BR112019022423A2

BR112019022423A2 - composto ou um agente que alveja integrina, composição, e, métodos para produzir um lipossomo, para produzir um agente que alveja integrina, para liberação de fármaco, para obter imagens, para liberar um agente bioativo, para obter imagem de uma estrutura biológica e para identificar um paciente em risco

Info

Publication number: BR112019022423A2
Application number: BR112019022423-8A
Authority: BR
Inventors: Darren Woodside; Peter Vanderslice; Robert Market; Ronald Biediger; Richard Dixon; James T. Willerson; Ananth Annapragada; Eric Tanifum
Original assignee: Texas Children's Hospital; Texas Heart Institute
Priority date: 2017-04-28
Filing date: 2018-04-27
Publication date: 2020-09-01
Also published as: CA3061174A1; EP3615087B1; IL270217A; EP3615087A1; AU2018258681A1; NZ759001A; KR20200018407A; WO2018201069A1; AU2018258681B2; CN111093717A; EP3615087A4; US11312685B2; MX2019012699A; JP2020518666A; IL270217B1; CN111093717B; US20210188774A1

Abstract

  É aqui descrita uma composição compreendendo uma pluralidade de lipossomos com um diâmetro médio menor que 400 nanômetros, em que a pluralidade de lipossomos compreende: um primeiro lipídeo ou fosfolipídeo; um segundo lipídeo ou fosfolipídeo que é derivado de um polímero; e um excipiente estericamente volumoso capaz de estabilizar os lipossomos; um terceiro lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina; DSPE ou um quarto lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de contraste em que a pluralidade de lipossomos opcionalmente encapsula um componente de carga útil consistindo em um ou mais agentes bioativos.

Description

1 / 72 COMPOSTO OU UM AGENTE QUE ALVEJA INTEGRINA, COMPOSIÇÃO, E, MÉTODOS PARA PRODUZIR UM LIPOSSOMO, PARA PRODUZIR UM AGENTE QUE ALVEJA INTEGRINA, PARA LIBERAÇÃO DE FÁRMACO, PARA OBTER IMAGENS, PARA LIBERAR UM AGENTE BIOATIVO, PARA OBTER IMAGEM DE UMA

ESTRUTURA BIOLÓGICA E PARA IDENTIFICAR UM PACIENTE EM RISCO DECLARAÇÃO RELACIONADA À PESQUISA OU DESENVOLVIMENTO PATROCIONADO PELO GOVERNO FEDERAL

[001] Não aplicável.

FUNDAMENTOS CAMPO DA INVENÇÃO

[002] Esta invenção se refere em geral ao campo da nanotecnologia em aplicações médicas. Especificamente, a invenção se refere a alvejar nanopartículas para o diagnóstico e tratamento de patologias.

FUNDAMENTOS DA INVEÇÃO

[003] O monitoramento e a liberação de carga útil para as células imunes ativadas é um processo muito importante no diagnóstico e tratamento de patologias graves. Por exemplo, em placas ateroscleróticas, sabe-se que uma alta prevalência de macrófagos ativados está correlacionada com a maturidade da placa e o potencial para vulnerabilidade. O imageamento de nanopartículas alvejadas nestes macrófagos é reconhecido como um método para identificar as placas. O imageamento de outras células imunes nas placas pode melhorar muito a sensibilidade e especificidade potencial do método.

[004] Admite-se que tumores desviam a função das células imunes associadas ao tumor para possibilitar o escape de célula tumoral. Um objetivo chave no campo da imunoterapia para o câncer é a capacidade de monitorar a prevalência de célula imune intra-tumoral, como um indicador de eficiência terapêutica.

2 / 72

[005] Existe uma necessidade contínua de desenvolver métodos de e sistemas de alvejamento eficientes para melhor diagnóstico e tratamento de várias doenças.

SUMÁRIO

[006] É aqui descrito um composto ou um agente que alveja integrina, incluindo isômeros óticos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, da fórmula: em que, R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), - N(alquila C1-C3)SO2(alquila C1-C3), -N(alquila C1-C3)SO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, OCF2, OCH2CF3, acila alifática, O(cicloalquilalquila), O(aralquila), -SO2(1-pirolidinila), SO2(1-piperidinila), piperidinila,

3 / 72 pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); Z é N ou CR2; R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio, halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, - CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2 , -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)-C(O)(alquila C1-C3), - NHC(O)N(alquila C1-C3), -C(O)NH(alquila C1-C3), -NHC(O)NH(alquila C1- C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), -C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH- alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, -CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1- C3), -SO3(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila e- C(O)NH(benzila); e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2 , -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, hidroxialcóxi, alquilamino, alquenilamino, di(alquila C1- C3)amino, -C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, -CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila,

4 / 72 heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); R1, R2, R3 e R4 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R5 em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir de uma cadeia C7-C21 que consiste em grupo alquila ou alquenila; m e p são independentemente em cada ocorrência um número inteiro de 0 a 5; L1 é uma cadeia de 3-14 átomos, contendo qualquer combinação de -CH2-, -C(O)-, -NH-, -S-, -S(O)-, -O-, - C(O)O- ou -S(O)2-; X é selecionado a partir de um grupo que consiste em: , , , , e ; s é um número inteiro de 1-2; L2 é uma cadeia –(CH2CH2O)n- onde n é um número inteiro na faixa de 7-115; e Y é (CH2)q onde q é um número inteiro de 0 a 2; em que o dito composto tem um peso molecular médio de 2000 a 7000.

[007] Em uma modalidade, o composto tem a fórmula: em que, R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alcóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, -CF3, -CN, -NO2, -NH2, -OH, - NHSO2(alquila C1-C3), alcoxialquila, alquilamino, cicloalquila, aralquila, - SO2(alquila), -OCF2, acila alifática, -OCH2CF3, alcoxialcóxi, - O(cicloalquilalquila), -O(aralquila), -SO2(1-pirrolidinila), -SO2(1-piperidinil) piperidinila e pirrolidinila, e em que cada R1 é independentemente não

5 / 72 substituído ou substituído por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; Z é N ou CR2; R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio, halogênio e alquila inferior; e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel e em que cada R2, quando presente, e R3 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alcóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, hidroxialcóxi, -CF3, -NH2 , -OH, -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, di(alquila C1-C3)amino, -C(O)O-alquila-(C1-C3), - C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, haloalquila, alcoxialcóxi, cicloalquila, arila, sulfonamido, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila e pirrolidinila, em que cada R4 é independentemente não substituído ou substituído por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R5 em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir de uma cadeia C7-C21 que consiste em grupo alquila ou alquenila; m e p são independentemente em cada ocorrência um número inteiro de 0 a 5; L1 é uma cadeia de 3-14 átomos, contendo qualquer combinação de -CH2-, -C(O)-, -NH-, -S-, -S(O)-, -O-, -C(O)O- ou - S(O)2-; X é selecionado a partir de um grupo que consiste em: , , , , e ; s é um número inteiro de 1-2; L2 é uma cadeia –(CH2CH2O)n- onde n é um número inteiro na faixa de 38 a 115; e Y é (CH2)q onde q é um número inteiro de 0 a

2. Em uma modalidade, cada R5 é (CH2)rCH3 em que r é 10-20.

[008] Em uma modalidade, o composto tem a fórmula:

6 / 72 em que n é um número inteiro na faixa de 38 a 115.

[009] Em uma modalidade, L1 é um radical 1,8-(3,6-dioxa)octan-di- ila, radical 1,5-(3-oxa)pentan-di-ila, ou radical alcan-di-ila C3-C12.

[0010] Em uma modalidade, o composto tem a fórmula: em que cada R6 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior e hidroxialquil; em que m e p são cada independentemente um número inteiro de 0-4.

[0011] Em uma modalidade, o composto tem uma estrutura da maneira a seguir: .

[0012] Em uma modalidade, o composto tem uma estrutura da maneira a seguir:

7 / 72 .

[0013] Em uma modalidade, o composto tem a fórmula: .

[0014] Em uma modalidade, o composto desta descrição possibilita a geração de imagens MRI. Nestes casos, estas imagens MRI são geradas em intensidade de campo clinicamente relevantes, por exemplo, intensidade de campo de 1 Tesla.

[0015] Igualmente, é aqui descrita uma composição compreendendo uma pluralidade de lipossomos com um diâmetro médio menor que 400 nanômetros, em que a pluralidade de lipossomos compreende: um primeiro lipídio ou fosfolipídio; um segundo lipídio ou fosfolipídio que é derivado de um polímero; um excipiente estericamente volumoso capaz de estabilizar os lipossomos; um terceiro lipídio ou fosfolipídio derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina; e opcionalmente DSPE ou um quarto lipídio ou fosfolipídio derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de contraste em que a pluralidade de lipossomos opcionalmente encapsula um componente de carga útil consistindo em um ou mais agentes bioativos. Em uma modalidade (por exemplo, a formulação doxorubicina), em que o quarto lipídio ou fosfolipídio não está presente, o

8 / 72 equilíbrio é DPPC, que é o mesmo que o primeiro lipídio ou fosfolipídio. Da maneira aqui usada, um agente intensificador de contraste é aquele que permite obter ou gerar imagens ou melhorar a qualidade de uma imagem obtida em um ambiente clínico.

[0016] Em uma modalidade, uma composição compreende uma pluralidade de lipossomos, os ditos lipossomos compreendendo: um primeiro lipídio ou fosfolipídio; um segundo lipídio ou fosfolipídio que é derivado de um polímero; um excipiente estericamente volumoso capaz de estabilizar os lipossomos; um terceiro lipídio ou fosfolipídio derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina; e DSPE ou um quarto lipídio ou fosfolipídio derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de contraste, em que a pluralidade de lipossomos opcionalmente encapsula um componente de carga útil consistindo em um ou mais agentes bioativos, rodamina, DHPE ou agente de contraste de iodo; em que a pluralidade de lipossomos tem um diâmetro médio menor que 400 nanômetros.

[0017] Em uma modalidade, o primeiro lipídio ou fosfolipídio compreende DPPC ou HSPC. HSPC representa fosfatidilcolina de soja hidrogenada. Em uma modalidade, o segundo lipídio ou fosfolipídio que é derivado de um polímero compreende mPEG (2000)-DSPE. Em uma modalidade, o terceiro lipídio ou fosfolipídio derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina é um composto da maneira aqui discutida.

[0018] Em uma modalidade, o quarto lipídio opcional ou fosfolipídio derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de contraste não radioativo é bis estearilamina-DTPA-Gd. Em uma modalidade, o quarto lipídio opcional ou fosfolipídio derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de contraste não radioativo é Gd-DOTA-DSPE. DOTA representa ácido 1,4,7,10-Tetraazaciclododecano-1,4,7,10-tetra-acético. DSPE

9 / 72 representa 1,2-Distearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina. Em uma modalidade, o primeiro lipídio ou fosfolipídio, o segundo lipídio ou fosfolipídio que é derivado de um polímero, e o excipiente estericamente volumoso capaz de estabilizar os lipossomos, e o quarto lipídio ou fosfolipídio derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de contraste não radioativo estão presentes em uma razão molar de cerca de 30-32:3:40:25.

[0019] Em uma modalidade, o lipídio ou fosfolipídio derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina consiste em 0,05 a 2,0% (mole por cento) do composto, da maneira aqui discutida. Em uma modalidade, o quarto lipídio opcional capaz de se ligar a um sal de gadolínio não radioativo é substituído por 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DSPE). Em uma modalidade, o agente bioativo é selecionado a partir de um grupo que compreende: doxorubicina, paclitaxel, daunorubicina, vincristina, tretinoina, cisplatina, anamicina, vinorelbina, HCl de irinotecano, ou floxuridina. Em uma modalidade, os lipossomos têm um diâmetro médio de cerca de 150 nm. Em uma modalidade, os lipossomos têm um diâmetro médio menor que 250 nm. Em uma modalidade, o agente bioativo compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em um quimioterapêutico, um gene, uma proteína, uma molécula pequena e um peptídeo.

[0020] Em uma modalidade, a composição é capaz de ser detectada usando pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em CT, micro-CT, mamografia, raios-X, MRI, espectroscopia de ressonância magnética, imageamento por bioluminescência, ultrassom, imageamento ótico, espectroscopia ótica, espectroscopia por fluorescência, imageamento por fluorescência, espectroscopia quase infravermelha e imageamento quase infravermelho. Em várias modalidades, a composição é usada em uma modalidade de imageamento ou usada para liberação de fármaco. Em uma modalidade, a composição desta descrição possibilita a geração de imagens

10 / 72 MRI. Em uma modalidade, a composição desta descrição possibilita a geração de imagens MRI em intensidade de campo clinicamente relevante, por exemplo, intensidade de campo de 1 Tesla.

[0021] Aqui também é descrito um método para produzir um lipossomo compreendendo combinar um primeiro lipídio ou fosfolipídio com um segundo lipídio ou fosfolipídio derivado de um polímero, um excipiente estericamente volumoso para estabilizar o lipossomo, um terceiro lipídio ou fosfolipídio derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina, e DSPE ou um quarto lipídio ou fosfolipídio capaz de se ligar a um agente de contraste não radioativo, e realizar extrusão para formar partículas menores que 400 nm.

[0022] Em uma modalidade, o lipossomo compreende um agente intensificador de contraste. Em uma modalidade, o lipossomo encapsula um componente de carga útil consistindo em um ou mais agentes bioativos.

[0023] Em uma modalidade, o componente que alveja integrina tem um peso molecular de 2000 a 7000, inclui isômeros óticos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, e é da fórmula: em que R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), -

11 / 72

N(alquila C1-C3)SO2(alquila C1-C3), -N(alquila C1-C3)SO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, OCF2, OCH2CF3, acila alifática, O(cicloalquilalquila), O(aralquila), -SO2(1-pirolidinila), SO2(1-piperidinila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); Z é N ou CR2; R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio, halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, - CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2 , -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)-C(O)(alquila C1-C3), - NHC(O)N(alquila C1-C3), -C(O)NH(alquila C1-C3), -NHC(O)NH(alquila C1- C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), -C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH- alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, -CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1- C3), -SO3(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila e - C(O)NH(benzila); e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi,

12 / 72 hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2 , -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, di(alquila C1-C3)amino, -C(O)O- alquila-(C1-C3), -C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, hidroxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); R1, R2, R3 e R4 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R5 em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir de uma cadeia C7-C21 que consiste em grupo alquila ou alquenila; m e p são independentemente em cada ocorrência um número inteiro de 0 a 5; L1 é uma cadeia de 3-14 átomos, contendo qualquer combinação de -CH2-, -C(O)-, -NH-, -S-, -S(O)-, -O-, - C(O)O- ou -S(O)2-; X é selecionado a partir de um grupo que consiste em: , , , , e ; s é um número inteiro de 1-2; L2 é uma cadeia –(CH2CH2O)n- onde n é um número inteiro na faixa de 38 a 115 e Y é (CH2)q onde q é um número inteiro de 0 a 2.

[0024] Em uma modalidade, o componente que alveja integrina é da fórmula:

13 / 72 em que R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alcóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, -CF3, -CN, -NO2, -NH2, -OH, - NHSO2(alquila C1-C3), alcoxialquila, alquilamino, cicloalquila, aralquila, - SO2(alquila), -OCF2, acila alifática, -OCH2CF3, alcoxialcóxi, - O(cicloalquilalquila), -O(aralquila), -SO2(1-pirrolidinila), -SO2(1-piperidinil) piperidinila, e pirrolidinila, e em que cada R1 é independentemente não substituído ou substituído por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; Z é N ou CR2; R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio, halogênio, e alquila inferior; e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel e em que cada R2, quando presente, e R3 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alcóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, hidroxialcóxi, -CF3, -NH2 , -OH, -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, di(alquila C1-C3)amino, -C(O)O-alquila-(C1-C3), - C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, haloalquila, alcoxialcóxi, cicloalquila, arila, sulfonamido, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila e pirrolidinila, em que cada R4 é independentemente não substituído ou substituído por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R5 em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir de uma cadeia C7-C21 que consiste em grupo alquila ou alquenila; m e p são independentemente em cada ocorrência

14 / 72 um número inteiro de 0 a 5; L1 é uma cadeia de 3-14 átomos, contendo qualquer combinação de -CH2-, -C(O)-, -NH-, -S-, -S(O)-, -O-, -C(O)O- ou - S(O)2-; X é selecionado a partir de um grupo que consiste em: , , , , e ; s é um número inteiro de 1-2; L2 é uma cadeia –(CH2CH2O)n- onde n é um número inteiro na faixa de 38 a 115; e Y é (CH2)q onde q é um número inteiro de 0 a 2.

[0025] Em uma modalidade, cada R5 é (CH2)rCH3 em que r é 10-20.

[0026] Em uma modalidade, o componente que alveja integrina é da fórmula: em que n é um número inteiro na faixa de 38 a 115.

[0027] Em uma modalidade, L1 é um radical 1,8-(3,6-dioxa)octan-di- ila, radical 1,5-(3-oxa)pentan-di-ila, ou radical alcan-di-ila C3-C12.

[0028] Em uma modalidade, o componente que alveja integrina é da fórmula: em que cada R6 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior e hidroxialquila.

15 / 72

[0029] Em uma modalidade, o componente que alveja integrina tem uma estrutura da maneira a seguir:

[0030] Em uma modalidade, o componente que alveja integrina tem uma estrutura da maneira a seguir:

[0031] Em uma modalidade, o componente que alveja integrina é da fórmula:

[0032] Em uma modalidade, o lipossomo possibilita a geração de imagens MRI. Em uma modalidade, o lipossomo possibilita a geração de imagens MRI em intensidade clinicamente relevante, por exemplo, intensidade de campo de 1 Tesla.

[0033] Adicionalmente, é descrito um método para produzir um

16 / 72 agente que alveja integrina, compreendendo formar um antagonista de VLA-4 funcionalmente protegido da estrutura, incluindo isômeros óticos:

em que, R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), - N(alquila C1-C3)SO2(alquila C1-C3), -N(alquila C1-C3)SO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, OCF2, OCH2CF3, acila alifática, O(cicloalquilalquila), O(aralquila), -SO2(1-pirolidinila), SO2(1-piperidinila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); Z é N ou CR2; R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio, halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, - CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2 , -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)-C(O)(alquila C1-C3), - NHC(O)N(alquila C1-C3), -C(O)NH(alquila C1-C3), -NHC(O)NH(alquila C1- C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino,

17 / 72 alquenilamino, diamino(C1-C3), -C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH- alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, -CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1- C3), -SO3(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila e - C(O)NH(benzila); e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2 , -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, di(alquila C1-C3)amino, -C(O)O- alquila-(C1-C3), -C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, hidroxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); R1, R2, R3 e R4 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; o método compreendendo sintetizar um fosfolipídio alquilando a piridona hidroxila com um grupo de ligação funcionalizado de 3-17 átomos; modificar opcionalmente o grupo funcional terminal; e anexar

18 / 72 a um grupo polimérico adequado para a formação de lipossomo, por meio do acoplamento de amida, formação de carbamato ou formação de triazol, e desproteção de grupos funcionais.

[0034] Em uma modalidade, o agente que alveja integrina tem um peso molecular médio de 2000-7000. Em uma modalidade, o agente que alveja integrina possibilita a geração de imagens MRI. Em uma modalidade, o agente que alveja integrina possibilita a geração de imagens MRI em intensidade de campo clinicamente relevante, por exemplo, em intensidade de campo de 1 Tesla. Em uma modalidade, o agente que alveja integrina é incorporado em um veículo de liberação para liberação de fármaco ou diagnóstico.

[0035] É aqui discutido um método de liberação de fármaco, compreendendo formar uma pluralidade de lipossomos com um diâmetro médio menor que 400 nanômetros, os ditos lipossomos compreendendo: um primeiro lipídio ou fosfolipídio; um segundo lipídio ou fosfolipídio que é derivado de um polímero; um excipiente estericamente volumoso capaz de estabilizar os lipossomos; um terceiro lipídio ou fosfolipídio derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina com um peso molecular médio de 2000-7000; opcionalmente DSPE; encapsular pelo menos um agente bioativo usando a dita pluralidade de lipossomos; e administrar a dita pluralidade de lipossomos a um paciente. Em uma modalidade, DPPC é usada em vez de DSPE.

[0036] Em uma modalidade, o agente bioativo compreende doxorubicina, paclitaxel, daunorubicina, vincristina, tretinoina, cisplatina, anamicina, vinorelbina, HCl de irinotecano ou floxuridina. Em uma modalidade, o componente que alveja integrina, incluindo isômeros óticos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, é da fórmula:

19 / 72 em que, R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), - N(alquila C1-C3)SO2(alquila C1-C3), -N(alquila C1-C3)SO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, OCF2, OCH2CF3, acila alifática, O(cicloalquilalquila), O(aralquila), -SO2(1-pirolidinila), SO2(1-piperidinila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); Z é N ou CR2; R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio, halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, - CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2 , -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)-C(O)(alquila C1-C3), - NHC(O)N(alquila C1-C3), -C(O)NH(alquila C1-C3), -NHC(O)NH(alquila C1- C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino,

20 / 72 alquenilamino, diamino(C1-C3), -C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH- alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, -CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1- C3), -SO3(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila e - C(O)NH(benzila); e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2 , -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, di(alquila C1-C3)amino, -C(O)O- alquila-(C1-C3), -C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, hidroxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); R1, R2, R3 e R4 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R5 em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir de uma cadeia C7-C21 que consiste em grupo alquila ou alquenila; m e p são independentemente em cada ocorrência um número inteiro de 0 a 5; L1 é uma cadeia de 3-14 átomos,

21 / 72 contendo qualquer combinação de -CH2-, -C(O)-, -NH-, -S-, -S(O)-, -O-, - C(O)O- ou -S(O)2-; X é selecionado a partir de um grupo que consiste em: , , , , e ; s é um número inteiro de 1-2; L2 é uma cadeia –(CH2CH2O)n- onde n é um número inteiro na faixa de 38 a 115; e Y é (CH2)q onde q é um número inteiro de 0 a 2.

[0037] É aqui descrito em método de imagear compreendendo formar uma pluralidade de lipossomos com um diâmetro médio menor que 400 nanômetros, os ditos lipossomos compreendendo: um primeiro lipídio ou fosfolipídio; um segundo lipídio ou fosfolipídio que é derivado de um polímero; um excipiente estericamente volumoso capaz de estabilizar os lipossomos; um terceiro lipídio ou fosfolipídio derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina com um peso molecular médio de 2000-7000; um quarto lipídio ou fosfolipídio; incorporar um agente intensificador de contraste na dita pluralidade de lipossomos; e usar uma modalidade de imageamento selecionado a partir do grupo que consiste em CT, micro-CT, mamografia, raios-X, MRI, espectroscopia de ressonância magnética, imageamento por bioluminescência, ultrassom, imageamento ótico, espectroscopia ótica, espectroscopia por fluorescência, espectroscopia quase infravermelha e imageamento quase infravermelho. Em uma modalidade, as imagens MRI são geradas em intensidade de campo de 1 Tesla. Em uma modalidade, as imagens MRI são geradas em intensidade de campo maior que 1 Tesla.

[0038] Em uma modalidade, o componente que alveja integrina, incluindo isômeros óticos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, é da fórmula:

22 / 72 em que, R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), - N(alquila C1-C3)SO2(alquila C1-C3), -N(alquila C1-C3)SO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, OCF2, OCH2CF3, acila alifática, O(cicloalquilalquila), O(aralquila), -SO2(1-pirolidinila), SO2(1-piperidinila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); Z é N ou CR2; R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio, halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, - CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2 , -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)-C(O)(alquila C1-C3), - NHC(O)N(alquila C1-C3), -C(O)NH(alquila C1-C3), -NHC(O)NH(alquila C1- C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino,

23 / 72 alquenilamino, diamino(C1-C3), -C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH- alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, -CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1- C3), -SO3(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila e - C(O)NH(benzila); e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2 , -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, di(alquila C1-C3)amino, -C(O)O- alquila-(C1-C3), -C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, hydroxalcoxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); R1, R2, R3 e R4 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R5 em cada ocorrência é independentemente selecionado a partir de uma cadeia C7-C21 que consiste em grupo alquila ou alquenila; m e p são independentemente em cada ocorrência um número inteiro de 0 a 5; L1 é

24 / 72 uma cadeia de 3-14 átomos, contendo qualquer combinação de -CH2-, -C(O)-, -NH-, -S-, -S(O)-, -O-, -C(O)O- ou -S(O)2-; X é selecionado a partir de um grupo que consiste em: , , , , e ; s é um número inteiro de 1-2; L2 é uma cadeia –(CH2CH2O)n- onde n é um número inteiro na faixa de 38 a 115; e Y é (CH2)q onde q é um número inteiro de 0 a 2.

[0039] É aqui descrita uma composição compreendendo uma pluralidade de lipossomos, em que a pluralidade de lipossomos compreende uma molécula que alveja integrina, em que a molécula que alveja integrina compreende uma fração de lipídio ou fosfolipídio derivado de polímero e uma fração que alveja integrina. Em uma modalidade, a fração que alveja integrina tem uma das seguintes estruturas:

R Cl O CO2H

O N N N

H H OEt O OEt , , ou , em que R é o ponto de anexação para a fração de lipídio ou fosfolipídio derivado de polímero. Em uma modalidade, a molécula que alveja integrina é um composto desta descrição. Em uma modalidade, a pluralidade de lipossomos tem um diâmetro médio de 150 a 175 nm. Em uma modalidade, a molécula que alveja integrina compreende cerca de 0,05 a 2% em mole da pluralidade de lipossomos. Em uma modalidade, a pluralidade de

25 / 72 lipossomos compreende adicionalmente um agente bioativo. Em uma modalidade, o agente bioativo é encapsulado na pluralidade de lipossomos.

[0040] Em uma modalidade, a pluralidade de lipossomos compreende adicionalmente um lipídio ou fosfolipídio derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de contraste. Em uma modalidade, o lipídio ou fosfolipídio derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de contraste compreende uma fração de DTPA-Gd ou uma de DOTA-Gd. Em uma modalidade, os lipossomos compreendem 30 a 45% em mole de DPPC, 15 a 45% em mole de colesterol, 1 a 6% em mole de DSPE-MPEG-2000, 20 a 30% em mole de Gd-DOTA-DSPE, e 0,05 a 2% em mole de THI-567.

[0041] É aqui discutido um método de liberar um agente bioativo para uma célula alvo em um paciente, o método compreendendo administrar a composição desta descrição ao paciente. Em uma modalidade, o agente bioativo é liberado seletivamente para células que expressam integrina α4β1. Em uma modalidade, as células que expressam integrina α4β1 compreendem um ou mais dos seguintes tipos de células: células mononucleares CD11b+, células T CD3+, células B CD19+, e leucócitos polimorfonucleares Ly-6G+.

[0042] Adicionalmente, é aqui descrito um método de imagear uma estrutura biológica em um sujeito, o método compreendendo administrar ao sujeito a composição desta descrição e detectar o agente intensificador de contraste com um gerador de imagens. Em uma modalidade, os lipossomos na composição se tornam enriquecidos na estrutura biológica. Em uma modalidade, o gerador de imagens realiza uma das seguintes técnicas: CT, micro-CT, mamografia, raios-X, MRI, espectroscopia de ressonância magnética, imageamento por bioluminescência, ultrassom, imageamento ótico, espectroscopia ótica, espectroscopia por fluorescência, imageamento por fluorescência, espectroscopia quase infravermelha, e imageamento quase infravermelho.

[0043] Em uma modalidade, o gerador de imagens é um scanner de

26 / 72 MRI com uma intensidade de campo de não mais que 3T ou de não mais que 1T. Em uma modalidade, a estrutura biológica é uma placa aterosclerótica, uma pluralidade de células que expressam integrina α4β1, ou um tumor.

[0044] Adicionalmente, é aqui descrito em método de identificar um paciente em risco para um evento isquêmico agudo, o método compreendendo: (a) administrar ao sujeito a composição desta descrição; (b) detectar o agente intensificador de contraste com um scanner de MRI para gerar uma imagem; (c) avaliar a imagem em relação à presença de placas ateroscleróticas; e (d) identificar o paciente com estando em risco de um evento isquêmico agudo se placas ateroscleróticas forem detectadas.

[0045] O exposto acima descreveu de maneira bem ampla os recursos e vantagens técnicas da invenção, a fim de que a descrição detalhada da invenção a seguir possa ser melhor entendida. Características e vantagens adicionais da invenção que serão descritas a partir deste ponto formam o assunto das reivindicações da invenção. Será compreendido pelos versados na técnica que a concepção e as modalidades específicas descritas podem ser facilmente utilizadas como uma base para modificar ou determinar outras estruturas para realizar os mesmos propósitos da invenção. Também deve ser entendido pelos versados na técnica que tais construções equivalentes não fujam do espírito e escopo da invenção, da maneira apresentada nas reivindicações em anexo.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0046] Para uma descrição detalhada das modalidades preferidas da invenção, será realizada agora referência aos desenhos em anexo, em que: A figura 1 ilustra a estrutura de lipossomos alvejados por antagonista de integrina. THI567 (Distearoil fosfoetanolamina- carboximetileno-polietileno glycol3400 –THI565 (DSPE-PEG3400-THI565)) é mostrado. THI567 é incorporado em um nível de 1% e o tamanho do lipossomo é 150 nm.

27 / 72

[0047] A figura 2 ilustra a estrutura de THI565 e a anexação do ligador e âncora de lipídio THI567 para o desenvolvimento de lipossomo. A estrutura de THI565 é mostarda na figura 2A e estrutura de THI567 é mostarda na figura 2B. A figura 2C ilustra a inibição de THI565 e THI0567 na adesão de célula α4β1-K562 a VCAM-1 (Mn++).

[0048] A figura 3 mostra inibição de THI565 da ligação de lipossomo que alveja THI567 (150 nm; 1,0%) às células α4β1-K562. O lipossomo que alveja THI567 (150 nm; 1,0%) foi usado em uma concentração de 2 x 10-10 pM, e THI565 foi usado em concentrações indicadas. A fluorescência de rodamina foi detectada por citometria de fluxo. A figura 3A ilustra a estrutura de THI565; A figura 3B exibe a inibição percentual de sinal máximo.

[0049] A figura 4 ilustra ligação específica de lipossomo que alveja THI567, que se liga à integrina α4β1. Os lipossomos que alvejam THI567, ou a ligação de lipossomo não alvejante é mostrada na parte A. Na parte B, anti- α4 integrina mAb PS/2 foi usado para inibir a ligação de lipossomos que alvejam THI567 (150 nm; 1,0%) às células α4β1-K562. Lipossomos que alvejam THI567 (150 nm; 1,0%) foram usados em uma concentração de 2 x 10-10 pM, e PS/2, ou anticorpos controle istotipo IgG2b de rato foram usados em uma concentração de 10 ug/mL). A fluorescência com rodamina foi detectada por citometria de fluxo e expressa como média geométrica da intensidade de fluorescência (gMFI) em ambos os painéis.

[0050] A figura 5 ilustra a ligação de lipossomos que alvejam THI567 (150 nm; 1,0%) às células Jurkat e K562, geneticamente modificadas, para expressar de maneira diferencial a integrina α4β1. Lipossomos que alvejam THI567 (150 nm; 1,0%) foram usados em uma concentração de 2 x 10-10 pM. A fluorescência com rodamina foi detectada por citometria de fluxo. A figura 5A mostra ligação às células Jurkat. A figura 5B representa ligação à K562. Os dados são expressos como média geométrica da intensidade de fluorescência (gMFI).

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[0051] A figura 6 ilustra ligação de lipossomo alvejado por THI567 (250 nm; 0,25%) às células Jurkat que expressam integrina α4β1. O lipossomo alvejado por THI567 (250 nm; 0,25%) foi usado nas concentrações indicadas, e a fluorescência de fundo (Bkgd) foi determinada na presença de lipossomos que alvejam THI567 e EDTA 20 mM. A fluorescência com rodamina foi detectada por citometria de fluxo e apresentada como média geométrica da intensidade de fluorescência (gMFI).

[0052] A figura 7 ilustra uma matriz de concentrações de ligante- alvejado e de tamanho diferente da ligação de lipossomo alvejado por THI567 às células Jurkat que expressam integrina α4β1. O lipossomo alvejado por THI567 (250 nm; 0,25%) foi usado em concentrações indicadas, e a fluorescência de fundo (Bkgd) foi determinada na presença de lipossomos que alvejam THI567 e EDTA 20 mM. A fluorescência com rodamina foi detectada por citometria de fluxo e apresentada como média geométrica da intensidade de fluorescência (gMFI).

[0053] A figura 8 ilustra a ligação específica de lipossomo alvejado por THI567 aos subconjuntos de linfócito. Os lipossomos alvejados por THI567 e não alvejados foram injetados (veia femoral) 2 horas antes da coleta de sangue completa por punção cardíaca. Os subconjuntos de sangue periférico foram identificados com FITC-CD11b (monócitos), FITC-Ly-6G (neutrófilos), Cy5-CD19 (células B), e Cy5-CD3 (células T), e a fluorescência de lipossomo (Rodamina B) em cada subconjunto foi quantificada por citometria de fluxo. Uma média ± SEM de três experimentos independentes é mostrada.

[0054] A figura 9 ilustra captação de lipossomo alvejado com THI567 e não alvejado em subconjuntos de linfócitos imageados com microscopia confocal. Os lipossomos foram injetados em camundongos C57BL/6 (veia femoral) 2 horas antes da coleta completa de sangue por punção cardíaca. Subconjuntos de sangue periférico foram escolhidos com base em FITC-Ly-

29 / 72 6G (neutrófilos), Cy5-CD19 (células B), e Cy5-CD3 (células T), e a fluorescência de lipossomo (Rodamina B) foi imageada por meio de microscopia confocal. A coloração Hoechst 33342 foi realizada para identificar núcleos de célula. Um dos três experimentos representativos é mostrado.

[0055] A figura 10 ilustra avaliação quantitativa de melhor acúmulo de lipossomo alvejado por THI567 na aorta de camundongos ApoE-/- alimentados com uma dieta rica em gordura três dias após a injeção de construções de lipossomo. (a) Comparação da razão de melhoria normalizada (NER) de placas ateroscleróticas em grupos de camundongos não alvejados (n=7) e alvejados por THI0567 (n=9). Os dados são apresentados como média±SEM. (B) Imagem 3D transmitida por volume de uma aorta de camundongo mostrando os diferentes segmentos aórticos examinados. (C) Comparação da NER em placas ateroscleróticas em grupos de camundongos não alvejados (n=7) e alvejados (n=6-8) para os diferentes segmentos da aorta. Os dados são apresentados como média±SEM. (D, E) As seções representativas de coloração com óleo vermelho (painéis superiores) e fluorescência com Rodamina B (painéis inferiores) das regiões de aorta ascendente (D) e arco aórtico (E) de camundongos não tratados, injetados com lipossomal-Gd alvejado por THI0567, ou lipossomal-Gd não alvejado.

[0056] A figura 11 ilustra o acúmulo de lipossomo alvejado por THI0567 nas placas ateroscleróticas de camundongos ApoE-/-. (a) Imageamento confocal por fluorescência de seções histológicas da raiz aórtica de camundongos injetados com lipossomo alvejado por THI0567 (fluorescência com Rodamina B). A coloração de IgG controle é representada em imagem de baixa ampliação (10 x) da raiz aórtica (painel superior à esquerda). Outras seções representativas foram coradas com anti-CD31 (superior à direita), anti-F4/80 (inferior à direita), ou anti-CD11b (inferior à esquerda). Os núcleos foram corados com Hoechst 33342. (B) A seção parcial

30 / 72 através do arco aórtico, incluindo a artéria braquiocefálica, corada com anti- CD11b e Hoechst 33342. (C) O imageamento confocal por fluorescência das seções do arco aórtico de animais tratados com lipossomo alvejado por THI0567 (seções representativas de n=8 animais. Fluorescência: lipossomo alvejado por THI0567 (Rodamina B); CD11b (verde); CD31 (roxo); núcleos (Hoechst 33342; azul).

DESCRIÇÃO DETALHADA Definições

[0057] O termo “alquila”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere aos radicais de cadeia C1-C22 reta ou ramificada, saturada substituída ou não substituída, derivados de hidrocarbonetos saturados pela remoção de um átomo de hidrogênio, a menos que o termo alquila seja precedido por uma designação Cx-Cy. Exemplos representativos de grupos alquila incluem metila, etila, n-propila, iso-propila, n-butila, sec- butila, iso-butila, terc-butila e estearila, entre outros.

[0058] O termo “alquenila”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere a um radical hidrocarboneto insaturado de cadeia reta substituído ou não substituído, ou de cadeia ramificada substituído ou não substituído contendo de 2 a 22 átomos de carbono. O termo alquenila, da maneira aqui usada, pode ser utilizado para significar uma cadeia contendo um ou mais graus de insaturação. Exemplos de tais radicais incluem, mas sem limitação, etenila, E- e Z-pentenila, decenila, docosa-3,6,9,12,15,18-hexaenila e similares.

[0059] O termo “alquinila”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere a um radical hidrocarboneto insaturado de cadeia reta substituída ou não substituída, ou de cadeia ramificada substituída ou não substituída, contendo de 2 a 10 átomos de carbono e um ou mais ligações triplas de carbono-carbono. Exemplos de tais radicais incluem, mas sem limitação, etinila, propinila, propargila, butinila, hexinila, decinila e similares.

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[0060] O termo “inferior” que modifica “alquila”, “alquenila”, “alquinila” ou “alcóxi” se refere a uma unidade C1-C6 para uma funcionalidade particular. Por exemplo, alquila inferior significa alquila C1- C6 .

[0061] O termo “acila alifática”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere aos radicais da fórmula alquil-C(O)-, alquenila- C(O)- e alquinila-C(O)- derivados de um ácido alcano-, alceno- ou alcino- carboxílico, em que os termos “alquila”, “alquenila” e “alquinila” são da maneira definida anteriormente. Exemplos de tais radicais de acila alifática radicais, mas sem limitação, acetila, propionila, butirila, valerila, 4- metilvalerila, acriloila, crotila, propionila e metilpropionila, entre outros.

[0062] O termo “cicloalquila”, da maneira aqui usada, se refere a um sistema de anel alifático com 3 a 10 átomos de carbono e 1 a 3 anéis incluindo, mas sem limitação, ciclopropila, ciclopentila, cicloexila, norbornila e adamantila, entre outros. Os grupos cicloalquila podem ser não substituídos ou substituídos por um, dois ou três substituintes independentemente selecioandos de alquila inferior, haloalquila, alcóxi, tioalcóxi, amino, alquilamino, dialquilamino, hidróxi, halo, mercapto, nitro, carboxaldeído, carbóxi, alcoxicarbonila e carboxamida.

[0063] “Cicloalquila” substituída inclui as formas cis ou trans. Além disso, os substituintes podem tanto estar em posições endo quanto exo nos sisntemas bicíclicos ligados.

[0064] O termo “cicloalquenila”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação se refere a um carbociclo cíclico contendo de 4 a 8 átomos de carbono e uma ou mais ligações duplas. Exemplos de tais radiciais cicloalquenila incluem, mas sem limitação, ciclopentenila, cicloexenila, ciclopentadienila e similares.

[0065] O termo “cicloalquilalquila”, da maneira aqui usada, se refere a um grupo cicloalquila anexada a um radical alquila inferior incluindo, mas

32 / 72 sem limitação, cicloexilmetila.

[0066] O termo “halo” ou “halogênio”, da maneira aqui usada, se refere a I, Br, Cl ou F.

[0067] O termo “haloalquila”, da maneira aqui usada, se refere a um radical alquila inferior, ao qual é anexado pelo menos um substituinte de halogênio, por exemplo, clorometila, fluoretila, trifluormetila e pentafluoretila, entre outros.

[0068] O termo “alcóxi”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere a um radical éter alquila, em que o termo “alquila” é da maneira definida anteriormente. Exemplos de radicais de éter alquila adequados incluem, mas sem limitação, metóxi, etóxi n-propóxi, iso-propóxi, n-butóxi, iso-butóxi, sec-butóxi, terc-butóxi e similares.

[0069] O termo “alcoxialquila”, da maneira aqui usada, se refere a RY-O- Rz, em que RY é alquila inferior da maneira definida anteriormente, e Rz é alquileno (-(CH2)w-) em que w é um número inteiro de um a seis. Exemplos representativos incluem metoximetila, metoxietila e etoxietila, entre outros.

[0070] O termo “alcenóxi”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere a um radical da fórmula alquenila-O-, contanto que o radical não seja um enol éter, em que o termo “alquenila” é da maneira definida anteriormente. Exemplos de radicais alcenóxi adequados incluem, mas sem limitação, alilóxi, E- e Z-3-metil-2-propenóxi e similares.

[0071] O termo “alquinóxi”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere a um radical da fórmula alquinila-O, contanto que o radical não seja um -inol éter. Exemplos de radicais alquinóxi adequados incluem, mas sem limitação, propargilóxi, 2-butinilóxi e similares.

[0072] O termo “carbóxi”, da maneira aqui usada, se refere a C(O)OH.

[0073] O termo “tioalcóxi” se refere a um radical tioéter da fórmula

33 / 72 alquil-S-, em que “alquila” é da maneira definida anteriormente.

[0074] O termo “sulfonamido”, da maneira aqui usada, se refere a - SO2NH2.

[0075] O termo “carboxaldeído”, da maneira aqui usada, se refere a - C(O)R, em que R é hidrogênio.

[0076] Os termos “carboxamida” ou “amida”, da maneira aqui usada, se referem a C(O)NRaRb, em que Ra e Rb são cada independentemente hidrogênio, alquila ou qualquer outro substituinte adequado.

[0077] O termo “alcoxialcóxi”, da maneira aqui usada, se refere a RcO-RdO-, em que Rc é alquila inferior da maneira definida anteriormente e Rd é alquileno em que alquileno é -(CH2)n-, em que n é um número inteiro de 1 a 6. Exemplos representativos de grupos alcoxialcóxi incluem metoximetóxi, etoximetóxi t-butoximetóxi, entre outros.

[0078] O termo “alquilamino”, da maneira aqui usada, se refere a ReNH- em que Re é um grupo alquila inferior, por exemplo, etilamino, butilamino, entre outros.

[0079] O termo “alquenilamino”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere a um radical da fórmula alquenila-NH- ou (alquenila)2N-, em que o termo “alquenila” é da maneira definida anteriormente, contanto que o radical não seja uma enamina. Um exemplo de tal radical alquenilamino é o radical alilamino.

[0080] O termo “alquinilamino”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere a um radical da fórmula alquinila-NH-ou (alquinila)2N-, em que o termo “alquinila” é da maneira definida anteriormente, contanto que o radical não seja um -C≡C-NH2 ou -C≡C-NH. Um exemplo de tais radicais alquinilamino, da maneira aqui usada, é o radical propargil amino HC≡C-CH2NH-.

[0081] O termo “dialquilamino”, da maneira aqui usada, se refere a (Rf)(Rg)N-, em que Rf e Rg são independentemente selecionados de alquila

34 / 72 inferior, por exemplo, dietilamino, e metil propilamino, entre outros.

[0082] O termo “alcoxicarbonil”, da maneira aqui usada, se refere a um grupo alcoxila, da maneira previamente definida em anexo à fração molecular parental através de um grupo carbonila. Exemplos de alcoxicarbonila incluem metoxicarbonila, etoxicarbonila e isopropoxicarbonila, entre outros.

[0083] O termo “arila” ou “aromático”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação se refere a um grupo aromático carbicíclico substituído ou não substituído com cerca de 6 a 12 átomos de carbono, tal como fenila, naftila, indenila, indanila, azulenila, fluorenila e antracenila; ou um grupo aromático heterocíclico contendo pelo menos um átomo N, O ou S endocíclico tal como furila, tienila, piridila, pirrolila, oxazolila, tiazolila, imidazolila, pirazolila, 2-pirazolinila, pirazolidinila, isoxazolila, isotiazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,3-triazolila, 1,3,4-tiadiazolila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, 1,3,5-triazinila, indolizinila, indolila, isoindolila, 3H- indolila, indolinila, benzo [b] furanila, 2,3-di-hidrobenzofuranila, benzo[b ]tiofenila, 1H-indazolila, benzimidazolila, benztiazolila, purinila, 4H- quinolizinila, isoquinolinila, cinolinila, ftalazinila, quinazolinila, quinoxalinila, 1,8-naftridinila, pteridinila, carbazolila, acridinila, fenazinila, fenotiazinila, fenoxiazinila, pirazolo[l,5-c ]triazinila e similares. “Aralquila” e “alquilarila” empregam o termo “alquila”, da maneira definida anteriormente. Anéis podem ser substituídos multiplamente.

[0084] O termo “aralquila”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere a um radical alquila substituído por arila, em que os termos “alquila” e “arila” são da maneira definida anteriormente. Exemplos de radicais aralquila adequados incluem, mas sem limitação, fenilmetila, fenetila, fenilexila, difenilmetila, piridilmetila, tetrazolil metila, furilmetila, imidazolil metila, indolilmetila, tienilpropila e similares.

[0085] O termo “aralquenila”, da maneira aqui usada, sozinho ou em

35 / 72 combinação, se refere a um radical alquenila substituída por arila, em que os termos “arila” e “alquenila” são da maneira definida anteriormente.

[0086] O termo “arilamino”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere a um radical da fórmula aril-NH-, em que “arila” é da maneira definida anteriormente. Exemplos de radicais arilamino incluem, mas sem limitação, fenilamino (anilido), naftilamino, 2-, 3-, e 4-piridilamino e similares.

[0087] O termo “benzila”, da maneira aqui usada, se refere a C6H5- CH2-.

[0088] O termo “biarila”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere a um radical da fórmula aril-arila, em que o termo “arila” é da maneira definida anteriormente.

[0089] O termo “tioarila”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere a um radical da fórmula arila-S- em que o termo “arila” é da maneira definida anteriormente. Um exemplo de um radical tioarila é o radical feniltio.

[0090] O termo “aroila”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere a um radical da fórmula arila-CO-, em que o termo “arila” é da maneira definida anteriormente. Exemplos de radicais acila aromáticos adequados incluem, mas sem limitação, benzoila, 4-halobenzoila, 4-carboxibenzoila, naftoila, piridilcarbonila e similares.

[0091] O termo “heterociclila”, da maneira aqui usada, sozinho ou em combinação, se refere a um anel não aromático de 3 a 10 elementos, contendo pelo menos um átomo N, O, ou S endocíclico. O heterociclo pode ser opcionalmente fundido à arila. O heterociclo também pode ser opcionalmente substituído por pelo menos um substituinte que é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidroxila, amino, nitro, trifluorometila, trifluorometoxi, alquila, aralquila, alquenila, alquinila, arila, ciano, carbóxi, carboalcoxi, carboxialquila, oxo,

36 / 72 arilsulfonila e aralquilaminocarbonila, entre outros.

[0092] O termo “alquil-heterociclila”, da maneira aqui usada, se refere a um grupo alquila previamente definido em anexo à fração molecular parental através de um grupo heterociclila incluindo, mas sem limitação, 4- metilpiperazin-1-ila.

[0093] O termo “heterociclilalquila”, da maneira aqui usada, se refere a um grupo heterociclila previamente definido em anexo à fração molecular parental através de um grupo alquila incluindo, mas sem limitação, 2-(1- piperidinil)etila.

[0094] O termo “heterocicloila”, da maneira aqui usada, se refere a radicais da fórmula heterociclil-C(O)-, em que o termo “heterociclila” é da maneira definida anteriormente.

[0095] O termo “aminal”, da maneira aqui usada, se refere a um hemiacetal da estrutura RhC(NRiRj)(NRkRl)- em que Rh, Ri, Rj, Rk e Rl são cada independentemente hidrogênio, alquila ou qualquer outro substituinte adequado.

[0096] O termo “éster”, da maneira aqui usada, se refere a -CO2Rm, em que Rm é alquila ou qualquer outro substituinte adequado.

[0097] O termo “carbamato”, da maneira aqui usada, se refere aos compostos à base de ácido carbâmico NXC(O)OR em que, por exemplo, X é hidrogênio, alquila, arila ou aralquila, e independentemente R é alquila, arila ou aralquila.

[0098] O termo “isômeros óticos”, da maneira aqui usada, se refere aos compostos que diferem apenas na estereoquímica de pelo menos um átomo, incluindo enantiômeros, diastereômeros e racematos.

[0099] Nesta descrição, THI0567 e THI567 são usados indiferentemente; THI0565 e THI565 são usados indiferentemente.

[00100] O uso dos termos anteriores é usado para incluir frações substituídas e não substituídas. A substituição pode ser por um ou mais

37 / 72 grupos tais como álcoois, éteres, ésteres, amidas, sulfonas, sulfetos, hidroxila, nitro, ciano, carbóxi, aminas, heteroátomos, alquila inferior, alcóxi inferior, alcoxicarbonila inferior, alcoxialcóxi, acilóxi, halogênios, trifluormetóxi, trifluormetila, alquila, aralquila, alquenila, alquinila, arila, ciano, carbóxi, carboxialquila, cicloalquila, cicloalquilalquila, heterociclila, alquil- heterociclila, heterociclilalquila, oxo, arilsulfonila e aralquilaminocarbonila ou quaisquer dos substituintes dos parágrafos precedentes, ou quaisquer daqueles substituintes tanto anexados diretamente quento por ligadores adequados. Os ligadores são tipicamente cadeias curtas de 1-3 átomos contendo qualquer combinação de -C-, -C(O)-, -NH-, -S-, -S(O)-, -O-, - C(O)O- ou -S(O)2-. Os anéis podem ser substituídos múltiplas vezes.

[00101] Os termos “retirada de elétrons” ou “doação de elétrons” se referem à capacidade de um substituinte retirar ou doar elétrons em relação ao hidrogênio, se o hidrogênio ocupar a mesma posição na molécula. Estes termos são bem entendidos pelos versados na técnica e são discutidos em Advanced Organic Chemistry by J. Março, 1985, pp. 16-18, aqui incorporado pela referência. Os grupos de elétron de retirada incluem halo, nitro, carbóxi, alquenila inferior, alquinila inferior, carboxaldeído, carboxiamido, arila, amônio quaternário, trifluorometila, sulfonila e aril alcanoil inferior, entre outros. Os grupos de elétron doador incluem grupos tais como hidróxi, alquila inferior, amino, alquila inferioramino, di(alquila inferior)amino, arilóxi, mercapto, alquiltio inferior, alquilmercapto inferior e dissulfeto, entre outros. Os versados na técnica entenderão que os substituintes anteriormente mencionados podem apresentar propriedades de doar ou retirar elétrons em diferentes condições químicas. Além do mais, a presente invenção contempla qualquer combinação de substituintes selecionada dos grupos identificados anteriormente.

[00102] Os substituintes que doam de elétrons ou que retiram elétrons mais preferidos são halo, nitro, alcanoila, carboxaldeído, arilalcanoila, arilóxi,

38 / 72 carboxila, carboxamida, ciano, sulfonila, sulfóxido, heterociclila, guanidina, amônio quaternário, alquenila inferior, alquinila inferior, sais de sulfônio, hidróxi, alcóxi inferior, alquila inferior, amino, alquilamino inferior, di(alquila inferior)amino, amina alquila inferior mercapto, mercaptoalquila, alquiltio, carbóxi alquila inferior, arilalcóxi, alcanoilamino, alcanoil(alquila inferior)amino, alquila inferiorsufonilamino, arilsulfonilamino, alquilsulfonil(alquila inferior)amino, arilsulfonil(alquila inferior) amino, alquila inferiorcarboxamida, di(alquila inferior) carboxamida, sulfonamida, alquila inferiorsulfonamida, di(alquila inferior)sulfonamida, alquila inferiorsulfonila, arilsulfonila e alquilditio.

[00103] Ésteres de ácido graxo são pretendidos pelos versados na técnica como os ésteres formados por cadeias longas de hidrocarboneto, as quais podem ser cadeias que podem ser saturadas ou com graus variados de insaturação finalizando em um grupo funcional de ácido carboxílico. Sem limitar o escopo da intensão dos inventores, ácidos graxos, a título de exemplo apenas, podem incluir: ácido palmítico, ácido esteárico ou ácido oléico, ácido dodecanóico, ácido tetradecanóico, ácido hexadecanóico, ácido octadecanóico, ácido eicosanóico, ácido cis-9-hexadecenóico, ácido cis-6- octadecenóico, ácido cis-9-octadecenóico, ácido cis-11-octadecenóico, ácido cis-13-docosenóico, ácido cis-15-tetracosenóico, ácido 9,12- octadecadienóico, ácido 6,9,12-octadecatrienóico, ácido 9,12,15- octadecatrienóico, ácido 5,8,11,14-eicosatetraenóico, ácido 5,8,11,14,17- eicosapentaenóico, ou ácido 4,7,10,13,16,19-docosaexanóico.

[00104] Da mesma forma, esta descrição envolve usar um ligador polimérico que consiste em polietileno glicol, ou alternativamente representado como unidades de –(CH2CH2O)n-, que contém inerentemente uma(s) distribuição(s) de pesos moleculares compondo a média. Em função disso, os pesos moleculares são expressos como um peso molecular médio que reflete a m´dia através da distribuição ou distribuições de massas

39 / 72 individuais presentes. Em uma modalidade, o número de unidades de monômero -(CH2CH2O)- em THI567 é de 7 a 115. Em uma modalidade, o número de unidades de monômero -(CH2CH2O)- em THI567 é de 38 a 115. Em uma modalidade, o número de unidades de monômero -(CH2CH2O)- em THI567 é de 38 a 100. Em uma modalidade, THI567 é uma mistura de moléculas com 38-115 unidade de monômero -(CH2CH2O)-. Assim, a título de exemplo, THI567 é uma mistura de moléculas e tem uma média alvo de 76 unidades de monômero -(CH2CH2O)-, e em um exemplo uma média real de 70-71 unidades de -(CH2CH2O)-.

[00105] Em um exemplo da mesma, a distribuição continha uma massa molecular +/- cerca de 1500 unidades de massa por espectrometria de massa. A invenção destina-se a abranger todos os componentes individuais que constituem a distribuição ou distribuições de compostos que contribuem para o peso molecular médio. Portanto, a média reivindicada inclui em sua definição a faixa de até cerca de +/- 38 unidades de monômero -(CH2CH2O)-. O termo polietileno glicol é usado para representar o radical divalente ligador L2. O termo peso molecular é usado para representar a média através da distribuição de produtos possíveis, da maneira representada neste parágrafo. Os versados na técnica reconhecerão a variação na distribuição do peso molecular de lote para lote. Por exemplo, deve-se entender que o reagente DSPE-PEG3400-NH2 inclui variações de lote para lote, mas permanece na especificação relatada para essa faixa de peso molecular.

[00106] Sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, S. M. Berge, et al., descrevem sais farmaceuticamente aceitáveis em detalhes em J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977). Os sais podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação final dos compostos aqui preceituados, ou separadamente reagindo uma função de base livre ou ácido livre com um reagente adequado, da maneira descrita em geral a seguir. Por exemplo, uma função de base livre pode ser reagida com um

40 / 72 ácido adequado. Além disso, onde os compostos aqui preceituados carregam uma fração acídica, sais farmaceuticamente aceitáveis adequados dos mesmos, sem limitar o escopo da invenção, podem incluir sais metálicos tais como sais de metal alcalino, por exemplo, sais de sódio ou potássio; e sais de metal alcalino terroso, por exemplo, sais de cálcio ou magnésio. Os versados na técnica reconhecerão que o segundo lipídio pode ser substituído por tamanhos menores de cadeia de polímero, (por exemplo, DSPE-mPEG(1000)) e ainda propriedades furtivas. Os versados na técnica identificarão adicionalmente que a substituição do segundo lipídio para tamanhos de cadeia menores pode permitir a substituição do terceiro lipídio para incorporar tamanhos menores de polímero, (por exemplo, DSPE-PEG2000-THI565) que mantém um tamanho de cadeia mais longo que aquele do segundo lipídio.

[00107] O agente que alveja integrina significa uma molécula projetada para reconhecer uma integrina na superfície celular e tem o efeito de autodirecionar um lipossomo para encontrar as ditas células. As integrinas aqui previstas são aquelas da família alfa4beta1 (α4β1), alfa4beta7 (α4β7) e alfa9beta1 (α9β1) de integrinas. Os agentes que alvejam integrina, tais como THI567, são projetados para a incorporação em mecanismos de liberação, tais como lipossomos, e cada um exige individualmente o outro para a funcionalidade completa, por exemplo, imageando tecidos específicos tais como placas ateroscleróticas. O termo pode ser usado indiferentemente com o termo “conjugado”, tal como “conjugado THI-565” (isto é, THI567).

[00108] Em uma modalidade, o agente que alveja integrina tem um peso molecular médio (MW) de 2.000 a 7.000. Em uma modalidade, o agente que alveja integrina tem um peso molecular médio (MW) de 3.150 a 6.850. Em uma modalidade, o agente que alveja integrina tem um peso molecular médio (MW) de 3.300 a 6.700. Em uma modalidade, o agente que alveja integrina tem um peso molecular médio (MW) de 3.450 a 6.550.

[00109] O termo meios de agente bioativo, a título de exemplo, apenas

41 / 72 e sem limitação, quimioterapêuticos tais como doxorubicina, paclitaxel, daunorubicina, vincristina, tretinoina, cisplatina, anamicina, vinorelbina, HCl de irinotecano, floxuridina; anti-inflamatórios; moduladores imunes, tais como ciclosporina; em que o agente bioativo pode ser liberado nos tecidos específicos que expressam a integrina.

[00110] Em uma modalidade, um agente que alveja integrina é produzido formando um antagonista de VLA-4 funcionalmente protegido da estrutura: em que, R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), - N(alquila C1-C3)SO2(alquila C1-C3), -N(alquila C1-C3)SO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, OCF2, OCH2CF3, acila alifática, O(cicloalquilalquila), O(aralquila), -SO2(1-pirolidinila), SO2(1-piperidinila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); Z é N ou CR2;

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R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio, halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, - NO2, -NH2 , -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, - N(alquila C1-C3)-C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3), - C(O)NH(alquila C1-C3), -NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila e -C(O)NH(benzila); e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2 , -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, di(alquila C1-C3)amino, -C(O)O- alquila-(C1-C3), -C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, hidroxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila,

43 / 72 heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); R1, R2, R3 e R4 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; sintetizando um fosfolipídio pela alquilação na piridona hidroxila com um grupo de ligação 3-17 átomos funcionalizados; opcionalmente modificando o grupo funcional terminal; anexando a um grupo polimérico adequado para a formação de lipossomo por meio do acoplamento de amida, formação de carbamato ou formação de triazol, e desproteção de grupos funcionais.

[00111] Em uma modalidade, um lipossomo de acordo com esta descrição é produzido combinando agente que alveja DSPE-PEG3400-VLA-4 (por exemplo, DSPE-PEG3400-THI565) em uma quantidade de 0,05 a 1,0% ou 0,05 a 2,0% dos componentes pré-diluídos totais, com colesterol, DSPE- Peg2000, opcionalmente Gd-DTPA-BSA, Gd-DOTA-DSPE ou DSPE; e quantidade variável de DPPC; opcionalmente adicionando uma quantidade de rodamina DHPE ou ingrediente farmaceuticamente ativo; diluindo com etanol; hidratando em solução salina 150mM / histidina 10 mM; extrusão para formar tamanho de partícula de 400 nm ou menos; e opcionalmente purificação por vários métodos conhecidos na técnica, por exemplo, por diálise.

[00112] Em uma modalidade, um lipossomo de acordo com esta descrição é produzido por: Etapa Um: DPPC, Colesterol, DSPE-MPEG2000, Gd-DTPA- BSA e DSPE-PEG3400-THI565 foram constituídos, respectivamente, com base na expressão do ligante que alveja superfície desejada em proporções molares mostradas na tabela a seguir:

44 / 72 Ligante de DSPE- Gd-DTPA- DSPE-PEG3400- superfície (% em DPPC Colesterol MPEG2000 BSA THI565 (THI567) mole) 0,05% 31,95 40 3 25 0,05 0,25% 31,75 40 3 25 0,25 1,0% 31,0 40 3 25 1,0

[00113] Etapa Dois: Em cada uma destas composições de lipídio foi adicionada rodamina DHPE (1,0 a 2,5 mg), e a formulação da partícula previamente descrita em Ghaghada KB, Ravoori M, Sabapathy D, Bankson J, Kundra V, Annapragada A. New Dual Mode Gadolinium Nanoparticle Contrast Agent for Magnetic Resonance Imaging. Yang S, editor. PLoS ONE. 29 de outubro de 2009;4(10):e7628. Resumidamente, os lipídios (467,4 mg) foram dissolvidos em etanol (1,0 a 1,2 mL), seguido por hidratação a 63-65°C por 40 minutos em salina 150 mM / histidina 10 mM (9 mL) para atingir uma concentração de lipídio de 50 mM. A mistura foi a seguir extrusada em uma extrusora Lipex de 10 mL (Northern Lipids Inc., Burnaby, Canadá), usando um filtro de policarbonato Track-Etch de 400 nm (5 passagens), para obter partículas com um diâmetro médio de ~250 nm. Em relação às partículas com diâmetro médio de ~150 nm, a formulação subsequente foi extrusada adicionalmente por meio de um filtro de policarbonato de 200 nm (8 passagens), e para as partículas com um diâmetro médio de ~100 nm, a formulação foi extrusada adicionalmente (5 vezes) por meio de filtros de 100 nm. As soluções resultantes foram a seguir dialisadas contra salina 150 mM / histidina 10 mM. O tamanho médio do lipossomo na formulação final foi determinado por espalhamento dinâmico de luz (DLS), e a concentração de gadolínio e fosfolipídio (fósforo equivalente) na formulação foi quantificada usando espectroscopia por emissão ótica de plasma acoplado indutivamente (ICP-OES). O número de partículas/mL foi computado com base no tamanho de partícula e na concentração final de lipídio na formulação.

[00114] Em uma modalidade, uma composição desta descrição compreende uma pluralidade de lipossomos, em que a pluralidade de lipossomos compreende uma molécula que alveja integrina, em que a

45 / 72 molécula que alveja integrina compreende uma fração de lipídio ou fosfolipídio derivado de polímero e uma fração que alveja integrina. Em uma modalidade, a fração que alveja integrina tem uma das seguintes estruturas:

R Cl O CO2H

O N N N

H H OEt O OEt , , ou , em que R é o ponto de anexação para a fração de lipídio ou fosfolipídio derivado de polímero.

[00115] Em uma modalidade, a molécula que alveja integrina é um composto desta descrição da maneira aqui discutida. Em uma modalidade, a pluralidade de lipossomos tem um diâmetro médio de 150 a 175 nm. Em uma modalidade, a molécula que alveja integrina compreende cerca de 0,05 a 2% em mole da pluralidade de lipossomos.

[00116] Em uma modalidade, a pluralidade de lipossomos compreende adicionalmente um agente bioativo. Em uma modalidade, o agente bioativo é encapsulado na pluralidade de lipossomos.

[00117] Em uma modalidade, a pluralidade de lipossomos compreende adicionalmente um lipídio ou fosfolipídio derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de contraste. Em uma modalidade, o lipídio ou fosfolipídio derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de

46 / 72 contraste compreende uma fração DTPA-Gd ou uma DOTA-Gd. Em uma modalidade, os lipossomos compreendem 30 a 45% em mole de DPPC, 15 a 45% em mole de colesterol, 1 a 6% em mole de DSPE-MPEG-2000, 20 a 30% em mole de Gd-DOTA-DSPE e 0,05 a 2% em mole de THI-567.

[00118] Em uma modalidade, um método de liberar um agente bioativo para uma célula alvo em um paciente compreende administrar a composição desta descrição ao paciente. Em uma modalidade, o agente bioativo é liberado seletivamente para as células que expressam integrina α4β1. Em uma modalidade, as células que expressam integrina α4β1 compreendem um ou mais dos seguintes tipos de células: células mononucleares CD11b+, células T CD3+ T, células B CD19+, e leucócitos polimorfonucleares Ly-6G+.

[00119] Em uma modalidade, um método de imagear uma estrutura biológica em um sujeito compreende administrar ao sujeito uma composição desta descrição, e detectar o agente intensificador de contraste com um gerador de imagens. Em uma modalidade, lipossomos na composição se tornam enriquecidos na estrutura biológica. Em uma modalidade, o gerador de imagens realiza uma das seguintes técnicas: CT, micro-CT, mamografia, raios-X, MRI, espectroscopia de ressonância magnética, imageamento por bioluminescência, ultrassom, imageamento ótico, espectroscopia ótica, espectroscopia por fluorescência, imageamento por fluorescência, espectroscopia quase infravermelha, e imageamento quase infravermelho.

[00120] Em uma modalidade, o gerador de imagens é um scanner de MRI com um intensidade de campo de não mais que 3T. Em uma modalidade, o gerador de imagens é um scanner de MRI com um intensidade de campo de não mais que 1T. Em uma modalidade, a estrutura biológica é uma placa aterosclerótica, uma pluralidade de células que expressam integrina α4β1, ou um tumor.

[00121] Em uma modalidade, um método de identificar um paciente em risco de um evento isquêmico agudo compreende: (a) administrar ao

47 / 72 sujeito a composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 23, 55, ou 56; (b) detectar o agente intensificador de contraste com um scanner de MRI para gerar uma imagem; (c) avaliar a imagem em relação à presença de placas ateroscleróticas; e (d) identificar o paciente como estando em risco de um evento isquêmico agudo se as placas ateroscleróticas forem detectadas.

[00122] Vantagens. Sem querer ficar limitado pela teoria, descobriu-se surpreendentemente que o agente que alveja integrina desta descrição possibilita que imagens MRI sejam obtidas em intensidade de campo clinicamente relevante, por exemplo, 1 Tesla, da maneira demonstrada em Scientific Reports (2018) 8:3733, a descrição que aqui é incorporada pela referência. Sem querer ficar limitado pela teoria, descobriu-se surpreendentemente que os lipossomos desta descrição possibilitam que imagens MRI sejam obtidas em intensidade de campo clinicamente relevante, por exemplo, 1 Tesla, da maneira demonstrada em Scientific Reports (2018) 8:3733, cuja descrição é aqui incorporada pela referência.

EXEMPLOS

[00123] Pretende-se que os exemplos a seguir sejam representativos da invenção, a qual não deve ser limitada de maneira alguma pelos exemplos específicos mostrados. Os versados na técnica reconhecerão a aplicabilidade geral de preparar outros exemplos sem fugir do espírito e escopo desta invenção. Todos os reagentes usados nos exemplos subsequentes foram obtidos a partir de fontes comerciais, e foram usados sem purificação adicional. DSPE-PEG3400-NH2 foi obtido a partir de Laysan Bio, Inc.. Exemplo 1

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[00124] Etapa Um: A uma solução de etileno glicol mono terc-butil éter (3,44 mL, 3,096 g, 26,2 mmole) em tetraidrofurano anidro (26,2 mL), a 0°C em argônio, hidreto de sódio (60% de dispersão em óleo mineral, 655 mg, 16,4 mmole) foi adicionado em várias porções. A mistura foi agitada a 0°C por 30 minutos e 2-cloro-6-fluorbenzonitrila (2,028 g, 13,1 mmole) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida naturalmente de maneira lenta até a temperatura ambiente e foi agitada por toda a noite. A mistura foi diluída com uma mistura 1:1 de hexanos:acetato de etila, e lavada com água (duas vezes) e salmoura. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel automatizada (Biotage®, SNAP 50 KP-Sila, 0-

49 / 72 50% de acetato de etila em hexanos) para fornecer 1 (3,22 g) como um óleo sem cor.

[00125] Etapa Dois: A uma solução de 1 (3,21 g, 12,7 mmole) em tetraidrofurano anidro (94 mL) resfriado a 0°C em argônio, uma solução de hidreto de alumínio e lítio (2,0 M em tetraidrofurano, 12,7 mL, 25,4 mmole) foi adicionado gota a gota por seringa. A mistura aqueceu naturalmente de maneira gradual em temperatura ambiente, e foi agitada por toda a noite. a mistura foi resfriada novamente a 0°C, a seguir água (0,97 mL) foi adicionada gota a gota por seringa. A mistura foi agitada vigorosamente por 10 minutos, a seguir uma solução de hidróxido de sódio (20% em peso em água, 0,71 mL) foi adicionada gota a gota e a agitação continuou por 10 minutos. Finalmente, a água (3.53 mL) e adjuvante de filtro Celite® foram adicionados. A mistura foi diluída com dietil éter, vigorosamente agitada por 30 minutos, a seguir filtrada por meio de mais Celite®, lavando com éter. O filtrado foi concentrado em pressão reduzida para fornecer 2 (3,27 g) como um óleo amarelo claro. Este material foi usado sem purificação.

[00126] Este procedimento também foi usado para preparar (2-(terc- butóxi)-6-clorofenil)metanamina a partir de 12.

[00127] Etapa Três: A um frasco contendo 3 (preparado de acordo com os procedimentos descritos na Etapa Um do exemplo 25 em U.S. 6972296, 2,11g, 13,3 mmole), uma solução de 2 (3,26 g, 12,7 mmole) em metanol (50 mL) foi adicionada junto com uma lavagem com metanol (14 mL). A mistura resultante foi aquecida a 45°C por toda a noite, a seguir refluxada por 24 horas. A mistura foi resfriada em temperatura ambiente e concentrada em pressão reduzida. O resíduo foi absorvido em acetato de etila e concentrado (duas vezes). O resíduo foi a seguir suspenso em acetato de etila (30 mL), agitado por 30 minutos, a seguir filtrado, lavando com acetato de etila. O sólido foi seco a vácuo para fornecer 4 (1,47 g) como um pó amarelo claro.

[00128] Este procedimento também foi usado para preparar 1-(2-(terc-

50 / 72 butóxi)-6-clorobenzil)-4-hidróxi-5-metilpiridin-2(1H)-ona a partir de (2-(terc- butóxi)-6-clorofenil)metanamina.

[00129] Etapa Quatro: (Referência: D Koley, OC Colón, SN Savinov. Org. Lett. 2009, 11, 4172-75.) A uma suspensão de 4 (1,789 g, 4,89 mmole) em tetraidrofurano (25 mL), em temperatura ambiente ao ar livre, terc-butil nitrito (1,74 mL, 14,7 mmole) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada por toda a noite, a seguir foi diluída com metanol (10 mL) e concentrada em pressão reduzida para fornecer 5 como um óleo amarelo escuro. Este material foi usado sem purificação.

[00130] Este procedimento também foi usado para preparar 1-(2-(terc- butóxi)-6-clorobenzil)-4-hidróxi-5-metil-3-nitropiridin-2(1H)-ona a partir de 1-(2-(terc-butóxi)-6-clorobenzil)-4-hidróxi-5-metilpiridin-2(1H)-ona.

[00131] Etapa Cinco: A uma solução de produto bruto 5 (4,89 mmole teórico da etapa quatro) em N,N-dimetilformamida (DMF) (16,3 mL), pó de zinco (1,44 g, 22,0 mmole) e cloridrato de trietilamina (3,702 g, 26,9 mmole) foram adicionados. A mistura foi aquecida a 55°C por 3 horas, resfriada em temperatura ambiente, e 1,1’-carbonildiimidazol (2,379 g, 14,7 mmole) foi adicionado em uma porção única. A mistura foi aquecida a 80°C por 1,5 hora, e foi resfriada em temperatura ambiente. A mistura de reação bruta foi filtrada em um frasco contendo água (200 mL), lavando com uma pequena quantidade de DMF. A suspensão resultante foi filtrada, lavando o sólido coletado com água. O sólido foi então dividido entre diclorometano e HCl aquoso (2N). A camada aquosa foi extraída duas vezes com diclorometano, e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, a seguir secas com sulfato de magnésio, filtradas e concentradas para fornecer 6 (1,91 g) como um sólido laranja escuro. Este material foi usado sem purificação.

[00132] Este procedimento também foi usado para preparar 5-(2-(terc- butóxi)-6-clorobenzil)-7-metiloxazolo[4,5-c]piridina-2,4(3H,5H)-diona a partir de 1-(2-(terc-butóxi)-6-clorobenzil)-4-hidróxi-5-metil-3-nitropiridin-

51 / 72 2(1H)-ona.

[00133] Etapa Seis: (Reference: B List, et. al. Adv. Synth. Catal. 2005, 347, 1558-60.) A uma solução de N,N-dimetiaminopiridina (DMAP) (200 mg, 1,64 mmole) em DMF (41 mL) em temperatura ambiente sob argônio, terc-butil hidrogênio malonato (3,94 g, 24,6 mmole) e 3-hidroxibenzaldeído (2,00 g, 16,4 mmole) foram adicionados. Piperazina (0,16 mL, 1,64 mmole) foi adicionada e a mistura foi agitada em temperatura ambiente três dias. Cromatografia em camada fina (TLC) indicou que material de partida significativo permaneceu, assim, a mistura foi aquecida a 55 ° por toda a noite, a seguir foi resfriada em temperatura ambiente. A mistura foi diluída com água (200 mL) e foi extraída com 4:1 hexanos:acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com cloreto de amônio aquoso saturado, água (duas vezes) e salmoura, a seguir foi seca com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em pressão reduzida para fornecer 7 (3,73 g) como um sólido branco. Este material continha solvente residual traços, mas foi usado sem purificação adicional.

[00134] Este procedimento também foi usado para preparar (E)-terc- butil 3-(3-(terc-butóxi)fenil)acrilato de 13.

[00135] Etapa Sete: A uma solução de 7 (2,04 g, 9,26 mmole) em diclorometano (46 mL) a 0°C em argônio, etileno glicol mono terc-butil éter (1,58 mL, 12,04 mmole) foi adicionado por seringa, seguido por trifenilfosfino (3,65 g, 13,9 mmole). A mistura foi agitada 10 minutos, a seguir uma solução de dietil azodicarboxilato (40% em peso em tolueno, 6,33 mL, 13,9 mmole) foi adicionada. Após agitar em temperatura ambiente por toda a noite, TLC indicou conversão parcial. Porções adicionais de etileno glicol mono terc-butil éter (0,79 mL, 6,0 mmole), trifenilfosfino (1,82 g, 7,0 mmole), e dietil azodicarboxilato (3,2 mL, 7,0 mmole) foram adicionados, e a mistura foi agitada por mais 24 horas, a seguir foi concentrada em pressão reduzida. O resíduo foi absorvido em 3:1 hexanos:acetato de etila e a solução

52 / 72 foi lavada com água (duas vezes) e salmoura. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em pressão reduzida. O resíduo foi absorvido em 9:1 hexanos:diclorometano com aquecimento para fornecer uma solução clara, que resfriou naturalmente em temperatura ambiente e permaneceu assim por toda a noite. Alguns cristais aderiram ao lado do frasco, os quais eram subprodutos da reação. A solução decantou e foi aplicada diretamente em um plugue de sílica gel de 5-polegadas, que foi eluída sequencialmente com 9:1 hexanos:diclorometano, 19:1 hexanos:acetato de etila, 9:1 hexanos:acetato de etila, e finalmente 3:1 hexanos:acetato de etila para fornecer 8 (2,029 g) como um óleo amarelo claro. Uma pequena quantidade de material de partida não reagido (0,39 g) também foi isolada.

[00136] Etapa Oito: A uma solução de (R)-(+)-N-benzil-α- metilbenzilamina (1,77 g, 8,40 mmole) em tetraidrofurano (28 mL) esfriada a -78°C em argônio, n-butil-lítio (1,6 M em hexanos, 4,88 mL, 7,80 mmole) foi adicionado gota a gota por 10 minutos. A solução vermelha brilhante foi agitada a -78°C por 30 minutos, e uma solução de 8 (2,029 g, 6,33 mmole), em tetraidrofurano (8 mL), foi adicionada gota a gota por seringa junto com um enxágue com THF (2 mL). A solução resultante foi agitada a -78°C por 4 horas, etanol absoluto (3 mL) foi adicionado, seguido por cloreto de amônio aquoso saturado (25 mL). A mistura resultante aqueceu naturalmente até o gele ser completamente fundido, a seguir foi extraída com 3:1 hexanos:etila. A camada orgânica foi lavada com água (duas vezes), uma mistura 1:1 de bicarbonato de sódio aquoso saturado:água e salmoura, seca com sulfato de magnésio (anidro), filtrada e concentrada em pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia automatizada em sílica gel (Biotage®, SNAP100 KP-Sila, eluindo com 5-20% de acetato de etila em hexanos) para fornecer 9 (2,98 g) como um óleo viscoso sem cor.

[00137] Este procedimento também foi usado para preparar (S)-terc- butil 3-(benzil((R)-1-feniletil)amino)-3-(3-(terc-butóxi)fenil)propanoato a

53 / 72 partir de (E)-terc-butil 3-(3-(terc-butóxi)fenil)acrilato, e (S)-terc-butil 3- (benzil((R)-1-feniletil)amino)-3-(3-etoxifenil)propanoato a partir de 26.

[00138] Etapa Nove: A uma solução de 9 (2,97 g, 5,80 mmole) em etanol absoluto (39 mL) em temperatura ambiente sob argônio, ácido acético glacial (0,5 mL), metal paládio em carbono (Degussa tipo E101 NE/W, 50% de H2O, 10% de base de peso seco de Pd, 0,98 g, 0,46 mmole Pd). A atmosfera foi substituída com hidrogênio (alternando entre vácuo e hidrogênio de um balão várias vezes) e a reação foi agitada por toda a noite. A mistura foi filtrada por meio de Celite®, lavando com etanol, e o filtrado foi concentrado em pressão reduzida. O resíduo foi recristalizado a partir de dietil éter e hexanos para fornecer 10 (1,373 g) como um sólido cristalino branco. Nenhuma tentativa adicional foi realizada para isolar material adicional a partir do licor mãe.

[00139] Este procedimento também foi usado para preparar (S)-terc- butil 3-amino-3-(3-(terc-butóxi)fenil)propanoato acetato a partir de (S)-terc- butil 3-(benzil((R)-1-feniletil)amino)-3-(3-(terc-butóxi)fenil)propanoato, e (S)-terc-butil 3-amino-3-(3-etoxifenil)propanoato acetato a partir de (S)-terc- butil 3-(benzil((R)-1-feniletil)amino)-3-(3-etoxifenil)propanoato.

[00140] Etapa Dez: Uma solução de 6 (1,003 g, 2,46 mmole) e 10 (890 mg, 2,24 mmole) em DMF (12,3 mL) e N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (0,59 mL, 3,36 mmole) em argônio foi aquecida a 55°C por 8 horas. Uma alíquota indicou 10 não reagido, assim, mais 6 (100 mg, 0,25 mmole) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 55°C por toda a noite, resfriada em temperatura ambiente e a seguir diluída com 1:1 hexanos:acetato de etila e HCl (2N). A camada orgânica foi lavada com água (três vezes) e salmoura, seca com MgSO4 e filtrada. O filtrado foi concentrado em pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia automatizada em sílica gel (Biotage®, SNAP100 KP-Sila, eluindo com 25-50% de acetato de etila em hexanos). Poucas frações contendo o produto desejado também continham

54 / 72 uma impureza. As frações foram concentradas e re-purificadas (Biotage®, SNAP10 Ultra, eluindo com 30-50% de acetato de etila em hexanos). As frações de ambas as separações contendo apenas o produto desejado foram combinadas e concentradas para fornecer 11 (1,25 g) como uma espuma amarelo claro. Este material continha aproximadamente 4% de acetato de etila em peso, mas foi usado como está.

[00141] Este procedimento também foi usado para preparar (S)-terc- butil 3-(3-(1-(2-(terc-butóxi)-6-clorobenzil)-4-hidróxi-5-metil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)ureido)-3-(3-(terc-butóxi)fenil)propanoato (15) a partir de 5- (2-(terc-butóxi)-6-clorobenzil)-7-metiloxazolo[4,5-c]piridina-2,4(3H,5H)- diona e (S)-terc-butil 3-amino-3-(3-(terc-butóxi)fenil)propanoato acetato, e (S)-terc-butil 3-(3-(1-(2-cloro-6-etoxibenzil)-4-hidróxi-5-metil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)ureido)-3-(3-etoxifenil)propanoato a partir de 5-(2-etóxi-6- clorobenzil)-7-metiloxazolo[4,5-c]piridina-2,4(3H,5H)-diona (U.S. 6972296, composto 151 no exemplo 36) e (S)-terc-butil 3-amino-3-(3- etoxifenil)propanoato acetato. Exemplo 2

[00142] Etapa Um: A uma solução de 2-cloro-6-fluorbenzonitrila (1,31 g, 8,4 mmole) em tetraidrofurano anidro (16,8 mL) em temperatura ambiente sob argônio, terc-butóxido de potássio (1,04 g, 9,24 mmole) foi adicionado. A mistura foi aquecida em refluxo por toda a noite, a seguir diluída com uma mistura 3:1 de hexanos:acetato de etila, e lavada com água (duas vezes) e salmoura. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em pressão reduzida para fornecer 12 (1,655 g) como um óleo amarelo claro. Este material foi usado sem purificação.

[00143] Etapa Dois: A uma solução de 3-hidroxibenzaldeído (2,059 g,

55 / 72 16,9 mmole) em diclorometano (26 mL) em temperatura ambiente, perclorato de magnésio (379 mg, 1,7 mmole) foi adicionado. A mistura foi agitada por 10 minutos, a seguir di-terc-butil dicarbonato (8,48 g, 38,9 mmole) foi adicionado. A mistura resultante foi aquecida em refluxo por 14 horas, resfriada em temperatura ambiente, diluída com uma mistura 4:1 de hexanos:acetato de etila, e lavada com água (duas vezes) e salmoura. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia automatizada em sílica gel (Biotage®, SNAP100 KP-Sila, eluindo com 0-10% de acetato de etila em hexanos) para fornecer 13 (1,64 g) como um óleo sem cor. Exemplo 3 O I NaN3, Et4NI O N3

I O I O DMF 14 O O N3 Cl OH COOtBu Cl O COOtBu

O O 14, K2CO3 a) PPh3, THF

N N N N DMF, 80 °C N N b) H2O

H H H H

OR O OR O OR 16: R = CH2CH2OtBu OR 11: R = CH2CH2OtBu 17: R = tBu 15: R = tBu O O

O O O O NH2 O N OH

H

O O O Cl O COOtBu Cl O COOtBu

O O O N N N N N N H H DIPEA, DMF H H

OR O OR O 18: R = CH2CH2OtBu OR OR 20: R = CH2CH2OtBu 19: R = tBu 21: R = tBu (CH2)16CH3 O

H

P N O O O O O O NH 22: R = CH2CH2OtBu, R' = tBu

OH O O O n 23: R = R' = tBu

O a) TSTU, DIPEA, DMF (CH2)16CH3 O TFA, CH2Cl2 b) DSPE-PEG3400-NH2 O

O N O

H Cl O COOR' 24: R = CH2CH2OH, R' = H

O 25: R = R' = H

N N N H H OR O OR

[00144] Etapa Um: A uma solução de bis-1,2-(2-iodoetoxi)etano (7,37

56 / 72 g, 19,9 mmole) em DMF (133 mL) em temperatura ambiente sob argônio, azida sódica (1,29 g, 19,9 mmole) e iodeto de tetraetilamônio (257 mg, 1,00 mmole) foram adicionados. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por toda a noite, diluída com água (400 mL), e extraída com 9:1 hexanos:acetato de etila (100 mL três vezes). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com água e salmoura, secas com sulfato de magnésio, filtradas e concentradas em pressão reduzida. Isto forneceu aproximadamente uma mistura estatística de material de partida, o produto desejado, e a bis- azida. Esta mistura foi purificada por cromatografia automatizada em sílica gel (Biotage®, SNAP100 KP-Sila, eluindo com 10-15% de acetato de etila em hexanos) para fornecer 14 (1,95 g) como um óleo amarelo. As frações contendo tanto o material de partida quanto 14 foram concentradas para fornecer aproximadamente uma mistura 1:1 (1,15 g) como um óleo amarelo. Nenhuma tentativa foi realizada para isolar mais 14 a partir desta mistura.

[00145] Etapa Dois: a uma solução de 11 (1,25 g, 96% de 14 em peso, 1,61 mmole) e 14 (918 mg, 3,22 mmole) em DMF (8 mL) em temperatura ambiente sob argônio, carbonato de potássio (668 mg, 4,83 mmole) foi adicionado. A mistura resultante foi aquecida a 80°C por toda a noite, resfriada em temperatura ambiente, diluída com acetato de etila e lavada com água (três vezes) e salmoura. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia automatizada em sílica gel (Biotage®, SNAP100 KP-Sila, eluindo com 50-100% de acetato de etila em hexanos) para fornecer 16 (1,16 g) como um óleo viscoso amarelo claro.

[00146] Este procedimento também foi usado para preparar 17 a partir de 15, e 27 a partir de (S)-terc-butil 3-(3-(1-(2-cloro-6-etoxibenzil)-4-hidróxi- 5-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)ureido)-3-(3-etoxifenil)propanoato (preparado a partir de (S)-terc-butil 3-amino-3-(3-etoxifenil)propanoato, de acordo com os procedimentos descritos no exemplo 34, etapas 1-2, exemplo

57 / 72 36, etapas 1-3, e exemplo 37, etapa 1 em U.S. 6972296) e terc-butil N-(6- bromo-hexil)carbamato.

[00147] Etapa Três: A uma solução de 16 (1,16 g, 1,29 mmole) em THF (12,9 mL) em temperatura ambiente sob argônio, trifenilfosfino (508 mg, 1,94 mmole) foi adicionado. A mistura foi agitada por 1,5 hora, água (0,26 mL) foi adicionada e a agitação continuou por toda a noite. A mistura foi concentração e o resíduo foi purificado por cromatografia automatizada em sílica gel (Biotage®, SNAP25 KP-Sila, eluindo com 75-100% de acetato de etila em hexanos, a seguir 0-10% metanol com 2% de trietilamina adicionada em acetato de etila, a seguir 10-20% de metanol com 2% de trietilamina adicionada em diclorometano) para fornecer 18 (1,101 g) como um óleo viscoso amarelo acastanhado.

[00148] Este procedimento também foi usado para preparar 19 a partir de 17.

[00149] Etapa Quatro: A uma solução de 18 (1,10 g, 1,26 mmole) em DMF (6,3 mL) em temperatura ambiente sob argônio, DIPEA (0,66 mL, 3,78 mmole) e anidrido diglicólico (439 mg, 3,78 mmole) foram adicionados. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por toda a noite, diluída com acetato de etila, lavada com HCl aquoso (2N), água (3 vezes) e salmoura. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa automatizada (Biotage®, SNAP30 C18, eluindo com 50-100% de acetonitrila em água). As frações contendo 20 foram combinadas, e a acetonitrila foi removida por evaporação rotativa até uma solução turva resultar. Acetonitrila suficiente foi adicionada para fornecer uma solução clara, que foi congelada em um banho de gelo seco/acetona e liofilizada para fornecer 20 (1,00 g) como um pó branco macio.

[00150] Este procedimento também foi usado para preparar 21 a partir de 19, e 29 a partir de 28.

58 / 72

[00151] Etapa Cinco: A uma solução de 20 (580 mg, 0,585 mmole) em DMF (5,9 mL) em temperatura ambiente sob argônio, DIPEA (0,38 mL, 2,19 mmole) e N,N,N’,N’-tetrametil-O-(N-succinimidil)urônio tetrafluorborato (TSTU) (283 mg, 0,73 mmole) foram adicionados. A mistura resultante foi agitada por 1,5 hora, a seguir foi canulada, junto com um enxágue com DMF (0,5 mL), em uma solução de DSPE-PEG3400-NH2 (616 mg, aproximadamente 0,146 mmole) em DMF (14,6 mmole) em temperatura ambiente em argônio. A mistura resultante foi agitada por 2,5 dias, a seguir foi concentrada em pressão reduzida. O resíduo foi absorvido em tolueno e concentrado várias vezes, a seguir foi absorvido em acetonitrila e água. Acetonitrila foi removida por evaporação rotativa até ficar levemente turva, a seguir a acetonitrila foi adicionada gota a gota até uma solução clara ter resultado. A mistura foi congelada em um banho de gelo seco/acetona e liofilizada. O pó resultante foi purificado por cromatografia por exclusão de tamanho (Sephadex LH-20) em quatro porções, eluindo com metanol. As frações individuais foram identificadas em placas TLC (com indicador de UV) e visualizadas com luz UV, bem como uma coloração com ácido fosfomolíbdico (PMA) (10% em etanol). O material que era ativo tanto com UV quanto PMA saiu da coluna em duas bandas. Em relação à primeira banda, as manchas na placa TLC foram muito compactos, se espalhando muito pouco além da ponta do aplicador de micropipeta. Em relação à segunda banda, as manchas foram mais difusas, com espalhamento em todo o caminho até a borda da frente do solvente com mancha. A primeira banda continha o produto desejado, e as frações desta banda foram combinadas e concentradas em pressão reduzida para fornecer 22 (690 mg) como um vidro amarelo acastanhado.

[00152] Este procedimento também foi usado para preparar 23 a partir de 21, e 30 a partir de 29.

[00153] Etapa Seis: A uma solução de 22 (680 mg, aproximadamente 0,13 mmole) em diclorometano (9 mL), ácido trifluoroacético (9 mL) foi

59 / 72 adicionado. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 4 horas, a seguir foi concentrada. O resíduo foi dissolvido em diclorometano e concentrado (cinco vezes). O resíduo foia seguir absorvido em uma mistura 1:1 de acetonitrila e água (30 mL) e permaneceu naturalmente por toda a noite. A mistura resultante foi diluída com água (60 mL), a seguir a mistura resultante foi congelada em um banho de gelo seco/acetona e liofilizada. O pó resultante foi purificado por cromatografia por exclusão de tamanho (Sephadex LH-20) em duas porções, eluindo com metanol. As frações foram coradas da maneira descrita anteriormente, e a fração contendo material que era ativo tanto com UV quanto PMA foi combinada e concentrada. O resíduo foi absorvido em água (50 mL) e acetonitrila (15 mL), a mistura resultante foi congelada em um banho de gelo seco/acetona e liofilizada para fornecer 24 (572 mg) como um sólido esbranquiçado.

[00154] Este procedimento também foi usado para preparar 25 a partir de 23, e 31 a partir de 30. Exemplo 4

[00155] Etapa Um: A uma suspensão de ácido 3-etoxicinâmico (2,028 g, 10,6 mmole) em tolueno (13,3 mL) em temperatura ambiente sob argônio, terc-butil 2,2,2-tricloroacetimidato (2,37 mL, 13,3 mmole) foi adicionado. A mistura foi aquecida a 50°C por toda a noite, tempo no qual a análise TLC revelou conversão parcial. Mais terc-butil 2,2,2-tricloroacetimidato (1,2 mL) foi adicionado e o aquecimento continuou por 24 horas. A reação ainda não estava completa, assim mais terc-butil 2,2,2-tricloroacetimidato (1,2 mL) foi adicionado e o aquecimento continuou por mais 24 horas. A mistura resultante foi filtrada, lavada com tolueno, e o filtrado foi concentrado em pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel,

60 / 72 eluindo com 10% de acetato de etila em hexanos para fornecer 26 (2,22 g) como um óleo sem cor. Exemplo 5

[00156] Etapa Um: A uma solução de 27 em acetato de etila (200 mg, 0,25 mmole) em acetato de etila (4,0 mL) em temperatura ambiente, uma solução de cloreto de hidrogênio (4,0 M em dioxano, 1,3 mL, 5,2 mmole) foi adicionada. A reação foi agitada por 2 horas, a seguir o excesso de cloreto de hidrogênio foi removido borrifando com argônio por 30 minutos. A mistura de reação foi concentrada, absorvida em água e liofilizada para fornecer um pó branco. Este material foi purificado por HPLC de fase reversa (Symmetry Shield RP18, 7 µm, 30 x 250mm, 30-80% de acetonitrila em água com 0,1%

61 / 72 de ácido trifluoracético). As frações contendo o material desejado foram combinadas, diluídas com água e acetato de etila, tornadas básicas com hidróxido de sódio aquoso, agitadas em um funil separatório, e as fases foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água (3 vezes) e salmoura, seca com sulfato de magnésio, filtrada, e concentrada em pressão reduzida para fornecer 28 (88 mg) como um óleo sem cor.

[00157] Etapas Dois a Quatro: Composto 31 foi preparado a partir de 28, seguindo as etapas Quatro a Seis o exemplo 3. Exemplo 6

[00158] Formulação representativa de lipossomo: 1,2-Di- hexadecanoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPPC) e colesterol foram obtidos de Lipoid Inc., Newark NJ, Estados Unidos. Sal de ácido dietilenotriaminepenta- acético-bis(stearilamida) gadolínio (Gd-DTPA-BSA) foi obtido de Avanti Polar Lipids, Alabaster AL, Estados Unidos. 1,2-Distearoil-sn-glicero-3- fosfoetanolamina-N-[metóxi(polietileno glicol)-2000] (DSPE-MPEG2000), foi obtido de Corden Pharma, Liestahl, Suíça. Lissamine™ Rodamina B 1,2- Di-hexadecanoil-sn-Glicero-3-Fosfoetanolamina, sal de trietilamônio (rodamina DHPE), foi obtido de ThermoFisher Scientific, Estados Unidos. Todos os reagentes obtidos foram usados sem purificação adicional. O conjugado DSPE-PEG3400-THI565 foi preparado da maneira descrita no protocolo de síntese anterior.

[00159] Etapa Um: DPPC, Colesterol, DSPE-MPEG2000, Gd-DTPA- BSA ou Gd-DOTA-DSPE e DSPE-PEG3400-THI565 foram constituídos, respectivamente, com base na superfície desejada que alveja a expressão do ligante nas proporções molares mostradas na tabela a seguir: Ligante de DPPC Colesterol DSPE- Gd-DTPA- DSPE-PEG3400-THI565 superfície MPEG2000 BSA* (THI567) (% em mole) 0,05% 31,95 40 3 25 0,05 0,25% 31,75 40 3 25 0,25 1,0% 31,0 40 3 25 1,0 *Quando GD-DTPA-BSA (ou Gd-DOTA-DSPE) não está presente, o equilíbrio pode ser realizado com 25% de 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DSPE), HSPC (fosfatidilcolina de soja hidrogenada), DPPC (Dipalmitoil fosfatidilcolina), ou HSPC/DPPC (fosfatidilcolina de soja hidrogenada / dipalmitoil

62 / 72 fosfatidilcolina) para manter o componente THI567 constante.

[00160] Em várias modalidades, outros agentes quelantes de Gd adequados são incluídos nesta descrição e o uso de outros agentes quelantes de Gd adequados também é contemplado.

[00161] Etapa Dois: Opcionalmente, a qualquer destas composições de lipídio foi adicionada rodamina DHPE (1,0 a 2,5 mg), agente de contraste de iodo (por exemplo, iodixanol) ou agente bioativo e formulação de partícula da maneira previamente descrita em Ghaghada KB, Ravoori M, Sabapathy D, Bankson J, Kundra V, Annapragada A. New Dual Mode Gadolinium Nanoparticle Contrast Agent for Magnetic Resonance Imaging. Yang S, editor. PLoS ONE. 29 de outubro de 2009;4(10):e7628. Resumidamente, os lipídios (467,4 mgs) foram dissolvidos em etanol (1,0 a 1,2 mL), seguido por hidratação a 63-65°C por 40 minutos em salina 150 mM/ histidina 10 mM (9 mLs) para atingir uma concentração de lipídio de 50 mM. A mistura foi então extrusada em uma extrusora Lipex de 10 mL (Northern Lipids Inc., Burnaby, Canadá), usando um filtro de policarbonato Track-Etch de 400 nm (5 passagens), para obter partículas com um diâmetro médio de ~250 nm. Em relação às partículas com diâmetro médio de ~150 nm, a formulação subsequente foi extrusada adicionalmente por meio de um filtro de policarbonato de 200 nm (8 passagens), e em relação às partículas com um diâmetro médio de ~100 nm, a formulação foi extrusada adicionalmente (5 vezes) por meio de filtros de 100 nm. As soluções resultantes foram então dialisadas contra salina 150 mM / histidina 10 mM. O tamanho médio do lipossomo na formulação final foi determinado por espalhamento dinâmico de luz (DLS), e a concentração de gadolínio e fosfolipídio (fósforo equivalente) na formulação foi quantificada usando espectroscopia por emissão ótica acoplada indutivamente (ICP-OES). O número de partículas/mL foi computado com base no tamanho da partícula e na concentração final de lipídio na formulação.

[00162] Nesta descrição, um lipossomo incorporado na integrina que

63 / 72 alveja uma molécula (THI567) é mostrado para ligar especificamente células T, células B, monócitos e neutrófilos. Em várias modalidades, os lipossomos modificados pelo agente de alvejamento desta descrição (por exemplo, THI567) são capazes de se ligar tanto às células não ativadas quanto às ativadas. Além disso, esta molécula (THI567) tem uma âncora de lipídio que permite que seja inserida em uma bicamada de lipídio em um lipossomo. Além disso, a molécula (THI567) tem uma característica hidrofílica exclusiva, prevenindo-a de romper a bicamada lipídica. A molécula é, portanto, particularmente bem adequada para liberar especificamente lipossomos para as células alvo. Os lipossomos modificados com/por ou que carregam esta molécula na superfície podem carregar agentes de imageamento, com o propósito de imagear/rastrear as células e também podem carregar agentes terapêuticos que podem ser liberados para as células alvo de maneira muito específica.

[00163] Preparação de iodo contendo agente de contraste CT que alveja VLA-4. Um outro lipossomo alvejado foi preparado dissolvendo lipídios (HSPC/DPPC, Chol, DSPE-mPEG2000, DSPE-PEG3400-THI0565) em etanol. A solução etanólica de lipídio foi hidratada com solução de iodixanol e sequencialmene extruida por meio de membranas Nuclepore para render nanopartículas de tamanho de partícula desejado. A solução de nanopartícula resultante foi diafiltrada para remover iodixanol não capsulado. Rodamina-DHPE pode ser incluído em 0,2% em mole para a preparação de nanosonda com marcação fluorescente. Preparou-se partículas alvejadas contendo 0,25 – 1,5% em mole de ligante de alvejamento, e tamanho de partícula de 100 – 300 nm. HSPC é fosfatidilcolina de soja hidrogenada no lugar de DSPE.

[00164] Preparação de Bioativo Representativo: Preparação de Lipossomal-doxorubicina que alveja VLA-4. Os lipídios (HSPC, Col, DSPE- mPEG2000, DSPE-PEG3400-THI0565) são dissolvidos em etanol em razão

64 / 72 molear 56:40:3:1. A solução etanólica de lipídio é hidratada com solução de sulfato de amônio 350 mM, e sequencialmente extrusada por meio de membranas Nuclepore com 5 passagens por meio de 400 nm e 8 passagens por meio de 200 nm. A solução lipossomal resultante é dialisada contra salina 150 mM /histidina 10mM. A solução lipossomal é misturada (1:1 V/V) com solução de doxorubicina (5 mg/mL) a 60 C. Após 1 hora, a solução é resfriada em banho de gelo e subsequentemente dialisada contra salina 150 mM /histidina 10mM.

[00165] Nesta descrição, o uso de integrina α4β1 que alveja o ligante acoplado aos lipossomos para imagear focos de célula autoimune ou inflamatória é discutido. Esta metodologia, por exemplo, pode ser usada para imagear placas ateroscleróticas, rejeição ao transplante, inflamação de articulação em artrite reumatoide, inflamação pulmonar em lesão pulmonar aguda, tumores que expressam α4β1, tais como aqueles encontrados em linfoma, e infiltração de célula imune em tumores sólidos. Além disso, tratamentos com fármaco para estes estágios da doença que usam esta metodologia de liberação também são contemplados.

[00166] A molécula/fração de alvejamento desta descrição é distinta de e vantajosa em relação àquelaa da técnica, em decorrência de apresentar uma característica hidrofílica exclusiva e âncoras de lipídio que a torna adequada para incorporação em uma bicamada de lipídio, provendo lipossomos ativos adequados, os quais se ligam especificamente às células alvo.

65 / 72 Tabela 1, Estruturas do composto, Número do Estrutura Atividade (IC50) Substrato Cátions Espécie Notas gerais composto Tipo de célula THI520 CH3 Cl ONa

O CO2Na Humano Antagonista 0,11 ± 0,04nM CS-1 Mn

N N N (n=2) de α4β1 não

H H O O K562(α4β1) conjugado O VCAM-1 Ca/Mg Humano com grupo , 6,3 ± 3,1 nM (n=3) que ancora K562(α4β1) lipídio, VCAM-1 Ca/Mg Camund 129 ± 42 nM (n=3) ongo cLogP – 70Z3 4,165 VCAM-1 Mn 0,75+/- 0,07 nM Camund (n=2) ongo 70Z3 THI565 Cl

CH

OH 3 Antagonista

CO H 0,467 ± 0,356 nM VCAM-1 Mn Humano de α4β1 não O 2

N N H N

H (n=13) conjugado K562(α4β1) com grupo

O O HO HO

O VCAM-1 Ca/Mg Humano que ancora 11,88 ± 4,84 nM lipídio, (n=3) K562(α4β1) CS-1 Mn Humano cLogP – 1,361 0,320 ± 0,113 nM (n=3) CS-1 Ca/Mg Humano Lipofilicidad K562(α4β1) e menor que THI520 7,94 ± 3,7 nM sugere (n=3) melhor K562(α4β1) desempenho em construções de lipossomo. THI567* THI565 0,62 ± 0,11 nM VCAM-1 Mn Humano conjugado (n=3)K562(α4β1) com grupo que ancora lipídio e ligador hidrofílico para a incorporação em lipossomos. *Estrutura representa o peso molecular alvo médio através da distribuição de compostos representados na amostra.

[00167] Foram geradas nanopartículas alvejadas com base em THI565 antagonista de integrina α4β1 como o ligante de alvejamento (vide Tabela 1 para estrutura). Este inibidor é um potente antagonista de integrina α4β1 tanto em condições de ensaio de adesão de célula em alta afinidade (0,467 ± 0,356 nM; n=13) quanto em baixa afinidade (11,88 ± 4,84 nM; n=3), e tem um

66 / 72 cLogP preferido em relação a THI520 para a incorporação de lipossomo. A modificação de THI565 com um ligador (DSPE-PEG-3400-NH) determinado para ser incorporado em lipossomos não afetou significativamente a atividade antagonista (THI567 IC50 = 0,48 ± 0,2 nM; n=5). A figura 2 descreve estes dois compostos.

[00168] THI567 foi usado na geração de uma variedade de diferentes formulações de lipossomo (vide Tabela 2). Tabela 2. Formulações de lipossomo. THI567 – 0,05% (percentual de ligante alvejado) Tamanho Partículas Ligantes de superfície Concentração de Kd (av); SEM de est./mL estimados /partícula ligante de superfície [pM] n=3 partícula [M] (nm) 250 3,21 X 1013 242 12,9 µM 398,6 +/- 78,2 5,33 x 10-8 M 150 6,81 X 1013 116 13,1 µM 567,6 +/- 32,8 1,13 x 10-7M 100 1,35 X 1014 60 13,5 µM 474,5+/- 62,3 2,24 x 10-7M THI567 – 0,25% (percentual de ligante alvejado) Tamanho Partículas Ligantes de superfície Concentração de Kd (av); SEM da est./mL estimados/partícula ligante de superfície [pM] n=3 partícula (M) (nm) 250 3,88 X 1013 1006 64,8 µM 294,9 +/- 33,1 6,44 x 10-8 M 150 7,20 X 1013 549 65,7 µM 303,6 +/- 70,0 1,20 x 10-7 M 100 1,76 X 1014 231 67,5 µM 309,0 +/- 57,6 2,92 x 10-7 M THI567 – 1,0% (percentual de ligante alvejado) Tamanho Partículas Ligantes de superfície Concentração de Kd (av); SEM de est./mL estimados /partícula ligante de superfície [pM] n=3 partícula (M) (nm) 250 3,06 X 1013 5075 258,0 µM 174 +/-21,3 5,08 x 10-8 M 150 6,21 X 1013 2535 261,5 µM 236,3 +/- 36,0 1,03 x 10-7 M 100 1,15 X 1014 1397 266,9 µM 247,5 +/- 41,2 1,91 x 10-7 M

[00169] Da maneira resumida na Tabela 2, THI567 foi incorporado a partir de concentrações que variam de 0,05% de concentração total de lipídio, até cerca de 1% da concentração total de lipídio. O tamanho da partícula é um componente importante para a funcionalidade e farmacocinética aceitável do lipossomo in vivo. Em uma modalidade, o tamanho da partícula está entre 50

67 / 72 e 400 nm. Em uma modalidade, o tamanho de partícula está entre 85 e 200 nm. Em uma outra modalidade, tamanhos diferentes de lipossomo foram desenvolvidos (250 nm, 150 nm, e 100 nm). Lissamine rodamina B foi incorporado nos lipossomos para detecção por fluorescência, e Gd foi incorporado no lipossomo para imageamento a base de MRI. Os lipossomos foram denominados “Gd567” (tamanho nm;% de ligante alvejado). Tabela 2 também descreve as constantes de ligação de lipossomo da maneira medida por sua ligação às células K562 que expressam α4β1 (avaliado por citometria de fluxo). As constantes de ligação são expressas como a concentração de partícula molar. A especificidade de ligação de lipossomos foi determinada por inúmeros meios diferentes. Estes incluem competição com ligante de alvejamento livre (Fig. 3), onde THI565 em excesso foi usado para competir com a ligação do lipossomo Gd567 (150 nm; 1,0%) às células K562 que expressam integrina α4β1. A inibição completa de ligação de Gd567 (150 nm; 1,0%) foi observada nas doses mais elevadas de THI0565 (Fig. 3).

[00170] Em um outro conjunto de experimentos, os lipossomos não alvejados (que têm 3% de revestimento de superfície inerte DSPE-PEG-2000- OMe para propriedades furtivas, enquanto o lipossomo alvejado tem 3% de DSPE-PEG-2000-OMe e 1% de DSPE-PEG-3400-THI565 (denominado THI567)) mostraram ligação mínima nas concentrações testadas, ao passo que os lipossomos que alvejam THI567 demonstraram ligação dose-dependente (Fig. 4). Igualmente, anticorpos monoclonais foram usados para inibir ligação de Gd567 (150 nm; 1,0%) à linhagem celular de murino 70Z/3. Os anticorpos específicos para α4 integrina de murino (mAb PS/2) inibiram completamente a ligação de Gd567 (150 nm; 1,0%) às células 70Z/3, ao passo que o isotipo controle mAb (IgG2b de rato) não apresentou nenhum efeito (Fig. 4). Isto demonstra ligação específica de Gd567 (150 nm; 1,0%) à integrina α4β1.

[00171] O teste adicional da especificidade de ligação de lipossomo beneficia de linhagens adicionais que foram geneticamente modificadas para

68 / 72 expressar integrina α4β1, ou linhagens celulares que foram mutadas e selecionadas em relação à perda da expressão de integrina α4β1. Células K562 tipo selvagem expressam pouca ou nenhuma integrina α4β1. Quando usado em ensaios de ligação com Gd567 (150 nm; 1,0%), houve pouca ligação de lipossomo a esta célula, comparado às células K562 que foram geneticamente modificadas para superexpressar integrina α4β1 (Fig. 5). Células Jurkat expressam integrina α4β1. As células foram mutadas e selecionadas quanto a perda de integrina α4β1. A ligação de Gd567 (150 nm; 1,0%) à Jurkats que expressam α4β1 foi detectada sem nenhuma ligação às células Jurkat α4β1- observada(Fig. 5).

[00172] Os receptores de adesão celular de integrina exigem cátions divalentes para sua atividade de ligação de ligante. Assim, em um outro experimento projetado para demonstrar especificidade de ligação de lipossomo, EDTA foi usado no ensaio de ligação para quelar cátions e inibir a função de integrina. EDTA anulou completamente a ligação de Gd567 (250 nm; 0,25%) aos linfócitos T Jurkat T mesmo em altas concentrações do lipossomo testado (Fig. 6).

[00173] Todas as formulações diferentes de lipossomo descritas na Tabela 2 foram submetidas à análise realizada na Fig. 6. Da maneira mostrada, a fluorescência de fundo foi determinada na presença de EDTA 20 mM para inibir a função de integrina. Esta fluorescência de fundo foi subtraída da ligação total para determinar curvas de ligação específicas, das quais Kd’s aparente foram determinadas. Kd’s variaram de 22,0 – 100,5 x 10- 12 M (vide Tabela 2). Observou-se também que quantidades menores de ligantes de alvejamento (por exemplo, 0,05%) resultaram em maiores ligações de lipossomo de fundo às células, indicando assim que maiores concentrações de ligante alvejado nos lipossomos seriam ideais para ligação de célula específica (Fig. 7).

[00174] A partir da matriz de lipossomos descrita na Tabela 2, Gd567

69 / 72 (150 nm; 1,0%) foi escolhido para análise adicional in vivo, com base na Kd observada e ligação não específica diminuída. Igualmente, como um outro teste de especificidade de ligação, o lipossomo controle dos mesmos parâmetros físico-químicos de Gd567 (150 nm; 1,0%) foi gerado sem o ligante alvo. Estas partículas não alvejadas (Gdcon (150 nm; 1,0%)) têm 3% de revestimento de superfície inerte DSPE-PEG-2000-OMe com propriedades furtivas, enquanto o lipossomo alvejado tem 3% de DSPE-PEG-2000-OMe e 1% de DSPE-PEG-3400-THI565 (denominado THI567). Um ensaio de ligação representativo é mostrado (Fig. 4).

[00175] Para analisar a ligação in vivo, Gd567 (150 nm; 1,0%) ou Gdcon (150 nm; 1,0%) foram injetados na veia femoral de camundongos C57BL/6 saudáveis. Após 2 horas, o sangue total foi coletado por punção cardíaca, e a ligação do lipossomo aos monócitos, neutrófilos, células T e células B do sangue periférico foi analisada (Fig. 8).

[00176] Similarmente aos estudos in vitro descritos na Fig. 4, a ligação de Gd567 (150 nm; 1,0%) foi detectada, ao passo que nenhuma ligação significativa de Gdcon foi observada in vivo (Fig. 8). Um resumo de três experimentos independentes (intensidade de fluorescência normalizada média ± SEM) é mostrado na Fig. 8.

[00177] Para visualizar a fluorescência do lipossomo em cada um destes subconjuntos de célula descritos na Fig. 8, os subconjuntos de células também foram escolhidos e fixos em lâminas de vidro para análise confocal (Fig. 9). Um de três experimentos representativos é mostrado.

[00178] A absorção de lipossomo alvejado por THI567 foi quantificada por imageamento MR em placa aterosclerótica em camundongos. Para estudos de MRI, camundongos ApoE-/- (12-14 semanas) foram alimentados com uma dieta rica em gordura por aproximadamente 10 semanas. A seguir, os camundongos foram injetados intravenosamente com lipossomos alvejados com THI0567 (0,1 mmole de Gd/kg) ou lipossomos controle não alvejados

70 / 72

(0,1 mmole de Gd/kg). O imageamento MR in vivo foi realizado em um imã permanente 1T, usando uma sequência denominada gradiente eco 3D ponderada em T1 (T1w). Todos os camundongos foram submetidos ao imageamento com pré-contraste T1w, seguido pela administração de agente de contraste lipossomal-Gd (alvejado por THI0567 ou não alvejado) e uma varredura após o contraste imediata.

Para garantir a remoção do agente de contraste da circulação, foram realizadas varreduras após o contraste 72 horas após administrar o contraste lipossomal.

O agente lipossomal-Gd alvejado por THI0567 mostrou melhoria do sinal na parede aórtica significativamente maior em imagens T1w em múltiplos locais ao longo da aorta (Fig. 10); o agente não alvejado não exibiu melhoria de sinal comparável.

Para quantificar a melhoria de sinal em imagens MR, calculou-se razões de melhoria normalizadas (NER). A NER geral foi significativamente maior em camundongos administrados com o agente lipossomal-Gd alvejado por THI0567-targeted, do que aqueles nos quais foi fornecido o lipossomal-Gd não alvejado (42,8±45,9 vs. 7,4±14,8, p=0,04) (Fig. 6A). Para identificar regiões com o maior sinal de melhoria, determinou-se a NER em múltiplos segmentos aórticos: a aorta ascendente, arco aórtico, e aorta descendente (Fig. 10). A NER foi significativamente maior em camundongos tratados com lipossomal-Gd alvejado do que em camundongos administrados com lipossomal-Gd não alvejado no arco aórtico (66,8±44,0 vs. 12,3±25,4, p=0,001) e na aorta descendente (28,7±38,5 vs. -12,2±22,3, p=0,023) (Fig. 6C). Na aorta ascendente, embora a NER média tenha sido maior no grupo de lipossomo alvejado, a diferença entre os dois grupos não atingiu significância estatística.

Após o atraso nas verificações após contraste, o tecido aórtico foi coletado e seccionado para examinar os padrões de acúmulo de lipossomo.

No exame das seções da aorta ascendente e arco aórtico, o acúmulo de lipossomo (indicado por fluorescência com Rodamina B) foi limitado às placas positivas para óleo vermelho (Fig. 10). Nenhuma fluorescência com Rodamina B foi

71 / 72 observada em placas a partir de camundongos não tratados (Fig. 10).

[00179] As seções de placas aórticas foram examinadas por imunofluorescência para determinar se os marcadores associados às células das linhagens monocíticas co-localizavam com lipossomos alvejados com THI0567. A fluorescência com Rodamina B (lipossomo) na raiz aórtica foi limitada às áreas subendoteliais nas placas (Fig. 11). A fluorescência do lipossomo co-localizou tanto com marcadores de monócito/macrófago CD11b quanto F4/80 (Fig. 11). As artérias de ramificação, tais como a artéria braquiocefálica, e a região do arco aórtico continham muito acúmulo de lipossomo alvejado por THI0567 (Fig. 11), com lipossomos internalizados nas células CD11b+ nas regiões da placa.

[00180] Embora as modalidades da invenção tenham sido mostradas e descritas, modificações das mesmas podem ser realizadas pelos versados na técnica, sem fugir do espírito e preceitos da invenção. As modalidades descritas e os exemplos aqui providos são apenas exemplares, e não são pretendidos que sejam limitantes. Muitas variações e modificações da invenção aqui descrita são possíveis e estão no escopo da invenção. Dessa maneira, o escopo de proteção não é limitado pela descrição apresentada anteriormente, mas é apenas limitado pelas reivindicações a seguir, este escopo inclui todos os equivalentes do assunto em questão das reivindicações.

[00181] A discussão de uma referência na descrição da técnica relacionada não é uma admissão que seja a técnica prévia para a presente invenção, especialmente qualquer referência que pode apresentar uma data de publicação após a data de prioridade deste pedido. As descrições de todas as patentes, pedidos de patente e publicações aqui citados são aqui incorporados pela referência na sua íntegra, na medida em que fornecem exemplos, procedimentos, ou outros detalhes suplementares àqueles aqui apresentados.

[00182] Não obstante, os intervalos e parâmetros numéricos que estabelecem o amplo escopo da invenção são aproximações, os valores

72 / 72 numéricos apresentados nos exemplos específicos são relatados o mais precisamente possível. Qualquer valor numérico, entretanto, contém inerentemente erros que resultam necessariamente do desvio padrão encontrado em suas respectivas medições de teste.

[00183] Observa-se que o termo “cerca de” pode significar até e incluindo ±10% do valor declarado. Por exemplo, “cerca de 10” pode significar de 9 as 11.

[00184] Além disso, embora as composições, métodos, e assim por diante tenham sido ilustrados pelos exemplos descritos, e embora os exemplos tenham sido descritos em detalhes consideráveis, não é intensão do requerente restringir, ou de maneira alguma limitar, o escopo das reivindicações em anexo com atais detalhes. Assim, pretende-se que este pedido inclua alterações, modificações e variações que estão no escopo das reivindicações em anexo. A descrição precedente não deve limitar o escopo da invenção. Preferencialmente, o escopo da invenção deve ser determinado pelas reivindicações em anexo e seus equivalentes.

Claims

1 / 28 REIVINDICAÇÕES

1. Composto ou um agente que alveja integrina, incluindo isômeros óticos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, caracterizado pelo fato de que é da fórmula: em que, R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), - N(alquila C1-C3)SO2(alquila C1-C3), -N(alquila C1-C3)SO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, OCF2, OCH2CF3, acila alifática, O(cicloalquilalquila), O(aralquila), -SO2(1-pirolidinila), SO2(1-piperidinila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); Z é N ou CR2;

2 / 28

R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio, halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, - NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, - N(alquila C1-C3)-C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3), - C(O)NH(alquila C1-C3), -NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila e-C(O)NH(benzila); e em que R2, quando presente e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, di(alquila C1-C3)amino, -C(O)O- alquila-(C1-C3), -C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, hidroxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila,

3 / 28 heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); R1, R2, R3 e R4 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R5, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir de uma cadeia C7-C21 que consiste em grupo alquila ou alquenila; m e p são independentemente, em cada ocorrência, um número inteiro de 0 a 5; L1 é uma cadeia de 3-14 átomos contendo qualquer combinação de -CH2-, -C(O)-, -NH-, -S-, -S(O)-, -O-, -C(O)O- ou -S(O)2-; X é selecionado a partir de um grupo que consiste em: , , , , e ; s é um número inteiro de 1-2; L2 é uma cadeia –(CH2CH2O)n-, onde n é um número inteiro na faixa de 7 a 115; e Y é (CH2)q onde q é um número inteiro de 0 a 2; e em que o dito composto tem um peso molecular médio de

2.000 a 7.000.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é da fórmula:

4 / 28 em que, R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alcóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, -CF3, -CN, -NO2, -NH2, -OH, -NHSO2(alquila C1- C3), alcoxialquila, alquilamino, cicloalquila, aralquila, -SO2(alquila), -OCF2, acila alifática, -OCH2CF3, alcoxialcoxi, -O(cicloalquilalquila), -O(aralquila), - SO2(1-pirrolidinila), -SO2(1-piperidinil) piperidinila, e pirrolidinila, e em que cada R1 é independentemente não substituído ou substituído por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; Z é N ou CR2; R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio, halogênio, e alquila inferior; e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel e em que cada R2, quando presente, e R3 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alcóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, hidroxialcóxi, -CF3, -NH2, -OH, -NHSO2(alquila C1- C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, di(alquila C1-C3)amino, - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, haloalquila, alcoxialcoxi, cicloalquila, arila, sulfonamido, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila e pirrolidinila, em que cada R4 é independentemente não substituído ou substituído por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R5, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir de uma cadeia C7-C21 que consiste em grupo alquila ou alquenila; m e p são independentemente, em cada ocorrência, um número inteiro de 0 a 5;

5 / 28 L1 é uma cadeia de 3-14 átomos, contendo qualquer combinação de -CH2-, -C(O)-, -NH-, -S-, -S(O)-, -O-, -C(O)O- ou -S(O)2-; X é selecionado a partir de um grupo que consiste em: , , , , e ; s é um número inteiro de 1-2; L2 é uma cadeia –(CH2CH2O)n-, onde n é um número inteiro na faixa de 38 a 115; e Y é (CH2)q onde q é um número inteiro de 0 a 2.

3. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que cada R5 é (CH2)rCH3, em que r é 10-20.

4. Composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que é da fórmula: em que n é um número inteiro na faixa de 38 a 115.

5. Composto de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o dito L1 é um radical 1,8-(3,6-dioxa)octan-di-ila, radical 1,5- (3-oxa)pentan-di-ila, ou radical alcan-di-ila C3-C12.

6. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que é da fórmula:

6 / 28 em que cada R6 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior e hidroxialquila; em que m e p são independentemente números inteiros de 0-4.

7. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que tem uma estrutura da maneira a seguir: .

8. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que tem uma estrutura da maneira a seguir: .

9. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que é da fórmula:

10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que possibilita a geração de imagens por

7 / 28 IRM, opcionalmente em intensidade de campo de 1 Tesla.

11. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende uma pluralidade de lipossomos, os ditos lipossomos compreendendo: um primeiro lipídeo ou fosfolipídeo; um segundo lipídeo ou fosfolipídeo que é derivado de um polímero; um excipiente estericamente volumoso capaz de estabilizar os lipossomos; um terceiro lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina; e opcionalmente DSPE ou um quarto lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de contraste, em que a pluralidade de lipossomos opcionalmente encapsula um componente de carga útil consistindo em um ou mais agentes bioativos, rodamina, DHPE ou agente de contraste de iodo; em que a pluralidade de lipossomos tem um diâmetro médio menor que 400 nanômetros.

12. Composição de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o primeiro lipídeo ou fosfolipídeo compreende DPPC ou HSPC.

13. Composição de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o segundo lipídeo ou fosfolipídeo que é derivado de um polímero compreende mPEG (2000)-DSPE.

14. Composição de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o terceiro lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina é um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9.

15. Composição de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o quarto lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um

8 / 28 grupo que se liga a um agente intensificador de contraste não radioativo é Gd- DTPA-BSA ou Gd-DOTA-DSPE.

16. Composição de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o primeiro lipídeo ou fosfolipídeo, o segundo lipídeo ou fosfolipídeo que é derivado de um polímero, e o excipiente estericamente volumoso capaz de estabilizar os lipossomos, e o quarto lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de contraste não radioativo estão presentes em uma razão molar de cerca de 30-32:3:40:25.

17. Composição de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pelo fato de que o lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina consiste em 0,05 a 2,0% (mole por cento) do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9.

18. Composição de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o agente bioativo compreende doxorubicina, paclitaxel, daunorubicina, vincristina, tretinoina, cisplatina, anamicina, vinorelbina, HCl de irinotecano, ou floxuridina.

19. Composição de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que os lipossomos têm um diâmetro médio de cerca de 150 nm.

20. Composição de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que os lipossomos têm um diâmetro médio menor que 250 nm.

21. Composição de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o agente bioativo compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em um quimioterápico, um gene, uma proteína, uma molécula pequena e um peptídeo.

22. Composição de acordo com qualquer uma das

9 / 28 reivindicações 11 a 21, caracterizada pelo fato de que a composição é usada em uma modalidade de imageamento ou usada para liberação de fármaco.

23. Composição de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que a dita modalidade de imageamento é selecionada a partir do grupo que consiste em CT, micro-CT, mamografia, raios-X, IRM, espectroscopia de ressonância magnética, imageamento por bioluminescência, ultrassom, imageamento ótico, espectroscopia ótica, espectroscopia por fluorescência, imageamento por fluorescência, espectroscopia quase infravermelha e imageamento quase infravermelho.

24. Composição de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que possibilita a geração de imagens por IRM, opcionalmente em intensidade de campo de 1 Tesla.

25. Método para produzir um lipossomo, caracterizado pelo fato de que compreende: combinar um primeiro lipídeo ou fosfolipídeo com um segundo lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um polímero, um excipiente estericamente volumoso para estabilizar o lipossomo, um terceiro lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina, e opcionalmente DSPE ou um quarto lipídeo ou fosfolipídeo capaz de se ligar a um agente de contraste não radioativo, e extrusar para formar partículas menores que 400 nm.

26. Método de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o dito lipossomo compreende um agente intensificador de contraste.

27. Método de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o dito lipossomo encapsula um componente de carga útil que consiste em um ou mais agentes bioativos.

28. Método de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o componente que alveja integrina tem um peso molecular de

10 / 28

2.000 a 7.000, inclui isômeros óticos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, e é da fórmula: em que, R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), - N(alquila C1-C3)SO2(alquila C1-C3), -N(alquila C1-C3)SO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, OCF2, OCH2CF3, acila alifática, O(cicloalquilalquila), O(aralquila), -SO2(1-pirolidinila), SO2(1-piperidinila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); Z é N ou CR2; R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio,

11 / 28 halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, - NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, - N(alquila C1-C3)-C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3), - C(O)NH(alquila C1-C3), -NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila e-C(O)NH(benzila); e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, di(alquila C1-C3)amino, -C(O)O- alquila-(C1-C3), -C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, hidroxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, O(haloalquila), O(cicloalquila),

12 / 28 O(cicloalquilalquila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); R1, R2, R3 e R4 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R5, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir de uma cadeia C7-C21 que consiste em grupo alquila ou alquenila; m e p são independentemente, em cada ocorrência, um número inteiro de 0 a 5; L1 é uma cadeia de 3-14 átomos, contendo qualquer combinação de -CH2-, -C(O)-, -NH-, -S-, -S(O)-, -O-, -C(O)O- ou -S(O)2-; X é selecionado a partir de um grupo que consiste em: , , , , e ; s é um número inteiro de 1-2; L2 é uma cadeia –(CH2CH2O)n- onde n é um número inteiro na faixa de 7 a 115; e Y é (CH2)q onde q é um número inteiro de 0 a 2.

29. Método de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o componente que alveja integrina é da fórmula: em que, R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alcóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, -CF3, -CN, -NO2, -NH2, -OH, -NHSO2(alquila C1-

13 / 28

C3), alcoxialquila, alquilamino, cicloalquila, aralquila, -SO2(alquila), -OCF2, acila alifática, -OCH2CF3, alcoxialcoxi, -O(cicloalquilalquila), -O(aralquila), - SO2(1-pirrolidinila), -SO2(1-piperidinil) piperidinila e pirrolidinila e em que cada R1 é independentemente não substituído ou substituído por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; Z é N ou CR2; R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio e alquila inferior, grupos; e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel e em que cada R2, quando presente, e R3 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alcóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, hidroxialcóxi, -CF3, -NH2, -OH, -NHSO2(alquila C1- C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, di(alquila C1-C3)amino, - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, haloalquila, alcoxialcoxi, cicloalquila, arila, sulfonamido, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila e pirrolidinila, em que cada R4 é independentemente não substituído ou substituído por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R5, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir de uma cadeia C7-C21 que consiste em grupo alquila ou alquenila; m e p são independentemente, em cada ocorrência, um número inteiro de 0 a 5; L1 é uma cadeia de 3-14 átomos, contendo qualquer combinação de -CH2-, -C(O)-, -NH-, -S-, -S(O)-, -O-, -C(O)O- ou -S(O)2-; X é selecionado a partir de um grupo que consiste em:

14 / 28 , , , , e ; s é um número inteiro de 1-2; L2 é uma cadeia –(CH2CH2O)n- onde n é um número inteiro na faixa de 38 a 115; e Y é (CH2)q onde q é um número inteiro de 0 a 2.

30. Método de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que cada R5 é (CH2)rCH3 em que r é 10-20.

31. Método de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o componente que alveja integrina é da fórmula: em que n é um número inteiro na faixa de 38 a 115.

32. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que o dito L1 é um radical 1,8-(3,6-dioxa)octan-di-ila, radical 1,5- (3-oxa)pentan-di-ila ou radical alcan-di-ila C3-C12

33. Método de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o componente que alveja integrina é da fórmula: em que cada R6 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior e hidroxialquila, em que m e p são independentemente cada um número inteiro de 0-4.

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34. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que o componente que alveja integrina tem uma estrutura da maneira a seguir:

35. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que o componente que alveja integrina tem uma estrutura da maneira a seguir:

36. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que o componente que alveja integrina é da fórmula:

37. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 ou 26 e 28 a 36, caracterizado pelo fato de que o dito lipossomo possibilita a geração de imagens por IRM, opcionalmente em intensidade de campo de 1

16 / 28 Tesla.

38. Método para produzir um agente que alveja integrina, caracterizado pelo fato de que compreende formar um antagonista de VLA-4 funcionalmente protegido da estrutura, incluindo isômeros óticos: em que, R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), - N(alquila C1-C3)SO2(alquila C1-C3), -N(alquila C1-C3)SO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, OCF2, OCH2CF3, acila alifática, O(cicloalquilalquila), O(aralquila), -SO2(1-pirolidinila), SO2(1-piperidinila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); Z é N ou CR2; R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio, halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -

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NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, - N(alquila C1-C3)-C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3), - C(O)NH(alquila C1-C3), -NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila e-C(O)NH(benzila); e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, di(alquila C1-C3)amino, -C(O)O- alquila-(C1-C3), -C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, hidroxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); R1, R2, R3 e R4 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo

18 / 28 menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; o método compreendendo sintetizar um fosfolipídeo alquilando na piridona hidroxila com um grupo de ligação ao átomo 3-17 funcionalizado; modificar opcionalmente o grupo funcional terminal; anexar a um grupo polimérico adequado para a formação de lipossomo, por meio de acoplamento de amida, formação de carbamato ou formação de triazol, e desproteção de grupos funcionais.

39. Método de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o dito agente que alveja integrina tem um peso molecular médio de 2.000-7.000.

40. Método de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o dito agente que alveja integrina possibilita a geração de imagens por IRM, opcionalmente em intensidade de campo de 1 Tesla.

41. Método de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o dito agente que alveja integrina é incorporado em um veículo de liberação para liberação de fármaco ou diagnóstico.

42. Método para liberação de fármaco, caracterizado pelo fato de que compreende: formar uma pluralidade de lipossomos com um diâmetro médio menor que 400 nanômetros, os ditos lipossomos compreendendo: um primeiro lipídeo ou fosfolipídeo; um segundo lipídeo ou fosfolipídeo que é derivado de um polímero; um excipiente estericamente volumoso capaz de estabilizar os lipossomos; um terceiro lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina com um peso molecular médio de 2000-7000;

19 / 28 DSPE; encapsular pelo menos um agente bioativo usando a dita pluralidade de lipossomos; e administrando a dita pluralidade de lipossomos a um paciente.

43. Método de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que o dito agente bioativo compreende doxorubicina, paclitaxel, daunorubicina, vincristina, tretinoina, cisplatina, anamicina, vinorelbina, HCl de irinotecano ou floxuridina.

44. Método de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que o dito componente que alveja integrina, incluindo isômeros óticos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, é da fórmula: em que, R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), - N(alquila C1-C3)SO2(alquila C1-C3), -N(alquila C1-C3)SO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila,

20 / 28 arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, OCF2, OCH2CF3, acila alifática, O(cicloalquilalquila), O(aralquila), -SO2(1-pirolidinila), SO2(1-piperidinila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); Z é N ou CR2; R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio, halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, - NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, - N(alquila C1-C3)-C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3), - C(O)NH(alquila C1-C3), -NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila e-C(O)NH(benzila); e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), -

21 / 28 NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, di(alquila C1-C3)amino, -C(O)O- alquila-(C1-C3), -C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, hidroxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); R1, R2, R3 e R4 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de retirada; R5, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir de uma cadeia C7-C21 que consiste em grupo alquila ou alquenila; m e p são independentemente, em cada ocorrência, um número inteiro de 0 a 5; L1 é uma cadeia de 3-14 átomos, contendo qualquer combinação de -CH2-, -C(O)-, -NH-, -S-, -S(O)-, -O-, -C(O)O- ou -S(O)2-; X é selecionado a partir de um grupo que consiste em: , , , , e ; s é um número inteiro de 1-2; L2 é uma cadeia –(CH2CH2O)n- onde n é um número inteiro na faixa de 38 a 115; e Y é (CH2)q onde q é um número inteiro de 0 a 2.

45. Método para obter imagens, caracterizado pelo fato de que compreende:

22 / 28 formar uma pluralidade de lipossomos com um diâmetro médio menor que 400 nanômetros, os ditos lipossomos compreendendo: um primeiro lipídeo ou fosfolipídeo; um segundo lipídeo ou fosfolipídeo que é derivado de um polímero; um excipiente estericamente volumoso capaz de estabilizar os lipossomos; um terceiro lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um polímero finalizado por um componente que alveja integrina com um peso molecular médio de 2.000-7.000; um quarto lipídeo ou fosfolipídeo; incorporar um agente intensificador de contraste na dita pluralidade de lipossomos; e usar uma modalidade de imageamento selecionado a partir do grupo que consiste em CT, micro-CT, mamografia, raios-X de tórax, IRM, espectroscopia de ressonância magnética, imageamento por bioluminescência, ultrassom, imageamento ótico, espectroscopia ótica, espectroscopia por fluorescência, espectroscopia quase infravermelha e imageamento quase infravermelho.

46. Método de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que imagens por IRM são geradas, opcionalmente em intensidade de campo de 1 Tesla.

47. Método de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que o dito componente que alveja integrina, incluindo isômeros óticos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, é da fórmula:

23 / 28 em que, R1, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), - N(alquila C1-C3)SO2(alquila C1-C3), -N(alquila C1-C3)SO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, OCF2, OCH2CF3, acila alifática, O(cicloalquilalquila), O(aralquila), -SO2(1-pirolidinila), SO2(1-piperidinila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); Z é N ou CR2; R2, quando presente, e R3 são cada independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em grupos de hidrogênio, halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, - NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -

24 / 28

N(alquila C1-C3)-C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3), - C(O)NH(alquila C1-C3), -NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, diamino(C1-C3), - C(O)O-alquila-(C1-C3), -C(O)NH-alquila-(C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila e-C(O)NH(benzila); e em que R2, quando presente, e R3 podem ser obtidos juntos para formar um anel; R4, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em grupos de halogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila, alcóxi, alcenóxi, alquinóxi, tioalcóxi, hidroxialquila, acila alifática, -CF3, -CO2H, -SH, -CN, -NO2, -NH2, -OH, alquinilamino, alcoxicarbonila, heterocicloila, carbóxi, -N(alquila C1-C3)- C(O)(alquila C1-C3), -NHC(O)N(alquila C1-C3)C(O)NH(alquila C1-C3), - NHC(O)NH(alquila C1-C6), -NHSO2(alquila C1-C3), -NHSO2(arila), alcoxialquila, alquilamino, alquenilamino, di(alquila C1-C3)amino, -C(O)O- alquila-(C1-C3), -C(O)NH-(alquila C1-C3), -C(O)N(alquila C1-C3)2, - CH=NOH, -PO3H2, -OPO3H2, haloalquila, alcoxialcoxi, hidroxialcóxi, carboxaldeído, carboxamida, cicloalquila, cicloalquenila, cicloalquinila, cicloalquilalquila, arila, aroila, arilóxi, arilamino, biarila, tioarila, diarilamino, heterociclila, alquilarila, aralquenila, aralquila, alquil-heterociclila, heterociclilalquila, sulfonila, -SO2-(alquila C1-C3), -SO3-(alquila C1-C3), sulfonamido, carbamato, ariloxialquila, O(haloalquila), O(cicloalquila), O(cicloalquilalquila), piperidinila, pirrolidinila e -C(O)NH(benzila); R1, R2, R3 e R4 são independentemente não substituídos ou substituídos por pelo menos um grupo de elétron doador ou elétron de

25 / 28 retirada; R5, em cada ocorrência, é independentemente selecionado a partir de uma cadeia C7-C21 que consiste em grupo alquila ou alquenila; m e p são independentemente, em cada ocorrência, um número inteiro de 0 a 5; L1 é uma cadeia de 3-14 átomos, contendo qualquer combinação de -CH2-, -C(O)-, -NH-, -S-, -S(O)-, -O-, -C(O)O- ou -S(O)2-; X é selecionado a partir de um grupo que consiste em: , , , , e ; s é um número inteiro de 1-2; L2 é uma cadeia –(CH2CH2O)n- onde n é um número inteiro na faixa de 38 a 115; e Y é (CH2)q onde q é um número inteiro de 0 a 2.

48. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende uma pluralidade de lipossomos, em que a pluralidade de lipossomos compreende uma molécula que alveja integrina, em que a molécula que alveja integrina compreende um polímero derivado da fração de lipídeo ou fosfolipídeo, e uma fração que alveja integrina.

49. Composição de acordo com a reivindicação 48, caracterizada pelo fato de que a fração que alveja integrina tem uma das seguintes estruturas:

R Cl O CO2H

O

N

N N

H H OEt O OEt , , ou

26 / 28 , em que R é o ponto de anexação para o polímero derivado da fração de lipídeo ou fosfolipídeo.

50. Composição de acordo com a reivindicação 48 ou 49, caracterizada pelo fato de que a molécula que alveja integrina é um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9.

51. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 50, caracterizada pelo fato de que a pluralidade de lipossomos tem um diâmetro médio de 150 a 175 nm.

52. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 51, caracterizada pelo fato de que a molécula que alveja integrina compreende cerca de 0,05 a 2 mole% da pluralidade de lipossomos.

53. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 52, caracterizada pelo fato de que a pluralidade de lipossomos compreende adicionalmente um agente bioativo.

54. Composição de acordo com a reivindicação 53, caracterizada pelo fato de que o agente bioativo é encapsulado na pluralidade de lipossomos.

55. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 54, caracterizada pelo fato de que a pluralidade de lipossomos compreende adicionalmente um lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de contraste.

56. Composição de acordo com a reivindicação 55, caracterizada pelo fato de que o lipídeo ou fosfolipídeo derivado de um grupo que se liga a um agente intensificador de contraste compreende uma fração DTPA-Gd ou um DOTA-Gd.

27 / 28

57. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 56, caracterizada pelo fato de que os lipossomos compreendem 30 a 45 mole% de DPPC, 15 a 45 mole% de colesterol, 1 a 6 mole% de DSPE-MPEG-2000, 20 a 30 mole% de Gd-DOTA-DSPE e 0,05 a 2 mole% de THI-567.

58. Método para liberar um agente bioativo para uma célula alvo em um paciente, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar a composição como definido em qualquer uma das reivindicações 11 a 23, 53 ou 54 ao paciente.

59. Método de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o agente bioativo é liberado seletivamente para as células que expressam integrina α4β1.

60. Método de acordo com a reivindicação 59, caracterizado pelo fato de que as células que expressam integrina α4β1 compreendem um ou mais dos seguintes tipos de células: células mononucleares CD11b+, células T CD3+, células B CD19+ e leucócitos polimorfonucleares Ly-6G+.

61. Método para obter imagem de uma estrutura biológica em um sujeito, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao sujeito a composição como definida em qualquer uma das reivindicações 11 a 23, 55 ou 56 e detectar o agente intensificador de contraste com um gerador de imagem.

62. Método de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que os lipossomos na composição se tornam enriquecidos na estrutura biológica.

63. Método de acordo com a reivindicação 61 ou 62, caracterizado pelo fato de que o gerador de imagens realiza uma das seguintes técnicas: CT, micro-CT, mamografia, raios-X, IRM, espectroscopia de ressonância magnética, imageamento por bioluminescência, ultrassom, imageamento ótico, espectroscopia ótica, espectroscopia por fluorescência,

28 / 28 imageamento por fluorescência, espectroscopia quase infravermelha e imageamento quase infravermelho.

64. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 61 a 63, caracterizado pelo fato de que o gerador de imagens é um scanner de IRM com uma intensidade de campo de não mais que 3T ou de não mais que 1T.

65. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 61 a 64, caracterizado pelo fato de que a estrutura biológica é uma placa aterosclerótica, uma pluralidade de células que expressam integrina α4β1 ou um tumor.

66. Método para identificar um paciente em risco para um evento isquêmico agudo, caracterizado pelo fato de que o método compreende: (a) administrar ao sujeito a composição como definida em qualquer uma das reivindicações 11 a 23, 55 ou 56; (b) detectar o agente intensificador de contraste com um scanner de IRM para gerar uma imagem; (c) avaliar a imagem para a presença de placas ateroscleróticas; e (d) identificar o paciente como estando em risco para um evento isquêmico agudo se placas ateroscleróticas forem detectadas.

Petição 870190131503, de 11/12/2019, pág. 106/119 Gadolínio (parte principal)

Colesterol

Dipalmitoil fosfatidilcolina (DPPC)

Distearoil fofoelanolamina-metoxi polietileno glicol 1/13

Distearoil fofoelanolamina-metoxi polietileno glicol

Di-hexadecanoil fosfoetanolamina (Lissamine rodamina B) (DHPE-Rodamina)

Ácido dietileno triamina penta- acético-Bis(stearilamina) (gadolínio)

Figura 1

Figura 2B

Figura 2C Figura 2A

Adesão de Célula (RFU)

Figura 3B

Fluorescência de canal mediano Figura 3A

Histogramas de citometria de fluxo de fluorescência

Contagem celular

Rodamina Figura 4A

Fluorescência de canal mediano (RodaminaB)

Tratamento

Figura 4B

Fluor. auto.

Figura 5A Fluor. auto.

Figura 5B

Fluorescência de canal mediano

Concentração de partícula (M) Figura 6A

Ligação específica Fluorescência de canal mediano

Concentração de partícula (M) Figura 6B

Fluorescência de canal mediano

Concentração de partícula (M) Fluorescência de canal mediano

Concentração de partícula (M) Figura 7A

Fluorescência de canal mediano Ligação total Ligação não específica

Concentração de partícula (M) Fluorescência de canal mediano

Concentração de partícula (M) Figura 7B

Fluorescência de canal mediano

Concentração de partícula (M)

Figura 8A Fluorescência de canal mediano

Concentração de partícula (M)

Figura 8B

Neutrófilo Células B Células T

TRATAMENTOS Petição 870190131503, de 11/12/2019, pág. 115/119 Contagem de célula Contagem de célula Contagem de célula Rodamina Rodamina Rodamina 10/13 Neutrófilo Células B Células T Figura 9

Autofluorescência Fluorescência de canal mediano

Células B Células T

Subconjunto de células

Figura 10

Autofluorescência

Salina injetada

Rodamina B injetado

Figura 11A

Autofluorescência

Salina injetada

Rodamina B injetado

Figura 11B

Autofluorescência

Salina injetada

Rodamina B injetado

Figura 11C