti- BCMA da presente invenção podem ser abrangidas pelas seguintes fórmulas estruturais, em que um X indica um aminoácido variável, que pode ser aminoácidos específicos conforme indicado abaixo.[0130] The CDR1, CDR2 and CDR3 sequences of the anti-BCMA antibodies of the present invention can be encompassed by the following structural formulas, where an X indicates a variable amino acid, which can be specific amino acids as indicated below.

[0131] CDR1[0131] CDR1

[0132] G F T X1 X2 X3 X4 X5 (SEQ ID NO: 51)[0132] G F T X1 X2 X3 X4 X5 (SEQ ID NO: 51)

[0133] onde[0133] where

[0134] X1 é V, I ou F;[0134] X1 is V, I or F;

[0135] X2 é S ou T;[0135] X2 is S or T;

[0136] X3 é S ou N;[0136] X3 is Y or N;

[0137] X4 é Y ou S;[0137] X4 is Y or S;

[0138] X5 é G ou A.[0138] X5 is G or A.

[0139] Numa modalidade, X1 é V ou I; X2 é S; X3 é S; X4 é Y; e X5 é G. Numa outra modalidade, CDR1 é selecionada a partir da sequência de SEQ ID NOs: 1 a 6. Em ainda outra modalidade, CDR1 compreende a sequência de SEQ ID NOs 1 ou 2. Numa modalidade adicional, CDR1 compreende a sequência GFTVSSYG (SEQ ID NO: 1).[0139] In one embodiment, X1 is V or I; X2 is S; X3 is S; X4 is Y; and X5 is G. In another embodiment, CDR1 is selected from the sequence of SEQ ID NOs: 1 to 6. In yet another embodiment, CDR1 comprises the sequence of SEQ ID NOs 1 or 2. In an additional embodiment, CDR1 comprises the sequence GFTVSSYG (SEQ ID NO: 1).

[0140] CDR2[0140] CDR2

[0141] I X6 G X7 X8 X9 X10 T (SEQ ID NO: 52)[0141] I X6 G X7 X8 X9 X10 T (SEQ ID NO: 52)

[0142] onde[0142] where

[0143] X6 é R ou S;[0143] X6 is R or S;

[0144] X7 é S ou D;[0144] X7 is S or D;

[0145] X8 é D, G, ou S;[0145] X8 is D, G, or S;

[0146] X9 é G ou D;[0146] X9 is G or D;

[0147] X10 é S, T ou N.[0147] X10 is S, T or N.

[0148] Numa modalidade, X6 é D e X7 é G. Numa outra modalidade, X8 é S. Em ainda outra modalidade, X9 é G e X10 é T. Numa modalidade adicional, X9 é G e X10 é S. Em ainda outra modalidade, X9 é G e X10 é T. Numa outra modalidade, CDR2 é selecionada a partir da sequência de SEQ ID NOs: 8 a 11. Em ainda outra modalidade, CDR2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 8 ou 9. Numa modalidade particular, CDR2 compreende a sequência IRGSDGST (SEQ ID NO: 8).[0148] In one modality, X6 is D and X7 is G. In another modality, X8 is S. In yet another modality, X9 is G and X10 is T. In an additional modality, X9 is G and X10 is S. In yet another modality, X9 is G and X10 is T. In another embodiment, CDR2 is selected from the sequence of SEQ ID NOs: 8 to 11. In yet another embodiment, CDR2 comprises the sequence of SEQ ID NO: 8 or 9. In one embodiment in particular, CDR2 comprises the sequence IRGSDGST (SEQ ID NO: 8).

[0149] CDR3[0149] CDR3

[0150] A K Q G X11 N D G P F D X12 (SEQ ID NO: 53)[0150] A K Q G X11 N D G P F D X12 (SEQ ID NO: 53)

[0151] onde[0151] where

[0152] X11 é G ou E;[0152] X11 is G or E;

[0153] X12 é Y ou H.[0153] X12 is Y or H.

[0154] Numa modalidade, X11 é G e X12 é Y. Numa outra modalidade, X11 é G e X12 é H. Numa outra modalidade, X11 é E e X12 é H. Numa modalidade adicional, X11 é E e X12 é Y. Em ainda outra modalidade, CDR3 é selecionada a partir da sequência de SEQ ID NOs: 12 a 15. Numa outra modalidade, CDR3 compreende a sequência de SEQ ID NO: 12, 14 ou 15. Em ainda outra modalidade, CDR3 compreende a sequência AKQGENDGPFDH (SEQ ID NO: 14).[0154] In one embodiment, X11 is G and X12 is Y. In another embodiment, X11 is G and X12 is H. In another embodiment, X11 is E and X12 is H. In an additional embodiment, X11 is E and X12 is Y. In yet another embodiment, CDR3 is selected from the sequence of SEQ ID NOs: 12 to 15. In another embodiment, CDR3 comprises the sequence of SEQ ID NO: 12, 14 or 15. In yet another embodiment, CDR3 comprises the sequence AKQGENDGPFDH (SEQ ID NO: 14).

[0155] As sequências representativas de CDR1, CDR2 e CDR3 são mostradas na Figura 1.[0155] Representative sequences for CDR1, CDR2 and CDR3 are shown in Figure 1.

[0156] Numa modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada anti-BCMA da presente invenção compreende a sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1; a sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 12 ou 14.[0156] In one embodiment, the anti-BCMA heavy chain antibody of the present invention comprises the CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1; the CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 12 or 14.

[0157] Em outra modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada anti-BCMA da presente invenção compreende a sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 2, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 ou 9; e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 12, 13, 14 ou 15.[0157] In another embodiment, the anti-BCMA heavy chain antibody of the present invention comprises the CDR1 sequence of SEQ ID NO: 2, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 or 9; and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 12, 13, 14 or 15.

[0158] Numa modalidade adicional, o anticorpo apenas de cadeia pesada anti-BCMA da presente invenção compreende a sequência de CDR1 de SEQ ID NO:1; a sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e a sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 14.[0158] In a further embodiment, the anti-BCMA heavy chain antibody of the present invention comprises the CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1; the CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and the CDR3 sequence of SEQ ID NO: 14.

[0159] Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-BCMA da presente invenção compreende qualquer uma das sequências de aminoácidos de região variável de cadeia pesada de SEQ ID NOs: 16 a 50 (Figura 2).[0159] In additional embodiments, the anti-BCMA antibody of the present invention comprises any of the heavy chain variable region amino acid sequences of SEQ ID NOs: 16 to 50 (Figure 2).

[0160] Em ainda outra modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada anti-BCMA da presente invenção compreende a sequência de região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 34 (anticorpo 308902).[0160] In yet another embodiment, the anti-BCMA heavy chain antibody of the present invention comprises the heavy chain variable region sequence of SEQ ID NO: 34 (antibody 308902).

[0161] Em algumas modalidades, uma sequência de CDR nos anticorpos anti-BMA da presente invenção compreende uma ou duas substituições de aminoácido com relação a uma sequência de CDR1, CDR2 e/ou CDR3 ou conjunto de sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 em qualquer uma das SEQ ID NOs: 1 a 15 (Figura 1). Em algumas modalidades, a dita substituição (ou substituições) de aminoácido é uma ou duas das posições de aminoácidos 4-6 de CDR1, e/ou uma ou duas das posições de aminoácidos 2, 4-7 de CDR2, e/ou uma ou duas das posições de aminoácidos 5 e 12 de CDR3, em relação às fórmulas fornecidas acima. Em alguma modalidade, os anticorpos apenas de cadeia única anti-BCMA no presente documento compreenderão uma sequência de região variável de cadeia pesada com pelo menos 85% de identidade, pelo menos 90% de identidade, pelo menos 95% de identidade, pelo menos 98% de identidade, ou pelo menos 99% de identidade com qualquer uma das sequências de região variável de cadeia pesada mostradas na Figura 2.[0161] In some embodiments, a CDR sequence in the anti-BMA antibodies of the present invention comprises one or two amino acid substitutions with respect to a CDR1, CDR2 and / or CDR3 sequence or set of CDR1, CDR2 and CDR3 sequences in any of SEQ ID NOs: 1 to 15 (Figure 1). In some embodiments, said amino acid substitution (or substitutions) is one or two of the amino acid positions 4-6 of CDR1, and / or one or two of the amino acid positions 2, 4-7 of CDR2, and / or one or two of the amino acid positions 5 and 12 of CDR3, relative to the formulas provided above. In some embodiment, the single-chain anti-BCMA antibodies herein will comprise a heavy chain variable region sequence with at least 85% identity, at least 90% identity, at least 95% identity, at least 98 % identity, or at least 99% identity with any of the heavy chain variable region sequences shown in Figure 2.

[0162] Em algumas modalidades, são fornecidos anticorpos biespecíficos ou multiespecíficos que podem ter qualquer uma das configurações discutidas no presente documento, incluindo, sem limitação, um anticorpo biespecífico de três cadeias. Os anticorpos biespecíficos compreendem pelo menos a região variável de cadeia pesada de um anticorpo específico para uma proteína diferente de BCMA.[0162] In some embodiments, bispecific or multispecific antibodies are provided that can have any of the configurations discussed in this document, including, without limitation, a bispecific three-chain antibody. Bispecific antibodies comprise at least the heavy chain variable region of an antibody specific to a protein other than BCMA.

[0163] Quando uma proteína da invenção é um anticorpo biespecífico, uma porção química de ligação é específica para BCMA humana, enquanto que o outro braço pode ser específico para células- alvo, antígenos associados a tumor, antígenos de alvejamento, por exemplo, integrinas, etc, antígenos de patógenos, proteínas de ponto de verificação e similares. As células-alvo incluem especificamente células de câncer, como tumores hematológicos, por exemplo, tumores de células B, conforme abordado abaixo.[0163] When a protein of the invention is a bispecific antibody, a chemical binding portion is specific for human BCMA, while the other arm may be specific for target cells, tumor-associated antigens, targeting antigens, for example, integrins , etc., pathogen antigens, checkpoint proteins and the like. Target cells specifically include cancer cells, such as haematological tumors, for example, B cell tumors, as discussed below.

[0164] Diversos formatos de anticorpos biespecíficos estão dentro do âmbito da invenção, incluindo, sem limitação, polipeptídeos de cadeia única, polipeptídeos de duas cadeias, polipeptídeos de três cadeias, polipeptídeos de quatro cadeias e múltiplos dos mesmos. Os anticorpos biespecíficos no presente documento incluem especificamente anticorpos biespecíficos de célula T que se ligam a BCMA, que é seletivamente expresso em células plasmáticas (PCs) e mieloma múltiplo (MM), e CD3 (anticorpos anti-BCMA × anti-CD3). Tais anticorpos induzem morte de células que carregam BCMA mediada por célula T potente, e podem ser usados para tratar tumores, em particular, tumores hematológicos, tais como tumores de célula B, conforme abordado abaixo.[0164] Various bispecific antibody formats are within the scope of the invention, including, without limitation, single chain polypeptides, two chain polypeptides, three chain polypeptides, four chain polypeptides and multiples thereof. The bispecific antibodies in this document specifically include bispecific T cell antibodies that bind to BCMA, which is selectively expressed in plasma cells (PCs) and multiple myeloma (MM), and CD3 (anti-BCMA × anti-CD3 antibodies). Such antibodies induce cell death that carries potent T cell-mediated BCMA, and can be used to treat tumors, in particular hematological tumors, such as B cell tumors, as discussed below.

[0165] Anticorpos biespecíficos contra CD3 e BCMA são descritos, por exemplo, nos documentos nº WO2007117600, WO2009132058, WO2012066058, WO2012143498, WO2013072406, WO2013072415, e WO2014122144, e no documento nº U.S. 20170051068.[0165] Bispecific antibodies against CD3 and BCMA are described, for example, in documents No. WO2007117600, WO2009132058, WO2012066058, WO2012143498, WO2013072406, WO2013072415, and WO2014122144, and in U.S. document 20170051068.

COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICASPHARMACEUTICAL COMPOSITIONS

[0166] É outro aspecto da presente invenção fornecer composições farmacêuticas que compreendem um ou mais anticorpos da presente invenção em mistura por adição com um carreador farmaceuticamente aceitável adequado. Os carreadores farmaceuticamente aceitáveis, como usado no presente documento, são exemplificados, mas não limitados a adjuvantes, carreadores sólidos, água, tampões ou outros carreadores usados na técnica para reter componentes terapêuticos, ou combinações dos mesmos.[0166] It is another aspect of the present invention to provide pharmaceutical compositions comprising one or more antibodies of the present invention in admixture by addition with a suitable pharmaceutically acceptable carrier. Pharmaceutically acceptable carriers, as used herein, are exemplified, but not limited to adjuvants, solid carriers, water, buffers or other carriers used in the art to retain therapeutic components, or combinations thereof.

[0167] As composições farmacêuticas dos anticorpos usados de acordo com a presente invenção são preparadas para armazenamento mediante a mistura de proteínas que têm o grau de pureza desejado com carreadores, excipientes ou estabilizantes farmaceuticamente aceitáveis opcionais (ver, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences 16ª edição, Osol, A. Ed. (1980)), como sob a forma de formulações liofilizadas ou soluções aquosas. Os carreadores, excipientes ou estabilizantes aceitáveis são não tóxicos aos recebedores nas dosagens e concentrações empregadas, e incluem tampões, como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzílico; alquil parabenos, como metil ou propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos que cerca de 10 resíduos); proteínas, como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, como polivinilpirrolidona; aminoácidos, como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, como EDTA; açúcares, como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contraíons formadores de sal, como sódio; complexos de metal (por exemplo, complexos de Zn-proteína); e/ou tensoativos não iônicos, como TWEEN™,PLURONICS™ ou polietileno glicol (PEG).[0167] The pharmaceutical compositions of the antibodies used in accordance with the present invention are prepared for storage by mixing proteins that have the desired degree of purity with optional pharmaceutically acceptable carriers, excipients or stabilizers (see, for example, Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)), as in the form of lyophilized formulations or aqueous solutions. Acceptable carriers, excipients or stabilizers are non-toxic to recipients at the dosages and concentrations used, and include buffers, such as phosphate, citrate and other organic acids; antioxidants, including ascorbic acid and methionine; preservatives (such as octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride, benzethonium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol; alkyl parabens such as methyl or propyl paraben; catechol; resorcinol; cyclohexanol; 3-pentanol; and m -cresol); low molecular weight polypeptides (less than about 10 residues); proteins, such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; hydrophilic polymers, such as polyvinylpyrrolidone; amino acids, such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine or lysine; monosaccharides, disaccharides and other carbohydrates, including glucose, mannose or dextrins; chelating agents, such as EDTA; sugars, such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; salt-forming counterions, such as sodium; metal complexes (for example, Zn-protein complexes); and / or non-ionic surfactants, such as TWEEN ™, PLURONICS ™ or polyethylene glycol (PEG).

[0168] Composições farmacêuticas para administração parenteral são preferencialmente estéreis e substancialmente isotônicas e fabricadas sob as condições de Boa Prática de Fabricação (GMP). Composições farmacêuticas podem ser fornecidas em forma de dosagem unitária (isto é, a dosagem para uma única administração). A formulação depende da rota de administração escolhida. Os anticorpos no presente documento podem ser administrados através de injeção intravenosa ou infusão ou por via subcutânea. Para administração por injeção, os anticorpos no presente documento podem ser formulados em soluções aquosas, preferencialmente em tampões fisiologicamente compatíveis para reduzir o desconforto no sítio de injeção. A solução pode conter carreadores, excipientes ou estabilizadores, conforme abordado acima. Alternativamente, anticorpos podem estar em forma liofilizada para constituição com um veículo adequado, por exemplo, água isenta de pirógeno estéril, antes do uso.[0168] Pharmaceutical compositions for parenteral administration are preferably sterile and substantially isotonic and manufactured under the conditions of Good Manufacturing Practice (GMP). Pharmaceutical compositions can be provided in unit dosage form (that is, the dosage for a single administration). The formulation depends on the chosen route of administration. The antibodies in this document can be administered via intravenous injection or infusion or subcutaneously. For administration by injection, the antibodies in this document can be formulated in aqueous solutions, preferably in physiologically compatible buffers to reduce discomfort at the injection site. The solution may contain carriers, excipients or stabilizers, as discussed above. Alternatively, antibodies may be in lyophilized form for constitution with a suitable vehicle, for example, sterile pyrogen-free water, before use.

[0169] Formulações de anticorpo anti-BCMA são reveladas, por exemplo, no documento de Patente nº U.S. 9.034.324. Formulações similares podem ser usadas para as proteínas da presente invenção. Formulações de anticorpo subcutâneas são descritas, por exemplo, nos documentos nº U.S. 20160355591 e U.S. 20160166689.[0169] Anti-BCMA antibody formulations are disclosed, for example, in U.S. Patent Document No. 9,034,324. Similar formulations can be used for the proteins of the present invention. Subcutaneous antibody formulations are described, for example, in U.S. No. 20160355591 and U.S. 20160166689.

MÉTODOS DE USOMETHODS OF USE

[0170] As composições farmacêuticas no presente documento podem ser usadas para o tratamento de distúrbios relacionados à célula B, que incluem malignidades de célula B e célula plasmática e distúrbios autoimunes caracterizados pela expressão ou superexpressão de BCMA.[0170] The pharmaceutical compositions in this document can be used for the treatment of B cell related disorders, which include B cell and plasma cell malignancies and autoimmune disorders characterized by BCMA expression or overexpression.

[0171] Tais distúrbios relacionados a células B incluem distúrbios autoimunes e malignidades de células B e células plasmáticas incluindo, sem limitação, plasmacitoma, linfoma de Hodgkin, linfomas foliculares, linfomas de células pequenas não clivadas, linfoma de Burkitt endêmico, linfoma de Burkitt esporádico, linfoma de zona marginal, linfoma de tecido linfoide associado à mucosa extranodal, linfoma de células B monocitoide nodal, linfoma esplênico, linfoma de células do manto, linfoma de células grandes, linfoma celular difuso misto, linfoma imunoblástico , linfoma de células B mediastinal primário, linfoma angiocêntrico de célula B pulmonar, linfoma linfocítico pequeno, proliferações de células B de potencial maligno incerto, granulomatose linfomatoide, distúrbio linfoproliferativo pós-transplante, um distúrbio imunorregulador, artrite reumatoide, miastenia grave, púrpura trombocitopênica Idiopática, síndrome antifosfolipídeo, doença de Chagas, doença de Grave, granulomatose de Wegener, poli-arterite nodosa, síndrome de Sjogren, pênfigo vulgar, esclerodermia, esclerose múltipla, síndrome antifosfolipídeo, vasculite associada a ANCA, doença de Goodpasture, doença de Kawasaki, anemia hemolítica autoimune e glomerulonefrite rapidamente progressiva, doença de cadeia pesada, amiloidose associada a imunócito ou primária, ou gamopatia monoclonal.[0171] Such B cell related disorders include autoimmune disorders and malignancies of B cells and plasma cells including, without limitation, plasmacytoma, Hodgkin's lymphoma, follicular lymphomas, small non-cleaved lymphomas, endemic Burkitt's lymphoma, sporadic Burkitt's lymphoma , marginal zone lymphoma, lymphoid tissue lymphoma associated with extranodal mucosa, nodal monocytoid B cell lymphoma, splenic lymphoma, mantle cell lymphoma, large cell lymphoma, mixed diffuse cell lymphoma, immunoblastic lymphoma, primary mediastinal B cell lymphoma , pulmonary B cell angiocentric lymphoma, small lymphocytic lymphoma, B cell proliferations of uncertain malignant potential, lymphomatoid granulomatosis, post-transplant lymphoproliferative disorder, an immunoregulatory disorder, rheumatoid arthritis, myasthenia gravis, idiopathic thrombocytopenic disease, , Grave's disease, Weg's granulomatosis ener, polyarteritis nodosa, Sjogren's syndrome, pemphigus vulgaris, scleroderma, multiple sclerosis, antiphospholipid syndrome, ANCA-associated vasculitis, Goodpasture's disease, Kawasaki's disease, autoimmune hemolytic anemia and rapidly progressive glomerulonephritis, heavy chain disease, associated amyloidosis immunocyte or primary, or monoclonal gammopathy.

[0172] Os distúrbios de células plasmáticas caracterizados pela expressão de BCMA incluem mieloma múltiplo (MM). MM é uma malignidade de célula B caracterizada por uma expansão monoclonal e acúmulo de células plasmáticas anormais no compartimento da medula óssea. As terapias atuais para MM muitas vezes causam remissões, mas quase todos os pacientes eventualmente sofrem recidiva e morrem. Existem evidências substanciais de uma eliminação mediada por sistema imune de células de mieloma no contexto de transplante alogênico de células-tronco hematopoiéticas; no entanto, a toxicidade desta abordagem é alta e poucos pacientes são curados. Embora alguns anticorpos monoclonais tenham se mostrado promissores no tratamento da MM em estudos pré-clínicos e ensaios clínicos iniciais, a eficácia clínica consistente de qualquer terapia com anticorpos monoclonais para MM não foi conclusivamente demonstrada. Existe, portanto, uma grande necessidade por novas terapias, incluindo imunoterapias para MM (ver, por exemplo Carpenter et al., Cancer Res 2013, 19(8):2048-2060).[0172] Plasma cell disorders characterized by BCMA expression include multiple myeloma (MM). MM is a B-cell malignancy characterized by monoclonal expansion and accumulation of abnormal plasma cells in the bone marrow compartment. Current therapies for MM often cause remissions, but almost all patients eventually relapse and die. There is substantial evidence of immune-mediated elimination of myeloma cells in the context of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation; however, the toxicity of this approach is high and few patients are cured. Although some monoclonal antibodies have shown promise in the treatment of MM in preclinical studies and initial clinical trials, the consistent clinical efficacy of any therapy with monoclonal antibodies for MM has not been conclusively demonstrated. There is, therefore, a great need for new therapies, including immunotherapies for MM (see, for example Carpenter et al., Cancer Res 2013, 19 (8): 2048-2060).

[0173] Sabe-se que a superexpressão ou ativação de BCMA através de seu ligante de indução de proliferação, APRIL promove progressão de Mieloma Múltiplo (MM) humano in vivo. BCMA também promove crescimento in vivo de células de MM xenoenxertadas que portam a mutação p53 em camundongos. Visto que a atividade da via APRIL/BCMA tem um papel central em patogênese de MM e resistência ao fármaco por meio de interações bidirecionais entre células tumorais e seu microambiente de medula óssea de suporte, BCMA foi identificado como um alvo para o tratamento de MM. Para mais detalhes, ver, por exemplo, Yu-Tsu Tai et al., Blood 2016; 127(25):3225-3236.[0173] It is known that the overexpression or activation of BCMA through its proliferation-inducing ligand, APRIL promotes progression of human Multiple Myeloma (MM) in vivo. BCMA also promotes in vivo growth of xenografted MM cells that carry the p53 mutation in mice. Since the activity of the APRIL / BCMA pathway plays a central role in the pathogenesis of MM and drug resistance through bidirectional interactions between tumor cells and their supporting bone marrow microenvironment, BCMA has been identified as a target for the treatment of MM. For more details, see, for example, Yu-Tsu Tai et al., Blood 2016; 127 (25): 3225-3236.

[0174] Um outro distúrbio de célula B que envolve células plasmáticas, isto é, que expressam BCMA, é lúpus eritematoso sistêmico (SLE), também conhecido como lúpus. O SLE é uma doença sistêmica autoimune que pode afetar qualquer parte do corpo e é representada com o sistema imunológico atacando as próprias células e tecidos do corpo, resultando em inflamação crônica e dano tecidual. É uma reação de hipersensibilidade do tipo III em que os complexos imunes de anticorpo precipitam e causam uma resposta imunológica adicional (Inaki & Lee, Nat Rev Rheumatol 2010; 6: 326-337).[0174] Another B-cell disorder involving plasma cells, that is, which express BCMA, is systemic lupus erythematosus (SLE), also known as lupus. SLE is a systemic autoimmune disease that can affect any part of the body and is represented with the immune system attacking the body's own cells and tissues, resulting in chronic inflammation and tissue damage. It is a type III hypersensitivity reaction in which the antibody immune complexes precipitate and cause an additional immune response (Inaki & Lee, Nat Rev Rheumatol 2010; 6: 326-337).

[0175] Os anticorpos apenas de cadeia pesada anti-BCMA (UniAb) da presente invenção podem ser usados para desenvolver agentes terapêuticos para o tratamento de MM, SLE e outros distúrbios de célula B ou distúrbios de célula plasmática caracterizados pela expressão de BCMA, como aqueles listados acima. Em particular, os anticorpos apenas de cadeia pesada anti-BCMA (UniAb) da presente invenção são candidatos ao tratamento de MM, sozinhos ou em combinação com outros tratamentos de MM.[0175] The anti-BCMA heavy chain antibodies (UniAb) of the present invention can be used to develop therapeutic agents for the treatment of MM, SLE and other B cell disorders or plasma cell disorders characterized by BCMA expression, such as those listed above. In particular, the anti-BCMA heavy chain only antibodies (UniAb) of the present invention are candidates for the treatment of MM, alone or in combination with other MM treatments.

[0176] Numa modalidade, os anticorpos no presente documento podem ser sob a forma de estruturas de anticorpo anti-BCMA apenas de cadeia pesada-CAR, isto é, estruturas de célula T transduzidas por anticorpo anti-BCMA apenas de cadeia pesada-CAR.[0176] In one embodiment, the antibodies in this document may be in the form of heavy chain-only anti-BCMA-CAR antibody structures, i.e., T cell structures transduced by heavy chain-only anti-BCMA antibody-CAR.

[0177] As doses eficazes das composições da presente invenção para o tratamento da doença variam dependendo de muitos fatores diferentes que incluem meios de administração, local alvo, estado fisiológico do paciente, se o paciente é humano ou um animal, outros medicamentos administrados, e se o tratamento é profilático ou terapêutico. Normalmente, o paciente é um ser humano, mas os mamíferos não humanos também podem ser tratados, por exemplo, animais de estimação como cães, gatos, cavalos, etc, mamíferos de laboratório como coelhos, camundongos, ratos, etc e similares. As dosagens de tratamento podem ser tituladas para otimizar a segurança e a eficácia.[0177] Effective doses of the compositions of the present invention for the treatment of the disease vary depending on many different factors including means of administration, target site, physiological state of the patient, whether the patient is human or an animal, other medications administered, and whether the treatment is prophylactic or therapeutic. Normally, the patient is a human being, but non-human mammals can also be treated, for example, pets such as dogs, cats, horses, etc., laboratory mammals such as rabbits, mice, rats, etc. and the like. Treatment dosages can be titrated to optimize safety and effectiveness.

[0178] Os níveis de dosagem podem ser prontamente determinados pelo médico normalmente qualificado e podem ser modificados conforme necessário, por exemplo, conforme necessário para modificar a resposta de um sujeito à terapia. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com os materiais carreadores para produzir uma forma de dosagem única varia dependendo do hospedeiro tratado e do modo específico de administração. As formas unitárias de dosagem geralmente contêm entre cerca de 1 mg a cerca de 500 mg de um ingrediente ativo.[0178] Dosage levels can be readily determined by the normally qualified physician and can be modified as needed, for example, as needed to modify a subject's response to therapy. The amount of active ingredient that can be combined with carrier materials to produce a single dosage form varies depending on the treated host and the specific mode of administration. Unit dosage forms generally contain between about 1 mg to about 500 mg of an active ingredient.

[0179] Em algumas modalidades, a dosagem terapêutica do agente pode se situar na faixa de cerca de 0,0001 a 100 mg/kg, e mais normalmente, 0,01 a 5 mg/kg, do peso corporal do hospedeiro. Por exemplo, as dosagens podem ser de 1 mg/kg de peso corporal ou de 10 mg/kg de peso corporal ou dentro da faixa de 1 a 10 mg/kg. Um regime de tratamento exemplificativo implica administração uma vez a cada duas semanas ou uma vez por mês ou uma vez a cada 3 a 6 meses. As entidades terapêuticas da presente invenção são normalmente administradas em múltiplas ocasiões. Os intervalos entre as dosagens únicas podem ser semanais, mensais ou anuais. Os intervalos também podem ser irregulares, conforme indicado pela medição de níveis sanguíneos da entidade terapêutica no paciente. Alternativamente, as entidades terapêuticas da presente invenção podem ser administradas como uma formulação de liberação prolongada, em cujo caso é necessária uma administração menos frequente. A dosagem e frequência variam dependendo da meia-vida do polipeptídeo no paciente.[0179] In some embodiments, the therapeutic dosage of the agent can be in the range of about 0.0001 to 100 mg / kg, and more normally, 0.01 to 5 mg / kg, of the host's body weight. For example, dosages can be 1 mg / kg of body weight or 10 mg / kg of body weight or within the range of 1 to 10 mg / kg. An exemplary treatment regimen requires administration once every two weeks or once a month or once every 3 to 6 months. The therapeutic entities of the present invention are usually administered on multiple occasions. The intervals between single dosages can be weekly, monthly or yearly. The intervals can also be irregular, as indicated by measuring blood levels of the therapeutic entity in the patient. Alternatively, the therapeutic entities of the present invention can be administered as an extended release formulation, in which case less frequent administration is required. Dosage and frequency vary depending on the polypeptide half-life in the patient.

[0180] Tipicamente, as composições são preparadas como injetáveis, como soluções ou suspensões líquidas; formas sólidas adequadas para a solução em, ou suspensão em veículos líquidos antes da injeção também podem ser preparadas. As composições farmacêuticas no presente documento são adequadas para administração intravenosa ou subcutânea, diretamente ou após reconstituição de composições sólidas (por exemplo, liofilizadas). A preparação também ser emulsionada ou encapsulada em lipossomas ou micropartículas, como polilactida, poliglicolida ou copolímero para um efeito adjuvante melhorado, conforme discutido acima. Langer, Science 249: 1527, 1990 e Hanes, Advanced Drug Delivery Reviews 28: 97-119, 1997. Os agentes desta invenção podem ser administrados na forma de uma injeção de depósito ou preparação de implante que pode ser formulada de modo que permita uma liberação sustentada ou pulsátil do ingrediente ativo. As composições farmacêuticas são geralmente formuladas como estéreis, substancialmente isotônicas e em total conformidade com todos os regulamentos das Boas Práticas de Fabricação (GMP) da Administração de Alimentos e Drogas dos Estados Unidos.[0180] Typically, the compositions are prepared as injectables, as liquid solutions or suspensions; solid forms suitable for solution in, or suspension in, liquid vehicles prior to injection can also be prepared. The pharmaceutical compositions in this document are suitable for intravenous or subcutaneous administration, directly or after reconstitution of solid compositions (for example, lyophilized). The preparation will also be emulsified or encapsulated in liposomes or microparticles, such as polylactide, polyglycolide or copolymer for an improved adjuvant effect, as discussed above. Langer, Science 249: 1527, 1990 and Hanes, Advanced Drug Delivery Reviews 28: 97-119, 1997. The agents of this invention can be administered in the form of a depot injection or implant preparation that can be formulated in a way that allows for a sustained or pulsatile release of the active ingredient. Pharmaceutical compositions are generally formulated as sterile, substantially isotonic and in full compliance with all United States Food and Drug Administration Good Manufacturing Practice (GMP) regulations.

[0181] A toxicidade dos anticorpos e estruturas de anticorpo descritas neste documento podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padrão em culturas celulares ou animais experimentais, por exemplo, mediante a determinação da LD50 (a dose letal para 50% da população) ou da LD100 (a dose letal para 100% da população). A razão de dose entre efeito tóxico e terapêutico é o índice terapêutico. Os dados obtidos a partir destes ensaios de cultura celular e estudos em animais podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagem que é não tóxica para uso em seres humanos. A dosagem dos anticorpos descritos no presente documento se situa, de preferência, dentro de uma faixa de concentrações circulantes que incluem a dose eficaz com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar dentro desta faixa, dependendo da forma de dosagem empregada e da via de administração usada. A formulação, a via de administração e a dosagem exata podem ser escolhidas pelo médico individual, tendo em vista a condição do paciente.[0181] The toxicity of the antibodies and antibody structures described in this document can be determined by standard pharmaceutical procedures in cell cultures or experimental animals, for example, by determining LD50 (the lethal dose for 50% of the population) or LD100 ( the lethal dose for 100% of the population). The dose ratio between toxic and therapeutic effect is the therapeutic index. The data obtained from these cell culture assays and animal studies can be used to formulate a dosage range that is non-toxic for use in humans. The dosage of the antibodies described in this document is preferably within a range of circulating concentrations that include the effective dose with little or no toxicity. The dosage can vary within this range, depending on the dosage form employed and the route of administration used. The formulation, route of administration and exact dosage can be chosen by the individual physician, taking into account the patient's condition.

[0182] As composições para administração irão compreender comumente um anticorpo ou outro agente ablativo dissolvido num carreador farmaceuticamente aceitável, de preferência, um carreador aquoso. Uma variedade de carreadores aquosos pode ser usada, por exemplo, solução salina tamponada e similares. Estas soluções são estéreis e geralmente livres de matéria indesejável. Estas composições podem ser esterilizadas por técnicas de esterilização convencionais bem conhecidas. As composições podem conter substâncias auxiliares farmaceuticamente aceitáveis, conforme necessário, para aproximar condições fisiológicas como agentes tamponantes e de ajuste do pH, agentes de ajuste de toxicidade e similares, por exemplo, acetato de sódio, cloreto de sódio, cloreto de potássio, cloreto de cálcio, lactato de sódio e similares. A concentração de agente ativo nestas formulações pode variar amplamente e será selecionada principalmente com base em volumes de fluido, viscosidades, peso corporal e similares de acordo com o modo particular de administração selecionado e as necessidades do paciente (por exemplo, Remington's Pharmaceutical Science (15ª edição, 1980) e Goodman & Gillman, The Pharmacological Basis of Therapeutics (Hardman et al., eds., 1996)).[0182] Compositions for administration will commonly comprise an antibody or other ablative agent dissolved in a pharmaceutically acceptable carrier, preferably an aqueous carrier. A variety of aqueous carriers can be used, for example, buffered saline and the like. These solutions are sterile and generally free of unwanted matter. These compositions can be sterilized by conventional, well-known sterilization techniques. The compositions may contain pharmaceutically acceptable auxiliary substances, as needed, to approximate physiological conditions such as buffering and pH adjusting agents, toxicity adjusting agents and the like, for example, sodium acetate, sodium chloride, potassium chloride, chloride calcium, sodium lactate and the like. The concentration of active agent in these formulations can vary widely and will be selected primarily based on fluid volumes, viscosities, body weight and the like according to the particular mode of administration selected and the needs of the patient (eg Remington's Pharmaceutical Science (15th edition, 1980) and Goodman & Gillman, The Pharmacological Basis of Therapeutics (Hardman et al., eds., 1996)).

[0183] Também são abrangidos pelo escopo da invenção kits que compreendem os agentes ativos, e formulações dos mesmos, da invenção, e instruções para uso. Os kits podem ainda conter pelo menos um reagente adicional, por exemplo, um fármaco quimioterapêutico, etc. Os kits incluem tipicamente um rótulo que indica o uso pretendido dos conteúdos do kit. O termo rótulo inclui qualquer material escrito ou gravado fornecido no ou com o kit ou que, de outra forma, acompanha o kit.[0183] Also included in the scope of the invention are kits comprising the active agents, and formulations thereof, of the invention, and instructions for use. The kits can also contain at least one additional reagent, for example, a chemotherapeutic drug, etc. Kits typically include a label that indicates the intended use of the kit's contents. The term label includes any written or recorded material provided with or with the kit or that otherwise accompanies the kit.

[0184] A invenção agora sendo completamente descrita, ficará evidente para um versado na técnica que várias alterações e modificações podem ser feitas sem se afastar do espírito ou escopo da invenção.[0184] The invention now being fully described, it will be evident to a person skilled in the art that various changes and modifications can be made without departing from the spirit or scope of the invention.

EXEMPLOS EXEMPLO 1EXAMPLES EXAMPLE 1

RATOS GENETICAMENTE MODIFICADOS QUE EXPRESSAMGENETICALLY MODIFIED RATS EXPRESSING ANTICORPOS APENAS DE CADEIA PESADAHEAVY CHAIN ANTIBODIES ONLY

[0185] Um locus de IgH 'humana-rato' foi construído e montado em várias partes. Isto envolveu a modificação e junção de genes da região C de rato a jusante de JHs humanos e, subsequentemente, a adição a montante da região de segmento de VH6 –D humano. Dois BACs com agrupamentos separados de genes VH humanos [BAC6 e BAC3] foram, então, coinjetados com o BAC denominado Georg, que codifica a região modificada e montada que compreende VH6 humano, todos os Ds, todos os JHs e Cγ2a/1/2b de rato modificado (ΔCH1).[0185] An 'human-mouse' IgH locus was constructed and assembled in several parts. This involved the modification and joining of genes from the mouse C region downstream of human JHs and, subsequently, the addition upstream of the human VH6 – D segment region. Two BACs with separate clusters of human VH genes [BAC6 and BAC3] were then co-injected with the BAC called Georg, which encodes the modified and assembled region comprising human VH6, all Ds, all JHs and Cγ2a / 1 / 2b modified rat (ΔCH1).

[0186] Foram gerados ratos transgênicos que carregam loci de imunoglobulina de cadeia pesada artificial em configuração não rearranjada. Os genes IgG2a(ΔCH1)., IgG1(ΔCH1)., IgG2b(ΔCH1) eram desprovidos do segmento CH1. Os genes de região constante IgE, IgA e intensificador 3’ foram incluídos em Georg BAC. RT-PCR e análise de soro (ELISA) de ratos transgênicos revelaram rearranjo produtivo de loci de imunoglobulina transgênica e expressão de anticorpos apenas de cadeia pesada de vários isotipos em soro. Os ratos transgênicos foram cruzados com ratos com loci de cadeia pesada e cadeia leve endógenos mutados anteriormente descritos na publicação de patente US 2009/0098134 A1. A análise de tais animais demonstrou inativação da expressão de cadeia pesada e leve de imunoglobulina de rato e expressão de nível alto de anticorpos de cadeia pesada com regiões variáveis codificadas pelos genes V, D e J humanos. A imunização de ratos transgênicos resultou na produção de respostas sérias de alta titulação de anticorpos de cadeia pesada específicos de antígeno. Estes ratos transgênicos que expressam anticorpos de cadeia pesada com uma região VDJ humana foram denominados de UniRats. EXEMPLO 2[0186] Transgenic rats that carry artificial heavy chain immunoglobulin loci in non-rearranged configuration were generated. The IgG2a (ΔCH1)., IgG1 (ΔCH1)., IgG2b (ΔCH1) genes were devoid of the CH1 segment. The IgE, IgA and 3 'enhancer constant region genes were included in Georg BAC. RT-PCR and serum analysis (ELISA) of transgenic mice revealed productive rearrangement of transgenic immunoglobulin loci and expression of only heavy chain antibodies of various isotypes in serum. The transgenic mice were crossed with mice with mutated endogenous heavy chain and light chain loci previously described in US patent publication 2009/0098134 A1. The analysis of such animals demonstrated inactivation of heavy and light chain expression of rat immunoglobulin and high level expression of heavy chain antibodies with variable regions encoded by human V, D and J genes. Immunization of transgenic mice resulted in the production of serious high-titer responses to antigen-specific heavy chain antibodies. These transgenic mice that express heavy chain antibodies with a human VDJ region have been called UniRats. EXAMPLE 2

IMUNIZAÇÃOIMMUNIZATION IMUNIZAÇÃO COM DOMÍNIO EXTRACELULAR RECOMBINANTE DE BCMA.IMMUNIZATION WITH BCMA RECOMBINANT EXTRACELLULAR DOMAIN.

[0187] Doze animais UniRat (6 HC27, 6 HC28) foram imunizados com proteína de BCMA humana recombinante. Os animais foram imunizados de acordo com o protocolo padrão usando um adjuvante Titermax/Alhydrogel. O domínio extracelular recombinante de BCMA foi adquirido junto à R&D Systems e foi diluído com solução salina esterilizada e combinado com adjuvante. O imunógeno foi combinado com adjuvantes Titermax e Alhydrogel. A primeira imunização (priming) com imunógeno em Titermax foi administrada nas pernas esquerda e direita. As imunizações de reforço subsequentes foram feitas na presença de Alhydrogel e três dias antes da coleta foram realizados reforços com imunógenos em PBS. O soro foi coletado de ratos no sangramento final para determinar os títulos de soro.[0187] Twelve UniRat animals (6 HC27, 6 HC28) were immunized with recombinant human BCMA protein. The animals were immunized according to the standard protocol using a Titermax / Alhydrogel adjuvant. The recombinant extracellular domain of BCMA was acquired from R&D Systems and was diluted with sterile saline and combined with adjuvant. The immunogen was combined with Titermax and Alhydrogel adjuvants. The first immunization (priming) with immunogen in Titermax was administered to the left and right legs. Subsequent booster immunizations were performed in the presence of Alhydrogel, and three days before collection, boosters were made with immunogens in PBS. Serum was collected from rats on final bleeding to determine serum titers.

RESULTADOS DE TÍTULO DE SOROSERUM TITLE RESULTS

[0188] A atividade de ligação para uma única diluição de título de soro de 1:500 é testada por ELISA contra uma proteína huBCMA+Fc e uma proteína cynoBCMA+Fc produzida em células eucarióticas e duas proteínas de BCMA humanas de E. coli e germe de trigo, respectivamente. Além disto, as amostras de soro são testadas contra duas proteínas fora de alvo, HSA e IgG1 humana. Além disto, o soro de todos os animais é analisado quanto à ligação a células NCI-H929 (BCMA+, lambda-).[0188] The binding activity for a single 1: 500 serum titer dilution is tested by ELISA against a huBCMA + Fc protein and a cynoBCMA + Fc protein produced in eukaryotic cells and two human E. coli BCMA proteins and wheat germ, respectively. In addition, serum samples are tested against two out-of-target proteins, HSA and human IgG1. In addition, the serum of all animals is analyzed for binding to NCI-H929 cells (BCMA +, lambda-).

[0189] Visto que normalmente uma difusão significativa de resultados é observada em níveis de reatividade sérica para células[0189] Since normally a significant diffusion of results is observed in levels of serum reactivity for cells

NCI-H929 (BCMA+, lambda-), a relevância destes resultados é confirmada pelos dados de ligação de ELISA gerados para um subconjunto dos animais. O sinal positivo para ligação à proteína cynoBCMA+Fc pode refletir a ligação ao ECD ou à porção Fc da molécula que também está incluída no imunógeno humano. Em ambos os tipos de ensaio, a análise de soro retirado destes animais antes da imunização não mostrou reatividade ao imunógeno ou à proteína fora de alvo. EXEMPLO 3 ENSAIOS DE LIGAÇÃO, EXPRESSÃO E MONTAGEM DE GENENCI-H929 (BCMA +, lambda-), the relevance of these results is confirmed by the ELISA binding data generated for a subset of the animals. The positive signal for binding to the cynoBCMA + Fc protein may reflect the binding to the ECD or the Fc portion of the molecule that is also included in the human immunogen. In both types of assays, analysis of serum taken from these animals prior to immunization did not show reactivity to the immunogen or out-of-target protein. EXAMPLE 3 GENE CONNECTION, EXPRESSION AND ASSEMBLY TESTS

[0190] cDNAs que codificam anticorpos apenas de cadeia pesada altamente expressos em células de nódulos linfáticos foram selecionados para montagem de gene e clonados num vetor de expressão. Subsequentemente, estas sequências de cadeias pesadas foram expressas em células HEK como anticorpos apenas de cadeia pesada de UniAb (CH1 deletado, sem cadeia leve).[0190] cDNAs encoding only heavy chain antibodies highly expressed in lymph node cells were selected for gene assembly and cloned into an expression vector. Subsequently, these heavy chain sequences were expressed in HEK cells as UniAb heavy chain antibodies only (deleted CH1, no light chain).

[0191] Os resultados dos ensaios que testam a ligação dos anticorpos apenas de cadeia pesada anti-BCMA da invenção são mostrados na Figura 3.[0191] The results of the assays that test the binding of the anti-BCMA heavy chain antibodies of the invention are shown in Figure 3.

[0192] Os sobrenadantes de 6 anticorpos foram testados acerca da ligação num ensaio ELISA padrão a um BCMA humano. A ligação à proteína de BCMA recombinante foi determinada por ELISA usando BCMA ECD humano obtido junto à Abcam (ab50089). A proteína de BCMA ECD foi usada numa concentração de 2 μg/ml para capturar UniAbs a 50 ng/ml. A ligação de UniAbs foi detectada com um anticorpo conjugado com HRP anti-IgG humana de cabra (ThermoFisher 31413). Todos os anticorpos foram diluídos em 1X TBS com 0,05% de Tween- 20 e 1% de leite em pó seco.[0192] 6 antibody supernatants were tested for binding in a standard ELISA assay to a human BCMA. Binding to the recombinant BCMA protein was determined by ELISA using human BCMA ECD obtained from Abcam (ab50089). BCMA ECD protein was used at a concentration of 2 μg / ml to capture UniAbs at 50 ng / ml. The binding of UniAbs was detected with a goat anti-human IgG HRP-conjugated antibody (ThermoFisher 31413). All antibodies were diluted in 1X TBS with 0.05% Tween-20 and 1% dry milk powder.

[0193] A ligação fora do alvo ao Extrato de Proteína de Baculovírus (BVP) foi conduzida por ELISA conforme acima, com a modificação do uso de 1X PBS e 1% de leite em pó seco para o diluente. O extrato BVP foi obtido junto à INSERM (Nantes, França). Acredita-se que a ligação a partículas de baculovírus (>5 x em relação à base no presente ensaio) indique interações de baixa afinidade com tecidos humanos que se correlaciona com meias-vidas reduzidas de anticorpos em seres humanos e macacos (Hotzel et al., mAbs 4:6, páginas 753-760, 2012).[0193] Off-target binding to Baculovirus Protein Extract (BVP) was conducted by ELISA as above, with the modification of the use of 1X PBS and 1% dry milk powder for the diluent. The BVP extract was obtained from INSERM (Nantes, France). Binding to baculovirus particles (> 5 x relative to the base in this assay) is believed to indicate low affinity interactions with human tissues that correlate with reduced antibody half-lives in humans and monkeys (Hotzel et al. , mAbs 4: 6, pages 753-760, 2012).

[0194] A ligação fora do alvo de IgG1 humana foi avaliada por ELISA usando os UniAbs para capturar IgG1 kappa humana seguido da detecção da cadeia kappa com um anticorpo conjugado com HRP anti- kappa humana de cabra (Southern Biotech 2060-05).[0194] Off-target binding of human IgG1 was assessed by ELISA using UniAbs to capture human kappa IgG1 followed by detection of the kappa chain with an antibody conjugated to goat anti-human kappa HRP (Southern Biotech 2060-05).

[0195] Os sobrenadantes dos 6 anticorpos anti-BCMA de teste também foram testados por citometria de fluxo acerca da ligação a células RPMI-8226 (BCMA+, lambda +) e os sobrenadantes de todos os 35 anticorpos anti-BCMA também foram testados acerca da ligação a células H929 (BCMA+, lambda-). A última coluna na Figura 3 mostra a ligação a células de linfoma de Hodgkin derivado de célula T (HDLM2), que não expressam BCMA sobre a superfície celular.[0195] The supernatants of the 6 test anti-BCMA antibodies were also tested by flow cytometry for binding to RPMI-8226 cells (BCMA +, lambda +) and the supernatants of all 35 anti-BCMA antibodies were also tested for binding to H929 cells (BCMA +, lambda-). The last column in Figure 3 shows the binding to T-cell-derived Hodgkin's lymphoma (HDLM2) cells, which do not express BCMA on the cell surface.

[0196] As amostras foram medidas por citometria de fluxo com o uso de um instrumento Guava easyCyte 8HT da EMD Millipore e analisadas com o uso de guavaSoft. Os anticorpos ligados foram detectados com F(ab)2 anti-IgG humana de cabra conjugado com PE (Southern Biotech 2042-09). Todos os anticorpos foram diluídos em PBS com 1% de BSA. A coloração positiva foi determinada mediante a comparação com a coloração com um controle de isotipo de IgG1 humana. As linhagens de células NCI-H929 e RPMI-8226 são linhagens de mieloma múltiplo humano que expressam BCMA humano, que foram obtidas junto à American Type Culture Collection (ATCC) e cultivadas de acordo com as recomendações da ATCC.[0196] Samples were measured by flow cytometry using an EMD Millipore Guava easyCyte 8HT instrument and analyzed using guavaSoft. Bound antibodies were detected with goat anti-human IgG F (ab) 2 conjugated to PE (Southern Biotech 2042-09). All antibodies were diluted in PBS with 1% BSA. Positive staining was determined by comparison with staining with a human IgG1 isotype control. The cell lines NCI-H929 and RPMI-8226 are human multiple myeloma lines that express human BCMA, which were obtained from the American Type Culture Collection (ATCC) and cultured according to ATCC recommendations.

[0197] Seis UniAbs também foram avaliados acerca da capacidade de bloquear a ligação de APRIL (ligante)/BCMA (receptor) num ensaio do estilo ELISA de proteína recombinante. Para avaliar o bloqueio da interação de receptor/ligante entre BCMA e APRIL, o BCMA humano recombinante (Sino Biological 10620-H03H) foi diretamente revestido sobre placas seguido de incubação com uma série de diluição de cada UniAb. A proteína APRIL recombinante com etiqueta HA (RnD Systems 5860-AP-010) foi, então, incubada com os complexos de BCMA/anticorpo e a ligação de APRIL ao BCMA foi detectada usando um anticorpo anti-HA de galinha conjugado com HRP (Abcam ab1190). Um anticorpo anti-BCMA RnD systems (AF193) foi usado como um controle positivo para o bloqueio de BCMA/APRIL.[0197] Six UniAbs were also evaluated for the ability to block the APRIL (ligand) / BCMA (receptor) binding in a recombinant protein ELISA style assay. To assess the blocking of receptor / ligand interaction between BCMA and APRIL, recombinant human BCMA (Sino Biological 10620-H03H) was directly coated onto plates followed by incubation with a dilution series of each UniAb. The recombinant APRIL protein with HA tag (RnD Systems 5860-AP-010) was then incubated with the BCMA / antibody complexes and the binding of APRIL to BCMA was detected using an HRP-conjugated chicken anti-HA antibody (Abcam ab1190). An anti-BCMA RnD systems antibody (AF193) was used as a positive control for BCMA / APRIL block.

[0198] Na Figura 3, a coluna 8 indica a porcentagem de bloqueio da proteína de ligante de April à proteína de BCMA. A Coluna 9 indica a intensidade fluorescente média da ligação de célula a células RPMI- 8226 que expressam BCMA sobre a superfície celular. A Coluna 10 indica a intensidade fluorescente média da ligação de célula a células NCI-H929 que expressam BCMA sobre a superfície celular. A Coluna 11 indica a intensidade fluorescente média da ligação de célula a células HDLM2 que não expressam BCMA sobre a superfície celular.[0198] In Figure 3, column 8 indicates the percentage of April's ligand protein blocking to BCMA protein. Column 9 indicates the average fluorescent intensity of the cell binding to RPMI-8226 cells that express BCMA on the cell surface. Column 10 indicates the average fluorescent intensity of cell binding to NCI-H929 cells that express BCMA on the cell surface. Column 11 indicates the average fluorescent intensity of cell binding to HDLM2 cells that do not express BCMA on the cell surface.

[0199] Um ensaio de ligação fora do alvo adicional foi executado em partículas de baculovírus intactas (BVPs), embora nenhum dos UniAbs testados mostrasse ligação positiva.[0199] An additional off-target binding assay was performed on intact baculovirus particles (BVPs), although none of the UniAbs tested showed positive binding.

[0200] A Figura 4 mostra a afinidade de ligação de anticorpo apenas de cadeia pesada anti-BCMA 308902 nas formas monovalente e bivalente, conforme medido por interferometria BioLayer, usando um instrumento Octet QK384 (Fortebio Inc., Menlo Park, CA) no modo cinético, essencialmente conforme descrito em Concepcion, J, et al., Comb Chem High Throughput Screen, 12(8), 791-800, 2009. A afinidade de ligação (Kd) da forma monovalente foi de 779 pM e a Kd da forma bivalente foi de 53 pM.[0200] Figure 4 shows the binding affinity of anti-BCMA 308902 heavy chain antibody in monovalent and divalent forms, as measured by BioLayer interferometry, using an Octet QK384 instrument (Fortebio Inc., Menlo Park, CA) in mode kinetic, essentially as described in Concepcion, J, et al., Comb Chem High Throughput Screen, 12 (8), 791-800, 2009. The binding affinity (Kd) of the monovalent form was 779 pM and the Kd of the form bivalent was 53 pM.

[0201] Embora modalidades preferenciais da presente invenção tenham sido mostradas e descritas no presente documento, será óbvio para aqueles versados na técnica que tais modalidades são fornecidas a título de exemplo apenas.[0201] Although preferred embodiments of the present invention have been shown and described in the present document, it will be obvious to those skilled in the art that such modalities are provided by way of example only.

Diversas variações, alterações e substituições ocorrerão agora para aqueles versados na técnica sem que se afaste da invenção.Several variations, changes and substitutions will now occur for those skilled in the art without departing from the invention.

Deve-se entender que várias alternativas às modalidades da invenção descritas neste documento podem ser empregadas na prática da invenção.It should be understood that several alternatives to the modalities of the invention described in this document can be used in the practice of the invention.

Pretende-se que as seguintes reivindicações definam o escopo da invenção e que métodos e estruturas inseridos do escopo destas reivindicações e seus equivalentes estejam cobertos deste modo.The following claims are intended to define the scope of the invention and that methods and structures inserted within the scope of these claims and their equivalents are covered in this way.

Claims (30)

REIVINDICAÇÕES 1. Anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga ao Antígeno de Maturação de Célula B (BCMA) humano caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende: (a) uma CDR1 que tem duas ou menos substituições em qualquer uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 1 a 7; e/ou (b) uma CDR2 que tem duas ou menos substituições em qualquer uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 8 a 11; e/ou (c) uma CDR3 que tem duas ou menos substituições em qualquer uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 12 a 15.1. Only heavy chain antibody that binds to human B-Cell Maturation Antigen (BCMA) characterized by the fact that it comprises a variable heavy chain region comprising: (a) a CDR1 that has two or less substitutions in either the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1 to 7; and / or (b) a CDR2 that has two or less substitutions in any of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 8 to 11; and / or (c) a CDR3 that has two or less substitutions in any of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 12 to 15. 2. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as ditas sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 estão presentes numa estrutura humana.2. Heavy chain only antibody according to claim 1, characterized in that said sequences of CDR1, CDR2 and CDR3 are present in a human structure. 3. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente uma sequência de região constante de cadeia pesada na ausência de uma sequência de CH1.A heavy chain only antibody according to claim 1, characterized in that it additionally comprises a heavy chain constant region sequence in the absence of a CH1 sequence. 4. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de CDR1 selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1 a 7; e/ou (b) uma sequência de CDR2 selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 8 a 11; e/ou (c) uma sequência de CDR3 selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 12 a 15.A heavy chain only antibody according to any one of claims 1 to 3, characterized in that it comprises: (a) a sequence of CDR1 selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 7; and / or (b) a CDR2 sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 8 to 11; and / or (c) a CDR3 sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 12 to 15. 5. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de CDR1 selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1 a 7; e (b) uma sequência de CDR2 selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 8 a 11; e (c) uma sequência de CDR3 selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 12 a 15.5. Heavy chain only antibody according to claim 4, characterized by the fact that it comprises: (a) a sequence of CDR1 selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 7; and (b) a CDR2 sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 8 to 11; and (c) a CDR3 sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 12 to 15. 6. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que compreende: (i) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 12; ou (ii) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 14; ou (iii) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 2, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 9 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 13; ou (iv) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 15.6. Heavy chain-only antibody according to claim 5, characterized in that it comprises: (i) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and a sequence of CDR3 of SEQ ID NO: 12; or (ii) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 14; or (iii) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 2, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 9 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 13; or (iv) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 15. 7. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia pesada que tem pelo menos 95% de identidade de sequência com qualquer uma das sequências de SEQ ID NOs: 16 a 50.A heavy chain only antibody according to any one of claims 1 to 3, characterized in that it comprises a heavy chain variable region that has at least 95% sequence identity with any of the sequences of SEQ ID NOs : 16 to 50. 8. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de região variável de cadeia pesada selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 16 a 50.8. Heavy chain only antibody according to claim 7, characterized in that it comprises a heavy chain variable region sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 16 to 50. 9. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de região variável de cadeia pesada selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 16, 17, 18, 30, 34 e 38.9. Heavy chain only antibody according to claim 8, characterized by the fact that it comprises a heavy chain variable region sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 16, 17, 18, 30, 34 and 38 . 10. Anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga ao Antígeno de Maturação de Célula B (BCMA) humano caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma variável de cadeia pesada que compreende: (a) uma sequência de CDR1 da Fórmula G F T X1 X2 X3 X4 X5 (SEQ ID NO: 51) onde X1 é V, I ou F; X2 é S ou T; X3 é S ou N; X4 é Y ou S; X5 é G ou A; (b) uma sequência de CDR2 da Fórmula I X6 G X7 X8 X9 X10 T (SEQ ID NO: 52) onde X6 é R ou S; X7 é S ou D; X8 é D, G, ou S; X9 é G ou D; X10 é S, T ou N; e (c) uma sequência de CDR3 da Fórmula A K Q G X11 N D G P F D X12 (SEQ ID NO: 53) onde X11 é G ou E; X12 é Y ou H.10. Only heavy chain antibody that binds to human B Cell Maturation Antigen (BCMA) characterized by the fact that it comprises a heavy chain variable region comprising a heavy chain variable comprising: (a) a sequence of CDR1 Formula GFT X1 X2 X3 X4 X5 (SEQ ID NO: 51) where X1 is V, I or F; X2 is S or T; X3 is Y or N; X4 is Y or S; X5 is G or A; (b) a Formula I CDR2 sequence X6 G X7 X8 X9 X10 T (SEQ ID NO: 52) where X6 is R or S; X7 is S or D; X8 is D, G, or S; X9 is G or D; X10 is S, T or N; and (c) a CDR3 sequence of Formula A K Q G X11 N D G P F D X12 (SEQ ID NO: 53) where X11 is G or E; X12 is Y or H. 11. Anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga ao11. Only heavy chain antibody that binds to Antígeno de Maturação de Célula B (BCMA) humano caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 numa estrutura de VH humana em que as sequências de CDR são uma sequência que tem duas ou menos substituições numa sequência de CDR selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1 a 15.Human B-Cell Maturation Antigen (BCMA) characterized by the fact that it comprises a heavy chain variable region comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences in a human VH structure in which the CDR sequences are a sequence that has two or less substitutions in a CDR sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 15. 12. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 numa estrutura de VH humana em que as sequências de CDR são selecionadas do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1 a 15.12. Heavy chain only antibody according to claim 11, characterized in that it comprises a variable region of heavy chain comprising sequences of CDR1, CDR2 and CDR3 in a human VH structure in which the CDR sequences are selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 15. 13. Anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga ao Antígeno de Maturação de Célula B (BCMA) humano caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende: (i) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 12; ou (ii) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 14; ou (iii) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 2, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 9 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 13; ou (iv) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 8 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 15, numa estrutura de VH humana.13. Only heavy chain antibody that binds to human B Cell Maturation Antigen (BCMA) characterized by the fact that it comprises a heavy chain variable region comprising: (i) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 12; or (ii) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 14; or (iii) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 2, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 9 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 13; or (iv) a CDR1 sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 sequence of SEQ ID NO: 8 and a CDR3 sequence of SEQ ID NO: 15, in a human VH structure. 14. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que é multiespecífico.14. Heavy chain only antibody according to any one of claims 1 to 13, characterized by the fact that it is multispecific. 15. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que é biespecífico.15. Heavy chain only antibody according to claim 14, characterized by the fact that it is bispecific. 16. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que tem afinidade de ligação com duas proteínas de BCMA diferentes.16. Heavy chain only antibody according to claim 15, characterized by the fact that it has binding affinity with two different BCMA proteins. 17. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que tem afinidade de ligação com dois epítopos diferentes na mesma proteína de BCMA.17. Heavy chain only antibody according to claim 15, characterized by the fact that it has binding affinity with two different epitopes on the same BCMA protein. 18. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que tem afinidade de ligação com uma célula efetora.18. Heavy chain only antibody, according to claim 14, characterized by the fact that it has binding affinity with an effector cell. 19. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que tem afinidade de ligação com um antígeno de célula T.19. Heavy chain only antibody according to claim 14, characterized by the fact that it has binding affinity with a T cell antigen. 20. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que tem afinidade de ligação com CD3.20. Heavy chain only antibody according to claim 19, characterized by the fact that it has binding affinity for CD3. 21. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que está num formato de CAR-T.21. Heavy chain only antibody according to any one of claims 1 to 20, characterized in that it is in a CAR-T format. 22. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende um anticorpo apenas de cadeia pesada, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 21.22. Pharmaceutical composition characterized by the fact that it comprises a heavy chain only antibody, as defined in any one of claims 1 to 21. 23. Método para o tratamento de um distúrbio de célula B caracterizado pelo fato de que a expressão de BCMA compreende administrar a um indivíduo com o dito distúrbio um anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 21, ou uma composição farmacêutica, como definida na reivindicação 22.23. Method for the treatment of a B cell disorder characterized by the fact that BCMA expression comprises administering to an individual with said disorder an antibody, as defined in any one of claims 1 to 21, or a pharmaceutical composition, such as defined in claim 22. 24. Método, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o distúrbio de célula B é mieloma múltiplo.24. Method according to claim 23, characterized by the fact that the B cell disorder is multiple myeloma. 25. Método, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o distúrbio de célula B é lúpus eritematoso sistêmico.25. Method according to claim 23, characterized by the fact that the B cell disorder is systemic lupus erythematosus. 26. Polinucleotídeo caracterizado pelo fato de que codifica um anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a26. Polynucleotide characterized by the fact that it encodes an antibody, as defined in any one of claims 1 to 21.21. 27. Vetor caracterizado pelo fato de que compreende o polinucleotídeo, como definido na reivindicação 26.27. Vector characterized by the fact that it comprises the polynucleotide, as defined in claim 26. 28. Célula caracterizada pelo fato de que compreende o vetor, como definido na reivindicação 27.28. Cell characterized by the fact that it comprises the vector, as defined in claim 27. 29. Método para produzir um anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que compreende cultivar uma célula, como definida na reivindicação 28, sob condições permissivas para expressão da proteína e isolar o anticorpo das células.29. Method for producing an antibody, as defined in any one of claims 1 to 21, characterized in that it comprises culturing a cell, as defined in claim 28, under permissive conditions for expression of the protein and isolating the antibody from the cells. 30. Método para fabricar anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que compreende imunizar um animal UniRat com BCMA e identificar sequências de cadeia pesada de ligação ao BCMA.30. Method for making antibody, as defined in any one of claims 1 to 21, characterized in that it comprises immunizing a UniRat animal with BCMA and identifying BCMA-binding heavy chain sequences.